【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、マツノザイセンチュウ、ネコブセンチュウ、シストセンチュウ、キタネグサレセンチュウなどに対して殺センチュウ作用を有する菌を含む粒状殺センチュウ剤の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
マツノマダラカミキリを媒介昆虫として松に寄生するマツノザイセンチュウ、キュウリやキャベツに寄生するネコブセンチュウ、ジャガイモに寄生するシストセンチュウなどに対して殺センチュウ作用を有する菌としては、例えば、下記の特許文献１に、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）に属する菌が記載されている。しかしながら、特許文献１ではその製剤化については詳細な検討がなされておらず、その他の文献を調べても報告は見当たらない。
【０００３】
【特許文献１】
特公平２−３２２５１号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
そこで本発明は、マツノザイセンチュウ、ネコブセンチュウ、シストセンチュウ、キタネグサレセンチュウなどに対して殺センチュウ作用を有する菌を含む粒状殺センチュウ剤の製造方法を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
上記の点に鑑みてなされた本発明の殺センチュウ剤の製造方法は、請求項１記載の通り、殺センチュウ作用を有する菌を固体培地で培養した後、得られた菌培養物を粒状担体と混合することを特徴とする。
また、請求項２記載の粒状殺センチュウ剤の製造方法は、請求項１記載の製造方法において、殺センチュウ作用を有する菌がアスペルギルス属（Aspergillus sp.）に属し、マツノザイセンチュウ、ネコブセンチュウ、シストセンチュウ、キタネグサレセンチュウから選ばれる少なくとも１種のセンチュウに対して殺センチュウ作用を有する菌であることを特徴とする。
また、請求項３記載の粒状殺センチュウ剤の製造方法は、請求項１または２記載の製造方法において、粒状担体が粒状バーミキュライトであることを特徴とする。
また、本発明の粒状殺センチュウ剤は、請求項４記載の通り、殺センチュウ作用を有する菌を固体培地で培養して得られた菌培養物と粒状バーミキュライトとからなることを特徴とする。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明の粒状殺センチュウ剤の製造方法は、殺センチュウ作用を有する菌を固体培地で培養した後、得られた菌培養物を粒状担体と混合することを特徴とするものである。本発明によれば、菌の長期保存が可能な粒状殺センチュウ剤を製造することができる。
【０００７】
菌の長期保存を可能ならしめるためには、菌は胞子の状態で担体と混合され保持されていることが望ましい。殺センチュウ作用を有する菌を固体培地で培養する工程は、菌の胞子形成を促進させるために行うものである。固体培地としては、菌の胞子形成に必要な栄養分であるＰＤＢ（potato, dextrose, broth）とポテトフレークや米糠を少なくとも含むものが好適に用いられる。固体培地中における栄養分の量は、菌の胞子形成を促進させるために用いられる一般的な量でよい。なお、固体培地で培養する菌は、予め自体公知の液体培地で培養した菌培養物であってもよい。しかしながら、液体培地中では菌の胞子が形成されにくいので、液体培地で培養した菌培養物を直接粒状担体と混合すると、菌の長期保存ができなくなることから、必ず菌を固体培地で培養してから粒状担体と混合する。
【０００８】
固体培地で培養した菌培養物を混合する粒状担体としては、バーミキュライト、パーライト、ピートモス、植物体の炭化物などの粒状物が挙げられるが、雑菌が共存することなく有効菌のみを長期保存できる点において粒状バーミキュライトが好適に用いられる。なお、粒状担体の粒径は１μｍ〜５ｍｍであることが望ましい。
【０００９】
固体培地で培養した菌培養物と粒状担体の混合は、例えば、粉体や粒状物を混合するために通常用いられる混合攪拌機を用いて行えばよい。両者またはそのいずれか一方は、予め粉砕して粒状にしておいて混合してもよいし、混合時に粉砕されることで粒状にされてもよい。両者の混合比率は、菌培養物に含まれている菌数を勘案した上で、製造される粒状殺センチュウ剤が所望する数の菌を含むように設定することが望ましい。
【００１０】
殺センチュウ作用を有する菌としては、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）に属し、マツノザイセンチュウ、ネコブセンチュウ、シストセンチュウ、キタネグサレセンチュウなどに対して殺センチュウ作用を有する菌が好適に用いられる。その具体例としては、アスペルギルス メリウス ＪＡＭ４０２２（Aspergillus melleus JAM4022, FERM BP-726）を好適に用いることができるが、この他、アスペルギルス パラシテイクス ＪＡＭ４００２（Aspergillus parasiticus JAM4002, FERM BP-724）、アスペルギルス タマリ ＪＡＭ４００７（Aspergillus tamarii JAM4007, FERM BP-723）、アスペルギルス フミガタス ＪＡＭ４００８（Aspergillus fumigatus JAM4008, FERM BP-727）などが挙げられる。なお、ＪＡＭとは、株式会社応微研の菌株分類記号を意味する（JAPAN APPLIDE RESEARCH MICROORGANISMSの略称）。
【００１１】
【実施例】
以下、本発明を実施例によってさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定して解釈されるものではない。
【００１２】
実施例：
（工程１）
アスペルギルス メリウス ＪＡＭ４０２２（Aspergillus melleus JAM4022, FERM BP-726）の胞子を点接種して前培養を行ったＰＤＡ培地（日水製薬社製のPDA培地39重量部、蒸留水1000重量部）を、ＰＤＢ培地（DIFCO社製のPDB培地2.4重量部、蒸留水125重量部）に接種し、２５℃で７日間振盪培養した。こうして得られた培養液１重量部を、固体培地（DIFCO社製のPDB培地2.4重量部、富士見園芸社製の粉砕パーライト63重量部、ギャバンスパイス社製のポテトフレーク63重量部、蒸留水100重量部）９重量部に接種し、２５℃で１４日間培養した。菌糸と固体培地とで凝集塊が形成された際にはその都度攪拌して崩壊させた。こうして得られた菌培養物には菌が１０8ｃｆｕ／ｇ以上含まれていること確認した（寒天平板培地希釈法による：以下同じ）。
【００１３】
（工程２）
工程１で得られた粒状の菌培養物を、粒径が数十μｍ〜数ｍｍの４種類の粒状担体（バーミキュライト、パーライト、ピートモス、植物体の炭化物）と常温中で混合攪拌機を用いて混合して粒状殺センチュウ剤を製造した。両者の混合比率は、製造される粒状殺センチュウ剤が菌を１０6ｃｆｕ／ｇ以上含むように設定した。
【００１４】
試験例：
実施例で４種類の粒状担体を用いて製造された粒状殺センチュウ剤の各々について、２５℃における菌の生存期間試験を行い２か月ごとに評価した。結果を図１に示す。図１から明らかなように、粒状担体としてパーライトと植物体の炭化物を用いた粒状殺センチュウ剤は、生菌数の減少が顕著であったが、粒状担体としてバーミキュライトとピートモスを用いた粒状殺センチュウ剤は、試験開始から６か月を経過しても生菌数の減少はほとんど見られなかった。しかしながら、粒状担体としてピートモスを用いた殺センチュウ剤には雑菌が多く含まれていた。
【００１５】
【発明の効果】
本発明によれば、マツノザイセンチュウ、ネコブセンチュウ、シストセンチュウなどに対して殺センチュウ作用を有する菌を含む粒状殺センチュウ剤の製造方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】 実施例における４種類の粒状殺センチュウ剤中の菌の生存期間評価試験の結果を示すグラフである。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for producing a granular nematode containing a fungus having a nematocidal action against pinewood nematodes, root-knot nematodes, cyst nematodes, scallop nematodes, and the like.
[0002]
[Prior art]
Examples of fungi that have nematocidal activity against pine wood nematodes that parasitize pine as a vector insect, pine nematodes that parasitize cucumbers and cabbages, cyst nematodes that parasitize potatoes, etc. And bacteria belonging to the genus Aspergillus sp. However, in Patent Document 1, no detailed study has been made on its formulation, and no report has been found even if other documents are examined.
[0003]
[Patent Document 1]
Japanese Examined Patent Publication No. 2-32251 [0004]
[Problems to be solved by the invention]
Therefore, an object of the present invention is to provide a method for producing a granular nematode containing a fungus that has nematocidal action against pinewood nematodes, root-knot nematodes, cyst nematodes, scallop nematodes, and the like.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
The method for producing a nematicide of the present invention made in view of the above points, as described in claim 1, cultivates a fungus having nematode action in a solid medium, and then uses the obtained fungus culture as a granular carrier. It is characterized by mixing.
Further, the method for producing a granular nematicide according to claim 2 is the method according to claim 1, wherein the fungus having an nematode action belongs to the genus Aspergillus sp., And pine wood nematode, root-knot nematode, cyst nematode The fungus is characterized by having a nematocidal action against at least one nematode selected from the northern nematode nematode.
The method for producing a granular nematicide according to claim 3 is characterized in that, in the production method according to claim 1 or 2, the granular carrier is granular vermiculite.
Moreover, the granular nematicidal agent of the present invention is characterized by comprising a bacterial culture obtained by culturing a fungus having nematicidal activity in a solid medium and granular vermiculite as described in claim 4.
[0006]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The method for producing a granular nematocide of the present invention is characterized in that a fungus having nematocidal action is cultured in a solid medium, and then the obtained bacterial culture is mixed with a granular carrier. According to the present invention, it is possible to produce a granular nematocide capable of long-term storage of bacteria.
[0007]
In order to enable long-term storage of the bacterium, it is desirable that the bacterium be mixed with the carrier and maintained in the form of spores. The step of culturing a fungus having nematocidal action in a solid medium is carried out to promote sporulation of the fungus. As the solid medium, a medium containing at least PDB (potato, dextrose, broth), potato flakes and rice bran, which are nutrients necessary for spore formation, is preferably used. The amount of nutrients in the solid medium may be a common amount used to promote fungal sporulation. Note that the bacteria cultured in the solid medium may be bacterial cultures previously cultured in a known liquid medium. However, since fungal spores are not easily formed in a liquid medium, if a bacterial culture cultured in a liquid medium is directly mixed with a granular carrier, the bacteria cannot be stored for a long period of time. To mix with the particulate carrier.
[0008]
Examples of granular carriers for mixing bacterial cultures cultured in a solid medium include vermiculite, perlite, peat moss, and particulate matter such as plant charcoal, but only effective bacteria can be stored for a long time without coexisting with various bacteria. Granular vermiculite is preferably used. The particle size of the granular carrier is desirably 1 μm to 5 mm.
[0009]
Mixing of the bacterial culture cultured on the solid medium and the granular carrier may be performed using, for example, a mixing stirrer that is usually used for mixing powder or granular material. Both or any one of them may be previously pulverized and granulated and mixed, or may be granulated by being pulverized during mixing. The mixing ratio of the two is desirably set so that the granular nematocide produced contains the desired number of bacteria after taking into account the number of bacteria contained in the bacterial culture.
[0010]
As the fungus having an nematocidal action, a fungus that belongs to the genus Aspergillus (Aspergillus sp.) And has an nematocidal action against pinewood nematode, root-knot nematode, cyst nematode, northern nematode, etc. is preferably used. As specific examples, Aspergillus melius JAM4022 (Aspergillus melleus JAM4022, FERM BP-726) can be suitably used. tamarii JAM4007, FERM BP-723) and Aspergillus fumigatus JAM4008 (FERM BP-727). In addition, JAM is meant a strain classification symbol of the Corporation応微Research (abbreviation of J APAN A PPLIDE RESEARCH M ICROORGANISMS) .
[0011]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further in detail, this invention is limited to this and is not interpreted.
[0012]
Example:
(Process 1)
PDA medium (39 parts by weight of PDA medium manufactured by Nissui Pharmaceutical Co., Ltd., 1000 parts by weight of distilled water) pre-cultured by inoculation with spores of Aspergillus melius JAM4022 (Aspergillus melleus JAM4022, FERM BP-726) (2.4 parts by weight of PDB medium manufactured by DIFCO, 125 parts by weight of distilled water) was inoculated and cultured with shaking at 25 ° C. for 7 days. 1 part by weight of the culture broth thus obtained was added to a solid medium (2.4 parts by weight of PDB medium manufactured by DIFCO, 63 parts by weight of pulverized perlite manufactured by Fujimi Gardening, 63 parts by weight of potato flakes manufactured by Gavan Spice, and 100 parts by weight of distilled water. Part) 9 parts by weight were inoculated and cultured at 25 ° C. for 14 days. When an agglomerate was formed between the mycelium and the solid medium, the agglomerate was stirred and disintegrated each time. It was confirmed that the bacterial culture thus obtained contained 10 8 cfu / g or more (by the agar plate medium dilution method: the same applies hereinafter).
[0013]
(Process 2)
The granular bacterial culture obtained in step 1 is mixed with four types of granular carriers (vermiculite, perlite, peat moss, plant carbide) having a particle size of several tens of μm to several mm using a mixing stirrer at room temperature. Thus, a granular nematocide was produced. The mixing ratio of the two was set so that the produced nematocide produced contained 10 6 cfu / g or more of bacteria.
[0014]
Test example:
For each of the granular nematicides produced using the four types of granular carriers in the examples, a fungal survival test at 25 ° C. was performed and evaluated every two months. The results are shown in FIG. As is clear from FIG. 1, the granular nematocide using pearlite and the carbide of the plant as the granular carrier showed a remarkable decrease in the number of viable bacteria, but the granular nematode using vermiculite and peat moss as the granular carrier. The agent showed almost no decrease in the number of viable bacteria even after 6 months from the start of the test. However, the nematocide using peat moss as a granular carrier contained a lot of germs.
[0015]
【The invention's effect】
ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the manufacturing method of the granular nematocide containing the microbe which has a nematocidal action with respect to a pinewood nematode, a root-knot nematode, a cyst nematode, etc. is provided.
[Brief description of the drawings]
BRIEF DESCRIPTION OF DRAWINGS FIG. 1 is a graph showing the results of a fungus life evaluation test in four types of granular nematocides in Examples.
