JP2006343201A - Protein aggregation prevention agent, protein aggregation prevention method using it, and specimen analysis tool - Google Patents
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Description
本発明は、酸性条件下であってもタンパク質の凝集を防止可能なタンパク質凝集防止剤、それを用いたタンパク質凝集防止方法および検体分析用具に関する。 The present invention relates to a protein aggregation inhibitor capable of preventing protein aggregation even under acidic conditions, a protein aggregation prevention method using the same, and a sample analysis tool.
医学、薬学、生物学、農学等のさまざまな分野において、試料中の成分分析が実施されている。生体由来試料には、タンパク質が含まれていることがあり、分析環境が酸性である場合、タンパク質が凝集して分析が妨害されることがある。特に、試料中の成分を分光分析等の光学的分析法により分析する場合は、タンパク質の凝集は重大な問題である。例えば、無希釈のヒト血清を、塩酸若しくは硫酸等の鉱酸や、スルホフタル酸、スルホサリチル酸等の強酸性有機酸、またはクエン酸、酢酸等の弱酸性有機酸からなるｐＨ１〜４の弱酸溶液と混合した場合、血清タンパク質（主に血清アルブミン）が凝集し、液は濁りを生じ、若しくは固化する。酸性条件下でのタンパク質の凝集は、タンパク質中のカルボキシル基、アミノ基、イミダゾール基、グアニジノ基等のイオン性官能基の乖離状態が変化し、陰イオンと陽イオンとのバランスが崩れ、イオン間の反発、イオン結合の破壊により、タンパク質が変性することに起因する。 In various fields such as medicine, pharmacy, biology, and agriculture, component analysis in samples is performed. A sample derived from a living body may contain a protein, and when the analysis environment is acidic, the protein may aggregate and interfere with the analysis. In particular, when a component in a sample is analyzed by an optical analysis method such as spectroscopic analysis, protein aggregation is a serious problem. For example, undiluted human serum is mixed with a mineral acid such as hydrochloric acid or sulfuric acid, a strong acid organic acid such as sulfophthalic acid or sulfosalicylic acid, or a weak acid solution having a pH of 1 to 4 comprising a weakly acidic organic acid such as citric acid or acetic acid. When mixed, serum proteins (mainly serum albumin) aggregate and the liquid becomes turbid or solidifies. Protein aggregation under acidic conditions changes the dissociation state of ionic functional groups such as carboxyl group, amino group, imidazole group, and guanidino group in the protein, and the balance between anion and cation is lost. This is due to protein denaturation due to repulsion of ions and breaking of ionic bonds.
酸性条件下でのタンパク質の凝集を防止するために、試料を希釈する方法や界面活性剤を使用する方法がある。例えば、体液中の無機リンを測定するにあたり、試料を希釈し、かつ界面活性剤を用いることが提案されている（特許文献１）。この方法において、無機リンの測定は、０．６７５〜１．２５Ｍ硫酸の強酸下で実施されるため、タンパク質の凝集を防止するために、非イオン性界面活性剤として、ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル若しくはポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテルを用い、生体由来試料を３０〜１２５倍に希釈している。しかしながら、検体分析用具（試験片）では、上記の界面活性剤によるタンパク質凝集防止は達成されなかったため、他のタンパク質凝集防止技術の開発が強く望まれていた。
そこで、本発明は、酸性条件下でのタンパク質の凝集を効果的に防止可能なタンパク質凝集防止剤、それを用いたタンパク質凝集防止方法および検体分析用具の提供を目的とする。 Therefore, an object of the present invention is to provide a protein aggregation inhibitor that can effectively prevent protein aggregation under acidic conditions, a protein aggregation prevention method using the same, and a sample analysis tool.
前記目的を達成するために、本発明のタンパク質凝集防止剤は、酸性条件下のタンパク質の凝集を防止するためのタンパク質凝集防止剤であって、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル、ポリオキシエチレンミリスチルエーテルおよびポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルからなる群から選択される少なくとも一つの非イオン性界面活性剤を含むタンパク質凝集防止剤である。なお、本発明において、酸性条件下とは、ｐＨ１未満の強酸性条件下ないしｐＨ１〜４の弱酸性条件下を意味する。
To achieve the above object, the protein aggregation inhibitor of the present invention is a protein aggregation inhibitor for preventing protein aggregation under acidic conditions, and comprises polyoxyethylene distyrenated phenyl ether, polyoxyethylene myristyl A protein aggregation inhibitor comprising at least one nonionic surfactant selected from the group consisting of ether and polyoxyethylene (10) octylphenyl ether. In the present invention, the acidic condition means a strongly acidic condition of less than
本発明のタンパク質凝集防止方法は、酸性条件下のタンパク質の凝集を防止するタンパク質凝集防止方法であって、前記本発明のタンパク質凝集防止剤を用いる方法である。 The protein aggregation preventing method of the present invention is a protein aggregation preventing method for preventing aggregation of proteins under acidic conditions, and is a method using the protein aggregation preventing agent of the present invention.
本発明の検体分析用具は、基板の上に試薬が配置され、前記試薬にタンパク質含有試料を供給して反応させて前記試料中の成分を分析する検体分析用具であって、さらに、前記基板上に、前記本発明のタンパク質凝集防止剤が配置され、前記タンパク質凝集防止剤によって前記試料中のタンパク質の凝集が防止される検体分析用具である。 The sample analysis tool of the present invention is a sample analysis tool in which a reagent is disposed on a substrate, a protein-containing sample is supplied to the reagent and reacted to analyze components in the sample, and further on the substrate. Further, the present invention provides a sample analysis tool in which the protein aggregation inhibitor of the present invention is arranged, and the protein aggregation in the sample is prevented by the protein aggregation inhibitor.
本発明者等は、酸性条件下でのタンパク質の凝集を効果的に防止するために、界面活性剤の検討を中心に一連の研究を重ねた。その結果、前記３種類の非イオン性界面活性剤を使用すれば、強酸性条件下であり、かつタンパク質が高濃度であっても、タンパク質の凝集を効果的に防止することができることを見出し、本発明に到達した。本発明によれば、試料を希釈しなくても、酸性条件下でタンパク質の凝集を効果的に防止することができ、タンパク質の凝集に起因する試料中でのタンパク質の凝固および試料の濁りを効果的に防止できる。したがって、本発明によれば、例えば、タンパク質含有試料中の成分を無希釈で光学的手法により分析する場合であっても、高信頼性および高精度での分析が可能となる。 In order to effectively prevent protein aggregation under acidic conditions, the present inventors have repeated a series of studies focusing on the study of surfactants. As a result, it has been found that the use of the three types of nonionic surfactants can effectively prevent protein aggregation even under strongly acidic conditions and at a high protein concentration. The present invention has been reached. According to the present invention, protein aggregation can be effectively prevented under acidic conditions without diluting the sample, and protein coagulation and sample turbidity in the sample due to protein aggregation are effective. Can be prevented. Therefore, according to the present invention, for example, even when a component in a protein-containing sample is analyzed by an optical technique without dilution, analysis with high reliability and high accuracy is possible.
本発明のタンパク質凝集防止剤において、前記非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルであることが好ましい。前記ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルであれば、さらに効果的にタンパク質の凝集を防止可能だからである。前記ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルの重合度は、例えば、４５〜８０の範囲であり、好ましくは、平均重合度として６０〜６５の範囲である。前記ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルとしては、例えば、花王株式会社製の商品名エマルゲンＡ−５００がある。また、前記ポリオキシエチレンミリスチルエーテルの重合度は、５０〜５５が好ましい。前記ポリオキシエチレンミリスチルエーテルとしては、例えば、花王株式会社製の商品名エマルゲン４０８５がある。前記ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルの重合度は、４０前後であることが好ましい。前記ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルとしては、例えば、ナカライテスク株式会社製の商品名ＴｒｉｔｏｎＸ−４０５がある。なお、前記ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル、前記ポリオキシエチレンミリスチルエーテルおよび前記ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルにおいて、前記重合度とは、ポリオキシエチレン鎖の長さ若しくは数を意味する。 In the protein aggregation inhibitor of the present invention, the nonionic surfactant is preferably polyoxyethylene distyrenated phenyl ether. This is because the polyoxyethylene distyrenated phenyl ether can more effectively prevent protein aggregation. The degree of polymerization of the polyoxyethylene distyrenated phenyl ether is, for example, in the range of 45-80, and preferably in the range of 60-65 as the average degree of polymerization. Examples of the polyoxyethylene distyrenated phenyl ether include trade name Emulgen A-500 manufactured by Kao Corporation. The degree of polymerization of the polyoxyethylene myristyl ether is preferably 50 to 55. Examples of the polyoxyethylene myristyl ether include trade name Emulgen 4085 manufactured by Kao Corporation. The degree of polymerization of the polyoxyethylene (10) octylphenyl ether is preferably about 40. Examples of the polyoxyethylene (10) octylphenyl ether include trade name Triton X-405 manufactured by Nacalai Tesque Corporation. In the polyoxyethylene distyrenated phenyl ether, the polyoxyethylene myristyl ether, and the polyoxyethylene (10) octyl phenyl ether, the degree of polymerization means the length or number of polyoxyethylene chains.
つぎに、本発明のタンパク質凝集防止方法において、前記酸性条件下のタンパク質は、例えば、酸性液中のタンパク質である。この場合、前記酸性液中における前記タンパク質凝集防止剤の非イオン性界面活性剤の濃度は、例えば、酸の種類、濃度、ｐＨ等により適宜設定されるものであり、少なくとも、０．１質量％（質量／体積％：以下、同じ）以上であることが好ましく、より好ましくは、０．５〜１０質量％の範囲で用いることである。また、本発明の場合では、例えば、酸が強酸の硫酸である場合、その濃度が０．５Ｍでは、少なくとも０．５質量％の前記非イオン性界面活性剤が必要であり、１９Ｍの場合では、５質量％以上の添加が好ましい。よって、硫酸の場合では、その濃度が０．５Ｍ〜１９Ｍの範囲で、０．５質量％〜５質量％の範囲で前記非イオン性界面活性剤の最低必要濃度と硫酸濃度とは比例関係にあるため、５質量％以上の添加で、どの濃度の硫酸であってもタンパク質凝集防止は達成される。また、スルホフタル酸の場合では、前記非イオン性界面活性剤の濃度は、１０質量％以上でどの酸濃度でもタンパク質凝集は達成されるが、好ましくは、５〜１０質量％の範囲である。 Next, in the protein aggregation preventing method of the present invention, the protein under the acidic condition is, for example, a protein in an acidic solution. In this case, the concentration of the nonionic surfactant of the protein aggregation inhibitor in the acidic solution is appropriately set according to, for example, the type, concentration, pH, and the like of the acid, and at least 0.1% by mass (Mass / volume%: the same applies hereinafter) or more, and more preferably 0.5 to 10 mass%. In the case of the present invention, for example, when the acid is a strong acid sulfuric acid, at a concentration of 0.5M, at least 0.5% by mass of the nonionic surfactant is required. Addition of 5% by mass or more is preferable. Therefore, in the case of sulfuric acid, the minimum required concentration of the nonionic surfactant and the sulfuric acid concentration are in a proportional relationship in the range of 0.5 to 19% in the concentration range of 0.5 to 5% by mass. Therefore, with the addition of 5% by mass or more, protein aggregation prevention is achieved at any concentration of sulfuric acid. In the case of sulfophthalic acid, the concentration of the nonionic surfactant is 10% by mass or more, and protein aggregation is achieved at any acid concentration, but it is preferably in the range of 5 to 10% by mass.
本発明において、その適用対象となる前記酸性液は、例えば、強酸性試薬が添加された生体由来試料がある。前記生体由来試料としては、例えば、血液試料、尿試料等がある。前記血液試料としては、例えば、全血、血清および血漿がある。前記強酸性試薬の種類は、特に制限されず、例えば、塩酸、硫酸、リン酸等の鉱酸、酢酸、スルホフタル酸、スルホサリチル酸等の有機酸がある。 In the present invention, the acidic liquid to be applied includes, for example, a biological sample to which a strongly acidic reagent is added. Examples of the biological sample include a blood sample and a urine sample. Examples of the blood sample include whole blood, serum and plasma. The type of the strong acid reagent is not particularly limited, and examples thereof include mineral acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, and phosphoric acid, and organic acids such as acetic acid, sulfophthalic acid, and sulfosalicylic acid.
本発明のタンパク質凝集防止剤の使用方法は、特に制限されない。例えば、タンパク質を含む試料に酸性試薬を添加した後、前記タンパク質凝集防止剤を添加してもよいし、タンパク質を含む試料に、前記タンパク質凝集防止剤を添加してから、酸性試薬を添加してもよく、好ましくは、後者である。 The method for using the protein aggregation inhibitor of the present invention is not particularly limited. For example, after adding an acidic reagent to a sample containing protein, the protein aggregation inhibitor may be added, or after adding the protein aggregation inhibitor to a sample containing protein, an acidic reagent is added. The latter is preferred.
前述のように、本発明の検体分析用具は、基板の上に試薬が配置され、前記試薬にタンパク質含有試料を供給して反応させて前記試料中の成分を分析する検体分析用具であって、さらに、前記基板上に、前記本発明のタンパク質凝集防止剤が配置され、前記タンパク質凝集防止剤によって前記試料中のタンパク質の凝集が防止される検体分析用具である。なお、本発明において、「検体分析用具」は、「試験片」と同義である。 As described above, the sample analysis tool of the present invention is a sample analysis tool in which a reagent is disposed on a substrate, a protein-containing sample is supplied to the reagent and reacted to analyze components in the sample, Further, the present invention is a sample analysis tool in which the protein aggregation inhibitor of the present invention is arranged on the substrate, and aggregation of proteins in the sample is prevented by the protein aggregation inhibitor. In the present invention, “specimen analysis tool” is synonymous with “test piece”.
本発明の検体分析用具において、前記試料は、特に制限されないが、例えば、血液試料、尿試料等の生体由来試料がある。前記血液試料としては、例えば、全血、血漿、血清がある。 In the sample analysis tool of the present invention, the sample is not particularly limited, and examples thereof include biological samples such as blood samples and urine samples. Examples of the blood sample include whole blood, plasma, and serum.
本発明の検体分析用具の構成としては、例えば、基板の上に、試薬層が配置された構成がある。前記基板としては、例えば、キュベット状に加工されたプラスチック基板またはガラス基板がある。前記試薬層は、例えば、試薬類を、カルボキシメチルセルロースやポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンといった水溶性ポリマーを賦形剤として練ったものがある。前記試薬としては、検査対象の成分によって適宜選択され、例えば、血糖値であれば、グルコースオキシダーゼと発色試薬とがあげられる。また、前記試薬の一部構成として、酸性試薬を使用することもある。そして、前記試薬層には、本発明のタンパク質凝集防止剤を含有させてもよい。前記試薬層における試薬や本発明のタンパク質凝集防止剤の含有は、前記水溶性ポリマーと試薬溶液や本発明のタンパク質凝集防止剤溶液とを混合し、その混合液を基板上へ配置することで達成できる。混合液の基板上への配置手段としては、例えば、インクジェット印刷、滴下、噴霧など、試薬層がドット状に配置されるような手段を用いることができる。また、検査対象が、血漿または血清中の成分である場合は、全血検体中の血球成分を除去するために、前記試薬層の上に血球分離層を配置することが好ましい。前記血球分離層としては、例えば、ガラスフィルターが使用できる。もちろん、血漿または血清をあらかじめ得るために、遠心分離作業をマニュアルで行っておくこともできる。 As a configuration of the sample analysis tool of the present invention, for example, there is a configuration in which a reagent layer is arranged on a substrate. Examples of the substrate include a plastic substrate or a glass substrate processed into a cuvette shape. Examples of the reagent layer include those obtained by kneading reagents with a water-soluble polymer such as carboxymethyl cellulose, polyvinyl alcohol, or polyvinyl pyrrolidone as an excipient. The reagent is appropriately selected depending on the component to be examined, and examples thereof include glucose oxidase and a coloring reagent for blood sugar levels. Moreover, an acidic reagent may be used as a partial structure of the reagent. The reagent layer may contain the protein aggregation inhibitor of the present invention. Inclusion of the reagent and the protein aggregation inhibitor of the present invention in the reagent layer is achieved by mixing the water-soluble polymer with the reagent solution or the protein aggregation inhibitor solution of the present invention and placing the mixture on the substrate. it can. As a means for arranging the mixed liquid on the substrate, for example, means such as ink jet printing, dropping, spraying, etc., in which the reagent layer is arranged in a dot shape can be used. When the test object is a component in plasma or serum, it is preferable to dispose a blood cell separation layer on the reagent layer in order to remove the blood cell component in the whole blood sample. As the blood cell separation layer, for example, a glass filter can be used. Of course, in order to obtain plasma or serum in advance, the centrifugation operation can be performed manually.
基板の種類としては、先述のように、プラスチック基板やガラス基板が好ましく利用できるが、特に当該基板が光透過性であれば、試薬が検体と反応した後に「透過光測定」を行うことができる。透過光測定は、反射光測定に比べて凝集により受ける影響が大きいため、透過光測定においては、本発明であるタンパク質凝集防止剤の効果が最大限に発揮される。 As described above, a plastic substrate or a glass substrate can be preferably used as the type of substrate. However, if the substrate is light-transmitting, “transmitted light measurement” can be performed after the reagent has reacted with the specimen. . Since the transmitted light measurement is more affected by aggregation than the reflected light measurement, the effect of the protein aggregation inhibitor of the present invention is maximized in the transmitted light measurement.
つぎに、本発明の実施例について、比較例と併せて説明する。なお、本発明は、下記の実施例および比較例により制限されない。 Next, examples of the present invention will be described together with comparative examples. In addition, this invention is not restrict | limited by the following Example and comparative example.
血清（総タンパク質濃度：８．３ｇ／１００ｍＬ）中に、最終濃度が５．６質量％となるように、非イオン性界面活性剤であるポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル（花王株式会社製、商品名エマルゲンＡ−５００）を溶解した界面活性剤含有血清１．６ｍＬに、０．８５質量％生理食塩水を０．２ｍＬ加えて試料液を調製した。分光分析用のセル（プラスチック製ディスポーザブルセル、セル長１ｃｍ）に、前記試料液１．６ｍＬおよび１８Ｍ硫酸液０．２ｍＬを入れて混合し、分光光度計（日本分光社製、商品名Ｖ５５０Ｄ）を用いて、各波長の光透過度を測定した。また、コントロールとして、前記試料液１．６ｍＬに蒸留水を０．２ｍＬ加えた液の各波長における光透過度も同様に測定した。これらの結果を図１のグラフに示す。同グラフにおいて、（１）が、コントロールの光透過度であり、（２）が、前記硫酸液と前記試料液とを混合した場合の光透過度である。
In serum (total protein concentration: 8.3 g / 100 mL), polyoxyethylene distyrenated phenyl ether (non-ionic surfactant, manufactured by Kao Corporation, so that the final concentration is 5.6% by mass) A sample solution was prepared by adding 0.2 mL of 0.85 mass% physiological saline to 1.6 mL of surfactant-containing serum in which trade name Emulgen A-500) was dissolved. In a cell for spectroscopic analysis (plastic disposable cell,
前記非イオン性界面活性剤として、前記ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルに代えて、ポリオキシエチレンミリスチルエーテル（花王株式会社製、商品名エマルゲン４０８５）を使用した以外は、前記実施例１と同様にして、光透過度を測定した。その結果を図２のグラフに示す。同グラフにおいて、（１）が、コントロールの光透過度であり、（２）が、前記硫酸液と前記試料液とを混合した場合の光透過度である。 As the nonionic surfactant, in place of the polyoxyethylene distyrenated phenyl ether, polyoxyethylene myristyl ether (trade name Emulgen 4085, manufactured by Kao Corporation) was used, as in Example 1 above. Then, the light transmittance was measured. The result is shown in the graph of FIG. In the graph, (1) is the light transmittance of the control, and (2) is the light transmittance when the sulfuric acid solution and the sample solution are mixed.
前記非イオン性界面活性剤として、前記ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルに代えて、前記ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル（ナカライテスク株式会社製、商品名ＴｒｉｔｏｎＸ−４０５）を使用した以外は、前記実施例１と同様にして、光透過度を測定した。その結果を図３のグラフに示す。同グラフにおいて、（１）が、コントロールの光透過度であり、（２）が、前記硫酸液と前記試料液とを混合した場合の光透過度である。 As the nonionic surfactant, in place of the polyoxyethylene distyrenated phenyl ether, the polyoxyethylene (10) octylphenyl ether (manufactured by Nacalai Tesque, trade name Triton X-405) was used. In the same manner as in Example 1, the light transmittance was measured. The result is shown in the graph of FIG. In the graph, (1) is the light transmittance of the control, and (2) is the light transmittance when the sulfuric acid solution and the sample solution are mixed.
（比較例１）
前記非イオン性界面活性剤として、前記ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルに代えて、前記ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル（シグマ社製、商品名Ｂｒｉｊ３５）を使用した以外は、前記実施例１と同様にして、光透過度を測定した。その結果を図４のグラフに示す。同グラフにおいて、（１）が、コントロールの光透過度であり、（２）が、前記硫酸液と前記試料液とを混合した場合の光透過度である。なお、前記非イオン性界面活性剤は、前記特許文献１に使用されているものである。
(Comparative Example 1)
Example 1 except that in place of the polyoxyethylene distyrenated phenyl ether, the polyoxyethylene (23) lauryl ether (manufactured by Sigma, trade name Brij 35) was used as the nonionic surfactant. In the same manner, the light transmittance was measured. The result is shown in the graph of FIG. In the graph, (1) is the light transmittance of the control, and (2) is the light transmittance when the sulfuric acid solution and the sample solution are mixed. The nonionic surfactant is the one used in
（比較例２）
前記非イオン性界面活性剤として、前記ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルに代えて、前記ポリオキシエチレン（２３）オレイルエーテル（シグマ社製、商品名Ｂｒｉｊ９８）を使用した以外は、前記実施例１と同様にして、光透過度を測定した。その結果を図５のグラフに示す。同グラフにおいて、（１）が、コントロールの光透過度であり、（２）が、前記硫酸液と前記試料液とを混合した場合の光透過度である。なお、前記非イオン性界面活性剤は、前記特許文献１に使用されているものである。
(Comparative Example 2)
Example 1 except that, instead of the polyoxyethylene distyrenated phenyl ether, the polyoxyethylene (23) oleyl ether (manufactured by Sigma, trade name Brij98) was used as the nonionic surfactant. In the same manner, the light transmittance was measured. The results are shown in the graph of FIG. In the graph, (1) is the light transmittance of the control, and (2) is the light transmittance when the sulfuric acid solution and the sample solution are mixed. The nonionic surfactant is the one used in
（比較例３）
前記非イオン性界面活性剤を使用せず、前記血清１．６ｍＬと前記硫酸液０．２ｍＬとを混合して光透過度を測定した以外は、前記実施例１と同様にして、光透過度を測定した。その結果を図６のグラフに示す。同グラフにおいて、（１）が、コントロール（前記血清）の光透過度であり、（２）が、前記硫酸液と前記血清とを混合した場合の光透過度である。
(Comparative Example 3)
The light transmittance was measured in the same manner as in Example 1 except that the nonionic surfactant was not used and 1.6 ml of the serum and 0.2 ml of the sulfuric acid solution were mixed to measure the light transmittance. Was measured. The result is shown in the graph of FIG. In the graph, (1) is the light transmittance of the control (the serum), and (2) is the light transmittance when the sulfuric acid solution and the serum are mixed.
図１、図２および図３の各グラフに示すように、実施例１、２および３では、高濃度の硫酸を加えても、効果的にタンパク質の凝集を防止できたといえる。特に、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルを使用した実施例１では、タンパク質の凝集が極めて効果的に防止され、試料液の濁りはまったく観察されなかった。これに対し、前記特許文献１に記載の前記非イオン性界面活性剤を使用した比較例１および比較例２では、タンパク質の凝集を防止することができなかった。また、非イオン性界面活性剤を使用しなかった比較例３では、タンパク質の強い凝集が起り、タンパク質の凝集塊が生成した。
As shown in the graphs of FIGS. 1, 2 and 3, in Examples 1, 2 and 3, it can be said that protein aggregation could be effectively prevented even when a high concentration of sulfuric acid was added. In particular, in Example 1 using polyoxyethylene distyrenated phenyl ether, protein aggregation was extremely effectively prevented, and no turbidity of the sample solution was observed. On the other hand, in Comparative Examples 1 and 2 using the nonionic surfactant described in
以上のように、本発明によれば、酸性条件下でのタンパク質の凝集を効果的に抑制できる。したがって、本発明は、例えば、酸性条件下で高濃度のタンパク質含有試料を分析する全ての分野に適用可能であり、特に、血液および尿等の生体由来試料の成分の分析に有用である。 As described above, according to the present invention, protein aggregation under acidic conditions can be effectively suppressed. Therefore, the present invention can be applied to, for example, all fields in which a high-concentration protein-containing sample is analyzed under acidic conditions, and is particularly useful for analyzing components of biological samples such as blood and urine.
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