JP2008184406A - Pharmaceutical composition - Google Patents
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Abstract
Description
この発明は、医薬組成物に関し、特に抗癌活性を有する有機金属錯体であるMn(CO)3(1,3-ビス(ジフェニルホスフィノ)プロパン)Br（以下、単にMn(CO)3(dppp)Brとも記載する。ここで又は以下、dpppとは1,3-ビス(ジフェニルホスフィノ)プロパンを意味する。）を有効成分とする癌（悪性腫瘍）治療用医薬組成物に関する。 The present invention relates to a pharmaceutical composition, and in particular, Mn (CO) 3 (1,3-bis (diphenylphosphino) propane) Br (hereinafter simply referred to as Mn (CO) 3 (dppp), which is an organometallic complex having anticancer activity. (Hereinafter also referred to as “Br”), or hereinafter, dppp means 1,3-bis (diphenylphosphino) propane)) and relates to a pharmaceutical composition for treating cancer (malignant tumor).
マンガンを含む有機金属錯体を、酸化ストレスに起因する疾患及び癌の治療に使用する例が知られている（例えば、特許文献１参照。）。 An example in which an organometallic complex containing manganese is used for treatment of diseases and cancer caused by oxidative stress is known (see, for example, Patent Document 1).
また、例えばMn(CO)3(1,1-ビス(ジフェニルホスフィノ)メタン)Br及びMn(CO)3(1,2-ビス(ジフェニルホスフィノ)エタン)Brといったマンガン金属錯体の合成、赤外線分光解析、及びＸ線構造解析に関する研究成果が本発明者らにより研究集会において発表されている（例えば、非特許文献１参照。）。
いわゆる抗癌剤として、従来、シスプラチン（シス-ジアンミンジクロロ白金（ＩＩ））といった白金製剤が用いられている。このような白金製剤は、貴金属である白金（プラチナ）を中心金属として含んでいる。すなわち白金を中心金属とする金属錯体を有効成分として含有している。従って、白金製剤は、高価である。 Conventionally, platinum preparations such as cisplatin (cis-diamminedichloroplatinum (II)) have been used as so-called anticancer agents. Such a platinum preparation contains platinum (platinum) which is a noble metal as a central metal. That is, a metal complex having platinum as a central metal is contained as an active ingredient. Thus, platinum formulations are expensive.
そこで、この発明の目的は、白金製剤と同等、又はそれ以上の生理活性、すなわち抗癌活性を有する医薬組成物をより安価に提供することにある。 Accordingly, an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition having a physiological activity equivalent to or higher than that of a platinum preparation, that is, an anticancer activity, at a lower cost.
上述した問題点を解決するために、本発明者らは鋭意研究を進める中で、マンガンを中心金属とする有機金属錯体であるMn(CO)3(1,3-ビス(ジフェニルホスフィノ)プロパン)Brに、癌細胞に対する極めて高い増殖阻害活性、すなわち抗癌活性があることを見い出し、この発明を完成するに至った。 In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors have conducted extensive research, and Mn (CO) 3 (1,3-bis (diphenylphosphino) propane, an organometallic complex having manganese as a central metal. It was found that Br has extremely high growth inhibitory activity against cancer cells, that is, anticancer activity, and the present invention was completed.
すなわち、この発明の医薬組成物は、特に癌治療に適用して好適であり、かつMn(CO)3(1,3-ビス(ジフェニルホスフィノ)プロパン)Brを有効成分として含有している。 That is, the pharmaceutical composition of the present invention is particularly suitable for application to cancer treatment, and contains Mn (CO) 3 (1,3-bis (diphenylphosphino) propane) Br as an active ingredient.
この発明の医薬組成物の有効成分であるMn(CO)3(1,3-ビス(ジフェニルホスフィノ)プロパン)Brは中心金属がマンガンであるため、極めて安価に製造することができる。 Mn (CO) 3 (1,3-bis (diphenylphosphino) propane) Br, which is an active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention, can be produced very inexpensively because the central metal is manganese.
この発明の医薬組成物は、好ましくは例えば、さらに生理学的に許容される担体、希釈剤及び賦形剤のいずれか又はこれらを組み合わせて含有するのがよい。 The pharmaceutical composition of the present invention preferably contains, for example, any one of physiologically acceptable carriers, diluents and excipients, or a combination thereof.
この発明の医薬組成物は、ヒト又は動物の癌を治療するための医薬を製造するために使用して好適である。 The pharmaceutical composition of this invention is suitable for use in the manufacture of a medicament for treating human or animal cancer.
この発明の医薬組成物の有効成分であるMn(CO)3(1,3-ビス(ジフェニルホスフィノ)プロパン)Brは、動物、特にヒトの癌細胞に対して、極めて優れた抗癌活性、すなわち増殖阻害活性を有している。よって、この発明の医薬組成物は特にヒトの癌治療に適用される医薬の製造に好適であると考えられる。 Mn (CO) 3 (1,3-bis (diphenylphosphino) propane) Br, which is an active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention, has extremely excellent anticancer activity against animal, particularly human cancer cells, That is, it has a growth inhibitory activity. Therefore, it is considered that the pharmaceutical composition of the present invention is particularly suitable for the production of a medicine that is applied to human cancer treatment.
この発明のMn(CO)3(1,3-ビス(ジフェニルホスフィノ)プロパン)Brを有効成分とする医薬組成物によれば、従来の金属錯体を有効成分とする組成物、すなわち抗癌剤と比較して、より高い抗癌活性を有する医薬組成物をより安価に提供することができる。 According to the pharmaceutical composition containing Mn (CO) 3 (1,3-bis (diphenylphosphino) propane) Br of the present invention as an active ingredient, it is compared with a composition containing a conventional metal complex as an active ingredient, that is, an anticancer agent. Thus, a pharmaceutical composition having higher anticancer activity can be provided at a lower cost.
以下、この発明の実施の形態につき説明する。なお、以下の説明において、特定の材料、条件及び数値条件等を用いることがあるが、これらは好適例の１つに過ぎず、従って、この発明は何らこれらに限定されない。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described. In the following description, specific materials, conditions, numerical conditions, and the like may be used. However, these are merely preferred examples, and the present invention is not limited to these.
この発明の医薬組成物の有効成分であるMn(CO)3(dppp)Brは、癌細胞に対する極めて優れた増殖阻害活性、すなわち抗癌活性を有している。従って、Mn(CO)3(dppp)Brを有効成分として含有するこの発明の医薬組成物は、いわゆる抗癌剤として使用して好適である。 Mn (CO) 3 (dppp) Br, which is an active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention, has extremely excellent growth inhibitory activity against cancer cells, that is, anticancer activity. Therefore, the pharmaceutical composition of the present invention containing Mn (CO) 3 (dppp) Br as an active ingredient is suitable for use as a so-called anticancer agent.
Mn(CO)3(dppp)Brは、動物、特にヒト由来の癌細胞に対して、極めて優れた抗癌活性を有している。よって、この発明の医薬組成物は特にヒトの癌治療に適用される医薬の製造に好適であると考えられる。 Mn (CO) 3 (dppp) Br has extremely excellent anticancer activity against cancer cells derived from animals, particularly humans. Therefore, it is considered that the pharmaceutical composition of the present invention is particularly suitable for the production of a medicine that is applied to human cancer treatment.
また、ここでいう癌治療において、この発明の医薬組成物を適用して好適な癌（悪性腫瘍）の種類については特に限定されない。 In addition, in the cancer treatment referred to herein, the type of cancer (malignant tumor) suitable for application of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited.
この発明の医薬組成物は、有効成分であるMn(CO)3(dppp)Brと、通常製剤化に用いられ、かつ生理学的に許容される任意好適な薬剤用担体、希釈剤、賦形剤その他の添加剤を単独又は任意好適に組み合わせたものを用い、常法に従って所望の性状に調製することができる。 The pharmaceutical composition of the present invention comprises an active ingredient, Mn (CO) 3 (dppp) Br, and any suitable pharmaceutical carrier, diluent, excipient that is usually used for formulation and physiologically acceptable Using other additives alone or in any suitable combination, they can be prepared in desired properties according to a conventional method.
この発明の医薬組成物を経口投与する場合には、好ましくは例えば錠剤、丸剤、カプセル、顆粒剤、散剤、或いは液剤といった任意好適な剤形で行うことができる。 When the pharmaceutical composition of the present invention is orally administered, it can be preferably used in any suitable dosage form such as a tablet, pill, capsule, granule, powder, or liquid.
また、この発明の医薬組成物を非経口投与とする場合には、好ましくは静注、筋注等の注射剤、座剤、又は経鼻、経粘膜、若しくは経皮といった所望の投与態様に好適な剤形とすることができる。 In addition, when the pharmaceutical composition of the present invention is to be administered parenterally, it is preferably suitable for a desired administration mode such as intravenous injection, intramuscular injection, suppository, or nasal, transmucosal, or transdermal. Can be made into various dosage forms.
この発明の医薬組成物を経口投与する場合には、好ましくは例えば錠剤、散剤、又は顆粒剤といった性状として用いられる。 When the pharmaceutical composition of this invention is orally administered, it is preferably used as a property such as a tablet, powder, or granule.
このような経口投与のための医薬組成物においては、有効成分であるMn(CO)3(dppp)Brを、不活性な希釈剤、好ましくは例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、及びメタケイ酸アルミン酸マグネシウムを含む群から選択される１又は２以上の成分と混合するのがよい。 In such a pharmaceutical composition for oral administration, the active ingredient Mn (CO) 3 (dppp) Br is added to an inert diluent, preferably lactose, mannitol, glucose, hydroxypropylcellulose, microcrystals. It may be mixed with one or more ingredients selected from the group comprising cellulose, starch, polyvinylpyrrolidone, and magnesium aluminate metasilicate.
また、この発明の医薬組成物は、上述した従来公知の希釈剤以外の添加剤、好ましくは例えばステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤や繊維素グリコール酸カルシウムのような崩壊剤、グルタミン酸又はアスパラギン酸のような溶解補助剤を含有していてもよい。 Further, the pharmaceutical composition of the present invention comprises additives other than the above-described conventionally known diluents, preferably a lubricant such as magnesium stearate, a disintegrant such as calcium calcium glycolate, glutamic acid or aspartic acid. Such a solubilizing agent may be contained.
この発明の医薬組成物を錠剤又は丸剤といった固形状に調製する場合には、所望により好ましくは例えばショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等の糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。 When the pharmaceutical composition of the present invention is prepared in a solid form such as a tablet or pill, it is preferably a sugar coating such as sucrose, gelatin, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose phthalate, or a gastric or enteric substance. You may coat with a film.
また、この発明の医薬組成物を液体状に調製する場合には、好ましくは例えば薬剤学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、及びエリキシル剤のいずれか又はこれらを任意好適に組み合わせて溶解又は含有させることができる。 When the pharmaceutical composition of the present invention is prepared in a liquid form, it is preferably any of pharmaceutically acceptable emulsions, solutions, suspensions, syrups, and elixirs, or these. Can be dissolved or contained in any suitable combination.
また、この発明の医薬組成物は、一般的に用いられる不活性な液体状の希釈剤、好ましくは例えば精製水、エタノールに含有させてもよい。 The pharmaceutical composition of the present invention may be contained in an inert liquid diluent that is generally used, preferably purified water or ethanol, for example.
さらにまた、この発明の医薬組成物は、上述したような不活性な希釈剤以外に、好ましくは例えば湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、香味剤、芳香剤及び防腐剤のいずれか又はこれらを任意好適な組み合わせで含有していてもよい。 Furthermore, the pharmaceutical composition of the present invention preferably contains, in addition to the inert diluent as described above, preferably adjuvants such as wetting agents and suspending agents, sweeteners, flavoring agents, fragrances and preservatives. Any of these or any combination thereof may be contained.
この発明の医薬組成物を注射剤として調製する場合には、好ましくは例えば無菌の水性或いは非水性の溶液剤、懸濁剤、及び乳濁剤のいずれか又はこれらの任意好適な組み合わせとして混合するのがよい。 When the pharmaceutical composition of the present invention is prepared as an injection, it is preferably mixed as any one of sterile aqueous or non-aqueous solutions, suspensions and emulsions, or any suitable combination thereof. It is good.
このような水性の溶液剤、懸濁剤としては、好ましくは例えば注射用蒸留水又は生理食塩水を用いるのがよい。 As such an aqueous solution or suspension, for example, distilled water for injection or physiological saline is preferably used.
非水溶性の溶液剤、懸濁剤としては、好ましくは例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油といった植物油、エタノールといったアルコール類、及びポリソルベート８０といった非イオン性界面活性剤のいずれか又はこれらを任意好適に組み合わせて用いるのがよい。
As the water-insoluble solution or suspension, for example, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, alcohols such as ethanol, and nonionic surfactants such as
この発明の医薬組成物は、好ましくはさらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤等といった補助剤を含んでいてもよい。 The pharmaceutical composition of the present invention may preferably further contain adjuvants such as preservatives, wetting agents, emulsifiers, dispersants, stabilizers, solubilizing agents and the like.
この発明の医薬組成物は、好ましくは例えばフィルタを通す濾過処理、殺菌剤の配合又は紫外線といった光線照射処理によって無菌化しておくのがよい。 The pharmaceutical composition of the present invention is preferably sterilized by, for example, filtration through a filter, blending of a bactericide, or irradiation with light such as ultraviolet rays.
また、この発明の医薬組成物を無菌の固体組成物とし、使用前に無菌化処理した水又は無菌化した注射用溶媒に溶解して使用することもできる。 Further, the pharmaceutical composition of the present invention can be used as a sterile solid composition which is dissolved in water sterilized before use or sterilized solvent for injection.
この発明の医薬組成物の投与対象に対する投与量は、年令、性別、体重等を考慮して個々の症状に応じて適宜決定することができる。 The dose of the pharmaceutical composition of the present invention to be administered can be appropriately determined according to individual symptoms in consideration of age, sex, body weight and the like.
実施例１
Mn(CO)3(1,3-ビス(ジフェニルホスフィノ)プロパン)Brの合成
この発明の医薬組成物の有効成分であるMn(CO)3(1,3-ビス(ジフェニルホスフィノ)プロパン)Brは、R.J. Angeliciらの方法(R.J. Angelici, F. Basolo, A.J. Poe, J. Am. Chem. Soc. 85 (1963) 2215を参照されたい。)を参考にして以下の工程により合成した。
Example 1
Mn (CO) 3 (1,3-bis (diphenylphosphino) propane) as an active ingredient of the synthesis of Br pharmaceutical compositions of the present invention Mn (CO) 3 (1,3-bis (diphenylphosphino) propane) Br was synthesized by the following steps with reference to the method of RJ Angelici et al. (See RJ Angelici, F. Basolo, AJ Poe, J. Am. Chem. Soc. 85 (1963) 2215).
まず、出発物質としてMn(CO)5Br 0.1 g (3.75×10-4 mol)（STREM CHEMICALS製）を、溶媒であるトルエン20 mlに溶かしてMn(CO)5Br溶液を調製した。 First, Mn (CO) 5 Br 0.1 g (3.75 × 10 −4 mol) (manufactured by STREM CHEMICALS) as a starting material was dissolved in 20 ml of toluene as a solvent to prepare a Mn (CO) 5 Br solution.
dppp 4.125×10-4 Mを溶媒であるトルエン20 mlに溶かしてdppp溶液を調製した。 dppp 4.125 × 10 −4 M was dissolved in 20 ml of toluene as a solvent to prepare a dppp solution.
調製したMn(CO)5Br溶液及びdppp溶液を混合し、約１００℃で還流しながら反応させた。 The prepared Mn (CO) 5 Br solution and dppp solution were mixed and reacted at about 100 ° C. while refluxing.
この反応は、フーリエ変換赤外分光光度計(FT-IR)（日本分光株式会社製）でIRスペクトルを測定してMn(CO)3(dppp)Brに特徴的な波長のピークを検出しつつ進行させる。 In this reaction, while measuring the IR spectrum with a Fourier transform infrared spectrophotometer (FT-IR) (manufactured by JASCO Corporation), the characteristic wavelength peak of Mn (CO) 3 (dppp) Br is detected. Make it progress.
FT-IRで測定したIRスペクトルでMn(CO)3(dppp)Brに特徴的な波長のピークの高さが変化しないようになった時点で反応を停止させた。 The reaction was stopped when the peak height of the characteristic wavelength of Mn (CO) 3 (dppp) Br did not change in the IR spectrum measured by FT-IR.
ロータリーエバポレータで溶媒を濃縮し、明るい黄色の固形物としてMn(CO)3(dppp)Brを得た。フィルタで集めた固形物をトルエンに溶かし、ロータリーエバポレータで再濃縮して得られた固形物を再度フィルタで集めた。 The solvent was concentrated on a rotary evaporator to give Mn (CO) 3 (dppp) Br as a light yellow solid. The solid substance collected by the filter was dissolved in toluene, and the solid substance obtained by re-concentration by a rotary evaporator was again collected by the filter.
これらの操作を数回繰り返して、未反応の出発材料等を取り除き、Mn(CO)3(dppp)Brを精製した。 These operations were repeated several times to remove unreacted starting materials and the like, and Mn (CO) 3 (dppp) Br was purified.
精製終了後、綺麗な結晶が得られるまで結晶化工程を繰り返し行った（この結晶化工程については後述する。）。なお、収率は70%から80%程度の範囲内であった。 After purification, the crystallization process was repeated until clean crystals were obtained (this crystallization process will be described later). The yield was in the range of about 70% to 80%.
上記工程で得られた固形物の同定は、Ｘ線結晶解析により行った。 The solid obtained in the above process was identified by X-ray crystallography.
まず、得られた固形物を結晶化工程により結晶とした。得られた固形物、すなわち得られたMn(CO)3(dppp)Brをジクロロエタンに溶かし、溶けない固形物をフィルタで除いた後、冷蔵庫（４℃）の中で遮光して放置することにより結晶を得た。 First, the obtained solid was crystallized by a crystallization process. By dissolving the obtained solid substance, that is, the obtained Mn (CO) 3 (dppp) Br in dichloroethane, removing the insoluble solid substance with a filter, and then leaving it in the refrigerator (4 ° C.) protected from light. Crystals were obtained.
得られた結晶をＸ線回折法を用いる常法に従うＸ線結晶解析により構造決定した。 The structure of the obtained crystal was determined by X-ray crystal analysis according to a conventional method using X-ray diffraction.
表１、図１（Ａ）及び（Ｂ）にその結果を示す。表１は、Ｘ線結晶解析データを示す表である。 The results are shown in Table 1 and FIGS. 1 (A) and 1 (B). Table 1 is a table showing X-ray crystallographic data.
図１（Ａ）は得られた結晶の解析結果である結晶構造（３次構造）を示す図であり、図１（Ｂ）は一分子の３次構造を示す図である。 FIG. 1A is a diagram showing a crystal structure (tertiary structure) as an analysis result of the obtained crystal, and FIG. 1B is a diagram showing a tertiary structure of one molecule.
以上のように得られた結晶にはMn(CO)3(dppp)Brが含まれている。すなわち既に説明した工程によりMn(CO)3(dppp)Brが得られたことが確認された。 The crystal obtained as described above contains Mn (CO) 3 (dppp) Br. That is, it was confirmed that Mn (CO) 3 (dppp) Br was obtained by the steps already described.
実施例２
ヒト癌細胞（培養細胞株）に対する増殖阻害活性の測定
１）溶解液の調製
得られたMn(CO)3(dppp)Br、Mn(CO)5Br、dppp及びシスプラチン（ALDRICH製）それぞれを、溶媒であるDMSO（Dimethyl Sulfoxide)に溶解して、Mn(CO)3(dppp)Br溶解液、Mn(CO)5Br溶解液、dppp溶解液及びシスプラチン溶解液を調製した。
Example 2
Measurement of growth inhibitory activity against human cancer cells (cultured cell lines) 1) Preparation of lysate Each of the obtained Mn (CO) 3 (dppp) Br, Mn (CO) 5 Br, dppp and cisplatin (manufactured by ALDRICH) Mn (CO) 3 (dppp) Br solution, Mn (CO) 5 Br solution, dppp solution and cisplatin solution were prepared by dissolving in DMSO (Dimethyl Sulfoxide) as a solvent.
２）細胞株
ヒト子宮頚癌から樹立された上皮様の細胞株であるHeLa細胞、ヒト白血病Ｔ細胞から樹立された細胞株であるMOLT-4細胞及びJurkat細胞を使用した。
2) Cell lines HeLa cells which are epithelial cell lines established from human cervical cancer, MOLT-4 cells and Jurkat cells which are cell lines established from human leukemia T cells were used.
３）培養条件
これらの細胞株は、5%炭酸ガスを含む大気下、37℃のCO2インキュベータで培養した。
3) Culture conditions These cell lines were cultured in a CO 2 incubator at 37 ° C. in an atmosphere containing 5% carbon dioxide gas.
HeLa細胞は、10%ウシ胎児血清と抗生物質とを含むDMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)培地（Sigma-ALDRICH製）で培養した。 HeLa cells were cultured in DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) medium (manufactured by Sigma-ALDRICH) containing 10% fetal bovine serum and antibiotics.
また、MOLT-4細胞及びJurkat細胞は、いずれも非働化した10%ウシ胎児血清と抗生物質とを含むRPMI-1640培地（Sigma-ALDRICH製）で培養した。 Moreover, both MOLT-4 cells and Jurkat cells were cultured in RPMI-1640 medium (manufactured by Sigma-ALDRICH) containing inactivated 10% fetal bovine serum and antibiotics.
４）増殖阻害活性の測定
測定は以下の手順で行った。
4) Measurement of growth inhibitory activity The measurement was performed according to the following procedure.
ｉ）既に説明した３種の細胞を、12ウエルプレートの各ウエルに1ウエルあたり5×104個となるように、既に説明した培地0.995 mlとともに加えた。 i) The three types of cells described above were added to each well of a 12-well plate together with 0.995 ml of the medium described above so that there were 5 × 10 4 cells per well.
ｉｉ）各ウエルに、測定対象である既に説明したMn(CO)3(dppp)Br溶解液、Mn(CO)5Br溶解液、dppp溶解液及びシスプラチン溶解液それぞれを、Mn(CO)3(dppp)Br、Mn(CO)5Br、dppp及びシスプラチンそれぞれの最終濃度が0μM（サンプル０：コントロール）、5μM（サンプル１）、10μM（サンプル２）、及び20μM（サンプル３）になるように5μlを加えた。
ii) In each well, the Mn (CO) 3 (dppp) Br solution, Mn (CO) 5 Br solution, dppp solution and cisplatin solution, which are already described, are Mn (CO) 3 ( dppp) Br, Mn (CO) 5 Br, dppp and
ｉｉｉ）既に説明した培養条件で48時間培養した後、生存している細胞の数をヘモサイトメータ（サンリード硝子有限会社）で顕微鏡下で直接数えることにより生存率を割り出した。１つのサンプルについて、少なくとも3回以上の実験を行いデータを収集した。 iii) After culturing for 48 hours under the culture conditions already described, the survival rate was determined by directly counting the number of surviving cells with a hemocytometer (Sunlead Glass Co., Ltd.) under a microscope. For one sample, data was collected by performing at least three experiments.
５）測定結果
以下に、図２、図３及び図４を参照して、上述した手順で行われた測定結果（増殖阻害活性）につき説明する。
5) Measurement Result Hereinafter, the measurement result (growth inhibitory activity) performed in the above-described procedure will be described with reference to FIG. 2, FIG. 3, and FIG.
なお、各図面に示したグラフは、横軸に測定対象の濃度（μM）及び縦軸に生存率（％）を表している。得られた結果の平均値をプロットし、各プロットに付されたエラーバーは得られた結果の最大値と最小値の範囲を示している。 In each graph, the horizontal axis represents the concentration (μM) of the measurement target, and the vertical axis represents the survival rate (%). The average value of the obtained results is plotted, and the error bar attached to each plot indicates the range of the maximum value and the minimum value of the obtained results.
ｉ）MOLT-4細胞
図２は、MOLT-4細胞におけるMn(CO)3(dppp)Br、Mn(CO)5Br、dppp及びシスプラチンそれぞれの増殖阻害活性を示すグラフである。
i) MOLT-4 cells FIG. 2 is a graph showing the growth inhibitory activities of Mn (CO) 3 (dppp) Br, Mn (CO) 5 Br, dppp and cisplatin in MOLT-4 cells.
グラフＡはMn(CO)3(dppp)Brの測定結果を示しており、グラフＢはシスプラチンの測定結果を示しており、グラフＣはdpppの測定結果を示しており、及びグラフＤはMn(CO) 5 Brの測定結果を示している。 Graph A shows the measurement result of Mn (CO) 3 (dppp) Br, Graph B shows the measurement result of cisplatin, Graph C shows the measurement result of dppp, and Graph D shows Mn ( The measurement result of CO) 5 Br is shown.
シスプラチンがMOLT-4細胞の増殖を50%阻害する濃度（以下、細胞の増殖を50％阻害する測定対象の濃度を単にIC50と表記する。）は、6.8 μMであると報告されている。 The concentration at which cisplatin inhibits the growth of MOLT-4 cells by 50% (hereinafter, the concentration to be measured that inhibits cell growth by 50% is simply referred to as IC 50 ) is reported to be 6.8 μM.
グラフＢからも理解されるように、シスプラチンのMOLT-4細胞に対するIC50を求めたところ、約6.5 μMと、既に報告されているIC50とほぼ同じ値が得られた。 As can be understood from graph B, when IC 50 of cisplatin for MOLT-4 cells was determined, it was about 6.5 μM, which was almost the same as IC 50 already reported.
グラフＣに示すように、dpppは、シスプラチンと同程度のIC50を有することがわかった。 As shown in graph C, dppp was found to have an IC 50 comparable to cisplatin.
グラフＤに示すように、Mn(CO)5Brは、20 μM以下の濃度において、MOLT-4細胞の増殖にはほとんど影響を及ぼさなかった。 As shown in graph D, Mn (CO) 5 Br had little effect on the growth of MOLT-4 cells at a concentration of 20 μM or less.
グラフＡに示すように、Mn(CO)3(dppp)Brは、dppp及びMn(CO)5Brのいずれよりも強くMOLT-4細胞の増殖を阻害した。 As shown in graph A, Mn (CO) 3 (dppp) Br inhibited MOLT-4 cell growth more strongly than both dppp and Mn (CO) 5 Br.
Mn(CO)3(dppp)Brの増殖阻害活性はシスプラチンの増殖阻害活性よりも極めて強く、10 μMでMOLT-4細胞はほとんど増殖できなかった。IC50を算定すると約2.7 μMとなった。 The growth inhibitory activity of Mn (CO) 3 (dppp) Br was much stronger than that of cisplatin, and MOLT-4 cells could hardly grow at 10 μM. The IC 50 was calculated to be about 2.7 μM.
図３は、Jurkat細胞におけるMn(CO)3(dppp)Br、Mn(CO)5Br、dppp及びシスプラチンそれぞれの増殖阻害活性を示すグラフである。 FIG. 3 is a graph showing the growth inhibitory activities of Mn (CO) 3 (dppp) Br, Mn (CO) 5 Br, dppp and cisplatin in Jurkat cells.
グラフＡはMn(CO)3(dppp)Brの測定結果を示しており、グラフＢはシスプラチンの測定結果を示しており、グラフＣはdpppの測定結果を示しており、及びグラフＤはMn(CO)5Brの測定結果を示している。 Graph A shows the measurement result of Mn (CO) 3 (dppp) Br, Graph B shows the measurement result of cisplatin, Graph C shows the measurement result of dppp, and Graph D shows Mn ( The measurement result of CO) 5 Br is shown.
グラフＢに示すように、シスプラチンは、実験した濃度の範囲ではJurkat細胞の増殖を強く阻害することはなかった。Jurkat細胞に対するIC50は、本実験では算定することができなかった。 As shown in graph B, cisplatin did not strongly inhibit Jurkat cell proliferation over the range of concentrations studied. IC 50 for Jurkat cells could not be calculated in this experiment.
この結果は、Jurkat細胞はMOLT-4細胞と同様のヒト白血病由来の細胞株であってもシスプラチンに対して耐性を有していることを示している。 This result indicates that Jurkat cells are resistant to cisplatin even if they are cell lines derived from human leukemia similar to MOLT-4 cells.
グラフＣに示すように、dpppはシスプラチンよりもJurkat細胞の増殖をより強く阻害し、そのIC50は約13.5 μMであった。 As shown in Graph C, dppp inhibited Jurkat cell proliferation more strongly than cisplatin, with an IC 50 of about 13.5 μM.
グラフＤに示すように、Mn(CO)5Brは20 μM以下の濃度では、Jurkat細胞の増殖にほとんど影響を及ぼさなかった。 As shown in graph D, Mn (CO) 5 Br had little effect on the growth of Jurkat cells at a concentration of 20 μM or less.
グラフＡに示すように、Mn(CO)3(dppp)Brは、シスプラチンやdpppよりもより強くJurkat細胞の増殖を阻害し、そのIC50は約7.5 μMであった。 As shown in graph A, Mn (CO) 3 (dppp) Br inhibited Jurkat cell proliferation more strongly than cisplatin and dppp, and its IC 50 was about 7.5 μM.
図４は、HeLa細胞におけるMn(CO)3(dppp)Br、Mn(CO)5Br、dppp及びシスプラチンそれぞれの増殖阻害活性を示すグラフである。 FIG. 4 is a graph showing the growth inhibitory activities of Mn (CO) 3 (dppp) Br, Mn (CO) 5 Br, dppp and cisplatin in HeLa cells.
グラフＡはMn(CO)3(dppp)Brの測定結果を示しており、グラフＢはシスプラチンの測定結果を示しており、グラフＣはdpppの測定結果を示しており、及びグラフＤはMn(CO) 5 Brの測定結果を示している。 Graph A shows the measurement result of Mn (CO) 3 (dppp) Br, Graph B shows the measurement result of cisplatin, Graph C shows the measurement result of dppp, and Graph D shows Mn ( The measurement result of CO) 5 Br is shown.
グラフＢに示すように、シスプラチンはHeLa細胞の増殖阻害効果を有しており、そのIC50は約12 μMであった。 As shown in graph B, cisplatin has a HeLa cell growth inhibitory effect, and its IC 50 was about 12 μM.
これより、シスプラチンのHeLa細胞に対する増殖阻害効果は、MOLT-4細胞より弱いが、Jurkat細胞より明らかに強いことがわかる。 From this, it can be seen that the growth inhibitory effect of cisplatin on HeLa cells is weaker than MOLT-4 cells, but clearly stronger than Jurkat cells.
グラフＤに示すように、Mn(CO)5Brは20 μM以下の濃度では、HeLa細胞の増殖にはほとんど影響を及ぼさなかった。 As shown in graph D, Mn (CO) 5 Br had almost no effect on the growth of HeLa cells at a concentration of 20 μM or less.
グラフＣに示すように、dpppはシスプラチンよりも強くHeLa細胞の増殖を阻害し、そのIC50は約7 μMであった。 As shown in the graph C, dppp inhibits proliferation of strongly HeLa cells than cisplatin, the IC 50 of from about 7 [mu] M.
グラフＡに示すように、Mn(CO)3(dppp)Brはシスプラチン及びdpppのいずれよりも強くHeLa細胞の増殖を阻害した。 As shown in graph A, Mn (CO) 3 (dppp) Br inhibited HeLa cell proliferation more strongly than either cisplatin or dppp.
この増殖阻害活性は極めて強く、濃度10 μMではHeLa細胞はほとんど増殖できなかった。IC50を算定すると約3.5 μMであった。 This growth inhibitory activity was extremely strong, and HeLa cells could hardly grow at a concentration of 10 μM. The IC 50 was calculated to be about 3.5 μM.
以上より、シスプラチンはMOLT-4細胞に対しては非常に強い増殖阻害活性を有するが、Jurkat細胞やHeLa細胞に対してはさほどの増殖阻害活性を有していなかった。特にJurkat細胞には非常に低い増殖阻害活性しか示さなかった。 From the above, cisplatin had a very strong growth inhibitory activity against MOLT-4 cells, but did not have a significant growth inhibitory activity against Jurkat cells and HeLa cells. In particular, Jurkat cells showed very low growth inhibitory activity.
Mn(CO)3(dppp)Brは、シスプラチンが効果的であるMOLT-4細胞に対しても、シスプラチンよりも強い増殖阻害活性を有することがわかった。 Mn (CO) 3 (dppp) Br was found to have a stronger growth inhibitory activity than cisplatin even in MOLT-4 cells in which cisplatin is effective.
また、Mn(CO)3(dppp)Brは、シスプラチンに対して耐性を示すJurkat細胞に対しても、IC50が約7.5 μMと、極めて強い増殖阻害活性を有することがわかった。 It was also found that Mn (CO) 3 (dppp) Br has a very strong growth inhibitory activity with an IC 50 of about 7.5 μM even for Jurkat cells that are resistant to cisplatin.
さらに、Mn(CO)3(dppp)Brは、HeLa細胞においても、シスプラチンと比較して、より強い増殖阻害活性を有することがわかった。 Furthermore, it was found that Mn (CO) 3 (dppp) Br has stronger growth inhibitory activity in HeLa cells as compared to cisplatin.
よって、この発明の医薬組成物は、ヒトの癌治療、特に子宮頸癌及び白血病の治療に適用して好適であると考えられる。 Therefore, it is considered that the pharmaceutical composition of the present invention is suitable for application to human cancer treatment, particularly cervical cancer and leukemia treatment.
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