JP2007147509A - Capillary electrophoresis apparatus - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、キャピラリ電気泳動装置に関し、特に、キャピラリの詰まりを検出する技術に関する。 The present invention relates to a capillary electrophoresis apparatus, and more particularly to a technique for detecting clogging of a capillary.
キャピラリ電気泳動装置は、従来から用いられてきた平板型電気泳動装置に比べて熱放散性が高く、高い電圧を印加することができるため、高速で電気泳動を行うことができる利点を有する。したがって、キャピラリ電気泳動装置はDNAやタンパクの解析をはじめ様々な分離分析測定に利用されている。 Capillary electrophoresis devices have the advantage of being able to perform electrophoresis at high speed because they have higher heat dissipation and can apply a higher voltage than conventional plate electrophoresis devices. Therefore, capillary electrophoresis apparatuses are used for various separation analysis measurements including DNA and protein analysis.
近年用いられているキャピラリ電気泳動装置の多くは、分離媒体であるポリマーの詰め替えを自動で行える機構を有している。米国アプライドバイオシステムズ社より、プリズム310、3100、3730(商品名)として販売されているDNAシーケンサでは、シリンジやポンプを用いてキャピラリへのポリマー充填を自動的に行う。
キャピラリ電気泳動装置では、試料及び分析の目的によって、キャピラリの長さや径などを変える必要があり、キャピラリを交換する。外したキャピラリは、通常、再使用するために、保存する。キャピラリ内には、ポリマーが充填されているが、それが乾燥し固化すると、再使用することできなくなる。そこで、キャピラリの両端が水やバッファなどの液体に浸かるように、容器に入れておく必要がある。 In a capillary electrophoresis apparatus, it is necessary to change the length and diameter of the capillary depending on the sample and the purpose of analysis, and the capillary is replaced. The removed capillaries are usually stored for reuse. The capillary is filled with polymer, but once it is dried and solidified, it cannot be reused. Therefore, it is necessary to put both ends of the capillary in a container so that they are immersed in a liquid such as water or a buffer.
しかしながら、キャピラリの保存状態が悪く、又は、管理が不十分であると、キャピラリの先端が乾燥し、キャピラリに詰まりが発生することがある。 However, if the storage state of the capillary is poor or if the management is insufficient, the tip of the capillary may dry out and the capillary may become clogged.
キャピラリの外観からは、詰まりを発見することはできない。詰まりがあるキャピラリを使用すると、測定のやり直しを行わなければならず、時間と試料の無駄使いとなる。特に、試料が微量しかなく、貴重である場合、試料を無駄遣いすることによる損害は極めて大きい。 The clogging cannot be found from the appearance of the capillaries. If a capillary with clogging is used, the measurement must be repeated and time and sample are wasted. In particular, if the sample is very small and valuable, the damage caused by wasting the sample is extremely large.
本発明の目的は、キャピラリの詰まりを検出することによって測定のやり直しと試料の浪費を回避し、効率的に電気泳動を行うことにある。 An object of the present invention is to efficiently perform electrophoresis by avoiding re-measurement and waste of a sample by detecting clogging of a capillary.
本発明は、キャピラリに分離媒体を充填して電気泳動を行うキャピラリ電気泳動装置において、キャピラリに分離媒体を充填するのに要する時間を計測する計測部と、キャピラリに詰まりがあるか否かを判定する判定部とを有することに関する。 The present invention relates to a capillary electrophoresis apparatus for performing electrophoresis by filling a capillary with a separation medium, a measuring unit for measuring the time required for filling the capillary with the separation medium, and determining whether the capillary is clogged. And having a determination unit.
本発明は、キャピラリに試料を注入する前にキャピラリアレイの詰まりを通常の測定操作の中で検知することが可能となる。 According to the present invention, the clogging of the capillary array can be detected in a normal measurement operation before the sample is injected into the capillary.
図1は本発明によるキャピラリ電気泳動装置の構成の一例を示す。本例のキャピラリ電気泳動装置は、ポンプユニット10、オートサンプラユニット20、照射・検出ユニット30、高圧電源ユニット40、及び、恒温槽ユニット50、を有することに関する。
FIG. 1 shows an example of the configuration of a capillary electrophoresis apparatus according to the present invention. The capillary electrophoresis apparatus of this example relates to having a
ポンプユニット10は、シリンジ101、ポリマーブロック102、逆止弁104、側流路切替弁106、ポリマーボトル108、及び、バッファ容器109を有し、キャピラリにポリマーなどの分離媒体を充填する。バッファ容器109には陽極側電極402が設けられている。ポンプユニットの動作は、後に詳細に説明する。
The
キャピラリアレイ110の先端のキャピラリヘッド112に装着されたチューブ111は、ポリマーブロック102に接続され、キャピラリアレイ110の下端にはキャピラリサンプル導入端側電極401が設けられている。
A
オートサンプラユニット20は、サンプルを分注したサンプル容器201、溶解した電解質を含むバッファ液を収容するバッファリザーバ202、又は、キャピラリ先端を洗浄する洗浄水を入れた容器や廃液を入れた容器をキャピラリサンプル導入端204に搬送し、又は、そこから搬出するオートサンプラ203を有する。
The
照射・検出ユニット30は、励起光302をキャピラリ検出部301に照射するレーザやLEDなどの光源と、キャピラリ検出部301からの蛍光を検出する信号検出機構303を有する。高圧電源ユニット40は、キャピラリサンプル導入端側電極401と陽極側電極402の間に高電圧を印加する高圧電源403を有する。恒温槽ユニット50はキャピラリアレイ110を収容する恒温槽501を有する。
The irradiation /
図2は本発明によるキャピラリ電気泳動装置の制御部の構成を示す。本例の制御部600は、キャピラリに分離媒体を充填するのに要する時間を計測する計測部601と、キャピラリに詰まりがあるか否かを判定する判定部602と、警告を発する警告発生部603と、測定を中止させる中止部604と、実験条件及びアプリケーション毎に設定された規定時間を有するテーブル605と、を有する。判定部602は、計測部601によって計測された充填時間がテーブル605に登録された規定時間を超えたとき詰まりがあると判定し、警告発声部603、又は、警告発声部603及び中止部604に命令信号を出力する。警告発生部603は、判定部からの命令信号により警告を発する。中止部604は、判定部からの命令信号により測定を中止する。
FIG. 2 shows the configuration of the controller of the capillary electrophoresis apparatus according to the present invention. The
図3を参照して、本発明によるキャピラリ電気泳動装置の動作を説明する。ステップS201にて、オートサンプラ203によって廃液容器をキャピラリサンプル導入端204に運搬する。この廃液容器には、キャピラリより押し出された廃分離媒体を溶解するための水が収容されている。ステップS202にて、シリンジ101を操作し、使用済の分離媒体を廃液容器に押し出し、キャピラリに新しい分離媒体を注入する。
The operation of the capillary electrophoresis apparatus according to the present invention will be described with reference to FIG. In
ステップS203にて、オートサンプラ203によって洗浄水容器をキャピラリサンプル導入端204に運搬し、キャピラリサンプル導入端204を洗浄する。ステップS204にて、バッファ容器をキャピラリサンプル導入端204に運搬する。ステップS205にて、サンプルを注入せずにキャピラリに電圧を印加して、予備泳動を行う。
In step S203, the
ステップS206にて、オートサンプラ203によって洗浄水容器をキャピラリサンプル導入端204に運搬し、キャピラリサンプル導入端204を洗浄する。ステップS207にて、オートサンプラ203によってサンプル容器をキャピラリサンプル導入端204に運搬し、キャピラリサンプル導入端204をサンプル容器内のサンプル溶液に浸す。
In step S206, the washing water container is transported to the capillary
ステップS208にて、キャピラリに電圧を印加して、サンプルを電気力学的にキャピラリ内に注入する。ステップS209にて、オートサンプラ203によって洗浄水容器をキャピラリサンプル導入端204に運搬し、キャピラリサンプル導入端204を洗浄する。ステップS210にて、バッファ容器をオートサンプラ203によりキャピラリサンプル導入端204に運搬する。ステップS211にて、泳動電圧をキャピラリに印加して、電気泳動を行う。
In step S208, a voltage is applied to the capillary to inject the sample into the capillary electrodynamically. In step S209, the washing water container is transported to the capillary
図4〜図6を参照して、ポンプユニットの動作を詳細に説明する。ポンプユニットは、内部に細管103が形成されたポリマーブロック102を有する。ポリマーブロック102の上端にはシリンジ101が接続されている。ポリマーブロック102の下端には管105、107が接続されている。管105は逆止弁104を有し、下端がポリマーボトル108に挿入されている。管107は、流路切替弁106を有し、下端がバッファ容器109に挿入されている。ポリマーブロック102の側端には、チューブ111が接続され、チューブ111にはキャピラリヘッド112が接続されている。シリンジ101、管105、107及びチューブ111は、ポリマーブロック102の細管103に接続されている。
The operation of the pump unit will be described in detail with reference to FIGS. The pump unit has a
本例では、ポリマーをキャピラリに充填するためにポリマーを吸引・吐出する手段としてシリンジ101を用いているが、ポンプなどの他のポリマー吸引・吐出手段を用いてもよい。また、流路切替弁106は、ピンバルブやロータリー型バルブなど、その形態は問わない。陽極の電極402がバッファ容器109内のバッファに浸っている。
In this example, the
図4は、流路切替弁106を閉じて、シリンジ101を吸引した状態を示す。ポリマーボトル109内のポリマーは、管105、逆止弁104及びポリマーブロック102内の細管103を経由してシリンジ101へ流れる。それによって、シリンジ101はポリマーによって充填される。
FIG. 4 shows a state where the flow
図5は、流路切替弁106を開けて、シリンジ101を押し出した状態を示す。シリンジ101内のポリマーは、ポリマーブロック102内の細管103及び流路切替弁106を経由してバッファ容器109へ流れる。ポリマーが、バッファ容器109へ流れることによって逆止弁104の吐出側が負圧になり、ポリマーボトル108内のポリマーが逆止弁104を経由してポリマーブロック102内の細管103に流れる。それによって、ポリマーブロック102内の細管103はポリマーによって充填され、気泡が除去される。
FIG. 5 shows a state where the flow
図6は、再び、流路切替弁106を閉じて、シリンジ101を押し出した状態を示す。シリンジ101内のポリマーは、ポリマーブロック102内の細管103を経由してチューブ111内に流れ、更に、キャピラリ内に流れる。流路切替弁106は閉じられているから、ポリマーがバッファ容器109に流れることはない。ポリマーが、キャピラリ内へ流れることによって逆止弁104の吐出側が負圧になり、ポリマーボトル108内のポリマーが逆止弁104を経由してポリマーブロック102内の細管103に流れる。
FIG. 6 shows a state where the flow
ポリマーが、キャピラリ内へ流れることによって、キャピラリ内の使用済ポリマーはキャピラリサンプル導入端より排出する。 As the polymer flows into the capillary, the used polymer in the capillary is discharged from the capillary sample introduction end.
本例では、シリンジ101側からポリマーブロック102内の細管103を加圧してキャピラリにポリマーを充填した。しかしながら、キャピラリにポリマーを充填する方法はこれに限定されるものではない。例えば、キャピラリのサンプル導入端204を新しいポリマーの入った容器を浸し、シリンジ101側からポリマーブロック102内の細管103を減圧することにより、キャピラリにポリマーを充填してもよい。
In this example, the
キャピラリの内径は、1mm以下であり、よく用いられるものは0.02mm〜0.2mm程度であり、非常に細い。このため、キャピラリに詰まりが発生すると、それを除去することは非常に困難である。ポリマーに配合されている物質の例として、DNA変性剤である尿素がある。尿素は、通常の状態ではポリマーに完全に溶解しているが、高濃度であるため、結晶化し易い。従って、尿素が結晶化すると、キャピラリの詰まりの原因となる。キャピラリの詰まりは、外観から見つけ出すことはできない。本発明によると、サンプルをキャピラリに注入する前に、一連の通常の測定操作の中で、キャピラリの詰まりの有無を判定する。 The inner diameter of the capillary is 1 mm or less, and those that are often used are about 0.02 mm to 0.2 mm, and are very thin. For this reason, when clogging occurs in the capillary, it is very difficult to remove it. An example of a substance blended in the polymer is urea, which is a DNA denaturing agent. Urea is completely dissolved in the polymer under normal conditions, but is easily crystallized because of its high concentration. Therefore, when urea crystallizes, it causes clogging of the capillary. Capillary clogging cannot be found from the appearance. According to the present invention, before the sample is injected into the capillary, the presence or absence of clogging of the capillary is determined in a series of normal measurement operations.
本発明によるキャピラリの詰まりの検出方法の原理を説明する。キャピラリアレイに充填されるポリマーの量は、ポリマーの種類、キャピラリの本数、内径、長さ、材質、温度等の実験条件によって決まるが、これらの実験条件が同一であれば同一である。即ち、キャピラリアレイに充填されるポリマーの量は、実験条件及びアプリケーションによって一定の量に定められている。 The principle of the capillary clogging detection method according to the present invention will be described. The amount of polymer filled in the capillary array is determined by the experimental conditions such as the type of polymer, the number of capillaries, the inner diameter, the length, the material, and the temperature, but the same if these experimental conditions are the same. That is, the amount of polymer filled in the capillary array is determined to be a constant amount depending on the experimental conditions and application.
キャピラリアレイに詰まりが無ければ、ポリマーの充填時間は一定の範囲内に収まるはずである。しかしながら、キャピラリに詰まりがあると、ポリマーの充填時間は一定の範囲に収まらず、より長くかかる。たとえば、4本のキャピラリのうち1本に詰まりがある場合、3本のキャピラリに4本分のポリマーを充填させなければならない。従って、ポリマーの充填時間は本来より長くかかる。そこで、ポリマーの充填時間を計測し、それが一定の範囲に収まるか否かで詰まりの有無を判定する。 If the capillary array is not clogged, the polymer fill time should be within a certain range. However, if the capillary is clogged, the polymer filling time does not fall within a certain range and takes longer. For example, if one of four capillaries is clogged, three capillaries must be filled with four polymers. Therefore, the filling time of the polymer is longer than the original. Therefore, the filling time of the polymer is measured, and the presence or absence of clogging is determined based on whether or not it falls within a certain range.
図7を参照して、本発明によるキャピラリアレイに詰まりがあるか否かを判定をする処理を説明する。ステップS601にて、キャピラリへのポリマーの充填を開始し、規定量のポリマーを充填するのに要する時間を測定する。ステップS602にて、ポリマーの充填時間が、規定時間の範囲にあるか否かを判定する。この規定時間は、ポリマーの種類、キャピラリの本数、内径、長さ、材質、温度等の実験条件及びアプリケーションによって、予め設定する。ポリマーの充填時間が、規定時間の範囲にある場合には、ステップS603に進み、キャピラリアレイに詰まりがないと判定する。ステップS604にて、電気泳動測定を続行する。 With reference to FIG. 7, a process for determining whether or not the capillary array according to the present invention is clogged will be described. In step S601, filling of the capillary with the polymer is started, and the time required for filling the specified amount of polymer is measured. In step S602, it is determined whether or not the polymer filling time is within a specified time range. This specified time is set in advance according to the experimental conditions such as the type of polymer, the number of capillaries, the inner diameter, the length, the material, the temperature, and the application. If the filling time of the polymer is within the specified time range, the process proceeds to step S603, and it is determined that the capillary array is not clogged. In step S604, the electrophoresis measurement is continued.
ポリマーの充填時間が、規定時間の範囲にない場合には、ステップS605に進み、キャピラリアレイに詰まりがあると判定する。ステップS606にて、詰まりの警告を出し、必要に応じて電気泳動測定を中止する。 If the polymer filling time is not within the specified time range, the process proceeds to step S605, where it is determined that the capillary array is clogged. In step S606, a clogging warning is issued, and the electrophoresis measurement is stopped if necessary.
以上本発明の例を説明したが、本発明はこれらの例に限定されるものではなく特許請求の範囲に記載された発明の範囲にて様々な変更が可能であることは当業者に容易に理解されよう。 Although examples of the present invention have been described above, the present invention is not limited to these examples, and it is easily understood by those skilled in the art that various modifications can be made within the scope of the invention described in the claims. It will be understood.
10…ポンプユニット、20…オートサンプラユニット、30…照射・検出ユニット、40…高圧電源ユニット、50…恒温槽ユニット、101…シリンジ、102…ポリマーブロック、103…管、104…逆止弁、105…管、106…流路切替弁、107…管、108…ポリマーボトル、109…バッファ容器、110…キャピラリアレイ、111…チューブ、112…キャピラリヘッド、201…サンプル容器、202…バッファリザーバ、203…オートサンプラ、204…キャピラリサンプル導入端、301…キャピラリ検出部、302…励起光、303…信号検出機構、401…キャピラリサンプル導入端側電極、402…陽極側電極、403…高圧電源、501…恒温槽、601…計測部、602…判定部、603…警告発生部、604…中止部、605…テーブル 10 ... pump unit, 20 ... autosampler unit, 30 ... irradiation / detection unit, 40 ... high-voltage power supply unit, 50 ... constant temperature unit, 101 ... syringe, 102 ... polymer block, 103 ... pipe, 104 ... check valve, 105 ... pipe, 106 ... flow path switching valve, 107 ... pipe, 108 ... polymer bottle, 109 ... buffer container, 110 ... capillary array, 111 ... tube, 112 ... capillary head, 201 ... sample container, 202 ... buffer reservoir, 203 ... Autosampler, 204 ... capillary sample introduction end, 301 ... capillary detector, 302 ... excitation light, 303 ... signal detection mechanism, 401 ... capillary sample introduction end side electrode, 402 ... anode side electrode, 403 ... high voltage power supply, 501 ... constant temperature Tank, 601 ... Measurement unit, 602 ... Determination unit, 603 ... Warning generation unit, 604 ... Cancellation unit, 605 ... Table
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