JP2006300689A - Marker for judging liver disease morbid state and liver disease morbid state judging method using it - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、肝疾患の病態を判定するための新規マーカー及び該マーカーを利用する肝疾患病態判定方法に関する。詳しくは、慢性肝炎と肝硬変の判定を正確に判定するための新規マーカー及び該マーカーの1種類又は複数種類を利用する肝疾患病態判定方法に関する。さらに、上記マーカーのスポットを二次元電気泳動で検出する肝疾患病態判定方法に関する。 The present invention relates to a novel marker for determining a disease state of liver disease and a method for determining a disease state of liver disease using the marker. Specifically, the present invention relates to a novel marker for accurately determining the determination of chronic hepatitis and cirrhosis and a method for determining a disease state of liver disease using one or more of the markers. Furthermore, the present invention relates to a method for determining a disease state of a liver disease, wherein the marker spot is detected by two-dimensional electrophoresis.
従来、肝障害の判定には、血中に漏出するＧＯＴやＧＰＴ等を定量し、異常が認められた場合に、さらに障害原因を特定するために他の検査を行うという方法が一般的に採用されている。しかし、ＧＯＴやＧＰＴは肝障害がかなり進行した段階でなければ血中に漏出しないため、ＧＯＴやＧＰＴ診断による疾患の早期発見は困難であった。そこで、肝障害の早期発見を目的として、肝障害時に血中に漏出する肝クレアチンを定量する肝障害検査法が提案されている（特許文献１）。 Conventionally, the method of quantifying GOT or GPT leaking into the blood and determining other causes to identify the cause of the disorder is generally used to determine liver damage. Has been. However, since GOT and GPT do not leak into the blood unless liver damage has progressed considerably, early detection of diseases by GOT and GPT diagnosis has been difficult. Therefore, for the purpose of early detection of liver damage, a liver damage test method for quantifying liver creatine leaking into the blood at the time of liver damage has been proposed (Patent Document 1).
また、肝細胞癌に関しては、肝細胞癌判定用マーカーが提案されている（例えば特許文献２）。
従来から、肝細胞癌判定用マーカーは数多く提案され利用されている。たとえばアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）やＰＩＶＫＡＩＩが繁用されているが、これらは感度ならびに特異性ともに満足できるものではない。また、肝癌治療に不可欠な肝癌早期診断マーカーは現存しない。一方、慢性肝炎と肝硬変を正確に判別する適切な方法も知られていない。慢性肝炎は、治療薬の効果が認められない場合は、やがて肝硬変へと進展するが、肝硬変はほぼ確実に肝癌へと転帰する。したがって肝硬変は肝癌発症におけるクリティカルステージであり、肝癌の前癌状態であるとみなしてよい。そのため、慢性肝炎から肝硬変への病態の進展を的確に判別するためのマーカーならびにその判別法は、肝癌の早期診断マーカーならびに早期診断法として予防治療を可能にするものであり、それらを発見し確立することは肝癌発症を防ぐための適切な治療を施すために早急に解決すべき重要な課題である。 Conventionally, many markers for determining hepatocellular carcinoma have been proposed and used. For example, alphafetoprotein (AFP) and PIVKAII are frequently used, but these are not satisfactory in both sensitivity and specificity. Moreover, there are no markers for early diagnosis of liver cancer that are indispensable for liver cancer treatment. On the other hand, an appropriate method for accurately discriminating chronic hepatitis from cirrhosis is not known. Chronic hepatitis eventually progresses to cirrhosis when no therapeutic effect is observed, but cirrhosis almost certainly results in liver cancer. Therefore, cirrhosis is a critical stage in the development of liver cancer and may be regarded as a precancerous state of liver cancer. Therefore, markers and methods for accurately distinguishing the progression of the pathology from chronic hepatitis to cirrhosis make it possible to detect and establish preventive treatment as an early diagnostic marker and early diagnostic method for liver cancer. This is an important issue that should be solved as soon as possible to provide appropriate treatment to prevent the development of liver cancer.
本発明は、上述の問題点を解決するためになされたものであって、慢性肝炎と肝硬変の患者で検出され、正常な人で検出されないマーカー及び正常な人と慢性肝炎患者で検出され、肝硬変の患者で検出されないマーカーに関するものである。また、それらのマーカーを用いる肝疾患の病態判定方法、及び、それらのマーカーのスポットを二次元電気泳動で検出する肝疾患の病態判定方法に関する。 The present invention has been made to solve the above-mentioned problems, and is detected in patients with chronic hepatitis and cirrhosis, and is not detected in normal people, and is detected in normal people and patients with chronic hepatitis. Related to markers that are not detected in any patient. The present invention also relates to a method for determining a disease state of a liver disease using these markers, and a method for determining a disease state of a liver disease in which spots of the markers are detected by two-dimensional electrophoresis.
すなわち、本発明は、（１）Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎを一成分とした複合分子を含む肝疾患の病態判定用マーカーである。 That is, the present invention is (1) a marker for determining a disease state of liver disease comprising a complex molecule comprising Transthyretin as one component.
Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎを一成分とした複合分子は、慢性肝炎ならびに肝硬変患者由来血清すべてで検出されるタンパク質であり、肝疾患の病態判定に効果的に利用できるマーカーである。 A complex molecule containing transthyretin as a component is a protein that is detected in all serum derived from patients with chronic hepatitis and cirrhosis, and is a marker that can be effectively used to determine the pathological condition of liver disease.
また、本発明は、（２）α１Ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ，Ｈａｐｔｏｇｌｏｂｉｎ α２ｃｈａｉｎ，Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ（ｍｏｎｏｍｅｒ），Ｈａｐｔｏｇｌｏｂｉｎ βｃｈａｉｎの少なくとも１種類を含む肝疾患の病態判定用マーカーである。 In addition, the present invention is a marker for determining a disease state of a liver disease comprising (2) at least one kind of α1 Antitrypsin, Haptoglobin α2 chain, Transthyretin (monomer), Haptoglobin β chain.
これらのタンパク質は、慢性肝炎患者の大部分で検出されたが、肝硬変患者では多くの試料で検出できなかった。マーカーとしての利用は、１種類の上記タンパク質であってもよいが、複数を組み合わせることによって、より正確な肝疾患の病態判定が可能になる。 These proteins were detected in the majority of patients with chronic hepatitis but not in many samples in patients with cirrhosis. The use as a marker may be one kind of the above protein, but by combining a plurality, it becomes possible to determine the pathological condition of liver disease more accurately.
また、本発明は、（３）慢性肝炎患者と肝硬変患者とを区別するための肝疾患病態判定方法であって、患者から得た生体試料におけるＴｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎを一成分とした複合分子の有無を決定するステップとα１Ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ， Ｈａｐｔｏｇｌｏｂｉｎ α２ｃｈａｉｎ，Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ（ｍｏｎｏｍｅｒ），Ｈａｐｔｏｇｌｏｂｉｎ βｃｈａｉｎの少なくとも１種類の有無を決定するステップとを有することを特徴とする肝疾患病態判定方法である。 In addition, the present invention is (3) a method for determining a disease state of a liver disease for distinguishing between a chronic hepatitis patient and a cirrhosis patient, and determines the presence or absence of a complex molecule containing Transthyretin as a component in a biological sample obtained from the patient. And a step of determining the presence or absence of at least one of α1 Antitrypsin, Haptoglobin α2 chain, Transthyretin (monomer), Haptoglobin β chain.
上述の各ステップの順序は任意でよく、どちらのステップを先に実行しても効果は同様である。上述のように肝疾患の病態を判定することにより、肝機能の正常な人、慢性肝炎患者、肝硬変患者を正確に判断することができる。 The order of the above steps may be arbitrary, and the effect is the same regardless of which step is executed first. By determining the pathology of liver disease as described above, it is possible to accurately determine a person with normal liver function, a chronic hepatitis patient, and a cirrhosis patient.
また、本発明は、（４）健常人と肝疾患患者とを区別するための方法であって、患者から得た生体試料の二次元電気泳動ゲルパターン上のスポットＡ（等電点がｐＨ４．８を含み、分子量分布が５万を含む）の有無を検出することを特徴とする肝疾患病態判定方法、である。 The present invention is also (4) a method for distinguishing between a healthy person and a patient with liver disease, the spot A on the two-dimensional electrophoresis gel pattern of a biological sample obtained from the patient (the isoelectric point is pH 4. 8 and a molecular weight distribution (including 50,000).
また、本発明は、（５）慢性肝炎患者と肝硬変患者とを区別するための方法であって、患者から得た生体試料の二次元電気泳動ゲルパターン上のスポットＢ（等電点がｐＨ５．０を含み、分子量分布が５万５千を含む），スポットＣ（等電点がｐＨ６．１を含み、分子量分布が１万７千を含む），スポットＤ（等電点がｐＨ５．４を含み、分子量分布が１万４千を含む），スポットＥ（等電点がｐＨ５．０を含み、分子量分布が４万２千を含む）の少なくとも１つの有無を検出することを特徴とする肝疾患病態判定方法、である。 The present invention also provides (5) a method for distinguishing between chronic hepatitis patients and cirrhosis patients, and spot B (isoelectric point is pH 5.) on a two-dimensional electrophoresis gel pattern of a biological sample obtained from the patient. 0, molecular weight distribution including 55,000), spot C (isoelectric point including pH 6.1, molecular weight distribution including 17,000), spot D (isoelectric point including pH 5.4) And liver having a molecular weight distribution of 14,000) and a spot E (having an isoelectric point of pH 5.0 and a molecular weight distribution of 42,000). It is a disease pathological condition determination method.
また、本発明は、（６）上記、慢性肝炎患者と肝硬変患者とを区別するための方法であって、患者から得た生体試料の二次元電気泳動ゲルパターン上のスポットＡ（等電点がｐＨ４．８を含み、分子量分布が５万を含む）、又はスポットＢ（等電点がｐＨ５．０を含み、分子量分布が５万５千を含む）又はスポットＣ（等電点がｐＨ６．１を含み、分子量分布が１万７千を含む）又はスポットＤ（等電点がｐＨ５．４を含み、分子量分布が１万４千を含む）又はスポットＥ（等電点がｐＨ５．０を含み、分子量分布が４万２千を含む）の有無を検出することを特徴とする肝疾患病態判定方法、である。 The present invention also provides (6) a method for distinguishing between a chronic hepatitis patient and a cirrhosis patient, wherein the spot A (isoelectric point is on the two-dimensional electrophoresis gel pattern of a biological sample obtained from the patient). pH 4.8 and molecular weight distribution including 50,000) or spot B (isoelectric point including pH 5.0 and molecular weight distribution including 55,000) or spot C (isoelectric point pH 6.1) And molecular weight distribution including 17,000) or spot D (isoelectric point including pH 5.4 and molecular weight distribution including 14,000) or spot E (isoelectric point including pH 5.0) , Which is characterized by detecting the presence or absence of molecular weight distribution (including 42,000).
上記スポットＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅはいずれも広がりを持つものであり、等電点、分子量とも厳密に特定することはできないので、各スポットが上記等電点、分子量を含むスポットとして規定した。 The spots A, B, C, D, and E are all broad, and since neither the isoelectric point nor the molecular weight can be strictly specified, each spot is defined as a spot including the isoelectric point and the molecular weight. did.
上述のように、マーカーの分子構造を同定する必要がないので、肝疾患の有無ならびにその病態の判定が二次元電気泳動装置を使用するだけで可能となる。また、特別な技能や知識を持たない人でも、肝疾患の判定が短時間で可能となる。 As described above, since it is not necessary to identify the molecular structure of the marker, the presence / absence of the liver disease and the determination of the disease state can be determined only by using the two-dimensional electrophoresis apparatus. In addition, even those who do not have special skills and knowledge can determine liver disease in a short time.
また、本発明は、（７）上記、（３），（４），（５）又は（６）において、前記生体試料が血液であることを特徴とする肝疾患病態判定方法、である。 The present invention is also (7) the method for determining a disease state of a liver disease according to (3), (4), (5) or (6), wherein the biological sample is blood.
少量の血液の採取だけで肝機能の正常な人、慢性肝炎患者、肝硬変患者を正確に判断することができるので、患者の負担を少なくすることができ、判定を短時間に行うことができる。 A person with normal liver function, a chronic hepatitis patient, and a cirrhosis patient can be accurately determined only by collecting a small amount of blood, so that the burden on the patient can be reduced and the determination can be made in a short time.
本発明の肝疾患病態判定用マーカー及び肝疾患病態判定方法によれば、慢性肝炎と肝硬変の判定を正確に判定することができる。したがって、本発明によって慢性肝炎患者の病態が肝硬変（前癌状態）へと進展したことを察知することが可能になり、肝癌発症阻止に向けた予防治療を早期に施すことが可能になる。 According to the liver disease condition determination marker and the liver disease condition determination method of the present invention, it is possible to accurately determine the determination of chronic hepatitis and cirrhosis. Therefore, according to the present invention, it is possible to detect that the disease state of a chronic hepatitis patient has progressed to cirrhosis (precancerous state), and it is possible to perform preventive treatment for preventing the onset of liver cancer at an early stage.
以下、本発明の実施の形態を、図面を参照して説明する。図１は、正常人血清の二次元電気泳動パターンである。図２は、肝硬変患者血清の二次元電気泳動パターンである。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described with reference to the drawings. FIG. 1 is a two-dimensional electrophoresis pattern of normal human serum. FIG. 2 is a two-dimensional electrophoresis pattern of liver cirrhosis patient serum.
慢性肝炎患者と肝硬変患者から血液を採取し、血清タンパク質を得て、二次元電気泳動にて解析すると、健常人由来の血清タンパク質では検出されないスポットＡ（等電点がｐＨ４．８を含み、分子量分布が５万を含む）が検出される。 When blood is collected from patients with chronic hepatitis and cirrhosis, serum protein is obtained and analyzed by two-dimensional electrophoresis, spot A (isoelectric point includes pH 4.8, molecular weight is not detected in serum protein derived from healthy subjects) Distribution is included).
肝機能に異常のない人から血液を採取し、血清タンパク質を得て、二次元電気泳動にて解析すると、ほぼ全ての人からスポットＢ（等電点がｐＨ５．０を含み、分子量分布が５万５千を含む）およびスポットＣ（等電点がｐＨ６．１を含み、分子量分布が１万７千を含む）およびスポットＤ（等電点がｐＨ５．４を含み、分子量分布が１万４千を含む）およびスポットＥ（等電点がｐＨ５．０を含み、分子量分布が４万２千を含む）が検出される。また、これらのスポットは大部分の慢性肝炎の患者からも検出される。しかし、肝硬変患者の多くからは検出されない。 When blood is collected from a person with no abnormal liver function, serum protein is obtained and analyzed by two-dimensional electrophoresis, spot B (isoelectric point includes pH 5.0 and molecular weight distribution is 5) from almost all persons. And C (including an isoelectric point of pH 6.1 and a molecular weight distribution of 17,000) and Spot D (including an isoelectric point of pH 5.4 and a molecular weight distribution of 14). 1000) and spot E (isoelectric point including pH 5.0 and molecular weight distribution including 42,000) are detected. These spots are also detected in most patients with chronic hepatitis. However, it is not detected in many patients with cirrhosis.
以上のスポットＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅの検出により、肝機能に以上のない人、慢性肝炎患者、肝硬変患者の判定が高い確率で可能となる（下記００３０および００３２参照）。つまり、スポットＡが検出されず、スポットＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅの中の少なくとも１種類が検出されれば、肝機能に異常のない可能性が非常に高い。スポットＡが検出され、スポットＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅのうちの二つ以上が検出されなければ、肝硬変の可能性が非常に高い。また、スポットＡ及びスポットＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅの中の少なくとも三種類が検出されれば、慢性肝炎の可能性が非常に高い。 By detecting the spots A, B, C, D, and E described above, it is possible to determine a person who has no liver function, chronic hepatitis patient, or cirrhosis patient with high probability (see 0030 and 0032 below). That is, if spot A is not detected and at least one of spots B, C, D, and E is detected, there is a very high possibility that liver function is not abnormal. If spot A is detected and two or more of spots B, C, D, and E are not detected, the possibility of cirrhosis is very high. Further, if at least three types of spot A and spots B, C, D, and E are detected, the possibility of chronic hepatitis is very high.
このようにして、肝疾患の病態を判定することができる。つまり、二次元電気泳動装置により、血清タンパク質のスポットＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅを検出すことにより、肝疾患の病態判定が短時間に可能である。 In this way, the pathological condition of liver disease can be determined. That is, by detecting serum protein spots A, B, C, D, and E with a two-dimensional electrophoresis apparatus, it is possible to determine the pathological condition of liver disease in a short time.
スポットＡはＴｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎを一成分とした複合分子であり、スポットＢはα１Ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎであり、スポットＣはＨａｐｔｏｇｌｏｂｉｎ α２ｃｈａｉｎであり、スポットＤはＴｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ（ｍｏｎｏｍｅｒ）であり、スポットＥはＨａｐｔｏｇｌｏｂｉｎ βｃｈａｉｎである。 Spot A is a complex molecule having Transthyretin as one component, Spot B is α1 Antitrypsin, Spot C is Haptoglobin α2 chain, Spot D is Transthyretin (monomer), and Spot E is Haptoglobin β chain.
つまり、血清タンパク質にＴｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎを一成分とした複合分子の有無を決定するステップとα１Ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ， Ｈａｐｔｏｇｌｏｂｉｎ α２ｃｈａｉｎ，Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ（ｍｏｎｏｍｅｒ），Ｈａｐｔｏｇｌｏｂｉｎ βｃｈａｉｎの少なくとも１種類の有無を決定するステップとを組み合わせることにより肝機能に異常のない人、慢性肝炎患者、肝硬変患者を判定することが高い精度で可能である。 That is, combining the step of determining the presence or absence of a complex molecule having transthyretin as a component in serum protein with the step of determining the presence or absence of at least one of α1 Antitrypsin, Haptoglobin, α2 chain, Transthyretin (monomer), and Haptoglobin β chain It is possible to determine a person who has no abnormality, a chronic hepatitis patient, and a cirrhosis patient with high accuracy.
実施例として、二次元電気泳動による慢性肝炎と肝硬変の血清タンパク質の解析を説明する。
（１）方法
健常人１９例ならびに慢性肝炎患者２４例、肝硬変患者２０例のそれぞれから得た血清タンパク質１００μ g を以下のような二次元電気泳動にて解析した。
一次元目の等電点電気泳動は、血清タンパク質を、８M尿素２％の界面活性剤ＣＨＡＰＳを含む緩衝液に溶解し、１３ｃｍの固定化ｐＨ勾配（ｐＨ４〜７）ストリップ上で８０，０００volt
hours泳動した。泳動後ゲル中のタンパク質をそれぞれＤＴＴとヨードアセトアミドを入れた２％ＳＤＳ緩衝溶液で還元アルキル化した後に、二次元目のＳＤＳ電気泳動（ゲル濃度１５％、ゲル長１６ｃｍ）をおこない、ゲル中のタンパク質を銀染色
(Silver Staining kit， Amersham社)した。
As an example, analysis of serum proteins of chronic hepatitis and cirrhosis by two-dimensional electrophoresis will be described.
(1) Method 100 μg of serum protein obtained from 19 healthy individuals and 24 chronic hepatitis patients and 20 cirrhosis patients was analyzed by two-dimensional electrophoresis as follows.
The first dimension isoelectric focusing was performed by dissolving serum protein in a buffer containing 8M urea 2% surfactant CHAPS and running on a 13 cm immobilized pH gradient (pH 4-7) strip at 80,000 volts.
Run for hours. After electrophoresis, the proteins in the gel were reductively alkylated with 2% SDS buffer solution containing DTT and iodoacetamide, respectively, followed by second-dimensional SDS electrophoresis (gel concentration: 15%, gel length: 16 cm). Protein silver staining
(Silver Staining kit, Amersham).
（２）結果
本方法において、およそ５００のタンパク質由来スポットが検出された。図１に健常人由来血清タンパク質の、図２に肝硬変患者由来血清タンパク質の電気泳動パターンの一例を示した。電気泳動パターン図中、赤丸で囲んだスポットＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅが検出の可否が試料ごとに変動したものである。Ａは肝炎ならびに肝硬変患者由来血清すべてで検出された。一方、スポットＢ，Ｃ，Ｄ，は健常人のほぼすべて、慢性肝炎患者の大部分で検出されたが、肝硬変患者では多くの試料で検出できなかった。これらのスポットを切り抜き、ゲル中のタンパク質を一晩トリプシン（Promega社）で処理してペプチド断片にした後、C-18 Tip（Eppendorf社）を用いて脱塩をおこない、マトリックスとしてCHCA(α-cyano-hydroxy-cinnamic
acid)を加えて共結晶化した。これを質量分析機（AXIMA-CFR、島津製作所）にかけ、上記ペプチドの質量パターンを得て、それをタンパク質同定ソフトMascotにて解析した。その結果図1中に示すように、
スポットＡはＴｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎを一成分とした複合分子であり、スポットＢはα１Ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎであり、スポットＣはＨａｐｔｏｇｌｏｂｉｎ α２ｃｈａｉｎであり、スポットＤはＴｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ（ｍｏｎｏｍｅｒ）であり、スポットＥはＨａｐｔｏｇｌｏｂｉｎ βｃｈａｉｎであった。
(2) Results In this method, approximately 500 protein-derived spots were detected. FIG. 1 shows an example of an electrophoresis pattern of serum protein derived from a healthy person, and FIG. 2 shows an example of an electrophoresis pattern of serum protein derived from a cirrhosis patient. In the electrophoretic pattern diagram, spots A, B, C, D, and E surrounded by red circles vary depending on the sample. A was detected in all sera from patients with hepatitis and cirrhosis. On the other hand, spots B, C, and D were detected in almost all healthy subjects in the majority of patients with chronic hepatitis, but were not detected in many samples in patients with cirrhosis. These spots are cut out, the protein in the gel is treated with trypsin (Promega) overnight to make peptide fragments, desalted using C-18 Tip (Eppendorf), and CHCA (α- cyano-hydroxy-cinnamic
acid) and co-crystallized. This was applied to a mass spectrometer (AXIMA-CFR, Shimadzu Corporation) to obtain a mass pattern of the above peptide, and analyzed with the protein identification software Mascot. As a result, as shown in Figure 1,
Spot A was a complex molecule containing Transthyretin as one component, Spot B was α1 Antitrypsin, Spot C was Haptoglobin α2 chain, Spot D was Transthyretin (monomer), and Spot E was Haptoglobin β chain.
（３）考察
本実験において、肝疾患の血清タンパク質マーカーに関し、以下の二点の発見があった。
１）本実験で検出された二次元電気泳動ゲルパターン上のスポットAは慢性肝炎患者ならびに肝硬変患者と健常人とを区別する、肝疾患マーカータンパク質である。
２）本実験において健常人で検出された二次元電気泳動ゲルパターン上のスポットB， C， D， Eが、慢性肝炎患者の大部分で観察されたが、肝硬変患者では検出率が顕著に減少した。
(3) Discussion In this experiment, the following two findings were found regarding serum protein markers for liver disease.
1) Spot A on the two-dimensional electrophoresis gel pattern detected in this experiment is a liver disease marker protein that distinguishes chronic hepatitis patients and cirrhosis patients from healthy individuals.
2) Spots B, C, D, and E on the two-dimensional electrophoresis gel pattern detected by healthy individuals in this experiment were observed in the majority of patients with chronic hepatitis, but the detection rate decreased significantly in patients with cirrhosis. did.
次に、単独マーカーによる肝硬変と慢性肝炎の判別の例を説明する。
上記実施例１の実験結果において、Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ各スポット単独を検出できない慢性肝炎患者ならびに肝硬変患者の割合は以下の通りであった。Ｂ；慢性肝炎４％、
肝硬変６０％、Ｃ；慢性肝炎１７％・肝硬変６０％、Ｄ；慢性肝炎１３％・肝硬変４０％、Ｅ；慢性肝炎４％・肝硬変７５％ 。すなわち、Ｅスポットの消失をマーカー（指標）とすれば、感度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）７５％、特異性（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）９６％
で肝硬変患者を慢性肝炎患者から判別できることになる。
Next, an example of discrimination between cirrhosis and chronic hepatitis using a single marker will be described.
In the experimental results of Example 1 above, the ratios of chronic hepatitis patients and cirrhosis patients who could not detect B, C, D, and E spots alone were as follows. B: Chronic hepatitis 4%,
Cirrhosis 60%, C: chronic hepatitis 17%, cirrhosis 60%, D: chronic hepatitis 13%, cirrhosis 40%, E: chronic hepatitis 4%, cirrhosis 75%. That is, if loss of E spot is used as a marker (index), sensitivity (Sensitivity) 75%, specificity (Specificity) 96%
Thus, cirrhosis patients can be distinguished from chronic hepatitis patients.
上記感度とは、該マーカーによって該疾患患者が陽性（罹患）と判定される確率であり、特異性とは、該マーカーによって非該疾患患者が陰性（非罹患）と判定される確率である。つまり、感度と特異性が高ければ、より高い精度での判別が可能となる。 The sensitivity is the probability that the diseased patient is determined to be positive (affected) by the marker, and the specificity is the probability that the non-disease patient is determined to be negative (unaffected) by the marker. That is, if sensitivity and specificity are high, discrimination with higher accuracy becomes possible.
次に、複数マーカーによる肝硬変と慢性肝炎の判別の例を説明する。
上記実施例１の実験結果において、スポットＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅのうち、２つ以上のスポットが検出されない例は、慢性肝炎患者で２４例中１例、肝硬変患者で２０例中１７例認められた。すなわち、スポットＢ，Ｃ，Ｄ，Ｅのうち、２つ以上のスポットが検出されないことをマーカー（指標）にして、感度９０％、特異性９６％で肝硬変患者を慢性肝炎患者から判別できる。このうち、ＢまたはＥが検出されないことを指標にして、感度９０％、特異性９２％で、ＣまたはＥが検出されないことを指標にして、感度９５％、特異性８０％で、ＤまたはＥが検出されないことを指標にして、感度８５％、特異性８８％で、肝硬変を検出することができる。
Next, an example of discrimination between cirrhosis and chronic hepatitis using a plurality of markers will be described.
In the experimental results of Example 1, two or more spots were not detected among spots B, C, D, and E. One out of 24 cases was observed in chronic hepatitis patients and 17 out of 20 cases were observed in cirrhosis patients. It was. That is, a cirrhosis patient can be discriminated from a chronic hepatitis patient with sensitivity 90% and specificity 96% by using as a marker (index) that two or more spots among spots B, C, D, and E are not detected. Among these, using B or E as an index, sensitivity is 90%, specificity is 92%, C or E is not detected as index, sensitivity is 95%, specificity is 80%, D or E Can be detected with a sensitivity of 85% and a specificity of 88%, using as an index that no is detected.
以上のように、複数のマーカーを指標とすることにより、感度と特異性を高めることが可能となる。 As described above, sensitivity and specificity can be increased by using a plurality of markers as indices.
以上、本発明の実施例を図面により説明したが、本発明の具体的構成はこの実施例に限られるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲の設計の変更等があっても本発明に含まれる。例えば、マーカーとなるタンパク質の検出は二次元電気泳動に限られるものではなく、他の方法を使うことも可能である。 Although the embodiments of the present invention have been described with reference to the drawings, the specific configuration of the present invention is not limited to these embodiments, and the present invention can be changed even if there is a design change or the like without departing from the gist of the present invention. include. For example, detection of a protein serving as a marker is not limited to two-dimensional electrophoresis, and other methods can be used.
我が国における肝癌患者数は６万人を越えており、慢性肝炎の予後を判定するマーカーならびに肝癌の早期診断マーカーの社会的ニーズは高い。
本発明によれば、慢性肝炎から肝硬変への病態の進展を判別することができるので、肝癌発症阻止に向けた予防治療を早期に施すことが可能になる。したがって、本発明をさらに発展させ、肝機能測定あるいは肝癌早期診断のための体外診断薬（検査薬キット）ならびに医療用診断機器を製造販売することによって、本発明を事業化することが可能である。
The number of patients with liver cancer in Japan exceeds 60,000, and social needs for markers for determining the prognosis of chronic hepatitis and markers for early diagnosis of liver cancer are high.
According to the present invention, since it is possible to determine the progress of a disease state from chronic hepatitis to cirrhosis, it is possible to perform early preventive treatment for preventing the onset of liver cancer. Therefore, by further developing the present invention, it is possible to commercialize the present invention by manufacturing and selling in vitro diagnostics (test drug kits) and medical diagnostic equipment for liver function measurement or early diagnosis of liver cancer. .
Claims (7)
The liver disease pathological condition determination method according to claim 3, 4, 5, or 6, wherein the biological sample is blood.
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