JP2006257009A - Method for evaluating sensitivity of plant to herbicide and method for evaluating herbicidal activity of compound - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、植物の除草剤感受性評価方法及び化合物の除草活性評価方法に関する。 The present invention relates to a herbicide sensitivity evaluation method for plants and a herbicidal activity evaluation method for compounds.
通常、除草剤の開発は、ポット栽培した植物種に除草剤の候補となる被検化合物を実際に施与し、その後の植物の生育状態や枯死の有無、植物の薬害程度等を観察する方法を用いて行われている。そのため、被検化合物の除草活性を判定するまでに極めて長い期間と労力とが必要である。また、除草剤抵抗性変異型雑草を識別する場合等、植物の除草剤に対する感受性又は抵抗性を評価する場合も上記と同様の方法が用いられており、植物の抵抗性変異型の有無等を判定するのに極めて長い期間と労力とが必要である。 Usually, the development of herbicides is a method of actually applying test compounds that are candidates for herbicides to plant species grown in pots, and then observing the growth state of the plants, the presence or absence of death, the degree of phytotoxicity of plants, etc. It is done using. Therefore, it takes a very long period of time and labor to determine the herbicidal activity of the test compound. In addition, the method similar to the above is also used when evaluating the sensitivity or resistance of a plant to a herbicide, such as when identifying a herbicide-resistant mutant weed. It takes a very long period of time and effort to make a decision.
そこで、これら植物の評価方法や除草剤の評価方法として、より短期間、且つ、より簡易に評価を行う方法が検討されている。これまで、除草剤抵抗性変異型植物を短期間で識別する方法としては、除草剤を処理した植物の発根程度を観察することにより評価を行う植物検定方法（例えば、非特許文献１参照）や、除草剤を処理した植物の酵素活性を測定することにより評価を行う手法（例えば、非特許文献２〜３参照）等が考案されている。 Therefore, as a method for evaluating these plants and a method for evaluating herbicides, methods for evaluating in a shorter period and more simply are being studied. Until now, as a method for identifying herbicide-resistant mutant plants in a short period of time, a plant test method for evaluating by observing the rooting degree of a plant treated with the herbicide (see, for example, Non-Patent Document 1). In addition, a technique (for example, see Non-Patent Documents 2 to 3) for evaluating by measuring enzyme activity of a plant treated with a herbicide has been devised.
しかしながら、上記非特許文献１に記載された評価方法は、ポット栽培した植物を用いた評価方法と比べると評価期間を短くすることができるものの、十分な精度で植物の感受性を評価するためには少なくとも数週間程度の発根状態を観察する必要があり、十分に短い期間で植物の除草剤感受性を評価することが難しいという問題を有している。また、かかる評価方法では、植物個体による差が大きく、客観的な評価が困難であるという問題も有している。 However, although the evaluation method described in Non-Patent Document 1 can shorten the evaluation period as compared with the evaluation method using plants grown in pots, in order to evaluate the sensitivity of plants with sufficient accuracy. It is necessary to observe the rooting state for at least several weeks, and it is difficult to evaluate the herbicide sensitivity of plants in a sufficiently short period. In addition, such an evaluation method has a problem that there is a large difference among plant individuals, and that objective evaluation is difficult.
また、上記非特許文献２〜３に記載された植物の評価方法は、作業が煩雑であるとともに、技能を必要とするため評価の精度が未だ不十分であり、客観的な評価が困難であるという問題を有している。 In addition, the plant evaluation methods described in Non-Patent Documents 2 to 3 described above are cumbersome and require skills, so that the accuracy of evaluation is still insufficient and objective evaluation is difficult. Has the problem.
本発明は、上記従来技術の有する課題に鑑みてなされたものであり、植物の除草剤に対する感受性又は抵抗性を短期間で簡易に、且つ、客観的に評価することが可能な植物の除草剤感受性評価方法を提供することを目的とする。また、本発明は、除草剤の候補となる被検化合物の植物に対する除草活性を短期間で簡易に、且つ、客観的に評価することが可能な化合物の除草活性評価方法を提供することを目的とする。 The present invention has been made in view of the above-described problems of the prior art, and is a herbicide for plants that can easily and objectively evaluate the sensitivity or resistance of plants to herbicides in a short period of time. The purpose is to provide a method for evaluating sensitivity. Another object of the present invention is to provide a method for evaluating the herbicidal activity of a compound, which can easily and objectively evaluate the herbicidal activity of a test compound that is a candidate for herbicide on a plant in a short period of time. And
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、植物の試料に除草剤を施与した後、試料の発光量を測定することにより、植物の除草剤に対する感受性又は抵抗性、及び、除草剤の候補となる被検化合物の植物に対する除草活性を、短期間で簡易に、且つ、客観的に評価することができることを見出し、本発明を完成するに至った。 As a result of intensive studies to achieve the above object, the present inventors have applied a herbicide to a plant sample, and then measured the amount of luminescence of the sample to thereby determine the sensitivity or resistance of the plant to the herbicide. And it discovered that the herbicidal activity with respect to the plant of the test compound used as the candidate of a herbicide could be evaluated easily and objectively in a short period of time, and came to complete this invention.
すなわち、本発明は、除草剤に対する被検植物の感受性又は抵抗性を評価する植物の除草剤感受性評価方法であって、上記被検植物の試料に上記除草剤を施与する施与ステップと、上記除草剤を施与した後の上記試料の発光量を測定する測定ステップと、測定した上記発光量に基づいて、上記被検植物の上記除草剤に対する感受性又は抵抗性を評価する評価ステップと、を備えることを特徴とする植物の除草剤感受性評価方法を提供する。 That is, the present invention is a plant herbicide sensitivity evaluation method for evaluating the sensitivity or resistance of a test plant to a herbicide, the application step of applying the herbicide to a sample of the test plant; A measurement step of measuring the amount of luminescence of the sample after applying the herbicide, and an evaluation step of evaluating the sensitivity or resistance of the test plant to the herbicide based on the measured amount of luminescence; A herbicide susceptibility evaluation method for plants characterized by comprising:
ここで、植物の茎、葉及び根等の試料からは、通常、微弱な自家発光が観測される。この植物の自家発光の性質に着目し、本発明者らが研究を重ねたところ、上記試料に除草剤を施与すると、その除草剤に対して植物が抵抗性を有している（感受性を有していない）場合には、発光量の一時的な増強や高い発光の維持、発光の低下といった発光量の変動や発光パターンの違いが生じ、一方、その除草剤に対して抵抗性を有していない（感受性を有している）場合には、発光量の変動や発光パターンの違いが生じないことを本発明者らは見出した。本発明の植物の除草剤感受性評価方法は、上述した植物の自家発光に係る性質を利用した評価方法であり、除草剤を与えた後の試料の発光量を測定することによって、短期間で簡易に、且つ、客観的に被検植物の除草剤に対する感受性又は抵抗性を評価することができる。 Here, weak autoluminescence is usually observed from samples such as plant stems, leaves and roots. Focusing on the self-luminous nature of this plant, the present inventors have conducted research. When a herbicide is applied to the above sample, the plant has resistance to the herbicide (sensitivity is reduced). If not, there will be fluctuations in the amount of light emission and differences in the light emission pattern such as temporary increase in light emission, maintenance of high light emission, and decrease in light emission, while there is resistance to the herbicide. The present inventors have found that no change in the light emission amount or difference in the light emission pattern occurs when it is not (has sensitivity). The herbicide sensitivity evaluation method of the plant of the present invention is an evaluation method using the above-mentioned properties relating to the self-luminescence of the plant, and can be simplified in a short period of time by measuring the amount of luminescence of the sample after giving the herbicide. In addition, the sensitivity or resistance of the test plant to the herbicide can be objectively evaluated.
かかる本発明の植物の除草剤感受性評価方法において、上記試料は、上記被検植物の茎、葉又は根であることが好ましい。このように、被検植物の一部の器官を試料として用いることで、被検植物全体を破壊することなく評価を行うことが可能となる。 In the plant herbicide sensitivity evaluation method of the present invention, the sample is preferably the stem, leaf or root of the test plant. Thus, it becomes possible to evaluate without destroying the whole test plant by using a part of organ of the test plant as a sample.
また、上記施与ステップは、上記被検植物の試料を上記除草剤に浸漬することにより行うことが好ましい。このように試料を除草剤に浸漬して発光量の測定を行うことにより、被検植物が抵抗性を有している（感受性を有していない）場合に、発光量の変動や発光パターンの違いを顕著に観測することができ、より精度の高い客観的な評価が可能となる。 The application step is preferably performed by immersing the sample of the test plant in the herbicide. By measuring the amount of luminescence by immersing the sample in the herbicide in this way, when the test plant is resistant (not sensitive), the variation in the amount of luminescence or the luminescence pattern Differences can be observed remarkably, and more accurate objective evaluation is possible.
更に、本発明の植物の除草剤感受性評価方法は、上記試料と同一部位で同一量の上記被検植物のブランク試料について、上記除草剤を施与せずに発光量を測定するブランク測定ステップと、上記測定ステップにおいて測定した上記試料の発光量と上記ブランク測定ステップにおいて測定した上記ブランク試料の発光量とを比較することで比較データを得る比較ステップと、を更に含み、上記評価ステップは、上記比較データに基づいて、上記被検植物の上記除草剤に対する感受性又は抵抗性を評価することにより行うことが好ましい。このように、ブランク試料の発光量と対比した比較データを用いて評価を行うことにより、より精度の高い客観的な評価が可能となる。 Further, the plant herbicide sensitivity evaluation method of the present invention comprises a blank measurement step of measuring the amount of luminescence without applying the herbicide on the blank sample of the test plant at the same site as the sample. A comparison step of obtaining comparison data by comparing the light emission amount of the sample measured in the measurement step with the light emission amount of the blank sample measured in the blank measurement step, and the evaluation step includes It is preferable to carry out by evaluating the sensitivity or resistance of the test plant to the herbicide based on the comparison data. As described above, by performing the evaluation using the comparison data compared with the light emission amount of the blank sample, a more accurate objective evaluation can be performed.
また、上記比較データは、上記試料の発光量と上記ブランク試料の発光量との差、上記試料の発光量と上記ブランク試料の発光量との比、及び、上記試料の発光量を経時的に測定した場合の発光パターンと上記ブランク試料の発光量を経時的に測定した場合の発光パターンとの違い、からなる群より選択される少なくとも一種の比較データを含むことが好ましい。これらの比較データを用いることにより、より精度の高いより客観的な評価が可能となる。 In addition, the comparison data includes the difference between the light emission amount of the sample and the light emission amount of the blank sample, the ratio of the light emission amount of the sample and the light emission amount of the blank sample, and the light emission amount of the sample over time. It is preferable to include at least one type of comparison data selected from the group consisting of the difference between the emission pattern when measured and the emission pattern when the emission amount of the blank sample is measured over time. By using these comparison data, more accurate and objective evaluation can be performed.
本発明はまた、植物に対する被検化合物の除草活性を評価する化合物の除草活性評価方法であって、上記植物の試料に上記被検化合物を施与する施与ステップと、上記被検化合物を施与した後の上記試料の発光量を測定する測定ステップと、測定した上記発光量に基づいて、上記被検化合物の上記植物に対する除草活性を評価する評価ステップと、を備えることを特徴とする化合物の除草活性評価方法を提供する。 The present invention also relates to a method for evaluating the herbicidal activity of a compound for evaluating the herbicidal activity of a test compound against a plant, comprising a step of applying the test compound to a sample of the plant, and applying the test compound. A measurement step of measuring the amount of luminescence of the sample after application, and an evaluation step of evaluating the herbicidal activity of the test compound against the plant based on the measured amount of luminescence A method for evaluating herbicidal activity is provided.
ここで、上述した植物の除草剤に対する感受性を評価する場合と同様に、上記試料に被検化合物を施与すると、その被検化合物が植物に対して除草活性を有していない場合には、発光量の一時的な増強や高い発光の維持、発光の低下といった発光量の変動や発光パターンの違いが生じ、一方、その被検植物が植物に対して除草活性を有している場合には、発光量の変動や発光パターンの違いが生じない。本発明の化合物の除草活性評価方法は、上述した植物の自家発光に係る性質を利用した評価方法であり、除草剤を与えた後の試料の発光量を測定することによって、短期間で簡易に、且つ、客観的に化合物の除草活性を評価することができる。 Here, as in the case of evaluating the sensitivity of the plant to the herbicide described above, when the test compound is applied to the sample, when the test compound does not have herbicidal activity against the plant, When there is a variation in the amount of luminescence or a difference in the luminescence pattern such as temporary enhancement of luminescence amount, maintenance of high luminescence, reduction of luminescence, on the other hand, when the test plant has herbicidal activity against the plant No change in emission amount or difference in emission pattern occurs. The method for evaluating the herbicidal activity of the compound of the present invention is an evaluation method using the above-mentioned properties relating to the self-luminescence of the plant, and it is simple in a short period of time by measuring the amount of luminescence of the sample after giving the herbicide. In addition, the herbicidal activity of the compound can be objectively evaluated.
かかる本発明の化合物の除草活性評価方法において、上記試料は、上記植物の茎、葉又は根であることが好ましい。このように、植物の一部の器官を試料として用いることで、植物全体を破壊することなく評価を行うことが可能となる。 In the method for evaluating the herbicidal activity of the compound of the present invention, the sample is preferably the stem, leaf or root of the plant. Thus, it becomes possible to evaluate without destroying the whole plant by using some organs of a plant as a sample.
また、上記施与ステップは、上記植物の試料を上記被検化合物に浸漬することにより行うことが好ましい。このように試料を被検化合物に浸漬して発光量の測定を行うことにより、被検化合物が除草活性を有していない場合に、発光量の変動や発光パターンの違いを顕著に観測することができ、より精度の高い客観的な評価が可能となる。 The application step is preferably performed by immersing the plant sample in the test compound. By measuring the amount of luminescence by immersing the sample in the test compound in this way, when the test compound does not have herbicidal activity, the difference in the luminescence amount and the difference in the luminescence pattern are observed significantly. It is possible to objectively evaluate with higher accuracy.
更に、本発明の化合物の除草活性評価方法は、上記試料と同一部位で同一量の上記植物のブランク試料について、上記被検化合物を施与せずに発光量を測定するブランク測定ステップと、上記測定ステップにおいて測定した上記試料の発光量と上記ブランク測定ステップにおいて測定した上記ブランク試料の発光量とを比較することで比較データを得る比較ステップと、を更に含み、上記評価ステップは、上記比較データに基づいて、上記被検化合物の上記植物に対する除草活性を評価することにより行うことが好ましい。このように、ブランク試料の発光量と対比した比較データを用いて評価を行うことにより、より精度の高い客観的な評価が可能となる。 Furthermore, the method for evaluating the herbicidal activity of the compound of the present invention includes a blank measurement step of measuring the amount of luminescence without applying the test compound with respect to a blank sample of the same amount at the same site as the sample; A comparison step of obtaining comparison data by comparing the light emission amount of the sample measured in the measurement step with the light emission amount of the blank sample measured in the blank measurement step, wherein the evaluation step comprises the comparison data Is preferably performed by evaluating the herbicidal activity of the test compound against the plant. As described above, by performing the evaluation using the comparison data compared with the light emission amount of the blank sample, a more accurate objective evaluation can be performed.
また、上記比較データは、上記試料の発光量と上記ブランク試料の発光量との差、上記試料の発光量と上記ブランク試料の発光量との比、及び、上記試料の発光量を経時的に測定した場合の発光パターンと上記ブランク試料の発光量を経時的に測定した場合の発光パターンとの違い、からなる群より選択される少なくとも一種の比較データを含むことが好ましい。これらの比較データを用いることにより、より精度の高いより客観的な評価が可能となる。 In addition, the comparison data includes the difference between the light emission amount of the sample and the light emission amount of the blank sample, the ratio of the light emission amount of the sample and the light emission amount of the blank sample, and the light emission amount of the sample over time. It is preferable to include at least one type of comparison data selected from the group consisting of the difference between the emission pattern when measured and the emission pattern when the emission amount of the blank sample is measured over time. By using these comparison data, more accurate and objective evaluation can be performed.
本発明によれば、植物の除草剤に対する感受性又は抵抗性を短期間で簡易に、且つ、客観的に評価することが可能な植物の除草剤感受性評価方法を提供することができる。また、本発明によれば、除草剤の候補となる被検化合物の植物に対する除草活性を短期間で簡易に、且つ、客観的に評価することが可能な化合物の除草活性評価方法を提供することができる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the herbicide sensitivity evaluation method of the plant which can evaluate the sensitivity or resistance with respect to the herbicide of a plant easily and objectively in a short period can be provided. In addition, according to the present invention, there is provided a method for evaluating the herbicidal activity of a compound, which can easily and objectively evaluate the herbicidal activity of a test compound which is a herbicide candidate against a plant in a short period of time. Can do.
以下、本発明をその好適な実施形態に即して詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to preferred embodiments thereof.
（植物の除草剤感受性評価方法）
本発明の植物の除草剤感受性評価方法は、除草剤に対する被検植物の感受性又は抵抗性を評価する方法であって、上記被検植物の試料に上記除草剤を施与する施与ステップと、上記除草剤を施与した後の上記試料の発光量を測定する測定ステップと、測定した上記発光量に基づいて、上記被検植物の上記除草剤に対する感受性又は抵抗性を評価する評価ステップと、を備えることを特徴とする方法である。以下、各ステップについて詳細に説明する。
(Method for evaluating plant herbicide sensitivity)
The plant herbicide sensitivity evaluation method of the present invention is a method for evaluating the sensitivity or resistance of a test plant to a herbicide, the application step of applying the herbicide to a sample of the test plant, A measurement step of measuring the amount of luminescence of the sample after applying the herbicide, and an evaluation step of evaluating the sensitivity or resistance of the test plant to the herbicide based on the measured amount of luminescence; It is a method characterized by providing. Hereinafter, each step will be described in detail.
まず、施与ステップについて説明する。施与ステップは、被検植物の試料に除草剤を施与するステップである。 First, the application step will be described. The application step is a step of applying a herbicide to the sample of the test plant.
ここで、本発明の植物の除草剤感受性評価方法において用いられる被検植物の種類は特に制限されないが、除草剤による薬害の有無を検定すべき農作物や、除草剤により除去すべき雑草種等を被検植物として用いることが有用である。農作物としては、特に制限されないが、例えば、イネ等のイネ科作物などの植物が挙げられる。また、雑草種としては、特に制限されないが、例えば、タイヌビエ等のイネ科雑草、イボクサ、コナギ等の一年生広葉雑草、イヌホタルイ等の多年生雑草などの植物が挙げられる。 Here, the type of the test plant used in the method for evaluating the herbicide sensitivity of the plant of the present invention is not particularly limited, but the crop to be tested for the presence or absence of phytotoxicity by the herbicide, the weed species to be removed by the herbicide, etc. It is useful to use it as a test plant. Although it does not restrict | limit especially as an agricultural crop, For example, plants, such as gramineous crops, such as a rice, are mentioned. The weed species is not particularly limited, and examples thereof include plants such as Gramineae weeds such as Tainubie, annual broad-leaved weeds such as Ibokusa and Konagi, and perennial weeds such as dog firefly.
被検植物の試料としては、上述したような被検植物の茎、葉及び根等の器官を用いることができる。これらの器官は、そのままの状態で試料として用いてもよいが、例えば、５ｍｍ角程度の十分に小さな切片となるように切り刻んだ状態で試料として用いることが好ましい。上記の器官を切り刻んで用いることにより、試料の発光量を増大させることができ、より精度の高い客観的な評価を行うことができる。 As a sample of the test plant, organs such as stems, leaves and roots of the test plant as described above can be used. These organs may be used as a sample as they are, but for example, it is preferable to use them as a sample in a state of being cut into sufficiently small sections of about 5 mm square. By cutting and using the above organs, the amount of light emission of the sample can be increased, and objective evaluation with higher accuracy can be performed.
また、本発明の植物の除草剤感受性評価方法において用いられる除草剤の種類は特に制限されず、一般的な除草剤や、除草剤としての効果を有する化合物等を用いることができるが、例えば、ベンスルフロンメチル等を用いることができる。 In addition, the type of herbicide used in the plant herbicide sensitivity evaluation method of the present invention is not particularly limited, and general herbicides, compounds having an effect as herbicides, and the like can be used. Bensulfuron methyl and the like can be used.
除草剤を被検植物に施与する方法としては特に制限されないが、例えば、シャーレ等の容器に被検植物を入れ、そこへ除草剤を添加する方法や、容器に除草剤を入れ、そこへ被検植物を浸漬させる方法等が挙げられる。なお、試料の発光量を増大させ、より精度の高い客観的な評価を行う観点から、被検植物が除草剤に浸漬した状態となるようにすることが好ましい。被検植物に対して除草剤を添加する場合には、被検植物が除草剤に十分に浸漬する量を添加することが好ましい。 The method of applying the herbicide to the test plant is not particularly limited. For example, the test plant is put in a container such as a petri dish, and the herbicide is added to the test plant. Examples include a method of immersing the test plant. In addition, it is preferable to make the test plant immersed in the herbicide from the viewpoint of increasing the light emission amount of the sample and performing objective evaluation with higher accuracy. When adding a herbicide to a test plant, it is preferable to add an amount that the test plant is sufficiently immersed in the herbicide.
次に、測定ステップについて説明する。測定ステップは、除草剤を施与した後の試料の発光量を測定するステップである。 Next, the measurement step will be described. The measurement step is a step of measuring the amount of luminescence of the sample after applying the herbicide.
試料の発光量の測定は、公知の微弱発光測定装置を用いて行うことができ、微弱発光測定装置としては、例えば、フォトンカウンタ（ＰＣＸ−１００、浜松ホトニクス社製）等を用いることができる。かかる微弱発光測定装置は、発光測定用の試料を導入する試料室内が、外部からの光の入射を遮断できる暗室となっている必要がある。また、微弱発光測定装置は、複数の試料の発光量を同時に測定することが可能な多点式の測定装置であることが好ましい。 The light emission amount of the sample can be measured using a known weak light emission measuring device. As the weak light emission measuring device, for example, a photon counter (PCX-100, manufactured by Hamamatsu Photonics) or the like can be used. In such a weak light emission measuring apparatus, the sample chamber into which the sample for light emission measurement is introduced needs to be a dark room that can block the incidence of light from the outside. Further, the weak luminescence measuring device is preferably a multipoint measuring device capable of simultaneously measuring the luminescence amounts of a plurality of samples.
発光量の測定は、室温で行うことが好ましく、更に上記施与ステップと略同一の温度で行うことがより好ましい。したがって、上記微弱発光測定装置は試料室内が室温付近でほぼ一定に保持可能であることが好ましく、２６±１℃程度に保持可能であることがより好ましい。発光量の測定を室温で行うことにより、自然界で被検植物が実際に除草剤を施与された場合をより十分に反映した評価結果を得ることが可能となる。 The measurement of the light emission amount is preferably performed at room temperature, and more preferably performed at substantially the same temperature as the application step. Therefore, it is preferable that the weak luminescence measuring apparatus can be held almost constant in the vicinity of room temperature in the sample chamber, and more preferably about 26 ± 1 ° C. By measuring the amount of luminescence at room temperature, it is possible to obtain an evaluation result that more fully reflects the case where the test plant is actually given a herbicide in nature.
また、測定ステップは、上記施与ステップにおいて試料に除草剤を施与した後に行うことが必要であるが、試料に除草剤を施与してからできるだけ早く測定を開始することが好ましい。これは、被検植物が除草剤感受性を有していない（抵抗性を有している）場合において、当該被検植物の試料に除草剤を施与した後の発光量の変動や発光パターンの違いが、施与してから長時間経過した後では観測しにくくなるためである。したがって、発光量の測定は、試料の発光量の変動や発光パターンの違いの有無を観測できる時期に行う必要がある。具体的な発光量の測定開始時期は、被検植物の種類によって異なるため一概には言えないが、通常、試料に除草剤を施与してから２０時間以内であることが好ましく、１０時間以内であることがより好ましく、３時間以内であることが更に好ましく、１時間以内であることが特に好ましい。また、上記のように、試料に除草剤を施与してからできるだけ早く測定を開始することにより、暗室内で外部からの光を遮断して発光を安定させることができる。 The measurement step needs to be performed after applying the herbicide to the sample in the application step, but it is preferable to start the measurement as soon as possible after applying the herbicide to the sample. This is because, when the test plant is not herbicide-sensitive (has resistance), the change in luminescence amount or the luminescence pattern after the herbicide is applied to the sample of the test plant. The difference is that it becomes difficult to observe after a long time has elapsed since application. Therefore, it is necessary to measure the light emission amount at a time when it is possible to observe the presence or absence of a variation in the light emission amount of the sample or a difference in light emission pattern. Although the specific measurement start time of the amount of luminescence varies depending on the type of the plant to be tested, it cannot be generally stated, but it is usually preferably within 20 hours after applying the herbicide to the sample, and within 10 hours. Is more preferably 3 hours or less, and particularly preferably 1 hour or less. Further, as described above, by starting the measurement as soon as possible after applying the herbicide to the sample, it is possible to block light from the outside in the dark room and stabilize the light emission.
また、測定ステップにおいて、発光量の測定回数や測定時間は、被検植物の試料に除草剤を施与した後の発光量の変動や発光パターンの違いの有無が確認できる範囲であれば特に制限されない。したがって、例えば、試料に除草剤を施与してから所定時間経過後の発光量を１点だけ測定してもよく、試料に除草剤を施与した直後から経時的に発光量を測定してもよい。なお、被検植物の除草剤に対する感受性又は抵抗性を、より高精度で客観的に評価する観点から、経時的に発光量を測定することが好ましく、所定時間連続的に発光量を測定することがより好ましい。 In addition, in the measurement step, the number of measurements and the measurement time of the amount of luminescence are not particularly limited as long as it is possible to confirm the variation in the amount of luminescence after the herbicide is applied to the sample of the test plant and the difference in the luminescence pattern. Not. Therefore, for example, the amount of luminescence after a predetermined time has elapsed after applying a herbicide to the sample may be measured, or the amount of luminescence may be measured over time immediately after the herbicide is applied to the sample. Also good. From the viewpoint of objectively evaluating the sensitivity or resistance of the test plant to the herbicide with higher accuracy, it is preferable to measure the amount of luminescence over time, and measure the amount of luminescence continuously for a predetermined time. Is more preferable.
次に、評価ステップについて説明する。評価ステップは、上記測定ステップにおいて測定した発光量に基づいて、被検植物の除草剤に対する感受性又は抵抗性を評価するステップである。 Next, the evaluation step will be described. The evaluation step is a step of evaluating the sensitivity or resistance of the test plant to the herbicide based on the amount of luminescence measured in the measurement step.
被検植物の除草剤に対する感受性又は抵抗性は、被検植物の試料に除草剤を施与した後の発光量の変動や発光パターンの違いの有無により評価することができる。すなわち、上述したように、施与された除草剤に対して被検植物が抵抗性を有している（感受性を有していない）場合には、発光量の一時的な増強や高い発光の維持、発光の低下といった発光量の変動や発光パターンの違いが生じるため、これら発光量の変動や発光パターンの違いを確認することで、施与された除草剤に対して被検植物が抵抗性を有している（感受性を有していない）と評価することができる。一方、施与された除草剤に対して被検植物が抵抗性を有していない（感受性を有している）場合には、発光量の変動や発光パターンの違いは生じないため、これら発光量の変動や発光パターンの違いが生じていないことを確認することで、施与された除草剤に対して被検植物が抵抗性を有していない（感受性を有している）と評価することができる。 The sensitivity or resistance of the test plant to the herbicide can be evaluated by the change in the amount of luminescence after the herbicide is applied to the sample of the test plant or the difference in the luminescence pattern. That is, as described above, when the test plant is resistant (not sensitive) to the applied herbicide, the amount of luminescence is temporarily increased or high luminescence is observed. Because there are variations in the amount of light emission and the light emission pattern, such as maintenance and reduction in light emission, the test plant is resistant to the applied herbicide by confirming these variations in the light emission amount and the light emission pattern. It can be evaluated that it has (no sensitivity). On the other hand, when the test plant is not resistant (sensitive) to the applied herbicide, there is no change in the amount of luminescence or difference in the luminescence pattern. Evaluate that the test plant is not resistant (sensitive) to the applied herbicide by confirming that there is no variation in amount or difference in luminescence pattern. be able to.
ここで、発光量の変動や発光パターンの違いの有無は、例えば、発光量の基準値又は基準となる発光パターンを予め設定しておき、この基準値又は基準パターンと測定ステップにより測定した発光量又はその発光パターンとを比較することによって判断することができる。このとき、基準値又は基準パターンと測定ステップにより測定した発光量又はその発光パターンとを比較して、有意差が認められれば被検植物は施与された除草剤に対して抵抗性を有している（感受性を有していない）と評価することができ、また、その差の程度により、抵抗性の強さ（感受性の強さ）を評価することができる。なお、差の程度と抵抗性の強さとの関係は、被検植物の種類によって異なる。 Here, whether there is a variation in the light emission amount or a difference in the light emission pattern, for example, a light emission amount reference value or a light emission pattern as a reference is set in advance, and the light emission amount measured by this reference value or reference pattern and the measurement step Or it can judge by comparing the light emission pattern. At this time, comparing the reference value or reference pattern with the amount of luminescence measured in the measurement step or the luminescence pattern, and if a significant difference is observed, the test plant has resistance to the applied herbicide. It can be evaluated that it is (not having sensitivity), and the strength of resistance (strength of sensitivity) can be evaluated by the degree of the difference. The relationship between the degree of difference and the strength of resistance varies depending on the type of plant to be tested.
また、本発明の植物の除草剤感受性評価方法は、上記評価ステップにおいてより精度の高いより客観的な評価を行うために、ブランク測定ステップ及び比較ステップを更に含むことが好ましい。以下、これら各ステップについて説明する。 Moreover, it is preferable that the herbicide sensitivity evaluation method of the plant of this invention further includes a blank measurement step and a comparison step in order to perform more objective evaluation with higher accuracy in the evaluation step. Hereinafter, each of these steps will be described.
ブランク測定ステップは、上述した被検植物の試料と同一部位で同一量の被検植物のブランク試料について、上述した除草剤を施与せずに発光量を測定するステップである。 The blank measurement step is a step of measuring the amount of luminescence without applying the above-described herbicide on the same amount of the blank sample of the test plant at the same site as the sample of the test plant described above.
ここで、ブランク試料には、被検植物の茎、葉及び根等の器官として上記試料と同一の器官を用いることが必要であるが、まず１つの試料を用意し、そこから等量の試料を採取して試料及びブランク試料を用意することが好ましい。このとき、上記器官を十分に切り刻んだ状態とし、そこから採取することが特に好ましい。このようにして上記試料と同一部位で同一量の被検植物のブランク試料を用意することで、評価の精度及び客観性をより向上させることができる。 Here, as a blank sample, it is necessary to use the same organ as the above sample as an organ such as a stem, a leaf, and a root of a test plant. First, one sample is prepared, and an equal amount of sample is prepared therefrom. It is preferable to collect a sample and prepare a sample and a blank sample. At this time, it is particularly preferable that the organ is sufficiently chopped and collected from there. Thus, by preparing a blank sample of the same amount of the test plant at the same site as the sample, the accuracy of evaluation and the objectivity can be further improved.
また、ブランク試料の発光量の測定は、除草剤を施与しない状態で行うことが必要である。このとき、無処理のままのブランク試料を用いて発光量の測定を行ってもよいが、除草剤を与えた場合と対比しやすくするために、上記施与ステップにおいて施与した除草剤の量と同一量の水又はその他の液体をブランク試料に施与して、発光量の測定を行うことが好ましい。 Moreover, it is necessary to measure the light emission amount of the blank sample in a state where no herbicide is applied. At this time, the amount of luminescence may be measured using a blank sample that has not been treated, but the amount of the herbicide applied in the above application step in order to facilitate comparison with the case of applying the herbicide. It is preferable to measure the amount of luminescence by applying the same amount of water or other liquid to the blank sample.
発光量の測定は、上記測定ステップにおいて説明した方法と同様の方法で行うことができる。このとき、多点式の微弱発光測定装置を用いて、試料とブランク試料とを同時に暗室に入れ、発光量の測定を同時に行うことが好ましい。また、ブランク試料に対して水等を施与する場合、発光量の測定開始時期は、除草剤を施与した試料の測定開始時期と揃えることが好ましい。したがって、まず試料及びブランク試料を用意し、試料には除草剤を、ブランク試料には水等を同時に施与し、これらの発光量を多点式の微弱発光測定装置を用いて同時に測定することが特に好ましい。更に、発光量の測定回数や測定時間についても、試料とブランク試料との間で揃えることが好ましい。 The measurement of the light emission amount can be performed by the same method as that described in the measurement step. At this time, it is preferable that the sample and the blank sample are simultaneously placed in a dark room by using a multipoint weak light emission measuring device, and the light emission amount is measured simultaneously. Moreover, when water etc. are given with respect to a blank sample, it is preferable to arrange | equalize the measurement start time of the light-emission quantity with the measurement start time of the sample which applied the herbicide. Therefore, first prepare a sample and a blank sample, apply a herbicide to the sample and water simultaneously to the blank sample, and measure the amount of luminescence simultaneously using a multipoint weak luminescence measuring device. Is particularly preferred. Furthermore, it is preferable that the number of times of light emission measurement and the measurement time are also uniform between the sample and the blank sample.
次に、比較ステップは、上記測定ステップにおいて測定した試料の発光量と上記ブランク測定ステップにおいて測定したブランク試料の発光量とを比較することで比較データを得るステップである。 Next, the comparison step is a step of obtaining comparison data by comparing the light emission amount of the sample measured in the measurement step with the light emission amount of the blank sample measured in the blank measurement step.
ここで、比較データとしては、試料の発光量とブランク試料の発光量との差、試料の発光量とブランク試料の発光量との比、及び、試料の発光量を経時的に測定した場合の発光パターンとブランク試料の発光量を経時的に測定した場合の発光パターンとの違い、等が挙げられ、これらのうちの少なくとも一種の比較データを含むことが好ましい。 Here, as comparison data, the difference between the light emission amount of the sample and the light emission amount of the blank sample, the ratio between the light emission amount of the sample and the light emission amount of the blank sample, and the case where the light emission amount of the sample is measured over time The difference between the light emission pattern and the light emission pattern when the amount of light emission of the blank sample is measured over time, and the like are mentioned, and it is preferable to include at least one kind of comparison data.
これらの比較データのうち、試料の発光量とブランク試料の発光量との差又は比としては、測定開始から所定時間経過後の発光量を１点だけ測定した場合の発光量の差又は比、経時的に発光量を複数回測定したときの合計の発光量の差又は比、及び、所定時間連続的に発光量を測定した場合の発光量の積分値の差又は比等が挙げられる。 Among these comparison data, as the difference or ratio between the light emission amount of the sample and the light emission amount of the blank sample, the difference or ratio of the light emission amount when only one point of light emission after a predetermined time has elapsed from the start of measurement, Examples include the difference or ratio of the total light emission when the light emission is measured a plurality of times over time, and the difference or ratio of the integrated value of the light emission when the light emission is measured continuously for a predetermined time.
また、試料の発光量を経時的に測定した場合の発光パターンとブランク試料の発光量を経時的に測定した場合の発光パターンとの違いとしては、発光量の一時的な増強や低下、高い発光の維持等による発光パターンの違いが挙げられる。なお、発光パターンは、発光量を断続的に測定して確認することもできるが、評価の精度を高めるために、発光量を連続的に測定して確認することが好ましい。 In addition, the difference between the light emission pattern when the light emission amount of the sample is measured over time and the light emission pattern when the light emission amount of the blank sample is measured over time includes temporary increase or decrease in the light emission amount, high light emission. The difference of the light emission pattern by the maintenance etc. is mentioned. The light emission pattern can be confirmed by intermittently measuring the light emission amount, but it is preferable to confirm the light emission amount by continuously measuring in order to improve the accuracy of evaluation.
本発明の植物の除草剤感受性評価方法が上記ブランク測定ステップ及び上記比較ステップを含む場合、上記評価ステップは、上記比較ステップにより得られた比較データに基づいて、被検植物の除草剤に対する感受性又は抵抗性を評価することにより行うこととなる。そして、比較データに有意差が認められれば、被検植物は施与された除草剤に対して抵抗性を有している（感受性を有していない）と評価することができ、また、その差の程度により、抵抗性の強さ（感受性の強さ）を評価することができる。 When the plant herbicide sensitivity evaluation method of the present invention includes the blank measurement step and the comparison step, the evaluation step is based on the comparison data obtained by the comparison step, or the sensitivity of the test plant to the herbicide or This is done by evaluating the resistance. And if a significant difference is recognized in the comparison data, the test plant can be evaluated as having resistance (not sensitive) to the applied herbicide, Depending on the degree of difference, the strength of resistance (strength of sensitivity) can be evaluated.
以上説明した本発明の植物の除草剤感受性評価方法によれば、植物の除草剤に対する感受性又は抵抗性を短期間で簡易に、且つ、客観的に評価することできる。かかる植物の除草剤感受性評価方法は、雑草に対する除草剤の効果の検定、作物に対する除草剤による薬害の検定、及び、除草剤抵抗性変異型雑草の識別等に活用することができる。 According to the plant herbicide sensitivity evaluation method of the present invention described above, the sensitivity or resistance of a plant to a herbicide can be easily and objectively evaluated in a short period of time. Such a method for evaluating the herbicide sensitivity of plants can be used for testing the effects of herbicides on weeds, testing for phytotoxicity of herbicides on crops, and identifying herbicide-resistant mutant weeds.
更に、本発明の植物の除草剤感受性評価方法を用いることにより、複数の被検植物の中から、特定の除草剤に対する感受性又は抵抗性を有する植物を短期間で簡易に選別することが可能となる。 Furthermore, by using the herbicide sensitivity evaluation method for plants of the present invention, it is possible to easily select a plant having sensitivity or resistance to a specific herbicide from a plurality of test plants in a short period of time. Become.
（化合物の除草活性評価方法）
本発明の化合物の除草活性評価方法は、植物に対する被検化合物の除草活性を評価する化合物の除草活性評価方法であって、上記植物の試料に上記被検化合物を施与する施与ステップと、上記被検化合物を施与した後の上記試料の発光量を測定する測定ステップと、測定した上記発光量に基づいて、上記被検化合物の上記植物に対する除草活性を評価する評価ステップと、を備えることを特徴とする方法である。以下、各ステップについて詳細に説明する。
(Method for evaluating herbicidal activity of compound)
The method for evaluating the herbicidal activity of a compound of the present invention is a method for evaluating the herbicidal activity of a compound for evaluating the herbicidal activity of a test compound against a plant, comprising the step of applying the test compound to a sample of the plant, A measurement step for measuring the amount of luminescence of the sample after application of the test compound; and an evaluation step for evaluating the herbicidal activity of the test compound against the plant based on the measured amount of luminescence. It is the method characterized by this. Hereinafter, each step will be described in detail.
まず、施与ステップについて説明する。施与ステップは、植物の試料に被検化合物を施与するステップである。 First, the application step will be described. The applying step is a step of applying a test compound to a plant sample.
ここで、本発明の化合物の除草活性評価方法において用いられる植物の種類は特に制限されず、一般的な農作物、雑草種等を用いることができる。なお、かかる植物としては、例えば、上記植物の除草剤感受性評価方法において例示したものが挙げられる。また、かかる植物の試料に関しても、上記植物の除草剤感受性評価方法において説明した通りである。 Here, the kind of the plant used in the method for evaluating the herbicidal activity of the compound of the present invention is not particularly limited, and general crops, weed species and the like can be used. In addition, as this plant, what was illustrated in the herbicide sensitivity evaluation method of the said plant is mentioned, for example. The plant sample is also as described in the method for evaluating the herbicide sensitivity of the plant.
また、本発明の化合物の除草活性評価方法における被検化合物としては、上記植物の除草剤感受性評価方法において例示した一般的な除草剤の他、除草剤の候補となる化合物を用いることができる。 Moreover, as a test compound in the method for evaluating the herbicidal activity of the compound of the present invention, in addition to the general herbicides exemplified in the above method for evaluating the herbicide sensitivity of plants, compounds that are candidates for herbicides can be used.
また、被検化合物を植物に施与する方法としては、上記植物の除草剤感受性評価方法における施与ステップと同様の方法を用いることができる。 In addition, as a method for applying the test compound to a plant, the same method as the application step in the herbicide sensitivity evaluation method for the plant can be used.
次に、測定ステップについて説明する。測定ステップは、被検化合物を施与した後の試料の発光量を測定するステップである。かかる測定ステップは、除草剤に代えて被検化合物を用いた以外は、上記植物の除草剤感受性評価方法における測定ステップと同様の手順で行うことができる。 Next, the measurement step will be described. The measurement step is a step of measuring the amount of luminescence of the sample after applying the test compound. Such a measurement step can be performed in the same procedure as the measurement step in the herbicide sensitivity evaluation method for plants described above, except that a test compound is used instead of the herbicide.
次に、評価ステップについて説明する。評価ステップは、上記測定ステップにおいて測定した発光量に基づいて、被検化合物の植物に対する除草活性を評価するステップである。 Next, the evaluation step will be described. The evaluation step is a step of evaluating the herbicidal activity of the test compound on the plant based on the amount of luminescence measured in the measurement step.
被検化合物の植物に対する除草活性（除草剤としての有効性）は、植物の試料に被検化合物を施与した後の発光量の変動や発光パターンの違いの有無により評価することができる。すなわち、上述したように、被検化合物が植物に対して除草活性を有していない場合には、発光量の一時的な増強や高い発光の維持、発光の低下といった発光量の変動や発光パターンの違いが生じるため、これら発光量の変動や発光パターンの違いを確認することで、被検化合物が植物に対して除草活性を有していないと評価することができる。一方、被検化合物が植物に対して除草活性を有している場合には、発光量の変動や発光パターンの違いは生じないため、これら発光量の変動や発光パターンの違いが生じていないことを確認することで、被検化合物が植物に対して除草活性を有していると評価することができる。 The herbicidal activity (effectiveness as a herbicide) of the test compound on the plant can be evaluated by the change in the amount of luminescence after the test compound is applied to the plant sample or the difference in the luminescence pattern. That is, as described above, when the test compound does not have herbicidal activity against the plant, fluctuations in the amount of luminescence such as temporary enhancement of luminescence, maintenance of high luminescence, reduction of luminescence, and luminescence pattern Therefore, it can be evaluated that the test compound does not have herbicidal activity against the plant by confirming the variation in the amount of luminescence and the difference in the luminescence pattern. On the other hand, when the test compound has herbicidal activity against a plant, there is no change in the amount of luminescence and no difference in the luminescence pattern. It can be evaluated that the test compound has herbicidal activity against the plant.
ここで、発光量の変動や発光パターンの違いの有無は、例えば、発光量の基準値又は基準となる発光パターンを予め設定しておき、この基準値又は基準パターンと測定ステップにより測定した発光量又はその発光パターンとを比較することによって判断することができる。このとき、基準値又は基準パターンと測定ステップにより測定した発光量又はその発光パターンとを比較して、有意差が認められなければ被検化合物はこれを施与した植物に対して除草活性を有していると評価することができる。また、差の程度により、除草活性の強さを評価することができる。なお、差の程度と除草活性の強さとの関係は、植物の種類によって異なる。 Here, whether there is a variation in the light emission amount or a difference in the light emission pattern, for example, a light emission amount reference value or a light emission pattern as a reference is set in advance, and the light emission amount measured by this reference value or reference pattern and the measurement step Or it can judge by comparing the light emission pattern. At this time, the reference value or reference pattern is compared with the amount of luminescence measured in the measurement step or the luminescence pattern, and if no significant difference is observed, the test compound has herbicidal activity against the plant to which it has been applied. Can be evaluated. Moreover, the strength of herbicidal activity can be evaluated by the degree of difference. The relationship between the degree of difference and the strength of herbicidal activity varies depending on the type of plant.
また、本発明の化合物の除草活性評価方法は、上記評価ステップにおいてより精度の高いより客観的な評価を行うために、上述した植物の試料と同一部位で同一量のブランク試料について、上記被検化合物を施与せずに発光量を測定するブランク測定ステップと、上記測定ステップにおいて測定した試料の発光量と上記ブランク測定ステップにおいて測定したブランク試料の発光量とを比較することで比較データを得る比較ステップと、を更に含むことが好ましい。ブランク測定ステップ及び比較ステップは、上記植物の除草剤感受性評価方法におけるブランク測定ステップ及び比較ステップと同様の手順で行うことができる。 In addition, the method for evaluating the herbicidal activity of the compound of the present invention is the above-mentioned test for the same amount of blank sample at the same site as the above-mentioned plant sample in order to perform more objective evaluation with higher accuracy in the evaluation step. Comparison data is obtained by comparing the blank measurement step in which the amount of luminescence is measured without applying the compound, the amount of luminescence of the sample measured in the measurement step and the amount of luminescence of the blank sample measured in the blank measurement step. A comparison step. The blank measurement step and the comparison step can be performed in the same procedure as the blank measurement step and the comparison step in the herbicide sensitivity evaluation method for the plant.
本発明の化合物の除草活性評価方法が上記ブランク測定ステップ及び上記比較ステップを含む場合、上記評価ステップは、上記比較ステップにより得られた比較データに基づいて、被検化合物の植物に対する除草活性を評価することにより行うこととなる。そして、比較データに有意差が認められなければ、被検化合物はこれを施与した植物に対して除草活性を有していると評価することができ、また、差の程度により、除草活性の強さを評価することができる。 When the method for evaluating the herbicidal activity of the compound of the present invention includes the blank measurement step and the comparison step, the evaluation step evaluates the herbicidal activity of the test compound against the plant based on the comparison data obtained by the comparison step. It will be done by doing. If no significant difference is found in the comparison data, the test compound can be evaluated as having herbicidal activity against the plant to which the test compound has been applied. Strength can be evaluated.
以上説明した本発明の化合物の除草活性評価方法によれば、被検化合物の植物に対する除草活性を短期間で簡易に、且つ、客観的に評価することできる。かかる化合物の除草活性評価方法は、新規除草剤の開発、雑草に対する被検化合物の除草活性の検定、作物に対する被検化合物による薬害の検定等に活用することができる。 According to the method for evaluating the herbicidal activity of the compound of the present invention described above, the herbicidal activity of the test compound against the plant can be easily and objectively evaluated in a short period of time. The method for evaluating the herbicidal activity of such compounds can be utilized for the development of new herbicides, the test of the herbicidal activity of test compounds against weeds, the test of phytotoxicity by test compounds on crops, and the like.
特に、本発明の化合物の除草活性評価方法によれば、除草剤の候補となる複数の被検化合物の中から、特定の植物に対して除草活性を有する化合物を短期間で簡易に選別することが可能となるため、新規な除草剤の開発に非常に有用である。 In particular, according to the method for evaluating the herbicidal activity of the compound of the present invention, a compound having herbicidal activity against a specific plant can be easily selected from a plurality of test compounds that are candidates for herbicides in a short period of time. Therefore, it is very useful for the development of new herbicides.
以下、実施例及び比較例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated more concretely based on an Example and a comparative example, this invention is not limited to a following example.
（実施例１）
温室内で育成したイヌホタルイを被検植物として用意した。このイヌホタルイは、除草剤であるベンスルフロンメチルに対して感受性を有している（抵抗性を有していない）ことが予め確認されているものである。このイヌホタルイの葉を採取して５ｍｍ角に切断し、切断した葉１ｇを直径６０ｍｍの２つのシャーレにそれぞれ取り、一方を試料、他方をブランク試料として用意した。次に、上記試料に終濃度１００ｐｐｍのベンスルフロンメチル水溶液（除草剤）１ｍｌを添加し、これと同時に、上記ブランク試料に蒸留水１ｍｌを添加した。添加後、直ぐに試料及びブランク試料をフォトンカウンタ（ＰＣＸ−１００、浜松ホトニクス社製）の暗室内に入れ、添加直後（５分以内）から３０時間後までの試料及びブランク試料の発光量を連続的に測定した。除草剤を試料に、蒸留水をブランク試料にそれぞれ添加してからの経過時間（添加後時間）［時間］と、発光量［フォトン／秒］との関係を図１のグラフに示す。
Example 1
A dog firefly raised in a greenhouse was prepared as a test plant. This dog firefly has been confirmed in advance to be sensitive (not resistant) to the herbicide bensulfuron methyl. The leaves of this firefly were collected and cut into 5 mm squares, 1 g of the cut leaves were placed in two petri dishes each having a diameter of 60 mm, and one was prepared as a sample and the other as a blank sample. Next, 1 ml of a bensulfuron methyl aqueous solution (herbicide) having a final concentration of 100 ppm was added to the sample, and simultaneously, 1 ml of distilled water was added to the blank sample. Immediately after the addition, the sample and the blank sample are placed in the dark room of a photon counter (PCX-100, manufactured by Hamamatsu Photonics), and the amount of luminescence of the sample and the blank sample immediately after addition (within 5 minutes) to 30 hours later is continuously measured. Measured. The graph of FIG. 1 shows the relationship between the elapsed time (time after addition) [time] after adding herbicide to the sample and distilled water to the blank sample, and the amount of luminescence [photons / second].
図１に示したグラフから明らかなように、試料とブランク試料との間には、発光量及び発光パターンのいずれについても有意差が見られなかった。このことから、実施例１のイヌホタルイは感受性を有している（抵抗性を有していない）と評価した。 As is clear from the graph shown in FIG. 1, no significant difference was observed between the sample and the blank sample with respect to both the light emission amount and the light emission pattern. From this, the dog firefly of Example 1 was evaluated as having sensitivity (not having resistance).
（実施例２）
温室内で育成したイボクサを被検植物として用意した。このイボクサは、除草剤であるベンスルフロンメチルに対して感受性を有している（抵抗性を有していない）ことが予め確認されているものである。このイボクサの葉を採取して５ｍｍ角に切断し、切断した葉１ｇを直径６０ｍｍの２つのシャーレにそれぞれ取り、一方を試料、他方をブランク試料として用意した。次に、上記試料に終濃度１００ｐｐｍのベンスルフロンメチル水溶液（除草剤）１ｍｌを添加し、これと同時に、上記ブランク試料に蒸留水１ｍｌを添加した。添加後、直ぐに試料及びブランク試料をフォトンカウンタ（ＰＣＸ−１００、浜松ホトニクス社製）の暗室内に入れ、添加直後（５分以内）から３０時間後までの試料及びブランク試料の発光量を連続的に測定した。除草剤を試料に、蒸留水をブランク試料にそれぞれ添加してからの経過時間（添加後時間）［時間］と、発光量［フォトン／秒］との関係を図２のグラフに示す。
(Example 2)
Ibokusa grown in a greenhouse was prepared as a test plant. It has been confirmed in advance that this stinkweed is sensitive (not resistant) to bensulfuron methyl, a herbicide. The leaves of this box were collected and cut into 5 mm squares, 1 g of the cut leaves were taken in two petri dishes each having a diameter of 60 mm, and one was prepared as a sample and the other as a blank sample. Next, 1 ml of a bensulfuron methyl aqueous solution (herbicide) having a final concentration of 100 ppm was added to the sample, and simultaneously, 1 ml of distilled water was added to the blank sample. Immediately after the addition, the sample and the blank sample are placed in the dark room of a photon counter (PCX-100, manufactured by Hamamatsu Photonics), and the amount of luminescence of the sample and the blank sample immediately after addition (within 5 minutes) to 30 hours later is continuously measured. Measured. The relationship between the elapsed time (time after addition) [time] after adding the herbicide to the sample and the distilled water to the blank sample and the amount of luminescence [photon / second] is shown in the graph of FIG.
図２に示したグラフから明らかなように、試料とブランク試料との間には、発光量及び発光パターンのいずれについても有意差が見られなかった。このことから、実施例２のイボクサは感受性を有している（抵抗性を有していない）と評価した。 As is clear from the graph shown in FIG. 2, no significant difference was observed between the sample and the blank sample with respect to both the light emission amount and the light emission pattern. From this, it was evaluated that the squirrel of Example 2 has sensitivity (does not have resistance).
（実施例３）
温室内で育成したイネを被検植物として用意した。このイネは、除草剤であるベンスルフロンメチルに対して感受性を有していない（抵抗性を有している）ことが予め確認されているものである。このイネの葉を採取して５ｍｍ角に切断し、切断した葉１ｇを直径６０ｍｍの２つのシャーレにそれぞれ取り、一方を試料、他方をブランク試料として用意した。次に、上記試料に終濃度１００ｐｐｍのベンスルフロンメチル水溶液（除草剤）１ｍｌを添加し、これと同時に、上記ブランク試料に蒸留水１ｍｌを添加した。添加後、直ぐに試料及びブランク試料をフォトンカウンタ（ＰＣＸ−１００、浜松ホトニクス社製）の暗室内に入れ、添加直後（５分以内）から３０時間後までの試料及びブランク試料の発光量を連続的に測定した。除草剤を試料に、蒸留水をブランク試料にそれぞれ添加してからの経過時間（添加後時間）［時間］と、発光量［フォトン／秒］との関係を図３のグラフに示す。
(Example 3)
Rice grown in a greenhouse was prepared as a test plant. It has been previously confirmed that this rice has no sensitivity (has resistance) to the herbicide bensulfuron methyl. The rice leaves were collected and cut into 5 mm squares, 1 g of the cut leaves were taken in two petri dishes each having a diameter of 60 mm, and one was prepared as a sample and the other as a blank sample. Next, 1 ml of a bensulfuron methyl aqueous solution (herbicide) having a final concentration of 100 ppm was added to the sample, and simultaneously, 1 ml of distilled water was added to the blank sample. Immediately after the addition, the sample and the blank sample are placed in the dark room of a photon counter (PCX-100, manufactured by Hamamatsu Photonics), and the amount of luminescence of the sample and the blank sample immediately after addition (within 5 minutes) to 30 hours later is continuously measured. Measured. The graph of FIG. 3 shows the relationship between the elapsed time (time after addition) [time] after adding the herbicide to the sample and distilled water to the blank sample, and the amount of luminescence [photons / second].
図３に示したグラフから明らかなように、試料とブランク試料との間には、発光量及び発光パターンのいずれについても有意差が見られた。このことから、実施例３のイネは感受性を有していない（抵抗性を有している）と評価した。 As apparent from the graph shown in FIG. 3, a significant difference was observed between the sample and the blank sample in both the light emission amount and the light emission pattern. From this, the rice of Example 3 was evaluated as having no sensitivity (having resistance).
（実施例４）
温室内で育成したタイヌビエを被検植物として用意した。このタイヌビエは、除草剤であるベンスルフロンメチルに対して感受性を有していない（抵抗性を有している）ことが予め確認されているものである。このタイヌビエの葉を採取して５ｍｍ角に切断し、切断した葉１ｇを直径６０ｍｍの２つのシャーレにそれぞれ取り、一方を試料、他方をブランク試料として用意した。次に、上記試料に終濃度１００ｐｐｍのベンスルフロンメチル水溶液（除草剤）１ｍｌを添加し、これと同時に、上記ブランク試料に蒸留水１ｍｌを添加した。添加後、直ぐに試料及びブランク試料をフォトンカウンタ（ＰＣＸ−１００、浜松ホトニクス社製）の暗室内に入れ、添加直後（５分以内）から３０時間後までの試料及びブランク試料の発光量を連続的に測定した。除草剤を試料に、蒸留水をブランク試料にそれぞれ添加してからの経過時間（添加後時間）［時間］と、発光量［フォトン／秒］との関係を図４のグラフに示す。
Example 4
Tainubies grown in a greenhouse were prepared as test plants. This Tainubier has been previously confirmed to be insensitive (has resistance) to the herbicide bensulfuron methyl. The Tainubier leaves were collected and cut into 5 mm squares, and 1 g of the cut leaves were placed in two petri dishes each having a diameter of 60 mm, and one was prepared as a sample and the other as a blank sample. Next, 1 ml of a bensulfuron methyl aqueous solution (herbicide) having a final concentration of 100 ppm was added to the sample, and simultaneously, 1 ml of distilled water was added to the blank sample. Immediately after the addition, the sample and the blank sample are placed in the dark room of a photon counter (PCX-100, manufactured by Hamamatsu Photonics), and the amount of luminescence of the sample and the blank sample immediately after addition (within 5 minutes) to 30 hours later is continuously measured. Measured. The graph of FIG. 4 shows the relationship between the elapsed time (time after addition) [time] after adding herbicide to the sample and distilled water to the blank sample, and the amount of luminescence [photons / second].
図４に示したグラフから明らかなように、試料とブランク試料との間には、発光量及び発光パターンのいずれについても有意差が見られた。このことから、実施例４のタイヌビエは感受性を有していない（抵抗性を有している）と評価した。 As is clear from the graph shown in FIG. 4, a significant difference was observed between the sample and the blank sample in both the light emission amount and the light emission pattern. From this, the Tainubier of Example 4 was evaluated as having no sensitivity (having resistance).
（実施例５）
温室内で育成したイヌホタルイを被検植物として用意した。このイヌホタルイは、除草剤であるベンスルフロンメチルに対して感受性を有している（抵抗性を有していない）ことが予め確認されているものである。このイヌホタルイの花茎を採取して５ｍｍ角に切断し、切断した花茎１ｇを直径６０ｍｍの２つのシャーレにそれぞれ取り、一方を試料、他方をブランク試料として用意した。次に、上記試料に終濃度１００ｐｐｍのベンスルフロンメチル水溶液（除草剤）１ｍｌを添加し、これと同時に、上記ブランク試料に蒸留水１ｍｌを添加した。添加後、直ぐに試料及びブランク試料をフォトンカウンタ（ＰＣＸ−１００、浜松ホトニクス社製）の暗室内に入れ、添加直後（５分以内）から３０時間後までの試料及びブランク試料の発光量を連続的に測定した。除草剤を試料に、蒸留水をブランク試料にそれぞれ添加してからの経過時間（添加後時間）［時間］と、発光量［フォトン／秒］との関係を図５のグラフに示す。
(Example 5)
A dog firefly raised in a greenhouse was prepared as a test plant. This dog firefly has been confirmed in advance to be sensitive (not resistant) to the herbicide bensulfuron methyl. The flower stems of this firefly were collected and cut into 5 mm squares, and 1 g of the cut flower stems were taken in two petri dishes each having a diameter of 60 mm, and one was prepared as a sample and the other as a blank sample. Next, 1 ml of a bensulfuron methyl aqueous solution (herbicide) having a final concentration of 100 ppm was added to the sample, and simultaneously, 1 ml of distilled water was added to the blank sample. Immediately after the addition, the sample and the blank sample are placed in the dark room of a photon counter (PCX-100, manufactured by Hamamatsu Photonics), and the amount of luminescence of the sample and the blank sample immediately after addition (within 5 minutes) to 30 hours later is continuously measured. Measured. The graph of FIG. 5 shows the relationship between the elapsed time (time after addition) [time] after adding herbicide to the sample and distilled water to the blank sample, and the amount of luminescence [photons / second].
図５に示したグラフから明らかなように、試料とブランク試料との間には、発光量及び発光パターンのいずれについても有意差が見られなかった。このことから、実施例５のイヌホタルイは感受性を有している（抵抗性を有していない）と評価した。 As is clear from the graph shown in FIG. 5, there was no significant difference between the sample and the blank sample with respect to both the light emission amount and the light emission pattern. From this, the dog firefly of Example 5 was evaluated as having sensitivity (not having resistance).
（実施例６）
温室内で育成したイヌホタルイを被検植物として用意した。このイヌホタルイは、抵抗性変異型のものであり、除草剤であるベンスルフロンメチルに対して感受性を有していない（抵抗性を有している）ことが予め確認されているものである。このイヌホタルイの花茎を採取して５ｍｍ角に切断し、切断した花茎１ｇを直径６０ｍｍの２つのシャーレにそれぞれ取り、一方を試料、他方をブランク試料として用意した。次に、上記試料に終濃度１００ｐｐｍのベンスルフロンメチル水溶液（除草剤）１ｍｌを添加し、これと同時に、上記ブランク試料に蒸留水１ｍｌを添加した。添加後、直ぐに試料及びブランク試料をフォトンカウンタ（ＰＣＸ−１００、浜松ホトニクス社製）の暗室内に入れ、添加直後（５分以内）から３０時間後までの試料及びブランク試料の発光量を連続的に測定した。除草剤を試料に、蒸留水をブランク試料にそれぞれ添加してからの経過時間（添加後時間）［時間］と、発光量［フォトン／秒］との関係を図６のグラフに示す。
(Example 6)
A dog firefly raised in a greenhouse was prepared as a test plant. This dog firefly is of a resistant mutant type and has been confirmed in advance to have no sensitivity (has resistance) to the herbicide bensulfuron methyl. The flower stems of this firefly were collected and cut into 5 mm squares, and 1 g of the cut flower stems were taken in two petri dishes each having a diameter of 60 mm, and one was prepared as a sample and the other as a blank sample. Next, 1 ml of a bensulfuron methyl aqueous solution (herbicide) having a final concentration of 100 ppm was added to the sample, and simultaneously, 1 ml of distilled water was added to the blank sample. Immediately after the addition, the sample and the blank sample are placed in the dark room of a photon counter (PCX-100, manufactured by Hamamatsu Photonics), and the amount of luminescence of the sample and the blank sample immediately after addition (within 5 minutes) to 30 hours later is continuously measured. Measured. The relationship between the elapsed time (time after addition) [time] after adding the herbicide to the sample and the distilled water to the blank sample and the amount of luminescence [photon / second] is shown in the graph of FIG.
図６に示したグラフから明らかなように、試料とブランク試料との間には、発光量及び発光パターンのいずれについても有意差が見られなかった。このことから、実施例６のイヌホタルイは感受性を有していない（抵抗性を有している）と評価した。 As apparent from the graph shown in FIG. 6, no significant difference was observed between the sample and the blank sample with respect to both the light emission amount and the light emission pattern. From this, it was evaluated that the dog firefly of Example 6 has no sensitivity (has resistance).
実施例１〜６に示した結果から明らかなように、本発明の植物の除草剤感受性評価方法によれば、被検植物の除草剤に対する感受性又は抵抗性を短期間で簡易に、且つ、客観的に評価することが可能であることが確認された。 As is clear from the results shown in Examples 1 to 6, according to the plant herbicide sensitivity evaluation method of the present invention, the sensitivity or resistance of the test plant to the herbicide is easily and objectively determined in a short period of time. It was confirmed that it was possible to evaluate it automatically.
Claims (10)
前記被検植物の試料に前記除草剤を施与する施与ステップと、
前記除草剤を施与した後の前記試料の発光量を測定する測定ステップと、
測定した前記発光量に基づいて、前記被検植物の前記除草剤に対する感受性又は抵抗性を評価する評価ステップと、
を備えることを特徴とする植物の除草剤感受性評価方法。 A plant herbicide sensitivity evaluation method for evaluating the sensitivity or resistance of a test plant to a herbicide,
An application step of applying the herbicide to the sample of the test plant;
A measurement step of measuring the amount of luminescence of the sample after applying the herbicide;
Based on the measured amount of luminescence, an evaluation step for evaluating sensitivity or resistance of the test plant to the herbicide;
A herbicide sensitivity evaluation method for plants, comprising:
前記測定ステップにおいて測定した前記試料の発光量と前記ブランク測定ステップにおいて測定した前記ブランク試料の発光量とを比較することで比較データを得る比較ステップと、を更に含み、
前記評価ステップは、前記比較データに基づいて、前記被検植物の前記除草剤に対する感受性又は抵抗性を評価することにより行うことを特徴とする請求項１〜３のうちのいずれか一項に記載の植物の除草剤感受性評価方法。 About a blank sample of the same amount of the test plant at the same site as the sample, a blank measurement step for measuring the amount of luminescence without applying the herbicide,
A comparison step of obtaining comparison data by comparing the light emission amount of the sample measured in the measurement step and the light emission amount of the blank sample measured in the blank measurement step,
The said evaluation step is performed by evaluating the sensitivity or resistance with respect to the said herbicide of the said test plant based on the said comparison data, It is any one of Claims 1-3 characterized by the above-mentioned. For evaluating the herbicide sensitivity of plants.
前記植物の試料に前記被検化合物を施与する施与ステップと、
前記被検化合物を施与した後の前記試料の発光量を測定する測定ステップと、
測定した前記発光量に基づいて、前記被検化合物の前記植物に対する除草活性を評価する評価ステップと、
を備えることを特徴とする化合物の除草活性評価方法。 A method for evaluating the herbicidal activity of a compound for evaluating the herbicidal activity of a test compound against a plant,
An application step of applying the test compound to the plant sample;
A measurement step of measuring the amount of luminescence of the sample after applying the test compound;
An evaluation step for evaluating the herbicidal activity of the test compound against the plant based on the measured amount of luminescence;
A method for evaluating the herbicidal activity of a compound.
前記測定ステップにおいて測定した前記試料の発光量と前記ブランク測定ステップにおいて測定した前記ブランク試料の発光量とを比較することで比較データを得る比較ステップと、を更に含み、
前記評価ステップは、前記比較データに基づいて、前記被検化合物の前記植物に対する除草活性を評価することにより行うことを特徴とする請求項６〜８のうちのいずれか一項に記載の化合物の除草活性評価方法。 About a blank sample of the same amount of the plant at the same site as the sample, a blank measurement step of measuring the amount of luminescence without applying the test compound,
A comparison step of obtaining comparison data by comparing the light emission amount of the sample measured in the measurement step and the light emission amount of the blank sample measured in the blank measurement step,
The evaluation step is performed by evaluating the herbicidal activity of the test compound with respect to the plant based on the comparison data. The compound according to any one of claims 6 to 8, Method for evaluating herbicidal activity.
The comparison data was obtained by measuring the difference between the light emission amount of the sample and the light emission amount of the blank sample, the ratio of the light emission amount of the sample and the light emission amount of the blank sample, and the light emission amount of the sample over time. The compound according to claim 9, comprising at least one kind of comparison data selected from the group consisting of the difference between the emission pattern of the case and the emission pattern when the amount of emission of the blank sample is measured over time. Method for evaluating herbicidal activity.
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019133471A1 (en) | 2017-12-29 | 2019-07-04 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Compositions and methods for controlling plant or crop size in a controlled environment |
| CN112730757A (en) * | 2021-01-12 | 2021-04-30 | 浙江农林大学 | A active subregion test device that divides of weeding for 4,8-DHT herbicide |
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|---|---|---|---|---|
| JPH06315320A (en) * | 1992-10-16 | 1994-11-15 | Hamamatsu Photonics Kk | Assay for resistance to plant disease, evaluation of disease resistance enhancement and the system and evaluation and system for agrochemical |
| JP2001099830A (en) * | 1999-09-30 | 2001-04-13 | Shizuoka Prefecture | Plant selection system based on organism information |
-
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- 2005-03-16 JP JP2005075732A patent/JP2006257009A/en active Pending
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