JP2008133190A - Protease inhibitor - Google Patents

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典生 山本
Naoki Yamamoto
直樹 山本
Shigeyuki Yokoyama
茂之 横山
Hiroshi Hirota
洋 廣田
Hiroyuki Onuki
裕之 大貫
Kazuhito Sato
万仁 佐藤
Akiko Tanaka
昭子 田仲
Takehisa Matsumoto
武久 松本
Hideaki Umeyama
秀昭 梅山
Mayuko Shitaka
真由子 志鷹
Shigeru Morikawa
茂 森川
Masayuki Saijo
政幸 西條
Ichiro Kurane
一郎 倉根
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Tokyo Medical and Dental University NUC
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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new protease inhibitor which inhibits the activity of protease, and to provide an antiviral agent containing the protease inhibitor as an active ingredient. <P>SOLUTION: This protease inhibitor comprises a pyridine carbonitrile-based compound or its pharmaceutically acceptable salt, which may have a 4-morpholinyl group or 1-piperidyl group. The antiviral agent comprises the protease inhibitor as an active ingredient. <P>COPYRIGHT: (C)2008,JPO&INPIT

Description

本発明は、プロテアーゼインヒビターに関するものであり、特に、ピリジンカルボニトリル系化合物であるプロテアーゼインヒビターに関するものである。   The present invention relates to a protease inhibitor, and more particularly to a protease inhibitor that is a pyridinecarbonitrile-based compound.

ウイルス由来の感染症に現在多くの人々が苦しんでいる。例えば、世界保健機関（ＷＨＯ）の調査によれば、ウイルス由来の感染症である重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）によって、２００２年１１月１日から２００３年７月３１日の間に約８０００人の患者が報告され、７７４人が亡くなっており、致死率は約１０％に及んでいる。このように、ウイルス由来の感染症に対して治療および予防に使用できる抗ウイルス剤の開発が求められている。   Many people are currently suffering from viral infections. For example, according to a survey by the World Health Organization (WHO), about 8,000 people were diagnosed between November 1, 2002 and July 31, 2003 due to severe acute respiratory syndrome (SARS), a virus-derived infection. 774 people have been reported, and the fatality rate has reached about 10%. Thus, development of the antiviral agent which can be used for treatment and prevention with respect to the infection derived from a virus is calculated | required.

しかしながら、ウイルスによる感染症は、細菌による感染症と異なり、抗生物質などでは治療し得ず、抗ウイルス剤の開発は困難である。現在、抗ウイルス剤としては、ウイルスの細胞への進入を阻害する（例えば、ノイラミニダーゼ阻害剤など）細胞侵入阻害剤や、核酸合成を阻害する（例えば、アシクロビル、ガンシクロビル、ジドブジン、ラミブジンなど）核酸合成阻害剤や、タンパク質の合成を阻害する（例えば、リトナビルや、フロロタンニンなど）プロテアーゼインヒビターなどの限られた種類しかない。   However, unlike bacterial infections, viral infections cannot be treated with antibiotics and the development of antiviral agents is difficult. Currently, antiviral agents include cell entry inhibitors that inhibit virus entry into cells (eg, neuraminidase inhibitors) and nucleic acid synthesis that inhibit nucleic acid synthesis (eg, acyclovir, gancyclovir, zidovudine, lamivudine, etc.) There are only a limited number of inhibitors and protease inhibitors that inhibit protein synthesis (eg, ritonavir, fluorotannin, etc.).

例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のエンベロープタンパク質のＧＰ１２０などは、変異が起こり易い。このため、エンベロープタンパク質を標的にした抗ウイルス薬では、ウイルスがエンベロープタンパク質の変異によって、抗ウイルス剤に耐性を容易に獲得し得る。   For example, human immunodeficiency virus (HIV) envelope protein GP120 is susceptible to mutation. For this reason, in an antiviral drug targeting an envelope protein, the virus can easily acquire resistance to the antiviral agent by mutation of the envelope protein.

一方、細胞内でウイルス増殖に必要なプロテアーゼは、比較的変異が起こりにくい。このため、プロテアーゼを標的にした抗ウイルス剤では、ウイルスが耐性を獲得しにくく、プロテアーゼを標的にした抗ウイルス剤の開発が有望である。このため、現在、例えば、リトナビルやフロロタンニンなど、プロテアーゼの活性を阻害することを目的し、プロテアーゼインヒビターを有効成分とする抗ウイルス剤の開発が行われている（特許文献１参照）。
特開２００４−１８９６４８号公報 On the other hand, proteases necessary for virus growth in cells are relatively difficult to mutate. For this reason, with antiviral agents targeting proteases, it is difficult for viruses to acquire resistance, and development of antiviral agents targeting proteases is promising. Therefore, at present, for the purpose of inhibiting the activity of proteases such as ritonavir and fluorotannin, an antiviral agent containing a protease inhibitor as an active ingredient has been developed (see Patent Document 1).
JP 2004-189648 A

しかしながら、リトナビルや、フロロタンニンは、ＳＡＲＳウイルス由来のプロテアーゼの活性中心に十分に結合しないため、十分にプロテアーゼの活性を阻害できない。このため、ＳＡＲＳに対して、リトナビルや、フロロタンニンは、プロテアーゼインヒビターを有効成分とする抗ウイルス剤として使用するには不十分である。このような事情から、現時点において、プロテアーゼの活性を阻害する新たなプロテアーゼインヒビターの開発が望まれている。   However, since ritonavir and phlorotannin do not bind sufficiently to the active center of the SARS virus-derived protease, they cannot sufficiently inhibit the activity of the protease. For this reason, ritonavir or phlorotannin is insufficient for SARS as an antiviral agent containing a protease inhibitor as an active ingredient. Under such circumstances, at present, development of a new protease inhibitor that inhibits the activity of protease is desired.

本発明は、上述したような課題に鑑みてなされたものである。その目的は、プロテアーゼの活性を阻害する新たなプロテアーゼインヒビターを提供するものである。また、プロテアーゼを有効成分として含む新たな抗ウイルス剤を提供するものである。   The present invention has been made in view of the above-described problems. The object is to provide new protease inhibitors that inhibit the activity of proteases. The present invention also provides a new antiviral agent containing protease as an active ingredient.

以上のような目的を達成するために、本発明は、以下のようなものを提供する。   In order to achieve the above object, the present invention provides the following.

（１） 下記一般式（式１）で表されるピリジンカルボニトリル系化合物又はその薬学的に許容され得る塩であるプロテアーゼインヒビター。
・・・（式１）
（式中、
Ａは、
（ａ）置換基として低級アルキル基または水酸基を有していてもよいジメチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基のいずれか、あるいは
（ｂ）−（ＣＨ２）ｎＣＯ−（ｎは１から３の整数）で示される基、のいずれかを示し、
Ｒ１は、
窒素原子を介してＡと結合し、置換基としてアルキル基を有していてもよい含窒素飽和の４から８員環基のいずれかを示し、ここで、前記環を形成するメチレン基の少なくとも１個は、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、または低級アルキル基を有する窒素原子で置換されていてもよく、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、
（ｃ）水素原子、または
（ｄ）フェニル基、または
（ｅ）ハロゲン基、ハロゲノメチル基、低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級アルキレンジオキシ基、アラルキルオキシ基、あるいはこれらの複数個で置換されたフェニル基のいずれか、から選ばれる原子または基を示す。） (1) A protease inhibitor which is a pyridinecarbonitrile compound represented by the following general formula (formula 1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
... (Formula 1)
(Where
A is
(A) As a substituent, either a dimethylene group, trimethylene group or tetramethylene group which may have a lower alkyl group or a hydroxyl group, or (b)-(CH2) nCO- (n is an integer of 1 to 3) Any one of the groups represented by
R 1 is
Any one of nitrogen-containing saturated 4- to 8-membered cyclic groups which may be bonded to A via a nitrogen atom and optionally have an alkyl group as a substituent, wherein at least one of the methylene groups forming the ring; One may be substituted with an oxygen atom, a sulfur atom, a nitrogen atom, or a nitrogen atom having a lower alkyl group,
R 2 and R 3 are each independently
(C) a hydrogen atom, or (d) a phenyl group, or (e) a halogen group, a halogenomethyl group, a lower alkyl group, a lower alkoxy group, a lower alkylenedioxy group, an aralkyloxy group, or a plurality thereof. An atom or group selected from any of the following phenyl groups. )

（１）の発明によれば、式（式１）で表されるピリジンカルボニトリル系化合物であるプロテアーゼインヒビターは、例えば、一種の基質としてプロテアーゼに作用し、このプロテアーゼインヒビターの反応部位とプロテアーゼ側の活性中心とが結合して安定な複合体を形成する。従って、このプロテアーゼインヒビターは、例えば、プロテアーゼの活性部位と結合することにより、このプロテアーゼの基質となるタンパク質と結合することを阻害し、さらに、このプロテアーゼによるタンパク質の分解を阻害することができる。   According to the invention of (1), a protease inhibitor that is a pyridinecarbonitrile-based compound represented by the formula (Formula 1) acts on a protease as a kind of substrate, for example. The active center binds to form a stable complex. Therefore, this protease inhibitor can inhibit, for example, binding to a protein serving as a substrate for the protease by binding to the active site of the protease, and can further inhibit degradation of the protein by the protease.

（２） （１）に記載のプロテアーゼインヒビターであって、ピリジンカルボニトリル系化合物又はその薬学的に許容され得る塩におけるＲ１は、４−モルフォリニル基または１−ピペリジル基であるプロテアーゼインヒビター。 (2) The protease inhibitor according to (1), wherein R 1 in the pyridinecarbonitrile compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is a 4-morpholinyl group or a 1-piperidyl group.

（２）の発明によれば、（２）の発明によるプロテアーゼインヒビターが、例えば、一種の基質としてプロテアーゼに作用し、このプロテアーゼインヒビターの反応部位とプロテアーゼ側の活性中心とが結合して、さらに、安定な複合体を形成する。従って、このプロテアーゼインヒビターは、例えば、プロテアーゼの活性部位と結合することにより、このプロテアーゼの基質となるタンパク質と結合することを阻害し、さらに、このプロテアーゼによるタンパク質の分解を阻害することができる。   According to the invention of (2), the protease inhibitor according to the invention of (2) acts, for example, on a protease as a kind of substrate, and the reaction site of this protease inhibitor and the active center on the protease side are bound, Forms a stable complex. Therefore, this protease inhibitor can inhibit, for example, binding to a protein serving as a substrate for the protease by binding to the active site of the protease, and can further inhibit degradation of the protein by the protease.

（３） 下記式（式２）で表されるピリジンカルボニトリル系化合物又はその薬学的に許容され得る塩であるプロテアーゼインヒビター。
・・・（式２） (3) A protease inhibitor which is a pyridinecarbonitrile compound represented by the following formula (formula 2) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
... (Formula 2)

（３）の発明によれば、式（式２）で表されるピリジンカルボニトリル系化合物であるプロテアーゼインヒビターは、例えば、一種の基質としてプロテアーゼに作用し、このプロテアーゼインヒビターの反応部位とプロテアーゼ側の活性中心とが結合して安定な複合体を形成する。従って、このプロテアーゼインヒビターは、例えば、プロテアーゼの活性部位と結合することにより、このプロテアーゼの基質となるタンパク質と結合することを阻害し、さらに、このプロテアーゼによるタンパク質の分解を阻害することができる。   According to the invention of (3), a protease inhibitor which is a pyridinecarbonitrile compound represented by the formula (Formula 2) acts on a protease as, for example, a kind of substrate, and the reaction site of the protease inhibitor and the protease side The active center binds to form a stable complex. Therefore, this protease inhibitor can inhibit, for example, binding to a protein serving as a substrate for the protease by binding to the active site of the protease, and can further inhibit degradation of the protein by the protease.

（４） 下記式（式３）で表されるピリジンカルボニトリル系化合物又はその薬学的に許容され得る塩であるプロテアーゼインヒビター。
(4) A protease inhibitor which is a pyridinecarbonitrile compound represented by the following formula (formula 3) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

（４）の発明によれば、式（式３）で表されるピリジンカルボニトリル系化合物であるプロテアーゼインヒビターは、例えば、一種の基質としてプロテアーゼに作用し、このプロテアーゼインヒビターの反応部位とプロテアーゼ側の活性中心とが結合して安定な複合体を形成する。従って、このプロテアーゼインヒビターは、例えば、プロテアーゼの活性部位と結合することにより、このプロテアーゼの基質となるタンパク質と結合することを阻害し、さらに、このプロテアーゼによるタンパク質の分解を阻害することができる。   According to the invention of (4), a protease inhibitor which is a pyridinecarbonitrile compound represented by the formula (Formula 3) acts on a protease as, for example, a kind of substrate, and the reaction site of the protease inhibitor and the protease side The active center binds to form a stable complex. Therefore, this protease inhibitor can inhibit, for example, binding to a protein serving as a substrate for the protease by binding to the active site of the protease, and can further inhibit degradation of the protein by the protease.

（５） （１）から（４）いずれか記載のプロテアーゼインヒビターであって、活性中心にＳＨ基を有するプロテアーゼの活性を阻害するプロテアーゼインヒビター。   (5) The protease inhibitor according to any one of (1) to (4), which inhibits the activity of a protease having an SH group at the active center.

（５）の発明によれば、（５）の発明によるプロテアーゼインヒビターが、一種の基質として、例えば、活性中心にＳＨ基を有するプロテアーゼに作用し、このプロテアーゼインヒビターの反応部位と、例えば、活性中心にＳＨ基を有するプロテアーゼ側の活性中心とが結合して、さらに、安定な複合体を形成する。従って、このプロテアーゼインヒビターは、例えば、プロテアーゼの活性部位と結合することにより、このプロテアーゼの基質となるタンパク質と結合することを阻害し、さらに、活性中心にＳＨ基を有するプロテアーゼによるタンパク質の分解を阻害することができる。   According to the invention of (5), the protease inhibitor according to the invention of (5) acts as a kind of substrate, for example, on a protease having an SH group at the active center, and the reaction site of the protease inhibitor, for example, the active center And an active center on the protease side having an SH group bind to each other to form a stable complex. Therefore, this protease inhibitor inhibits, for example, binding to a protein serving as a substrate of the protease by binding to the active site of the protease, and further inhibits degradation of the protein by a protease having an SH group at the active center. can do.

（６） （１）から（５）いずれか記載のプロテアーゼインヒビターであって、ウイルス由来のプロテアーゼの活性を阻害するプロテアーゼインヒビター。   (6) A protease inhibitor according to any one of (1) to (5), which inhibits the activity of a virus-derived protease.

（６）の発明によれば、（６）の発明によるプロテアーゼインヒビターが、一種の基質として、例えば、ウイルス由来のプロテアーゼに作用し、このプロテアーゼインヒビターの反応部位と、例えば、ウイルス由来のプロテアーゼ側の活性中心とが結合して、さらに、安定な複合体を形成する。従って、このプロテアーゼインヒビターは、例えば、プロテアーゼの活性部位と結合することにより、このプロテアーゼの基質となるタンパク質と結合することを阻害し、さらに、ウイルス由来のプロテアーゼによるタンパク質の分解を阻害することができる。   According to the invention of (6), the protease inhibitor according to the invention of (6) acts as a kind of substrate on, for example, a virus-derived protease, and reacts with the protease inhibitor reaction site, for example, on the virus-derived protease side. The active center binds to form a stable complex. Therefore, the protease inhibitor can inhibit, for example, binding to a protein serving as a substrate of the protease by binding to the active site of the protease, and further inhibit the degradation of the protein by a virus-derived protease. .

（７） （６）に記載のプロテアーゼインヒビターであって、前記ウイルス由来のプロテアーゼが、ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼであるプロテアーゼインヒビター。   (7) The protease inhibitor according to (6), wherein the virus-derived protease is an RNA virus-derived protease.

（７）の発明によれば、（７）の発明によるプロテアーゼインヒビターが、一種の基質として、例えば、ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼに作用し、このプロテアーゼインヒビターの反応部位と、例えば、ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼ側の活性中心とが結合して、さらに、安定な複合体を形成する。従って、このプロテアーゼインヒビターは、例えば、プロテアーゼの活性部位と結合することにより、このプロテアーゼの基質となるタンパク質と結合することを阻害し、さらに、ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼによるタンパク質の分解を阻害することができる。   According to the invention of (7), the protease inhibitor according to the invention of (7) acts as a kind of substrate on, for example, a protease derived from RNA virus, and the reaction site of this protease inhibitor, for example, a protease derived from RNA virus The active center on the side binds to form a stable complex. Therefore, this protease inhibitor inhibits, for example, binding to a protein serving as a substrate for this protease by binding to the active site of the protease, and further inhibits degradation of the protein by protease derived from RNA virus. it can.

（８） （７）に記載のプロテアーゼインヒビターであって、前記ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼが、一本鎖（＋）ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼであるプロテアーゼインヒビター。   (8) The protease inhibitor according to (7), wherein the RNA virus-derived protease is a single-stranded (+) RNA virus-derived protease.

（８）の発明によれば、（８）の発明によるプロテアーゼインヒビターが、一種の基質として、例えば、一本鎖（＋）ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼに作用し、このプロテアーゼインヒビターの反応部位と、例えば、一本鎖（＋）ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼ側の活性中心とが結合して、さらに、安定な複合体を形成する。従って、このプロテアーゼインヒビターは、例えば、プロテアーゼの活性部位と結合することにより、このプロテアーゼの基質となるタンパク質と結合することを阻害し、さらに、一本鎖（＋）ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼによるタンパク質の分解を阻害することができる。   According to the invention of (8), the protease inhibitor according to the invention of (8) acts on a protease derived from, for example, a single-stranded (+) RNA virus as a kind of substrate, A single-stranded (+) RNA virus-derived active center on the protease side binds to form a stable complex. Therefore, this protease inhibitor inhibits binding to a protein that is a substrate of this protease, for example, by binding to the active site of the protease, and further, the protease of a protein derived from a single-stranded (+) RNA virus Degradation can be inhibited.

（９） （８）に記載のプロテアーゼインヒビターであって、前記一本鎖（＋）ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼが、コロナウイルス科に属するウイルス由来のプロテアーゼであるプロテアーゼインヒビター。   (9) The protease inhibitor according to (8), wherein the single-stranded (+) RNA virus-derived protease is a protease derived from a virus belonging to the Coronaviridae family.

（９）の発明によれば、（９）の発明によるプロテアーゼインヒビターが、一種の基質として、例えば、コロナウイルス科に属するウイルス由来のプロテアーゼに作用し、このプロテアーゼインヒビターの反応部位と、例えば、コロナウイルス科に属するウイルス由来のプロテアーゼ側の活性中心とが結合して、さらに、安定な複合体を形成する。従って、このプロテアーゼインヒビターは、例えば、プロテアーゼの活性部位と結合することにより、このプロテアーゼの基質となるタンパク質と結合することを阻害し、さらに、コロナウイルス科に属するウイルス由来のプロテアーゼによるタンパク質の分解を阻害することができる。   According to the invention of (9), the protease inhibitor according to the invention of (9) acts as a kind of substrate on, for example, a protease derived from a virus belonging to the Coronaviridae family, and the reaction site of this protease inhibitor, for example, corona The active center on the protease side from a virus belonging to the family Viridae binds to form a stable complex. Therefore, this protease inhibitor inhibits binding to a protein that is a substrate of this protease, for example, by binding to the active site of the protease, and further prevents degradation of the protein by a protease derived from a virus belonging to the Coronaviridae family. Can be inhibited.

（１０） （９）に記載のプロテアーゼインヒビターであって、前記コロナウイルス科に属するウイルス由来のプロテアーゼが、ヒトコロナウイルス、ブタコロナウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスのいずれかのウイルス由来のプロテアーゼであるプロテアーゼインヒビター。   (10) The protease inhibitor according to (9), wherein the protease derived from a virus belonging to the Coronaviridae family is derived from any one of human coronavirus, porcine coronavirus, and severe acute respiratory syndrome (SARS) virus. A protease inhibitor which is a protease.

（１０）の発明によれば、（１０）の発明によるプロテアーゼインヒビターが、一種の基質として、例えば、ヒトコロナウイルス、ブタコロナウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスのいずれかのウイルス由来のプロテアーゼに作用し、このプロテアーゼインヒビターの反応部位と、例えば、ヒトコロナウイルス、ブタコロナウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスのいずれかのウイルス由来のプロテアーゼ側の活性中心とが結合して、さらに、安定な複合体を形成する。従って、このプロテアーゼインヒビターは、例えば、プロテアーゼの活性部位と結合することにより、このプロテアーゼの基質となるタンパク質と結合することを阻害し、さらに、ヒトコロナウイルス、ブタコロナウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスのいずれかのウイルス由来のプロテアーゼによるタンパク質の分解を阻害することができる。   According to the invention of (10), the protease inhibitor according to the invention of (10) is derived from any one of, for example, human coronavirus, porcine coronavirus, and severe acute respiratory syndrome (SARS) virus as a kind of substrate. Acting on protease, the reaction site of this protease inhibitor and the active center on the protease side derived from any one of human coronavirus, porcine coronavirus, severe acute respiratory syndrome (SARS) virus, for example, Furthermore, a stable complex is formed. Therefore, this protease inhibitor inhibits binding to a protein serving as a substrate for this protease, for example, by binding to the active site of the protease, and further, human coronavirus, porcine coronavirus, severe acute respiratory syndrome ( Protein degradation by proteases from any of the SARS) viruses can be inhibited.

（１１） （１）から（１０）いずれか記載のプロテアーゼインヒビターを有効成分として含む抗ウイルス剤。   (11) An antiviral agent comprising the protease inhibitor according to any one of (1) to (10) as an active ingredient.

（１１）の発明によれば、プロテアーゼインヒビターが、一種の基質として、例えば、プロテアーゼに作用し、このプロテアーゼインヒビターの反応部位と、例えば、プロテアーゼ側の活性中心とが結合して、さらに、安定な複合体を形成する。このため、本発明のプロテアーゼインヒビターは、例えば、ウイルス増殖に必要なプロテアーゼによるタンパク質分解反応を阻害することによって、ウイルスの増殖を抑えることができる。このため、このプロテアーゼインヒビターは抗ウイルス剤の有効成分として、ウイルス感染症の治療及び予防に使用することができる。   According to the invention of (11), the protease inhibitor acts as, for example, a protease as a kind of substrate, and the reaction site of this protease inhibitor binds to, for example, the active center on the protease side, thereby further stabilizing the protease. Form a complex. For this reason, the protease inhibitor of the present invention can suppress the growth of the virus, for example, by inhibiting the proteolytic reaction by the protease necessary for the virus growth. Therefore, this protease inhibitor can be used as an active ingredient of an antiviral agent for the treatment and prevention of viral infections.

本発明のプロテアーゼインヒビターは、プロテアーゼの活性中心に結合することによって、プロテアーゼの活性を阻害することができる。また、本発明のプロテアーゼインヒビターは、例えば、ウイルス増殖に必要なプロテアーゼの活性を阻害することによって、抗ウイルス剤として、ウイルス感染症の治療及び予防に使用できる。   The protease inhibitor of the present invention can inhibit the activity of the protease by binding to the active center of the protease. The protease inhibitor of the present invention can be used as an antiviral agent for the treatment and prevention of viral infections, for example, by inhibiting the activity of proteases necessary for virus growth.

本発明にかかるプロテアーゼインヒビターであるピリジンカルボニトリル系化合物又はその薬学的に許容され得る塩（以下、単にピリジンカルボニトリル系化合物ともいう）は、下記式（式１）で表される硫黄原子を含む化合物である。   A pyridinecarbonitrile compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof (hereinafter also simply referred to as a pyridinecarbonitrile compound) which is a protease inhibitor according to the present invention contains a sulfur atom represented by the following formula (formula 1). A compound.

・・・（式１） ... (Formula 1)

（式中、
Ａは、
（ａ）置換基として低級アルキル基または水酸基を有していてもよいジメチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基のいずれか、あるいは
（ｂ）−（ＣＨ２）ｎＣＯ−（ｎは１から３の整数）で示される基、のいずれかを示し、
Ｒ１は、
窒素原子を介してＡと結合し、置換基としてアルキル基を有していてもよい含窒素飽和の４から８員環基のいずれかを示し、ここで、前記環を形成するメチレン基の少なくとも１個は、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、または低級アルキル基を有する窒素原子で置換されていてもよく、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、
（ｃ）水素原子、または
（ｄ）フェニル基、または
（ｅ）ハロゲン基、ハロゲノメチル基、低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級アルキレンジオキシ基、アラルキルオキシ基、あるいはこれらの複数個で置換されたフェニル基のいずれか、から選ばれる原子または基を示す。） (Where
A is
(A) Either a dimethylene group, trimethylene group or tetramethylene group which may have a lower alkyl group or a hydroxyl group as a substituent, or (b)-(CH 2 ) n CO— (n is 1 to 3) An integer), and
R 1 is
Any one of nitrogen-containing saturated 4- to 8-membered cyclic groups which may be bonded to A via a nitrogen atom and optionally have an alkyl group as a substituent, wherein at least one of the methylene groups forming the ring; One may be substituted with an oxygen atom, a sulfur atom, a nitrogen atom, or a nitrogen atom having a lower alkyl group,
R 2 and R 3 are each independently
(C) a hydrogen atom, or (d) a phenyl group, or (e) a halogen group, a halogenomethyl group, a lower alkyl group, a lower alkoxy group, a lower alkylenedioxy group, an aralkyloxy group, or a plurality thereof. An atom or group selected from any of the following phenyl groups. )

本発明に係る式（式１）にて表されるＡは、具体的には、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、プロピレン、2-メチルトリメチレン、2,2-ジメチルトリメチレン、2-ヒドロキシトリメチレン、メチレンカルボニル、エチレンカルボニル等が例示することができる。   Specifically, A represented by the formula (Formula 1) according to the present invention is ethylene, trimethylene, tetramethylene, propylene, 2-methyltrimethylene, 2,2-dimethyltrimethylene, 2-hydroxytrimethylene. , Methylenecarbonyl, ethylenecarbonyl and the like.

本発明に係る式（式１）にて表されるＲ１は、具体的には、1-ピロリジニル、1-ピペリジル、パーヒドロ-1-アゼピニル、4-モルホリニル、4-チオモルホリニル、4-メチル-1-ピペラジニル等が例示することができる。 R 1 represented by the formula (formula 1) according to the present invention is specifically 1-pyrrolidinyl, 1-piperidyl, perhydro-1-azepinyl, 4-morpholinyl, 4-thiomorpholinyl, 4-methyl-1 -Piperazinyl and the like can be exemplified.

本発明に係る式（式１）にて表されるＲ２およびＲ３は、具体的には、フェニル、4-フルオロフェニル、4-クロロフェニル、4-トリフルオロメチルフェニル、2-メチルフェニル、3-メチルフェニル、4-メチルフェニル、3,4-ジメチルフェニル、2-メトキシフェニル、4-メトキシフェニル、3,4-ジメトキシフェニル、4-エトキシフェニル、3,4-メチレンジオキシフェニル、4-ベンジルオキシ-3-メトキシフェニル等が例示することができる。 R 2 and R 3 represented by the formula (formula 1) according to the present invention are specifically phenyl, 4-fluorophenyl, 4-chlorophenyl, 4-trifluoromethylphenyl, 2-methylphenyl, 3 -Methylphenyl, 4-methylphenyl, 3,4-dimethylphenyl, 2-methoxyphenyl, 4-methoxyphenyl, 3,4-dimethoxyphenyl, 4-ethoxyphenyl, 3,4-methylenedioxyphenyl, 4-benzyl Examples thereof include oxy-3-methoxyphenyl.

本発明に係る式（式１）で表されるピリジンカルボニトリル系化合物の薬学的に許容され得る塩とは、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、硝酸塩のような鉱酸塩；メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のようなスルホン酸塩；シュウ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、マンデル酸塩、アスコルビン酸塩、乳酸塩、グルコン酸塩、リンゴ酸塩のような有機酸塩等の酸付加塩が挙げられる。   Examples of the pharmaceutically acceptable salt of the pyridinecarbonitrile compound represented by the formula (Formula 1) according to the present invention include hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, phosphate, Mineral salts such as sulfates and nitrates; sulfonates such as methanesulfonate, ethanesulfonate, benzenesulfonate, p-toluenesulfonate; oxalate, tartrate, citrate, Acid addition salts such as maleate, succinate, acetate, benzoate, mandelate, ascorbate, lactate, gluconate, malate and the like.

本発明に係る式（式１）で表されるプロテアーゼインヒビターに含まれるピリジンカルボニトリル系化合物は、SPECS社（オランダ）等から市販品を購入することができる。また、下記の合成法にて製造することができるが、特に限定されるものではない。   The pyridinecarbonitrile compound contained in the protease inhibitor represented by the formula (Formula 1) according to the present invention can be purchased from SPECS (Netherlands) or the like. Moreover, although it can manufacture with the following synthesis method, it is not specifically limited.

反応式１：Ａに水酸基の置換基がない例
・・・（式４） Reaction Formula 1: Example where A does not have a hydroxyl group substituent
... (Formula 4)

反応式２：Ａに水酸基がある例
Reaction formula 2: Example where A has a hydroxyl group

式中のA、R1、R2、R3は上記に同じであり、Xはハロゲン基を示す。化合物(2)はG.E.H.Elgemeie, Heterocycles, 31, 123-127(1990)を参考にして製造することができる。化合物(2)から化合物(3)あるいは化合物(5)の合成はJ.L.Soto et al.,Organic Preparation and Procedures Int., 16, 11-24(1984)を参考にして製造することができる。化合物(3)から化合物(4)の合成は公知のアルコール性水酸基のハロゲン化反応あるいはカルボン酸ハライドの合成反応を利用して製造することができる。化合物(4)から化合物(1)の合成は公知のアミン誘導体のアルキル化反応あるいはカルボン酸アミドの合成反応を利用して製造することができる。化合物(5)から化合物(1)の合成は公知のオキシラン誘導体のアミンによる開環反応を利用して製造することができる。 In the formula, A, R 1 , R 2 and R 3 are the same as above, and X represents a halogen group. Compound (2) can be produced with reference to GEHElgemeie, Heterocycles, 31, 123-127 (1990). Synthesis of compound (3) or compound (5) from compound (2) can be produced with reference to JLSoto et al., Organic Preparation and Procedures Int., 16, 11-24 (1984). The compound (4) can be synthesized from the compound (3) using a known halogenation reaction of an alcoholic hydroxyl group or a synthesis reaction of a carboxylic acid halide. The compound (1) can be synthesized from the compound (4) by using a known alkylation reaction of an amine derivative or a synthesis reaction of a carboxylic acid amide. Synthesis of compound (1) from compound (5) can be produced by utilizing a ring-opening reaction of a known oxirane derivative with an amine.

本発明においては、前記式（式１）で表される硫黄原子を含むピリジンカルボニトリル系化合物の具体例としては、例えば、下記式、（式２）4-(4-メトキシフェニル)-6-(4-メチルフェニル)-2-[[2-(4-モルホリニル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式３）4-(4-メトキシフェニル)-6-フェニル-2-[[2-(1-ピペリジル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式６）4-(4-メチルフェニル)-6-フェニル-2-[[3-(4-モルホリニル)-2-ヒドロキシプロピル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式７）4,6-ジフェニル-2-[[2-(1-ピペリジル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式８）4-(4-クロロフェニル)-6-フェニル-2-[[2-(1-ピペリジル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式９）4-(4-メトキシフェニル)-6-(3,4-ジメチルフェニル)-2-[(4-モルホリニル)カルボニルメチルチオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式１０）4-(4-メトキシフェニル)-6-フェニル-2-[(4-モルホリニル)カルボニルメチルチオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式１１）4,6-ジフェニル-2-[(4-モルホリニル)カルボニルメチルチオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式１２）6-フェニル-2-[[2-(4-モルホリニル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式１３）4-(3,4-ジメトキシフェニル)-6-(4-メチルフェニル)-2-[[2-(1-ピペリジル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式１４）4-(2-メトキシフェニル)-6-(4-メチルフェニル)-2-[[2-(1-ピペリジル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式１５）6-(4-メチルフェニル)-4-フェニル-2-[[2-(1-ピペリジル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式１６）4-(2-メトキシフェニル)-6-フェニル-2-[[2-(パーヒドロ-1-アゼピニル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式１７）4-(4-フルオロフェニル)-6-フェニル-2-[[2-(1-ピペリジル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式１８）6-(4-メチルフェニル)-4-フェニル-2-[(4-モルホリニル)カルボニルメチルチオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式１９）4-(3,4-ジメトキシフェニル)-6-(4-メチルフェニル)-2-[(4-モルホリニル)カルボニルメチルチオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式２０）4-(2-メトキシフェニル)-6-(4-メチルフェニル)-2-[(4-モルホリニル)カルボニルメチルチオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式２１）6-(4-エトキシフェニル)-4-フェニル-2-[[2-(1-ピペリジル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式２２）4-(4-ベンジルオキシ-3-メトキシフェニル)-6-フェニル-2-[[2-(1-ピペリジル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリル、（式２３）6-(4-メチルフェニル)-4-フェニル-2-[[2-(4-モルホリニル)エチル]チオ]-3-ピリジンカルボニトリルの化合物を挙げることができる。これらの中では、式（式２）の化合物が最も好ましく用いられる。   In the present invention, specific examples of the pyridinecarbonitrile-based compound containing a sulfur atom represented by the formula (formula 1) include, for example, the following formula: (formula 2) 4- (4-methoxyphenyl) -6- (4-Methylphenyl) -2-[[2- (4-morpholinyl) ethyl] thio] -3-pyridinecarbonitrile, (Formula 3) 4- (4-methoxyphenyl) -6-phenyl-2-[[ 2- (1-Piperidyl) ethyl] thio] -3-pyridinecarbonitrile, (formula 6) 4- (4-methylphenyl) -6-phenyl-2-[[3- (4-morpholinyl) -2-hydroxy Propyl] thio] -3-pyridinecarbonitrile (formula 7) 4,6-diphenyl-2-[[2- (1-piperidyl) ethyl] thio] -3-pyridinecarbonitrile, (formula 8) 4- ( 4-chlorophenyl) -6-phenyl-2-[[2- (1-piperidyl) ethyl] thio] -3-pyridinecarbonitrile (formula 9) 4- (4-methoxyphenyl) -6- (3,4 -Dimethylphenyl) -2-[(4-morpholinyl) carbonyl Tylthio] -3-pyridinecarbonitrile (formula 10) 4- (4-methoxyphenyl) -6-phenyl-2-[(4-morpholinyl) carbonylmethylthio] -3-pyridinecarbonitrile, (formula 11) 4, 6-diphenyl-2-[(4-morpholinyl) carbonylmethylthio] -3-pyridinecarbonitrile, (Formula 12) 6-phenyl-2-[[2- (4-morpholinyl) ethyl] thio] -3-pyridinecarbo Nitrile, (Formula 13) 4- (3,4-Dimethoxyphenyl) -6- (4-methylphenyl) -2-[[2- (1-piperidyl) ethyl] thio] -3-pyridinecarbonitrile, (Formula 14) 4- (2-methoxyphenyl) -6- (4-methylphenyl) -2-[[2- (1-piperidyl) ethyl] thio] -3-pyridinecarbonitrile, (Formula 15) 6- (4 -Methylphenyl) -4-phenyl-2-[[2- (1-piperidyl) ethyl] thio] -3-pyridinecarbonitrile, (Formula 16) 4- (2-methoxyphenyl) -6-phenyl-2- [[2- (Perhydro-1-aze Pinyl) ethyl] thio] -3-pyridinecarbonitrile, (formula 17) 4- (4-fluorophenyl) -6-phenyl-2-[[2- (1-piperidyl) ethyl] thio] -3-pyridinecarbonitrile Nitrile, (Formula 18) 6- (4-Methylphenyl) -4-phenyl-2-[(4-morpholinyl) carbonylmethylthio] -3-pyridinecarbonitrile, (Formula 19) 4- (3,4-dimethoxyphenyl) ) -6- (4-Methylphenyl) -2-[(4-morpholinyl) carbonylmethylthio] -3-pyridinecarbonitrile, (Formula 20) 4- (2-methoxyphenyl) -6- (4-methylphenyl) -2-[(4-morpholinyl) carbonylmethylthio] -3-pyridinecarbonitrile, (Formula 21) 6- (4-Ethoxyphenyl) -4-phenyl-2-[[2- (1-piperidyl) ethyl] thio ] -3-Pyridinecarbonitrile, (Formula 22) 4- (4-Benzyloxy-3-methoxyphenyl) -6-phenyl-2-[[2- (1-piperidyl) ethyl] thio] -3-pyridinecarb D And tolyl, (formula 23) 6- (4-methylphenyl) -4-phenyl-2-[[2- (4-morpholinyl) ethyl] thio] -3-pyridinecarbonitrile. Of these, the compound of the formula (Formula 2) is most preferably used.

式（式２）で表される化合物は、例えば、ピリジン環に置換基を導入することにより得ることができる。また、市販品をそのまま利用することも可能である。市販品としては、例えば、ＳＰＥＣＳ社のＡＧ−６９０／４０７５００９７、ＴｉｍＴｅｃ社のＯＶＳ２３１４３４４、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ社、Ａｍｂｉｎｔｅｒ社、ＡｓＩｎＥｘ社からのＢＡＳ１８１６４２８などを挙げることができる。   The compound represented by the formula (Formula 2) can be obtained, for example, by introducing a substituent into the pyridine ring. Moreover, it is also possible to use a commercial item as it is. Commercially available products include, for example, AG-690 / 40750097 from SPECS, OVS2314344 from TimTec, BAS1816428 from Interchim, Ambinter, AsInEx.

・・・（式３） ... (Formula 3)

式（式３）で表される化合物は、例えば、ピリジン環に置換基を導入することにより得ることができる。また、市販品をそのまま利用することも可能である。市販品としては、例えば、ＳＰＥＣＳ社のＡＫ−７７７／３６８４００２１、ＡＫｏｓ Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ ａｎｄ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ＧｍｂＨ社のＯＷＨＵＳＳＨ−３０７１９８８、Ａｍｂｉｎｔｅｒ社のＡ１１６８などを挙げることができる。   The compound represented by the formula (Formula 3) can be obtained, for example, by introducing a substituent into the pyridine ring. Moreover, it is also possible to use a commercial item as it is. Examples of commercially available products include AK-777 / 368840021 from SPECS, OWHUSSH-3071988 from Akos Consulting and Solutions GmbH, and A1168 from Ambinter.

・・・（式６） ... (Formula 6)

・・・（式７） ... (Formula 7)

・・・（式９） ... (Formula 9)

・・・（式１０） ... (Formula 10)

・・・（式１１） ... (Formula 11)

・・・（式１２） ... (Formula 12)

・・・（式１３） ... (Formula 13)

・・・（式１４） ... (Formula 14)

・・・（式１５） ... (Formula 15)

・・・（式１６） ... (Formula 16)

・・・（式１７） ... (Formula 17)

・・・（式１８） ... (Formula 18)

・・・（式１９） ... (Formula 19)

・・・（式２０） ... (Formula 20)

・・・（式２１） ... (Formula 21)

・・・（式２２） ... (Formula 22)

・・・（式２３） ... (Formula 23)

ウイルスによる感染症は、ＤＮＡウイルスやＲＮＡウイルスなどのウイルスが、宿主に感染することによって生じる。   Infectious diseases caused by viruses are caused by infecting a host with a virus such as a DNA virus or an RNA virus.

ＤＮＡウイルスの例としては、二本鎖ＤＮＡウイルスと一本鎖ＤＮＡウイルスがある。二本鎖ＤＮＡウイルスの例としては、例えば、ポックスウイルス科、イリドウイルス科、バキュロウイルス科、ヘルペスウイルス科、アデノウイルス科、パポーバウイルス科、ポリドナウイルス科、ヘパドナウイルス科に属するウイルスなどがある。一本鎖ＤＮＡウイルスの例としては、シルコウイルス科、パルボウイルス科に属するウイルスなどがある。   Examples of DNA viruses include double-stranded DNA viruses and single-stranded DNA viruses. Examples of double-stranded DNA viruses include viruses belonging to the poxviridae, iridoviridae, baculoviridae, herpesviridae, adenoviridae, papovaviridae, polydonaviridae, hepadnaviridae, etc. . Examples of single-stranded DNA viruses include viruses belonging to the family Silcoviridae and Parvoviridae.

ＲＮＡウイルスの例としては、二本鎖ＲＮＡウイルス、一本鎖（＋）ＲＮＡウイルス、一本鎖（−）ＲＮＡウイルスなどがある。二本鎖ＲＮＡウイルスの例としては、レオウイルス科、ビルナウイルス科に属するウイルスがある。また、一本鎖（＋）ＲＮＡウイルス例としては、ヒトコロナウイルス、ブタコロナウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスなどのコロナウイルス科、ピコルナウイルス科、カリシウイルス科、アストロウイルス科、ノダウイルス科、テトラウイルス科、フラビウイルス科、トガウイルス科、レトロウイルス科に属するウイルスなどがある。一本鎖（−）ＲＮＡウイルスの例としては、パラミクソウイルス科、ラブドウイルス科、フィロウイルス科、オルトミクソウイルス科、ブニヤウイルス科、アレナウイルス科に属するウイルスなどがある。   Examples of RNA viruses include double-stranded RNA viruses, single-stranded (+) RNA viruses, and single-stranded (-) RNA viruses. Examples of double-stranded RNA viruses include viruses belonging to the family Reoviridae and Birnaviridae. Examples of single-stranded (+) RNA viruses include human coronavirus, porcine coronavirus, severe acute respiratory syndrome (SARS) virus and other coronaviridae, picornaviridae, caliciviridae, astroviridae, There are viruses belonging to Nodaviridae, Tetraviridae, Flaviviridae, Togaviridae and Retroviridae. Examples of single-stranded (-) RNA viruses include Paramyxoviridae, Rhabdoviridae, Filoviridae, Orthomyxoviridae, Bunyaviridae, and Arenaviridae.

なお、コロナウイルス科に属するウイルス由来のプロテアーゼは、非常に類似していることが知られている（Anand K, Ziebuhr J, Wadhwani P, mesters JR, Hilgenfeld R. Coronavirus main proteinase (3CLpro) structure: basis for design of anti-SARS drugs. Science. 2003 Jun 13; 300(5626):1763-7）。   In addition, it is known that proteases derived from viruses belonging to the Coronaviridae family are very similar (Anand K, Ziebuhr J, Wadhwani P, mesters JR, Hilgenfeld R. Coronavirus main proteinase (3CLpro) structure: basis Science. 2003 Jun 13; 300 (5626): 1763-7) for design of anti-SARS drugs.

これらのＤＮＡウイルスやＲＮＡウイルスなどによるウイルス感染は、正常宿主細胞膜にある受容体タンパクにウイルスが結合するところから始まる。例えば、ＲＮＡウイルスは、受容体を介して細胞内に入り、細胞質内でＲＮＡウイルス由来のＲＮＡから一本鎖のタンパク質への翻訳を行う。   Viral infection with these DNA viruses or RNA viruses begins when the virus binds to a receptor protein in the normal host cell membrane. For example, an RNA virus enters a cell via a receptor and translates RNA from RNA virus into a single-stranded protein in the cytoplasm.

この一本鎖のタンパク質は、プロテアーゼとして機能する部位を有する。細胞質内において、この一本鎖のタンパク質が複数翻訳されると、これらの複数の一本鎖のタンパク質は、一方の一本鎖のタンパク質のプロテアーゼとして機能する部位によって、他方の一本鎖のタンパク質を切断する。このように翻訳された一本鎖のタンパク質が切断されることによって、例えば、プロテアーゼやキャプシドなどのウイルス増殖に必要なタンパク質が作られる。   This single-chain protein has a site that functions as a protease. When multiple single-stranded proteins are translated in the cytoplasm, these single-stranded proteins are separated from the other single-stranded protein by a site that functions as a protease of one single-stranded protein. Disconnect. By cleaving the translated single-stranded protein in this way, for example, a protein required for virus growth such as protease and capsid is produced.

このため、ウイルスの増殖において、プロテアーゼによるタンパク質の分解は重要である。プロテアーゼインヒビターによって、プロテアーゼによるタンパク質の分解を阻害することによりウイルスの増殖を抑えることが可能である。なお、プロテアーゼは、ウイルス由来のプロテアーゼ以外に、宿主細胞由来のプロテアーゼの場合がある。   For this reason, protein degradation by protease is important in virus growth. Protease inhibitors can suppress viral growth by inhibiting protein degradation by proteases. In addition to the virus-derived protease, the protease may be a host cell-derived protease.

なお、ウイルスごとにプロテアーゼのタイプ（例えば、セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、メタロプロテアーゼなど）が決まっているが、例えば、ＨＩＶのプロテアーゼ（アスパラギン酸プロテアーゼ）に対するプロテアーゼインヒビターであるネルフィナビルがシステインプロテアーゼを阻害するなど、あるタイプのプロテアーゼに対するプロテアーゼインヒビターが、別のタイプのプロテアーゼに対するプロテアーゼインヒビターとして機能し得ることが知られている。   The type of protease (for example, serine protease, cysteine protease, aspartic protease, metalloprotease, etc.) is determined for each virus. For example, nelfinavir, a protease inhibitor for HIV protease (aspartic protease), is cysteine protease. It is known that protease inhibitors for one type of protease can function as protease inhibitors for another type of protease, such as inhibiting.

本発明に係る式（式１）の化合物は、プロテアーゼの活性中心に結合するプロテアーゼインヒビターとして機能し、化合物の反応部位と、プロテアーゼ側の活性中心とが結合して、安定的な複合体を形成する。このため、これらの化合物は、プロテアーゼの活性部位と結合することにより、このプロテアーゼの基質となるタンパク質と結合することを阻害することができる。また、シアノ基がＳＨ基と反応し得るため、本発明に係る式（式１）の化合物によって阻害されるプロテアーゼは、活性部位にＳＨ基を有するプロテアーゼが好ましい。   The compound of the formula (Formula 1) according to the present invention functions as a protease inhibitor that binds to the active center of the protease, and the reaction site of the compound and the active center on the protease side bind to form a stable complex. To do. For this reason, these compounds can inhibit binding to a protein serving as a substrate of the protease by binding to the active site of the protease. Further, since the cyano group can react with the SH group, the protease inhibited by the compound of the formula (Formula 1) according to the present invention is preferably a protease having an SH group in the active site.

また、本発明に係る式（式１）の化合物によって阻害されるプロテアーゼは、宿主細胞由来のプロテアーゼやウイルス由来のプロテアーゼが好ましく、さらに、一本鎖（＋）ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼがより好ましい。さらに、コロナウイルス科に属するウイルス由来のプロテアーゼがより好ましい。   Moreover, the protease inhibited by the compound of formula (Formula 1) according to the present invention is preferably a protease derived from a host cell or a virus, and more preferably a protease derived from a single-stranded (+) RNA virus. Furthermore, a virus-derived protease belonging to the Coronaviridae family is more preferable.

感染細胞内において、例えば、キャプシドなどのタンパク質が十分に生産され、ＲＮＡの複製が十分に行われると、ウイルスは、感染細胞を破壊し、細胞外に放出され、新たな正常宿主細胞膜にある受容体タンパクに結合し得る。このため、ウイルス増殖に必要なタンパク質が産出されるためには、ウイルス感染から５〜６時間かかる。本発明に係る式（式１）の化合物は、ウイルス感染後に投与されると、細胞内において、ウイルス増殖に必要なプロテアーゼによるタンパク質分解反応を阻害し、ウイルスの増殖を抑えることが可能である。このため、このプロテアーゼインヒビターは抗ウイルス剤の有効成分として、ウイルス感染症の治療及び予防に使用することができる。   In an infected cell, for example, when a protein such as capsid is sufficiently produced and RNA is sufficiently replicated, the virus destroys the infected cell, is released outside the cell, and is received in a new normal host cell membrane. Can bind to body proteins. For this reason, it takes 5 to 6 hours from virus infection in order to produce proteins necessary for virus propagation. When the compound of the formula (Formula 1) according to the present invention is administered after virus infection, it can inhibit the proteolytic reaction by protease necessary for virus growth in the cell and suppress the virus growth. Therefore, this protease inhibitor can be used as an active ingredient of an antiviral agent for the treatment and prevention of viral infections.

本発明のプロテアーゼインヒビターを抗ウイルス剤として用いる場合、任意の剤型にすることができる。又、投与も各経路で行なわれる。経口投与の場合には、それに適用される錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などは、それらの組成物中に製剤上一般に使用される結合剤、包含剤、賦形剤、潤滑剤、崩壊剤、湿潤剤のような添加物を含有していてもよく、又経口用液体製剤として用いる場合は、内用水剤、振盪合剤、懸濁液剤、乳剤、シロップ剤の形態であってもよく、又使用する前に再溶解させる乾燥生成物の形態であってもよい。さらに、このような液体製剤は普通用いられる添加剤、保存剤のいずれを含有してもよい。注射用の場合には、その組成物は安定剤、緩衝剤、保存剤、等張化剤などの添加剤を含んでいてもよく、単位投与量アンプル、又は多投与量容器中で提供される。なお、上記組成物は水溶液、懸濁液、溶液、乳液などのような形態であってもよく、一方活性成分は使用する前に適当な滅菌した水などで再溶解させる粉末であってもよい。   When the protease inhibitor of the present invention is used as an antiviral agent, it can be in any dosage form. Administration is also performed by each route. In the case of oral administration, tablets, granules, powders, capsules, and the like applied thereto are binders, inclusion agents, excipients, lubricants, disintegrants commonly used in pharmaceutical compositions in those compositions. , May contain additives such as wetting agents, and when used as an oral liquid preparation, it may be in the form of an internal solution, a shaking mixture, a suspension, an emulsion, or a syrup. It may also be in the form of a dry product that is re-dissolved before use. Further, such a liquid preparation may contain any commonly used additive and preservative. For injection, the composition may contain additives such as stabilizers, buffers, preservatives, isotonic agents and the like, and is provided in unit dose ampoules or multiple dose containers. . The composition may be in the form of an aqueous solution, suspension, solution, emulsion, etc., while the active ingredient may be a powder that is re-dissolved in appropriate sterilized water before use. .

本発明の抗ウイルス剤は人間及び動物に経口的または非経口的に投与される。経口的投与は舌下投与を包含する。非経口的投与は注射例えば皮下、筋肉、静脈注射、点滴などを含む。本発明の抗ウイルス剤の投与量は動物か人間により、また年齢、個人差、病状などに影響されるので、場合によっては下記範囲外の量を投与する場合も生ずるが、一般に人間を対象とする場合、本物質の経口投与量は体重1Kg、１日当り0.1〜1000mg、好ましくは１〜100mgを１回から３回に分けて投与する。   The antiviral agent of the present invention is administered to humans and animals orally or parenterally. Oral administration includes sublingual administration. Parenteral administration includes injections such as subcutaneous, intramuscular, intravenous injection, infusion and the like. The dose of the antiviral agent of the present invention is affected by animals or humans, and by age, individual differences, medical conditions, etc. In this case, the oral dose of this substance is 1 kg body weight, 0.1 to 1000 mg, preferably 1 to 100 mg per day, divided into 1 to 3 doses.

以下、本発明を実施例、試験例に基づいて説明するが、本発明は、これらの例に限定されるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated based on an Example and a test example, this invention is not limited to these examples.

実施例１ ＳＡＲＳウイルス由来プロテアーゼ阻害効果比較実験
大腸菌を用いた蛋白質合成系を用いてリコンビナントＳＡＲＳウイルスプロテアーゼを作製した。基質はＦＲＥＴ(Fluorescence Resonance Energy Transfer)の技術を用い、切断によって蛍光を発する物質に変換される修飾ペプチドを作製した。酵素反応は酵素濃度５μＭ、基質濃度４０μＭ、薬剤濃度１００μＭで行い、３７℃で１２時間反応させた。その後基質切断によって生じた蛍光性物質の量を、蛍光強度を読みとることにより測定した。 Example 1 Comparative Experiment for SARS Virus-Derived Protease Inhibitory Effect Recombinant SARS virus protease was prepared using a protein synthesis system using Escherichia coli. The substrate used FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) technology to prepare a modified peptide that is converted into a substance that emits fluorescence upon cleavage. The enzyme reaction was performed at an enzyme concentration of 5 μM, a substrate concentration of 40 μM, and a drug concentration of 100 μM, and allowed to react at 37 ° C. for 12 hours. Thereafter, the amount of the fluorescent substance produced by the substrate cleavage was measured by reading the fluorescence intensity.

図１は、式（式２）の化合物（図中のＲ４６）と、ＳＡＲＳ−ＣｏＶメインプロテアーゼとの反応の結果を示している。コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）を添加したプロテアーゼの活性を１００％とする。式（式２）の化合物は、プロテアーゼの活性を７０％阻害している。   FIG. 1 shows the result of the reaction between the compound of formula (Formula 2) (R46 in the figure) and SARS-CoV main protease. The activity of the protease to which the control (Control) is added is defined as 100%. The compound of formula (Formula 2) inhibits the activity of protease by 70%.

これらの実験結果より、式（式２）の化合物がＳＡＲＳ−ＣｏＶメインプロテアーゼと結合することによって、プロテアーゼインヒビターとして機能することが分かった。   From these experimental results, it was found that the compound of the formula (Formula 2) functions as a protease inhibitor by binding to the SARS-CoV main protease.

実施例２ ＳＡＲＳウイルス増殖阻害効果比較実験
Vero E6細胞にSARS-CoVをMOI 0.01で感染させ、２４時間後に培養上清を回収し、ISOGEN(Nippongene)試薬でウイルスＲＮＡを回収した。次にこのＲＮＡを１step RT-PCR kit (ABI)とABI7700 sequence detector systemを用いて定量した。そのときに用いたプライマー・プローブの配列は以下の通りである。
ＯＲＦ1-Ｆ；ＡＧＣＴＡＣＧＡＧＣＡＣＣＡＧＡＣＡＣＣ,
ＯＲＦ１−Ｒ；ＡＣＴＴＴＧＧＧＣＡＴＴＣＣＣＣＴＴＴ,
ＯＲＦ１−ｐｒｏｂｅ;ＴＣＧＡＡＡＴＴＡＡＧＡＧＴＧＣＣＡＡＧＡＡＡＴＴＴＧＡＣＡＣＴＴＴ. Example 2 SARS virus growth inhibitory effect comparison experiment
Vero E6 cells were infected with SARS-CoV at MOI 0.01, and after 24 hours, the culture supernatant was collected, and viral RNA was collected with ISOGEN (Nippongene) reagent. Next, this RNA was quantified using 1 step RT-PCR kit (ABI) and ABI7700 sequence detector system. The primer / probe sequences used at that time are as follows.
ORF1-F; AGCTACGAGCACCAGACACC,
ORF1-R; ACTTTGGGCATTCCCCTTT,
ORF1-probe; TCGAAATTAAGAGTGCCAAGAAATTTTGACACTTT.

図２は、様々な濃度の化合物式（式２）の化合物（図中のＲ４６）を投与したＳＡＲＳウイルス増殖阻害効果の比較結果を示している。コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）を添加したＰＣＲのウイルスＲＮＡ量を１００％とする。０．０１μＭの式（式２）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して８８．６％阻害している。０．１μＭの式（式２）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９５．０％阻害している。１μＭの式（式２）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９９．６％阻害している。１０μＭの式（式２）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９９．９％阻害している。   FIG. 2 shows the comparison results of SARS virus growth inhibitory effects when various concentrations of the compound of the formula (Formula 2) (R46 in the figure) were administered. The amount of viral RNA in PCR to which control (Control) is added is defined as 100%. 0.01 μM of the compound of formula (Formula 2) inhibits the increase in RNA by 88.6% compared to the control. 0.1 μM of the compound of formula (Formula 2) inhibits the increase in RNA by 95.0% compared to the control. 1 μM of the compound of formula (Formula 2) inhibits the increase in RNA by 99.6% compared to the control. 10 μM of the compound of formula (Formula 2) inhibits the increase in RNA by 99.9% compared to the control.

これらの実験結果より、式（式２）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。   From these experimental results, it was found that the compound of the formula (Formula 2) inhibits the increase in SARS virus RNA.

実施例３ ＳＡＲＳウイルス感染後に起こる細胞変性（ＣＰＥ）実験
Vero E6細胞にSARS-CoVをMOI 0.01で感染させ、６０時間後に3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromideを加えた。３時間３７℃でインキュベーションしたあと、Triton/HCl-isopropyl alcoholで細胞を溶解し生成したFormazanの濃度を測定した。 Example 3 Cytopathic (CPE) experiments that occur after SARS virus infection
Vero E6 cells were infected with SARS-CoV at MOI 0.01, and 60 hours later, 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide was added. After incubation at 37 ° C. for 3 hours, the concentration of Formazan produced by lysing cells with Triton / HCl-isopropyl alcohol was measured.

表1は、様々な濃度の化合物式（式２）の化合物（表中のＲ４６）を投与したＳＡＲＳウイルス感染後に起こる細胞変性（ＣＰＥ）実験の結果を示している。ＥＣ５０は、抑制濃度を表している。ＣＣ５０は、細胞障害濃度を表している。
Table 1 shows the results of cytopathic (CPE) experiments that occur after SARS virus infection administered with various concentrations of compound of formula (Formula 2) (R46 in the table). EC50 represents the inhibitory concentration. CC50 represents the cytotoxic concentration.

図３は、様々な濃度の化合物式（式２）の化合物（図中のＲ４６）を投与したＳＡＲＳウイルス感染後に起こる細胞変性（ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ＣＰＥ）実験による細胞の写真を示している。式（式２）の化合物を非投与（０μＭ）の場合、ＣＰＥが生じている。また、式（式２）の化合物を０．１μＭ以上の濃度で投与した場合、ＣＰＥが非常に抑制されている。   FIG. 3 shows photographs of cells from a cytopathic effect CPE experiment that occurs after infection with SARS virus administered with various concentrations of the compound of formula (Formula 2) (R46 in the figure). CPE occurs when the compound of formula (Formula 2) is not administered (0 μM). In addition, when the compound of formula (Formula 2) is administered at a concentration of 0.1 μM or more, CPE is greatly suppressed.

これらの実験結果より、式（式２）の化合物がＳＡＲＳウイルスの増加を阻害することが分かった。   From these experimental results, it was found that the compound of the formula (Formula 2) inhibits the increase of SARS virus.

実施例４ ＭＴＴ分析実験
式（式２）の化合物（図４中の４６）、式（式３）の化合物（図４中の１５７）、式（式６）の化合物（図４中の１４６）、式（式７）の化合物（図４中の１４７）、式（式８）の化合物（図４中の１４８）、式（式９）の化合物（図４中の１４９）、式（式１０）の化合物（図４中の１５０）、式（式１１）の化合物（図４中の１５１）、式（式１２）の化合物（図４中の１５２）、式（式１３）の化合物（図４中の１５３）、式（式１４）の化合物（図４中の１５４）、式（式１５）の化合物（図４中の１５５）、式（式１６）の化合物（図４中の１５６）、式（式１７）の化合物（図４中の１５８）、式（式１８）の化合物（図４中の１５９）、式（式１９）の化合物（図４中の１６０）、式（式２０）の化合物（図４中の１６１）、式（式２１）の化合物（図４中の１６２）、式（式２２）の化合物（図４中の１６３）、式（式２３）の化合物（図４中の１６４）に対して、ＭＴＴ分析を行った。ＭＴＴ分析は、市販の試薬を用いて、それぞれ５μＭの濃度の化合物に対して行った。 Example 4 MTT analysis experiment Compound of formula (formula 2) (46 in FIG. 4), compound of formula (formula 3) (157 in FIG. 4), compound of formula (formula 6) (146 in FIG. 4) , Compound of formula (formula 7) (147 in FIG. 4), compound of formula (formula 8) (148 in FIG. 4), compound of formula (formula 9) (149 in FIG. 4), formula (formula 10 ) Compound (150 in FIG. 4), compound of formula (Formula 11) (151 in FIG. 4), compound of Formula (Formula 12) (152 in FIG. 4), compound of Formula (Formula 13) (Figure 153 in 4), compound of formula (Formula 14) (154 in FIG. 4), compound of Formula (Formula 15) (155 in FIG. 4), compound of Formula (Formula 16) (156 in FIG. 4) , Compound of formula (formula 17) (158 in FIG. 4), compound of formula (formula 18) (159 in FIG. 4), compound of formula (formula 19) (160 in FIG. 4), formula (formula 20 ) Product (161 in FIG. 4), compound of formula (formula 21) (162 in FIG. 4), compound of formula (formula 22) (163 in FIG. 4), compound of formula (formula 23) (in FIG. 4) 164) was subjected to MTT analysis. MTT analysis was performed on compounds at a concentration of 5 μM using commercially available reagents.

図４は、式（式２）の化合物、式（式３）の化合物、式（式６）の化合物、式（式７）の化合物、式（式８）の化合物、式（式９）の化合物、式（式１０）の化合物、式（式１１）の化合物、式（式１２）の化合物、式（式１３）の化合物、式（式１４）の化合物、式（式１５）の化合物、式（式１６）の化合物、式（式１７）の化合物、式（式１８）の化合物、式（式１９）の化合物、式（式２０）の化合物、式（式２１）の化合物、式（式２２）の化合物、式（式２３）の化合物に対するＭＴＴ分析の結果を示している。   FIG. 4 shows a compound of formula (formula 2), a compound of formula (formula 3), a compound of formula (formula 6), a compound of formula (formula 7), a compound of formula (formula 8), and a formula (formula 9). Compound, compound of formula (formula 10), compound of formula (formula 11), compound of formula (formula 12), compound of formula (formula 13), compound of formula (formula 14), compound of formula (formula 15), Compound of formula (formula 16), compound of formula (formula 17), compound of formula (formula 18), compound of formula (formula 19), compound of formula (formula 20), compound of formula (formula 21), formula ( The result of the MTT analysis with respect to the compound of Formula 22) and the compound of Formula (Formula 23) is shown.

これらの実験結果より、式（式２）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式３）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式６）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式７）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式８）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式９）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式１０）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式１１）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式１２）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式１３）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式１４）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式１５）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式１６）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式１７）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式１８）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式１９）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式２０）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式２１）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式２２）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。また、式（式２３）の化合物がウイルスによるＣＰＥを抑制し、かつ細胞の活性を阻害しないことが分かった。   From these experimental results, it was found that the compound of the formula (Formula 2) suppresses virus-induced CPE and does not inhibit cell activity. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 3) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 6) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 7) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 8) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 9) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 10) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 11) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 12) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 13) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 14) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 15) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 16) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 17) suppresses CPE by a virus and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 18) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 19) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 20) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 21) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 22) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell. Moreover, it turned out that the compound of Formula (Formula 23) suppresses CPE by a virus, and does not inhibit the activity of a cell.

実施例５ ＳＡＲＳウイルス増殖阻害効果比較実験
ＭＴＴ分析の結果、特に高い抑制活性を示した、式（式２）の化合物（図４中の４６）、式（式３）の化合物（図４中の１５７）、式（式８）の化合物（図４中の１４８）、式（式９）の化合物（図４中の１４９）、式（式１３）の化合物（図４中の１５３）、式（式１４）の化合物（図４中の１５４）、式（式１５）の化合物（図４中の１５５）、式（式１６）の化合物（図４中の１５６）、式（式１７）の化合物（図４中の１５８）、式（式１９）の化合物（図４中の１６０）、式（式２１）の化合物（図４中の１６２）、式（式２２）の化合物（図４中の１６３）に対して、以下のようにＳＡＲＳウイルス増殖阻害効果比較実験を行った。 Example 5 Comparative Experiment for SARS Virus Growth Inhibitory Effect As a result of MTT analysis, a compound of the formula (formula 2) (46 in FIG. 4) and a compound of the formula (formula 3) that showed particularly high suppressive activity (in FIG. 4) 157), a compound of formula (formula 8) (148 in FIG. 4), a compound of formula (formula 9) (149 in FIG. 4), a compound of formula (formula 13) (153 in FIG. 4), a formula ( Compound of formula 14) (154 in FIG. 4), compound of formula (formula 15) (155 in FIG. 4), compound of formula (formula 16) (156 in FIG. 4), compound of formula (formula 17) (158 in FIG. 4), compound of formula (formula 19) (160 in FIG. 4), compound of formula (formula 21) (162 in FIG. 4), compound of formula (formula 22) (in FIG. 4) 163), the SARS virus growth inhibitory effect comparison experiment was conducted as follows.

Vero E6細胞にSARS-CoVをMOI 0.01で感染させ、24時間後に培養上清を回収し、ISOGEN(Nippongene)試薬でウイルスRNAを回収した。次にこのRNAを1 step RT-PCR kit (ABI)とABI7700 sequence detector systemを用いて定量した。そのときに用いたプライマー・プローブの配列は以下の通りである。
ORF1-F;AGCTACGAGCACCAGACACC,
ORF1-R;ACTTTGGGCATTCCCCTTT,
ORF1-probe;TCGAAATTAAGAGTGCCAAGAAATTTGACACTTT. Vero E6 cells were infected with SARS-CoV at MOI 0.01, and after 24 hours, the culture supernatant was collected, and viral RNA was collected with ISOGEN (Nippongene) reagent. Next, this RNA was quantified using 1 step RT-PCR kit (ABI) and ABI7700 sequence detector system. The primer / probe sequences used at that time are as follows.
ORF1-F; AGCTACGAGCACCAGACACC,
ORF1-R; ACTTTGGGCATTCCCCTTT,
ORF1-probe; TCGAAATTAAGAGTGCCAAGAAATTTGACACTTT.

図５は、式（式２）の化合物（図５中のＲ４６）、式（式３）の化合物（図５中のＲ１５７）、式（式８）の化合物（図５中のＲ１４８）、式（式９）の化合物（図５中のＲ１４９）、式（式１３）の化合物（図５中のＲ１５３）、式（式１４）の化合物（図５中のＲ１５４）、式（式１５）の化合物（図５中のＲ１５５）、式（式１６）の化合物（図５中のＲ１５６）、式（式１７）の化合物（図５中のＲ１５８）、式（式１９）の化合物（図５中のＲ１６０）、式（式２１）の化合物（図５中のＲ１６２）、式（式２２）の化合物（図５中のＲ１６３）を投与したＳＡＲＳウイルス増殖阻害効果の比較結果を示している。コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）を添加したＰＣＲのウイルスＲＮＡ量を１００％とする。５μＭの式（式２）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９９．９％阻害している。５μＭの式（式３）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９９．９％阻害している。５μＭの式（式８）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９９．９％阻害している。５μＭの式（式９）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９９．９％阻害している。５μＭの式（式１３）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９９．６％阻害している。５μＭの式（式１４）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９９．９％阻害している。５μＭの式（式１５）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９９．９％阻害している。５μＭの式（式１６）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９９．２％阻害している。５μＭの式（式１７）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９９．９％阻害している。５μＭの式（式１９）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９３．６％阻害している。５μＭの式（式２１）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９９．９％阻害している。５μＭの式（式２２）の化合物は、ＲＮＡの増加をコントロールと比較して９０．３％阻害している。   FIG. 5 shows a compound of formula (formula 2) (R46 in FIG. 5), a compound of formula (formula 3) (R157 in FIG. 5), a compound of formula (formula 8) (R148 in FIG. 5), a formula (Formula 9) (R149 in FIG. 5), Formula (Formula 13) (R153 in FIG. 5), Formula (Formula 14) (R154 in FIG. 5), Formula (Formula 15) Compound (R155 in FIG. 5), compound of formula (Formula 16) (R156 in FIG. 5), compound of Formula (Formula 17) (R158 in FIG. 5), compound of Formula (Formula 19) (in FIG. 5) R160), the compound of the formula (Formula 21) (R162 in FIG. 5), and the compound of the formula (Formula 22) (R163 in FIG. 5) were administered, and the comparison results of SARS virus growth inhibitory effect were shown. The amount of viral RNA in PCR to which control (Control) is added is defined as 100%. 5 μM of the compound of formula (Formula 2) inhibits the increase in RNA by 99.9% compared to the control. 5 μM of the compound of formula (Formula 3) inhibits the increase in RNA by 99.9% compared to the control. 5 μM of the compound of formula (Formula 8) inhibits the increase in RNA by 99.9% compared to the control. 5 μM of the compound of formula (Formula 9) inhibits the increase in RNA by 99.9% compared to the control. 5 μM of the compound of formula (Formula 13) inhibits the increase in RNA by 99.6% compared to the control. 5 μM of the compound of formula (Formula 14) inhibits the increase in RNA by 99.9% compared to the control. 5 μM of the compound of formula (Formula 15) inhibits the increase in RNA by 99.9% compared to the control. 5 μM of the compound of formula (Formula 16) inhibits the increase in RNA by 99.2% compared to the control. 5 μM of the compound of formula (Formula 17) inhibits the increase in RNA by 99.9% compared to the control. 5 μM of the compound of formula (Formula 19) inhibits the increase in RNA by 93.6% compared to the control. 5 μM of the compound of formula (Formula 21) inhibits the increase in RNA by 99.9% compared to the control. 5 μM of the compound of formula (Formula 22) inhibits the increase in RNA by 90.3% compared to the control.

これらの実験結果より、式（式２）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。式（式３）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。式（式８）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。式（式９）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。式（式１３）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。式（式１４）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。式（式１５）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。式（式１６）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。式（式１７）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。式（式１９）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。式（式２１）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。式（式２２）の化合物がＳＡＲＳウイルスのＲＮＡの増加を阻害することが分かった。   From these experimental results, it was found that the compound of the formula (Formula 2) inhibits the increase in SARS virus RNA. It was found that the compound of formula (Formula 3) inhibits the increase in SARS virus RNA. The compound of formula (Formula 8) was found to inhibit the increase in SARS virus RNA. The compound of formula (Formula 9) was found to inhibit the increase in SARS virus RNA. The compound of formula (Formula 13) was found to inhibit the increase in SARS virus RNA. The compound of formula (Formula 14) was found to inhibit the increase in SARS virus RNA. The compound of formula (Formula 15) was found to inhibit the increase in SARS virus RNA. The compound of formula (Formula 16) was found to inhibit the increase in SARS virus RNA. The compound of formula (Formula 17) was found to inhibit the increase in SARS virus RNA. The compound of formula (Formula 19) was found to inhibit the increase in SARS virus RNA. The compound of formula (Formula 21) was found to inhibit the increase in SARS virus RNA. The compound of formula (Formula 22) was found to inhibit the increase in SARS virus RNA.

化合物とＳＡＲＳ−ＣｏＶメインプロテアーゼとの反応の結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of reaction of a compound and SARS-CoV main protease. 化合物によるＳＡＲＳウイルス増殖阻害効果の結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of the SARS virus growth inhibitory effect by a compound. 化合物投与後のＳＡＲＳウイルスによるＣＰＥを示す写真である。It is a photograph which shows CPE by the SARS virus after compound administration. 各化合物によるＳＡＲＳウイルス増殖阻害効果の結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of the SARS virus growth inhibitory effect by each compound. 各化合物によるＳＡＲＳウイルス増殖阻害効果の結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of the SARS virus growth inhibitory effect by each compound.

Claims (11)

下記一般式（１）で表されるピリジンカルボニトリル系化合物又はその薬学的に許容され得る塩であるプロテアーゼインヒビター。
・・・（式１）
（式中、
Ａは、
（ａ）置換基として低級アルキル基または水酸基を有していてもよいジメチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基のいずれか、あるいは
（ｂ）−（ＣＨ２）ｎＣＯ−（ｎは１から３の整数）で示される基、のいずれかを示し、
Ｒ１は、
窒素原子を介してＡと結合し、置換基としてアルキル基を有していてもよい含窒素飽和の４から８員環基のいずれかを示し、ここで、前記環を形成するメチレン基の少なくとも１個は、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、または低級アルキル基を有する窒素原子で置換されていてもよく、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、
（ｃ）水素原子、または
（ｄ）フェニル基、または
（ｅ）ハロゲン基、ハロゲノメチル基、低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級アルキレンジオキシ基、アラルキルオキシ基、あるいはこれらの複数個で置換されたフェニル基のいずれか、から選ばれる原子または基を示す。） A protease inhibitor which is a pyridinecarbonitrile compound represented by the following general formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
... (Formula 1)
(Where
A is
(A) Either a dimethylene group, trimethylene group or tetramethylene group which may have a lower alkyl group or a hydroxyl group as a substituent, or (b)-(CH 2 ) n CO— (n is 1 to 3) An integer), and
R 1 is
Any one of nitrogen-containing saturated 4- to 8-membered cyclic groups which may be bonded to A via a nitrogen atom and optionally have an alkyl group as a substituent, wherein at least one of the methylene groups forming the ring; One may be substituted with an oxygen atom, a sulfur atom, a nitrogen atom, or a nitrogen atom having a lower alkyl group,
R 2 and R 3 are each independently
(C) a hydrogen atom, or (d) a phenyl group, or (e) a halogen group, a halogenomethyl group, a lower alkyl group, a lower alkoxy group, a lower alkylenedioxy group, an aralkyloxy group, or a plurality thereof. An atom or group selected from any of the following phenyl groups. ) 前記ピリジンカルボニトリル系化合物又はその薬学的に許容され得る塩におけるＲ１は、４−モルフォリニル基または１−ピペリジル基である請求項１に記載のプロテアーゼインヒビター。 The protease inhibitor according to claim 1, wherein R 1 in the pyridinecarbonitrile-based compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is a 4-morpholinyl group or a 1-piperidyl group. 下記式（２）で表されるピリジンカルボニトリル系化合物又はその薬学的に許容され得る塩であるプロテアーゼインヒビター。
・・・（式２） A protease inhibitor which is a pyridinecarbonitrile compound represented by the following formula (2) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
... (Formula 2) 下記式（３）で表されるピリジンカルボニトリル系化合物又はその薬学的に許容され得る塩であるプロテアーゼインヒビター。
A protease inhibitor which is a pyridinecarbonitrile compound represented by the following formula (3) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
活性中心にＳＨ基を有するプロテアーゼの活性を阻害する請求項１から４いずれか記載のプロテアーゼインヒビター。   The protease inhibitor according to any one of claims 1 to 4, which inhibits the activity of a protease having an SH group at the active center. ウイルス由来のプロテアーゼの活性を阻害する請求項１から５いずれか記載のプロテアーゼインヒビター。   The protease inhibitor according to any one of claims 1 to 5, which inhibits the activity of a virus-derived protease. 前記ウイルス由来のプロテアーゼが、ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼである請求項６に記載のプロテアーゼインヒビター。   The protease inhibitor according to claim 6, wherein the virus-derived protease is an RNA virus-derived protease. 前記ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼが、一本鎖（+）ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼである請求項７に記載のプロテアーゼインヒビター。   The protease inhibitor according to claim 7, wherein the protease derived from an RNA virus is a protease derived from a single-stranded (+) RNA virus. 前記一本鎖（+）ＲＮＡウイルス由来のプロテアーゼが、コロナウイルス科に属するウイルス由来のプロテアーゼである請求項８に記載のプロテアーゼインヒビター。   The protease inhibitor according to claim 8, wherein the protease derived from the single-stranded (+) RNA virus is a protease derived from a virus belonging to the Coronaviridae family. 前記コロナウイルス科に属するウイルス由来のプロテアーゼが、ヒトコロナウイルス、ブタコロナウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスのいずれかのウイルス由来のプロテアーゼである請求項９に記載のプロテアーゼインヒビター。   The protease inhibitor according to claim 9, wherein the protease derived from a virus belonging to the Coronaviridae family is a protease derived from any one of human coronavirus, porcine coronavirus, and severe acute respiratory syndrome (SARS) virus. 請求項１から１０いずれか記載のプロテアーゼインヒビターを有効成分として含む抗ウイルス剤。   The antiviral agent which contains the protease inhibitor in any one of Claim 1 to 10 as an active ingredient.
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