JP2008067648A - Agent and method for labeling fish - Google Patents

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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new agent for labeling fishes, using a material of which the safety to human beings has been confirmed, and to provide a method for labeling the fishes of a method that will not present concern, from the point of the safety of foods by using the labeling agent, and which is carried out with the cost suppressed so as to be lower than that of the conventional types. <P>SOLUTION: The agent for labeling the fishes comprises a cochineal dye, a rack dye or a gromwell dye, or a chemical comprising any one of these as an active ingredient. The method for labeling the fishes includes soaking of fertilized eggs, or of the fries, and the labeling-target fish in a labeling solution, in which the labeling agent is dissolved to dye the hard tissues (otoliths, spines, scales or the like) thereof, and is suitable for the labeling of red sea bream, Inimicus japonicus, flatfish, tiger puffer,or the like. <P>COPYRIGHT: (C)2008,JPO&INPIT

Description

本発明は魚類の標識剤とその標識剤を用いて魚類を標識する方法に関する。詳しくは、新規な魚類の標識剤とその標識剤を用いて魚体の硬組織を染色し、魚類を標識する方法に関する。さらに詳しくは、人体への安全性が確認されている素材からなる標識剤とその標識剤を用いて魚類を安全かつ安価に標識する方法に関する。   The present invention relates to a fish labeling agent and a method for labeling fish using the labeling agent. Specifically, the present invention relates to a novel fish labeling agent and a method for labeling fish by staining a hard tissue of a fish body using the labeling agent. More specifically, the present invention relates to a labeling agent made of a material that has been confirmed to be safe for the human body, and a method for labeling fish safely and inexpensively using the labeling agent.

近年、種苗生産技術の飛躍的な向上に伴い、全国で放流を目的として生産される海産仔稚魚は2002年で37種・9400万尾に達している。なかでもマダイは、栽培漁業を代表する対象種の一つであり、2002年には全国で1955万尾の稚魚が放流されている。また、ヒラメは、マダイと共に栽培漁業を代表する魚種であり、近年、放流を目的とする魚類の中では稚魚の生産数と放流尾数が最も多くなっており、2002年には全国で2590万尾が放流されている。また、オニオコゼは、栽培漁業の有望な対象種であり、2002年には全国で64万尾の稚魚が放流されている。   In recent years, with the dramatic improvement of seed production technology, the number of marine larvae produced for the purpose of release nationwide reached 37 species and 94 million in 2002. Among them, red sea bream is one of the target species representing cultivated fishery. In 2002, 1,955,000 fry were released nationwide. In addition, flounder is a fish species that represents cultivated fishery together with red sea bream. In recent years, the number of juveniles produced and the number of released tails are the largest among the fishes intended for release. In 2002, 25.9 million nationwide. The tail is released. Oniokoze is a promising target species for cultivated fishery. In 2002, 640,000 fry were released throughout the country.

これらの放流調査に使用する魚類の標識法には、従来から、アンカータグ等の各種標識票の装着、鰭切除、鰭抜去、焼印等の体外標識法と、標識剤としてアリザリンコンプレクソン(以下「ALC」)、塩酸オキシテトラサイクリン(以下「OTC」)、アリザリンレッドS(以下「ARS」)等の薬剤を用いる耳石蛍光染色法や、墨汁、イラストマー蛍光タグ等の皮下注射による体内標識法が用いられている。   The fish labeling methods used in these discharge surveys have been conventionally applied to in vitro labeling methods such as attaching various tagging tags such as anchor tags, phlegm excision, phlegm removal, and branding, and alizarin complexone (hereinafter “ ALC ”), oxytetracycline hydrochloride (hereinafter“ OTC ”), alizarin red S (hereinafter“ ARS ”) and other otolith fluorescent staining methods, and in-vivo labeling methods by subcutaneous injection such as ink and illustrator fluorescent tags. It is used.

魚類の標識技術の問題点として、体外標識法では、装着に長時間を要すること、標識票の脱落、切除後や抜去後の鰭の再生、焼印痕の再生等によって標識の識別が困難になることが指摘されている。一方、体内標識法では、ALCやARS等の標識剤が高価であるため、稚魚等に大量に装着する場合の経済性の問題が指摘されている。なお、OTCは、薬事法で規定された動物用医薬品であり、承認された使用法以外での使用は刑事罰の対象となるため、実際の放流試験には使用できない。   As a problem of fish labeling technology, in vitro labeling methods require a long time to put on, the tag slips off, the rehabilitation of the salmon after excision or removal, the regeneration of the brand mark, etc., making it difficult to identify the label It has been pointed out. On the other hand, in the in-body labeling method, since labeling agents such as ALC and ARS are expensive, a problem of economic efficiency when a large amount is attached to a fry is pointed out. Note that OTC is a veterinary drug prescribed by the Pharmaceutical Affairs Law, and uses other than approved usage are subject to criminal penalties, and therefore cannot be used for actual release tests.

また、近年は食の安全性に対する国民の関心が高まっているが、ALCやARSは、人体に対する安全性が確認された薬剤であるとは明言できない。また、将来的には、いずれの標識方法であっても、魚体内に異物を装着する点で人体に対する安全性が危惧される可能性が高い。このため、今後はこの点に配慮した標識技術の開発が必要である。   In recent years, public interest in food safety has increased, but ALC and ARS cannot be clearly stated as drugs that have been confirmed to be safe for the human body. Further, in the future, any labeling method is highly likely to be a safety concern for the human body in that a foreign object is attached to the fish body. Therefore, in the future, it will be necessary to develop a labeling technology that takes this into consideration.

従来の体内標識法では、標識剤としてフッ化物イオンの定量試薬であるALCが多用されている。ALCは、魚の体内に取り込まれると、カルシウムとキレートを生成して耳石等の硬組織に沈着する。沈着したALCは、蛍光顕微鏡で観察することにより蛍光として確認されるので、調査した魚が放流魚であるか否かを容易に判定できる。しかし、前記のとおり、ALCは、安全性に懸念があると共にかなり高価であるから、人体に対してより安全でより安価な標識剤を開発することができれば、きわめて好ましい。   In the conventional in vivo labeling method, ALC, which is a quantitative reagent for fluoride ions, is frequently used as a labeling agent. When ALC is taken into the fish body, it forms calcium and chelate and deposits on hard tissues such as otoliths. Since the deposited ALC is confirmed as fluorescence by observing with a fluorescence microscope, it can be easily determined whether or not the investigated fish is a released fish. However, as described above, since ALC is concerned with safety and is quite expensive, it is highly preferable if a safer and cheaper labeling agent can be developed for the human body.

体内標識法によれば、体外標識法では困難である受精卵やふ化仔魚(受精卵からふ化した直後の仔魚)サイズの小型魚への大量標識が可能であり、また、ALCで確認されているように標識後の持続性が高く、標識率を100%に高めることができる。さらに、放流調査においていくつかの放流群を識別する際、放流魚には耳石における蛍光リングの多重性が要求されるため、受精卵ないしふ化仔魚期における蛍光標識技術が不可欠であるが、体内標識法はこの点にも適合する。なお、受精卵ないしふ化仔魚期における標識は、稚魚期における標識と比べて1個体あたりの標識単価を低くすることができる。   According to the in vivo labeling method, it is possible to label a large amount of fertilized eggs and hatched larvae (larvae just after hatching from fertilized eggs), which is difficult with in vitro labeling methods, and has been confirmed by ALC. Thus, the persistence after labeling is high, and the labeling rate can be increased to 100%. Furthermore, when distinguishing several release groups in a release study, the release of fish requires a multiplicity of fluorescent rings in the otolith, so fluorescent labeling technology in the fertilized egg or hatchling larva stage is indispensable. The labeling method is compatible with this point. In addition, the label | marker in a fertilized egg thru | or hatched larva stage can make the tag unit price per individual low compared with the label | marker in the juvenile stage.

このような状況に鑑み、本発明者らは、上記全ての問題点を解消できる魚類の体内標識法の開発を志向し、技術情報を入手すべく、まず特許文献について調査した。
特許公報を見ると、魚類の標識技術に関していくつかの発明が出願され、開示されているが、そのほとんどは体外標識法の改良に関する発明であり、体内標識法に関する発明は皆無に近い。わずかに、特許文献1には、放流魚の耳石に標識を付ける方法が開示されているが、この標識方法は、魚類のふ化飼養池の水温・水質を変化させて魚類の耳石にバーコード状模様の標識を形成させる発明であり、本発明の課題に対して何ら参考となる情報ではない。また、特許文献2には、河川で捕獲されるアユの耳石成長基点を通る断面におけるストロンチウムの濃度分布を測定し、天然アユか放流アユかを識別する方法について開示されている。しかし、この方法も本発明の課題とは何ら関係がない。このように特許公報には、本発明の課題を解決するために参考となる情報は何ら開示されていない。
特開2003−9701号公報 特開2001−275512号公報
In view of such a situation, the present inventors aimed at the development of a fish internal labeling method capable of solving all the above-mentioned problems, and first investigated patent documents in order to obtain technical information.
Looking at the patent publications, several inventions have been filed and disclosed regarding fish labeling technology, but most of them are inventions related to the improvement of the in vitro labeling method, and there are almost no inventions related to the in vivo labeling method. Slightly, Patent Document 1 discloses a method of labeling otoliths of released fish, but this labeling method changes the water temperature and water quality of fish hatchery ponds to bar code on fish otoliths. It is an invention for forming a sign having a pattern, and is not information to be used as a reference for the problem of the present invention. Patent Document 2 discloses a method of measuring the concentration distribution of strontium in a cross-section passing through the otolith growth base point of ayu captured in a river and discriminating whether it is natural or released. However, this method has nothing to do with the problem of the present invention. Thus, the patent publication does not disclose any information that serves as a reference for solving the problems of the present invention.
Japanese Patent Laid-Open No. 2003-9701 JP 2001-275512 A

上記の状況に鑑み、本発明は、人体に対する安全性が確認されている新規な魚類の標識剤とその標識剤を用いて魚類を安全に標識する方法を提供することを第1の課題とする。また、本発明は、人体に対する安全性が確認されていると共に安価な標識剤とその標識剤を用いて魚類を安全かつ安価に標識する方法を提供することを第2の課題とする。   In view of the above situation, it is a first object of the present invention to provide a novel fish labeling agent that has been confirmed to be safe for the human body and a method for safely labeling fish using the labeling agent. . Another object of the present invention is to provide a method for labeling fish safely and inexpensively using an inexpensive labeling agent and the labeling agent that have been confirmed to be safe for the human body.

上記の各課題を解決するための本発明のうち、特許請求の範囲・請求項1に記載する発明は、コチニール色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤である。   Of the present invention for solving the above-mentioned problems, the invention described in claims 1 and 2 is a fish labeling agent comprising a cochineal dye or a drug containing this as an active ingredient.

また、同請求項2に記載する発明は、ラック色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤である。   The invention described in claim 2 is a fish labeling agent comprising a rack dye or a drug containing the same as an active ingredient.

また、同請求項3に記載する発明は、シコン色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤である。   The invention described in claim 3 is a fish labeling agent comprising a sicon pigment or a drug containing the same as an active ingredient.

また、同請求項4に記載する発明は、請求項1から3のいずれかに記載の標識剤を溶解した標識液に標識対象魚の受精卵を浸漬し、受精卵ないしそのふ化仔魚の硬組織を染色することによって魚類を標識する方法である。   Moreover, the invention described in claim 4 is a method in which a fertilized egg of a target fish is immersed in a labeling solution in which the labeling agent according to any one of claims 1 to 3 is dissolved, and the hard tissue of the fertilized egg or its hatched larvae is obtained. It is a method of labeling fish by staining.

また、同請求項5に記載する発明は、請求項4に記載の標識方法において、標識液の濃度を、請求項1に記載する標識剤を用いる場合には4000〜8000mg/Lとし、請求項2に記載する標識剤を用いる場合には4000mg/L程度とし、請求項3に記載する標識剤を用いる場合には0.2mg/L程度とし、浸漬時間はそれぞれ24時間程度として魚類を標識する方法である。   The invention described in claim 5 is the labeling method according to claim 4, wherein the concentration of the labeling solution is 4000 to 8000 mg / L when the labeling agent according to claim 1 is used. When the labeling agent described in 2 is used, it is about 4000 mg / L. When the labeling agent according to claim 3 is used, it is about 0.2 mg / L, and the immersion time is about 24 hours, respectively. Is the method.

また、同請求項6に記載する発明は、請求項4又は5に記載の標識方法において、標識対象魚をマダイ、オニオコゼ又はヒラメのいずれかとする魚類の標識方法である。   The invention described in claim 6 is the method for labeling fish according to claim 4 or 5, wherein the fish to be labeled is either red sea bream, oniochoze or flounder.

また、同請求項7に記載する発明は、請求項1又は3に記載の標識剤を溶解した標識液に標識対象魚の稚魚を浸漬し、その硬組織を染色することによって魚類を標識する方法である。   Further, the invention described in claim 7 is a method of labeling fish by immersing a fry of a fish to be labeled in a labeling solution in which the labeling agent according to claim 1 or 3 is dissolved and staining the hard tissue thereof. is there.

また、同請求項8に記載する発明は、請求項7に記載の標識方法において、標識対象魚をオニオコゼ又はトラフグとし、コチニール色素を16000mg/L程度の濃度に溶解した標識液を用いて、稚魚の硬組織のうち耳石を染色することによってオニオコゼ又はトラフグの稚魚を標識する方法である。   Further, the invention described in claim 8 is the labeling method according to claim 7, wherein the target fish for labeling is oniochoze or trough puffer and a labeling solution in which the cochineal dye is dissolved at a concentration of about 16000 mg / L is used. This is a method for labeling fry of Oniochoze or tiger puffer fish by staining otoliths among the hard tissues.

また、同請求項9に記載する発明は、請求項7に記載の標識方法において、コチニール色素を2000mg/L程度の濃度に溶解した標識液を用いて、稚魚の硬組織のうち棘、鱗、下鰓蓋骨又は軟条のいずれかを染色することによって魚類を標識する方法である。   The invention described in claim 9 is the labeling method according to claim 7, wherein a labeling solution in which a cochineal dye is dissolved at a concentration of about 2000 mg / L is used, and spines, scales, It is a method of labeling fish by staining either the lower skull or soft stripes.

また、同請求項10に記載する発明は、請求項9に記載の標識方法において、標識対象魚をマダイ、オニオコゼ、ヒラメ又はトラフグのいずれかの稚魚とする魚類の標識方法である。   The invention described in claim 10 is the method for labeling fish according to claim 9, wherein the fish to be labeled is a larvae of red sea bream, oniokoze, flounder, or tiger puffer fish.

また、同請求項11に記載する発明は、請求項7に記載の標識方法において、標識対象魚をマダイ又はオニオコゼとし、シコン色素を0.5mg/L程度の濃度に溶解した標識液を用いて、稚魚の硬組織のうち耳石又は鱗を染色することによってマダイ又はオニオコゼの稚魚を標識する方法である。   Further, the invention described in claim 11 is the labeling method according to claim 7, wherein the labeling fish is red sea bream or onyokoze, and a labeling solution in which a sycon dye is dissolved at a concentration of about 0.5 mg / L is used. This is a method for labeling red sea bream or oniokoze fry by staining otoliths or scales in the hard tissues of the fry.

本発明に係る魚類の標識剤は、いずれも食品添加物や漢方薬として公認されている素材からなるものであるから、これらを放流魚の体内標識に使用しても、食の安全性の点で安心であり、いたずらに危惧されるおそれがない。また、本発明に係る魚類の標識方法は、いずれも人体に安全な方法であると共に大量標識に用いるのに適しているので、魚類の体内標識における所要コストを抑えることができる。   Since the fish labeling agents according to the present invention are made of materials that are officially recognized as food additives and herbal medicines, they are safe in terms of food safety even if they are used for the labeling of released fish. There is no fear of mischief. In addition, since the fish labeling methods according to the present invention are both safe for the human body and suitable for use in large-scale labeling, it is possible to reduce the cost required for fish body labeling.

しかも、本発明に係る魚類の標識方法は、標識対象魚が受精卵ないしふ化仔魚の時期に標識できるので、放流魚の耳石蛍光リングの多重性の要求に十分に応えることができる。   In addition, the method for labeling fish according to the present invention can sufficiently meet the requirement for multiplicity of the otolith fluorescent ring of the released fish because the target fish can be labeled at the time of fertilized eggs or hatched larvae.

特に、本発明のうちシコン色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤については、これを用いて受精卵を標識する場合、標識コストをALCを用いる場合よりも低く抑えることができる。また、シコン色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤は、マダイやオニオコゼを標識対象とする場合は、受精卵ないしふ化仔魚期の標識にも、また、稚魚の標識にも有用であるから、すこぶる便利である。   In particular, in the case of a fish labeling agent comprising a sicon dye or a drug containing this as an active ingredient in the present invention, when labeling a fertilized egg using this, the labeling cost can be kept lower than when using ALC. . In addition, fish labeling agents consisting of sicon pigments or drugs containing them as active ingredients are useful for labeling fertilized eggs or hatched larvae, and for labeling fry when red sea bream or oniokoze are targeted. Therefore, it is very convenient.

本発明のうちコチニール色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤については、稚魚の耳石以外の硬組織を標識する場合において、標識コストをALCを用いる場合よりも低く抑えることができる。すなわち、コチニール色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤は、稚魚を標識対象とする場合は、耳石の標識に限らず、鱗や棘や下鰓蓋骨等を染色できるので、これらの染色状況をもって標識対象魚であるか否かを容易に鑑別できる。しかも、2000mg/Lという、いずれの魚種にも安全に浸漬できる濃度で有効である上、鱗や棘や鰓等は標識液の濃度を低く抑えても十分に染色できるので、標識コストをALCを用いる場合よりも低く抑えることができる。このように、コチニール色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる標識剤の溶液(標識液)に稚魚を浸漬する標識方法は、耳石をターゲットとしない場合にはきわめて有用な標識方法である。   Regarding the labeling agent for fish comprising the cochineal dye or a drug containing this as an active ingredient in the present invention, when labeling hard tissue other than otoliths of fry, the labeling cost can be kept lower than when using ALC. it can. That is, a fish labeling agent comprising a cochineal pigment or a drug containing this as an active ingredient can stain scales, spines, the lower skull, etc., not only for otolith labeling, when juveniles are to be labeled. Thus, it is possible to easily distinguish whether or not the fish is a labeling target fish with these staining conditions. Moreover, it is effective at a concentration of 2000 mg / L that can be safely immersed in any fish species, and scales, thorns, corals, etc. can be sufficiently stained even if the concentration of the labeling solution is kept low, so that the labeling cost is reduced by ALC. It can be kept lower than when using. Thus, the labeling method in which the fry is immersed in a solution (labeling solution) of a labeling agent comprising a cochineal dye or a drug containing this as an active ingredient is a very useful labeling method when the target is not an otolith.

なお、耳石をターゲットとしない場合、鱗は、外部から容易に採取できるため、鱗によって鑑別するときはサンプリングが簡単である。また、オニオコゼやトラフグには鱗はないが、オニオコゼは通常は市販前に切除されている棘を採集すればよいし、トラフグは皮膚に存在する棘を採取できるので、いずれもサンプリングが簡単にできる。   If the otolith is not targeted, scales can be easily collected from the outside, and therefore sampling is easy when discriminating by scales. Oniochoze and tiger pufferfish do not have scales, but the scorpionfish usually collects spines that have been excised before they are put on the market, and trough puffer can collect the thorns present on the skin, so both can be sampled easily. .

また、コチニール色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤は、稚魚の耳石標識にもきわめて有用である。例えば、オニオコゼやトラフグについては、その硬組織のうち耳石への標識が可能であることが確認されている。このように、本発明のうちコチニール色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤は、受精卵ないしふ化仔魚期の標識にも、また、稚魚の標識にも有用であるから、標識剤として大きな成果が期待される。   In addition, a fish labeling agent comprising a cochineal dye or a drug containing the same as an active ingredient is very useful for labeling fry otoliths. For example, it has been confirmed that, for Oniochoze and tiger puffer, labeling of otoliths in the hard tissue is possible. As described above, the fish labeling agent comprising a cochineal dye or a drug containing the same as an active ingredient in the present invention is useful for labeling fertilized eggs or hatched larvae and also for labeling fry. Great results are expected as an agent.

本発明は、コチニール色素もしくはラック色素又はこれらを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤である。さらに、本発明は、これらの標識剤を用いて魚体の硬組織を染色し、魚類を標識する方法である。具体的には、これらの標識剤を濾過海水等に溶解して作った標識液に標識対象魚の受精卵を24時間程度浸漬することによって受精卵ないしそのふ化仔魚の硬組織を染色し、魚体を標識する方法を採ることが好ましい。また、コチニール色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる標識剤を用いる場合は、これを濾過海水等に溶解した標識液に標識対象の稚魚を24時間程度浸漬し、その硬組織(特に耳石、鱗、棘、下鰓蓋骨、軟条等)を染色することによって、稚魚を標識する方法を採ることもできる。この方法は、耳石を標識対象とするとき、オニオコゼやトラフグの稚魚について特に有用であり、耳石以外の硬組織を標識対象とするとき、マダイ、オニオコゼ、ヒラメ、トラフグについて特に有用である。   The present invention is a fish labeling agent comprising a cochineal dye or a rack dye or a drug containing these as an active ingredient. Furthermore, the present invention is a method for labeling fish by dyeing hard tissues of fish using these labeling agents. Specifically, the fertilized egg or the hatched larvae hard tissue is stained by immersing the fertilized egg of the target fish for about 24 hours in a labeling solution prepared by dissolving these labeling agents in filtered seawater or the like. It is preferable to adopt a labeling method. When a labeling agent comprising a cochineal dye or a drug containing this as an active ingredient is used, the target fish is soaked in a labeling solution in which it is dissolved in filtered seawater for about 24 hours, and its hard tissue (especially otoliths). , Scales, thorns, lower skull, soft stripes, etc.) can also be used to label the fry. This method is particularly useful for the fry of Oniochoze and tiger puffer fish when targeting otoliths, and is particularly useful for red sea bream, tiger jelly, flounder and trough fish when targeting hard tissues other than otoliths.

また、本発明は、シコン色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤である。さらに、本発明は、これらの標識剤を用いて魚体の硬組織を染色して魚類を標識する方法である。具体的には、これらの標識剤を濾過海水等に溶解して作った標識液に標識対象魚の受精卵を24時間程度浸漬することによって受精卵ないしそのふ化仔魚の硬組織を染色し、魚体を標識する方法を採ることが好ましい。また、シコン色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる標識剤を用いる場合、これを濾過海水等に溶解した標識液に標識対象の稚魚を24時間程度浸漬し、その硬組織(特に耳石や鱗)を染色することによって、稚魚を標識する方法を採ることもできる。この方法は、標識対象をマダイやオニオコゼの稚魚とするときは特に有用である。   In addition, the present invention is a fish labeling agent comprising a sicon pigment or a drug containing the same as an active ingredient. Furthermore, the present invention is a method for labeling fish by dyeing the hard tissue of fish using these labeling agents. Specifically, the fertilized egg or the hatched larvae hard tissue is stained by immersing the fertilized egg of the target fish for about 24 hours in a labeling solution prepared by dissolving these labeling agents in filtered seawater or the like. It is preferable to adopt a labeling method. In addition, when using a labeling agent comprising a sicon pigment or a drug containing this as an active ingredient, the target fry is immersed in a labeling solution in which it is dissolved in filtered seawater for about 24 hours, and its hard tissue (especially otolith or It is also possible to take a method of labeling fry by staining scales. This method is particularly useful when the target to be labeled is a red sea bream or a scallop.

本発明者らは、耳石等への蛍光標識は、使用される標識剤の化学構造により可能となっているものと推測し、ALCやARSが有するアントラキノン環構造に着目した。また、本発明で開発する標識剤は、食の安全の観点から食品又は食品添加物として公認されている素材を対象とすることとし、アントラキノン環を有する化学物質が含まれる食品又は食品添加物を対象として検索・検討した。その結果、着色料製剤であるコチニール色素と同ラック色素が有用であると推定するに至った。   The present inventors speculated that fluorescent labeling on otoliths and the like is possible due to the chemical structure of the labeling agent used, and focused on the anthraquinone ring structure possessed by ALC and ARS. In addition, the labeling agent developed in the present invention is intended for a material that is certified as a food or food additive from the viewpoint of food safety, and a food or food additive that contains a chemical substance having an anthraquinone ring. Searched and examined as targets. As a result, it has been estimated that the cochineal dye and the same rack dye, which are colorant preparations, are useful.

本発明者らは、上記の推定を試験によって確認した。すなわち、後記の試験例1に示すように、標識剤に適した素材を選出する目的で、食品添加物として公認されている市販色素29種類に漢方薬として市販されているシコン色素(化合物和名はシコニン)を加えた合計30種類の色素素材について、シコン色素以外の素材は2000mg/Lの濃度となるように濾過海水に溶解し、シコン色素は50mg/Lの濃度となるように濾過海水に溶解して、それぞれの溶液へマダイのふ化仔魚を24時間浸漬した後、耳石の染色状況を観察した。その結果、マダイのふ化仔魚が生き残って、かつ、耳石の蛍光染色が認められたのは、30種の色素素材の中ではコチニール色素とラック色素のみであった。また、シコン色素は、仔魚は死亡したが(おそらく標識液の濃度が濃すぎたものと考えられる。)、耳石には蛍光染色が認められたため、これも検討対象の素材に加えることにした。   The inventors confirmed the above estimation by testing. That is, as shown in Test Example 1 to be described later, for the purpose of selecting a material suitable for a labeling agent, there are 29 kinds of commercially available dyes that are recognized as food additives. For a total of 30 pigment materials including shikonin, materials other than the silicone pigment are dissolved in filtered seawater to a concentration of 2000 mg / L, and the silicone pigment is dissolved in filtered seawater to a concentration of 50 mg / L. Then, after immersing red sea bream hatchlings in each solution for 24 hours, the staining condition of otoliths was observed. As a result, the red sea bream hatchling larvae survived and the otolith fluorescent staining was recognized only in the cochineal pigment and the rack pigment among the 30 pigment materials. In addition, although the larvae died (perhaps the concentration of the labeling solution was probably too high), the sicon dye was added to the material under consideration because fluorescent staining was observed in the otoliths. .

すなわち、上記の予備試験によって、アントラキノン類のうちアントラキノン系色素として市販されている食品添加物「コチニール色素」と同「ラック色素」が魚類の標識剤として適していることが確認された。また、ナフトキノン類のうちナフトキノン系の色素であり、漢方薬として市販されている「シコン色素」も魚類の標識剤として有用であることが推定された。そこで、本発明者らは、コチニール色素とラック色素にシコン色素を加えた3種の素材について魚類の標識剤としての有用性をさらに試験・検討することにした。   That is, the above preliminary test confirmed that among the anthraquinones, food additives “cochineal dye” and “lac dye” commercially available as anthraquinone dyes are suitable as fish labeling agents. In addition, it was estimated that “sicon dye”, which is a naphthoquinone pigment among naphthoquinones and marketed as a Chinese medicine, is also useful as a fish labeling agent. Therefore, the present inventors decided to further test and examine the usefulness as a fish labeling agent for three materials obtained by adding a chicone pigment to a cochineal pigment and a rack pigment.

コチニール色素は、アントラキノン系の色素に属し、カイガラムシ科エンジムシの乾燥体から抽出された食品添加物(着色料)であり、カルミン酸を主成分とする。コチニール色素は、国連食糧農業機関(FAO)と世界保健機関(WHO)の合同で食品規格計画を策定する委員会において食品として安全であると認められていて、日本では蒲鉾、菓子、麺類、漬物等に使用されている。   Cochineal pigments belong to anthraquinone pigments and are food additives (coloring agents) extracted from the dried body of scale insects, which are mainly composed of carminic acid. Cochineal pigments are recognized as food safe by a committee that formulates a food standard plan jointly formed by the United Nations Food and Agriculture Organization (FAO) and the World Health Organization (WHO). Etc. are used.

ラック色素は、アントラキノン系の色素に属し、カイガラムシ科ラックカイガラムシが分泌する樹脂状物質から抽出された食品添加物(着色料)であり、ラッカイン酸を主成分とする。日本では蒲鉾、菓子、麺類等に使用されている。   A rack pigment belongs to an anthraquinone-based pigment, and is a food additive (colorant) extracted from a resinous substance secreted by a scale insect, the scale insect, and mainly contains laccaic acid. In Japan, it is used for rice cakes, confectionery, noodles, etc.

シコン色素は、植物「ムラサキ」の根(シコン)から抽出されるナフトキノン系の色素で、漢方薬として市販されている。その主成分はシコニン、アセチルシコニン、イソブチルシコニン等である。なお、シコニンは、天然には微量しか存在せず、ほとんどはアセチルシコニン、イソブチルシコニン等のエステル化合物として存在する。シコン色素は、古くから高貴な色として知られている紫色の織物の染料として使用されているほか、抗炎症作用、抗腫瘍活性を有し、漢方薬として解熱・解毒、ニキビ治療、やけど治療等の目的で使用されている。また、口紅の色素としても利用されている。なお、本発明におけるシコン色素には、バイオテクノロジーにより培養細胞に作らせて精製したものを含む。   Sikon pigment is a naphthoquinone pigment extracted from the root of the plant "Murasaki" and is commercially available as a Chinese medicine. Its main components are shikonin, acetylshikonin, isobutylshikonin and the like. Shikonin is naturally present in a very small amount, and most of it exists as an ester compound such as acetylshikonin and isobutylshikonin. In addition to being used as a dye for purple fabrics that have long been known as a noble color, sicon pigments have anti-inflammatory and antitumor activities, and are used as herbal medicines for antipyretic / detoxification, acne treatment, burn treatment, etc. Used for purposes. It is also used as a lipstick pigment. In addition, the sycon pigment | dye in this invention contains what was made to make the cultured cell by biotechnology and refine | purified.

本発明に係る魚類の標識剤としては、コチニール色素、ラック色素、シコン色素のみならず、これらを有効成分とする薬剤も有用である。これら各色素を有効成分とする薬剤としては色素製剤や試薬製剤等がある。例えば、コチニール色素は、メーカーそれぞれの商品名で色素製剤が市販されている他、試薬製剤が「コチニール」又は「コチニール色素」の商品名で市販されている。ラック色素、シコン色素についても同様であり、それぞれ、色素製剤の他に試薬製剤が市販されている。   As the fish labeling agent according to the present invention, not only cochineal pigments, lac pigments and sicon pigments but also agents containing these as active ingredients are useful. Examples of drugs containing these dyes as active ingredients include dye preparations and reagent preparations. For example, as for the cochineal dye, a dye preparation is commercially available under the trade name of each manufacturer, and a reagent preparation is commercially available under the trade name of “Cochineal” or “Cochineal dye”. The same applies to rack dyes and silicon dyes, and reagent preparations are commercially available in addition to dye preparations.

一般に体内標識法において、魚体の硬組織中、蛍光顕微鏡で観察し、蛍光染色の有無を確認するのに最も適している部位は耳石であるため、従来から魚類の体内標識では耳石染色法が広く用いられている。耳石は聴砂ともいい、魚体の内耳の前庭にある粒状の石灰質で、魚が平衡感覚を維持する役割をしている。受精卵でも、胚体に耳胞が形成されるとまもなく耳石が出現する。しかし、本発明に係る魚類の標識方法において、特にコチニール色素溶液を用いて稚魚を標識する場合は、蛍光染色する部位は耳石に限るものではなく、耳石以外の硬組織、例えば、棘(特に背鰭第2棘)や鰓(特に下鰓蓋骨)、鱗、軟条等についても容易に染色でき、蛍光顕微鏡によって蛍光の状況を確認できる。   In general, the otolith is the most suitable site for labeling fish, because the most suitable site for observing the presence or absence of fluorescent staining in a hard tissue of a fish is the otolith. Is widely used. Otoliths, also known as auditory sand, are granular calcareous materials in the vestibule of the inner ear of the fish body that serve to maintain a sense of balance. Even in fertilized eggs, otoliths appear soon after the formation of otocysts in the embryo. However, in the method for labeling fish according to the present invention, particularly when a fry fish is labeled using a cochineal dye solution, the fluorescent staining site is not limited to the otolith, but a hard tissue other than the otolith, such as a spine ( In particular, dorsal fin second spine, heels (especially the lower skull), scales, soft stripes, etc. can be easily stained, and the fluorescence status can be confirmed by a fluorescence microscope.

本発明では、標識剤を魚体に注射する方法を採ることもできる。例えば、全長68mmのオニオコゼ1尾に対して20mgのコチニール色素を溶解した0.1mLの生理食塩水を注射することによって、耳石標識が可能であることが確認されている。すなわち、標識剤を生理食塩水等に溶解させた標識液を、標識対象魚の腹腔内に0.1mL/尾の割合で注射する。注射前に0.03%の2−フェノキシエタノールを溶解した砂濾過海水に魚類を浸漬して麻酔を行なうとよい。注射は、実体顕微鏡下で行ない、ピンセットで魚の右胸鰭を固定した後、注射器を用いて右胸鰭基部から腹腔内に標識液を注入する。標識液を注入した魚の耳石を蛍光顕微鏡で観察すると、浸漬法の場合と同様、蛍光を発しているので標識を付した魚類であることを確認できる。   In the present invention, a method of injecting the labeling agent into the fish body can also be adopted. For example, it has been confirmed that otolith labeling is possible by injecting 0.1 mL of physiological saline in which 20 mg of cochineal dye is dissolved into one onioze with a total length of 68 mm. That is, a labeling solution in which a labeling agent is dissolved in physiological saline or the like is injected into the peritoneal cavity of the fish to be labeled at a rate of 0.1 mL / tail. Anesthesia may be performed by immersing fish in sand-filtered seawater in which 0.03% 2-phenoxyethanol is dissolved before injection. The injection is performed under a stereomicroscope, and after fixing the right thoracic fin of the fish with tweezers, the labeling solution is injected into the abdominal cavity from the base of the right pleural cavity using a syringe. When the otolith of the fish injected with the labeling solution is observed with a fluorescence microscope, it can be confirmed that it is a fish with a label because it emits fluorescence, as in the case of the immersion method.

本発明における受精卵の耳石標識においては、使用する標識剤と標識対象魚の種類によって標識液の所要濃度が異なる。すなわち、後記の試験例2〜4に示すとおり、標識剤としてコチニール色素又はこれを主成分とする薬剤を用いる場合において、コチニール色素の濃度を、マダイ受精卵では2000〜8000mg/L、オニオコゼ受精卵では2000〜16000mg/L、ヒラメ受精卵では4000〜16000mg/Lとするのが効果的である。したがって、コチニール色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる標識剤を用いる場合は、コチニール色素の濃度を「4000〜8000mg/L」に調整して用いれば、受精卵一般について広く使用できる。   In the otolith labeling of fertilized eggs in the present invention, the required concentration of the labeling solution varies depending on the labeling agent used and the type of fish to be labeled. That is, as shown in Test Examples 2 to 4 below, in the case where a cochineal dye or a drug containing this as a main component is used as a labeling agent, the concentration of the cochineal dye is 2000 to 8000 mg / L for a red sea bream fertilized egg. Is effective for 2000-16000 mg / L and for flounder fertilized eggs, 4000-16000 mg / L. Therefore, in the case of using a labeling agent comprising a cochineal dye or a drug containing this as an active ingredient, it can be widely used for fertilized eggs in general if the concentration of the cochineal dye is adjusted to “4000 to 8000 mg / L”.

また、標識剤としてラック色素又はこれを有効成分とする薬剤を用いる場合には、ラック色素の濃度を、マダイ受精卵では1000〜4000mg/L、オニオコゼ受精卵では1000〜16000mg/L、ヒラメ受精卵では4000mg/L程度とするのが効果的である。したがって、ラック色素溶又はこれを有効成分とする薬剤からなる標識剤を用いる場合は、ラック色素の濃度を「4000mg/L」程度に調整して用いれば、受精卵一般について広く使用できる。なお、本発明において、「4000mg/L程度」とは、4000mg/Lを中心に魚類の標識液として通常許容される範囲の濃度、例えば、3900〜4100mg/Lの濃度をいう。   In addition, when a rack dye or a drug containing this as an active ingredient is used as a labeling agent, the concentration of the rack dye is 1000 to 4000 mg / L for a red sea bream fertilized egg, 1000 to 16000 mg / L for a fertilized onyokoze egg, and a flatfish fertilized egg. Then, it is effective to set it to about 4000 mg / L. Therefore, when a labeling agent comprising a lac dye solution or a drug containing this as an active ingredient is used, it can be widely used for fertilized eggs in general if the concentration of the lac dye is adjusted to about “4000 mg / L”. In the present invention, “about 4000 mg / L” refers to a concentration in a range generally accepted as a fish labeling solution, mainly 4000 mg / L, for example, a concentration of 3900 to 4100 mg / L.

また、標識剤としてシコン色素又はこれを有効成分とする薬剤を用いる場合には、シコン色素の濃度を、マダイ受精卵では0.1〜0.2mg/L、オニオコゼ受精卵では0.5〜2mg/L、ヒラメ受精卵では0.2mg/L程度とするのが効果的である。したがって、シコン色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる標識剤を用いる場合は、シコン色素の濃度を「0.2mg/L」程度に調整して用いれば、受精卵一般について広く使用できる。   In addition, when using a sicon dye or a drug containing this as an active ingredient as a labeling agent, the concentration of the sicon dye is 0.1 to 0.2 mg / L for red sea bream fertilized eggs and 0.5 to 2 mg for oniochoze fertilized eggs. For L / F, flounder fertilized eggs, it is effective to be about 0.2 mg / L. Therefore, when using a labeling agent comprising a sycon dye or a drug containing this as an active ingredient, it can be widely used for fertilized eggs in general if the concentration of the sicon dye is adjusted to about “0.2 mg / L”.

本発明における稚魚の硬組織の標識においては、使用する標識剤と標識対象魚の種類と標識部位によって標識液の所要濃度が異なる。すなわち、後記の試験例5・6に示すとおり、標識剤としてコチニール色素又はこれを主成分とする薬剤を用いる場合において、コチニール色素の濃度を、オニオコゼ稚魚の耳石標識では16000mg/L程度に、オニオコゼ稚魚の耳石以外の硬組織の標識では8000〜16000mg/Lに、トラフグ稚魚の耳石、棘、軟条の標識では8000〜16000mg/Lにするのが効果的である。なお、コチニール色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる標識剤を用いる場合、コチニール色素の濃度を「2000mg/L」程度に調整すると、マダイ、オニオコゼ、ヒラメ、トラフグなど稚魚一般について安全に使用できると共に、耳石以外の硬組織を十分に染色することができる。   In the labeling of the hard tissue of the fry in the present invention, the required concentration of the labeling solution varies depending on the labeling agent used, the type of the target fish to be labeled, and the labeling site. That is, as shown in Test Examples 5 and 6 below, in the case of using a cochineal dye or a drug containing this as a main component as a labeling agent, the concentration of the cochineal dye is about 16000 mg / L for the otolith labeling of Oniokoze fry, It is effective to set it to 8000 to 16000 mg / L for a hard tissue label other than the otolith of Oniokose fry, and to 8000 to 16000 mg / L for a label of otolith, thorn, and soft streak of tiger puffer fish. In addition, when using a labeling agent comprising a cochineal dye or a drug containing the same as an active ingredient, adjusting the concentration of the cochineal dye to about “2000 mg / L” can be safely used for fry in general such as red sea bream, oniokoze, flounder, and tiger pufferfish. At the same time, hard tissues other than otolith can be sufficiently stained.

また、本発明における稚魚の硬組織の標識において、シコン色素又はこれを主成分とする薬剤を用いると、濃度0.5mg/L程度でマダイ稚魚やオニオコゼ稚魚の耳石又は鱗もしくは背鰭棘を染色することができる。   Further, in the labeling of fry hard tissue in the present invention, when a sykon pigment or a drug containing this as a main component is used, otoliths, scales, or dorsal spines of red sea bream larvae or larvae larvae are stained at a concentration of about 0.5 mg / L. can do.

本発明に係る魚類の標識剤及びこれを用いる標識方法によれば、魚類の硬組織への標識効果を長期間にわたって持続できる。例えば、全長65mmのオニオコゼをコチニール色素の16000mg/L溶液に浸漬し、標識を施した後、新鮮海水へ戻して継続飼育したところ、6カ月を経過した後も、耳石、背鰭棘、下鰓蓋骨のどの部位についても蛍光染色が観察されている。   According to the fish labeling agent and the labeling method using the same according to the present invention, the labeling effect on the hard tissue of fish can be maintained for a long period of time. For example, after immersing an onyokoze with a total length of 65 mm in a 16000 mg / L solution of cochineal pigment, labeling it, and then continuing the breeding after returning to fresh seawater, after 6 months, otoliths, dorsal spines, lower armpits Fluorescent staining has been observed for every part of the skull.

本発明に係る魚類の標識剤及び標識方法の対象魚は、マダイ、オニオコゼ、ヒラメ、トラフグに限るものではなく、メバル、メダカ、キンギョなど多くの魚類について適用できることが確認されている。例えば、本発明に基づき、コチニール色素溶液を用いて稚魚の耳石を標識する場合、メバル、メダカ、キンギョでは、標識液の濃度を8000mg/L程度にすると染色効果が見られることが確認されている。   The target fish of the fish labeling agent and the labeling method according to the present invention is not limited to red sea bream, onyokoze, flounder, and tiger puffer, and it has been confirmed that it can be applied to many fishes such as rockfish, medaka, goldfish. For example, in the case of labeling fry otoliths using a cochineal dye solution based on the present invention, it has been confirmed that the staining effect is observed when the concentration of the labeling solution is about 8000 mg / L in the rockfish, medaka and goldfish. Yes.

本発明に係る標識剤について、最近の標準的な価格を調べたところ、ALCは約1000円/g、コチニール色素は約13円/g、ラック色素は約9円/g、シコン色素は約6000円/gで販売されていることが確認された(市販の色素製剤による)。受精卵を標識する場合、標識液の適正な濃度は、上記のとおり、コチニール色素は4000〜8000mg/L、ラック色素は4000mg/L程度、シコン色素は0.2mg/L程度である。よって、標識液1Lあたりの標識剤のコストは、コチニール色素は52〜104円、ラック色素は36円、シコン色素は約1円である。これをALCと比べると、受精卵を標識する場合のALCの適正濃度は5mg/L程度であるから、その1Lあたりの標識コストは5円である。よって、今回開発した標識剤のうちシコン色素の標識コストはALCよりも安価である。   A recent standard price of the labeling agent according to the present invention was examined. The ALC was about 1,000 yen / g, the cochineal dye was about 13 yen / g, the rack dye was about 9 yen / g, and the chicone dye was about 6000. It was confirmed that the product was sold in yen / g (by a commercially available pigment preparation). When a fertilized egg is labeled, the appropriate concentration of the labeling solution is 4000 to 8000 mg / L for the cochineal dye, about 4000 mg / L for the rack dye, and about 0.2 mg / L for the sicon dye as described above. Therefore, the cost of the labeling agent per liter of labeling solution is 52 to 104 yen for the cochineal dye, 36 yen for the rack dye, and about 1 yen for the chicone dye. When this is compared with ALC, since the appropriate concentration of ALC when labeling a fertilized egg is about 5 mg / L, the labeling cost per 1 L is 5 yen. Therefore, among the labeling agents developed this time, the labeling cost of the sicon dye is lower than that of ALC.

また、コチニール色素を用いてオニオコゼ稚魚の耳石を標識する場合、放流サイズを全長50mmと仮定し、海水1kLあたり3000尾を収容するとして、好ましい標識液の濃度はALC(1000円/g)では50mg/L、コチニール色素(13円/g)では16000mg/Lであるから、1尾あたりの標識剤のコストは、ALCでは17円、コチニール色素では69円となり、ALCの方が安いことになる。しかし、棘や鱗等を標識する場合には、コチニール色素は8分の1の濃度、すなわち2000mg/L程度の濃度で標識可能であるため、その標識コストは8.7円/尾と試算され、経費面でもALCよりも効果的である。   In addition, when labeling the otoliths of juvenile Oniokose using a cochineal pigment, assuming that the release size is 50 mm in total length and accommodating 3000 fish per 1 kl of seawater, the preferred concentration of the labeling solution is ALC (1000 yen / g) For 50 mg / L and cochineal dye (13 yen / g), the cost per label is 17 yen for ALC and 69 yen for cochineal dye, so ALC is cheaper. . However, when labeling spines, scales, etc., the cochineal dye can be labeled at 1/8 concentration, that is, at a concentration of about 2000 mg / L, so the labeling cost is estimated at 8.7 yen / tail. In terms of cost, it is more effective than ALC.

また、シコン色素を用いてマダイやオニオコゼの稚魚を標識する場合、好ましい標識液の濃度はALC(1000円/g)では50mg/Lであり、シコン色素(6000円/g)では0.5mg/Lであるから、標識液1Lあたりの標識剤のコストは、ALCでは50円、シコン色素では3円となり、シコン色素の使用は経費面でもALCよりも効果的である。   Moreover, when labeling red sea bream or scallop fry using a silicon pigment, the preferred concentration of the labeling solution is 50 mg / L for ALC (1000 yen / g), and 0.5 mg / L for the silicon pigment (6000 yen / g). Therefore, the cost of the labeling agent per liter of the labeling solution is 50 yen for ALC and 3 yen for the sicon dye, and the use of the sicon dye is more effective than ALC in terms of cost.

以下、試験例をもって本発明をさらに詳しく説明する。なお、供試魚は、試験例1〜4では、独立行政法人水産総合研究センター・伯方島栽培漁業センターにおいて養殖した親魚が自然産卵したオニオコゼの受精卵とマダイのふ化仔魚及び民間の養殖業者が養殖した親魚が自然産卵したマダイの受精卵とヒラメの受精卵を用いた。また、試験例5では、同水産総合研究センター・伯方島栽培漁業センターで2004年と2005年に生産したオニオコゼ仔稚魚、同2005年に生産したヒラメ稚魚、同屋島栽培漁業センターで2006年に生産したトラフグ仔稚魚及び民間の養殖業者が2005年に生産したマダイ稚魚を用いた。また、試験例6では、同水産総合研究センター・屋島栽培漁業センターで2006年に生産したマダイ稚魚と同伯方島栽培技術開発センターで2006年に生産したオニオコゼ稚魚を用いた。   Hereinafter, the present invention will be described in more detail with test examples. In addition, in Test Examples 1 to 4, the test fish were fertilized eggs of onyokoze that were naturally spawned by the parent fish cultivated at the Fisheries Research Center of Independent Administrative Institution, Hakatajima Cultivation Fishery Center, hatchling larvae of red sea bream and private aquaculture companies Red sea bream fertilized eggs and flounder fertilized eggs that were naturally laid by the cultured parent fish were used. In Test Example 5, Oniokose larvae produced in 2004 and 2005 at the Fisheries Research Center and Hakatajima Cultivation Fisheries Center, flounder fry produced in 2005, and produced in 2006 at the Doyajima Cultivation Fisheries Center Larvae and larvae produced in 2005 by a private farmer were used. In Test Example 6, red sea bream fry produced in 2006 at the Fisheries Research Center and Yajima Cultivation Fisheries Center and Oniokose fry produced in 2006 at the Hakuhojima Cultivation Technology Development Center were used.

また、以下の試験例では、いずれも市販されている色素製剤を用いた。すなわち、コチニール色素として「カルミンレッド MK-40」(商品名:キリヤ化学株式会社)を、ラック色素として「ラッカインレッド R」(商品名:キリヤ化学株式会社)を、また、シコン色素として「シコニン」(商品名:株式会社ぴのあ)を使用した。なお、本発明に係る標識剤の素材は、これらに限るものでないことは勿論である。本発明者らは、コチニール色素として「SRレッド K-R」(商品名:三栄源株式会社)、「コチニール色素」(商品名:和光純薬工業株式会社)、「コチニール」(商品名:関東化学株式会社)を、また、ラック色素として「SRレッド L」(商品名:三栄源株式会社)、「ラック色素」(商品名:和光純薬工業株式会社)を使用して、以下の試験例と同様の試験を行ない、以下の試験例とほぼ同様の結果が得られることを確認している。   In the following test examples, commercially available pigment preparations were used. That is, “Carmine Red MK-40” (trade name: Kiriya Chemical Co., Ltd.) as the cochineal pigment, “Luckine Red R” (trade name: Kiriya Chemical Co., Ltd.) as the rack pigment, and “Sikonin” as the silicone pigment. (Trade name: Pinoa Co., Ltd.). Of course, the material of the labeling agent according to the present invention is not limited to these. The present inventors have used “SR Red KR” (trade name: Saneigen Co., Ltd.), “Cochineal dye” (trade name: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), “Cochineal” (trade name: Kanto Chemical Co., Ltd.) as cochineal dyes. Company), and “SR Red L” (trade name: Saneigen Co., Ltd.) and “Rack Dye” (trade name: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) It was confirmed that almost the same results as in the following test examples were obtained.

また、以下の試験例では、試験の結果をまとめた表1〜表11において、「○」は供試魚が生残したか又は標識が施されたことを示し、「×」は供試魚が死亡したか又は標識が施されなかったことを示す。また、生残又は生残性の項の「△」は、供試した個体の一部が生き残ったことを示し、蛍光染色又は染色性の項の「△」は、蛍光が明瞭に見えるわけではないが、見えなわけでもないことを示す。なお、表中の「−」は、観察していないことを示す。   In the following test examples, in Tables 1 to 11 summarizing the test results, “◯” indicates that the test fish survived or was labeled, and “×” indicates that the test fish was Indicates death or no labeling. In addition, “△” in the term of survival or survival indicates that a part of the tested individuals survived, and “△” in the term of fluorescence staining or staining does not clearly show the fluorescence. No, but not visible. In addition, "-" in a table | surface shows not having observed.

なお、従来からALCを用いる場合、魚類を標識液へ浸漬する時間は通常「24時間」としているので、以下の各試験例でも、供試魚の標識液への浸漬時間を24時間として試験している。しかし、本発明に係る魚類の標識方法では、標識液へ魚類を浸漬する時間は24時間に限るものではなく、任意に設定して差し支えない。例えば、6〜12時間程度に短縮することも可能である。しかし、浸漬時間を短くすると標識液の濃度を濃くする必要があるため、標識剤を多量に使用することになり、その分だけ標識コストが高くなることは否めない。   In addition, when using ALC from the past, the time for immersing fish in the labeling solution is usually “24 hours”. Therefore, in each of the following test examples, the immersion time of the test fish in the labeling solution was tested for 24 hours. Yes. However, in the fish labeling method according to the present invention, the time for immersing the fish in the labeling solution is not limited to 24 hours, and may be arbitrarily set. For example, it can be shortened to about 6 to 12 hours. However, since it is necessary to increase the concentration of the labeling solution when the immersion time is shortened, a large amount of labeling agent is used, and it is undeniable that the labeling cost increases accordingly.

《試験例1》
<魚類の標識に適した素材を選定するための予備試験>
標識剤に適した素材を選出する目的で、食品添加物に指定されている市販色素29種類に漢方薬として市販されているシコン色素を加えた合計30種類の素材について、以下の試験を行なった。
(1)試験方法
供試素材のうち、シコン色素以外の素材については、それぞれ濃度2000mg/Lとなるように濾過海水に溶解し、標識液とした。また、シコン色素については、濃度50mg/Lとなるように濾過海水に溶解し、標識液とした。次いで、それぞれの標識液へマダイのふ化仔魚を24時間浸漬した後、耳石の染色状況を観察した。
(2)試験結果
試験結果は表1に示すとおりである。
(3)考察
マダイ仔魚が生き残って、耳石の蛍光染色が認められたのは、29種の色素素材のうちコチニール色素(カルミンレッド MK-40)とラック色素(ラッカインレッド R)のみであった。また、シコン色素(シコニン)は、マダイ仔魚は生残しなかったものの、耳石の蛍光染色が認められた。マダイ仔魚が死亡したのは、シコン色素の濃度が濃すぎたからであると推測される。よって、この試験によって、コチニール色素とラック色素は、標識剤として有用な素材であることが確認された。また、シコン色素は、標識剤として有用な素材であることが推認された。
<< Test Example 1 >>
<Preliminary test for selecting materials suitable for fish labeling>
For the purpose of selecting materials suitable for the labeling agent, the following tests were conducted on a total of 30 types of materials, including 29 types of commercially available dyes designated as food additives and silicon dyes marketed as traditional Chinese medicines.
(1) Test method Among the test materials, materials other than the sicon pigment were each dissolved in filtered seawater so as to have a concentration of 2000 mg / L, and used as a labeling solution. In addition, the sicon dye was dissolved in filtered seawater so as to have a concentration of 50 mg / L to obtain a labeling solution. Next, after immersing red sea bream hatchlings in each labeling solution for 24 hours, the staining state of otoliths was observed.
(2) Test results The test results are as shown in Table 1.
(3) Consideration The larval larvae survived and fluorescent staining of otoliths was observed only in Cochineal pigment (Carmine Red MK-40) and Lac pigment (Luckine Red R) among 29 pigment materials. It was. In addition, the sicon pigment (Shikonin) did not survive the red sea bream larvae, but fluorescent staining of otolith was observed. It is presumed that the larvae of the red sea bream died because the concentration of the cocoon pigment was too high. Therefore, this test confirmed that cochineal dyes and rack dyes are useful materials as labeling agents. It was also inferred that sicon dye is a useful material as a labeling agent.

《試験例2》
<マダイ受精卵を用いた3種の標識素材の実用化試験>
耳石標識剤としての有用性が認められたコチニール色素とラック色素に漢方薬として使用されているシコン色素を加えた3種の素材について、マダイ受精卵に対する標識の可能性と使用条件を実用規模で試験した。
(1)試験方法
上記3種の素材を表2に示す各濃度となるように濾過海水に溶解し、それぞれの溶液へ胚体に耳胞の形成が確認されたマダイ受精卵を24時間浸漬した。浸漬中にふ化して仔魚になったものを含め、所定浸漬時間経過後、受精卵又はふ化仔魚を採取し、蛍光顕微鏡下で耳石の蛍光の有無を観察した。
(2)試験結果
試験結果は表2に示すとおりである。
(3)考察
イ.コチニール色素溶液では、1000mg/L以上の濃度において耳石への蛍光が確認 された。いずれの濃度でも死亡は発生しなかった。最も蛍光が強いのは8000mg/ L濃度であった。
ロ.ラック色素溶液では、500〜4000mg/L濃度において耳石への蛍光が確認さ れたが、8000mg/L濃度では死亡が発生した。蛍光が強いのは2000〜400 0mg/L濃度であった。
ハ.シコン色素溶液では、0.4mg/L濃度以上において死亡が発生した。また、耳石 への強い蛍光が0.1mg/L濃度以上において確認された。
<< Test Example 2 >>
<Practical application test of three kinds of labeling materials using red sea bream fertilized eggs>
About the possibility of labeling of red sea bream fertilized eggs and the conditions of use of three kinds of materials, which are a combination of cochineal dyes and lac dyes that have been recognized as useful as otolith labeling agents, as well as Chinese dyes Tested.
(1) Test method The above-mentioned three kinds of materials were dissolved in filtered seawater so as to have the respective concentrations shown in Table 2, and red sea bream fertilized eggs in which formation of otocysts was confirmed in each solution were immersed for 24 hours. . Fertilized eggs or hatched larvae were collected after a predetermined immersion time, including those that became larvae by hatching during immersion, and the presence or absence of fluorescence of the otolith was observed under a fluorescence microscope.
(2) Test results The test results are as shown in Table 2.
(3) Discussion i. In the cochineal dye solution, fluorescence to the otolith was confirmed at a concentration of 1000 mg / L or more. No deaths occurred at any concentration. The highest fluorescence was at a concentration of 8000 mg / L.
B. In the rack dye solution, fluorescence to the otolith was observed at a concentration of 500 to 4000 mg / L, but death occurred at a concentration of 8000 mg / L. The fluorescence was strong at a concentration of 2000 to 400 mg / L.
C. In the silicon dye solution, death occurred at a concentration of 0.4 mg / L or more. In addition, strong fluorescence to the otolith was confirmed at a concentration of 0.1 mg / L or more.

(4)総合評価
以上の試験結果を総合すると、以下のとおりである。
イ.マダイ受精卵を、コチニール色素とラック色素をそれぞれ500〜8000mg/L 含む溶液に24時間浸漬した結果、コチニール色素で8000mg/L以下、ラック色 素で4000mg/L以下の濃度において、正常なふ化が認められた。耳石への蛍光は コチニール色素で2000mg/L以上、ラック色素で1000mg/L以上の濃度で 全ての供試個体について確認された。
ロ.シコン色素では、0.1〜10mg/L濃度の溶液に24時間浸漬した結果、0.1 〜0.3mg/Lの濃度で、全ての供試個体についてふ化が認められ、かつ、耳石への 蛍光も認められた。
(4) Comprehensive evaluation The above test results are summarized as follows.
I. As a result of immersing red sea bream fertilized eggs in a solution containing 500 to 8000 mg / L of cochineal pigment and lac pigment for 24 hours, normal hatching can be achieved at a concentration of 8000 mg / L or less for cochineal pigment and 4000 mg / L or less for rack pigment. Admitted. Fluorescence on otoliths was confirmed in all test individuals at a concentration of 2000 mg / L or more for the cochineal dye and 1000 mg / L or more for the rack dye.
B. With the sicon pigment, as a result of being immersed in a solution having a concentration of 0.1 to 10 mg / L for 24 hours, hatching was observed in all test individuals at a concentration of 0.1 to 0.3 mg / L. Fluorescence was also observed.

《試験例3》
<オニオコゼ受精卵を用いた3種の標識素材の実用化試験>
耳石標識剤としての有用性が認められたコチニール色素とラック色素に漢方薬として使用されているシコン色素を加えた3種の素材について、オニオコゼ受精卵に対する標識の可能性と使用条件を実用規模で試験した。
(1)試験方法
上記3種の素材を表3に示す各濃度となるように濾過海水に溶解し、それぞれの溶液へ胚体に耳胞の形成が確認されたオニオコゼ受精卵を24時間浸漬した。浸漬中にふ化して仔魚になったものを含め、所定浸漬時間経過後、受精卵又はふ化仔魚を採取し、蛍光顕微鏡下で耳石の蛍光の有無を観察した。
(2)試験結果
試験結果は表3に示すとおりである。
(3)考察
イ.コチニール色素溶液では、1000mg/L以上の濃度において耳石への蛍光が確認 された。いずれの濃度でも死亡は発生しなかった。蛍光が強いのは4000mg/L濃 度以上であった。
ロ.ラック色素溶液では500mg/L以上の濃度において耳石への蛍光が確認された。 いずれの濃度でも死亡は発生しなかった。蛍光が強いのは2000mg/L濃度以上で あった。
ハ.シコン色素溶液では、5mg/L以上の濃度では死亡したが、2mg/L濃度以下で は死亡が認められず、また、生残した全ての濃度で耳石への強い蛍光が確認された。
<< Test Example 3 >>
<Practical application test of three kinds of labeling materials using fertilized eggs
Regarding the use of three kinds of materials, which have been recognized as useful as otolith markers, cochineal dyes and lac dyes, plus sicon dyes used as traditional Chinese medicines, the possibility of labeling fertilized eggs of onyokoze on a practical scale Tested.
(1) Test method The above-mentioned three kinds of materials were dissolved in filtered seawater so as to have the respective concentrations shown in Table 3, and onyokoze fertilized eggs in which the formation of otocysts was confirmed in each solution were immersed for 24 hours. . Fertilized eggs or hatched larvae were collected after a predetermined immersion time, including those that became larvae by hatching during immersion, and the presence or absence of fluorescence of the otolith was observed under a fluorescence microscope.
(2) Test results The test results are as shown in Table 3.
(3) Discussion i. In the cochineal dye solution, fluorescence to the otolith was confirmed at a concentration of 1000 mg / L or more. No deaths occurred at any concentration. The intensity of fluorescence was 4000 mg / L or more.
B. In the rack dye solution, fluorescence to the otolith was confirmed at a concentration of 500 mg / L or more. No deaths occurred at any concentration. The strong fluorescence was 2000 mg / L or more.
C. In the silicone dye solution, death occurred at a concentration of 5 mg / L or more, but death was not observed at a concentration of 2 mg / L or less, and strong fluorescence to otoliths was confirmed at all remaining concentrations.

(4)総合評価
以上の試験結果を総合すると、以下のとおりである。
イ.オニオコゼ受精卵を、コチニール色素とラック色素をそれぞれ250〜16000m g/L含む溶液に24時間浸漬した結果、いずれの色素を用いた場合でも、16000 mg/L以下の濃度において、正常なふ化が認められた。耳石への蛍光はコチニール色 素で2000mg/L以上、ラック色素で1000mg/L以上の濃度で全ての供試個 体について確認された。
ロ.シコン色素では、0.1〜50mg/L濃度の溶液に24時間浸漬した結果、0.1 〜2mg/Lの範囲において全ての供試個体のふ化が認められ、また、耳石への蛍光も 全ての供試個体について確認された。
(4) Comprehensive evaluation The above test results are summarized as follows.
I. Onyokoze fertilized eggs were immersed in a solution containing 250 to 16000 mg / L of cochineal pigment and lac pigment for 24 hours. As a result, normal hatching was observed at a concentration of 16000 mg / L or less using any pigment. It was. Fluorescence on otoliths was confirmed for all test specimens at a concentration of 2000 mg / L or more for cochineal color and 1000 mg / L or more for lac dye.
B. In the case of the sicon dye, as a result of being immersed in a solution having a concentration of 0.1 to 50 mg / L for 24 hours, hatching of all test individuals was observed in the range of 0.1 to 2 mg / L, and fluorescence to the otolith was also observed. Confirmed for all specimens.

《試験例4》
<ヒラメ受精卵を用いた3種の標識素材の実用化試験>
耳石標識剤としての有用性が認められたコチニール色素とラック色素に漢方薬として使用されているシコン色素を加えた3種の素材について、ヒラメ受精卵に対する標識の可能性と使用条件を実用規模で試験した。
(1)試験方法
上記3種の素材を表4に示す各濃度となるように濾過海水に溶解し、それぞれの溶液へ胚体に耳胞の形成が確認されたヒラメ受精卵を24時間浸漬した。浸漬中にふ化して仔魚になったものを含め、所定浸漬時間経過後、受精卵又はふ化仔魚を採取し、蛍光顕微鏡下で耳石の蛍光の有無を観察した。
(2)試験結果
試験結果は表4に示すとおりである。
(3)考察
イ.コチニール色素溶液では、2000mg/L以上の濃度において耳石への蛍光が確認 された。いずれの濃度でも死亡は発生しなかった。蛍光が強いのは4000mg/L濃 度以上であった。
ロ.ラック色素溶液では、2000mg/L以上の濃度において耳石への蛍光が確認され た。4000mg/L以下の濃度では死亡が発生しなかった。蛍光が強いのは4000 mg/L濃度以上であった。
ハ.シコン色素溶液では、1mg/L濃度以上では死亡したが、0.5mg/L濃度以下 ではふ化が認められた。耳石への蛍光は0.1〜0.2mg/L濃度で確認された。ま た、強い蛍光は0.2mg/L濃度で確認された。
<< Test Example 4 >>
<Practical application test of three kinds of labeling materials using flounder fertilized eggs>
About the possibility of labeling of flounder fertilized eggs and the conditions of use on three scales of three kinds of materials that add the chicon pigment used as a Chinese medicine to the cochineal pigment and the rack pigment that have been recognized as useful as otolith markers Tested.
(1) Test method The above three kinds of materials were dissolved in filtered seawater so as to have respective concentrations shown in Table 4, and flounder fertilized eggs in which formation of otocysts was confirmed in the embryos were immersed in the respective solutions for 24 hours. . Fertilized eggs or hatched larvae were collected after a predetermined immersion time, including those that became larvae by hatching during immersion, and the presence or absence of fluorescence of the otolith was observed under a fluorescence microscope.
(2) Test results The test results are as shown in Table 4.
(3) Discussion i. In the cochineal dye solution, fluorescence to the otolith was confirmed at a concentration of 2000 mg / L or more. No deaths occurred at any concentration. The intensity of fluorescence was 4000 mg / L or more.
B. In the rack dye solution, the fluorescence to the otolith was confirmed at a concentration of 2000 mg / L or more. No death occurred at a concentration of 4000 mg / L or less. The fluorescence was strong at a concentration of 4000 mg / L or more.
C. With the sicon dye solution, death occurred at a concentration of 1 mg / L or more, but hatching was observed at a concentration of 0.5 mg / L or less. The fluorescence to the otolith was confirmed at a concentration of 0.1 to 0.2 mg / L. Strong fluorescence was confirmed at a concentration of 0.2 mg / L.

(4)総合評価
以上の試験結果を総合すると、以下のとおりである。
イ.ヒラメ受精卵を、コチニール色素とラック色素をそれぞれ500〜16000mg/ L含む溶液に24時間浸漬した結果、コチニール色素では16000mg/L以下、ラ ック色素はで4000mg/L以下の濃度において、正常なふ化が認められた。耳石へ の蛍光は、コチニール色素で4000mg/L以上、ラック色素でも4000mg/L 以上の濃度で確認された。
ロ.シコン色素では、0.1〜5mg/Lの溶液に24時間浸漬した結果、0.1〜0. 2mg/Lの濃度範囲で全ての供試個体のふ化生残が認められ、また、0.2mg/L で全ての供試個体について耳石への蛍光が認められた。
(4) Comprehensive evaluation The above test results are summarized as follows.
I. As a result of immersing the flounder fertilized eggs in a solution containing 500 to 16000 mg / L of cochineal pigment and lac pigment for 24 hours, the cochineal pigment is normal at a concentration of 16000 mg / L or less and the rack pigment is 4000 mg / L or less. Hatching was observed. The fluorescence to the otolith was confirmed at a concentration of 4000 mg / L or more for the cochineal dye and 4000 mg / L or more for the rack dye.
B. As for the sicon dye, it was immersed in a solution of 0.1 to 5 mg / L for 24 hours. In the concentration range of 2 mg / L, hatching survival of all test individuals was observed, and otolith fluorescence was observed for all test individuals at 0.2 mg / L.

《試験例5》
<コチニール色素を用いた各種稚魚の標識試験>
(1)試験方法
水槽に入れた海水に、コチニ−ル色素をそれぞれ2000、4000、8000、16000mg/Lの濃度となるように溶解し、全長14〜100mmのオニオコゼ、マダイ、ヒラメ、トラフグの各稚魚を10尾ずつ24時間浸漬した。水槽は、稚魚の大きさに合わせて容量1〜30Lのものを用いた。浸漬終了後、全ての供試魚を新鮮海水中に移し、その生残状況を確認した。また、一部の個体をサンプリングして耳石及び耳石以外の硬組織を採取し、蛍光顕微鏡下で耳石等への蛍光標識の有無(染色度)を観察し、稚魚の成長に伴う浸漬濃度と標識状況を調査した。さらに、一部の個体を継続飼育して、硬組織への標識の残存状況についても観察した。
(2)試験結果
試験結果は、表5・表6(耳石の染色性)、表7・表8(耳石以外の硬組織の染色性)及び表9(トラフグ稚魚の生残性と染色性)に示すとおりである。
(3)考察
イ.全長100mmサイズの稚魚では、オニオコゼは、いずれの濃度でも供試魚の生残が 確認された。また、いずれの魚種についても、16000mg/Lの濃度では耳石への 明瞭な蛍光染色が確認された。しかし、マダイとヒラメは、16000mg/L濃度で は生残しなかった(表5)。
ロ.全長100mm未満のオニオコゼでも、16000mg/Lの濃度で全ての供試魚が 生残し、かつ、耳石への蛍光標識が可能であることが確認された(表6)。
ハ.全長47mmのトラフグ稚魚では、いずれの濃度でも供試魚の生残が確認された。ま た、耳石への明瞭な蛍光は8000mg/L以上で確認された。4000mg/L以下 の濃度でも蛍光が見えないわけではなかった(表9)。
<< Test Example 5 >>
<Laboratory test of various fry using cochineal dye>
(1) Test method Cochineal pigments are dissolved in seawater in a water tank so as to have concentrations of 2000, 4000, 8000, and 16000 mg / L, respectively, and oniokoze, red sea bream, Japanese flounder, and trough fish with a total length of 14 to 100 mm. 10 fry were soaked for 24 hours. A water tank having a capacity of 1 to 30 L was used according to the size of the fry. After immersion, all test fish were moved into fresh seawater and their survival status was confirmed. In addition, some individuals are sampled and otoliths and hard tissues other than otoliths are collected, and the presence or absence (staining degree) of fluorescent labels on otoliths is observed under a fluorescence microscope, soaking with the growth of fry Concentration and labeling status were investigated. Furthermore, some individuals were continuously raised to observe the remaining state of the label on the hard tissue.
(2) Test results Test results are shown in Tables 5 and 6 (Otstone staining), Tables 7 and 8 (Hard tissue staining other than otoliths), and Table 9 (Survaf fry survival and staining). ).
(3) Discussion i. In the larvae of 100 mm in length, the onyokoze was confirmed to survive the test fish at any concentration. For all fish species, clear fluorescence staining of otoliths was confirmed at a concentration of 16000 mg / L. However, red sea bream and flounder did not survive at a concentration of 16000 mg / L (Table 5).
B. It was confirmed that even onionkoze with a total length of less than 100 mm survived all test fish at a concentration of 16000 mg / L, and that otoliths could be fluorescently labeled (Table 6).
C. In the trough puffer fish with a total length of 47 mm, the survival of the test fish was confirmed at any concentration. In addition, clear fluorescence to the otolith was confirmed at 8000 mg / L or more. Even at a concentration of 4000 mg / L or less, fluorescence was not invisible (Table 9).

ニ.耳石以外の硬組織の染色状況については、2000mg/Lの濃度において、オニオ コゼでは背鰭棘や下鰓蓋骨が(表7・表8)、ヒラメでは鱗等が(表7)、マダイでは 背鰭棘や鱗が(表7)、トラフグでは皮膚の棘や軟条が(表9)、それぞれ蛍光染色さ れることが確認された。2000mg/Lは、表5や表9に示すように、いずれの魚種 も安全に浸漬できる濃度であり、2000mg/L程度のコチニール色素を有効成分と する標識液に稚魚を浸漬する標識方法は、耳石をターゲットとしない場合には有用な標 識方法であると考えられる。 D. Regarding the staining of hard tissues other than otoliths, at the concentration of 2000 mg / L, the dorsal spine and the lower skull (Table 7 and Table 8) are observed in Oniokoze, scales (Table 7) in Japanese flounder, and in red sea bream. It was confirmed that dorsal spines and scales (Table 7) and skin thorns and soft stripes (Table 9) were stained with trough fish. As shown in Tables 5 and 9, 2000 mg / L is a concentration at which any fish species can be safely immersed, and the labeling method for immersing fry in a labeling solution containing about 2000 mg / L of cochineal pigment as an active ingredient is as follows. It is considered to be a useful labeling method when the target is not an otolith.

ホ.濃度16000mg/Lのコチニール色素溶液に24時間浸漬した全長65mmのオ ニオコゼを継続飼育したところ、6カ月が経過した後も、耳石、背鰭棘、下鰓蓋骨のい ずれからも蛍光が観察された。表5と表6に示すように、耳石の染色状況は標識液の濃 度によって異なる。しかしながら、耳石以外の硬組織である背鰭棘や下鰓蓋骨では、A LCより標識コストが安価となる濃度2000mg/Lの標識液に浸漬した場合にも、 表7や表8に示すように蛍光が観察されている。したがって、16000mg/Lの標 識液に浸漬したときのように6カ月経過した後も蛍光が残存することが予想される。後 記のように、ヒラメ、マダイでは2000mg/L濃度の標識液に浸漬した稚魚の7カ 月が経過した背鰭棘や鱗から蛍光標識が確認されており、オニオコゼでも同様と考えら れる。
ヘ.また、濃度4000mg/Lのコチニール色素溶液に浸漬した全長100mmのヒラ メ、マダイを継続飼育したところ、7カ月が経過した後も、鱗(ヒラメ、マダイ)、背 鰭棘(マダイ)、臀鰭軟条(ヒラメ)に蛍光が観察された。表7に示すように、200 0mg/Lの標識液に浸漬した後も、特に鱗では蛍光標識が観察されているので、この ことから、本発明の標識方法によれば、その蛍光標識は、ALCよりも標識コストが安 価となる濃度においても7カ月以上残存することが予想される。
ト.上記のとおり、蛍光標識が長期にわたって残存する面において、従来法であるALC 溶液に浸漬する標識方法よりも安価に標識が可能であるため、本発明におけるコチニー ル色素溶液に浸漬する方法の有用性が理解される。
E. After continuous breeding of a 65 mm long onyokoze soaked in a 16,000 mg / L cochineal dye solution for 24 hours, fluorescence was observed from any of the otolith, dorsal spine, and lower skull after 6 months. It was done. As shown in Tables 5 and 6, the staining condition of the otolith varies depending on the concentration of the labeling solution. However, as shown in Table 7 and Table 8, when the dorsal spine and the lower heel bone, which are hard tissues other than otoliths, are immersed in a labeling solution having a concentration of 2000 mg / L, the labeling cost is lower than that of ALC. Fluorescence is observed in Therefore, it is expected that the fluorescence will remain even after 6 months have passed, as when immersed in a 16000 mg / L labeling solution. As described later, in the Japanese flounder and red sea bream, fluorescent labeling has been confirmed from dorsal spines and scales after 7 months of larvae immersed in a labeling solution of 2000 mg / L.
F. Moreover, when flounder and red sea bream with a total length of 100 mm soaked in a 4000 mg / L cochineal pigment solution were continuously bred, scales (flatfish, red sea bream), dorsal spines (red sea bream), spider soft stripes even after 7 months had passed. Fluorescence was observed in (flounder). As shown in Table 7, since the fluorescent label is observed especially in the scale even after being immersed in the labeling solution of 2000 mg / L, according to the labeling method of the present invention, the fluorescent label is Even at a concentration at which the labeling cost is cheaper than ALC, it is expected to remain for 7 months or more.
G. As described above, since the fluorescent label can remain for a long period of time, it can be labeled at a lower cost than the conventional labeling method in which the fluorescent label is immersed in the ALC solution. Therefore, the usefulness of the method of immersing in the cochineal dye solution in the present invention is useful. Is understood.

《試験例6》
<シコン色素を用いたマダイ稚魚の標識試験>
(1)試験方法
水槽に入れた海水に、シコン色素を0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0及び10.0mg/Lの濃度となるようにそれぞれ溶解し、全長78mmのマダイ稚魚と全長14mmのオニオコゼ稚魚を10尾ずつ24時間浸漬した。水槽は、マダイには容量10Lのものを、オニオコゼには容量1Lのものを用いた。浸漬終了後、全ての供試魚を新鮮海水中に移し、生残状況を確認した。また、一部の個体をサンプリングして耳石及びその他の硬組織を採取し、蛍光顕微鏡下で耳石等への蛍光標識の有無(染色度)を観察した。
(2)試験結果
試験結果は、表10(マダイ稚魚の生残性と染色性)と表11(オニオコゼの生残性と染色性)に示すとおりである。
(3)考察
イ.どちらの稚魚も全ての個体の生残が0.5mg/L以下の濃度で認められ、1.0m g/Lでも一部 の個体が生残した。
ロ.マダイの耳石では、0.5〜1.0mg/Lの濃度で蛍光染色が確認された。その他 の硬組織でも0.5〜1.0mg/Lの濃度で鱗や背鰭棘で染色が確認されたが、0. 5mg/Lでは背鰭棘の染色状況は弱かった(表10)。
ハ.オニオコゼの耳石、同背鰭棘では、0.1〜1.0mg/Lの濃度で蛍光染色が確認 された(表11)。
ニ.この試験によって、シコン色素はマダイ稚魚やオニオコゼ稚魚の標識剤としても有用 であることが確認された。標識液の好ましい濃度は、マダイ稚魚では0.5mg/L、 オニオコゼ稚魚では0.1〜0.5mg/Lである。
<< Test Example 6 >>
<Labeling test of juvenile red sea bream using sicon pigment>
(1) Test method In the seawater put in the aquarium, the concentration of sicon pigment is 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 and 10.0 mg / L. Each of them was dissolved, and 10 red bream fish with a total length of 78 mm and 10 mm long fry fish were immersed for 24 hours. As the water tank, a red sea bream with a capacity of 10 L was used, and an onyokoze with a capacity of 1 L was used. After immersion, all test fish were moved into fresh seawater and the survival situation was confirmed. In addition, some individuals were sampled to collect otoliths and other hard tissues, and the presence or absence (staining degree) of fluorescent labels on otoliths and the like was observed under a fluorescence microscope.
(2) Test results The test results are as shown in Table 10 (survival and staining properties of red sea bream fry) and Table 11 (survival and staining properties of Oniokose).
(3) Discussion i. In both fry, all individuals survived at a concentration of 0.5 mg / L or less, and some individuals survived even at 1.0 mg / L.
B. In red sea bream otoliths, fluorescent staining was confirmed at a concentration of 0.5 to 1.0 mg / L. In other hard tissues, staining was confirmed with scales and dorsal spines at a concentration of 0.5 to 1.0 mg / L. At 5 mg / L, the dorsal spine staining was weak (Table 10).
C. Fluorescence staining was confirmed at a concentration of 0.1 to 1.0 mg / L in the otolith of scallops and spinal cords (Table 11).
D. Through this test, it was confirmed that Shikon pigment is also useful as a labeling agent for juvenile red sea bream and larvae. The preferred concentration of the labeling solution is 0.5 mg / L for red sea bream larvae and 0.1 to 0.5 mg / L for Oniokose larvae.

以上詳しく説明したとおり、本発明は、人体に対する安全性が確認されている新規な魚類の標識剤を提供する。また本発明は、その標識剤を用いて魚類を安全に標識する方法を提供する。さらに本発明は、人体に対する安全性が確認されていると共に安価な標識剤とその標識剤を用いて大量の魚類を安全かつ安価に標識する方法を提供するものである。このように本発明は、栽培漁業技術の向上にすこぶる貢献する発明である。

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As described above in detail, the present invention provides a novel fish labeling agent that has been confirmed to be safe for the human body. The present invention also provides a method for safely labeling fish using the labeling agent. Furthermore, the present invention provides an inexpensive labeling agent that has been confirmed to be safe for the human body and a method for safely labeling a large amount of fish using the labeling agent. Thus, the present invention is an invention that greatly contributes to the improvement of cultivated fishery technology.

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Claims (11)

コチニール色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤。   A fish labeling agent comprising a cochineal dye or a drug containing the same as an active ingredient. ラック色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤。   A fish labeling agent comprising a lac dye or a drug containing the same as an active ingredient. シコン色素又はこれを有効成分とする薬剤からなる魚類の標識剤。   A fish labeling agent comprising a sicon dye or a drug containing the same as an active ingredient. 請求項1から3のいずれかに記載の標識剤を溶解した標識液に標識対象魚の受精卵を浸漬し、受精卵ないしそのふ化仔魚の硬組織を染色することによって魚類を標識する方法。   A method for labeling fish by immersing a fertilized egg of a fish to be labeled in a labeling solution in which the labeling agent according to any one of claims 1 to 3 is dissolved, and staining the hard tissue of the fertilized egg or its hatched larvae. 請求項4に記載の標識方法において、標識液の濃度を、請求項1に記載する標識剤を用いる場合には4000〜8000mg/Lとし、請求項2に記載する標識剤を用いる場合には4000mg/L程度とし、請求項3に記載する標識剤を用いる場合には0.2mg/L程度とし、浸漬時間はそれぞれ24時間程度として魚類を標識する方法。   In the labeling method according to claim 4, the concentration of the labeling solution is 4000 to 8000 mg / L when the labeling agent according to claim 1 is used, and 4000 mg when the labeling agent according to claim 2 is used. When the labeling agent according to claim 3 is used, the amount is set to about 0.2 mg / L, and the immersion time is set to about 24 hours, respectively. 請求項4又は5に記載の標識方法において、標識対象魚をマダイ、オニオコゼ又はヒラメのいずれかとする魚類の標識方法。   6. The labeling method according to claim 4 or 5, wherein the fish to be labeled is any one of red sea bream, oniokoze or flounder. 請求項1又は3に記載の標識剤を溶解した標識液に標識対象魚の稚魚を浸漬し、その硬組織を染色することによって魚類を標識する方法。   A method for labeling fish by immersing a fry of a target fish in a labeling solution in which the labeling agent according to claim 1 or 3 is dissolved, and staining the hard tissue. 請求項7に記載の標識方法において、標識対象魚をオニオコゼ又はトラフグとし、コチニール色素を16000mg/L程度の濃度に溶解した標識液を用いて、稚魚の硬組織のうち耳石を染色することによってオニオコゼ又はトラフグの稚魚を標識する方法。   The labeling method according to claim 7, wherein the fish to be labeled is onyokoze or tiger puffer, and the otolith is stained in the hard tissue of the fry using a labeling solution in which the cochineal dye is dissolved at a concentration of about 16000 mg / L. A method of labeling fry of oniokose or tiger puffer fish. 請求項7に記載の標識方法において、コチニール色素を2000mg/L程度の濃度に溶解した標識液を用いて、稚魚の硬組織のうち棘、鱗、下鰓蓋骨又は軟条のいずれかを染色することによって魚類を標識する方法。   8. The labeling method according to claim 7, wherein any one of spines, scales, lower skull bones, or soft stripes in the hard tissue of the fry is stained using a labeling solution in which a cochineal dye is dissolved at a concentration of about 2000 mg / L. How to mark fish by. 請求項9に記載の標識方法において、標識対象魚をマダイ、オニオコゼ、ヒラメ又はトラフグのいずれかの稚魚とする魚類の標識方法。   The labeling method according to claim 9, wherein the fish to be labeled is a fry of any one of red sea bream, oniokoze, flounder, or trough puffer fish. 請求項7に記載の標識方法において、標識対象魚をマダイ又はオニオコゼとし、シコン色素を0.5mg/L程度の濃度に溶解した標識液を用いて、稚魚の硬組織のうち耳石又は鱗を染色することによってマダイ又はオニオコゼの稚魚を標識する方法。













The labeling method according to claim 7, wherein the target fish is red sea bream or onyokoze, and a labeling solution in which a sykon pigment is dissolved at a concentration of about 0.5 mg / L is used to remove otoliths or scales from the hard tissue of the fry. A method for labeling red sea bream or oniokoze fry by dyeing.













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