JP2008116235A

JP2008116235A - Device for immuno-chromatographic assay

Info

Publication number: JP2008116235A
Application number: JP2006297551A
Authority: JP
Inventors: Kazuhiro Omiya; 一紘大宮; Kyoichi Oshiro; 京一大代
Original assignee: Arkray Inc
Current assignee: Arkray Inc
Priority date: 2006-11-01
Filing date: 2006-11-01
Publication date: 2008-05-22

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide an immuno-chromatographic sample assay device that prevents increase in the background, without increase in the size. <P>SOLUTION: The immuno-chromatographic sample assay device 10 includes a developing layer 12 and a developing liquid receiving pad 13; the developing solution receiving pad 13 is disposed on a first end of the surface of the developing layer 12; an antibody fixed part 18 is formed on a second end of the surface of the developing layer 12; a sample supply part 17 is formed between the antibody fixed part 18 and the developing solution receiving pad 13 on the surface of the developing layer 12; a developing solution supply part 14 is formed on the surface of the developing solution receiving pad 13; the developing solution receiving pad 13 contains a substrate; a liquid impermeable layer 19 is disposed on the first end of the surface of the developing layer 12; and the developing solution receiving pad 13 is disposed on the liquid impermeable layer 19. <P>COPYRIGHT: (C)2008,JPO&INPIT

Description

本発明は、イムノクロマトグラフ検体分析用具に関する。 The present invention relates to an immunochromatographic sample analysis tool.

従来から、生化学検査や臨床検査等において、検体分析用具が汎用されている。近年では、検体中の様々な物質の検出、定性分析または定量分析にイムノクロマトグラフ法（Ｉｍｍｕｎｏ−ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃＡｓｓａｙ；ＩＣＡ）を利用したイムノクロマトグラフ検体分析用具が使用されている（例えば、特許文献１参照）。ここで、ＩＣＡとは、免疫反応（抗原−抗体反応）を利用した測定方法である。 Conventionally, specimen analysis tools have been widely used in biochemical tests and clinical tests. In recent years, an immunochromatographic sample analysis tool using an immunochromatographic method (ICA) has been used for detection, qualitative analysis or quantitative analysis of various substances in a sample (see, for example, Patent Document 1). . Here, ICA is a measurement method using an immune reaction (antigen-antibody reaction).

図９に、従来のイムノクロマトグラフ検体分析用具を示す。図示のとおり、このイムノクロマトグラフ検体分析用具９０は、支持体９１上に前記支持体９１より長さの短い展開層９２が配置され、この展開層９２表面の一端（同図において右側端部）側に展開液受取パッド９３が配置され、前記展開層９２表面の他端（同図において左側端部）側に抗体が固定化された固定化抗体部９８が形成されている。また、前記展開層９２表面の前記固定化抗体部９８と前記展開液受取パッド９３との間に検体供給部９７が形成されている。そして、前記展開液受取パッド９３の表面には、展開液供給部９４および基質含浸部９５が形成されている。さらに、前記展開層９２表面の前記固定化抗体部９８よりもさらに他端（同図において左側端部）側には、廃液吸収パッド９６が配置されている。前記展開液受取パッド９３の一端（同図において右側端部）側は、前記展開層９２表面の一端（同図において右側端部）から前記支持体９１上へと垂らされ、前記支持体９１の一端（同図において右側端部）に固定されている。また、前記廃液吸収パッド９６の一端（同図において左側端部）側は、前記展開層９２表面の他端（同図において左側端部）から前記支持体９１上へと垂らされ、前記支持体９１の他端（同図において左側端部）に固定されている。 FIG. 9 shows a conventional immunochromatographic sample analysis tool. As shown in the figure, in this immunochromatographic sample analysis tool 90, a development layer 92 having a length shorter than that of the support 91 is disposed on a support 91, and one end (right end in the figure) side of the surface of the development layer 92 is disposed. A developing solution receiving pad 93 is disposed on the surface of the developing layer 92, and an immobilized antibody portion 98 in which the antibody is immobilized is formed on the other end (left end portion in the figure) of the surface of the developing layer 92. Further, a specimen supply unit 97 is formed between the immobilized antibody unit 98 on the surface of the development layer 92 and the development liquid receiving pad 93. A developing solution supply unit 94 and a substrate impregnation unit 95 are formed on the surface of the developing solution receiving pad 93. Further, a waste liquid absorption pad 96 is disposed on the other end side (left side end portion in the figure) of the surface of the development layer 92 further than the immobilized antibody portion 98. One end (right end portion in the figure) side of the developing solution receiving pad 93 is hung from the one end (right end part in the figure) on the surface of the developing layer 92 onto the support 91. It is fixed to one end (right end in the figure). Further, one end (left end portion in the figure) side of the waste liquid absorbing pad 96 is hung on the support body 91 from the other end (left end section in the figure) on the surface of the development layer 92, and the support body. 91 is fixed to the other end (left end portion in the figure).

つぎに、このイムノクロマトグラフ検体分析用具９０を用いた特定物質（被測定物質）の測定について説明する。まず、検体供給部９７に、検体と酵素標識抗体とを含む検体液を供給する。このとき、検体中に被測定物質が含まれていれば、抗原−抗体反応により、被測定物質（抗原）と酵素標識抗体とが結合する。つぎに、展開液供給部９４に展開液を供給する。すると、前記展開液が基質含浸部９５に含浸された基質を溶解し、この溶液が展開層９２へと展開される。前記溶液は、図９の矢印ｄに示すように、毛細管作用により、検体供給部９７に供給された前記検体液とともに固定化抗体部９８へと運ばれる。ここで、検体中に被測定物質が含まれていれば、抗原−抗体反応により、酵素標識抗体が結合した被測定物質（抗原）と固定化抗体部９８に固定化された抗体とが結合する。ついで、固定化抗体部９８において、酵素標識抗体の酵素と基質との反応による発色または発光を測定することにより、被測定物質の検出、定性分析または定量分析を行うことができる。 Next, measurement of a specific substance (substance to be measured) using the immunochromatographic sample analysis tool 90 will be described. First, a sample solution containing a sample and an enzyme-labeled antibody is supplied to the sample supply unit 97. At this time, if the substance to be measured is contained in the sample, the substance to be measured (antigen) and the enzyme-labeled antibody are bound by the antigen-antibody reaction. Next, a developing solution is supplied to the developing solution supply unit 94. Then, the developing solution dissolves the substrate impregnated in the substrate impregnation portion 95, and this solution is developed on the developing layer 92. As shown by the arrow d in FIG. 9, the solution is carried to the immobilized antibody unit 98 together with the sample solution supplied to the sample supply unit 97 by capillary action. Here, if the analyte is contained in the sample, the analyte (antigen) bound with the enzyme-labeled antibody and the antibody immobilized on the immobilized antibody portion 98 are bound by the antigen-antibody reaction. . Next, in the immobilized antibody part 98, by measuring the color development or luminescence due to the reaction between the enzyme of the enzyme-labeled antibody and the substrate, it is possible to perform detection, qualitative analysis or quantitative analysis of the substance to be measured.

特開２００５−６１９１０号公報JP 2005-61910 A

しかしながら、前記イムノクロマトグラフ検体分析用具９０では、展開層９２で起こる毛細管作用が一方向に限られないため、検体供給部９７に供給された検体液が、図９の矢印ｅに示すように、展開液受取パッド９３の側にも運ばれてしまう。この結果、展開層９２の展開液受取パッド９３側や、展開液受取パッド９３でも酵素と基質との反応による発色または発光が起こってしまい、この結果、バックグラウンドが上がってしまう。バックグラウンドが上がってしまうと、固定化抗体部９８における発色または発光の測定において、十分なシグナルが得られないという問題があった。また、この問題を回避するために、検体供給部９７と展開液受取パッド９３との間の距離を長くしたり、幅を広くしたりするという方法がある。しかし、この方法では、イムノクロマトグラフ検体分析用具９０全体が大きくなってしまうという問題があった。 However, in the immunochromatographic sample analysis tool 90, since the capillary action occurring in the development layer 92 is not limited to one direction, the sample liquid supplied to the sample supply unit 97 is developed as shown by an arrow e in FIG. It is also carried to the liquid receiving pad 93 side. As a result, the developing solution receiving pad 93 side of the developing layer 92 or the developing solution receiving pad 93 also develops color or emits light due to the reaction between the enzyme and the substrate, resulting in an increased background. If the background is increased, there is a problem that a sufficient signal cannot be obtained in the measurement of color development or luminescence in the immobilized antibody portion 98. In order to avoid this problem, there are methods of increasing the distance between the specimen supply unit 97 and the developing solution receiving pad 93 or increasing the width. However, this method has a problem that the entire immunochromatographic sample analysis tool 90 becomes large.

そこで、本発明は、大型化することなく、バックグラウンドの上昇が防止されたイムノクロマトグラフ検体分析用具を提供することを目的とする。 Therefore, an object of the present invention is to provide an immunochromatographic sample analysis tool in which an increase in background is prevented without increasing the size.

前記目的を達成するために、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具は、展開層と展開液受取パッドとを有し、前記展開層表面上の一端側に前記展開液受取パッドが配置され、前記展開層表面の他端側に抗体が固定化された固定化抗体部が形成され、前記展開層表面の前記固定化抗体部と前記展開液受取パッドとの間に検体供給部が形成され、前記展開液受取パッドの表面に展開液供給部が形成され、前記展開液受取パッドが基質を含み、検体と酵素標識抗体とを含む検体液を前記検体供給部から供給して前記検体液を前記展開層中を移動させて前記固定化抗体部に導入し、前記固定化抗体、前記検体中の被測定物質および前記酵素標識抗体の複合体を形成させ、前記展開液供給部から展開液を供給して前記基質を前記展開液と共に前記展開層中を移動させて前記固定化抗体部に導入し、前記酵素標識抗体の酵素と前記基質との反応による発色および発光の少なくとも一方を検出することにより、前記被測定物質を検出するイムノクロマトグラフ検体分析用具において、前記展開層表面上の一端側に、液体非透過性層が配置され、前記液体非透過性層の上に前記展開液受取パッドが配置されていることを特徴とする。 In order to achieve the above object, the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention has a developing layer and a developing solution receiving pad, and the developing solution receiving pad is disposed on one end side on the surface of the developing layer, and the developing is performed. An immobilized antibody part in which an antibody is immobilized is formed on the other end side of the layer surface, and a specimen supply part is formed between the immobilized antibody part on the surface of the development layer and the development liquid receiving pad, and the development A developing solution supply unit is formed on the surface of the solution receiving pad, the developing solution receiving pad includes a substrate, and a sample solution including a sample and an enzyme-labeled antibody is supplied from the sample supplying unit to supply the sample solution to the developing layer. Moved inside and introduced into the immobilized antibody part to form a complex of the immobilized antibody, the substance to be measured in the sample and the enzyme-labeled antibody, and supply a developing solution from the developing solution supply unit. The substrate together with the developing solution An immunochromatograph for detecting the substance to be measured by moving through the open layer and introducing it into the immobilized antibody part, and detecting at least one of color development and luminescence due to the reaction between the enzyme of the enzyme-labeled antibody and the substrate In the sample analysis tool, a liquid impermeable layer is disposed on one end side of the surface of the development layer, and the development liquid receiving pad is disposed on the liquid impermeable layer.

このように、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具では、展開層と展開液受取パッドとの間に液体非透過性層が配置されている。このため、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具では、従来のイムノクロマトグラフ検体分析用具のように、展開層の展開液受取パッド側や、展開液受取パッドで酵素と基質とが反応することを防止できる。この結果、イムノクロマトグラフ検体分析用具を大型化することなく、展開層の展開液受取パッド側や、展開液受取パッドの発色または発光によるバックグラウンドの上昇を防止することができる。したがって、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具は、小型化が可能で、高精度で信頼性に優れた分析を実施することができる。 Thus, in the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention, the liquid impermeable layer is disposed between the development layer and the development liquid receiving pad. For this reason, in the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention, it is possible to prevent the enzyme and the substrate from reacting at the developing solution receiving pad side of the developing layer or the developing solution receiving pad as in the conventional immunochromatographic sample analyzing tool. . As a result, without increasing the size of the immunochromatographic sample analysis tool, it is possible to prevent the background from rising due to color development or light emission of the developing solution receiving pad side of the developing layer or the developing solution receiving pad. Therefore, the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention can be miniaturized, and can perform analysis with high accuracy and high reliability.

本発明において、「被測定物質の検出」とは、被測定物質の定性分析および定量分析をも含む概念である。 In the present invention, “detection of a substance to be measured” is a concept including qualitative analysis and quantitative analysis of a substance to be measured.

本発明において、「酵素標識抗体」とは、酵素で標識化された抗体を意味する。 In the present invention, “enzyme-labeled antibody” means an antibody labeled with an enzyme.

本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具において、前記展開層表面と前記展開液受取パッドの前記検体供給部側の底部との間に、前記液体非透過性層が配置され、前記展開層表面と前記展開液受取パッドの前記検体供給部側と反対側の底部との間には、前記液体非透過性層が配置されていなくともよい。 In the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention, the liquid non-permeable layer is disposed between the surface of the development layer and the bottom of the development liquid receiving pad on the side of the sample supply unit, and the development layer surface and the development The liquid non-permeable layer may not be disposed between the liquid receiving pad and the bottom portion on the opposite side.

本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具において、前記液体非透過性層は、液体を透過させないものであればいかなるものを用いてもよいが、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルムであってもよい。 In the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention, the liquid impermeable layer may be any material as long as it does not allow liquid to permeate. For example, a polyethylene terephthalate (PET) film may be used.

本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具において、前記展開液受取パッド中に基質含浸部を有し、前記基質含浸部に基質が配置されていてもよい。 In the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention, the developing solution receiving pad may have a substrate-impregnated portion, and the substrate may be disposed in the substrate-impregnated portion.

本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具は、さらに、支持体を有し、前記支持体の上に前記展開層が配置されていてもよい。 The immunochromatographic sample analysis tool of the present invention may further include a support, and the development layer may be disposed on the support.

本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具は、さらに、廃液吸収パッドを有し、前記廃液吸収パッドが、前記展開層表面の前記固定化抗体部よりもさらに他端側に配置されていてもよい。 The immunochromatographic sample analysis tool of the present invention may further include a waste liquid absorption pad, and the waste liquid absorption pad may be disposed further to the other end side than the immobilized antibody portion on the surface of the development layer.

本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具において、前記固定化抗体部は、前記被測定物質を捕捉する抗体が固定化されている固定化捕捉抗体部と、対照用の抗体が固定化されている固定化対照抗体部とを有し、前記固定化対照抗体部よりも、前記固定化捕捉抗体部が、前記検体供給部側に配置されていてもよい。 In the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention, the immobilized antibody portion includes an immobilized capture antibody portion to which an antibody that captures the substance to be measured is immobilized, and an immobilization to which a control antibody is immobilized. A control antibody part, and the immobilized capture antibody part may be arranged closer to the specimen supply part than the immobilized control antibody part.

つぎに、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具について例を挙げて説明する。ただし、本発明は、下記の例に制限されるものではない。 Next, the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention will be described with examples. However, the present invention is not limited to the following examples.

（実施形態１）
図１に、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具の一例を示す。図示のように、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０は、支持体１１上に前記支持体１１より長さの短い展開層１２が配置され、この展開層１２表面上の一端（同図において右側端部）側に展開液受取パッド１３が配置され、前記展開層１２表面の他端（同図において左側端部）側に抗体が固定化された固定化抗体部１８が形成されている。また、前記展開層１２表面の前記固定化抗体部１８と前記展開液受取パッド１３との間に検体供給部１７が形成されている。そして、前記展開液受取パッド１３の表面には、展開液供給部１４および基質含浸部１５が形成されている。さらに、前記展開層１２表面の前記固定化抗体部１８よりもさらに他端（同図において左側端部）側には、廃液吸収パッド１６が配置されている。ここで、前記展開層１２表面上の一端（同図において右側端部）側に、液体非透過性層１９が配置され、前記液体非透過性層１９の上に前記展開液受取パッド１３が配置されている。本発明において、前記展開液受取パッド１３は、その全体が前記液体非透過性層１９の上に載った状態であってもよいし、その一部のみが前記液体非透過性層１９の上に載った状態であってもよい。同図においては、前記展開液受取パッド１３の一端（同図において右側端部）側は、前記液体非透過性層１９の端部（同図において右側端部）から前記支持体１１上へと垂らされ、前記支持体１１の一端（同図において右側端部）に固定されている。また、前記廃液吸収パッド１６の一端（同図において左側端部）側は、前記展開層１２表面の他端（同図において左側端部）から前記支持体１１上へと垂らされ、前記支持体１１の他端（同図において左側端部）に固定されている。 (Embodiment 1)
FIG. 1 shows an example of the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention. As shown in the figure, the immunochromatographic sample analysis tool 10 has a development layer 12 having a length shorter than that of the support 11 on a support 11, and one end on the surface of the development layer 12 (the right end in the figure). ) Side is provided with a developing solution receiving pad 13, and an immobilized antibody portion 18 in which an antibody is immobilized is formed on the other end (left side end portion in the figure) side of the surface of the developing layer 12. In addition, a specimen supply unit 17 is formed between the immobilized antibody unit 18 on the surface of the development layer 12 and the development liquid receiving pad 13. A developing solution supply unit 14 and a substrate impregnating unit 15 are formed on the surface of the developing solution receiving pad 13. Further, a waste liquid absorbing pad 16 is arranged on the other end side (left end portion in the figure) of the surface of the development layer 12 further than the immobilized antibody portion 18. Here, a liquid impermeable layer 19 is disposed on one end (right end portion in the figure) on the surface of the developing layer 12, and the developing liquid receiving pad 13 is disposed on the liquid impermeable layer 19. Has been. In the present invention, the developing liquid receiving pad 13 may be entirely placed on the liquid impermeable layer 19 or only a part of the developing liquid receiving pad 13 may be placed on the liquid impermeable layer 19. It may be in a state of being placed. In this figure, one end (right end in the figure) side of the developing liquid receiving pad 13 is from the end (right end in the figure) of the liquid impermeable layer 19 onto the support 11. It is hung and fixed to one end of the support 11 (right end in the figure). Further, one end (left end portion in the figure) side of the waste liquid absorbing pad 16 is hung on the support body 11 from the other end (left end section in the figure) on the surface of the developing layer 12, and the support body 11 is fixed to the other end (left end portion in the figure).

前記支持体１１の大きさは、特に制限されないが、例えば、長さ５〜２００ｍｍ、幅１〜５０ｍｍ、厚み０．００５〜０．５ｍｍである。 Although the magnitude | size of the said support body 11 is not restrict | limited in particular, For example, it is 5-200 mm in length, 1-50 mm in width, and 0.005-0.5 mm in thickness.

前記支持体１１としては、例えば、ＰＥＴ、ポリスチレン、ポリエステル、酢酸セルロース等から形成されたものが使用でき、その形状としては、フィルム状、シート状、板状のいずれでもよい。 As the support 11, for example, one formed from PET, polystyrene, polyester, cellulose acetate or the like can be used, and the shape may be any of a film, a sheet, and a plate.

なお、本発明において、前記支持体１１は、任意の構成要素であり、形成しなくともよいが、形成することが好ましい。 In the present invention, the support 11 is an optional component and may not be formed, but is preferably formed.

前記展開層１２の形成材料は、毛細管作用を奏するものであれば特に制限されず、例えば、セルロース膜、酢酸セルロースまたはニトロセルロース等のセルロース誘導体膜、ガラスフィルター、濾紙等の多孔質膜が使用できる。前記展開層１２の大きさは、特に制限されないが、例えば、その長さは、４．５〜１９０ｍｍであり（前記支持体１１の長さの５〜９５％であり）、その厚みは、０．０２５〜０．２５ｍｍであり、その幅は、前記支持体１１と同様である。 The material for forming the spreading layer 12 is not particularly limited as long as it exhibits a capillary action. For example, a cellulose membrane, a cellulose derivative membrane such as cellulose acetate or nitrocellulose, a porous membrane such as a glass filter or filter paper can be used. . The size of the spreading layer 12 is not particularly limited. For example, the length is 4.5 to 190 mm (5 to 95% of the length of the support 11), and the thickness is 0. 0.025 to 0.25 mm, and the width is the same as that of the support 11.

前記支持体１１上への前記展開層１２の形成は、常法により行うことができ、例えば、支持体１１上に、多孔質膜を両面テープや接着剤を用いて固定すればよい。 The development layer 12 can be formed on the support 11 by a conventional method. For example, a porous film may be fixed on the support 11 using a double-sided tape or an adhesive.

前述のとおり、前記液体非透過性層１９としては、例えば、ＰＥＴフィルムを用いることができるが、それ以外にも、塩化ビニリデン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリエステル、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリアミド等を用いることができる。前記液体非浸透性層１９の大きさは、特に制限されないが、例えば、その長さは、前記展開層１２の長さの５〜９５％であり、その厚みは、０．００５〜０．２５ｍｍであり、その幅は、前記支持体１１と同様である。前記展開層１２上への前記液体非透過性層１９の形成は、常法により行うことができ、例えば、展開層１２上に、ＰＥＴフィルムを両面テープや接着剤を用いて固定すればよい。 As described above, for example, a PET film can be used as the liquid impermeable layer 19, but in addition thereto, vinylidene chloride, polytetrafluoroethylene, polyester, polyethylene, polyvinyl chloride, polyamide, or the like is used. be able to. The size of the liquid impermeable layer 19 is not particularly limited. For example, the length is 5 to 95% of the length of the spreading layer 12, and the thickness is 0.005 to 0.25 mm. The width is the same as that of the support 11. The liquid impermeable layer 19 can be formed on the spreading layer 12 by a conventional method. For example, a PET film may be fixed on the spreading layer 12 using a double-sided tape or an adhesive.

前記展開液受取パッド１３は、多孔性の材料からなり、その形成材料としては、例えば、ポリエチレン、グラスファーバー、レーヨン、ナイロン、紙、セルロース等が挙げられる。前記展開液受取パッド１３の大きさは、特に制限されないが、例えば、その長さは、５〜２００ｍｍであり、その厚みは、０．１〜５ｍｍであり、その幅は、前記支持体１１と同様である。 The developing solution receiving pad 13 is made of a porous material, and examples of the forming material include polyethylene, glass fiber, rayon, nylon, paper, and cellulose. The size of the developing solution receiving pad 13 is not particularly limited. For example, the length is 5 to 200 mm, the thickness is 0.1 to 5 mm, and the width is the same as that of the support 11. It is the same.

前記展開液受取パッド１３の形成は、例えば、前記支持体１１の一端（図１において右側端部）に前記展開液受取パッド１３の一端（図１において右側端部）を両面テープや接着剤を用いて固定し、前記展開液受取パッド１３の他端（図１において左側端部）側を前記液体非透過性層１９上に重ねることで行うことができる。なお、前記展開液受取パッド１３の他端（図１において左側端部）側を、前記液体非透過性層１９上に両面テープや接着剤を用いて固定してもよい。 The developing solution receiving pad 13 is formed by, for example, attaching one end of the developing solution receiving pad 13 (right end portion in FIG. 1) to one end (right end portion in FIG. 1) with a double-sided tape or an adhesive. The other end (left end portion in FIG. 1) of the developing solution receiving pad 13 is overlaid on the liquid impermeable layer 19. The other end (the left end portion in FIG. 1) of the developing solution receiving pad 13 may be fixed on the liquid impermeable layer 19 using a double-sided tape or an adhesive.

前述のとおり、前記展開層１２表面の他端（図１において左側端部）側には、抗体が固定化された固定化抗体部１８が形成されている。 As described above, the immobilized antibody portion 18 on which the antibody is immobilized is formed on the other end (left end portion in FIG. 1) side of the surface of the development layer 12.

前記固定化抗体部１８に固定化される抗体は、検体中の被測定物質と結合するものであれば特に制限されず、免疫グロブリン(Ｉｇ)Ｇ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤのいずれであってもよい。また、これらの抗体は、ポリクローナルおよびモノクローナルのいずれでもよい。これらの抗体は、マウス、ラット、ヤギ等の動物を用いて、常法により作製できる。 The antibody immobilized on the immobilized antibody portion 18 is not particularly limited as long as it binds to the substance to be measured in the specimen, and may be any of immunoglobulin (Ig) G, IgA, IgM, IgE, and IgD. May be. These antibodies may be either polyclonal or monoclonal. These antibodies can be prepared by conventional methods using animals such as mice, rats, and goats.

固定化抗体部１８に抗体が固定化されている一例を、図２に示す。図２において、図１と同一部分には同一符号を付している。図示のとおり、固定化抗体部１８に、抗体２１が固定化されている。なお、図２は、模式的に示したものであり、抗体２１の大きさ、数等は、実際とは異なる。 An example in which the antibody is immobilized on the immobilized antibody portion 18 is shown in FIG. In FIG. 2, the same parts as those in FIG. As shown, the antibody 21 is immobilized on the immobilized antibody portion 18. Note that FIG. 2 is a schematic view, and the size, number, and the like of the antibody 21 are different from actual ones.

前述のとおり、前記展開層１２表面の前記固定化抗体部１８と前記展開液受取パッド１３との間には、検体供給部１７が形成されている。 As described above, the sample supply unit 17 is formed between the immobilized antibody unit 18 on the surface of the development layer 12 and the development solution receiving pad 13.

前記固定化抗体部１８と前記検体供給部１７との間の距離は、特に制限されないが、例えば、前記展開層１１の長さの０〜９５％の範囲である。 The distance between the immobilized antibody part 18 and the specimen supply part 17 is not particularly limited, but is, for example, in the range of 0 to 95% of the length of the development layer 11.

前述のとおり、前記展開液受取パッド１３の表面には、展開液供給部１４と基質含浸部１５とが形成されている。なお、図１においては、前記展開液供給部１４が前記基質含浸部１５よりも前記展開液受取パッド１３表面の一端（同図において右側端部）側に形成されているが、本発明は、これに限定されない。本発明において、例えば、前記展開液供給部１４は、前記基質含浸部１５よりも前記展開液受取パッド１３表面の他端（同図において左側端部）側に形成されていてもよい。また、本発明において、例えば、前記展開液供給部１４と前記基質含浸部１５とは、前記展開液受取パッド１３表面の同じ位置に重なって形成されていてもよい。 As described above, the developing solution supply portion 14 and the substrate impregnation portion 15 are formed on the surface of the developing solution receiving pad 13. In FIG. 1, the developing solution supply unit 14 is formed on one end (the right end portion in the figure) side of the surface of the developing solution receiving pad 13 with respect to the substrate impregnating unit 15. It is not limited to this. In the present invention, for example, the developing solution supply unit 14 may be formed on the other end (left end portion in the drawing) side of the surface of the developing solution receiving pad 13 with respect to the substrate impregnating unit 15. In the present invention, for example, the developing solution supply unit 14 and the substrate impregnating unit 15 may be formed to overlap with the same position on the surface of the developing solution receiving pad 13.

前記基質含浸部１５には、後述の酵素標識抗体の酵素に対応した基質（発色基質、蛍光基質、発光基質等）が含浸される。前記基質は、１種類を単独で用いてもよいし、２種類以上を混合して用いてもよい。また、前記基質含浸部１５は、図１に示すように、前記展開液受取パッド１３の表面に１箇所だけ設けてもよいし、用いる基質の種類および量に応じて、前記展開液受取パッド１３上に２箇所以上設けてもよい。なお、本発明において、前記基質含浸部１５は、任意の構成要素であり、前記基質含浸部１５を形成することなく、前記展開液受取パッド１３に基質を含ませてもよい。つぎに、前記基質を例示するが、前記基質は、下記の例に制限されない。 The substrate impregnation unit 15 is impregnated with a substrate (coloring substrate, fluorescent substrate, luminescent substrate, etc.) corresponding to an enzyme of an enzyme-labeled antibody described later. One kind of the substrate may be used alone, or two or more kinds may be mixed and used. Further, as shown in FIG. 1, the substrate impregnating section 15 may be provided only at one location on the surface of the developing solution receiving pad 13, or the developing solution receiving pad 13 depending on the type and amount of the substrate used. Two or more locations may be provided on the top. In the present invention, the substrate impregnating part 15 is an optional component, and the developing liquid receiving pad 13 may contain a substrate without forming the substrate impregnating part 15. Next, the substrate is exemplified, but the substrate is not limited to the following example.

(ａ)発色基質
パーオキシダーゼ用（過酸化水素と組み合わせて）：２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ）、３，３’，５，５’−テトラメチルベンチジン（ＴＭＢ）、ジアミノベンチジン（ＤＡＢ）
アルカリホスファターゼ用：５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸（ＢＣＩＰ） (a) For chromogenic substrate peroxidase (in combination with hydrogen peroxide): 2,2′-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS), 3,3 ′, 5,5 ′ -Tetramethylbenzidine (TMB), Diaminobenzidine (DAB)
For alkaline phosphatase: 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate (BCIP)

（ｂ）蛍光基質
アルカリホスファターゼ用：４−メチルウムベリフェニル−ホスフェート（４ＭＵＰ）
β−Ｄ−ガラクトシダーゼ用：４−メチルウムベリフェニル−β−Ｄ−ガラクトシド（４ＭＵＧ） (B) For fluorescent substrate alkaline phosphatase: 4-methylumbelliferyl-phosphate (4MUP)
For β-D-galactosidase: 4-methylumberylphenyl-β-D-galactoside (4MUG)

（ｃ）発光基質
アルカリホスファターゼ用：３−（２’−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−（３’’−ホスフォリルオキシ）フェニル−１，２−ジオキセタン（ＡＭＧＰＤ）・２ナトリウム塩（ＡＭＰＰＤ）
β−Ｄ−ガラクトシダーゼ用：３−（２’−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−（３’’−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）フェニル−１，２−ジオキセタン（ＡＭＧＰＤ）
パーオキシダーゼ用（過酸化水素と組み合わせて）：ルミノール、イソルミノール (C) Luminescent substrate for alkaline phosphatase: 3- (2′-spiroadamantane) -4-methoxy-4- (3 ″ -phosphoryloxy) phenyl-1,2-dioxetane (AMGPD) disodium salt ( AMPPD)
For β-D-galactosidase: 3- (2′-spiroadamantane) -4-methoxy-4- (3 ″ -β-D-galactopyranosyl) phenyl-1,2-dioxetane (AMGPD)
For peroxidase (in combination with hydrogen peroxide): luminol, isoluminol

前記基質含浸部１５は、例えば、前記基質の水溶液を、前記展開液受取パッド１３に塗布した後、乾燥させることで形成することができる。前記水溶液には、所望により、シグナル増強剤、安定化剤、溶解調節剤等を添加することもできる。前記基質の量は、測定条件により決定することができるが、例えば、イムノクロマトグラフ検体分析用具１個当たり１００〜４００ｍｇである。 The substrate impregnating portion 15 can be formed, for example, by applying an aqueous solution of the substrate to the developing solution receiving pad 13 and then drying it. If desired, a signal enhancer, a stabilizer, a dissolution regulator and the like can be added to the aqueous solution. The amount of the substrate can be determined according to measurement conditions, and is, for example, 100 to 400 mg per immunochromatographic sample analysis tool.

前記検体供給部１７と前記展開液受取パッド１３の前記検体供給部１７側の端部との間の距離は、特に制限されないが、例えば、前記展開層１２の長さの５０〜１００％の範囲であり、好ましくは、１０〜２００ｍｍの範囲であり、より好ましくは、２０〜１００ｍｍの範囲である。 The distance between the sample supply unit 17 and the end of the developing solution receiving pad 13 on the sample supply unit 17 side is not particularly limited, but is, for example, in the range of 50 to 100% of the length of the development layer 12 Preferably, it is the range of 10-200 mm, More preferably, it is the range of 20-100 mm.

前記廃液吸収パッド１６は、展開層１２における毛細管現象を補助するとともに、固定化抗体部１８を通過してきた廃液を回収するためのものである。前記廃液吸収パッド１６には、例えば、濾紙等を使用することができる。なお、本発明において、前記廃液吸収パッド１６は、任意の構成要素であり、形成しなくともよいが、形成することが好ましい。 The waste liquid absorption pad 16 assists the capillary phenomenon in the development layer 12 and collects the waste liquid that has passed through the immobilized antibody portion 18. For example, filter paper or the like can be used for the waste liquid absorption pad 16. In the present invention, the waste liquid absorption pad 16 is an optional component and need not be formed, but is preferably formed.

前記廃液吸収パッド１６の形成は、例えば、前記支持体１１の他端（図１において左側端部）に前記廃液吸収パッド１６の一端（図１において左側端部）を両面テープや接着剤を用いて固定し、前記廃液吸収パッド１６の他端（図１において右側端部）側を前記展開層１２の他端（図１において左側端部）上に重ねることで行うことができる。 The waste liquid absorption pad 16 is formed by using, for example, a double-sided tape or an adhesive on the other end (left end portion in FIG. 1) of the support 11 and one end (left end portion in FIG. 1) of the waste liquid absorption pad 16. The other end (right end portion in FIG. 1) of the waste liquid absorption pad 16 is overlaid on the other end (left end portion in FIG. 1) of the spreading layer 12.

つぎに、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０を用いた測定について、図面を参照して説明する。 Next, measurement using this immunochromatographic sample analysis tool 10 will be described with reference to the drawings.

まず、検体供給部１７に、検体と酵素標識抗体とを含む検体液を供給する。 First, a sample liquid containing a sample and an enzyme-labeled antibody is supplied to the sample supply unit 17.

本発明において、その測定対象となる検体は、液状のものが好ましいが、これに限定されない。検体が固体状のものであっても、緩衝液等の液体中に溶解若しくは分散させれば、展開層に展開可能となるからである。前記検体としては、特に制限されないが、例えば、全血、血清、血漿、唾液、尿、髄液等が挙げられる。 In the present invention, the sample to be measured is preferably liquid, but is not limited thereto. This is because even if the specimen is solid, it can be developed in the spreading layer if it is dissolved or dispersed in a liquid such as a buffer solution. The specimen is not particularly limited, and examples thereof include whole blood, serum, plasma, saliva, urine, and cerebrospinal fluid.

前記酵素標識抗体の抗体は、前記検体中の被測定物質と結合するものであれば特に制限されず、免疫グロブリン(Ｉｇ)Ｇ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤのいずれであってもよい。また、これらの抗体は、ポリクローナルおよびモノクローナルのいずれでもよい。これらの抗体は、マウス、ラット、ヤギ等の動物を用いて、常法により作製できる。前記酵素標識抗体の酵素も、特に制限されず、例えば、パーオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ等が挙げられる。 The antibody of the enzyme-labeled antibody is not particularly limited as long as it binds to the substance to be measured in the specimen, and may be any of immunoglobulin (Ig) G, IgA, IgM, IgE, and IgD. These antibodies may be either polyclonal or monoclonal. These antibodies can be prepared by conventional methods using animals such as mice, rats, and goats. The enzyme of the enzyme-labeled antibody is not particularly limited, and examples thereof include peroxidase, alkaline phosphatase, β-D-galactosidase and the like.

ここで、検体中に被測定物質が含まれていれば、抗原−抗体反応により、被測定物質（抗原）と酵素標識抗体とが結合する。 Here, if the analyte is contained in the specimen, the analyte (antigen) and the enzyme-labeled antibody are bound by the antigen-antibody reaction.

つぎに、展開液供給部１４に、展開液を供給する。前記展開液としては、例えば、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等を用いることができる。前記展開液には、界面活性剤、安定化剤、抗菌剤等を適宜添加してもよい。 Next, the developing solution is supplied to the developing solution supply unit 14. As the developing solution, for example, Tris buffer solution, phosphate buffer solution, acetate buffer solution, borate buffer solution and the like can be used. A surfactant, a stabilizer, an antibacterial agent and the like may be appropriately added to the developing solution.

図３の断面図に、本実施形態における検体液、展開液の移動の状態を示す。なお、図３において、図１と同一部分には同一符号を付している。同図に示すように、前記展開液供給部１４に展開液が供給されると、前記展開液が前記基質含浸部１５に含浸された基質を溶解し、その溶液が、矢印ａに示すように、前記展開層１２の端部（同図において右側端部）から回りこんで、展開層１２へと展開される。前記溶液は、図３の矢印ｂに示すように、毛細管作用により、検体供給部１７に供給された前記検体液とともに固定化抗体部１８へと運ばれる。ここで、検体中に被測定物質が含まれていれば、抗原−抗体反応により、酵素標識抗体と結合した被測定物質（抗原）と固定化抗体部１８に固定化された抗体とが結合する。一方、検体供給部１７に供給された前記検体液は、展開液受取パッド１３側にも毛細管作用で移動するが、矢印ｃで示すように、液体非透過性層１９があることで、展開層１２の展開液受取パッド１３側や、展開液受取パッド１３での酵素と基質との反応による発色または発光が防止される。この結果、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０によれば、イムノクロマトグラフ検体分析用具１０を大型化することなく、展開層１２の展開液受取パッド１３側や、展開液受取パッド１３の発色または発光によるバックグラウンドの上昇を防止することができる。 The sectional view of FIG. 3 shows the state of movement of the sample liquid and the developing liquid in this embodiment. In FIG. 3, the same parts as those in FIG. As shown in the figure, when a developing solution is supplied to the developing solution supply unit 14, the developing solution dissolves the substrate impregnated in the substrate impregnating unit 15, and the solution is as shown by an arrow a. Then, it extends from the end portion (the right end portion in the figure) of the development layer 12 and develops into the development layer 12. As shown by the arrow b in FIG. 3, the solution is carried to the immobilized antibody unit 18 together with the sample solution supplied to the sample supply unit 17 by capillary action. Here, if the analyte is contained in the sample, the analyte (antigen) bound to the enzyme-labeled antibody and the antibody immobilized on the immobilized antibody portion 18 are bound by the antigen-antibody reaction. . On the other hand, the sample liquid supplied to the sample supply unit 17 also moves to the development liquid receiving pad 13 side by a capillary action. However, as shown by an arrow c, the liquid impermeable layer 19 is provided, so that the development layer Color development or luminescence due to the reaction between the enzyme and the substrate at the developing solution receiving pad 13 side or at the developing solution receiving pad 13 is prevented. As a result, according to the immunochromatographic sample analysis tool 10, the immunochromatographic sample analysis tool 10 does not increase the size of the development liquid receiving pad 13 side of the developing layer 12, and the back of the developing liquid receiving pad 13 by color development or light emission. The rise of the ground can be prevented.

図４に、本発明における抗原−抗体反応を模式的に示す。図４において、図１〜３と同一部分には同一符号を付している。図示のとおり、検体中の被測定物質（抗原）４１が、酵素標識抗体２４と結合するとともに、固定化抗体部１８に固定化された抗体２１とも結合し、複合体を形成している。なお、図４において、２２は、酵素標識抗体２４の抗体を示し、２３は、酵素標識抗体２４の酵素を示す。また、図４は、模式的に示したものであり、抗体および標識の大きさ等は、実際とは異なる。 FIG. 4 schematically shows the antigen-antibody reaction in the present invention. 4, the same parts as those in FIGS. As shown in the figure, the substance to be measured (antigen) 41 in the specimen is bound to the enzyme-labeled antibody 24 and is also bound to the antibody 21 immobilized on the immobilized antibody portion 18 to form a complex. In FIG. 4, 22 indicates an antibody of the enzyme-labeled antibody 24, and 23 indicates an enzyme of the enzyme-labeled antibody 24. FIG. 4 is a schematic view, and the sizes of antibodies and labels are different from actual ones.

ついで、固定化抗体部１８を通過した廃液が、廃液吸収パッド１６によって回収される。 Next, the waste liquid that has passed through the immobilized antibody portion 18 is collected by the waste liquid absorption pad 16.

所定時間（特に制限されないが、例えば、１０〜２０分）経過後、固定化抗体部１８における、酵素標識抗体の酵素と基質との反応による発色または発光を測定することにより、被測定物質の検出、定性分析または定量分析を行うことができる。前記測定は、目視による判定や、比色計、蛍光光度計、フォトンカウンター、感光フィルム等の測定装置を用いることで実施することができる。 After the elapse of a predetermined time (for example, 10 to 20 minutes), detection of a substance to be measured is performed by measuring the color development or luminescence due to the reaction between the enzyme-labeled antibody enzyme and the substrate in the immobilized antibody portion 18. Qualitative analysis or quantitative analysis can be performed. The measurement can be performed by visual determination or using a measuring device such as a colorimeter, a fluorometer, a photon counter, or a photosensitive film.

（実施形態２）
図５に、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のその他の例を示す。図５において、図１および図３と同一部分には同一符号を付している。図示のとおり、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０は、液体非透過性層１９の配置位置が異なること以外、図１および図３に示した実施形態１のイムノクロマトグラフ検体分析用具と同様の構成である。また、このイムノクロマトグラフ検体分析用具を用いた測定方法も、実施形態１と同様である。 (Embodiment 2)
FIG. 5 shows another example of the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention. 5, the same parts as those in FIGS. 1 and 3 are denoted by the same reference numerals. As shown in the figure, the immunochromatographic sample analysis tool 10 has the same configuration as the immunochromatographic sample analysis tool of the first embodiment shown in FIGS. 1 and 3 except that the arrangement position of the liquid impermeable layer 19 is different. . The measurement method using this immunochromatographic sample analysis tool is the same as that of the first embodiment.

同図に示すように、本実施形態のイムノクロマトグラフ検体分析用具１０では、液体非透過性層１９を、検体供給部１７側に突き出した（ずらした）形態で配置しており、展開層１２表面と展開液受取パッド１３の検体供給部１７側の底部との間に、液体非透過性層１９が配置され、前記展開層１２表面と前記展開液受取パッド１３の前記検体供給部１７と反対側の底部との間には、前記液体非透過性層１９が配置されていない構成となっている。このような構成としても、基質を含む展開液が、矢印ａに示すように、前記展開層１２の端部（同図において右側端部）から回り込んで、展開層１２へと展開される。また、矢印ｃに示すように、展開液受取パッド１３への検体液の浸入が防止される。この結果、イムノクロマトグラフ検体分析用具１０を大型化することなく、展開液受取パッド１３の発色または発光によるバックグラウンドの上昇を防止することができる。 As shown in the figure, in the immunochromatographic sample analysis tool 10 of the present embodiment, the liquid impermeable layer 19 is arranged in a protruding (shifted) manner toward the sample supply unit 17 side, and the surface of the development layer 12 A liquid non-permeable layer 19 is disposed between the developing solution receiving pad 13 and the bottom of the developing solution receiving pad 13 on the sample supplying unit 17 side, and the surface of the developing layer 12 and the developing solution receiving pad 13 opposite to the sample supplying unit 17. The liquid non-permeable layer 19 is not disposed between the bottom portion of the liquid crystal and the bottom portion. Even in such a configuration, the developing solution containing the substrate wraps around from the end portion (the right end portion in the figure) of the developing layer 12 as shown by the arrow a, and is developed to the developing layer 12. Further, as shown by the arrow c, the sample liquid is prevented from entering the developing liquid receiving pad 13. As a result, it is possible to prevent the background from rising due to color development or light emission of the developing solution receiving pad 13 without increasing the size of the immunochromatographic sample analysis tool 10.

（実施形態３）
図６に、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のさらにその他の例を示す。図６において、図１および図３と同一部分には同一符号を付している。図示のとおり、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０では、液体非透過性層１９の長さを図１および図３に示したイムノクロマトグラフ検体分析用具のそれよりも短くしている。それ以外は、図１および図３に示した実施形態１のイムノクロマトグラフ検体分析用具と同様の構成である。また、このイムノクロマトグラフ検体分析用具を用いた測定方法も、実施形態１と同様である。 (Embodiment 3)
FIG. 6 shows still another example of the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention. 6, the same parts as those in FIGS. 1 and 3 are denoted by the same reference numerals. As shown in the figure, in this immunochromatographic sample analysis tool 10, the length of the liquid impermeable layer 19 is made shorter than that of the immunochromatographic sample analysis tool shown in FIGS. Other than that, the configuration is the same as that of the immunochromatographic sample analysis tool of Embodiment 1 shown in FIGS. The measurement method using this immunochromatographic sample analysis tool is the same as that of the first embodiment.

同図に示すように、本実施形態のイムノクロマトグラフ検体分析用具１０では、液体非透過性層１９として、図１および図３に示したイムノクロマトグラフ検体分析用具のそれよりも長さが短いものを使用し、検体供給部１７側の端部を前記展開液受取パッド１３の端部とそろえた状態で配置しており、その結果、前記展開液受取パッド１３の前記検体供給部１７と反対側の底部と、展開層１２表面との間には、前記液体非透過性層１９が配置されていない状態となっている。このような構成としても、基質を含む展開液が、矢印ａに示すように、前記展開層１２の端部（同図において右側端部）から回り込んで、展開層１２へと展開される。また、矢印ｃに示すように、展開液受取パッド１３への検体液の浸入が防止される。この結果、イムノクロマトグラフ検体分析用具１０を大型化することなく、展開液受取パッド１３の発色または発光によるバックグラウンドの上昇を防止することができる。 As shown in the figure, in the immunochromatographic sample analysis tool 10 of the present embodiment, the liquid impermeable layer 19 is shorter than that of the immunochromatographic sample analysis tool shown in FIGS. 1 and 3. Used, with the end on the side of the sample supply unit 17 aligned with the end of the developing solution receiving pad 13, and as a result, the side of the developing solution receiving pad 13 opposite to the sample supplying unit 17 is arranged. The liquid non-permeable layer 19 is not disposed between the bottom and the surface of the development layer 12. Even in such a configuration, the developing solution containing the substrate wraps around from the end portion (the right end portion in the figure) of the developing layer 12 as shown by the arrow a, and is developed to the developing layer 12. Further, as shown by the arrow c, the sample liquid is prevented from entering the developing liquid receiving pad 13. As a result, it is possible to prevent the background from rising due to color development or light emission of the developing solution receiving pad 13 without increasing the size of the immunochromatographic sample analysis tool 10.

（実施形態４）
図７に、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のさらにその他の例を示す。図７において、図１および図３と同一部分には同一符号を付している。図示のとおり、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０でも、液体非透過性層１９の長さを図１および図３に示したイムノクロマトグラフ検体分析用具のそれよりも短くしている。それ以外は、図１および図３に示した実施形態１のイムノクロマトグラフ検体分析用具と同様の構成である。また、このイムノクロマトグラフ検体分析用具を用いた測定方法も、実施形態１と同様である。 (Embodiment 4)
FIG. 7 shows still another example of the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention. 7, the same parts as those in FIGS. 1 and 3 are denoted by the same reference numerals. As shown in the figure, also in this immunochromatographic sample analysis tool 10, the length of the liquid impermeable layer 19 is made shorter than that of the immunochromatographic sample analysis tool shown in FIGS. Other than that, the configuration is the same as that of the immunochromatographic sample analysis tool of Embodiment 1 shown in FIGS. The measurement method using this immunochromatographic sample analysis tool is the same as that of the first embodiment.

同図に示すように、本実施形態のイムノクロマトグラフ検体分析用具１０では、液体非透過性層１９として、図１および図３に示したイムノクロマトグラフ検体分析用具のそれよりも長さが短いものを使用し、前記液体非透過性層１９の両端が、前記展開液受取パッド１３の両端よりも内側にひっこんだ状態で配置されている。その結果、展開層１２表面と前記展開液受取パッド１３の前記検体供給部１７側の底部との間、および前記展開層１２表面と前記展開液受取パッド１３の前記検体供給部１７側と反対側の底部との間の双方において、前記液体非透過性層が配置されていない構成となっている。このような構成としても、基質を含む展開液が、矢印ａに示すように、前記展開層１２の端部（同図において右側端部）から回り込んで、展開層１２へと展開される。また、矢印ｃに示すように、展開液受取パッド１３への検体液の浸入が防止される。この結果、イムノクロマトグラフ検体分析用具１０を大型化することなく、展開液受取パッド１３の発色または発光によるバックグラウンドの上昇を防止することができる。 As shown in the figure, in the immunochromatographic sample analysis tool 10 of the present embodiment, the liquid impermeable layer 19 is shorter than that of the immunochromatographic sample analysis tool shown in FIGS. 1 and 3. In use, both ends of the liquid non-permeable layer 19 are disposed inwardly of both ends of the developing solution receiving pad 13. As a result, the surface of the developing layer 12 and the bottom of the developing solution receiving pad 13 on the side of the sample supply unit 17 and the surface of the developing layer 12 and the developing solution receiving pad 13 opposite to the sample supplying unit 17 side. The liquid non-permeable layer is not disposed on both sides of the bottom of the liquid crystal. Even in such a configuration, the developing solution containing the substrate wraps around from the end portion (the right end portion in the figure) of the developing layer 12 as shown by the arrow a, and is developed to the developing layer 12. Further, as shown by the arrow c, the sample liquid is prevented from entering the developing liquid receiving pad 13. As a result, it is possible to prevent the background from rising due to color development or light emission of the developing solution receiving pad 13 without increasing the size of the immunochromatographic sample analysis tool 10.

（実施形態５）
図８に、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のさらにその他の例を示す。図８において、図１と同一部分には同一符号を付している。図示のとおり、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０は、固定化抗体部１８の構成が異なること以外、図１に示した実施形態１のイムノクロマト検体分析用具と同様の構成である。 (Embodiment 5)
FIG. 8 shows still another example of the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention. In FIG. 8, the same parts as those in FIG. As shown, the immunochromatographic sample analysis tool 10 has the same configuration as the immunochromatographic sample analysis tool of Embodiment 1 shown in FIG. 1 except that the configuration of the immobilized antibody portion 18 is different.

同図に示すとおり、本実施形態のイムノクロマトグラフ検体分析用具１０では、固定化抗体部１８が、検体中の被測定物質を捕捉する抗体が固定化されている固定化捕捉抗体部８１と、対照用の抗体が固定化されている固定化対照抗体部８２とを有し、前記固定化対照抗体部８２よりも、前記固定化捕捉抗体部８１が、検体供給部１７側に配置されている。前記固定化捕捉抗体部８１に固定化される抗体としては、実施形態１の固定化抗体部１８に固定化される抗体と同様である。また、前記固定化対照抗体部８２に固定化される対照用の抗体としては、例えば、抗マウス抗体、抗ヤギ抗体、抗ウサギ抗体、抗アルカリホスファターゼ抗体、抗ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）抗体等が挙げられる。このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０を用いた測定は、実施形態１と同様にして行うことができる。ここで、前記固定化捕捉抗体部８１が、実施形態１における固定化抗体部１８と同じ働きをする。また、本実施形態では、固定化対照抗体部８２に固定化されている対照用の抗体が、酵素標識抗体と結合して発色または発光することで、前記固定化捕捉抗体部８１での複合体の形成が完了したことを知ることができる。 As shown in the figure, in the immunochromatographic sample analysis tool 10 of the present embodiment, the immobilized antibody portion 18 is contrasted with an immobilized capture antibody portion 81 on which an antibody that captures a substance to be measured in the sample is immobilized. The immobilized capture antibody part 81 is arranged closer to the specimen supply part 17 than the immobilized control antibody part 82. The antibody immobilized on the immobilized capture antibody portion 81 is the same as the antibody immobilized on the immobilized antibody portion 18 of the first embodiment. Examples of the control antibody immobilized on the immobilized control antibody portion 82 include anti-mouse antibody, anti-goat antibody, anti-rabbit antibody, anti-alkaline phosphatase antibody, and anti-peroxidase (POD) antibody. . Measurement using this immunochromatographic sample analysis tool 10 can be performed in the same manner as in the first embodiment. Here, the immobilized capture antibody part 81 has the same function as the immobilized antibody part 18 in the first embodiment. In this embodiment, the control antibody immobilized on the immobilized control antibody portion 82 binds to the enzyme-labeled antibody and develops color or emits light, whereby the complex in the immobilized capture antibody portion 81 is obtained. You can know that the formation of is completed.

［実施例１］
下記の手順により、図８に示す構成のイムノクロマトグラフ検体分析用具を得た。ただし、本例のイムノクロマトグラフ検体分析用具において、液体非透過性層は、図８に示したイムノクロマトグラフ検体分析用具のそれよりも長さが短い。その結果、本例のイムノクロマトグラフ検体分析用具では、展開層表面と展開液受取パッドの検体供給部と反対側の底部との間には、前記液体非透過性層が配置されていない状態となっている。 [Example 1]
By the following procedure, an immunochromatographic sample analysis tool having the configuration shown in FIG. 8 was obtained. However, in the immunochromatographic sample analysis tool of this example, the liquid impermeable layer has a shorter length than that of the immunochromatographic sample analysis tool shown in FIG. As a result, in the immunochromatographic sample analysis tool of this example, the liquid impermeable layer is not disposed between the surface of the developing layer and the bottom of the developing solution receiving pad opposite to the sample supplying unit. ing.

（１）展開層の作製
ニトロセルロース膜（ミリポア社製、商品名「ＨＡ１８０」）を、長さ５０ｍｍ、幅４ｍｍに切断し、これを展開層１２とした。前記展開層１２の一端（図８において右側端部）から３１ｍｍ、３５ｍｍの位置に、それぞれ、卵白アレルゲン抽出蛋白質水溶液（１ｍｇ／ｍＬ（５ｍｍｏｌ／Ｌ）ホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）で希釈後、透析した水溶液）と、抗ヤギＩｇＧマウスモノクローナル抗体（０．１ｍｇ／ｍＬ（５ｍｍｏｌ／Ｌ）ホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）で希釈後、透析した水溶液）とを、幅１ｍｍとなるように塗布した。このようにして、前記展開層１２表面に、固定化捕捉抗体部８１および固定化対照抗体部８２を形成した。なお、前記固定化捕捉抗体部８１の形成においては、前記展開層１２を３７℃で１時間放置して、前記卵白アレルゲン抽出蛋白質を固定化した後、固定化した膜をブロッキングした。 (1) Production of spreading layer A nitrocellulose membrane (product name “HA180”, manufactured by Millipore) was cut into a length of 50 mm and a width of 4 mm, and this was used as a spreading layer 12. After dilution with an egg white allergen-extracted protein aqueous solution (1 mg / mL (5 mmol / L) borate buffer (pH 8.5) at positions 31 mm and 35 mm from one end (right end in FIG. 8) of the spreading layer 12, respectively. , Dialyzed aqueous solution) and anti-goat IgG mouse monoclonal antibody (0.1 mg / mL (5 mmol / L) diluted with borate buffer (pH 8.5) and dialyzed aqueous solution) so as to have a width of 1 mm. Applied. In this way, an immobilized capture antibody portion 81 and an immobilized control antibody portion 82 were formed on the surface of the development layer 12. In the formation of the immobilized capture antibody portion 81, the development layer 12 was left at 37 ° C. for 1 hour to immobilize the egg white allergen-extracted protein, and then the immobilized membrane was blocked.

（２）展開液受取パッドの作製
セルロースパッド（ミリポア社製、商品名「ＡＰ２５」）を、長さ２０ｍｍ、幅４ｍｍに切断し、これを展開液受取パッド１３とした。前記展開液受取パッド１３の一端（図８において右側端部）から３ｍｍの位置に、基質として、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸（２０ｍｇ／ｍＬ、ベーリンガーマンハイム社製、商品名「ＢＣＩＰ」）５μＬを塗布し、３７℃で１時間放置して乾燥させた。 (2) Production of Developing Solution Receiving Pad A cellulose pad (trade name “AP25”, manufactured by Millipore) was cut into a length of 20 mm and a width of 4 mm. 5-bromo-4-chloro-3-indolylphosphoric acid (20 mg / mL, manufactured by Boehringer Mannheim Co., Ltd.) as a substrate at a position 3 mm from one end (right end in FIG. 8) of the developing solution receiving pad 13 (Name “BCIP”) 5 μL was applied and allowed to dry at 37 ° C. for 1 hour.

（３）廃液吸収パッドの作製
セルロースパッド（ミリポア社製、商品名「ＡＰ２５」）を、長さ３０ｍｍ、幅４ｍｍに切断し、これを廃液吸収パッド１６とした。 (3) Production of Waste Liquid Absorption Pad A cellulose pad (manufactured by Millipore, trade name “AP25”) was cut into a length of 30 mm and a width of 4 mm.

（４）支持体の作製
バッキングシート（ＢｉｏＤｏｔ製）を、長さ８０ｍｍ、幅５ｍｍに切断し、これを支持体１１とした。 (4) Production of Support Body A backing sheet (manufactured by Bio Dot) was cut into a length of 80 mm and a width of 5 mm, and this was used as a support body 11.

（５）液体非透過性層の作製
ＰＥＴフィルムを、長さ１０ｍｍ、幅４ｍｍに切断し、これを液体非透過性層１９とした。 (5) Preparation of liquid impermeable layer The PET film was cut into a length of 10 mm and a width of 4 mm, and this was used as a liquid impermeable layer 19.

（６）イムノクロマトグラフ検体分析用具の作製
前記支持体１１の一端（図８において右側端部）から１０ｍｍの位置に前記展開層１２を貼り付け、前記展開層１２の一端（図８において右側端部）から５ｍｍの位置に前記液体非透過性層１９を貼り付けた。つぎに、前記展開液受取パッド１３の一端（図８において右側端部）を前記支持体１１の一端（図８において右側端部）に固定し、前記展開液受取パッド１３の他端（図８において左側端部）側を前記液体非透過性層１９上に重ねた。つぎに、前記廃液吸収パッド１６の一端（図１において左側端部）を前記支持体１１の他端（図８において右側端部）に固定し、前記廃液吸収パッド１６の他端（図８において右側端部）側を前記展開層１２の他端（図１において左側端部）上に重ねた。このようにして、本例のイムノクロマトグラフ検体分析用具１０を得た。 (6) Preparation of immunochromatographic sample analysis tool The development layer 12 is attached to a position 10 mm from one end of the support 11 (right end in FIG. 8), and one end of the development layer 12 (right end in FIG. 8). The liquid impermeable layer 19 was pasted at a position of 5 mm from the above. Next, one end (the right end portion in FIG. 8) of the developing solution receiving pad 13 is fixed to one end (the right end portion in FIG. 8) of the support 11, and the other end of the developing solution receiving pad 13 (FIG. 8). In FIG. 2, the left end portion side was overlaid on the liquid impermeable layer 19. Next, one end (left end portion in FIG. 1) of the waste liquid absorption pad 16 is fixed to the other end (right end portion in FIG. 8) of the support 11, and the other end of the waste liquid absorption pad 16 (in FIG. 8). The right end portion was overlapped on the other end (left end portion in FIG. 1) of the spread layer 12. Thus, the immunochromatographic sample analysis tool 10 of this example was obtained.

（評価）
１０μＬの卵白特異ＩｇＧ陽性血清と６０μＬのアルカリホスファターゼ標識抗体（１０μｇ、ヤギ由来）を混合したものを検体液として用いた。前記検体液を検体供給部１７（前記展開層１２の一端（図８において右側端部）から２０ｍｍの位置）に１０μＬ点着した。つぎに、前記展開液受取パッド１３に８０μＬの展開液を滴下した。滴下から２０分後、前記固定化捕捉抗体部８１（１ｍｍ幅）および前記展開層１２全体の発色の度合いを目視により判定した。 (Evaluation)
A mixture of 10 μL of egg white specific IgG positive serum and 60 μL of alkaline phosphatase labeled antibody (10 μg, derived from goat) was used as a sample solution. 10 μL of the sample liquid was spotted on the sample supply unit 17 (at a position 20 mm from one end (right end in FIG. 8) of the development layer 12). Next, 80 μL of a developing solution was dropped onto the developing solution receiving pad 13. Twenty minutes after the dropping, the degree of color development of the immobilized capture antibody portion 81 (1 mm width) and the entire development layer 12 was visually determined.

［比較例１］
前記液体非透過性層を用いず、前記展開層表面の一端側の上に直接前記展開液受取パッドを配置したこと以外は、実施例１と同様にして、本例のイムノクロマトグラフ検体分析用具を得た。このイムノクロマトグラフ検体分析用具を、実施例１と同様にして評価した。 [Comparative Example 1]
The immunochromatographic sample analysis tool of this example was prepared in the same manner as in Example 1 except that the liquid impermeable layer was not used and the developing liquid receiving pad was disposed directly on one end side of the surface of the developing layer. Obtained. This immunochromatographic sample analysis tool was evaluated in the same manner as in Example 1.

実施例１および比較例１の評価結果を、下記表１に示す。なお、下記表１においては、発色が鮮明に観察されたものを＋、発色がかろうじて観察されたものを±、発色が観察されなかったものを−とした。 The evaluation results of Example 1 and Comparative Example 1 are shown in Table 1 below. In Table 1 below, “+” indicates that the color was clearly observed, “±” indicates that the color was barely observed, and “−” indicates that no color was observed.

（表１）
固定化捕捉抗体部展開層全体
実施例１＋ −
比較例１ ± ＋
(Table 1)
Immobilized capture antibody part Entire development layer
Example 1 + −
Comparative Example 1 ± +

上記表１に示すとおり、実施例１では、展開層全体からは発色が確認されず、固定化捕捉抗体部の発色が鮮明に観察された。一方、比較例１では、展開層全体が発色していたため、固定化捕捉抗体部の発色が検出しにくくなっていた。このように、実施例１のイムノクロマトグラフ検体分析用具では、展開層の展開液受取パッド側や、展開液受取パッドでの酵素と基質との反応が防止され、バックグラウンドの上昇が防止されていた。 As shown in Table 1 above, in Example 1, color development was not confirmed from the entire development layer, and color development of the immobilized capture antibody portion was clearly observed. On the other hand, in Comparative Example 1, since the entire development layer was colored, it was difficult to detect the color of the immobilized capture antibody portion. As described above, in the immunochromatographic sample analysis tool of Example 1, the reaction between the enzyme and the substrate at the developing solution receiving pad side of the developing layer or the developing solution receiving pad was prevented, and the background was prevented from rising. .

本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具は、大型化することなく、バックグラウンドの上昇が防止されたものである。したがって、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具は、例えば、全血、血清、血漿、唾液、尿、髄液等に含まれる特定物質の検出、定性分析または定量分析に好適に使用でき、臨床検査、生化学検査などの分野に使用できるが、その用途は制限されず、広い分野に適用可能である。 The immunochromatographic sample analysis tool of the present invention prevents the background from rising without increasing its size. Therefore, the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention can be suitably used for detection, qualitative analysis or quantitative analysis of specific substances contained in, for example, whole blood, serum, plasma, saliva, urine, spinal fluid, Although it can be used in fields such as biochemical testing, its application is not limited and it can be applied to a wide range of fields.

図１は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具の一例の構成を示す斜視図である。FIG. 1 is a perspective view showing the configuration of an example of the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention. 図２は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具の一例における固定化抗体部に固定化された抗体について説明する模式図である。FIG. 2 is a schematic diagram for explaining an antibody immobilized on an immobilized antibody portion in an example of the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention. 図３は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具の一例における検体液、展開液の移動の状態を説明する断面図である。FIG. 3 is a cross-sectional view illustrating a state of movement of the sample liquid and the developing liquid in an example of the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention. 図４は、本発明のイムノクロマトグラム検体分析用具の一例における抗原−抗体反応の状態を説明する模式図である。FIG. 4 is a schematic diagram for explaining the state of the antigen-antibody reaction in an example of the immunochromatogram sample analysis tool of the present invention. 図５は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のその他の例の構成を示す断面図である。FIG. 5 is a cross-sectional view showing the configuration of another example of the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention. 図６は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のさらにその他の例の構成を示す断面図である。FIG. 6 is a cross-sectional view showing the configuration of still another example of the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention. 図７は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のさらにその他の例の構成を示す断面図である。FIG. 7 is a cross-sectional view showing the configuration of still another example of the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention. 図８は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のさらにその他の例の構成を示す斜視図である。FIG. 8 is a perspective view showing the configuration of still another example of the immunochromatographic sample analysis tool of the present invention. 図９は、従来のイムノクロマトグラフ検体分析用具の一例の構成を示す斜視図である。FIG. 9 is a perspective view showing a configuration of an example of a conventional immunochromatographic sample analysis tool.

Explanation of symbols

１０、９０イムノクロマトグラフ検体分析用具
１１、９１支持体
１２、９２展開層
１３、９３展開液受取パッド
１４、９４展開液供給部
１５、９５基質含浸部
１６、９６廃液回収パッド
１７、９７検体供給部
１８、９８固定化抗体部
１９液体非透過性層
２１、２２抗体
２３酵素
２４酵素標識抗体
４１被測定物質（抗原）
８１固定化捕捉抗体部
８２固定化対照抗体部
ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ矢印 10, 90 Immunochromatographic specimen analysis tool 11, 91 Support body 12, 92 Development layer 13, 93 Development liquid receiving pad 14, 94 Development liquid supply section 15, 95 Substrate impregnation section 16, 96 Waste liquid collection pad 17, 97 Sample supply section 18, 98 Immobilized antibody part 19 Liquid impermeable layer 21, 22 Antibody 23 Enzyme 24 Enzyme labeled antibody 41 Substance to be measured (antigen)
81 Immobilized capture antibody part 82 Immobilized control antibody part a, b, c, d, e Arrows

Claims

An immobilized antibody portion having a developing layer and a developing solution receiving pad, wherein the developing solution receiving pad is disposed on one end side of the developing layer surface, and an antibody is immobilized on the other end side of the developing layer surface; Formed, a specimen supply part is formed between the immobilized antibody part on the surface of the development layer and the development liquid receiving pad, a development liquid supply part is formed on the surface of the development liquid receiving pad, and the development liquid reception The pad includes a substrate, a sample liquid containing a sample and an enzyme-labeled antibody is supplied from the sample supply unit, and the sample solution is moved through the development layer and introduced into the immobilized antibody unit, and the immobilized antibody Forming a complex of the substance to be measured in the sample and the enzyme-labeled antibody, supplying a developing solution from the developing solution supply unit, and moving the substrate together with the developing solution in the developing layer to immobilize the substrate. Introduced into the antibody part, and the enzyme of the enzyme-labeled antibody In the immunochromatographic sample analysis tool for detecting the substance to be measured by detecting at least one of color development and luminescence due to reaction with the substrate, a liquid non-permeable layer is disposed on one end side on the surface of the development layer. An immunochromatographic sample analysis tool, wherein the developing solution receiving pad is disposed on the liquid impermeable layer.

The liquid impermeable layer is disposed between the surface of the developing layer and the bottom of the developing solution receiving pad on the side of the specimen supply unit, and the surface of the developing layer and the side of the developing solution receiving pad on the side of the sample supplying unit The immunochromatographic sample analysis tool according to claim 1, wherein the liquid impermeable layer is not disposed between the bottom portion on the opposite side.

The immunochromatographic sample analysis tool according to claim 1 or 2, wherein the liquid impermeable layer is formed of a polyethylene terephthalate film.

The immunochromatographic sample analysis tool according to any one of claims 1 to 3, wherein the developing solution receiving pad has a substrate-impregnated portion, and the substrate is disposed in the substrate-impregnated portion.

The immunochromatographic sample analysis tool according to any one of claims 1 to 4, further comprising a support, wherein the development layer is disposed on the support.

The immunochromatography according to any one of claims 1 to 5, further comprising a waste liquid absorption pad, wherein the waste liquid absorption pad is disposed further to the other end side than the immobilized antibody portion on the surface of the development layer. Graph specimen analysis tool.

The immobilized antibody part has an immobilized capture antibody part in which an antibody that captures the substance to be measured is immobilized, and an immobilized control antibody part in which a control antibody is immobilized, The immunochromatographic sample analysis tool according to any one of claims 1 to 6, wherein the immobilized capture antibody portion is arranged closer to the sample supply portion than the control antibody portion.