JP2007121205A - Specimen treating liquid composition for immunoassay using polyamine and kit, and immunoassay using them - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、抗原または抗体を検出する為の免疫測定法において測定時の擬似反応の要因となる、抗体もしくは抗原への非特異的な結合を抑え、分析対象物を正確に且つ迅速に検出または定量することのできる免疫測定法に用いるための検体処理液組成物及びその使用に関する。 In the immunoassay for detecting an antigen or antibody, the present invention suppresses non-specific binding to the antibody or antigen, which causes a pseudo reaction at the time of measurement, and detects an analyte accurately and rapidly. The present invention relates to a sample treatment liquid composition for use in an immunoassay method that can be quantified and use thereof.
抗原抗体反応のような免疫反応の特異性を利用して試料中の分析対象物を検出または定量する分析方法（免疫学的分析方法）として、免疫拡散法、酵素免疫測定法、凝集法等種々の方法論が実用化されている（例えば、Annu Rev Microbiol.1960;14:161−76 “Intepretation of immunodiffusion tests.” Growle AJ, Biochimie.1972;54(7):837−42 “Enzyme−Immunoassay for the measurement of antigens using peroxidase conjugates.” Avrameas S, Guilbert B, Med Dosw Mikrobiol. 1950;2(2):167−8 “Evaluation of agglutination reaction in infectious mononucleosis.” Chojnowski J, Stetkiewicz S,参照）。
しかし、これらの手法を使用する際には、検体中に含まれる分析対象物以外の成分の抗体や抗原への非特異的な結合や、測定法に用いる資材（抗体を結合させたラテックスや金コロイド等のコロイド標識抗体、酵素標識抗体など）の使用時の分散性が常に問題となり、これらが要因となって非特異的な反応を起こして擬似陽性反応を呈する場合があり、診断が正確に行えない場合があった（例えば、非特許文献１及び２参照）。
Various analysis methods (immunological analysis methods) for detecting or quantifying analytes in samples using the specificity of immune reactions such as antigen-antibody reactions, such as immunodiffusion, enzyme immunoassay, and aggregation methods (For example, Annu Rev Microbiol. 1960; 14: 161-76 “Intepretation of immunodiffusion tests.” Growle AJ, Biochimie. 1972; 54 (7): 837-42 “Enzyme-Immunoassay for the "Measurement of antigens using peroxidase conjugates." Avrameas S, Guilbert B, Med Dosw Mikrobiol. 1950; 2 (2): 167-8 "Evaluation of agglutination reaction in infectious mononucleosis." Chojnowski J, Stetkiewicz S,).
However, when these methods are used, non-specific binding of components other than the analyte contained in the specimen to the antibody or antigen, or materials used in the measurement method (latex or gold bound antibody) Dispersibility when using colloid-labeled colloid-labeled antibodies, enzyme-labeled antibodies, etc., is always a problem, and these may cause non-specific reactions and exhibit false positive reactions. In some cases, this was not possible (see, for example, Non-Patent Documents 1 and 2).
従って、本発明は免疫測定法において検体中に含まれる分析対象物以外の成分の非特異的な結合を軽減し、且つ免疫測定法用資材の分散能を高め、これらの効果によって正確且つ迅速な診断を行うことを目的とする。 Therefore, the present invention reduces non-specific binding of components other than the analyte contained in the specimen in the immunoassay, and increases the dispersibility of the immunoassay material. The purpose is to make a diagnosis.
上記課題は、免疫測定法において、一定の組成からなる検体処理液組成物を用いることにより達成されることを見出し、本発明を完成した。
すなわち本発明は、ポリアミンを含有する免疫測定法に用いるための検体処理液組成物に関する。
上記組成物において、ポリアミンは以下の一般式（Ｉ）で表されるアルキレンポリアミンであることが好ましい。
NH2(CH2)aNH(CH2)bNH(CH2)c・・・・NH(CH2)zNH2 （I)
式中、a：1以上の整数、b,c,・・・・,z：それぞれ独立に0以上の整数である。
また、上記組成物において、該ポリアミンは、1,3−ジアミノプロパン、プトレッシン、カダベリン、カルジン（ノルスペルミジン）、スペルミジン、ホモスペルミジン、アミノプロピルカダベリン、テルミン（ノルスペルミン）、スペルミン、テルモスペルミン、カナバルミン、アミノペンチルノルスペルミジン、N,N’−ビス（アミノプロピル）カダベリン、カルドペンタミン、ホモカルドペンタミン、及びカルドヘキサミンより成る群より選択される少なくとも一種であることが好ましい。
また上記組成物は、無機塩類及び界面活性剤より成る群より選択される少なくとも１種類の化合物を更に含むことが好ましい。
該無機塩類は0１(1A)族、02(2A)族、13(3B)族から成る群より選択される金属塩類の少なくとも１種類であることが好ましく、該界面活性剤はポリアルキレンオキサイド誘導体から選択される少なくとも一種であることが好ましい。
また、上記組成物においてはポリアミンは０．００１〜１Ｍの範囲で含有されることが好ましい。
本発明の他の実施態様は、検体中の分析対象物を免疫反応を利用して測定する免疫測定法において、検体を上記いずれかの組成物と混合することを特徴とする免疫測定法、である。
本発明の更なる他の実施態様は、（１）患者から採取した検体を上記いずれかの組成物と混合する、（２）前記混合液を分析対象物と特異的に反応する捕捉試薬が固定化された担体と接触させて分析対象物を前記担体上に捕捉する、（３）前記担体上に捕捉された分析対象物と、分析対象物と特異的に反応する標識化検出試薬とを反応させ、捕捉試薬−分析対象物−標識化検出試薬の免疫複合体を形成させる、及び(４)前記免疫複合体を検出する、工程を含む免疫測定法、である。
また、本発明の他の実施態様は、（１）患者から採取した検体、検体中の分析対象物と特異的に反応する標識化検出試薬及び上記いずれかの組成物を混合して、分析対象物−標識化検出試薬の免疫複合体を形成させる、（２）前記混合液を分析対象物と特異的に反応する捕捉試薬が固定化された担体と接触させて、前記担体上に捕捉試薬−分析対象物−検出試薬の免疫複合体を形成させる、及び(４)前記（３）で得られた免疫複合体を検出する、工程を含む免疫測定法、である。
本発明の他の実施態様として、上記いずれかの組成物を含む、免疫測定法用キットを提供する。
前記キットは、患者から採取した検体中の分析対象物に特異的に反応する捕捉試薬、分析対象物と特異的に反応する標識化検出試薬を更に含むことが好ましい。
また、前記キットにおいて、捕捉試薬は担体上に固定されていることが好ましい。
It has been found that the above problems can be achieved by using a sample treatment liquid composition having a certain composition in an immunoassay, and the present invention has been completed.
That is, the present invention relates to a sample treatment liquid composition for use in an immunoassay containing polyamine.
In the above composition, the polyamine is preferably an alkylene polyamine represented by the following general formula (I).
NH 2 (CH 2 ) a NH (CH 2 ) b NH (CH 2 ) c・ ・ ・ ・ ・ ・ NH (CH 2 ) z NH 2 (I)
In the formula, a: an integer of 1 or more, b, c,..., Z: each independently an integer of 0 or more.
In the above composition, the polyamine may be 1,3-diaminopropane, putrescine, cadaverine, cardine (norspermidine), spermidine, homospermidine, aminopropyl cadaverine, theremin (norspermine), spermine, thermospermine, canabalmin, It is preferably at least one selected from the group consisting of aminopentylnorspermidine, N, N′-bis (aminopropyl) cadaverine, cardopentamine, homocardopentamine, and cardohexamine.
The composition preferably further contains at least one compound selected from the group consisting of inorganic salts and surfactants.
The inorganic salt is preferably at least one metal salt selected from the group consisting of group 01 (1A), group 02 (2A), group 13 (3B), and the surfactant is selected from polyalkylene oxide derivatives. It is preferable that it is at least one selected.
Moreover, in the said composition, it is preferable that polyamine is contained in 0.001-1M.
Another embodiment of the present invention is an immunoassay method for measuring an analyte in a specimen using an immune reaction, wherein the specimen is mixed with any of the above compositions. is there.
According to still another embodiment of the present invention, (1) a specimen collected from a patient is mixed with any of the above compositions, and (2) a capture reagent that specifically reacts with the analyte is immobilized on the mixed solution. (3) reacting an analyte captured on the carrier with a labeled detection reagent that specifically reacts with the analyte. And (4) an immunoassay method comprising the steps of: forming a capture reagent-analyte-labeled detection reagent immune complex; and (4) detecting the immune complex.
In another embodiment of the present invention, (1) a sample collected from a patient, a labeled detection reagent that specifically reacts with the analyte in the sample, and any one of the above-described compositions are mixed and analyzed. An immunocomplex of an object-labeled detection reagent; (2) contacting the mixed solution with a carrier on which a capture reagent that specifically reacts with an analyte is immobilized; An immunoassay comprising the steps of forming an analyte-detection reagent immune complex, and (4) detecting the immune complex obtained in (3) above.
As another embodiment of the present invention, an immunoassay kit comprising any one of the above compositions is provided.
The kit preferably further includes a capture reagent that specifically reacts with the analyte in the sample collected from the patient, and a labeled detection reagent that reacts specifically with the analyte.
In the kit, the capture reagent is preferably immobilized on a carrier.
本発明の、ポリアミンを含む免疫測定法用検体処理液組成物を使用することにより、分析対象物以外の成分に起因する非特異的な反応を軽減させることができ、なお且つ免疫測定法用資材の検出反応時における分散能を高めることができ、分析対象物の正確な判定を行うことが可能となった。特に患者由来の脱離細胞成分、粘液成分などは捕捉試薬及び/あるいは検出試薬に吸着すると、擬似陽性の反応を呈する場合があるが、本発明の組成物、これを用いた免疫測定法及び免疫測定法用キットはこれらの非特異的な反応を軽減できるという優れた効果を奏する。
本発明のポリアミンを含む免疫測定法用検体処理液組成物を使用することにより、免疫測定法における検出感度を増強するという優れた効果を奏することは驚くべきことである。
By using the sample treatment solution composition for immunoassay containing polyamine of the present invention, non-specific reaction caused by components other than the analyte can be reduced, and the material for immunoassay It was possible to increase the dispersibility during the detection reaction, and to accurately determine the analyte. In particular, detached cell components derived from patients, mucus components, etc. may exhibit false positive reactions when adsorbed to a capture reagent and / or detection reagent. However, the composition of the present invention, an immunoassay method and an immunity using the composition may be used. The measurement method kit has an excellent effect of reducing these non-specific reactions.
It is surprising that an excellent effect of enhancing the detection sensitivity in the immunoassay is obtained by using the sample treatment solution composition for immunoassay containing the polyamine of the present invention.
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の免疫測定法に用いるための検体処理液組成物（以下、単に本発明の組成物ともいう）について説明する。検体処理液組成物とは、免疫測定法において検体中の分析対象物を検出する為の反応過程及び/またはその前処理過程に関与する溶液組成物を意味する。より具体的には、ウイルスや細菌等に感染した患者の咽頭あるいは鼻腔等から採取した検体を浮遊させるための溶液、浮遊後更に、標識化抗体等の標識化検出試薬と反応させるための溶液等を意味する。
免疫測定法用検体処理液の基本組成として、免疫学的手法による試料の検出または定量において通常使用されるバッファー類を使用できる。より具体的には、生理食塩水、リン酸緩衝性生理食塩水(PBS)、ゼラチン添加PBS、ウシ血清アルブミン(BSA)添加PBS、グッドの緩衝液、子牛インフュージョンブロス(VIB)、ハートインフュージョンブロス、イーグルの最小必須培地(EMEM)、BSA添加EMEMなどが挙げられるが、この限りではない。また、上記バッファー類は2種類以上を組み合わせて用いても良い。
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The specimen treatment liquid composition (hereinafter also simply referred to as the composition of the present invention) for use in the immunoassay of the present invention will be described. The sample treatment liquid composition means a solution composition involved in a reaction process and / or a pretreatment process for detecting an analyte in a sample in an immunoassay. More specifically, a solution for floating a specimen collected from the pharynx or nasal cavity of a patient infected with a virus or bacteria, a solution for reacting with a labeled detection reagent such as a labeled antibody after the suspension, etc. Means.
As a basic composition of the sample treatment solution for immunoassay, buffers usually used in detection or quantification of a sample by an immunological technique can be used. More specifically, physiological saline, phosphate buffered saline (PBS), gelatin-added PBS, bovine serum albumin (BSA) -added PBS, Good's buffer, calf infusion broth (VIB), heart-in Examples include, but are not limited to, fusion broth, Eagle's minimal essential medium (EMEM), and BSA-added EMEM. Further, two or more of the above buffers may be used in combination.
本発明の組成物は、ポリアミン類から選択される少なくとも一種の化合物を含む。
本明細書において、ポリアミンとは、同一分子内にアミノ基を２以上有する脂肪族炭化水素化合物の総称を意味する。より好ましくは、第一級アミノ基および／または第二級アミノ基を分子内に二つ以上持つ脂肪族炭化水素化合物である。
本発明において更に好ましいポリアミンとしては以下の一般式（Ｉ）で表されるポリアルキレンポリアミンが挙げられる。
NH2(CH2)aNH(CH2)bNH(CH2)c・・・・NH(CH2)zNH2 （I)
式中、a：1以上の整数、b,c,・・・・,z：それぞれ独立に0以上の整数である。
上記式において、より好ましくはａは１〜５であり、b,c,・・・・,zはそれぞれ独立に０〜５であることが好ましい。
The composition of the present invention contains at least one compound selected from polyamines.
In this specification, polyamine means a general term for aliphatic hydrocarbon compounds having two or more amino groups in the same molecule. More preferably, it is an aliphatic hydrocarbon compound having two or more primary amino groups and / or secondary amino groups in the molecule.
More preferred polyamines in the present invention include polyalkylene polyamines represented by the following general formula (I).
NH 2 (CH 2 ) a NH (CH 2 ) b NH (CH 2 ) c・ ・ ・ ・ ・ ・ NH (CH 2 ) z NH 2 (I)
In the formula, a: an integer of 1 or more, b, c,..., Z: each independently an integer of 0 or more.
In the above formula, more preferably, a is 1 to 5, and b, c,..., Z are each independently preferably 0 to 5.
ポリアミンの例として、生体内ポリアミンまたは人工的に得られる生体内ポリアミン誘導体が挙げられ、より具体的には、1,3−ジアミノプロパン、プトレッシン、カダベリン、カルジン（ノルスペルミジン）、スペルミジン、ホモスペルミジン、アミノプロピルカダベリン、テルミン（ノルスペルミン）、スペルミン、テルモスペルミン、カナバルミン、アミノペンチルノルスペルミジン、N,N'’−ビス（アミノプロピル）カダベリン、カルドペンタミン、ホモカルドペンタミン、カルドヘキサミンあるいはそれらの誘導体が挙げられる。 Examples of polyamines include in vivo polyamines or artificially obtained in vivo polyamine derivatives, and more specifically 1,3-diaminopropane, putrescine, cadaverine, cardine (norspermidine), spermidine, homospermidine, Aminopropyl cadaverine, theremin (norspermine), spermine, thermospermine, canabalmin, aminopentylnorspermidine, N, N ″ -bis (aminopropyl) cadaverine, cardopentamine, homocardopentamine, cardohexamine or derivatives thereof Is mentioned.
ポリアミンの構造について以下に記載する。
（１）ジアミン：NH2(CH2)aNH2
1,3−ジアミノプロパン(a=3)、プトレッシン(a=4)、カダベリン(a=5)
（２）トリアミン：NH2(CH2)aNH(CH2)bNH2
カルジン(ノルスペルミジン)(a=3, b=3)、スペルミジン(a=3, b=4)、ホモスペルミジン(a=4, b=4)、アミノプロピルカダベリン(a=3, b=5)
（３）テトラアミン：NH2(CH2)aNH(CH2)bNH(CH2)cNH2
テルミン(ノルスペルミン)(a=3, b=3, c=3)、スペルミン(a=3, b=4, c=3)、テルモスペルミン(a=3, b=3, c=4)、カナバルミン(a=4, b=3, c=4)、アミノペンチルノルスペルミジン(a=3, b=3, c=5)、N,N’−ビス（アミノプロピル）カダベリン(a=3, b=5, c=3)
（４）ペンタアミン：NH2(CH2)aNH(CH2)bNH(CH2)cNH(CH2)dNH2
カルドペンタミン(a=3, b=3, c=3, d=3)、ホモカルドペンタミン(a=3, b=3, c=3, d=4)
（５）ヘキサアミン：NH2(CH2)aNH(CH2)bNH(CH2)cNH(CH2)dNH(CH2)eNH2
カルドヘキサミン(a=3, b=3, c=3, d=3, e=3)
The structure of the polyamine is described below.
(1) Diamine: NH 2 (CH 2 ) a NH 2
1,3-diaminopropane (a = 3), putrescine (a = 4), cadaverine (a = 5)
(2) Triamine: NH 2 (CH 2 ) a NH (CH 2 ) b NH 2
Cardin (norspermidine) (a = 3, b = 3), spermidine (a = 3, b = 4), homospermidine (a = 4, b = 4), aminopropyl cadaverine (a = 3, b = 5)
(3) Tetraamine: NH 2 (CH 2 ) a NH (CH 2 ) b NH (CH 2 ) c NH 2
Theremin (norspermine) (a = 3, b = 3, c = 3), spermine (a = 3, b = 4, c = 3), thermospermine (a = 3, b = 3, c = 4), Canabalmin (a = 4, b = 3, c = 4), aminopentylnorspermidine (a = 3, b = 3, c = 5), N, N′-bis (aminopropyl) cadaverine (a = 3, b = 5, c = 3)
(4) Pentaamine: NH 2 (CH 2 ) a NH (CH 2 ) b NH (CH 2 ) c NH (CH 2 ) d NH 2
Cardopentamine (a = 3, b = 3, c = 3, d = 3), Homocardopentamine (a = 3, b = 3, c = 3, d = 4)
(5) Hexaamine: NH 2 (CH 2 ) a NH (CH 2 ) b NH (CH 2 ) c NH (CH 2 ) d NH (CH 2 ) e NH 2
Cardohexamine (a = 3, b = 3, c = 3, d = 3, e = 3)
本発明の組成物は、これらのポリアミンを２種類以上含んでいてもよい。
組成物中のポリアミンの濃度は、用いるポリアミンの種類等により適宜変更することができるが、例えば、０．０１〜１Ｍ程度、より好ましくは０．０２〜０．２Ｍである。
The composition of the present invention may contain two or more of these polyamines.
Although the density | concentration of the polyamine in a composition can be suitably changed with the kind etc. of polyamine to be used, it is about 0.01-1M, for example, More preferably, it is 0.02-0.2M.
検体の種類(例えば、患者由来の脱離・剥離細胞等あるいはそれらの細胞から放出された細胞成分、粘性成分、糖成分等を含むような検体)によっては、反応中に不要な凝集塊(凝集物)が形成され、これが非特異的な反応の原因となる場合があるが、ポリアミンはこれら凝集を抑制する凝集抑制剤としての作用も期待できる。また、コロイド粒子を用いた免疫測定法に際しては、コロイド粒子同士の非特異的な凝集に起因する非特異的な反応・非特異的な判定結果が起こる場合があるが、ポリアミンはこれら凝集を抑制する凝集抑制剤としての作用も期待できる。従って、このような検体の検出を行う場合には、特に本発明の組成物を用いることが好ましい。 Depending on the type of specimen (for example, specimens that contain patient-derived detached or exfoliated cells, or specimens that contain cellular components, viscous components, sugar components, etc. released from those cells), unnecessary aggregates (aggregation) may occur during the reaction. In some cases, this may cause a nonspecific reaction, but polyamines can also be expected to act as an aggregation inhibitor that suppresses these aggregations. In immunoassay using colloidal particles, nonspecific reactions and nonspecific determination results may occur due to nonspecific aggregation between colloidal particles. Polyamine suppresses these aggregations. It can also be expected to act as an aggregation inhibitor. Therefore, when detecting such a specimen, it is particularly preferable to use the composition of the present invention.
本発明の組成物は、好ましくは無機塩類及び界面活性剤より成る群より選択される少なくとも１種類の化合物を更に含む。無機塩を添加することにより、コロイド粒子の分散性の向上、抗原抗体反応における非特異的な反応解消効果が更に期待されるからである。また界面活性剤を添加すると、膜部材（例えばニトロセルロース膜）の測定時（反応時）の濡れ性が向上し、それにより反応性の向上が見られるため好ましい。また、抗原の可溶化（検出抗原の検体からの抽出効率化）という効果も奏するため好ましい。
また本発明の組成物として、ポリアミン、無機塩類、及び界面活性剤の3種類を含むものが本発明の効果の点において特に好ましい。
The composition of the present invention preferably further comprises at least one compound selected from the group consisting of inorganic salts and surfactants. This is because the addition of the inorganic salt is expected to further improve the dispersibility of the colloidal particles and to eliminate the nonspecific reaction in the antigen-antibody reaction. Moreover, it is preferable to add a surfactant because wettability at the time of measurement (during reaction) of a membrane member (for example, a nitrocellulose membrane) is improved, thereby improving the reactivity. Moreover, it is preferable because of the effect of solubilizing the antigen (increasing the efficiency of extraction of the detected antigen from the specimen).
In addition, as the composition of the present invention, a composition containing three kinds of polyamines, inorganic salts, and surfactants is particularly preferable in view of the effects of the present invention.
本発明の組成物において用いられる無機塩類の例としては、0１(1A)族、02(2A)族、13(3B)族から成る群より選択される金属塩類であり、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の塩化物、臭化物、硫酸塩、リン酸塩、炭酸塩、ホウ酸塩等が挙げられるが、この限りではない。コスト面から、塩化ナトリウム、塩化カリウムが好ましい。
無機塩類を用いる場合、本発明の組成物中に0.01〜0.3M程度、より好ましくは0.05〜0.1M程度、さらに好ましくは0.05M程度の濃度となるように添加することが好ましい。
Examples of inorganic salts used in the composition of the present invention are metal salts selected from the group consisting of group 01 (1A), group 02 (2A), group 13 (3B), lithium, sodium, potassium, Examples include, but are not limited to, chlorides, bromides, sulfates, phosphates, carbonates, borates, and the like such as magnesium, calcium, and aluminum. From the viewpoint of cost, sodium chloride and potassium chloride are preferable.
When inorganic salts are used, it is preferably added to the composition of the present invention so as to have a concentration of about 0.01 to 0.3M, more preferably about 0.05 to 0.1M, and still more preferably about 0.05M.
本発明の組成物において用いられる界面活性剤の例としては、ノニオン系、アニオン系、カチオン系、及び両性界面活性剤のいずれでも使用することが出来るが、特に特異的(抗原抗体)反応への影響の少ないノニオン系界面活性剤が好ましい。ノニオン系界面活性剤としては、ポリアルキレンオキサイド基を分子中に有するポリアルキレンオキサイド誘導体が挙げられる。ポリアルキレンオキサイド基としては、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、ポリオキシブチレン等が挙げられる。ポリアルキレンオキサイド基のアルキレンオキサイドの繰り返し数は、通常6〜20程度であり、6〜12が更に好ましい。ポリアルキレンオキサイド誘導体としては、具体的には、例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルエーテル類、ポリオキシエチレンフェニルエーテル、ポリオキシエチレンナフチルエーテル等のポリオキシエチレンアリールエーテル類、ポリオキシエチレンメチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、ポリオキシエチレン−ポリプロピレン縮合物が挙げられる。特に好ましいポリアルキレンオキサイド誘導体としては、特異的反応への影響の少ないポリオキシエチレンアルキルアリールエーテルが挙げられる。
界面活性剤を用いる場合、本発明の組成物中に０．１〜５％（ｖ/ｖ）程度の濃度となるように添加することが好ましい。
As examples of the surfactant used in the composition of the present invention, any of nonionic, anionic, cationic, and amphoteric surfactants can be used, but particularly for specific (antigen-antibody) reaction. Nonionic surfactants having little influence are preferred. Examples of nonionic surfactants include polyalkylene oxide derivatives having a polyalkylene oxide group in the molecule. Examples of the polyalkylene oxide group include polyoxyethylene, polyoxypropylene, polyoxybutylene and the like. The number of repeating alkylene oxides in the polyalkylene oxide group is usually about 6 to 20, more preferably 6 to 12. Specific examples of the polyalkylene oxide derivative include polyoxyethylene alkyl ethers such as polyoxyethylene lauryl ether, polyoxyethylene cetyl ether, and polyoxyethylene stearyl ether, polyoxyethylene phenyl ether, and polyoxyethylene naphthyl. Examples thereof include polyoxyethylene aryl ethers such as ether, polyoxyethylene alkyl aryl ethers such as polyoxyethylene methyl phenyl ether, polyoxyethylene octyl phenyl ether, and polyoxyethylene nonyl phenyl ether, and polyoxyethylene-polypropylene condensates. Particularly preferred polyalkylene oxide derivatives include polyoxyethylene alkylaryl ethers that have little influence on specific reactions.
When a surfactant is used, it is preferably added to the composition of the present invention so as to have a concentration of about 0.1 to 5% (v / v).
上記組成物には更に保存剤、防腐剤等の添加剤を更に使用しても良い。防腐剤としては、アジ化ナトリウム等が挙げられる。また、5−クロロ−2−メチル−4−イソチアゾリン−3−オンや2−メチル−4−イソチアゾリン−3−オン等のイソチアゾロン系の防腐剤も使用可能である。 Additives such as preservatives and preservatives may be further used in the composition. Examples of the preservative include sodium azide. Further, isothiazolone preservatives such as 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one and 2-methyl-4-isothiazolin-3-one can also be used.
本発明の免疫測定法において説明する。
本発明において、免疫測定法とは、抗体抗原反応のような免疫反応の特異性を利用して試料中の分析対象物を免疫学的手法により検出または定量する方法を意味する。
本発明の免疫測定法としては、免疫拡散法、酵素免疫測定法、凝集法等が挙げられる。本発明の方法は特に、フロースルーアッセイやラテラルフローアッセイなどの簡易迅速診断において有利に使用することができる。
It demonstrates in the immunoassay method of this invention.
In the present invention, an immunoassay means a method for detecting or quantifying an analyte in a sample by an immunological technique using the specificity of an immune reaction such as an antibody-antigen reaction.
Examples of the immunoassay method of the present invention include an immunodiffusion method, an enzyme immunoassay method, and an agglutination method. The method of the present invention can be advantageously used particularly in simple and rapid diagnosis such as flow-through assay and lateral flow assay.
本発明の免疫測定法は、上記組成物を用いることを特徴とする。免疫測定法において、本発明の組成物を検体と混合して用いることにより、細菌、ウイルス、ホルモン、その他臨床マーカー等の様々な抗原、抗体等を正確且つ迅速に分析する事ができる。
本発明の免疫測定法の第一の態様は、（１）患者から採取した検体を上述した本発明の組成物と混合する、（２）前記混合液を分析対象物と特異的に反応する捕捉試薬が固定化された担体と接触させて分析対象物を前記担体上に捕捉する、（３）前記担体上に捕捉された分析対象物と、分析対象物に特異的に反応する標識化検出試薬とを反応させ、捕捉試薬−分析対象物−標識化検出試薬の免疫複合体を形成させる、及び(４)前記免疫複合体を検出する、工程を含む免疫測定法、である。
The immunoassay method of the present invention is characterized by using the above composition. By using the composition of the present invention in a mixture with a specimen in an immunoassay, various antigens such as bacteria, viruses, hormones, and other clinical markers, antibodies, and the like can be analyzed accurately and rapidly.
The first aspect of the immunoassay method of the present invention is as follows: (1) A specimen collected from a patient is mixed with the above-described composition of the present invention, and (2) capture that specifically reacts with the analyte. The reagent is brought into contact with the carrier on which the reagent is immobilized, and the analyte is captured on the carrier. (3) The labeled detection reagent that reacts specifically with the analyte captured on the carrier and the analyte. To form an immune complex of capture reagent-analyte-labeled detection reagent and (4) detecting the immune complex.
（１）の工程において本発明の組成物と混合した検体中の分析対象物は、（２）の工程において担体上の捕捉試薬に捕捉され、分析対象物−捕捉試薬の免疫複合体を形成する。（２）の工程後、担体上に残存する検体液由来物を水、本発明の組成物、その他バッファー等により洗浄してもよい。任意に洗浄した後、分析対象物に特異的に反応する標識化検出試薬を前記分析対象物が捕捉された担体上に滴下し、捕捉試薬−分析対象物−標識化検出試薬の免疫複合体を担体上に捕捉する。その後、過剰の標識化試薬を任意に洗浄し、担体上の、捕捉試薬−分析対象物−標識化検出試薬の免疫複合体を、標識化検出試薬の標識を利用して検出する。標識物が例えば、金コロイドのような発色物である場合には、目視で検出することができる。また、例えば酵素標識の場合には、酵素の作用によって発色するような酵素の基質を更に添加することにより、発色を行なって検出する。これらの各工程において、本発明の組成物と混合した検体を用いることにより、検体中に存在する患者由来の脱離細胞成分や粘液成分と、捕捉試薬、検出試薬との非特異的な反応が軽減され、偽陽性を防止することができる。 The analyte in the sample mixed with the composition of the present invention in the step (1) is captured by the capture reagent on the carrier in the step (2) to form an analyte-capture reagent immune complex. . After the step (2), the sample liquid-derived material remaining on the carrier may be washed with water, the composition of the present invention, other buffers, or the like. After optionally washing, a labeled detection reagent that specifically reacts with the analyte is dropped onto the carrier on which the analyte is captured, and an immunocomplex of the capture reagent-analyte-labeled detection reagent is added. Capture on the carrier. Thereafter, the excess labeled reagent is optionally washed, and the immune complex of capture reagent-analyte-labeled detection reagent on the carrier is detected using the label of the labeled detection reagent. For example, when the label is a color-developing material such as gold colloid, it can be detected visually. Further, for example, in the case of an enzyme label, color is developed and detected by further adding an enzyme substrate that develops color by the action of the enzyme. In each of these steps, by using a sample mixed with the composition of the present invention, nonspecific reaction between a patient-derived detached cell component or mucus component present in the sample, and a capture reagent or detection reagent is caused. It can be mitigated and false positives can be prevented.
本発明の免疫測定法の第二の態様は、（１）患者から採取した検体、検体中の分析対象物と特異的に反応する標識化検出試薬及び上述した本発明の組成物を混合して、分析対象物−標識化検出試薬の免疫複合体を形成させる、（２）前記混合液を分析対象物と特異的に反応する捕捉試薬が固定化された担体と接触させて、前記担体上に捕捉試薬−分析対象物−検出試薬の免疫複合体を形成させる、及び(４)前記（３）で得られた免疫複合体を検出する、工程を含む免疫測定法、である。 In the second aspect of the immunoassay method of the present invention, (1) a sample collected from a patient, a labeled detection reagent that specifically reacts with an analyte in the sample, and the composition of the present invention described above are mixed. An analyte-labeled detection reagent immune complex is formed, (2) the mixture is contacted with a carrier on which a capture reagent that specifically reacts with the analyte is immobilized, An immunoassay method comprising a step of forming an immunocomplex of capture reagent-analyte-detection reagent, and (4) detecting the immune complex obtained in (3) above.
上記方法では、（１）の工程において、患者から採取した検体、検体中の分析対象物と特異的に反応する標識化検出試薬及び上述した本発明の組成物を混合して分析対象物−標識化検出試薬の免疫複合体を形成させる。このとき、検体、標識化検出試薬の混合順序はいずれが先でもよい。（２）の工程において前記分析対象物−標識化検出試薬の免疫複合体を、捕捉試薬が固定された担体上に滴下することにより、分析対象物−捕捉試薬の免疫複合体を形成する。（２）の工程後、担体上に残存する検体液由来物を水、本発明の組成物、その他バッファー等により洗浄してもよい。任意に洗浄した後、担体上の、捕捉試薬−分析対象物−標識化検出試薬の免疫複合体を、標識化検出試薬の標識を利用して検出する。これらの各工程において、本発明の組成物と混合した検体を用いると、検体中に存在する患者由来の脱離細胞成分や粘液成分と、捕捉試薬、検出試薬との非特異的な反応が軽減され、偽陽性を防止することができる。 In the above method, in the step (1), an analyte-label is prepared by mixing a specimen collected from a patient, a labeled detection reagent that specifically reacts with the analyte in the specimen, and the composition of the present invention described above. An immune complex of the detection reagent is formed. At this time, the sample and the labeled detection reagent may be mixed in any order. In the step (2), the analyte-labeled detection reagent immune complex is dropped onto a carrier on which the capture reagent is immobilized to form an analyte-capture reagent immune complex. After the step (2), the sample liquid-derived material remaining on the carrier may be washed with water, the composition of the present invention, other buffers, or the like. After optionally washing, the immune complex of capture reagent-analyte-labeled detection reagent on the carrier is detected using the label of the labeled detection reagent. In each of these steps, when a specimen mixed with the composition of the present invention is used, non-specific reactions between a patient-derived detached cell component or mucus component present in the specimen and a capture reagent or detection reagent are reduced. And prevent false positives.
本明細書において、捕捉試薬とは、分析対象物に特異的に結合し、分析対象物と複合体を形成するものを意味する。従って、分析対象物により捕捉試薬が異なることは当然であるが、一般には分析対象物が、細菌、ウイルス、ホルモン、その他の臨床マーカーの場合にはこれらに対し特異的に反応して結合するポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、レセプター、リガンド等が挙げられる。その他、ウイルス抗原等の抗原、ウイルス中空粒子、遺伝子組換えタンパク質等が挙げられる。 In this specification, the capture reagent means a substance that specifically binds to an analyte and forms a complex with the analyte. Therefore, it is natural that the capture reagent differs depending on the analyte, but in general, in the case of bacteria, viruses, hormones, and other clinical markers, the polyclonal that binds specifically reacts to these analytes. Examples include antibodies, monoclonal antibodies, receptors, ligands and the like. In addition, antigens such as virus antigens, virus hollow particles, gene recombinant proteins and the like can be mentioned.
本明細書において、検出試薬とは、分析対象物に特異的に結合し、分析対象物と複合体を形成し得るものである。これは直接または間接的に標識化され得るものである場合もあり、分析対象物と複合体を形成した後に、何らかの手段で検出を可能とせしめる試薬を意味する。酵素で標識化された場合には、該酵素により触媒される反応により比色法、蛍光法等により検出可能な物質を生成する該酵素の基質を添加することにより複合体の検出を行う事ができる。標識化される前の検出試薬としては捕捉試薬について述べたものと同じものが挙げられる。また、標識は酵素、蛍光・発光性標識、磁性体標識、放射性同位元素、金コロイド等の金属コロイド、ラテックス等が挙げられる。酵素標識を用いる場合には、使用される酵素としては例えば、アルカリフォスファターゼ、ペルオキシダーゼ、グルコース‐6‐リン酸脱水素酵素が挙げられる。 In the present specification, the detection reagent specifically binds to an analysis target and can form a complex with the analysis target. This may be one that can be labeled directly or indirectly, and refers to a reagent that allows detection by some means after complex formation with the analyte. When labeled with an enzyme, the complex may be detected by adding a substrate of the enzyme that produces a substance detectable by a colorimetric method, a fluorescence method, or the like by a reaction catalyzed by the enzyme. it can. Examples of the detection reagent before labeling are the same as those described for the capture reagent. Examples of the label include enzymes, fluorescent / luminescent labels, magnetic labels, radioactive isotopes, metal colloids such as gold colloids, and latex. When an enzyme label is used, examples of the enzyme used include alkaline phosphatase, peroxidase, and glucose-6-phosphate dehydrogenase.
次に本発明の免疫測定法用キットについて説明する。本発明の免疫測定法用キットは、上述した本発明の組成物を含むことを特徴とする。
本発明のキットは更に、患者から採取した検体中の分析対象物に特異的に反応する捕捉試薬、分析対象物と特異的に反応する標識化検出試薬を含んでいてもよい。
また、該捕捉試薬が担体上に固定されていてもよい。すなわち、本発明のキットは、捕捉試薬の代わりに、捕捉試薬が固定された担体を含んでいても良い。本発明において担体とは、分析対象物−捕捉試薬または標識化検出試薬−分析対象物−捕捉試薬の免疫複合体を捕集するための、ろ過フィルターの役割、捕捉試薬を固定化する支持体の役割、あるいは免疫複合体を検出するための標識物の反応、例えば酵素−基質反応を行なう反応場の役割を行なうものであり、通常、膜（メンブレン）状の形態を有する。
従って、担体（濾過フィルター）の孔径（直径）または保留粒子径は、免疫複合体を捕集できる程度のサイズであることが必要である。例えば、０．２〜２．０μｍ、好ましくは０．２〜０．６μｍである。また、担体の材質の例としては、不織布、紙、ガラス繊維、シリカ繊維、ニトロセルロース、セルロースエステル、ニトロセルロースとセルロースエステルの混合物、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、四フッ化エチレン樹脂、フッ化ビニリデン樹脂、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリアミド、ナイロン６，６、ポリエステル、コットン、ステンレススチール繊維等が挙げられるが、これらに限定されない。
Next, the immunoassay kit of the present invention will be described. The immunoassay kit of the present invention is characterized by including the composition of the present invention described above.
The kit of the present invention may further contain a capture reagent that reacts specifically with the analyte in the sample collected from the patient, and a labeled detection reagent that reacts specifically with the analyte.
Further, the capture reagent may be immobilized on a carrier. That is, the kit of the present invention may include a carrier on which the capture reagent is immobilized instead of the capture reagent. In the present invention, the carrier refers to a role of a filtration filter for collecting an analyte-capture reagent or a labeled detection reagent-analyte-capture reagent immune complex, and a support on which the capture reagent is immobilized. It plays the role of a reaction field for performing a role or reaction of a label for detecting an immune complex, for example, an enzyme-substrate reaction, and usually has a membrane (membrane) form.
Therefore, the pore diameter (diameter) or the retained particle diameter of the carrier (filtration filter) needs to be a size that can collect the immune complex. For example, it is 0.2 to 2.0 μm, preferably 0.2 to 0.6 μm. Examples of the carrier material include nonwoven fabric, paper, glass fiber, silica fiber, nitrocellulose, cellulose ester, a mixture of nitrocellulose and cellulose ester, polyethersulfone, polysulfone, tetrafluoroethylene resin, and vinylidene fluoride resin. , Polycarbonate, polypropylene, polyamide, nylon 6,6, polyester, cotton, stainless steel fiber, and the like, but are not limited thereto.
本発明のキットは、例えば、上述した担体を備えたアッセイ装置を含むものであってもよい。アッセイ装置は、いわゆる、フロースルー式メンブレンアッセイ法またはラテラルフロー式メンブレンアッセイ法を利用する装置であることが好ましい。フロースルー式メンブレンアッセイ法を利用するアッセイ装置の具体例は、例えば図５及び６に示されるような装置である。
図５は装置の平面図であり、図６は、図５のＩ−Ｉ’切断端面図である。図５及び６において、ａは、調製した検体試料を滴下する開口部を有し、底面部に試料が通過するための穴（Ａホール及びＢホール）を備えたアダプターである。ｂは被測定物に特異的に結合する捕捉物質が結合したメンブレンであり、ｃは液体を吸収する部材である。
The kit of the present invention may include, for example, an assay device provided with the above-described carrier. The assay device is preferably a device utilizing a so-called flow-through membrane assay method or a lateral flow membrane assay method. A specific example of an assay device using a flow-through membrane assay is a device as shown in FIGS. 5 and 6, for example.
5 is a plan view of the apparatus, and FIG. 6 is a cross-sectional end view taken along the line II ′ of FIG. 5 and 6, a is an adapter having an opening for dropping the prepared specimen sample and having holes (A hole and B hole) through which the sample passes on the bottom surface. b is a membrane to which a capture substance that specifically binds to the object to be measured is bound, and c is a member that absorbs liquid.
本発明のキットはさらに必要により、洗浄液組成物、標識化検出試薬の標識が酵素標識である場合には、後述する酵素の基質、反応停止液等を含むことができる。
また、必要に応じて、キットの活性を検査するためのバッファーのみからなる陰性コントロール液、抗原性物質などの被測定物を含むバッファーからなる陽性コントロールを含んでいてもよい。さらに、滅菌綿棒等の検体採取器具を含んでいてもよい。
If necessary, the kit of the present invention may contain an enzyme substrate, a reaction stop solution, and the like, which will be described later, when the cleaning solution composition and the label of the labeled detection reagent are enzyme labels.
Further, if necessary, a negative control solution consisting only of a buffer for examining the activity of the kit, and a positive control consisting of a buffer containing an analyte such as an antigenic substance may be included. Furthermore, a sample collection device such as a sterile cotton swab may be included.
本発明において、分析対象物の例としては、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、ＨＡＶ、ＨＢｃ、ＨＣＶ、ＨＩＶ、ＥＢＶ、ノーウォーク様ウイルス等のウイルス抗原、クラミジア・トラコマティス、溶連菌、百日咳菌、ヘリコバクター・ピロリ、レプトスピラ、トレポネーマ・パリダム、トキソプラズマ・ゴンディ、ボレリア、炭疽菌、MRSA等の細菌抗原、マイコプラズマ脂質抗原、ヒト繊毛性ゴナドトロピン等のペプチドホルモン、ステロイドホルモン等のステロイド、エピネフリンやモルヒネ等の生理活性アミン類、ビタミンＢ類等のビタミン類、プロスタングランジン類、テトラサイクリン等の抗生物質、細菌等が産生する毒素、各種腫瘍マーカー、農薬、抗大腸菌抗体、抗サルモネラ抗体、抗ブドウ球菌抗体、抗カンピロバクター抗体、抗ウェルシュ菌抗体、抗腸炎ビブリオ菌抗体、抗ベロトキシン抗体、抗ヒトトランスフェリン抗体、抗ヒトアルブミン抗体、抗ヒト免疫グロブリン抗体、抗マイクログロブリン抗体、抗ＣＲＰ抗体、抗トロポニン抗体、抗ＨＣＧ抗体、抗クラミジア・トラコマティス抗体、抗ストレプトリジンO抗体、抗ヘリコバクター・ピロリ抗体、抗β−グルカン抗体、抗ＨＢｅ抗体、抗ＨＢｓ抗体、抗アデノウイルス抗体、抗ＨＩＶ抗体、抗ロタウイルス抗体、抗インフルエンザウイルス抗体、抗パルボウイルス抗体、抗ＲＳウイルス抗体、抗ＲＦ抗体、病原微生物に由来する核酸成分に相補的なヌクレオチド等を挙げることができるが、これらに限定されない。 In the present invention, examples of the analysis object include virus antigens such as influenza virus, adenovirus, RS virus, HAV, HBc, HCV, HIV, EBV, Norwalk-like virus, Chlamydia trachomatis, Streptococcus, Bordetella pertussis, Helicobacter pylori, Leptospira, Treponema Paridam, Toxoplasma gondii, Borrelia, Anthrax, MRSA and other bacterial antigens, Mycoplasma lipid antigens, peptide hormones such as human ciliary gonadotropin, steroids such as steroid hormones, physiology such as epinephrine and morphine Vitamins such as active amines, vitamin Bs, antibiotics such as prostaglandins, tetracycline, toxins produced by bacteria, various tumor markers, pesticides, anti-E. Coli antibodies, anti-Salmonella antibodies, anti-staphylococcal antibodies Anti-Campylobacter antibody, anti-C. Perfringens antibody, anti-V. Parahaemolyticus antibody, anti-verotoxin antibody, anti-human transferrin antibody, anti-human albumin antibody, anti-human immunoglobulin antibody, anti-microglobulin antibody, anti-CRP antibody, anti-troponin antibody, anti HCG antibody, anti-Chlamydia trachomatis antibody, anti-streptolysin O antibody, anti-Helicobacter pylori antibody, anti-β-glucan antibody, anti-HBe antibody, anti-HBs antibody, anti-adenovirus antibody, anti-HIV antibody, anti-rotavirus antibody, Examples include, but are not limited to, anti-influenza virus antibodies, anti-parvovirus antibodies, anti-RS virus antibodies, anti-RF antibodies, nucleotides complementary to nucleic acid components derived from pathogenic microorganisms, and the like.
以下、本発明を実施例に基づき更に具体的に説明する。但し、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
実施例１ フロースルー型アッセイ装置を用いたインフルエンザウイルスの検出
（1）検出方法
インフルエンザA型ウイルスまたはB型ウイルスを含むサンプルを緩衝液に浮遊させた（それぞれ６〜１５×１０11pfu/ｍL)。その溶液500μLと金コロイド標識抗インフルエンザ抗体8.0OD520、50μLを混合し反応させる。一定時間反応後、フィルター（例えば、0.22μm）で濾過した後、アッセイ装置（図５及び６に記載と同様のデバイス）へ全量滴下する。液が膜部材に全て吸収された後、抗インフルエンザウイルスモノクローナル抗体を吸着させた部分の膜部材が金コロイドの色（例えば、赤色〜赤褐色）に着色していれば、サンプル中にインフルエンザウイルスが存在していると判定する。色調の変化がなく膜部材の色のままであれば、サンプル中にインフルエンザウイルスが存在していないと判定する。
Hereinafter, the present invention will be described more specifically based on examples. However, the present invention is not limited to the following examples.
Example 1 Detection of influenza virus using a flow-through assay device (1) Detection method Samples containing influenza A virus or B virus were suspended in a buffer solution (each 6-15 × 10 11 pfu / mL). . 500 μL of the solution and gold colloid-labeled anti-influenza antibody 8.0OD 520 and 50 μL are mixed and reacted. After reacting for a certain period of time, the solution is filtered through a filter (for example, 0.22 μm), and then the whole amount is dropped onto an assay device (a device similar to that described in FIGS. 5 and 6). After the liquid is completely absorbed by the membrane member, influenza virus is present in the sample if the portion of the membrane member that adsorbs the anti-influenza virus monoclonal antibody is colored in the color of gold colloid (eg, red to reddish brown) It is determined that If there is no change in color tone and the color of the membrane member remains, it is determined that influenza virus is not present in the sample.
使用した緩衝液組成：
Bis−Tris(pH 7.0) 20mM
ウシ血清アルブミン 1％(w/v)
NaCl 50mM
ポリエチレングリコールモノ-ｐ-イソオクチルフェニルエーテル
（Triton X-100、ナカライテスク製） 5％(v/v) 上記緩衝液組成に加え、本発明の方法としてポリアミンを、また対照実験としてアルギニンを添加し実験を行った。ポリアミンとしてはプトレッシン、スペルミジン、スペルミンを用い、それぞれ25ｍＭから200ｍＭまで、25ｍＭ毎に濃度を変えて、非特異反応が抑制されえる境界値を決定した。結果を図１及び図２に示す。
また、様々な濃度のポリアミンを用いて、インフルエンザウイルス抗原の希釈濃度を変化させて、感度を調べた（表１及び表２、図３及び４）。
Buffer composition used:
Bis-Tris (pH 7.0) 20 mM
Bovine serum albumin 1% (w / v)
Polyethylene glycol mono-p-isooctylphenyl ether (Triton X-100, manufactured by Nacalai Tesque) 5% (v / v) In addition to the above buffer solution composition, polyamine was added as a method of the present invention, and arginine was added as a control experiment. The experiment was conducted. As the polyamine, putrescine, spermidine, and spermine were used, and the boundary value at which the nonspecific reaction can be suppressed was determined by changing the concentration from 25 mM to 200 mM for each 25 mM. The results are shown in FIGS.
Moreover, the sensitivity was examined by changing the dilution concentration of the influenza virus antigen using various concentrations of polyamine (Tables 1 and 2, FIGS. 3 and 4).
該インフルエンザ検出試薬は簡易迅速診断を狙った診断法である為、最終的な検査の判定は目視判定で行なわれる。その為、図中の判定境界は、目視判定結果と検出スポット中の金コロイド密度(赤色の濃さ)によって決定した。その為、検出境界とは、検出スポット中の金コロイド相対密度がその境界値以下であれば陰性と、境界値以上であれば陽性と判断する、判定境界値であり、その値は約24(RD/mm2)である。なお、縦軸Density(RD/mm2)はRelative Density(相対密度)を示し、検出スポットのカウント数の密度をデンシトメトリーで算出した値である。よって、Mean Value × Num.Pixels / Area による算出によって出された値であり、単位はO.D.(530nm)/mm2である。 Since the influenza detection reagent is a diagnostic method aiming at simple and quick diagnosis, the final inspection is determined by visual determination. Therefore, the determination boundary in the figure was determined based on the visual determination result and the gold colloid density (red color density) in the detection spot. Therefore, the detection boundary is a determination boundary value that determines negative if the colloidal gold relative density in the detection spot is equal to or lower than the boundary value, and positive if the gold colloid relative density is equal to or higher than the boundary value. RD / mm 2 ). The vertical axis Density (RD / mm 2 ) represents Relative Density (relative density), and is a value obtained by calculating the density of the count number of detection spots by densitometry. Therefore, it is a value obtained by calculation by Mean Value × Num.Pixels / Area, and the unit is OD (530 nm) / mm 2 .
スペルミジン添加により、またその添加濃度の増加により、該インフルエンザウイルス検出試薬の非特異反応は解消された(図１及び図２)。
A型、B型両方のインフルエンザウイルス検出試薬の検出強度(感度)は、様々なポリアミンの添加によって維持または更に増強される結果が得られた(図３及び４)。
また、図２、図４の結果より、Ｂ型インフルエンザウイルス検出試薬の非特異抑制および検出強度(感度)は、アルギニンに比してポリアミンの添加によって、驚くべき事に増強されていることがわかる。
着色の度合はＲＤ（相対密度（relative density））で表されており、具体的には検出スポットのカウント数の密度をデンシトメトリーで算出した値（ＲＤ＝平均値×ピクセル数／面積）（RD : Mean Value × Num.Pixels / Area）（単位はO.D.(530nm)/mm2）である。なお、530nmは、金コロイド粒子の極大吸収波長である。極大吸収波長は、粒径の差によって数nm範囲でずれる場合が有るが結果に対しての影響は小さいため、補正をしていない。
The nonspecific reaction of the influenza virus detection reagent was eliminated by the addition of spermidine and the increase of the concentration of the addition (FIGS. 1 and 2).
The detection intensity (sensitivity) of both type A and type B influenza virus detection reagents was maintained or further enhanced by the addition of various polyamines (FIGS. 3 and 4).
In addition, the results of FIGS. 2 and 4 show that the nonspecific suppression and detection intensity (sensitivity) of the influenza B virus detection reagent are surprisingly enhanced by the addition of polyamine compared to arginine. .
The degree of coloring is represented by RD (relative density). Specifically, the density of the detection spot count number is calculated by densitometry (RD = average value × number of pixels / area) ( RD: Mean Value × Num.Pixels / Area) (Unit: OD (530nm) / mm 2 ) Note that 530 nm is the maximum absorption wavelength of colloidal gold particles. The maximum absorption wavelength may deviate in the range of several nm due to the difference in particle size, but is not corrected because the influence on the result is small.
ａ：調製した検体試料を滴下する開口部を有するアダプター
ｂ：は被測定物に特異的に結合する捕捉物質が結合したメンブレン
ｃ：液体吸収部材
Ａ：試料が通過するための穴
Ｂ：試料が通過するための穴
a: Adapter b having an opening for dropping the prepared specimen sample b: Membrane to which a capture substance that specifically binds to the object to be measured is bound c: Liquid absorbing member A: Hole through which the sample passes B: Sample is Hole to go through
Claims (13)
NH2(CH2)aNH(CH2)bNH(CH2)c・・・・NH(CH2)zNH2 （I)
式中、a：1以上の整数、b,c,・・・・,z：それぞれ独立に0以上の整数である。 The composition according to claim 1, wherein the polyamine is an alkylene polyamine represented by the following general formula (I):
NH 2 (CH 2 ) a NH (CH 2 ) b NH (CH 2 ) c・ ・ ・ ・ ・ ・ NH (CH 2 ) z NH 2 (I)
In the formula, a: an integer of 1 or more, b, c,..., Z: each independently an integer of 0 or more.
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