JP2007127424A - Determination method of hyperlipemia or its onset risk, total cholesterol measuring method, and kit - Google Patents

Determination method of hyperlipemia or its onset risk, total cholesterol measuring method, and kit Download PDF

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貴 田中
Shuko Numata
修子 沼田
Yoichi Fujimura
洋一 藤村
Takao Tsuda
孝雄 津田
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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To measure total cholesterol which is a risk factor of arteriosclerosis or hyperlipemia by a sample collectable in a noninvasive/bloodless manner, and to determine hyperlipemia or its onset risk. <P>SOLUTION: This determination method of hyperlipemia or its onset risk is characterized by measuring sweat total cholesterol. As the sweat, a sample formed by collecting sweat accumulated on the skin surface by using liquid such as ethanol aqueous solution can be used. Gas chromatography is preferably used for measuring the total cholesterol. Since a sweat cholesterol value is correlated with a blood total cholesterol value, it can be used for determination of hyperlipemia or its onset risk. A kit simply executable by an individual is also provided. <P>COPYRIGHT: (C)2007,JPO&INPIT

Description

本発明は、皮膚表面から汗を採取し総コレステロールを測定することにより、動脈硬化や高脂血症に関する健康状態の判定、管理が可能な測定方法、および汗中に存在する総コレステロールの診断キットに関する。     The present invention relates to a measuring method capable of determining and managing a health condition related to arteriosclerosis and hyperlipidemia by collecting sweat from the skin surface and measuring total cholesterol, and a diagnostic kit for total cholesterol present in sweat About.

血液中の総コレステロール値は、動脈硬化、高脂血症の診断、予防マーカーとして非常に重要な指標として用いられており、医療現場では採血により採取したサンプルを検査室や検査会社において高額でしかも大型の機器を用いて求められる。また、このような測定の機会は重篤な患者を除けば、リスクの高い患者予備軍であっても気軽に測定を行うことは不可能であり、年に数回の健康診断において測定されるのみであり、確実な疾病予防には極めて不十分である。     The total cholesterol level in blood is used as a very important indicator as a marker for the diagnosis and prevention of arteriosclerosis and hyperlipidemia. In medical practice, samples collected by blood collection are expensive in laboratories and laboratories. Required using large equipment. In addition, except for serious patients, such measurement opportunities cannot be easily measured even by high-risk patient reserves, and are measured in health examinations several times a year. This is extremely insufficient for reliable disease prevention.

また近年、簡便に小型の装置を用いて指先から採取した血液中の総コレステロール値を測定できる機器が考案されているが(特許文献1)、未だ実用化はされておらず、さらには採血のため指を針で刺すことは苦痛を伴ううえに、感染症に罹患する危険がある。     In recent years, a device has been devised that can measure the total cholesterol level in blood collected from a fingertip using a simple and compact device (Patent Document 1), but has not yet been put to practical use. Therefore, piercing a finger with a needle is not only painful but also at risk of getting an infection.

血液以外の体液からコレステロールの測定が可能であれば患者は痛みを伴うこともなく非侵襲かつ非観血的に健康疾病マーカーの確認を気軽に行うことができる。これまで涙中にコレステロールが存在することは知られている(非特許文献1)が、汗中にコレステロールが存在するか否かは知られていなかった。
特開2001−343348号公報 アチーブメント オブ オフタルモロジー(Archievement of Ophtalmology) 1976年、第36巻、p.155-160
If cholesterol can be measured from body fluids other than blood, the patient can easily check the health disease marker non-invasively and non-invasively without pain. Until now, it has been known that cholesterol is present in tears (Non-patent Document 1), but it has not been known whether cholesterol is present in sweat.
JP 2001-343348 A Achievement of Ophtalmology 1976, 36, p.155-160

以上の従来技術の問題点に鑑み、総コレステロール値測定のための試料サンプリングは、非侵襲かつ非観血に行えるなど被験者の生理的負荷が少ないことが望ましい。また、日常的にサンプリングが行え、手軽に在宅で可能な総コレステロールのサンプリング法が望ましい。     In view of the above-described problems of the prior art, it is desirable that the sample sampling for measuring the total cholesterol value is less invasive and non-invasive, so that the subject's physiological load is small. In addition, a sampling method of total cholesterol that can be sampled on a daily basis and can be easily performed at home is desirable.

そこで、本発明は上記状況に鑑みて、被験者への負荷を軽減し、かつ簡便で手軽に実施することができる汗中に存在する総コレステロールを測定することによる高脂血症の判定方法および総コレステロール測定キットを提供することを目的とする。     Therefore, in view of the above situation, the present invention reduces the burden on the subject, and can be easily and easily performed. The method for determining hyperlipidemia by measuring total cholesterol present in sweat and total An object is to provide a cholesterol measurement kit.

上記課題を解決するため、鋭意検討の結果、本発明者らは汗中にコレステロールおよびコレステロールエステル類が出てくることを見出した。そこで、汗を採取し、その中の総コレステロール濃度を測定したところ、得られた測定値は血中総コレステロール値と相関しており、汗中の総コレステロール値が健康疾病マーカーとして簡易的に採取、測定可能であることを見出した。     As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have found that cholesterol and cholesterol esters appear in sweat. Therefore, when sweat was collected and the total cholesterol concentration in it was measured, the measured value obtained was correlated with the blood total cholesterol level, and the total cholesterol level in sweat was simply collected as a health disease marker. And found that it can be measured.

すなわち、本発明は以下のとおりである。
(1)汗中総コレステロールを測定することを特徴とする高脂血症またはその発症リスクの判定方法。
(2)汗が皮膚表面から液体を用いて採取されたものであることを特徴とする上記(1)記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。
(3)液体がアルコールの水溶液であることを特徴とする上記(2)記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。
(4)アルコールがエタノールであることを特徴とする上記(3)記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。
(5)液体が界面活性剤を含んだ水溶液であることを特徴とする上記(2)記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。
(6)汗が、洗浄後よく乾燥した皮膚に、所定の時間静置して蓄積されることにより採取された汗であることを特徴とする上記(1)から(5)のいずれか記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。
(7)皮膚が手指の皮膚であることを特徴とする上記(1)から(6)のいずれか記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。
(8)汗を含む液体をサンプルとし、これを酸処理後、ガスクロマトグラフィーを用いて総コレステロールの測定を行うことを特徴とする上記(1)から(7)のいずれか記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。
(9)ガスクロマトグラフィーに先立ちサンプルをBSTFA(N,O-ビス(トリメチルシリル)トリフルオロアセタミド)誘導体化することを特徴とする上記(8)記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。
(10)汗から採取された汗中総コレステロールを測定対象とするキット。
(11)皮膚表面より汗を採取するための液体を含むことを特徴とする上記(10)記載のキット。
(12)液体がアルコール水溶液であることを特徴とする上記(11)記載のキット。
(13)アルコール水溶液がエタノール水溶液であることを特徴とする上記(12)記載のキット。
(14)液体が界面活性剤の水溶液であることを特徴とする上記(11)記載のキット。
(15)酸処理された汗を含む液体をガスクロマトグラフィーにより分析する方法を用いることを特徴とする上記(10)から(14)のいずれか記載のキット。
(16)酸処理された汗を含む液体中の総コレステロールをさらにBSTFA(N,O-ビス(トリメチルシリル)トリフルオロアセタミド)誘導体化する方法を含むものであることを特徴とする上記(15)記載の高脂血症またはその発症リスクの判定用キット。
(17)汗中総コレステロールを測定することを特徴とする総コレステロールの測定方法。
(18)酸処理された生体サンプルをBSTFA(N,O-ビス(トリメチルシリル)トリフルオロアセタミド)誘導体化し、ガスクロマトグラフィーにより分析することを特徴とする総コレステロールの測定方法。
(19)生体サンプルが皮膚表面から採取された汗であることを特徴とする上記(17)または(18)記載の総コレステロールの測定方法。
That is, the present invention is as follows.
(1) A method for determining hyperlipidemia or its risk of developing, characterized by measuring total cholesterol in sweat.
(2) The method for determining hyperlipidemia or onset risk thereof according to (1) above, wherein the sweat is collected from the skin surface using a liquid.
(3) The method for determining hyperlipidemia or its onset risk according to (2) above, wherein the liquid is an aqueous solution of alcohol.
(4) The method for determining hyperlipidemia or its onset risk according to (3) above, wherein the alcohol is ethanol.
(5) The method for determining hyperlipidemia or its onset risk according to (2) above, wherein the liquid is an aqueous solution containing a surfactant.
(6) The sweat according to any one of (1) to (5) above, wherein the sweat is a sweat collected by allowing it to stand and accumulate for a predetermined period of time on skin that is well dried after washing A method for determining hyperlipidemia or the risk of developing it.
(7) The method for determining hyperlipidemia or its onset risk according to any one of (1) to (6) above, wherein the skin is finger skin.
(8) The hyperlipidemia according to any one of (1) to (7) above, wherein a liquid containing sweat is used as a sample, and after the acid treatment, total cholesterol is measured using gas chromatography. To determine the disease or its risk.
(9) The method for determining hyperlipidemia or risk of its onset according to (8) above, wherein the sample is BSTFA (N, O-bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide) derivative prior to gas chromatography .
(10) A kit for measuring total cholesterol in sweat collected from sweat.
(11) The kit according to (10) above, which contains a liquid for collecting sweat from the skin surface.
(12) The kit according to (11) above, wherein the liquid is an alcohol aqueous solution.
(13) The kit according to (12) above, wherein the aqueous alcohol solution is an aqueous ethanol solution.
(14) The kit according to (11) above, wherein the liquid is an aqueous solution of a surfactant.
(15) The kit according to any one of (10) to (14) above, wherein a method of analyzing a liquid containing acid-treated sweat by gas chromatography is used.
(16) The method according to (15) above, comprising a method of further derivatizing total cholesterol in a liquid containing acid-treated sweat with BSTFA (N, O-bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide) A kit for determining hyperlipidemia or its risk.
(17) A method for measuring total cholesterol, comprising measuring total cholesterol in sweat.
(18) A method for measuring total cholesterol, characterized in that an acid-treated biological sample is derivatized with BSTFA (N, O-bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide) and analyzed by gas chromatography.
(19) The method for measuring total cholesterol according to the above (17) or (18), wherein the biological sample is sweat collected from the skin surface.

本発明によれば、非侵襲かつ非観血に被験者の生理的負荷の少ない総コレステロール値の測定が可能となる。これにより、日常的にサンプリングが行え、手軽に在宅で可能な総コレステロールのサンプリングが可能となる。     According to the present invention, it is possible to measure a total cholesterol level that is non-invasive and non-invasive with a small physiological load on a subject. As a result, sampling can be performed on a daily basis, and total cholesterol can be easily sampled at home.

このように簡便で手軽に汗中に存在する総コレステロールを測定することにより、動脈硬化、高脂血症の健康疾病マーカーを日常的に測定管理し、重篤な疾患の予防を図ることが可能となる。     By measuring total cholesterol present in sweat in this simple and easy manner, it is possible to measure and manage health disease markers for arteriosclerosis and hyperlipidemia on a daily basis, and to prevent serious diseases It becomes.

本発明で測定される総コレステロールとは生体由来の体液などから得られるコレステロールおよびコレステロールエステル類の総称である。コレステロールエステルは脂肪酸とコレステロールがエステル結合したものであり、コレステロールエステル類にはコレステリルリノレエイト(cholesteryl linoleate)、コレステリルオレエイト(cholesteryl oleate)、コレステリルアラキドネイト(cholesteryl arachidonate)などが知られている。     The total cholesterol measured in the present invention is a general term for cholesterol and cholesterol esters obtained from biological fluids derived from living bodies. Cholesterol ester is an ester-bonded fatty acid and cholesterol, and cholesteryl linoleate, cholesteryl oleate, cholesteryl arachidonate and the like are known as cholesterol esters.

血液中の総コレステロール値は動脈硬化、高脂血症の指標として知られており、高い状態が続くと動脈硬化に由来する心筋梗塞、脳梗塞の原因ともなり、また肥満のマーカーともなるなど健康疾病マーカーとして極めて有用である。     Total cholesterol in the blood is known as an index of arteriosclerosis and hyperlipidemia. It is extremely useful as a disease marker.

従来は、病院などにおいて採血針により侵襲的に血液を採取し測定するほか手段がなく、気軽に総コレステロールを測定するためのサンプルを採取する手段がないため、測定の機会は限られていた。本発明では皮膚表面より採取した汗中にコレステロール、コレステロールエステルが存在し、それらを測定した結果が血中総コレステロール値と相関することから、新たな高脂血症またはその発症リスクの判定方法となりうることを開示する。また同時に汗中の総コレステロールを測定するためのキット、汗サンプルをBSTFA(N,O-ビス(トリメチルシリル)トリフルオロアセタミド)誘導体化し、ガスクロマトグラフィーにより分析することを特徴とする汗中総コレステロールの測定方法を開示する。     Conventionally, in hospitals and the like, there is no means for collecting and measuring blood invasively with a blood collection needle, and there is no means for easily collecting a sample for measuring total cholesterol, so the opportunity for measurement has been limited. In the present invention, cholesterol and cholesterol esters are present in sweat collected from the skin surface, and the measurement results correlate with the blood total cholesterol level. Disclose that. At the same time, a kit for measuring total cholesterol in sweat, which is characterized by derivatizing a sweat sample with BSTFA (N, O-bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide) and analyzing it by gas chromatography The measurement method of is disclosed.

汗の採取は、汗中に存在する総コレステロールが採取でき、測定できるのであれば、どのような方法を使っても差し支えない。皮膚に布、紙、ガーゼを押し当てることや、運動時、入浴時などには汗の液滴を採取することによっても回収可能である。     Any method can be used to collect sweat, as long as the total cholesterol present in the sweat can be collected and measured. It can also be collected by pressing a cloth, paper, or gauze on the skin, or collecting sweat droplets during exercise or bathing.

好適には、液体を皮膚に接触させた後、その液を回収することにより採取可能である。液体としては、水溶液、特にアルコールの水溶液であることが好ましい。また上記液体は界面活性剤を含むものであることも好ましい。上記アルコールとしてはメタノール、エタノール、イソプロパノ−ルなどが使用可能であり、界面活性剤としてはn-オクチルグルコピラノシド、DKエステル、n-Decanoyl-N-methylglucamide(MEGA-10)、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン(Tween20)、デオキシコール酸ナトリウム、ドデシルマルトシドなどが使用可能である。好ましくは70%エタノール水溶液である。     Preferably, the liquid can be collected by bringing the liquid into contact with the skin and then collecting the liquid. The liquid is preferably an aqueous solution, particularly an aqueous alcohol solution. The liquid preferably contains a surfactant. As the alcohol, methanol, ethanol, isopropanol and the like can be used. As the surfactant, n-octylglucopyranoside, DK ester, n-Decanoyl-N-methylglucamide (MEGA-10), polyoxyethylene sorbitan monolaurate (Tween 20), sodium deoxycholate, dodecyl maltoside and the like can be used. A 70% ethanol aqueous solution is preferred.

またこれら水溶液の皮膚への接触方法としてはいかなる方法でも実施可能であるが、好ましくは霧状に水溶液を塗布することのできる小型噴霧器(松下電工製INHALERなど)により皮膚に水溶液を噴霧し、その液を治具を用いて回収することで皮膚からの汗の採取が可能となる。または適当な容器に入った水溶液を皮膚に押し当てることでも汗の採取は可能であるため、上記治具としては容器であってもよいし、スポイト、管など吸引もしくは毛細管現象を利用して回収できる治具であってもよい。     In addition, any method can be used as a method of contacting the aqueous solution with the skin. Preferably, the aqueous solution is sprayed onto the skin with a small sprayer (such as INHALER manufactured by Matsushita Electric Works) that can apply the aqueous solution in a mist form. By collecting the liquid using a jig, sweat can be collected from the skin. Alternatively, sweat can be collected by pressing an aqueous solution in a suitable container against the skin, so the jig may be a container, or collected using suction or capillary action such as a dropper or tube. The jig which can be used may be sufficient.

採取する皮膚の部位については、体のどこの部位から採取してもよい。汗の採取は、顔、首、背中、腹、腕、手の甲、てのひら、手指、もも、足の裏などさまざまな部位から可能であることが確認されているが、採取の容易さを考慮すると手指、腕からの採取が好ましいと考えられる。     About the site | part of the skin to extract | collect, you may extract | collect from any part of the body. It has been confirmed that sweat can be collected from various parts such as the face, neck, back, abdomen, arms, back of hands, palms, fingers, thighs, and soles. It is considered preferable to collect from fingers and arms.

また採取時間については、どのような時間であっても検出に十分な総コレステロール量が得られれば問題はないが、5分以上であることが好ましく、20分以上であることがより好ましい。     Regarding the collection time, there is no problem as long as a sufficient amount of total cholesterol for detection can be obtained at any time, but it is preferably 5 minutes or more, and more preferably 20 minutes or more.

具体的な採取方法としては、皮膚表面を十分に洗浄したのち、清浄に拭き取るなどして乾燥させ、その後静置して汗の染み出しにより供給される体液などから得られる総コレステロールを皮膚表面に蓄積させる方法が好ましい。それを前述の回収方法により回収したときに得られる総コレステロール量を適当な分析法により測定する。
なお、皮膚表面には正確に言うと、汗の他、皮膚細胞からの成分、皮膚組織からの成分、浸出液からの成分がありうるが、本発明において汗を採取する際、このような汗以外の成分が含まれていてもかまわない。
As a specific method of collection, after thoroughly washing the skin surface, wiping it clean, etc., drying it, and then leaving it to stand for total cholesterol obtained from body fluids supplied by sweat exudation to the skin surface. The accumulation method is preferred. The total amount of cholesterol obtained when it is recovered by the aforementioned recovery method is measured by an appropriate analysis method.
In addition, to be precise, the skin surface may contain components from skin cells, components from skin tissue, and components from exudate in addition to sweat. May be included.

汗中総コレステロールの測定は、どのような方法を用いても測定可能であるが、例えば、ガスクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーによるもの、コレステロールオキシダーゼによる酸化反応を利用した発色反応、電気化学反応などの酵素法が利用可能である。クロマトグラフィーによる測定の場合にはコレステロールエステル類は酸処理などによりコレステロールに変換してから測定するのが好ましく、酵素反応の場合にはコレステロールエステラーゼのような酵素によりコレステロールに変換してから測定するのが好ましい。さらに好ましくは、酸処理された汗サンプルをガスクロマトグラフィーにより分析する方法であり、この場合検出を容易にする、あるいは高感度にする目的でサンプルを誘導体化することが有効である。誘導体の種類としてはコレステロールを効率よく誘導体化できる物質であればどのようなものでも利用可能であるが、好ましくはBSTFA(N,O-ビス(トリメチルシリル)トリフルオロアセタミド)を用いる。   The total cholesterol in sweat can be measured by any method, for example, by chromatography such as gas chromatography or high performance liquid chromatography, color reaction using oxidation reaction by cholesterol oxidase, Enzymatic methods such as electrochemical reactions can be used. In the case of measurement by chromatography, it is preferable to measure cholesterol ester after it is converted to cholesterol by acid treatment or the like, and in the case of enzymatic reaction, it is measured after conversion to cholesterol by an enzyme such as cholesterol esterase. Is preferred. More preferably, it is a method of analyzing an acid-treated sweat sample by gas chromatography. In this case, it is effective to derivatize the sample for the purpose of facilitating detection or high sensitivity. Any substance can be used as long as it can efficiently derivatize cholesterol, but BSTFA (N, O-bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide) is preferably used.

なお、このBSTFA(N,O-ビス(トリメチルシリル)トリフルオロアセタミド)誘導体化して、ガスクロマトグラフィーにより分析する方法は、汗から採取したサンプルの他、その他の生体サンプルを用いた場合にも有効に用いることができる。   This method of derivatizing BSTFA (N, O-bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide) and analyzing by gas chromatography is also effective when using other biological samples in addition to samples collected from sweat. Can be used.

また汗をサンプルとしたキットには、汗中のコレステロールの測定に必要などのようなものでも含むことができる。好ましくは、上記で述べた汗の採取に必要となる液体および治具を含むことが望ましい。上記液体、治具、その他測定方法については前述と同様である。   The kit using sweat as a sample can also contain anything necessary for the measurement of cholesterol in sweat. Preferably, the liquid and jig necessary for collecting the sweat described above are included. The liquid, jig, and other measurement methods are the same as described above.

測定にあたっては、簡易な方法で可能であればキットに測定のための試薬、測定装置を含むことができるが、ガスクロマトグラフィーでの測定を採用する場合には、その場で測定することは不可能であり、その場合、キットに含まれる採取用の液体、治具で採取されたサンプルを郵送などで専門機関に送付し、そこで測定された結果を被験者に返還する仕組みなどが考えられる。     For measurement, if possible by a simple method, the kit can contain reagents and measuring devices for measurement. However, if measurement by gas chromatography is adopted, it is not possible to measure on the spot. In such a case, there may be a mechanism for sending the liquid collected in the kit or the sample collected with the jig to a specialized institution by mail or the like, and returning the measurement result to the subject.

以下に、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらのみに限定されるものではない。
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.

実施例1.
以下のような状態の被験者より指先皮膚より汗を採取し、そのコレステロール濃度を測定した。
Example 1.
Sweat was collected from the fingertip skin from a subject in the following state, and its cholesterol concentration was measured.

20代女性
サンプル1:軽食摂取後3時間
サンプル2:肉類を含む食事摂取後2時間
指の第2関節より先の部分(表面積50平方センチメートル)を70%エタノール、蒸留水でよく洗浄後、乾燥し、25分間安静にした後、小型噴霧器(松下電工製INHALER)を用いて70%エタノール水溶液を10秒間噴霧し、指の第2関節より先の部分に存在する液を可能な限り全量チューブに回収した。回収量は約400μLであった。回収液を真空乾燥した後、0.1M塩酸を30μL加えコレステロールエステルを加水分解した後、さらに真空乾燥した。さらに30μLのBSTFA(N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide)を加えて室温で2時間反応させ、誘導体化した。
Women in their 20s Sample 1: 3 hours after ingestion of snacks Sample 2: 2 hours after ingestion of meals containing meats The portion beyond the second joint of the finger (surface area 50 square centimeters) is thoroughly washed with 70% ethanol and distilled water, and then dried. After resting for 25 minutes, 70% ethanol aqueous solution is sprayed for 10 seconds using a small sprayer (INHALER made by Matsushita Electric Industrial Co., Ltd.), and as much liquid as possible in the part beyond the second joint of the finger is collected in the tube did. The recovered amount was about 400 μL. The recovered solution was vacuum-dried, 30 μL of 0.1M hydrochloric acid was added to hydrolyze the cholesterol ester, and then vacuum-dried. Further, 30 μL of BSTFA (N, O-Bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide) was added and reacted at room temperature for 2 hours for derivatization.

上記で調製したサンプルを以下の条件でガスクロマトグラフを行った。
キャピラリ1: 5m in length, 0.25mm inner diameter, HP-5
キャピラリ2: 25m in length, 0.25mm inner diameter, trimethylsilyl treatment
これらカラムを連結して使用し行ったガスクロマトグラフィー結果の一例を図1に示す。
The sample prepared above was gas chromatographed under the following conditions.
Capillary 1: 5m in length, 0.25mm inner diameter, HP-5
Capillary 2: 25m in length, 0.25mm inner diameter, trimethylsilyl treatment
An example of the results of gas chromatography carried out using these columns connected is shown in FIG.

その結果、クロマトグラム上9.7分に標準コレステロールと保持時間の一致するピークが確認されたため、本ピークのマススペクトルを確認した。その結果を図2に示す。標準コレステロールのマススペクトルパターンの分析やデータベース解析の結果、本ピークはコレステロールであることが確認できた。それぞれ標準コレステロールのピーク面積から換算するとサンプル1では150μM、サンプル2では850μMのコレステロール濃度が含まれることがわかった。
実施例2.
20〜40代の男女4人の被験者より、血液を採取し、その後実施例1と同様の方法で汗を採取した。
As a result, a peak having a retention time equal to that of standard cholesterol was confirmed at 9.7 minutes on the chromatogram, and thus the mass spectrum of this peak was confirmed. The result is shown in FIG. As a result of analysis of mass spectrum pattern of standard cholesterol and database analysis, it was confirmed that this peak was cholesterol. When converted from the peak area of standard cholesterol, it was found that sample 1 contained 150 μM and sample 2 contained 850 μM cholesterol.
Example 2
Blood was collected from 4 male and female subjects in their 20s and 40s, and then sweat was collected in the same manner as in Example 1.

汗中総コレステロール値については実施例1と同様の方法で測定した。汗蓄積前の洗浄直後の採取サンプルをバックグランドとして、25分間蓄積した汗中のコレステロール値を測定した。また被験者の血漿中総コレステロール値も測定し、それらの結果を表1に示し、それらの相関を図3に示した。すなわち、図3は汗中コレステロール値と血漿中コレステロール値の相関を示すグラフである。     The total cholesterol level in sweat was measured by the same method as in Example 1. A sample collected immediately after washing before sweat accumulation was used as a background, and the cholesterol level in sweat accumulated for 25 minutes was measured. In addition, the total plasma cholesterol level of the subjects was also measured, the results are shown in Table 1, and their correlation is shown in FIG. That is, FIG. 3 is a graph showing the correlation between sweat cholesterol level and plasma cholesterol level.

その結果、汗中のコレステロール値と血漿中コレステロール値の間にはゆるやかな相関があることが確認された。したがって、汗中のコレステロール値を測定することで、高脂血症の判定もしくはその発症リスクの判定が可能であることがわかる。     As a result, it was confirmed that there was a gentle correlation between the cholesterol level in sweat and the cholesterol level in plasma. Therefore, it can be seen that by measuring the cholesterol level in sweat, it is possible to determine hyperlipidemia or to determine the risk of developing it.

Figure 2007127424
Figure 2007127424

本発明によれば、汗中の総コレステロールを測定することにより、動脈硬化や高脂血症の危険因子の測定が可能となるものであり、医療現場における診断用途などに有益に使用可能である。また非侵襲、非観血的に採取可能なサンプルにより測定可能であることから、生活習慣病の予防を目的とした家庭での個人で測定可能な健康管理測定キットとしても有用である。また、人間のみならず動物においても利用可能である。   According to the present invention, it is possible to measure risk factors for arteriosclerosis and hyperlipidemia by measuring total cholesterol in sweat, and it can be usefully used for diagnostic purposes in medical settings. . In addition, since it can be measured with a sample that can be collected noninvasively and noninvasively, it is also useful as a health care measurement kit that can be measured by individuals at home for the purpose of preventing lifestyle-related diseases. Moreover, it can be used not only for human beings but also for animals.

実施例で測定した汗サンプルのガスクロマトグラフィー結果である。It is a gas chromatography result of the sweat sample measured in the Example. 実施例で測定した汗サンプル中のコレステロールピークのマススペクトル結果である。It is a mass spectrum result of the cholesterol peak in the sweat sample measured in the Example. 汗中コレステロール値と血漿中コレステロール値の相関を示すグラフである。It is a graph which shows the correlation of the cholesterol level in sweat and the cholesterol level in plasma.

Claims (19)

汗中総コレステロールを測定することを特徴とする高脂血症またはその発症リスクの判定方法。 A method for determining hyperlipidemia or its risk of developing, characterized by measuring total cholesterol in sweat. 汗が皮膚表面から液体を用いて採取されたものであることを特徴とする請求項1記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。 2. The method for determining hyperlipidemia or its onset risk according to claim 1, wherein the sweat is collected from the skin surface using a liquid. 液体がアルコールの水溶液であることを特徴とする請求項2記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。 3. The method for determining hyperlipidemia or its onset risk according to claim 2, wherein the liquid is an aqueous solution of alcohol. アルコールがエタノールであることを特徴とする請求項3記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。 4. The method for determining hyperlipidemia or its onset risk according to claim 3, wherein the alcohol is ethanol. 液体が界面活性剤を含んだ水溶液であることを特徴とする請求項2記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。 3. The method for determining hyperlipidemia or its onset risk according to claim 2, wherein the liquid is an aqueous solution containing a surfactant. 汗が、洗浄後よく乾燥した皮膚に、所定の時間静置して蓄積されることにより採取された汗であることを特徴とする請求項1から5のいずれか記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。 6. The hyperlipidemia according to any one of claims 1 to 5, wherein the sweat is sweat collected by allowing it to stand for a predetermined period of time and accumulate in skin that is well dried after washing. How to determine risk of onset. 皮膚が手指の皮膚であることを特徴とする請求項1から6のいずれか記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。 7. The method for determining hyperlipidemia or its onset risk according to claim 1, wherein the skin is finger skin. 汗を含む液体をサンプルとし、これを酸処理後、ガスクロマトグラフィーを用いて総コレステロールの測定を行うことを特徴とする請求項1から7のいずれか記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。 A liquid containing sweat is used as a sample, and after acid treatment, the total cholesterol is measured using gas chromatography, and the risk of hyperlipidemia or the onset risk thereof according to any one of claims 1 to 7 is characterized. Judgment method. ガスクロマトグラフィーに先立ちサンプルをBSTFA(N,O-ビス(トリメチルシリル)トリフルオロアセタミド)誘導体化することを特徴とする請求項8記載の高脂血症またはその発症リスクの判定方法。 9. The method for determining hyperlipidemia or its onset risk according to claim 8, wherein the sample is BSTFA (N, O-bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide) derivatized prior to gas chromatography. 汗から採取された汗中総コレステロールを測定対象とするキット。 A kit for measuring total cholesterol in sweat collected from sweat. 皮膚表面より汗を採取するための液体を含むことを特徴とする請求項10記載のキット。 The kit according to claim 10, comprising a liquid for collecting sweat from the skin surface. 液体がアルコール水溶液であることを特徴とする請求項 11記載のキット。 The kit according to claim 11, wherein the liquid is an alcohol aqueous solution. アルコール水溶液がエタノール水溶液であることを特徴とする請求項12記載のキット。 The kit according to claim 12, wherein the aqueous alcohol solution is an aqueous ethanol solution. 液体が界面活性剤の水溶液であることを特徴とする請求項11記載のキット。 The kit according to claim 11, wherein the liquid is an aqueous solution of a surfactant. 酸処理された汗を含む液体をガスクロマトグラフィーにより分析する方法を用いることを特徴とする請求項10から14のいずれか記載のキット。 The kit according to any one of claims 10 to 14, wherein a method for analyzing a liquid containing acid-treated sweat by gas chromatography is used. 酸処理された汗を含む液体中の総コレステロールをさらにBSTFA(N,O-ビス(トリメチルシリル)トリフルオロアセタミド)誘導体化する方法を含むものであることを特徴とする請求項15記載の高脂血症またはその発症リスクの判定用キット。 The hyperlipidemia according to claim 15, comprising a method of further derivatizing total cholesterol in a liquid containing acid-treated sweat with BSTFA (N, O-bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide). Or a kit for determining its risk. 汗中総コレステロールを測定することを特徴とする総コレステロールの測定方法。 A method for measuring total cholesterol, comprising measuring total cholesterol in sweat. 酸処理された生体サンプルをBSTFA(N,O-ビス(トリメチルシリル)トリフルオロアセタミド)誘導体化し、ガスクロマトグラフィーにより分析することを特徴とする総コレステロールの測定方法。 A method for measuring total cholesterol, characterized in that an acid-treated biological sample is derivatized with BSTFA (N, O-bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide) and analyzed by gas chromatography. 生体サンプルが皮膚表面から採取された汗であることを特徴とする請求項17または18記載の総コレステロールの測定方法。 The method for measuring total cholesterol according to claim 17 or 18, wherein the biological sample is sweat collected from the skin surface.
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