JP2006340668A - Microorganism culture for decomposing styrene-acrylonitrile resin - Google Patents

Microorganism culture for decomposing styrene-acrylonitrile resin Download PDF

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佐伯  誠
Fumio Yamane
文夫 山根
Tokio Fujita
藤樹夫 藤田
Noriaki Kishimoto
憲明 岸本
Yasutaka Kaya
保崇 蚊谷
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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a microorganism culture that stably can decompose styrene-acrylonitrile resin with high efficiency and facilitates the decomposition of the resin substantially in no accompany with CO<SB>2</SB>occurrence and can recycle unused useful metals and useful compounds in the waste matter including the resin. <P>SOLUTION: The microorganism culture includes a microorganism in Pseudomonas boreopolis and can at least biodegrade styrene-acrylonitrile compound. The composition for decomposing styrene-acrylonitrile compound includes the microorganism culture. In the method for decomposing styrene-acrylonitrile, a product or waste including styrene-acrylonitrile compound is allowed to contact with the microorganism culture. Waste matter including styrene-acrylonitrile compound, metals or pigments is allowed to contact with the microorganism culture or a decomposition composition to decompose the styrene-acrylonitrile compound in the waste matter to separate the metal and pigments in the waste matter thereby recovering the metals and pigments from the waste matter. <P>COPYRIGHT: (C)2007,JPO&INPIT

Description

本発明は、スチレンアクリル樹脂の生分解能を呈する微生物培養物、該樹脂の分解用組成物、並びに廃棄物中の金属又は色素の回収方法に関する。   The present invention relates to a microorganism culture exhibiting a biodegradability of styrene acrylic resin, a composition for decomposing the resin, and a method for recovering metal or pigment in waste.

従来、樹脂を含有する廃棄物、例えば、トナー等は、焼却炉等での焼却等により処理されている。しかしながら、前記焼却による処理を行なった場合、廃棄物中に含まれる有用資源の回収が困難になる場合があるという欠点がある。また、前記焼却による処理には、石油資源等を要し、CO2等の排気ガスの発生を伴うという欠点もある。 Conventionally, waste containing resin, such as toner, is treated by incineration in an incinerator or the like. However, when processing by the incineration is performed, there is a drawback that it may be difficult to recover useful resources contained in the waste. In addition, the treatment by incineration requires petroleum resources and the like, and has the disadvantage that it involves generation of exhaust gas such as CO 2 .

一方、加水分解反応により分解されやすいポリエステル樹脂については、特定の微生物により生分解させることができることが報告されている(例えば、非特許文献1を参照のこと)。しかしながら、ポリエステル樹脂を生分解することができる微生物では、ポリエステル樹脂以外の樹脂の生分解は困難であるのが現状である。
ユタカ トキワ(Yutaka Tokiwa)、Sen’iGakkaishi、第7巻、第521頁〜第526頁(1991)
On the other hand, it has been reported that a polyester resin that is easily degraded by a hydrolysis reaction can be biodegraded by a specific microorganism (for example, see Non-Patent Document 1). However, in the present situation, it is difficult for a microorganism capable of biodegrading a polyester resin to biodegrade a resin other than the polyester resin.
Yutaka Tokiwa, Sen'i Gakkaishi, Vol. 7, pp. 521 to 526 (1991)

本発明は、1つの側面では、樹脂、例えば、スチレンアクリル樹脂をより高い効率で分解すること、該樹脂をより安定的に分解すること、CO2の発生を実質的に伴わずに該樹脂を分解すること、該樹脂を含む廃棄物中の未使用の有用金属、有用化合物等のリサイクルをより容易にすること、分解により生じた産物を実質的に資化すること等の少なくとも1つを達成しうる、スチレンアクリル樹脂の生分解能を呈する微生物培養物を提供することにある。さらに、本発明は、他の側面では、前記樹脂をより高い効率で分解すること、該樹脂をより安定的に分解すること、CO2の発生を実質的に伴わずに該樹脂を分解すること、該樹脂を含む廃棄物中の未使用の有用金属、有用化合物等のリサイクルをより容易にすること等の少なくとも1つを達成しうる、前記スチレンアクリル樹脂の分解用組成物を提供することにある。また、本発明は、別の側面では、前記樹脂を効率よく分解すること、該樹脂を安定的に分解すること、前記樹脂を安価に分解すること、前記樹脂を周辺環境に対し低影響で分解すること、CO2の発生を実質的に伴わずに該樹脂を分解すること等の少なくとも1つを達成しうる、スチレンアクリル樹脂の分解方法を提供することにある。本発明のさらに他の側面は、前記樹脂を含む廃棄物中の未使用の有用金属、有用化合物等のリサイクルをより容易にすること、該廃棄物から有用金属、有用化合物等を安価に回収すること、廃棄物中の有用金属、有用化合物等を、周辺環境に対し低影響で回収すること等の少なくとも1つを達成しうる、廃棄物中の金属又は色素の回収方法を提供することにある。 The present invention, in one aspect, decomposes a resin, for example, a styrene acrylic resin with higher efficiency, more stably decomposes the resin, and substantially eliminates the generation of CO 2. Achieved at least one of decomposing, making it easier to recycle unused useful metals and useful compounds in waste containing the resin, and substantially assimilating the products generated by decomposition Another object of the present invention is to provide a microorganism culture exhibiting the biodegradability of styrene acrylic resin. Furthermore, the present invention, in another aspect, decomposes the resin with higher efficiency, decomposes the resin more stably, and decomposes the resin without substantially generating CO 2. And providing a composition for decomposing the styrene-acrylic resin, which can achieve at least one of recycling of useful metals, useful compounds, etc. that are unused in waste containing the resin. is there. In another aspect of the present invention, the resin can be efficiently decomposed, the resin can be stably decomposed, the resin can be decomposed at low cost, and the resin can be decomposed with low influence on the surrounding environment. Another object of the present invention is to provide a method for decomposing a styrene acrylic resin, which can achieve at least one of decomposing the resin substantially without generating CO 2 . Still another aspect of the present invention is to facilitate recycling of unused useful metals and useful compounds in waste containing the resin, and to recover useful metals and useful compounds from the waste at low cost. Another object of the present invention is to provide a method for recovering metals or pigments in waste, which can achieve at least one of recovering useful metals, useful compounds, etc. in waste with a low influence on the surrounding environment. .

すなわち、本発明の要旨は、
〔1〕 シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis)に属する微生物を含有してなる、スチレンアクリル樹脂の生分解能を呈する微生物培養物、
〔2〕 シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis)に属する微生物が、シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5(受託番号:NITE P−80)である、前記〔1〕記載の微生物培養物、
〔3〕 ルテイモナス スピーシーズ(Luteimonas sp.)に属する微生物と、メソリゾビウム ロティ(Mesorhizobium loti)に属する微生物と、ロシャリメア エリザベザエ(Rochalimaea elizabethae)に属する微生物と、アルカリジェネス スピーシーズ(Alcaligenes sp.)に属する微生物とをさらに含有してなる、前記〔1〕又は〔2〕記載の微生物培養物、
〔4〕 前記〔1〕〜〔3〕いずれか1項に記載の微生物培養物を含有してなる、スチレンアクリル樹脂の分解用組成物、
〔5〕 微生物培養物を保持するに適した固定用担体をさらに含有してなる、前記〔4〕記載のスチレンアクリル樹脂の分解用組成物、
〔6〕 微生物の培養に適した培地をさらに含有してなる、前記〔4〕又は〔5〕記載のスチレンアクリル樹脂の分解用組成物、
〔7〕 (A)スチレンアクリル樹脂を含む生産物若しくは廃棄物と、(B)前記〔1〕〜〔3〕いずれか1項に記載の微生物培養物又は前記〔4〕〜〔6〕いずれか1項に記載の分解用組成物とを接触させることを特徴とする、スチレンアクリル樹脂の分解方法、並びに
〔8〕 (a)スチレンアクリル樹脂と金属若しくは色素とを含む廃棄物と、(b)前記〔1〕〜〔3〕いずれか1項に記載の微生物培養物又は前記〔4〕〜〔6〕いずれか1項に記載の分解用組成物とを接触させ、廃棄物中のスチレンアクリル樹脂を分解させ、それにより、廃棄物中の金属又は色素を分離することを特徴とする、廃棄物中の金属又は色素の回収方法、
に関する。
That is, the gist of the present invention is as follows.
[1] A microorganism culture exhibiting a biodegradability of styrene acrylic resin, comprising microorganisms belonging to Pseudomonas boreeopolis,
[2] The microorganism culture according to [1] above, wherein the microorganism belonging to Pseudomonas boreopolis is Pseudomonas boreopolis Q-5 (accession number: NITE P-80),
[3] A microorganism belonging to Luteimonas sp., A microorganism belonging to Mesorhizobium loti, a microorganism belonging to Rocharimaea elizabethee, and a microorganism belonging to Alpenia sp. The microorganism culture according to [1] or [2], further comprising:
[4] A composition for decomposing a styrene acrylic resin, comprising the microorganism culture according to any one of [1] to [3],
[5] The composition for decomposing a styrene acrylic resin according to the above [4], further comprising a fixing carrier suitable for holding a microorganism culture.
[6] The composition for decomposing a styrene acrylic resin according to the above [4] or [5], further comprising a medium suitable for culturing microorganisms,
[7] (A) A product or waste containing a styrene acrylic resin, and (B) the microorganism culture according to any one of [1] to [3] or any of [4] to [6] (8) (a) waste containing styrene acrylic resin and a metal or a pigment, and (b) A styrene acrylic resin in waste by contacting the microorganism culture according to any one of [1] to [3] or the decomposition composition according to any one of [4] to [6]. A method for recovering metal or pigment in waste, characterized in that the metal or pigment in waste is separated thereby
About.

本発明の微生物培養物によれば、樹脂、特に、スチレンアクリル樹脂を、CO2の発生を実質的に伴わずに、より高い効率で、より安定的に分解することができ、かつ分解により生じた産物を実質的に資化することができ、樹脂、特にスチレンアクリル樹脂を含む廃棄物中の未使用の有用金属、有用化合物等のリサイクルをより容易にすることができるという優れた効果を奏する。本発明のスチレンアクリル樹脂の分解用組成物によれば、樹脂、特に、スチレンアクリル樹脂を、CO2の発生を実質的に伴わずに、より高い効率で、より安定的に分解することができ、樹脂、特にスチレンアクリル樹脂を含む廃棄物中の未使用の有用金属、有用化合物等のリサイクルをより容易にすることができるという優れた効果を奏する。また、本発明のスチレンアクリル樹脂の分解方法によれば、樹脂、特に、スチレンアクリル樹脂を、CO2の発生を実質的に伴わずに、高い効率で、安定的に分解することができ、該樹脂、特に、スチレンアクリル樹脂を含む廃棄物中の未使用の有用金属、有用化合物等のリサイクルを容易にすることができるという優れた効果を奏する。さらに、本発明の廃棄物中の金属又は色素の回収方法によれば、前記樹脂を含む廃棄物中の未使用の有用金属、有用化合物等のリサイクルをより容易にし、該有用金属、有用化合物等を、周辺環境に対し低影響で安価に回収することができるという優れた効果を奏する。 According to the microorganism culture of the present invention, a resin, in particular, a styrene acrylic resin, can be decomposed more stably with higher efficiency without substantially generating CO 2 , and generated by the decomposition. The product can be substantially assimilated, and has an excellent effect that it is possible to more easily recycle unused useful metals and useful compounds in wastes including resins, particularly styrene acrylic resins. . According to the composition for decomposing a styrene acrylic resin of the present invention, a resin, in particular, a styrene acrylic resin can be decomposed more stably with higher efficiency without substantially generating CO 2. In addition, there is an excellent effect that recycling of unused useful metals, useful compounds, etc. in wastes containing resins, particularly styrene acrylic resins, can be facilitated. Further, according to the method for decomposing a styrene acrylic resin of the present invention, a resin, particularly a styrene acrylic resin, can be stably decomposed with high efficiency and substantially without generation of CO 2 , An excellent effect that recycling of unused useful metals, useful compounds, etc. in wastes containing resins, particularly styrene acrylic resins, can be facilitated. Furthermore, according to the method for recovering a metal or pigment in waste of the present invention, it is possible to more easily recycle unused useful metals and useful compounds in the waste containing the resin, and the useful metals, useful compounds and the like. Can be recovered at low cost with low impact on the surrounding environment.

本発明の1つの側面は、シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis)に属する微生物を含有した、スチレンアクリル樹脂の生分解能を少なくとも呈する微生物培養物である。   One aspect of the present invention is a microbial culture that exhibits at least the biodegradability of a styrene acrylic resin, containing microorganisms belonging to Pseudomonas boreopolis.

なお、本明細書において、「スチレンアクリル樹脂の生分解能を少なくとも呈する」とは、後述の分解活性の評価方法により、スチレンアクリル樹脂の生分解能が検出されることを意味し、他の化合物に対する分解活性の有無により限定されないことを意図する。したがって、別の側面では、本発明の微生物培養物には、ポリエステル樹脂、スチレンアクリル樹脂等の化学合成樹脂等に対する分解活性をさらに呈するものも含まれる。   In the present specification, “at least exhibiting the biodegradability of styrene acrylic resin” means that the biodegradability of styrene acrylic resin is detected by the degradation activity evaluation method described later. It is intended not to be limited by the presence or absence of activity. Therefore, in another aspect, the microbial culture of the present invention includes those that further exhibit degradation activity against chemically synthesized resins such as polyester resins and styrene acrylic resins.

本発明の微生物培養物は、前記微生物を含有しているため、従来、生分解することが困難であったスチレンアクリル樹脂を効率よく、安定的に生分解することができるという優れた効果を発揮する。したがって、本発明の微生物培養物によれば、コピー機やプリンターのトナーに使用されている難分解性樹脂であるスチレンアクリル樹脂を生分解することができる。   Since the microorganism culture of the present invention contains the microorganism, it has an excellent effect of being able to efficiently and stably biodegrade styrene acrylic resin, which has heretofore been difficult to biodegrade. To do. Therefore, according to the microorganism culture of the present invention, it is possible to biodegrade styrene acrylic resin, which is a hardly decomposable resin used in toners for copying machines and printers.

また、本発明の微生物培養物は、前記微生物を含有しているため、前記樹脂の分解に基づくCO2の発生が、実質的に抑制される。したがって、本発明の微生物培養物によれば、樹脂、特に、スチレンアクリル樹脂を含有する廃棄物を処理する際、大気中へのCO2の放出を実質的に抑制することができるため、環境保護の点で優れた効果を発揮する。 In addition, since the microorganism culture of the present invention contains the microorganism, the generation of CO 2 based on the decomposition of the resin is substantially suppressed. Therefore, according to the microorganism culture of the present invention, when processing waste containing a resin, particularly a styrene acrylic resin, it is possible to substantially suppress the release of CO 2 into the atmosphere. Excellent effect in terms of.

さらに、本発明の微生物培養物によれば、樹脂、特に、スチレンアクリル樹脂を含有する廃棄物中の樹脂、特に、スチレンアクリル樹脂を分解することができ、該廃棄物中の未使用の有用金属又は有用色素の回収の容易化を図ることができる。したがって、本発明の微生物培養物によれば、廃棄物中の未使用の有用金属又は有用色素のリサイクルをより容易にすることができるため、資源の有効利用、環境保護等の点で優れた効果を発揮する。   Furthermore, according to the microorganism culture of the present invention, a resin, particularly a resin in waste containing a styrene acrylic resin, in particular, a styrene acrylic resin can be decomposed, and an unused useful metal in the waste. Alternatively, it is possible to facilitate the collection of useful dyes. Therefore, according to the microorganism culture of the present invention, it is possible to make it easier to recycle unused useful metals or useful pigments in wastes, and thus excellent effects in terms of effective use of resources, environmental protection, and the like. Demonstrate.

また、本発明の微生物培養物は、分解により生じた産物を実質的に資化することができるという優れた性質を発現する。したがって、分解により生じた産物の蓄積が実質的に抑制されるため、環境保護等の点で優れた効果を発揮する。   Moreover, the microorganism culture of the present invention exhibits an excellent property that it can substantially assimilate the product produced by the degradation. Therefore, accumulation of products generated by the decomposition is substantially suppressed, and thus an excellent effect in terms of environmental protection and the like is exhibited.

なお、本明細書において、前記廃棄物とは、樹脂、特に、スチレンアクリル樹脂を含む廃棄物をいい、具体的には、例えば、トナー、缶ラミネート、電子機器類の絶縁体、家電の廃棄物、自動車の廃棄物、産業廃棄物等が挙げられる。   In this specification, the waste refers to a waste containing a resin, in particular, a styrene acrylic resin. Specifically, for example, a toner, a can laminate, an insulator for electronic devices, and a waste for home appliances. , Automobile waste, industrial waste, and the like.

前記スチレンアクリル樹脂としては、アクリル酸 n−ブチルエステル等のアクリル酸化合物とスチレンとを重縮合させて得られる化合物等が挙げられる。具体的には、前記スチレンアクリル樹脂としては、特に限定されないが、アクリロニトリルアクリレートスチレン、スチレンブチルアクリレート等が挙げられる。なお、前記スチレンアクリル樹脂の平均分子量、重合度等は、本発明の微生物培養物による生分解能(スチレンアクリル樹脂の分解活性)を呈する範囲であればよい。   Examples of the styrene acrylic resin include compounds obtained by polycondensation of acrylic acid compounds such as acrylic acid n-butyl ester and styrene. Specifically, the styrene acrylic resin is not particularly limited, and examples thereof include acrylonitrile acrylate styrene and styrene butyl acrylate. The average molecular weight, degree of polymerization, etc. of the styrene acrylic resin may be in a range that exhibits biodegradation (degradation activity of styrene acrylic resin) by the microorganism culture of the present invention.

なお、本発明の微生物培養物によるスチレンアクリル樹脂の分解活性の評価法としては、例えば、
1) 終濃度5g/Lのスチレンアクリル樹脂を含有したFY培地〔組成:1重量% NH4Cl、0.1重量% KH2PO4、0.05重量% K2HPO4、0.05重量% MgSO4・7H2O、0.2重量% NaCl、0.001重量% ZnCl2、0.001重量% FeSO4・7H2O、0.001重量% CaCl2、0.1重量% 酵母エキス〕に、微生物培養物を接種し、37℃で7日間、125ストローク/分で振とう培養するステップ、
2) 得られた培養液に残存する樹脂成分を、ジクロロメタンで抽出し、ヘキサトリアコンタンを添加し、エバポレーターで減圧乾固させるステップ、
3) 得られた乾固物を、n−ヘキサン:トルエン/2:8(体積比) 5mLに溶解し、得られた試料 1μLを、例えば、商品名:クロマロッドSIII(0.1×10cm)(株式会社三菱化学ヤトロン製)を用いた薄層クロマトグラフィーに供し、n−ヘキサンで展開させるステップ、及び
4) 例えば、商品名:イアトロスキャンMk−6s(株式会社三菱化学ヤトロン製)を用いて、検出器:FID、水素ガス:160mL/分、空気:2.0L/分、スキャン速度:30秒/スキャンの条件で、培養液中のスチレンアクリル樹脂及びスチレンアクリル樹脂の分解産物それぞれに対応するピークを検出するステップ、
を含む方法等が挙がられる。
In addition, as an evaluation method of the degradation activity of styrene acrylic resin by the microorganism culture of the present invention, for example,
1) FY medium containing styrene acrylic resin having a final concentration of 5 g / L [Composition: 1 wt% NH 4 Cl, 0.1 wt% KH 2 PO 4 , 0.05 wt% K 2 HPO 4 , 0.05 wt % MgSO 4 .7H 2 O, 0.2 wt% NaCl, 0.001 wt% ZnCl 2 , 0.001 wt% FeSO 4 .7H 2 O, 0.001 wt% CaCl 2 , 0.1 wt% Yeast extract ] Inoculating the microorganism culture and culturing at 37 ° C. for 7 days with shaking at 125 strokes / minute,
2) A step of extracting the resin component remaining in the obtained culture broth with dichloromethane, adding hexatriacontane, and drying under reduced pressure with an evaporator;
3) The obtained dried product was dissolved in 5 mL of n-hexane: toluene / 2: 8 (volume ratio), and 1 μL of the obtained sample was treated with, for example, trade name: Chromarod SIII (0.1 × 10 cm) Steps subjected to thin-layer chromatography using (Mitsubishi Chemical Yatron Co., Ltd.) and developing with n-hexane, and 4) For example, trade name: Iatroscan Mk-6s (Mitsubishi Chemical Yatron Co., Ltd.) is used. Detector: FID, hydrogen gas: 160 mL / min, air: 2.0 L / min, scan speed: 30 sec / scan, corresponding to styrene acrylic resin and degradation products of styrene acrylic resin in the culture solution Detecting a peak to be detected,
The method including

前記ステップ1)において、前記スチレンアクリル樹脂を含有したFY培地は、ジクロロメタンに溶解したスチレンアクリル樹脂を終濃度5g/Lになるように試験管に分注し、風乾させ、FY培地 5mLを添加し、121℃20分間高圧滅菌することにより調製されうる。   In the above step 1), in the FY medium containing the styrene acrylic resin, styrene acrylic resin dissolved in dichloromethane is dispensed into a test tube to a final concentration of 5 g / L, air-dried, and 5 mL of FY medium is added. It can be prepared by autoclaving at 121 ° C. for 20 minutes.

前記ステップ3)において、薄層クロマトグラフィーは、恒湿槽(条件:65%RH)で10分間インキュベーションし、ついで、n−ヘキサンが入った展開槽内で、37℃で展開することにより行なわれうる。   In the above step 3), thin layer chromatography is carried out by incubating for 10 minutes in a humidity chamber (condition: 65% RH) and then developing at 37 ° C. in a developing tank containing n-hexane. sell.

なお、前記分解活性の評価において、対照として、微生物培養物非存在下の場合について同様に行なえばよい。前記分解活性は、微生物培養物存在下の場合の各ピークの面積と、対照の場合の各ピークの面積とを比較することにより評価される。スチレンアクリル樹脂に対応するピークの面積がゼロの場合、当該スチレンアクリル樹脂が100%分解されたことの指標となり、前記分解活性は、〔{(コントロールのスチレンアクリル樹脂に対応するピーク面積)−(培養液のスチレンアクリル樹脂に対応するピーク面積)}/(コントロールのスチレンアクリル樹脂に対応するピーク面積)〕×100(%)として算出された値で示される。   It should be noted that the evaluation of the degradation activity may be carried out in the same manner in the absence of a microorganism culture as a control. The degradation activity is evaluated by comparing the area of each peak in the presence of the microorganism culture with the area of each peak in the control. When the area of the peak corresponding to the styrene acrylic resin is zero, it becomes an indicator that the styrene acrylic resin was decomposed 100%, and the decomposition activity is [{(peak area corresponding to the control styrene acrylic resin) − ( The peak area corresponding to the styrene acrylic resin in the culture medium} / (peak area corresponding to the control styrene acrylic resin)] × 100 (%) is shown.

なお、前記スチレンアクリル樹脂の分解活性の評価において、スチレンアクリル樹脂の代わりに、他の樹脂化合物を適切な溶媒に溶解させて用いることにより、当該樹脂化合物に対する分解活性を評価することができる。   In the evaluation of the decomposition activity of the styrene acrylic resin, the decomposition activity of the resin compound can be evaluated by using another resin compound dissolved in an appropriate solvent instead of the styrene acrylic resin.

前記シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis)に属する微生物としては、上記スチレンアクリル樹脂の分解活性の評価方法によりスチレンアクリル樹脂に対して分解活性を示すものであればよく、具体的には、シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5等が挙げられる。なお、前記シュードモナス ボレオポリス Q−5は、「Pseudomonas boreopolis Q−5」と命名・表示され、受託番号:NITE P−80(受託日:2005年2月28日)の下、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター〔郵便番号292−0818 千葉県木更津市かずさ鎌足2−5−8〕に寄託されている。   The microorganism belonging to Pseudomonas boreopolis is not particularly limited as long as it exhibits a degrading activity with respect to the styrene acrylic resin by the method for evaluating the degrading activity of the styrene acrylic resin. Specifically, Pseudomonas boreopolis Q-5 etc. are mentioned. The Pseudomonas boreopolis Q-5 is named and displayed as “Pseudomonas boreeopolis Q-5”, and under the accession number: NITE P-80 (contract date: February 28, 2005), an independent administrative agency product evaluation technology. Foundation Organization Deposited at the Patent Microorganism Depositary Center [Zip code 292-0818, Kisarazu City, Kazusa Kamashichi 2-5-8].

前記シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5は、DDBJに登録されている16S rDNAライブラリーに基づき、16S rDNA解析をした場合、シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis)との相同性が、99.5%である。また、前記シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5は、グラム陰性の運動性を有する短桿菌であり、コロニーの特徴:粘質であり、オキシダーゼ 有、β−ガラクトシダーゼ 有、アルギニンジヒドロラーゼ 有、リジンデカルボキシラーゼ 有、オルニチンデカルボキシラーゼ 有、ウレアーゼ 有、トリプトファンデアミナーゼ 有、ゲラチナーゼ 有、クエン酸の利用 有、H2Sの産生 無、インドールの産生 無、アセトインの産生 無、グルコース資化性 無、D−マンニトール資化性 無、イノシトール資化性 無、L−ラムノース資化性 無、D−ソルビトール資化性 無、サッカロース資化性 無、D−メリビオース資化性 無、D−アミグダリン資化性 無、L−アラビノース資化性 無である。 The Pseudomonas boreopolis Q-5 is 99.5% homologous to Pseudomonas boreopolis when analyzed by 16S rDNA based on the 16S rDNA library registered in DDBJ. . The Pseudomonas boreopolis Q-5 is a short gonococcus having gram-negative motility, and is characterized by colony: sticky, having oxidase, β-galactosidase, arginine dihydrolase, carboxylase Yes, ornithine decarboxylase Yes, urease Yes, tryptophan deaminase Yes, gelatinase Yes, use organic citric acid, Mu production of H 2 S, Mu production of indole, Mu production of acetoin, Mu glucose assimilative, D- mannitol No assimilation, no inositol assimilation, no L-rhamnose assimilation, no D-sorbitol assimilation, no, no saccharose assimilation, no D-melibiose assimilation, no D-amygdalin assimilation -No arabinose utilization.

なお、前記16S rDNA解析は、Blast(Basic Local Alignment Search Tool)アルゴリズム(条件:検索対象Division(バクテリア、GAP計算あり、期待値10)に基づき、デフォルトの条件で、例えば、DNA Data Bank of Japan(DDBJ)のデータを用いて、対象となる16S rDNAの塩基配列と、既知の16S rDNAの塩基配列とを比較することにより行なわれうる。   The 16S rDNA analysis is based on the Blast (Basic Local Alignment Search Tool) algorithm (condition: search target division (bacteria, with GAP calculation, expected value 10) under default conditions, for example, DNA Data Bank of Japan ( DDBJ) data can be used to compare the target 16S rDNA base sequence with the known 16S rDNA base sequence.

前記シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5によれば、前記分解活性の評価方法により、スチレンアクリル樹脂〔三笠産業株式会社供給〕の分解活性を測定した生分解率として、約40%の生分解率を達成することができ、当該シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5非存在下の場合に比べ、安定的に、例えば、約2.0mg/5mL/7日の生分解率を達成するという優れた性質を示す。   According to the Pseudomonas boreopolis Q-5, the biodegradation rate of about 40% as the biodegradation rate measured by the degradation activity of the styrene acrylic resin [supplied by Mikasa Sangyo Co., Ltd.] by the degradation activity evaluation method. Compared with the absence of the Pseudomonas boreopolis Q-5, for example, the biodegradation rate of about 2.0 mg / 5 mL / 7 days is excellent. Show properties.

なお、本発明においては、前記シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5に代えて、該シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5と進化系統樹上近い位置にある微生物であって、前記分解活性の評価方法により、スチレンアクリル樹脂の分解活性が検出される微生物を用いることもできる。   In the present invention, instead of the Pseudomonas boreopolis Q-5, it is a microorganism close to the evolutionary tree of the Pseudomonas boreopolis Q-5, wherein the degradation activity is evaluated. Depending on the method, a microorganism in which the degradation activity of the styrene acrylic resin is detected can also be used.

かかるシュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5を含有した本発明の微生物培養物は、該シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5によりスチレンアクリル樹脂が分解され生成した分解産物を捕捉若しくは資化しうる他の微生物をさらに含有していてもよい。また、本発明の微生物培養物は、別の側面では、前記シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5と協調的に、樹脂、例えば、スチレンアクリル樹脂等を分解しうる他の微生物をさらに含有していてもよい。   The microbial culture of the present invention containing the Pseudomonas boreopolis Q-5 is not limited to any other product that can capture or assimilate the degradation products produced by the degradation of the styrene acrylic resin by the Pseudomonas boreopolis Q-5. It may further contain a microorganism. In another aspect, the microorganism culture of the present invention further contains another microorganism capable of degrading a resin, for example, a styrene acrylic resin, in cooperation with the Pseudomonas boreopolis Q-5. May be.

本発明の微生物培養物は、好ましくは、ルテイモナス スピーシーズ(Luteimonas sp.)に属する微生物と、メソリゾビウム ロティ(Mesorhizobium loti)に属する微生物と、ロシャリメア エリザベザエ(Rochalimaea elizabethae)に属する微生物と、アルカリジェネス スピーシーズ(Alcaligenes sp.)に属する微生物とをさらに含有した微生物培養物である。かかる微生物培養物によれば、前記微生物が一群として、協調的に作用しうるため、スチレンアクリル樹脂に対して、より安定的に、より高い生分解能が維持されるという優れた効果を発揮する。また、本発明の微生物培養物によれば、前記微生物が一群として、協調的に前記スチレンアクリル樹脂を分解し、それぞれの生育における栄養素として用いることができる。したがって、本発明の微生物培養物によれば、周辺環境に対し低影響で前記スチレンアクリル樹脂を分解することができる。   The microorganism culture of the present invention is preferably a microorganism belonging to Luteimonas sp., A microorganism belonging to Mesorhizobium loti, and a microorganism belonging to Rocharimaea elisabeth ae. a microorganism culture further containing a microorganism belonging to sp.). According to such a microorganism culture, since the microorganisms can act cooperatively as a group, an excellent effect of maintaining higher biodegradability more stably with respect to the styrene acrylic resin is exhibited. Moreover, according to the microorganism culture of this invention, the said microorganisms can decompose | disassemble the said styrene acrylic resin cooperatively as a group, and can use it as a nutrient in each growth. Therefore, according to the microorganism culture of the present invention, the styrene acrylic resin can be decomposed with a low influence on the surrounding environment.

より具体的には、混合微生物群AMOC2の微生物培養物が挙げられる。   More specifically, a microorganism culture of the mixed microorganism group AMOC2 can be mentioned.

なお、前記AMOC2は、AMOC2と命名・表示され、独立行政法人製品評価技術基盤機構〔郵便番号292−0818 千葉県木更津市かずさ鎌足2−5−8〕に安全寄託されている。また、前記AMOC2は、近畿大学農学部農芸化学科応用微生物研究室(郵便番号:631−8505 奈良県奈良市中町3327−204)に保存されており、必要に応じ、「独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター」における分譲に関する取り扱いに準じて、特許法施行規則第27条の3に規定される分譲が行なわれ、入手可能である。   The AMOC2 is named and displayed as AMOC2, and is safely deposited with the National Institute of Technology and Evaluation (postal code 292-0818, 2-5-8, Kazusa Kamashichi, Kisarazu City, Chiba Prefecture). The AMOC2 is stored in the Kinki University Department of Agriculture, Department of Agricultural Chemistry, Applied Microbiology Laboratory (Postal Code: 631-8505, Nakamachi, Nara City, 3327-204). According to the handling related to the sale at the "Japan Patent Microorganism Deposit Center", the sale specified in Article 27-3 of the Patent Law Enforcement Regulations is made and available.

前記AMOC2の微生物培養物によれば、前記分解活性の評価方法により、スチレンアクリル樹脂〔三笠産業株式会社供給〕の分解活性を測定した生分解率として、約45%の生分解率を達成することができ、当該微生物培養物非存在下の場合に比べ、安定的に、少なくとも約2.3mg/5mL/7日の生分解率を達成するという優れた性質を示す。   According to the microorganism culture of AMOC2, the biodegradation rate of about 45% is achieved as the biodegradation rate measured by the degradation activity evaluation method of the styrene acrylic resin [supplied by Mikasa Sangyo Co., Ltd.]. Compared to the absence of the microbial culture, the biodegradation rate is at least about 2.3 mg / 5 mL / 7, which is an excellent property.

前記AMOC2は、適切な希釈率で滅菌生理食塩水に希釈し、例えば、R2A平板培地〔組成:0.05重量% 酵母エキス、0.05重量% ペプトン、0.05重量% カザミノ酸、0.05重量% グルコース、0.05重量% 可溶性スターチ、0.03重量% K2HPO4、0.005重量% MgSO4・7H2O、0.03重量% ピルビン酸ナトリウム、1.5重量% 寒天;ディフコラボラトリーズ(Difco Laboratories)社製〕に塗布し、37℃で7〜14日間培養し、生じたコロニーを均一になるまで選択することにより、ルテイモナス スピーシーズ(Luteimonas sp.) Q−1、メソリゾビウム ロティ(Mesorhizobium loti) Q−2、Q−3株、Q−4株、前記シュードモナス ボレオポリス Q−5〔Pseudomonas boreopolis Q−5(受託番号:NITE P−80、受託日:2005年2月28日)〕及びアルカリジェネス スピーシーズ(Alcaligenes sp.) Q−6を含有することが確認される混合微生物の培養物である。 The AMOC2 is diluted in a sterilized physiological saline at an appropriate dilution rate, for example, R2A plate medium [composition: 0.05 wt% yeast extract, 0.05 wt% peptone, 0.05 wt% casamino acid, 0. 05 wt% glucose, 0.05 wt% soluble starch, 0.03 wt% K 2 HPO 4 , 0.005 wt% MgSO 4 .7H 2 O, 0.03 wt% sodium pyruvate, 1.5 wt% agar Applied to Difco Laboratories Co., Ltd., cultured at 37 ° C. for 7 to 14 days, and the resulting colonies were selected until they became homogeneous, so that Lutemonas sp. Q-1, Mesozobium Loti (Mesohizobium loti) Q-2, Q-3 strain, Q-4 strain, Pseudomona Boreopolis Q-5 [Pseudomonas boreeopolis Q-5 (Accession Number: NITE P-80, Accession Date: February 28, 2005)] and Alkaline Genes sp. Q-6 are confirmed to be contained It is a culture of mixed microorganisms.

なお、本発明においては、前記AMOC2に含まれる各微生物に代えて、該微生物と進化系統樹上近い位置にある微生物であって、前記分解活性の評価方法により、スチレンアクリル樹脂の分解活性が検出される微生物を用いることもできる。   In the present invention, instead of the microorganisms contained in the AMOC2, the microorganisms are close to the evolutionary tree with the microorganisms, and the degradation activity of the styrene acrylic resin is detected by the degradation activity evaluation method. It is also possible to use microorganisms.

ここで、前記ルテイモナス スピーシーズ(Luteimonas sp.) Q−1は、DNA Data Bank of Japan(DDBJ)に登録されている16S rDNAライブラリーに基づき、ルテイモナス スピーシーズ(Luteimonas sp.) TUT1238との相同性が、98.6%である。また、前記ルテイモナス スピーシーズ(Luteimonas sp.) Q−1は、グラム陰性の運動性を有する短桿菌であり、コロニーの特徴:粘質であり、オキシダーゼ 有、β−ガラクトシダーゼ 有、アルギニンジヒドロラーゼ 有、リジンデカルボキシラーゼ 無、オルニチンデカルボキシラーゼ 無、ウレアーゼ 無、トリプトファンデアミナーゼ 有、ゲラチナーゼ 有、クエン酸の利用 無、H2Sの産生 無、インドールの産生 無、アセトインの産生 有、グルコース資化性 無、D−マンニトール資化性 無、イノシトール資化性 無、L−ラムノース資化性 無、D−ソルビトール資化性 無、サッカロース資化性 無、D−メリビオース資化性 無、D−アミグダリン資化性 無、L−アラビノース資化性 無である。 Here, the above-mentioned Luteimonas sp. Q-1 is based on the 16S rDNA library registered in DNA Data Bank of Japan (DDBJ) and has a homology with Luteimonas sp. TUT1238. 98.6%. In addition, the above-mentioned Luteimonas sp. Q-1 is a short gonococcus having gram-negative motility, colony characteristics: mucus, oxidase, β-galactosidase, arginine dihydrolase, lysine Mu decarboxylase, Mu ornithine decarboxylase, urease Mu, tryptophan deaminase Yes, gelatinase Yes, Mu use of citric acid, Mu production of H 2 S, Mu production of indole, acetoin production Yes, Mu glucose assimilation, D- Mannitol assimilation, no inositol assimilation, no L-rhamnose assimilation, no D-sorbitol assimilation, no saccharose assimilation, no D-melibiose assimilation, no D-amygdalin assimilation, L-arabinose assimilation property None.

前記メソリゾビウム ロティ(Mesorhizobium loti) Q−2は、DDBJに登録されている16S rDNAライブラリーに基づき、メソリゾビウム ロティ(Mesorhizobium loti)との相同性が、98.6%である。また、前記メソリゾビウム ロティ(Mesorhizobium loti) Q−2は、グラム陰性の運動性を有する短桿菌であり、コロニーの特徴:赤色であり、オキシダーゼ 有、β−ガラクトシダーゼ 無、アルギニンジヒドロラーゼ 有、リジンデカルボキシラーゼ 無、オルニチンデカルボキシラーゼ 無、ウレアーゼ 有、トリプトファンデアミナーゼ 有、ゲラチナーゼ 無、クエン酸の利用 無、H2Sの産生 無、インドールの産生 無、アセトインの産生 有、グルコース資化性 無、D−マンニトール資化性 無、イノシトール資化性 無、L−ラムノース資化性 無、D−ソルビトール資化性 無、サッカロース資化性 無、D−メリビオース資化性 無、D−アミグダリン資化性 無、L−アラビノース資化性 無である。 The Mesozobium loti Q-2 is based on the 16S rDNA library registered in DDBJ, and has a homology of 98.6% with the Mesozobium loti (Mesohizobium loti). Further, the Mesohizobium loti Q-2 is a short gonococcus having gram-negative motility, and a colony characteristic: red, oxidase present, β-galactosidase absent, arginine dihydrolase present, lysine decarboxylase No, Mu ornithine decarboxylase, urease Yes, tryptophan deaminase Yes, Mu gelatinase, Mu use of citric acid, Mu production of H 2 S, Mu production of indole, acetoin production Yes, Mu glucose assimilative, D- mannitol No assimilation, no inositol assimilation, no L-rhamnose assimilation, no D-sorbitol assimilation, no saccharose assimilation, no D-melibiose assimilation, no D-amygdalin assimilation, L- No arabinose utilization.

前記Q−3は、DDBJに登録されている16S rDNAライブラリーに基づき、ロシャリメア エリザベザエ(Rochalimaea elizabethae)との相同性が、96.5%である。また、前記Q−3は、グラム陰性の運動性を有する短桿菌であり、コロニーの特徴:周縁部が緑色であり、オキシダーゼ 有、β−ガラクトシダーゼ 無、アルギニンジヒドロラーゼ 有、リジンデカルボキシラーゼ 無、オルニチンデカルボキシラーゼ 無、ウレアーゼ 無、トリプトファンデアミナーゼ 有、ゲラチナーゼ 無、クエン酸の利用 有、H2Sの産生 無、インドールの産生 無、アセトインの産生 有、グルコース資化性 無、D−マンニトール資化性 無、イノシトール資化性 無、L−ラムノース資化性 無、D−ソルビトール資化性 無、サッカロース資化性 無、D−メリビオース資化性 無、D−アミグダリン資化性 無、L−アラビノース資化性 無である。 Q-3 is based on a 16S rDNA library registered in DDBJ and has a homology of 96.5% with Rocharimaea elizabethee. Q-3 is a short gonococcus having gram-negative motility, colony characteristics: peripheral part is green, oxidase present, β-galactosidase absent, arginine dihydrolase present, lysine decarboxylase absent, ornithine Mu decarboxylase, Mu urease, tryptophan deaminase Yes, Mu gelatinase, use organic citric acid, Mu production of H 2 S, Mu production of indole, acetoin production Yes, Mu glucose assimilative, D- mannitol assimilation Mu , Inositol assimilation, no L-rhamnose assimilation, no D-sorbitol assimilation, no saccharose assimilation, no D-melibiose assimilation, no D-amygdalin assimilation, no L-arabinose assimilation Sex is nothing.

前記Q−4は、DDBJに登録されている16S rDNAライブラリーに基づき、ロシャリメア エリザベザエ(Rochalimaea elizabethae)との相同性が、96.6%である。また、前記Q−4は、グラム陰性の運動性を有する短桿菌であり、コロニーの特徴:周縁部が赤色であり、オキシダーゼ 有、β−ガラクトシダーゼ 無、アルギニンジヒドロラーゼ 有、リジンデカルボキシラーゼ 無、オルニチンデカルボキシラーゼ 無、ウレアーゼ 無、トリプトファンデアミナーゼ 有、ゲラチナーゼ 無、クエン酸の利用 有、H2Sの産生 無、インドールの産生 無、アセトインの産生 有、グルコース資化性 無、D−マンニトール資化性 無、イノシトール資化性 無、L−ラムノース資化性 無、D−ソルビトール資化性 無、サッカロース資化性 無、D−メリビオース資化性 無、D−アミグダリン資化性 無、L−アラビノース資化性 無である。 Q-4 is based on the 16S rDNA library registered in DDBJ and has a homology of 96.6% with Rocharimaea elizabethae. Q-4 is a short gonococcus having gram-negative motility, and the characteristics of the colony are red at the periphery, oxidase present, β-galactosidase absent, arginine dihydrolase present, lysine decarboxylase absent, ornithine Mu decarboxylase, Mu urease, tryptophan deaminase Yes, Mu gelatinase, use organic citric acid, Mu production of H 2 S, Mu production of indole, acetoin production Yes, Mu glucose assimilative, D- mannitol assimilation Mu , Inositol assimilation, no L-rhamnose assimilation, no D-sorbitol assimilation, no saccharose assimilation, no D-melibiose assimilation, no D-amygdalin assimilation, no L-arabinose assimilation Sex is nothing.

前記シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5は、前記と同様である。   The Pseudomonas boreopolis Q-5 is the same as described above.

前記アルカリジェネス スピーシーズ(Alcaligenes sp.) Q−6は、DDBJに登録されている16S rDNAライブラリーに基づき、アルカリジェネス スピーシーズ(Alcaligenes sp.) mp−2との相同性が、99.6%である。また、前記アルカリジェネス スピーシーズ(Alcaligenes sp.) Q−6は、グラム陰性の運動性を有する短桿菌であり、コロニーの特徴:無色であり、オキシダーゼ 有、β−ガラクトシダーゼ 無、アルギニンジヒドロラーゼ 有、リジンデカルボキシラーゼ 無、オルニチンデカルボキシラーゼ 有、ウレアーゼ 有、トリプトファンデアミナーゼ 有、ゲラチナーゼ 無、クエン酸の利用 有、H2Sの産生 無、インドールの産生 無、アセトインの産生 有、グルコース資化性 無、D−マンニトール資化性 無、イノシトール資化性 無、L−ラムノース資化性 無、D−ソルビトール資化性 無、サッカロース資化性 無、D−メリビオース資化性 無、D−アミグダリン資化性 無、L−アラビノース資化性 無である。 The Alkaline genes sp. Q-6 is based on the 16S rDNA library registered in DDBJ, and has a homology of 99.6% with Alkaline genes sp. Mp-2. . Alkaligene sp. Q-6 is a short gonococcus having gram-negative motility, colony characteristics: colorless, oxidase present, β-galactosidase absent, arginine dihydrolase present, lysine Mu decarboxylase, ornithine decarboxylase Yes, urease Yes, tryptophan deaminase Yes, Mu gelatinase, use organic citric acid, Mu production of H 2 S, Mu production of indole, acetoin production Yes, Mu glucose assimilation, D- Mannitol assimilation, no inositol assimilation, no L-rhamnose assimilation, no D-sorbitol assimilation, no saccharose assimilation, no D-melibiose assimilation, no D-amygdalin assimilation, L-arabinose assimilation property None.

本発明の微生物培養物は、炭素源として、前記スチレンアクリル樹脂等を含有し、窒素源として、例えば、NH4Cl、(NHSO、NHNO、(NHCO、(NHHPO、(NH)HPO等の存在下に維持されうる。前記窒素源は、微生物を生育させるに十分な窒素源を供給する観点から、好ましくは、0.5重量%以上、より好ましくは、0.6 重量%以上、さらに好ましくは、1.0重量%以上であり、微生物に十分な生育能を発揮させる観点から、好ましくは、3.0重量%以下、より好ましくは、1.7重量%以下、さらに好ましくは、1.2重量%以下であることが望ましい。また、炭素源/窒素源重量比(C/N比)は、炭素源と窒素源とのバランスを調整する観点から、好ましくは、40以上、より好ましくは、43以上、さらに好ましくは、48以上であり、微生物に十分な生育能を発揮させる観点から、好ましくは、60以下、より好ましくは、55以下、さらに好ましくは、50以下であることが望ましい。また、培地のpHは、好ましくは、pH6.5〜7.5、より好ましくは、pH6.9〜7.1であることが望ましい。本発明の微生物培養物は、前記の条件下、好ましくは、30〜40℃、より好ましくは、35〜37℃で、100〜150ストローク/分、好ましくは、110〜130ストローク/分培養することにより維持されうる。 The microorganism culture of the present invention contains the styrene acrylic resin or the like as a carbon source, and examples of the nitrogen source include NH 4 Cl, (NH 4 ) 2 SO 4 , NH 4 NO 3 , (NH 4 ) 2 CO. , (NH 4 ) 2 HPO 4 , (NH 4 ) H 2 PO 4 and the like. The nitrogen source is preferably 0.5% by weight or more, more preferably 0.6% by weight or more, and further preferably 1.0% by weight from the viewpoint of supplying a sufficient nitrogen source for growing microorganisms. From the viewpoint of exerting sufficient growth ability for the microorganism, it is preferably 3.0% by weight or less, more preferably 1.7% by weight or less, and still more preferably 1.2% by weight or less. Is desirable. The carbon source / nitrogen source weight ratio (C / N ratio) is preferably 40 or more, more preferably 43 or more, and still more preferably 48 or more, from the viewpoint of adjusting the balance between the carbon source and the nitrogen source. From the viewpoint of exerting sufficient growth ability for the microorganism, it is preferably 60 or less, more preferably 55 or less, and still more preferably 50 or less. Further, the pH of the medium is preferably pH 6.5 to 7.5, and more preferably pH 6.9 to 7.1. The microorganism culture of the present invention is cultured under the above conditions, preferably at 30 to 40 ° C., more preferably at 35 to 37 ° C., for 100 to 150 strokes / minute, preferably 110 to 130 strokes / minute. Can be maintained.

本発明の微生物培養物は、具体的には、前記FY培地、スチレンアクリル樹脂添加FY培地(組成:0.5重量%スチレンアクリル樹脂、1重量% NH4Cl、0.1重量% KH2PO4、0.05重量% K2HPO4、0.05重量% MgSO4・7H2O、0.2重量% NaCl、0.001重量% ZnCl2、0.001重量% FeSO4・7H2O、0.001重量% CaCl2、0.1重量% 酵母エキス)等により維持されうる。 Specifically, the microorganism culture of the present invention is prepared by using the FY medium, a styrene acrylic resin-added FY medium (composition: 0.5 wt% styrene acrylic resin, 1 wt% NH 4 Cl, 0.1 wt% KH 2 PO). 4 , 0.05 wt% K 2 HPO 4 , 0.05 wt% MgSO 4 .7H 2 O, 0.2 wt% NaCl, 0.001 wt% ZnCl 2 , 0.001 wt% FeSO 4 .7H 2 O 0.001 wt% CaCl 2 , 0.1 wt% yeast extract) and the like.

本発明は、別の側面では、スチレンアクリル樹脂の分解用組成物に関する。   In another aspect, the present invention relates to a composition for decomposing a styrene acrylic resin.

本発明の分解用組成物は、本発明の微生物培養物を含有する。したがって、本発明の分解用組成物によれば、樹脂、特に、スチレンアクリル樹脂を、CO2の発生を実質的に伴わずに、より高い効率で、より安定的に分解することができ、樹脂、特にスチレンアクリル樹脂を含む廃棄物中の未使用の有用金属、有用化合物等のリサイクルをより容易にすることができる。 The decomposition composition of the present invention contains the microorganism culture of the present invention. Therefore, according to the composition for decomposition of the present invention, a resin, in particular, a styrene acrylic resin can be decomposed more stably with higher efficiency without substantially generating CO 2. In particular, it is possible to make it easier to recycle unused useful metals, useful compounds, etc. in wastes containing styrene acrylic resin.

本発明の分解用組成物は、長期にわたって、微生物培養物を安定に保持させる観点から、微生物培養物を保持するに適した固定用担体をさらに含有してもよい。   The composition for decomposition of the present invention may further contain a fixing carrier suitable for holding a microbial culture from the viewpoint of stably holding the microbial culture for a long period of time.

前記固定用担体としては、微生物培養物に含まれる各微生物の生育を安定的に維持し、該生分解能を阻害しない担体であることが望ましく、長期にわたって、微生物培養物を安定に保持させる観点から、好ましくは、前記微生物により実質的に分解されない担体であることが望ましい。前記固定用担体としては、例えば、多孔質担体、不織布,活性炭、セラミックス、セルロース等が挙げられる。   The fixing carrier is preferably a carrier that stably maintains the growth of each microorganism contained in the microorganism culture and does not inhibit the biodegradability. From the viewpoint of stably holding the microorganism culture over a long period of time. Preferably, the carrier is not substantially decomposed by the microorganism. Examples of the fixing carrier include a porous carrier, a nonwoven fabric, activated carbon, ceramics, and cellulose.

また、本発明の分解用組成物は、微生物の培養に適した培地をさらに含有していてもよい。   Moreover, the composition for decomposition of the present invention may further contain a medium suitable for culturing microorganisms.

本発明の分解用組成物においては、本発明の微生物培養物を前記不溶性担体の表面に固定化してもよく、内部に固定化若しくは保持させてもよい。本発明の微生物培養物を、かかる担体の内部に固定化若しくは保持させる場合、前記微生物の生育に必要な各種栄養素、分解対象の樹脂、例えば、スチレンアクリル樹脂等の授受が可能な担体であることが望ましい。   In the composition for decomposition of the present invention, the microorganism culture of the present invention may be immobilized on the surface of the insoluble carrier, or may be immobilized or held inside. When the microorganism culture of the present invention is immobilized or held inside such a carrier, it is a carrier capable of giving and receiving various nutrients necessary for the growth of the microorganism and a resin to be decomposed, such as a styrene acrylic resin. Is desirable.

本発明の分解用組成物中に含まれる微生物細胞の数には、特に限定されるものではなく、微生物の生育状態、生分解能の発現の程度、当該分解用組成物の取り扱い方法等に応じて適宜設定されうる。   The number of microbial cells contained in the decomposition composition of the present invention is not particularly limited, depending on the growth state of the microorganism, the degree of expression of biodegradability, the method of handling the decomposition composition, etc. It can be set appropriately.

本発明は、他の側面では、(A)スチレンアクリル樹脂を含む生産物若しくは廃棄物と、(B)本発明の微生物培養物又は本発明の分解用組成物とを接触させることを特徴とする、スチレンアクリル樹脂の分解方法に関する。   In another aspect, the present invention is characterized by contacting (A) a product or waste containing a styrene acrylic resin with (B) the microbial culture of the present invention or the decomposition composition of the present invention. The present invention relates to a method for decomposing styrene acrylic resin.

なお、本明細書において、前記生産物は、樹脂、特に、スチレンアクリル樹脂を含む生産物をいい、具体的には、成型ようの型枠等が挙げられる。   In addition, in this specification, the said product says the product containing resin, especially a styrene acrylic resin, and specifically, a mold form etc. are mentioned.

本発明の分解方法は、本発明の微生物培養物又は本発明の分解用組成物が用いられていることに1つの大きな特徴がある。したがって、本発明の分解方法によれば、樹脂、特に、スチレンアクリル樹脂を、CO2の発生を実質的に伴わずに、より高い効率で、より安定的に分解することができる。また、本発明の分解方法によれば、樹脂、特にスチレンアクリル樹脂を含む廃棄物の処理に適用することにより、該廃棄物中の樹脂、特にスチレンアクリル樹脂を優先的に生分解し、残存する未使用の有用金属、有用化合物等を回収しやすい状態で分離及び/又は露呈させることができる。そのため、前記廃棄物中の未使用の有用金属、有用化合物等のリサイクルをより容易に行なうことが可能になる。 The degradation method of the present invention has one major feature in that the microorganism culture of the present invention or the degradation composition of the present invention is used. Therefore, according to the decomposition method of the present invention, a resin, particularly a styrene acrylic resin, can be decomposed more stably with higher efficiency without substantially generating CO 2 . Moreover, according to the decomposition method of the present invention, the resin, particularly styrene acrylic resin, in the waste is preferentially biodegraded and remains by applying it to the treatment of waste including resin, particularly styrene acrylic resin. Unused useful metals, useful compounds, etc. can be separated and / or exposed in a state where they can be easily recovered. Therefore, it becomes possible to more easily recycle unused useful metals and useful compounds in the waste.

本発明の分解方法においては、具体的には、本発明の微生物培養物又は本発明の分解用組成物を、前記生産物又は廃棄物の存在下に、スチレンアクリル樹脂の分解活性を発現させるに適した条件、例えば、本発明の微生物培養物に含まれる各微生物の維持に適した条件下に維持すること;本発明の微生物培養物又は本発明の分解用組成物を、前記生産物又は廃棄物に散布又は混合し、スチレンアクリル樹脂の分解活性を発現させるに適した条件、例えば、本発明の微生物培養物に含まれる各微生物の維持に適した条件下に維持すること等を行なえばよい。   In the decomposition method of the present invention, specifically, the microorganism culture of the present invention or the decomposition composition of the present invention is allowed to express the decomposition activity of the styrene acrylic resin in the presence of the product or waste. Maintaining the suitable conditions, for example, the conditions suitable for the maintenance of each microorganism contained in the microbial culture of the present invention; the microbial culture of the present invention or the decomposing composition of the present invention as the product or waste It may be dispersed or mixed with the product, and maintained under conditions suitable for expressing the degradation activity of the styrene acrylic resin, for example, conditions suitable for maintaining each microorganism contained in the microorganism culture of the present invention. .

前記廃棄物は、必要に応じ、適切な手段で粉砕して粉末状にしてもよく、本発明の微生物培養物の生育を妨げない適切な溶媒に溶解させてもよい。   If necessary, the waste may be pulverized by suitable means to form a powder, or may be dissolved in an appropriate solvent that does not hinder the growth of the microorganism culture of the present invention.

本発明の分解方法の適用の具体例としては、トナー、缶ラミネート、電子機器類の絶縁体、家電・自動車の廃棄物、産業廃棄物等の廃棄物の処理;樹脂、特に、スチレンアクリル樹脂を含む廃液の処理;前記廃棄物中からの有用金属や有用化合物の回収;スチレンアクリル樹脂等の樹脂を成型加工等の際に利用した場合、例えば、スチレンアクリル樹脂等の樹脂から製造された型枠に材料を入れ、成型させした場合の目的の成型物の回収の容易化等が挙げられる。   Specific examples of the application of the decomposition method of the present invention include treatment of waste such as toner, can laminate, electronic equipment insulators, home appliance / automobile waste, industrial waste, etc .; resin, particularly styrene acrylic resin Treatment of waste liquid containing; Recovery of useful metals and useful compounds from the waste; When a resin such as styrene acrylic resin is used for molding, for example, a mold made from a resin such as styrene acrylic resin For example, it is easy to recover the target molded product when the material is put in and molded.

本発明は、他の側面では、(a)スチレンアクリル樹脂と金属若しくは色素とを含む廃棄物と、(b)本発明の微生物培養物又は分解用組成物とを接触させ、廃棄物中のスチレンアクリル樹脂を分解させ、それにより、廃棄物中の金属又は色素を分離することを特徴とする、廃棄物中の金属又は色素の回収方法に関する。   In another aspect of the present invention, (a) a waste material containing a styrene acrylic resin and a metal or a pigment is contacted with (b) the microorganism culture or decomposition composition of the present invention, and styrene in the waste material is brought into contact. The present invention relates to a method for recovering a metal or a dye in waste, which comprises decomposing an acrylic resin and thereby separating the metal or the dye in the waste.

本発明の回収方法によれば、本発明の微生物培養物又は分解用組成物が用いられているため、スチレンアクリル樹脂と金属若しくは色素とを含む廃棄物中の樹脂、特にスチレンアクリル樹脂を優先的に生分解し、残存する未使用の有用金属、有用化合物等を回収しやすい状態で分離及び/又は露呈させることができる。そのため、前記廃棄物中の未使用の有用金属、有用化合物等を、周辺環境に対し低影響で、容易に、安価に回収することができ、前記有用金属、有用化合物等のリサイクルをより容易に行なうことが可能になる。
前記(a)の廃棄物と、前記(b)の微生物培養物又は分解用組成物との接触は、
1) 必要に応じ、廃棄物を適切な手段で粉砕して粉末状にし、あるいは本発明の微生物培養物の生育を妨げない適切な溶媒に廃棄物を溶解させるステップ、及び
2) 本発明の微生物培養物又は分解用組成物を、前記廃棄物の存在下に、スチレンアクリル樹脂の分解活性を発現させるに適した条件、例えば、本発明の微生物培養物に含まれる各微生物の維持に適した条件下に維持するステップ、又は、
2’)本発明の微生物培養物又は分解用組成物を、前記廃棄物に散布又は混合し、スチレンアクリル樹脂の分解活性を発現させるに適した条件、例えば、本発明の微生物培養物に含まれる各微生物の維持に適した条件下に維持するステップ、
により行なわれうる。
According to the recovery method of the present invention, since the microbial culture or decomposition composition of the present invention is used, the resin in the waste containing the styrene acrylic resin and the metal or the pigment, particularly the styrene acrylic resin is preferentially used. It is possible to separate and / or expose the remaining unused useful metals, useful compounds and the like in a state where they can be easily recovered. Therefore, unused useful metals, useful compounds, etc. in the waste can be easily and inexpensively recovered with low impact on the surrounding environment, and recycling of the useful metals, useful compounds, etc. can be made easier. It becomes possible to do.
Contact between the waste of (a) and the microbial culture or decomposition composition of (b)
1) if necessary, pulverizing the waste by appropriate means to form a powder, or dissolving the waste in an appropriate solvent that does not interfere with the growth of the microbial culture of the present invention; and 2) the microorganism of the present invention. Conditions suitable for expressing the degradation activity of the styrene acrylic resin in the presence of the waste, such as conditions suitable for maintaining each microorganism contained in the microorganism culture of the present invention The step to keep down, or
2 ′) The microorganism culture or decomposition composition of the present invention is dispersed or mixed with the waste, and is included in conditions suitable for expressing the decomposition activity of the styrene acrylic resin, for example, included in the microorganism culture of the present invention. Maintaining under conditions suitable for the maintenance of each microorganism,
It can be done by.

廃棄物中に含まれるスチレンアクリル樹脂の分解後の産物は、スチレンアクリル樹脂から構成される成分が実質的に除去されている。したがって、前記産物から、回収対象の金属又は色素を、慣用の分画法、酸アルカリ処理、沈殿、有機溶媒抽出、遠心分離、各種クロマトグラフィー等で容易に回収することができる。   In the product after decomposition of the styrene acrylic resin contained in the waste, the components composed of the styrene acrylic resin are substantially removed. Therefore, the metal or pigment to be recovered can be easily recovered from the product by a conventional fractionation method, acid-alkali treatment, precipitation, organic solvent extraction, centrifugation, various chromatographies, and the like.

以下、本発明を実施例に基づき詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated in detail based on an Example, this invention is not limited to these Examples.

スチレンアクリル樹脂分解微生物のスクリーニング
終濃度5g/Lになるようにジクロロメタンにスチレンアクリル樹脂〔三笠産業株式会社、トナーインク用スチレンアクリル樹脂〕を溶解し、得られた溶液 1mLを試験管に分注した。その後、ドラフト内で前記試験管を風乾させた。
Screening for styrene acrylic resin-degrading microorganisms Styrene acrylic resin (Mikasa Sangyo Co., Ltd., styrene acrylic resin for toner ink) was dissolved in dichloromethane to a final concentration of 5 g / L, and 1 mL of the resulting solution was dispensed into a test tube. . Thereafter, the test tube was air-dried in a fume hood.

前記試験管に、FY培地〔組成:1重量% NH4Cl、0.1重量% KH2PO4、0.05重量% K2HPO4、0.05重量% MgSO4・7H2O、0.2重量% NaCl、0.001重量% ZnCl2、0.001重量% FeSO4・7H2O、0.001重量% CaCl2、0.1重量% 酵母エキス〕 5mLを添加し、121℃20分間高圧滅菌した。 In the test tube, FY medium [Composition: 1 wt% NH 4 Cl, 0.1 wt% KH 2 PO 4 , 0.05 wt% K 2 HPO 4 , 0.05 wt% MgSO 4 .7H 2 O, 0 2 wt% NaCl, 0.001 wt% ZnCl 2 , 0.001 wt% FeSO 4 .7H 2 O, 0.001 wt% CaCl 2 , 0.1 wt% yeast extract] Autoclaved for minutes.

近畿大学農学部構内土壌、奈良県山中の土壌、石川県内の土壌、和歌山県から採取した海水、大阪府沿岸から採取した海水、近畿大学農学部応用微生物学研究室保存の重油分解微生物群及びコンポストのそれぞれを試料として用いた。前記土壌は、生理食塩水に懸濁後、超音波処理〔28kHz〕で均一に分散させて、試料とした。また、海水は、そのまま試料として用いた。さらに、コンポストは、生理食塩水に懸濁後、超音波処理〔28kHz〕で均一に分散させて、試料とした。   Kinki University, Faculty of Agriculture, Soil in the mountains of Nara Prefecture, Soil in Ishikawa Prefecture, Seawater collected from Wakayama Prefecture, Seawater collected from the coast of Osaka Prefecture, Heavy Oil Decomposing Microorganisms Group and Compost preserved by Applied Microbiology Laboratory Was used as a sample. The soil was suspended in physiological saline and then uniformly dispersed by ultrasonic treatment [28 kHz] to prepare a sample. Seawater was used as a sample as it was. Further, the compost was suspended in physiological saline and then uniformly dispersed by ultrasonic treatment [28 kHz] to prepare a sample.

各試料を、前記高圧滅菌後の試験管に接種し、37℃、125ストローク/分で振とう培養を行なった。なお、スチレンアクリル樹脂を分解する微生物を含む試料は、培養前において試験管壁にフィルム状に付着していたスチレンアクリル樹脂が培養液中に均一に分散し、菌が良好に生育して培養液が白濁することを指標として選抜した。スチレンアクリル樹脂を分解する微生物を含む試料の集積培養液の一部を新たなFY培地に移し、継代培養を重ねた。   Each sample was inoculated into the test tube after high-pressure sterilization, and cultured with shaking at 37 ° C. and 125 strokes / min. Samples containing microorganisms that degrade styrene-acrylic resin are those in which the styrene-acrylic resin that has adhered to the test tube wall in the form of a film before culturing is uniformly dispersed in the culture solution, so that the bacteria grow well and the culture solution Was selected as an index. A part of the enrichment culture solution of the sample containing microorganisms that decompose styrene acrylic resin was transferred to a new FY medium, and subculture was repeated.

その結果、スクリーニングした試料のうち、コンポストに由来する試料について、図1に示されるように、試験管壁面に付着していたスチレンアクリル樹脂が、培養液中に均一に分散され、培養液が白濁した。かかる安定してスチレンアクリル樹脂を分解する微生物を含む培養物を、AMOC2という。なお、前記AMOC2は、AMOC2と命名・表示され、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター〔郵便番号292−0818 千葉県木更津市かずさ鎌足2−5−8〕において、受託番号:NITE P−80として、2005年2月28日(受託日)に寄託されている。   As a result, among the screened samples, with respect to the samples derived from compost, as shown in FIG. 1, the styrene acrylic resin adhering to the test tube wall was uniformly dispersed in the culture solution, and the culture solution became cloudy. did. Such a culture containing microorganisms that stably decompose styrene acrylic resin is referred to as AMOC2. The AMOC2 is named and displayed as AMOC2, and is registered at the Patent Microorganism Depositary Center of the National Institute of Technology and Evaluation [Zip No. 292-0818, 2-5-8, Kazusa Kamashichi, Kisarazu City, Chiba Prefecture]. Deposited as P-80 on February 28, 2005 (date of trust).

得られたAMOC2を、滅菌生理食塩水で10倍段階希釈し、R2A平板培地〔組成:0.05重量% 酵母エキス、0.05重量% ペプトン、0.05重量% カザミノ酸、0.05重量% グルコース、0.05重量% 可溶性スターチ、0.03重量% K2HPO4、0.005重量% MgSO4・7H2O、0.03重量% ピルビン酸ナトリウム、1.5重量% 寒天;ディフコラボラトリーズ(Difco Laboratories)社製〕に塗布し、37℃で7〜14日間培養した。その後、生じたコロニーの中から形態の異なるコロニーを選抜し、さらに、均一になるまで選抜した。 The obtained AMOC2 was diluted 10-fold with sterilized physiological saline, and R2A plate medium [composition: 0.05% by weight yeast extract, 0.05% by weight peptone, 0.05% by weight casamino acid, 0.05% by weight] % Glucose, 0.05 wt% Soluble starch, 0.03 wt% K 2 HPO 4 , 0.005 wt% MgSO 4 .7H 2 O, 0.03 wt% Sodium pyruvate, 1.5 wt% Agar; Diff The product was applied to a laboratory (Difco Laboratories) and cultured at 37 ° C. for 7 to 14 days. Thereafter, colonies with different morphologies were selected from the resulting colonies and further selected until they became uniform.

その結果、図2に示される6種類のコロニーの微生物が得られた。   As a result, 6 types of colony microorganisms shown in FIG. 2 were obtained.

AMOC2の性質検討
前記実施例1で得られた各微生物を、終濃度5g/Lのスチレンアクリル樹脂を含有したFY培地〔組成:1重量% NH4Cl、0.1重量% KH2PO4、0.05重量% K2HPO4、0.05重量% MgSO4・7H2O、0.2重量% NaCl、0.001重量% ZnCl2、0.001重量% FeSO4・7H2O、0.001重量% CaCl2、0.1重量% 酵母エキス〕に接種し、37℃で7日間培養した。
Examination of AMOC2 Properties Each microorganism obtained in Example 1 was treated with an FY medium containing a styrene acrylic resin having a final concentration of 5 g / L [composition: 1 wt% NH 4 Cl, 0.1 wt% KH 2 PO 4 , 0.05 wt% K 2 HPO 4 , 0.05 wt% MgSO 4 .7H 2 O, 0.2 wt% NaCl, 0.001 wt% ZnCl 2 , 0.001 wt% FeSO 4 .7H 2 O, 0 .001 wt% CaCl 2 , 0.1 wt% yeast extract] and cultured at 37 ° C. for 7 days.

培養後の各微生物を集菌し、滅菌水で洗浄した。その後、凍結融解により、各菌体を破砕し、破砕した菌体をTE緩衝液〔組成:100mM Tris−HCl、40mM EDTA(pH8.0)〕 500μLに懸濁した。得られた懸濁液に、ドデシル硫酸ナトリウム(200g/L,和光純薬株式会社)溶液 50μLと塩化ベンジル 300μLとを添加し、攪拌した。   Each microorganism after the culture was collected and washed with sterilized water. Thereafter, each microbial cell was crushed by freezing and thawing, and the crushed microbial cell was suspended in 500 μL of TE buffer (composition: 100 mM Tris-HCl, 40 mM EDTA (pH 8.0)). To the resulting suspension, 50 μL of sodium dodecyl sulfate (200 g / L, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) solution and 300 μL of benzyl chloride were added and stirred.

その後、得られた産物を、50℃ウォーターバス中で5分毎に攪拌しがら60分間インキュベーションした。インキュベーション後に得られた産物に、ジルコニア/シリカ混合ビーズ〔外径0.1mm、バイオスペック プロダクツ インコーポレーティッド(BIOSPEC PRODUCTS INC.)〕 100mgを添加し、ボルテックスで10秒間攪拌した。得られた産物に、3.0M NaOAc(pH5.0) 300μLを添加し、氷水中で30分間静置し、その後、17400×g、20℃で10分間遠心分離し、上清を回収した。   Thereafter, the obtained product was incubated for 60 minutes in a 50 ° C. water bath with stirring every 5 minutes. To the product obtained after the incubation, 100 mg of zirconia / silica mixed beads (outer diameter 0.1 mm, Biospec Products Inc.) was added, and the mixture was vortexed for 10 seconds. To the obtained product, 300 μL of 3.0 M NaOAc (pH 5.0) was added, and the mixture was allowed to stand in ice water for 30 minutes, and then centrifuged at 17400 × g and 20 ° C. for 10 minutes to recover the supernatant.

得られた上清に、TE飽和フェノール溶液 600μLを添加し、17400×g、20℃で10分間遠心分離して、フェノール層を除去した。得られた水層にフェノール−クロロホルム−イソアミルアルコール(50:49:1)(以下、PCI) 600μLを添加し、17400×g、20℃で10分間遠心分離し、上層(水層)を回収した。回収した水層に、クロロホルム:イソアミルアルコール/24:1(v/v)(CIA) 600μLを添加し、17400×g、20℃で10分間遠心分離して、その上清を回収した。   To the obtained supernatant, 600 μL of TE saturated phenol solution was added, and centrifuged at 17400 × g and 20 ° C. for 10 minutes to remove the phenol layer. To the resulting aqueous layer, 600 μL of phenol-chloroform-isoamyl alcohol (50: 49: 1) (hereinafter, PCI) was added, and centrifuged at 17400 × g, 20 ° C. for 10 minutes to recover the upper layer (aqueous layer). . To the recovered aqueous layer, 600 μL of chloroform: isoamyl alcohol / 24: 1 (v / v) (CIA) was added and centrifuged at 17400 × g and 20 ° C. for 10 minutes to recover the supernatant.

得られた上清に、2−プロパノール 600μLを添加し、4℃で10分間静置した。その後、得られた産物を、17400×g、20℃で20分間遠心分離して、上清を除去した。得られた沈殿物を、70%(v/v) エタノール 800μLで洗浄後、該エタノールを除去して沈殿物を風乾させた。得られた産物を滅菌水 20mLに溶解し、DNA溶液を得た。得られたDNA溶液を、滅菌水で50倍希釈し、得られた溶液について、260nmにおける吸光度を、分光光度計〔商品名:DU.Series 650、ベックマン(BECKMAN)社製〕で測定し、DNA濃度を求めた。得られたDNAを、鋳型DNAを用いた。   To the obtained supernatant, 600 μL of 2-propanol was added and allowed to stand at 4 ° C. for 10 minutes. Thereafter, the obtained product was centrifuged at 17400 × g and 20 ° C. for 20 minutes, and the supernatant was removed. The obtained precipitate was washed with 800 μL of 70% (v / v) ethanol, and then the ethanol was removed and the precipitate was air-dried. The obtained product was dissolved in 20 mL of sterilized water to obtain a DNA solution. The obtained DNA solution was diluted 50 times with sterilized water, and the absorbance at 260 nm of the obtained solution was measured with a spectrophotometer [trade name: DU. Series 650, manufactured by Beckman Co., Ltd.] to determine the DNA concentration. The obtained DNA was used as template DNA.

前記鋳型DNAを用い、PCR法により、16S rDNAのV3領域(大腸菌の16S rDNAの341位〜536位に相当)にあたる200bpの塩基配列を増幅した。具体的には、商品名:MyCycler Thermal Cycler〔バイオラッド(BIO RAD)社製〕を用い、10×Gold Taq buffer〔商品名、アプライドバイオシステムズ(Applied Biosystems)製〕 5μLと、2.0mM dNTP混合物〔アプライドバイオシステムズ(Applied Biosystems)社製〕 5μLと、25mM MgCl2〔アプライドバイオシステムズ(Applied Biosystems)社製〕 6μLと、フォワードプライマー GC−341F:5'-CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGTCCCGCCGCCCCCGCCCGCCTACGGGAGGCAGCAG-3'(10pmol/μL、シグマジェノシス社製、配列番号:1) 1μLとリバースプライマー 534R〔5'-ATTACCGCGGCTGCTGG-3'(10pmol/μL、シグマジェノシス社製、配列番号:2) 1μLと、50ng相当量の鋳型DNAと、商品名:AmpliTaq Gold〔5U/μL、アプライドバイオシステムズ(Applied Biosystems)社製〕 0.2μLと、滅菌水 残部とを含む反応液 50μL中でPCRを行なった。 Using the template DNA, a 200 bp base sequence corresponding to the V3 region of 16S rDNA (corresponding to positions 341 to 536 of E. coli 16S rDNA) was amplified by PCR. Specifically, using a product name: MyCycler Thermal Cycler (manufactured by BioRad (BIO RAD)), 10 × Gold Taq buffer (trade name, manufactured by Applied Biosystems) 5 μL and 2.0 mM dNTP mixture [Applied Biosystems (Applied Biosystems)] 5 μL, 25 mM MgCl 2 [Applied Biosystems (Applied Biosystems) 6 μL, forward primer GC-341F: 5′-CGCCCGCCGCGCCCCGGGCCCGCCCCGCCGCCCCCG Genosys, SEQ ID NO: 1) 1 μL and reverse primer 534R [5′-ATTACCGCGGCTGCTGG-3 ′ (10 pmol / μL, Sigma Genosys) SEQ ID NO: 2) Reaction solution containing 1 μL, 50 ng equivalent amount of template DNA, AmpliTaq Gold [5 U / μL, Applied Biosystems, Inc.] 0.2 μL, and the remainder of sterile water PCR was performed in 50 μL.

PCRのサーマルプロファイルは、95℃で10分間のインキュベーション後、93℃で60秒の熱変性と48℃で70秒のアニーリングと、72℃で70秒の伸長とを1サイクルとする25サイクル、72℃で5分のインキュベーションとした。   The PCR thermal profile consists of 25 cycles of 10 cycles of incubation at 95 ° C. followed by one cycle of heat denaturation at 93 ° C. for 60 seconds, annealing at 48 ° C. for 70 seconds, and extension at 72 ° C. for 70 seconds. Incubation at 5 ° C. for 5 minutes.

得られた産物を、アガロースゲル電気泳動に供し、目的配列の増幅を確認した。得られた産物を、商品名:QIAEXII Gel Extraction Kit〔キアジェン(QIAGEN)社製〕に供して濃縮し、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動(DGGE)解析対象試料を得た。   The obtained product was subjected to agarose gel electrophoresis to confirm amplification of the target sequence. The obtained product was subjected to a product name: QIAEXII Gel Extraction Kit (manufactured by QIAGEN) and concentrated to obtain a denaturant gradient gel electrophoresis (DGGE) analysis target sample.

ついで、得られたDGGE解析対象試料について、商品名:Dcode system 6〔バイオラッドラボラトリー(Bio−Rad Lab.)製〕を用いて、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動を行なった。   Subsequently, denaturant concentration gradient gel electrophoresis was performed on the obtained DGGE analysis target sample using a trade name: Dcode system 6 (manufactured by Bio-Rad Lab.).

変性剤濃度勾配は、7.0M 尿素〔バイオラッドラボラトリー(Bio−Rad Lab.)製〕と40%(v/v) ホルムアミド〔バイオラッドラボラトリー(Bio−Rad Lab.)製〕とを含む変性剤を、濃度100%として、電気泳動方向に20%〜50%となるように調整した。また、アクリルアミド〔バイオラッドラボラトリー(Bio−Rad Lab.)製〕濃度が、電気泳動方向に6〜9%(v/v)となるように勾配させたポリアクリルアミドゲルを用いた。泳動条件は、電圧200V、泳動時間6時間、泳動温度61℃とし、泳動用緩衝液として、0.5×TAE緩衝液を用いた。   Denaturant gradient includes 7.0M urea (Bio-Rad Lab.) And 40% (v / v) formamide (Bio-Rad Lab.). Was adjusted to 20% to 50% in the electrophoresis direction, with a concentration of 100%. In addition, a polyacrylamide gel in which the concentration of acrylamide (manufactured by Bio-Rad Lab.) Was 6 to 9% (v / v) in the electrophoresis direction was used. The electrophoresis conditions were a voltage of 200 V, a migration time of 6 hours, a migration temperature of 61 ° C., and 0.5 × TAE buffer was used as a migration buffer.

泳動終了後、ゲルを、商品名:Syber Gold(タカラバイオ株式会社製)で30分間染色した。その後、ゲルに、紫外線(310nm)を照射し、染色されたDNAに基づく励起光を、商品名:Kodak Gel Logic 200 Imaging System〔コダック(Kodak)社製〕と商品名:KODAK GL Filter〔SYBR Green/SYBR Gold用、コダック(Kodak)社製〕とを用いて撮影した。結果を図3に示す。   After completion of the electrophoresis, the gel was stained with a trade name: Syber Gold (manufactured by Takara Bio Inc.) for 30 minutes. Thereafter, the gel was irradiated with ultraviolet rays (310 nm), and excitation light based on the stained DNA was subjected to trade name: Kodak Gel Logic 200 Imaging System (manufactured by Kodak) and trade name: KODAK GL Filter (SYBR Green). For SYBR Gold, manufactured by Kodak Co., Ltd.]. The results are shown in FIG.

図3に示されるように、AMOC2から、複数のDNAバンドが確認され、Q−1〜Q−6のDNAバンドは、AMOC2に由来するDNAバンドにそれぞれ帰属することができた。   As shown in FIG. 3, a plurality of DNA bands were confirmed from AMOC2, and the DNA bands Q-1 to Q-6 could be attributed to the DNA bands derived from AMOC2, respectively.

また、前記Q−1〜Q−6に由来する鋳型DNAを用い、以下のように、PCRにより、16S rDNAの塩基配列の解析を行なった。   Further, the base sequence of 16S rDNA was analyzed by PCR using the template DNA derived from Q-1 to Q-6 as follows.

商品名:MyCycler Thermal Cycler〔バイオラッド(BIO RAD)社製〕を用い、10×Gold Taq buffer〔商品名、アプライドバイオシステムズ(Applied Biosystems)製〕 5μLと、各2.0mMのdNTP混合物 5μLと、25mM MgCl2 6μLと、フォワードプライマー27f:5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'(10pmol/μL、東亜合成株式会社製、配列番号:3) 1μLと、リバースプライマー1525r:5'-AAAGGAGGTGATCCAGCC-3'(10pmol/μL、東亜合成株式会社製、配列番号:4) 1μLと、50ng相当量の前記鋳型DNAと、商品名:AmpliTaq Gold〔5U/μL、アプライドバイオシステムズ(Applied Biosystems)社製〕 0.5μLと、滅菌水 残部とを含む反応液 50μL中でPCR反応液とした。 Using a product name: MyCycler Thermal Cycler (manufactured by BioRad (BIO RAD)), 5 μL of 10 × Gold Taq buffer (trade name, Applied Biosystems) and 2.0 μm each of dNTP mixture 5 μL, 6 μL of 25 mM MgCl 2 and forward primer 27f: 5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ′ (10 pmol / μL, manufactured by Toagosei Co., Ltd., SEQ ID NO: 3) 1 μL and reverse primer 1525r: 5′-AAAGGAGGTGATCCAGCC-3 ′ (10 pmol / μL, manufactured by Toa Gosei Co., Ltd., SEQ ID NO: 4) 1 μL, 50 ng equivalent amount of the template DNA, and trade name: AmpliTaq Gold [5 U / μL, manufactured by Applied Biosystems] 0.5 μL And a PCR reaction solution in the reaction solution 50μL containing the sterile water balance.

PCRのサーマルプロファイルは、94℃で7分間のインキュベーション後、94℃で45秒の熱変性と55℃で45秒のアニーリングと、72℃で45秒の伸長とを1サイクルとする25サイクル、72℃で10分のインキュベーションとした。得られた産物を、アガロースゲル電気泳動に供し、目的配列の増幅を確認した。得られた産物を、1.5重量% 低融点アガロースゲル〔バイオプロダクツ(BioProducts)製〕を用いて精製し、滅菌水 20μLに溶解し、シークエンス用試料を得た。   The PCR thermal profile consists of 25 cycles of 7 minutes incubation at 94 ° C. followed by 45 cycles of heat denaturation at 94 ° C. for 45 seconds, annealing at 55 ° C. for 45 seconds, and extension at 72 ° C. for 45 seconds, 72 Incubation was at 10 ° C. for 10 minutes. The obtained product was subjected to agarose gel electrophoresis to confirm amplification of the target sequence. The obtained product was purified using 1.5 wt% low melting point agarose gel (manufactured by BioProducts) and dissolved in 20 μL of sterilized water to obtain a sample for sequencing.

前記シークエンス用試料を用い、ダイレクトシーケンスを行なった。伸長反応には、商品名:DYEnamic ET Terminator Cycle Sequencing Kit〔アマシャムバイオサイエンシーズ(Amersham Biosciences)社製〕を用い、下記16S rDNAシークエンスプライマー:
f1L フォワードプライマー 9−27 5'-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'(配列番号:5)、
f2L フォワードプライマー 518−536 5'-CCAGCAGCCGCGGTAATAC-3'(配列番号:6)、
f2.5L フォワードプライマー 776−795 5'-AGCAAACAGGATTAGATACC-3'(配列番号:7)、
f3L フォワードプライマー 1093−1111 5'-GTCCCGCAACGAGCGCAAC-3'(配列番号:8)、
r1L リバースプライマー 535−517 5'-GTATTACCGCGGCTGCTGG-3'(配列番号:9)、
r2L リバースプライマー 804−785 5'-GACTACCAGGGTATCTAATC-3'(配列番号:10)、
r3L リバースプライマー 1110−1092 5'-TTGCGCTCGTTGCGGGACT-3'(配列番号:11)、
r4L リバースプライマー 1405−1388 5'-ACGGGCGGTGTGTACAAG-3'(配列番号:12)、
rE1L リバースプライマー 344−326 5'-GTAGGAGTCTGGACCGTGT-3'(配列番号:13)、
を用いた。なお、シークエンス反応の条件は、95℃20秒と50℃15秒と60℃1分とを1サイクルとする30サイクルとした。ついで、DNAシーケンサー〔商品名:ABI PRISM 3100 DNA Sequencer、アプライドバイオシステムズ(Applied Biosystems)社製〕を用いて、各試料を解析した。
Direct sequencing was performed using the sequencing sample. For the extension reaction, a trade name: DYEamic ET Terminator Cycle Sequencing Kit (manufactured by Amersham Biosciences) was used, and the following 16S rDNA sequence primer:
f1L forward primer 9-27 5′-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ′ (SEQ ID NO: 5),
f2L forward primer 518-536 5′-CCAGCAGCCGCGGTAATAC-3 ′ (SEQ ID NO: 6),
f2.5L forward primer 776-795 5'-AGCAAACAGGATTAGATACC-3 '(SEQ ID NO: 7),
f3L forward primer 1093-1111 5′-GTCCCGCAACGAGCGCAAC-3 ′ (SEQ ID NO: 8),
r1L reverse primer 535-517 5′-GTATTACCGCGGCTGCTGG-3 ′ (SEQ ID NO: 9),
r2L reverse primer 804-785 5′-GACTACCAGGGTATCTAATC-3 ′ (SEQ ID NO: 10),
r3L reverse primer 1110-1092 5′-TTGCGCTCGTTGCGGGACT-3 ′ (SEQ ID NO: 11),
r4L reverse primer 1405-1388 5′-ACGGGCGGTGTGTACAAG-3 ′ (SEQ ID NO: 12),
rE1L reverse primer 344-326 5′-GTAGGAGTCTGGACCGTGT-3 ′ (SEQ ID NO: 13),
Was used. The sequence reaction conditions were 30 cycles with 95 ° C. for 20 seconds, 50 ° C. for 15 seconds and 60 ° C. for 1 minute as one cycle. Subsequently, each sample was analyzed using a DNA sequencer (trade name: ABI PRISM 3100 DNA Sequencer, Applied Biosystems).

得られた解析対象の16S rDNAの塩基配列について、DNA Data Bank of Japan(DDBJ)のデータベースに登録されている16S rDNAライブラリーについて、BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)を用い、検索対象Division バクテリア、GAP計算あり、期待値10、その他パラメータ デフォルト値の条件で、相同性の高い菌株を検索した。   About the obtained 16S rDNA base sequence to be analyzed, BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) is used for the 16S rDNA library registered in the database of DNA Data Bank of Japan (DDBJ), and the search target division bacteria, A strain with high homology was searched under the conditions of GAP calculation, expected value 10 and other parameters default values.

その結果、前記Q−1は、ルテイモナス スピーシーズ(Luteimonas sp.) TUT1238と98.6%の相同性、前記Q−2は、メソリゾビウム ロティ(Mesorhizobium loti)と98.6%の相同性、前記Q−3は、ロシャリメア エリザベザエ(Rochalimaea elizabethae)と96.5%の相同性、前記Q−4は、ロシャリメア エリザベザエ(Rochalimaea elizabethae)と96.6%の相同性、前記Q−5は、シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis)と99.5%の相同性、前記Q−6は、アルカリジェネス スピーシーズ(Alcaligenes sp.) mp−2と99.6%の相同性を示した。   As a result, the Q-1 was 98.6% homologous with the Luteimonas sp. TUT1238, the Q-2 was 98.6% homologous with the Mesohizobium loti, the Q- 3 is 96.5% of homology with Rocharimaea elizabethae, and Q-4 is 96.6% of homology with Rochalimaea elisabethee, and Q-5 is p ) And 99.5% homology, and Q-6 showed 99.6% homology with Alcaligenes sp. Mp-2.

そこで、前記Q−1を、ルテイモナス スピーシーズ(Luteimonas sp.) Q−1、前記Q−2を、メソリゾビウム ロティ(Mesorhizobium loti) Q−2、前記Q−5を、シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5、前記Q−6を、アルカリジェネス スピーシーズ(Alcaligenes sp.) Q−6とした。   Therefore, Q-1 is referred to as Luteimonas sp. Q-1, Q-2 as Mesohizobium loti Q-2, Q-5 as Pseudomonas boreopolis Q-, Pseudomonas boreeopolis Q-. The above Q-6 was designated as Alcaligenes sp. Q-6.

ついで、前記Q−1〜Q−6について、慣用の手法により、形態学的、生理生化学的特徴を調べた。前記Q−1〜Q−6について、位相差顕微鏡〔株式会社ニコン製〕で観察して、運動性を検討した。また、グラム染色とオキシターゼテストは、ホルムス(B.Holmes)ら〔International Journal of Systematic Bacteriology、第38巻、第406頁〜第416頁、(1988)〕に従って行なった。   Subsequently, the morphological and physiological biochemical characteristics of Q-1 to Q-6 were examined by a conventional method. About said Q-1-Q-6, it observed with the phase-contrast microscope [made by Nikon Corporation], and examined the mobility. In addition, Gram staining and oxidase test were performed according to B. Holmes et al. [International Journal of Systemic Bacteriology, 38, 406-416, (1988)].

その結果、Q−1、Q−2、Q−3、Q−4、Q−5及びQ−6は、全て運動性を有するグラム陰性の短桿菌であった。   As a result, Q-1, Q-2, Q-3, Q-4, Q-5 and Q-6 were all Gram-negative short bacillus having motility.

また、その他の生理・生化学的性状は、商品名:Api 20E同定キット〔バイオメリオ(BioMerieux)製〕を用いて検討した。表1に生理・生化学的性質を示す。   Further, other physiological and biochemical properties were examined using a trade name: Api 20E identification kit [manufactured by BioMerieux]. Table 1 shows the physiological and biochemical properties.

スチレンアクリル樹脂の分解活性
終濃度5g/Lになるようにジクロロメタンに、前記スチレンアクリル樹脂〔三笠産業株式会社、トナーインク用スチレンアクリル樹脂〕を溶解し、得られた溶液 1mLを試験管に分注した。その後、ドラフト内で前記試験管を風乾させた。
Decomposition activity of styrene acrylic resin Dissolve the styrene acrylic resin (Mikasa Sangyo Co., Ltd., styrene acrylic resin for toner ink) in dichloromethane to a final concentration of 5 g / L, and dispense 1 mL of the resulting solution into a test tube. did. Thereafter, the test tube was air-dried in a fume hood.

前記試験管に、FY培地〔組成:1重量% NH4Cl、0.1重量% KH2PO4、0.05重量% K2HPO4、0.05重量% MgSO4・7H2O、0.2重量% NaCl、0.001重量% ZnCl2、0.001重量% FeSO4・7H2O、0.001重量% CaCl2、0.1重量% 酵母エキス〕 5mLを添加し、121℃20分間高圧滅菌した。 In the test tube, FY medium [Composition: 1 wt% NH 4 Cl, 0.1 wt% KH 2 PO 4 , 0.05 wt% K 2 HPO 4 , 0.05 wt% MgSO 4 .7H 2 O, 0 2 wt% NaCl, 0.001 wt% ZnCl 2 , 0.001 wt% FeSO 4 .7H 2 O, 0.001 wt% CaCl 2 , 0.1 wt% yeast extract] Autoclaved for minutes.

ついで、AMOC2、Q−1〜Q−6のそれぞれを前記高圧滅菌後の試験管に接種し、37℃、125ストローク/分で振とう培養を行なった。なお、対照として、近畿大学農学部応用微生物学研究室に保存されているポリエステル化合物分解微生物群AMOC001を用いた。   Subsequently, each of AMOC2, Q-1 to Q-6 was inoculated into the test tube after autoclaving, and cultured with shaking at 37 ° C. and 125 strokes / min. As a control, a polyester compound-degrading microorganism group AMOC001 stored in the Applied Microbiology Laboratory of the Faculty of Agriculture, Kinki University was used.

7日間培養後に得られた培養液に残存するスチレンアクリル樹脂及びそれに由来する分解生成物をジクロロメタンで抽出し、ヘキサトリアコンタン〔内部標準物質、シグマ−アルドリッヒ(Sigma−Aldrich)社製〕を添加し、エバポレーターで減圧乾固させた。得られた乾固物を、ヘキサン:トルエン/2:8(体積比) 5mLに溶解した。   The styrene acrylic resin remaining in the culture broth obtained after 7 days of culture and the degradation products derived from it are extracted with dichloromethane, and hexatriacontane (internal standard, Sigma-Aldrich) is added. And dried under reduced pressure using an evaporator. The obtained dried product was dissolved in 5 mL of hexane: toluene / 2: 8 (volume ratio).

得られた試料 1μLを、の石英ガラスの周りにシリカゲルを薄くコーティングしたロッド(商品名:クロマロッドSIII 株式会社三菱化学ヤトロン製)にスポットし、そのロッドを恒湿槽(条件:65%RH)で10分間インキュベーションした。その後、n−ヘキサンが入った展開槽内で10分間ハンギングしてから、10cm展開させた。なお、ハンギング及び展開は37℃の恒温槽内で行った。   1 μL of the obtained sample was spotted on a rod (trade name: Chromarod SIII, manufactured by Mitsubishi Chemical Yatron Co., Ltd.) thinly coated with silica gel around quartz glass, and the rod was placed in a humidity chamber (condition: 65% RH). For 10 minutes. Then, after hanging for 10 minutes in the developing tank containing n-hexane, it was developed 10 cm. In addition, hanging and expansion | deployment were performed in a 37 degreeC thermostat.

展開が終わったロッドは、溶媒を除去させるため室温で乾燥させ、まず10cm展開したロッドをFID分析して内部標準ピークを検出した。   The developed rod was dried at room temperature to remove the solvent, and the rod developed 10 cm was first subjected to FID analysis to detect an internal standard peak.

その後、部分測定が終了したロッドを、再び10分間恒湿槽に保った。トルエンで10cm展開させた。除去させるため室温で乾燥させて溶媒を除去した。展開後のロッドを、商品名:イアトロスキャンMk−6s(株式会社三菱化学ヤトロン製)を用いて、検出器:FID、水素ガス:160mL/分、空気:2.0L/分、スキャン速度:30秒/スキャンの条件で分析し、スチレンアクリル樹脂に対応するピークと、それに由来する分解生成物に対応するピークとを検出した。また、継代培養は7日毎に行い分解率の経時変化も求めた。   Thereafter, the rod for which the partial measurement was completed was kept again in the constant humidity chamber for 10 minutes. 10 cm was developed with toluene. In order to remove, the solvent was removed by drying at room temperature. Using the developed rod, trade name: Iatroscan Mk-6s (manufactured by Mitsubishi Chemical Yatron Co., Ltd.), detector: FID, hydrogen gas: 160 mL / min, air: 2.0 L / min, scan speed: Analysis was performed under the condition of 30 seconds / scan, and a peak corresponding to the styrene acrylic resin and a peak corresponding to the decomposition product derived therefrom were detected. Further, subculture was performed every 7 days, and the change with time of the degradation rate was also determined.

なお、陰性対照として、微生物培養物非存在下の場合について同様に行なった。   As a negative control, the same procedure was performed in the absence of a microorganism culture.

前記分解活性は、微生物培養物存在下の場合の各ピークの面積と、対照の場合の各ピークの面積とを比較し、スチレンアクリル樹脂に対応するピークの面積がゼロの場合、当該スチレンアクリル樹脂が100%分解されたことの指標として算出した。その結果を図4及び図5に示す。   The degradation activity is determined by comparing the area of each peak in the presence of the microorganism culture with the area of each peak in the control, and when the area of the peak corresponding to the styrene acrylic resin is zero, the styrene acrylic resin Was calculated as an indicator that 100% was decomposed. The results are shown in FIGS.

その結果、図4に示されるように、AMOC2は、3代以上継代培養しても、安定して、分解率は、約45%であり、スチレンアクリル樹脂を分解できることがわかる。また、生育も良好であった。しかしながら、図4に示されるように、ポリエステル分解微生物群AMOC001は、スチレンアクリル樹脂の分解率は継代回数が増加するにつれて低下し、継代回数3回目(7日/回)で樹脂の分解も菌の生育が認められなくなった。   As a result, as shown in FIG. 4, it can be seen that AMOC2 is stable and has a decomposition rate of about 45% even when subcultured for 3 or more generations, and can decompose styrene acrylic resin. The growth was also good. However, as shown in FIG. 4, in the polyester-degrading microorganism group AMOC001, the degradation rate of the styrene acrylic resin decreases as the number of passages increases, and the degradation of the resin also occurs at the third passage number (7 days / times). The growth of fungus was not recognized.

また、図5に示されるように、 Q−1〜Q−4株及びQ−6株は、単独では、分解率は、25%であったが、Q−5株は、安定して、分解率は、約40%であった。したがって、AMOC2において、Q−5は、Q−1〜Q−4及びQ−6と協調的に、互いに機能を補完しあって、高い分解率を維持していることが示唆される。   In addition, as shown in FIG. 5, the Q-1 to Q-4 and Q-6 strains alone had a degradation rate of 25%, but the Q-5 strain was stable and degraded. The rate was about 40%. Therefore, in AMOC2, it is suggested that Q-5 cooperates with Q-1 to Q-4 and Q-6 to complement each other's functions and maintain a high decomposition rate.

本発明によれば、スチレンアクリル樹脂を含む廃棄物を、安価で、かつ環境に対して低影響で処理することができ、廃棄物中の金属又は色素の安価でかつ環境に対して低影響で回収することができる。   According to the present invention, waste containing styrene acrylic resin can be treated at low cost and with a low impact on the environment, and the metal or pigment in the waste can be treated at a low cost and with a low impact on the environment. It can be recovered.

図1は、微生物培養物によるスチレンアクリルの分解を示す図である。レーン1は、対照であり、レーン2は、微生物培養物存在下のスチレンアクリルの分解を示す。FIG. 1 is a diagram illustrating the degradation of styrene acrylic by a microbial culture. Lane 1 is a control and lane 2 shows the degradation of styrene acrylic in the presence of a microbial culture.

図2は、Q−1〜Q−6のコロニーの形状を示す図である。FIG. 2 is a diagram showing the shape of the colonies Q-1 to Q-6.

図3は、AMOC2及びQ−1〜Q−6それぞれの16S rDNA V3領域の変性剤濃度勾配ゲル電気泳動解析の結果を示す図である。レーン1は、AMOC2、レーン2〜レーン7は、それぞれQ−1〜Q−6である。FIG. 3 is a diagram showing the results of denaturant concentration gel electrophoresis analysis of 16S rDNA V3 regions of AMOC2 and Q-1 to Q-6, respectively. Lane 1 is AMOC2, and Lanes 2 to 7 are Q-1 to Q-6, respectively.

図4は、AMOC2及びAMOC001によるスチレンアクリル樹脂の分解活性を調べた結果を示す図である。図中、四角が、AMOC2、三角が、AMOC001である。FIG. 4 is a diagram showing the results of examining the decomposition activity of styrene acrylic resin by AMOC2 and AMOC001. In the figure, the square is AMOC2, and the triangle is AMOC001.

図5は、AMOC2及びQ−1〜Q−6それぞれによるスチレンアクリル樹脂の分解活性を調べた結果を示す図である。図中、四角が、AMOC2、星印が、Q−1、十字印が、Q−2、五角形が、Q−3、六角形が、Q−4、ひし形が、Q−5、三角が、Q−6である。FIG. 5 is a diagram showing the results of examining the decomposition activity of styrene acrylic resin by AMOC2 and Q-1 to Q-6, respectively. In the figure, the square is AMOC2, the star is Q-1, the cross is Q-2, the pentagon is Q-3, the hexagon is Q-4, the rhombus is Q-5, the triangle is Q -6.

配列番号:1は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 1 is the sequence of the primer.

配列番号:2は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 2 is the primer sequence.

配列番号:3は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 3 is the primer sequence.

配列番号:4は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 4 is the sequence of a primer.

配列番号:5は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 5 is the sequence of the primer.

配列番号:6は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 6 is the sequence of the primer.

配列番号:7は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 7 is the primer sequence.

配列番号:8は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 8 is the sequence of a primer.

配列番号:9は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 9 is the sequence of a primer.

配列番号:10は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 10 is a primer sequence.

配列番号:11は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 11 is the sequence of a primer.

配列番号:12は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 12 is the sequence of a primer.

配列番号:13は、プライマーの配列である。   SEQ ID NO: 13 is the sequence of a primer.

Claims (8)

シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis)に属する微生物を含有してなる、スチレンアクリル樹脂の生分解能を呈する微生物培養物。   A microorganism culture exhibiting a biodegradability of styrene acrylic resin, comprising microorganisms belonging to Pseudomonas boreeopolis. シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis)に属する微生物が、シュードモナス ボレオポリス(Pseudomonas boreopolis) Q−5(受託番号:NITE P−80)である、請求項1記載の微生物培養物。   The microorganism culture according to claim 1, wherein the microorganism belonging to Pseudomonas boreopolis is Pseudomonas boreopolis Q-5 (accession number: NITE P-80). ルテイモナス スピーシーズ(Luteimonas sp.)に属する微生物と、メソリゾビウム ロティ(Mesorhizobium loti)に属する微生物と、ロシャリメア エリザベザエ(Rochalimaea elizabethae)に属する微生物と、アルカリジェネス スピーシーズ(Alcaligenes sp.)に属する微生物とをさらに含有してなる、請求項1又は2記載の微生物培養物。   A microorganism belonging to Luteimonas sp., A microorganism belonging to Mesorhizobium loti, a microorganism belonging to Rocharmaea elizabethee, and a microorganism belonging to Algae sp. The microorganism culture according to claim 1 or 2, wherein 請求項1〜3いずれか1項に記載の微生物培養物を含有してなる、スチレンアクリル樹脂の分解用組成物。   The composition for decomposition | disassembly of a styrene acrylic resin formed by containing the microorganism culture of any one of Claims 1-3. 微生物培養物を保持するに適した固定用担体をさらに含有してなる、請求項4記載のスチレンアクリル樹脂の分解用組成物。   The composition for decomposing a styrene acrylic resin according to claim 4, further comprising a fixing carrier suitable for holding a microorganism culture. 微生物の培養に適した培地をさらに含有してなる、請求項4又は5記載のスチレンアクリル樹脂の分解用組成物。   The composition for decomposing a styrene acrylic resin according to claim 4 or 5, further comprising a medium suitable for culturing microorganisms. (A)スチレンアクリル樹脂を含む生産物若しくは廃棄物と、(B)請求項1〜3いずれか1項に記載の微生物培養物又は請求項4〜6いずれか1項に記載の分解用組成物とを接触させることを特徴とする、スチレンアクリル樹脂の分解方法。   (A) A product or waste containing a styrene acrylic resin, and (B) the microorganism culture according to any one of claims 1 to 3 or the decomposition composition according to any one of claims 4 to 6. A method for decomposing a styrene acrylic resin, wherein (a)スチレンアクリル樹脂と金属若しくは色素とを含む廃棄物と、(b)請求項1〜3いずれか1項に記載の微生物培養物又は請求項4〜6いずれか1項に記載の分解用組成物とを接触させ、廃棄物中のスチレンアクリル樹脂を分解させ、それにより、廃棄物中の金属又は色素を分離することを特徴とする、廃棄物中の金属又は色素の回収方法。   (A) waste containing a styrene acrylic resin and a metal or pigment; and (b) the microorganism culture according to any one of claims 1 to 3 or the degradation according to any one of claims 4 to 6. A method for recovering a metal or pigment in waste, comprising contacting the composition to decompose styrene acrylic resin in the waste, thereby separating the metal or pigment in the waste.
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