JP2006133002A - Lupus anticoagulant detection reagent kit - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、in vitroでの血液検査でループスアンチコアグラント陽性疾患を特異的に検出できる試薬キットに関する。 The present invention relates to a reagent kit capable of specifically detecting lupus anticoagulant positive disease by in vitro blood test.
ループスアンチコアグラント（以下、LAと略記することがある）はSLE（Systemic Lupus Erythematosus）患者について初めて報告された抗凝血素である。SLE患者においてLAが検出される頻度は5％乃至10％である一方、他の自己免疫性疾患、腫瘍性疾患においても検出されることがある。LAは血栓症、流早産、血小板減少などの抗リン脂質抗体症候群(antiphospholipid syndrome；APS)において検出される頻度が高く、リン脂質依存性の凝固反応で凝固するまでの時間が延長されることから、リン脂質に対する自己抗体であると考えられている。
また、LAは不均一な抗体であり、陰性荷電リン脂質とβ２−グリコプロテインＩ（β２−ＧＰＩ）またはプロトロンビンとの複合体に対する抗体であることが、近年明らかになった。LAの抗凝固作用は、LAがこの複合体と結合することによりプロトロンビンがトロンビンに変化することを阻害するために起こると考えられる。
Lupus anticoagulant (hereinafter abbreviated as LA) is the first reported anticoagulant for SLE (Systemic Lupus Erythematosus) patients. While the frequency of detection of LA in SLE patients is 5% to 10%, it may be detected in other autoimmune diseases and neoplastic diseases. LA is frequently detected in antiphospholipid syndrome (APS) such as thrombosis, premature labor, thrombocytopenia, etc., and the time until coagulation is prolonged due to a phospholipid-dependent coagulation reaction. It is believed to be an autoantibody against phospholipids.
It has recently been revealed that LA is a heterogeneous antibody and is an antibody against a complex of negatively charged phospholipid and β2-glycoprotein I (β2-GPI) or prothrombin. The anticoagulant action of LA is thought to occur because LA binds to this complex and inhibits the conversion of prothrombin to thrombin.
このような特徴を有するLAの検出試薬としては、 ホスファチジルセリンを含むリン脂質を含有する第１凝固時間測定試薬とホスファチジルセリンを含むリン脂質を含有する第２凝固時間測定試薬を備え、第１凝固時間測定試薬に含まれるホスファチジルセリンの全リン脂質に対する割合が、第２凝固時間測定試薬に含まれるホスファチジルセリンの全リン脂質に対する割合と異なっており、第１凝固時間測定試薬のホスファチジルセリン濃度が第２凝固時間測定試薬より高いことを特徴とするループスアンチコアグラント測定試薬が知られている(特許文献１)。この特許文献１にはヘパリン投与患者血漿やワーファリン投与患者血漿とは区別することができるLA測定試薬が開示されている。
一方、LAの検査ではLA弱陽性検体についても検出できる検出感度の高い試薬が望まれているが、特許文献１には、LA弱陽性検体に対する検出感度の向上については記載がない。
The LA detection reagent having such characteristics includes a first coagulation time measurement reagent containing a phosphatidylserine-containing phospholipid and a second coagulation time measurement reagent containing a phosphatidylserine-containing phospholipid. The ratio of the phosphatidylserine contained in the time measurement reagent to the total phospholipid is different from the ratio of the phosphatidylserine contained in the second coagulation time measurement reagent to the total phospholipid, and the phosphatidylserine concentration of the first coagulation time measurement reagent is A lupus anticoagulant measuring reagent characterized by being higher than the two coagulation time measuring reagent is known (Patent Document 1). Patent Document 1 discloses an LA measurement reagent that can be distinguished from heparin-administered patient plasma and warfarin-administered patient plasma.
On the other hand, a reagent having high detection sensitivity capable of detecting even LA weak positive specimens is desired in the LA test, but Patent Document 1 does not describe improvement of detection sensitivity for LA weak positive specimens.
本発明の課題は、LAの検出感度を高め、LA 弱陽性検体であっても特異的に検出できる試薬キットを提供することにある。 An object of the present invention is to provide a reagent kit that can enhance the detection sensitivity of LA and can specifically detect even a weak LA positive sample.
本発明は、第１凝固時間測定試薬と第２凝固時間測定試薬とを備えたループスアンチコアグラント検出試薬キットにおいて、第１凝固時間測定試薬が、リン脂質としてのホスファチジルセリンと、カルシウムイオンと、ヒトを除く脊椎動物の抗体、血清、血漿及び免疫グロブリンから成る群より選ばれる少なくとも１種の非ヒト由来物質とを含有し、第２凝固時間測定試薬が、カルシウムイオンと、第１凝固時間測定試薬より低濃度のホスファチジルセリンとを含有することを特徴とするループスアンチコアグラント検出試薬キットに関する。 The present invention is a lupus anticoagulant detection reagent kit comprising a first coagulation time measurement reagent and a second coagulation time measurement reagent, wherein the first coagulation time measurement reagent comprises phosphatidylserine as a phospholipid, calcium ion, It contains at least one non-human-derived substance selected from the group consisting of vertebrate antibodies other than humans, serum, plasma and immunoglobulins, and the second clotting time measurement reagent is calcium ion and first clotting time measurement. The present invention relates to a lupus anticoagulant detection reagent kit characterized by containing a lower concentration of phosphatidylserine than the reagent.
本発明の試薬キットでは、LAに対して特異的に凝固時間の差異を認めることができ、LA陽性患者だけを高感度に検出することができる。 In the reagent kit of the present invention, a difference in coagulation time can be recognized specifically with respect to LA, and only LA positive patients can be detected with high sensitivity.
本発明の実施形態の検出試薬キットは、血液又は血漿検体におけるループスアンチコアグラントが弱陽性検体であっても特異的に検出できる試薬キットである。 The detection reagent kit of the embodiment of the present invention is a reagent kit that can specifically detect lupus anticoagulant in a blood or plasma sample even if it is a weak positive sample.
本発明の実施形態の検出試薬キットは、第１凝固時間測定試薬と第２凝固時間測定試薬とを備えたループスアンチコアグラント検出試薬キットにおいて、第１凝固時間測定試薬が、リン脂質としてのホスファチジルセリンと、カルシウムイオンと、ヒトを除く脊椎動物の抗体、血清、血漿及び免疫グロブリンから成る群より選ばれる少なくとも１種の非ヒト由来物質とを含有し、第２凝固時間測定試薬が、カルシウムイオンと、第１凝固時間測定試薬より低濃度のホスファチジルセリンとを含有２種類の凝固時間測定試薬の組合せである。 The detection reagent kit of an embodiment of the present invention is a lupus anticoagulant detection reagent kit comprising a first clotting time measuring reagent and a second clotting time measuring reagent, wherein the first clotting time measuring reagent is phosphatidyl as a phospholipid. Containing serine, calcium ions, and at least one non-human substance selected from the group consisting of vertebrate antibodies other than humans, serum, plasma and immunoglobulins, and the second clotting time measurement reagent comprises calcium ions And a combination of two kinds of coagulation time measurement reagents containing a lower concentration of phosphatidylserine than the first coagulation time measurement reagent.
上記第１凝固時間測定試薬及び第２凝固時間測定試薬にリン脂質として含有されるホスファチジルセリン（以下、PSと略記することがある）は、合成ホスファチジルセリンであってもよいし、天然由来ホスファチジルセリンであってもよい。ホスファチジルセリンは合成ホスファチジルセリンであることが好ましい。天然由来のホスファチジルセリンを用いる場合には、純度99％以上に精製されたものを用いることが好ましい。 The phosphatidylserine (hereinafter sometimes abbreviated as PS) contained as a phospholipid in the first coagulation time measurement reagent and the second coagulation time measurement reagent may be a synthetic phosphatidylserine or a naturally-derived phosphatidylserine. It may be. The phosphatidylserine is preferably synthetic phosphatidylserine. When natural phosphatidylserine is used, it is preferable to use one purified to a purity of 99% or more.
ホスファチジルセリン以外のリン脂質としては、ホスファチジルエタノールアミン（以下、PEと略記することがある）及びホスファチジルコリン（以下、PCと略記することがある）を挙げることができる。 Examples of phospholipids other than phosphatidylserine include phosphatidylethanolamine (hereinafter abbreviated as PE) and phosphatidylcholine (hereinafter abbreviated as PC).
ループスアンチコアグラントを捕捉するために含有されるヒトを除く脊椎動物の抗体、血清、血漿又は免疫グロブリン（以下、これらを区別せず、総称して述べるときは「非ヒト由来物質」という）としては、好ましくはヒト及びブタを除くほ乳類の抗体、血清又は免疫グロブリンが用いられ、具体的には、マウスIgG、ウマIgG、ウシIgG、マウス血清、ウマ血清、ウシ血清、マウス、ウマ又はウシのα−グロブリンなどを用いることができる。市販品としては、Scantibodies社製のHBR(Heterophile Blocking Reagent) や、MAK33 (ロッシュ社製)、NM8などがある。HBRは、免疫測定方法における異好性抗体による干渉を抑制することを目的として検査系に添加される試薬であるが、本発明者により、LAに特異的に結合し、しかも、血液検体中に含まれるLA以外の血液凝固時間に関連する成分とは結合しないことが見出され、本発明の凝固時間測定試薬におけるLA抗体捕捉剤としての使用が可能となった。 As a non-human vertebrate antibody, serum, plasma, or immunoglobulin contained to capture lupus anticoagulant (hereinafter referred to as “non-human-derived substance” when they are not distinguished and collectively referred to) Are preferably mammalian antibodies other than humans and pigs, serum or immunoglobulins, specifically mouse IgG, horse IgG, bovine IgG, mouse serum, horse serum, bovine serum, mouse, horse or bovine. α-globulin and the like can be used. Commercially available products include HBR (Heterophile Blocking Reagent) manufactured by Scantibodies, MAK33 (Roche), and NM8. HBR is a reagent added to a test system for the purpose of suppressing interference caused by heterophilic antibodies in an immunoassay method. The HBR binds specifically to LA by the present inventor and is also contained in a blood sample. It was found that it does not bind to components related to blood coagulation time other than LA, and it can be used as an LA antibody capturing agent in the coagulation time measurement reagent of the present invention.
LAを捕捉するために含有される非ヒト由来物質としては、１種類の動物由来の抗体等だけを用いてもよいし、異なる２種以上の動物由来の抗体等、例えばマウスIgGとウマIgGを混合して用いてもよい。 As a non-human-derived substance contained for capturing LA, only one animal-derived antibody or the like may be used, or antibodies derived from two or more different animals, such as mouse IgG and horse IgG. You may mix and use.
第２凝固時間測定試薬には、LA捕捉剤となる非ヒト由来物質が実質的に含まれず、また好ましくは非ヒト由来物質が含まれていないので、LA陽性の検体では、LAの存在により、凝固時間が延長される。一方、第１凝固時間測定試薬と検体を接触させた場合には、第１凝固時間測定試薬に含まれる非ヒト由来物質により、LAが捕捉されるので、LA陽性の検体であっても、LAの存在による凝固時間の延長が阻止される。従って、第１凝固時間測定試薬を用いたときの凝固時間（第１凝固時間）と第２凝固時間測定試薬を用いたときの凝固時間（第２凝固時間）との間で有意な差異が認められればLA陽性であり、有意な差異が認められなければ、LA陰性と判定できる。 The second clotting time measurement reagent does not substantially contain a non-human-derived substance serving as an LA capture agent, and preferably does not contain a non-human-derived substance. Therefore, in an LA positive sample, due to the presence of LA, The clotting time is extended. On the other hand, when the first coagulation time measurement reagent and the sample are brought into contact with each other, LA is captured by the non-human-derived substance contained in the first coagulation time measurement reagent. Prolongation of the coagulation time due to the presence of is prevented. Therefore, there is a significant difference between the coagulation time when using the first coagulation time measurement reagent (first coagulation time) and the coagulation time when using the second coagulation time measurement reagent (second coagulation time). If positive, it is positive for LA, and if there is no significant difference, it can be determined as LA negative.
第１凝固時間測定試薬及び第２凝固時間測定試薬には、さらに、in vitroで血液凝固を起こすのに必要な他の成分を含んでもよい。他の成分としては、例えば、活性化剤、蛇毒、カルシウム、組織因子などが挙げられる。活性化剤としては、エラグ酸、カオリン、セライト及コロイドシリカからなる群より選択される１種以上を用いることが好ましい。蛇毒としては、ラッセル蛇毒、テキスタリン蛇毒及びエカリン蛇毒からなる群より選択される１種以上を用いることが好ましい。組織因子としては、ウサギ脳、ヒト胎盤由来のもの、これらの組換え体を用いることが好ましい。
これらの他の成分は、凝固時間測定試薬の種類に応じて適宜選択される。例えば、第１凝固時間測定試薬及び第２凝固時間測定試薬がカルシウム及び活性化剤を含む場合には活性化部分トロンボプラスチン時間測定の測定原理に基づいて凝固時間を測定する。第１凝固時間測定試薬及び第２凝固時間測定試薬がカルシウム及び蛇毒を含む場合には、蛇毒測定時間の原理に基づいて凝固時間を測定する。また、第１凝固時間測定試薬及び第２凝固時間測定試薬がカルシウム及び組織因子を含む場合には、プロトロンビン時間測定の原理に基づいて凝固時間を測定する。
The first clotting time measuring reagent and the second clotting time measuring reagent may further contain other components necessary for causing blood coagulation in vitro. Examples of other components include an activator, snake venom, calcium, and tissue factor. As the activator, it is preferable to use one or more selected from the group consisting of ellagic acid, kaolin, celite and colloidal silica. As the snake venom, it is preferable to use one or more selected from the group consisting of Russell snake venom, textural snake venom and ecarin snake venom. As tissue factor, those derived from rabbit brain, human placenta, or recombinants thereof are preferably used.
These other components are appropriately selected according to the type of coagulation time measurement reagent. For example, when the first coagulation time measurement reagent and the second coagulation time measurement reagent contain calcium and an activator, the coagulation time is measured based on the measurement principle of activated partial thromboplastin time measurement. When the first coagulation time measurement reagent and the second coagulation time measurement reagent contain calcium and snake venom, the coagulation time is measured based on the principle of the snake venom measurement time. When the first clotting time measuring reagent and the second clotting time measuring reagent contain calcium and tissue factor, the clotting time is measured based on the principle of prothrombin time measurement.
尚、第１凝固時間測定試薬及び第２凝固時間測定試薬には、さらに必要に応じて、ヘペスおよびトリス緩衝液などの緩衝液を含んでもよい。緩衝液の濃度は、一般的に臨床化学の分野で用いられている濃度であればよく、簡単な繰り返し実験により決定することができる。 The first coagulation time measurement reagent and the second coagulation time measurement reagent may further contain a buffer solution such as Hepes and Tris buffer as necessary. The concentration of the buffer solution may be a concentration generally used in the field of clinical chemistry, and can be determined by simple repeated experiments.
第１凝固時間測定試薬に含まれる凝固系組成物と、第２凝固時間測定試薬に含まれる凝固系組成物とは同種でなければならない。つまり、第１凝固時間測定試薬に含まれる凝固系組成物が活性化部分トロンボプラスチン時間測定の測定原理に基づいて凝固時間を測定する場合には、第２凝固時間測定試薬に含まれる凝固系組成物も活性化部分トロンボプラスチン時間測定の測定原理に基づいて凝固時間を測定する。 The coagulation composition contained in the first coagulation time measurement reagent and the coagulation composition contained in the second coagulation time measurement reagent must be the same type. That is, when the coagulation system composition contained in the first coagulation time measurement reagent measures the coagulation time based on the measurement principle of activated partial thromboplastin time measurement, the coagulation system composition contained in the second coagulation time measurement reagent. Also measure the clotting time based on the measurement principle of activated partial thromboplastin time measurement.
また、検出試薬キットを第１部分試薬と第２部分試薬からなる第１凝固時間測定試薬と、第３部分試薬と第４部分試薬からなる第２凝固時間測定試薬とで構成するようにしてもよい。
このとき、活性化部分トロンボプラスチン時間測定の測定原理に基づいて凝固時間を測定する場合には第１部分試薬および第３部分試薬にはリン脂質及び活性化剤が含有され、２部分試薬および第４部分試薬にはカルシウムイオンが含まれる。
また、蛇毒測定時間の原理に基づいて凝固時間を測定する場合には第１部分試薬および第３部分試薬にはリン脂質及び蛇毒が含有され、２部分試薬および第４部分試薬には、カルシウムイオンが含まれる。
さらに、プロトロンビン時間測定の原理に基づいて凝固時間を測定する場合には第１部分試薬および第３部分試薬にはリン脂質及び組織因子が含有され、２部分試薬および第４部分試薬には、カルシウムイオンが含まれる。
なお、上記第１部分試薬には非ヒト由来物質を含有してもよい。
Further, the detection reagent kit may be composed of a first clotting time measuring reagent comprising a first partial reagent and a second partial reagent, and a second clotting time measuring reagent comprising a third partial reagent and a fourth partial reagent. Good.
At this time, when measuring the coagulation time based on the measurement principle of the activated partial thromboplastin time measurement, the first partial reagent and the third partial reagent contain a phospholipid and an activator. The partial reagent includes calcium ions.
When measuring the coagulation time based on the principle of snake venom measurement time, the first partial reagent and the third partial reagent contain phospholipid and snake venom, and the second partial reagent and the fourth partial reagent contain calcium ions. Is included.
Furthermore, when measuring the clotting time based on the principle of prothrombin time measurement, the first partial reagent and the third partial reagent contain phospholipid and tissue factor, and the second partial reagent and the fourth partial reagent include calcium. Ions are included.
Note that the first partial reagent may contain a non-human-derived substance.
さらに、検出試薬キットを第１部分試薬、第２部分試薬及び第３部分試薬からなる第１凝固時間測定試薬と、第４部分試薬と第５部分試薬及び第６部分試薬からなる第２凝固時間測定試薬とで構成するようにしてもよい。
このとき、活性化部分トロンボプラスチン時間測定の測定原理に基づいて凝固時間を測定する場合には第１部分試薬および第４部分試薬にはリン脂質が含有され、第２部分試薬及び第５部分試薬には活性化剤が含有され、第３部分試薬および第６部分試薬にはカルシウムイオンが含まれる。
また、蛇毒測定時間の原理に基づいて凝固時間を測定する場合には第１部分試薬および第４部分試薬にはリン脂質が含有され、第２部分試薬及び第５部分試薬には蛇毒が含有され、第３部分試薬および第６部分試薬にはカルシウムイオンが含まれる。
さらに、プロトロンビン時間測定の原理に基づいて凝固時間を測定する場合には第１部分試薬および第４部分試薬にはリン脂質が含有され、第２部分試薬及び第５部分試薬には組織因子が含有され、第３部分試薬および第６部分試薬にはカルシウムイオンが含まれる。
なお、上記第１部分試薬には非ヒト由来物質を含有してもよい。
Further, the detection reagent kit includes a first clotting time measurement reagent comprising a first partial reagent, a second partial reagent and a third partial reagent, and a second clotting time comprising a fourth partial reagent, a fifth partial reagent and a sixth partial reagent. You may make it comprise with a measurement reagent.
At this time, when measuring the coagulation time based on the measurement principle of the activated partial thromboplastin time measurement, the first partial reagent and the fourth partial reagent contain phospholipids, and the second partial reagent and the fifth partial reagent Contains an activator, and the third and sixth partial reagents contain calcium ions.
When measuring the coagulation time based on the principle of snake venom measurement time, the first partial reagent and the fourth partial reagent contain phospholipid, and the second partial reagent and the fifth partial reagent contain snake venom. The third partial reagent and the sixth partial reagent contain calcium ions.
Furthermore, when measuring the coagulation time based on the principle of prothrombin time measurement, the first partial reagent and the fourth partial reagent contain phospholipid, and the second partial reagent and the fifth partial reagent contain tissue factor. The third partial reagent and the sixth partial reagent contain calcium ions.
Note that the first partial reagent may contain a non-human-derived substance.
第１凝固時間測定試薬および第２凝固時間測定試薬のリン脂質の含有量は、検体と第１凝固時間測定試薬または第２凝固時間測定試薬を等量混合して（検体50μＬと第１凝固時間測定試薬または第２凝固時間測定試薬を50μＬ混合する場合）、凝固時間測定する測定方法においては、第１凝固時間測定試薬中のホスファチジルセリン含有量は35〜370μM、好ましくは60〜250μMであり、ホスファチジルエタノールアミン含有量は40〜410μM、好ましくは65〜270μMであり、ホスファチジルコリン含有量は35〜385μM、好ましくは60〜255μMである。さらに、非ヒト由来物質の含有量は、被検体 1mL当たり0.1〜50mg、好ましくは0.2〜10mg、より好ましくは0.5〜6mgとなる量を含有させることが好ましい。測定試料1mLあたり、0.1mg以下では、LA陽性の検体の場合に、LAの捕捉が不十分となり、捕捉されなかったLAにより凝固時間の延長が認められるからである。
また、第２凝固時間測定試薬中のホスファチジルセリン含有量は1〜25μM、好ましくは5〜20μMであり、ホスファチジルエタノールアミン含有量は1〜30μM、好ましくは5〜20μMであり、ホスファチジルコリン含有量は10〜150μM、好ましくは25〜65μMである。
The content of the phospholipid in the first clotting time measuring reagent and the second clotting time measuring reagent is obtained by mixing an equal amount of the sample with the first clotting time measuring reagent or the second clotting time measuring reagent (50 μL of the sample and the first clotting time). In the measurement method for measuring the coagulation time, the phosphatidylserine content in the first coagulation time measurement reagent is 35 to 370 μM, preferably 60 to 250 μM. The phosphatidylethanolamine content is 40-410 μM, preferably 65-270 μM, and the phosphatidylcholine content is 35-385 μM, preferably 60-255 μM. Further, the content of the non-human-derived substance is preferably 0.1 to 50 mg, preferably 0.2 to 10 mg, more preferably 0.5 to 6 mg per mL of the subject. This is because at a concentration of 0.1 mg or less per 1 mL of the measurement sample, LA is insufficiently captured in the case of an LA positive specimen, and the coagulation time is extended due to the uncaptured LA.
The phosphatidylserine content in the second clotting time measurement reagent is 1 to 25 μM, preferably 5 to 20 μM, the phosphatidylethanolamine content is 1 to 30 μM, preferably 5 to 20 μM, and the phosphatidylcholine content is 10 -150 μM, preferably 25-65 μM.
ホスファチジルセリンは上記記載の濃度の範囲内で使用することができ、第１凝固時間測定試薬に含まれるホスファチジルセリンの全リン脂質に対する割合が、第２凝固時間測定試薬に含まれるホスファチジルセリンの全リン脂質に対する割合と異なるものが好ましく、第１凝固時間測定試薬のホスファチジルセリンの全リン脂質に対する割合が第２凝固時間測定試薬のホスファチジルセリンの全リン脂質に対する割合より大きいことが好ましい。 The phosphatidylserine can be used within the above-mentioned concentration range, and the ratio of the phosphatidylserine contained in the first clotting time measurement reagent to the total phospholipids is the total phosphatidylserine contained in the second clotting time measurement reagent. What differs from the ratio with respect to a lipid is preferable, and it is preferable that the ratio with respect to the total phospholipid of the phosphatidylserine of a 1st coagulation time measurement reagent is larger than the ratio with respect to the total phospholipid of the phosphatidylserine of a 2nd coagulation time measurement reagent.
上記リン脂質の濃度は検体50μＬと第１凝固時間測定試薬または第２凝固時間測定試薬を50μＬ混合する場合の濃度を記載したが、検体と凝固時間測定試薬との混合割合が異なる場合、検体と第１凝固時間測定試薬または第２凝固時間測定試薬とを混合した後のリン脂質の終濃度が上記の場合と同様の範囲となるようにすれればよい。 The concentration of the above-mentioned phospholipid is the concentration when 50 μL of the specimen is mixed with 50 μL of the first clotting time measuring reagent or the second clotting time measuring reagent, but when the mixing ratio of the specimen and the clotting time measuring reagent is different, What is necessary is just to make it the final concentration of the phospholipid after mixing a 1st coagulation time measuring reagent or a 2nd coagulation time measuring reagent become the range similar to said case.
また、前記第１凝固時間測定試薬が第１部分試薬と第２部分試薬との組合せからなり、前記第２凝固時間測定試薬も第３部分試薬と第４部分試薬との組合せからなる場合、第１部分試薬および第３部分試薬のリン脂質の含有量は、検体と第１部分試薬または第３部分試薬を等量混合して、凝固時間測定する測定方法においては、第１部分試薬中のホスファチジルセリン含有量はホスファチジルセリン含有量は35〜370μM、好ましくは60〜250μMであり、ホスファチジルエタノールアミン含有量は40〜410μM、好ましくは65〜270μMであり、ホスファチジルコリン含有量は35〜385μM、好ましくは60〜255μMである。さらに、非ヒト由来物質の含有量は、被検体 1mL当たり0.1〜50mg、好ましくは0.2〜10mg、より好ましくは0.5〜6mgとなる量を含有させることが好ましい。測定試料1mLあたり、0.1mg以下では、LAの検体の場合に、LAの捕捉が不十分となり、捕捉されなかったLAにより凝固時間の延長が認められるからである。
また、第３部分試薬のホスファチジルセリン含有量は1〜25μM、好ましくは5〜20μMであり、ホスファチジルエタノールアミン含有量は1〜30μM、好ましくは5〜20μMであり、ホスファチジルコリン含有量は10〜150μM、好ましくは25〜65μMである。
When the first coagulation time measurement reagent is a combination of a first partial reagent and a second partial reagent, and the second coagulation time measurement reagent is also a combination of a third partial reagent and a fourth partial reagent, The phospholipid content of the 1st partial reagent and the 3rd partial reagent is equal to the phosphatidyl in the 1st partial reagent in the measurement method in which the sample and the 1st partial reagent or the 3rd partial reagent are mixed in equal amounts and the clotting time is measured. Serine content is phosphatidylserine content 35-370 μM, preferably 60-250 μM, phosphatidylethanolamine content 40-410 μM, preferably 65-270 μM, phosphatidylcholine content 35-385 μM, preferably 60 ~ 255 μM. Further, the content of the non-human-derived substance is preferably 0.1 to 50 mg, preferably 0.2 to 10 mg, more preferably 0.5 to 6 mg per mL of the subject. This is because when the amount is 0.1 mg or less per 1 mL of the measurement sample, LA is not sufficiently captured in the case of an LA sample, and the coagulation time is extended due to the uncaptured LA.
The phosphatidylserine content of the third partial reagent is 1 to 25 μM, preferably 5 to 20 μM, the phosphatidylethanolamine content is 1 to 30 μM, preferably 5 to 20 μM, and the phosphatidylcholine content is 10 to 150 μM. Preferably it is 25-65 micromol.
前記第１凝固時間測定試薬が第１部分試薬、第２部分試薬及び第３部分試薬との組合せからなり、前記第２凝固時間測定試薬も第４部分試薬、第５部分試薬及び第６部分試薬との組合せからなる場合、第１部分試薬および第４部分試薬のリン脂質の含有量は、検体と第１部分試薬または第４部分試薬を等量混合して、凝固時間測定する測定方法においては、第１部分試薬中のホスファチジルセリン含有量は35〜370μM、好ましくは60〜250μMであり、ホスファチジルエタノールアミン含有量は40〜410μM、好ましくは65〜270μMであり、ホスファチジルコリン含有量は35〜385μM、好ましくは60〜255μMである。さらに、非ヒト由来物質の含有量は、被検体 1mL当たり0.1〜50mg、好ましくは0.2〜10mg、より好ましくは0.5〜6mgとなる量を含有させることが好ましい。測定試料1mLあたり、0.1mg以下では、LA陽性の検体の場合に、LAの捕捉が不十分となり、捕捉されなかったLAにより凝固時間の延長が認められるからである。
また、第４部分試薬のホスファチジルセリン含有量は1〜25μM、好ましくは5〜20μMであり、ホスファチジルエタノールアミン含有量は1〜30μM、好ましくは5〜20μMであり、ホスファチジルコリン含有量は10〜150μM、好ましくは25〜65μMである。
The first clotting time measuring reagent is a combination of a first partial reagent, a second partial reagent and a third partial reagent, and the second clotting time measuring reagent is also a fourth partial reagent, a fifth partial reagent and a sixth partial reagent. In the measurement method in which the phospholipid content of the first partial reagent and the fourth partial reagent is mixed with an equal amount of the sample and the first partial reagent or the fourth partial reagent, and the coagulation time is measured. The phosphatidylserine content in the first partial reagent is 35 to 370 μM, preferably 60 to 250 μM, the phosphatidylethanolamine content is 40 to 410 μM, preferably 65 to 270 μM, and the phosphatidylcholine content is 35 to 385 μM. Preferably it is 60-255 micromol. Further, the content of the non-human-derived substance is preferably 0.1 to 50 mg, preferably 0.2 to 10 mg, more preferably 0.5 to 6 mg per mL of the subject. This is because at a concentration of 0.1 mg or less per 1 mL of the measurement sample, LA is insufficiently captured in the case of an LA positive specimen, and the coagulation time is extended due to the uncaptured LA.
The phosphatidylserine content of the fourth partial reagent is 1 to 25 μM, preferably 5 to 20 μM, the phosphatidylethanolamine content is 1 to 30 μM, preferably 5 to 20 μM, and the phosphatidylcholine content is 10 to 150 μM. Preferably it is 25-65 micromol.
次に、上記構成を有する本発明の試薬キットを用いて、LAを検出する方法について説明する。
まず検体試料を２つに分け、一方には高濃度のPSを含む第１凝固時間測定試薬を添加し、もう一方の検体試料には、低濃度のPSを含む第２凝固時間測定試薬を添加する。
また、第１凝固時間測定試薬がそれぞれ第１部分試薬と第２部分試薬とに分かれている場合には、検体と第１部分試薬とを混合してから第２部分試薬を添加する。
さらに、第１凝固時間測定試薬が第１部分試薬、第２部分試薬および第３部分試薬に分かれている場合には、検体と第１部分試薬とを混合し、第２部分試薬、第３部分試薬の順に試薬を添加する。
検体に各試薬を添加した後、試料の凝固時間を測定する。凝固時間の測定は、当業者に公知の方法で行えばよく、公知の自動測定装置を用いて測定してもよい。
Next, a method for detecting LA using the reagent kit of the present invention having the above configuration will be described.
First, divide the specimen sample into two parts, add the first clotting time measurement reagent containing high concentration PS to one, and add the second clotting time measurement reagent containing low concentration PS to the other specimen sample. To do.
When the first clotting time measurement reagent is divided into the first partial reagent and the second partial reagent, the sample and the first partial reagent are mixed and then the second partial reagent is added.
Further, when the first coagulation time measurement reagent is divided into the first partial reagent, the second partial reagent, and the third partial reagent, the sample and the first partial reagent are mixed, and the second partial reagent, the third partial reagent are mixed. Add reagents in the order of reagents.
After each reagent is added to the specimen, the clotting time of the sample is measured. The measurement of the coagulation time may be performed by a method known to those skilled in the art, or may be performed using a known automatic measuring device.
ここで、LA検出に用いる試料としては、血液をそのまま用いるよりも血漿を用いることが好ましく、より好ましくは血小板除去血漿を用いることが好ましい。また、試料に、正常血漿または正常血小板除去正常血漿を混合したものを用いてもよい。正常血漿を混合しておくことにより、凝固因子欠損に基づく凝固時間の延長を防止するが可能となり、LAの感度が高まるからである。試料と正常血漿の混合する場合の混合比は、一般的に４：１乃至１：４であり、好ましくは１：１である。 Here, as a sample used for LA detection, it is preferable to use plasma rather than using blood as it is, and it is more preferable to use platelet-free plasma. Moreover, you may use what mixed normal plasma or normal platelet removal normal plasma into the sample. This is because mixing normal plasma makes it possible to prevent prolongation of the coagulation time due to coagulation factor deficiency and enhances the sensitivity of LA. When mixing the sample and normal plasma, the mixing ratio is generally 4: 1 to 1: 4, preferably 1: 1.
本発明の試薬キットを用いた凝固検査では、LA陽性患者、血液凝固因子欠損患者、ワーファリン投与患者、ヘパリン投与患者などの抗凝血疾患由来の試料の凝固時間は、正常血漿の凝固時間よりも長くなる。さらに、LA陽性患者検体については、第１凝固時間測定試薬と第２凝固時間測定試薬による凝固時間の差異も認められる。すなわち、LA陽性患者由来の試料では、高濃度のPSを含む第１凝固時間測定試薬を用いたときの凝固時間よりも、低濃度のPSを含む第２凝固時間測定試薬を用いたときの凝固時間の方が長くなる。一方、血液凝固因子欠損患者、ワーファリン投与患者、ヘパリン投与患者由来の試料では、第１凝固時間測定試薬と第２凝固時間測定試薬との間で、凝固時間の顕著な差異は認められない。従って、第１凝固時間測定試薬と第２凝固時間測定試薬との凝固時間の差異に基づいて、LAを特異的に検出することができる。 In the coagulation test using the reagent kit of the present invention, the coagulation time of samples derived from anticoagulant diseases such as LA positive patients, blood coagulation factor deficient patients, warfarin administration patients, heparin administration patients, etc. become longer. Further, for LA positive patient specimens, a difference in coagulation time between the first coagulation time measurement reagent and the second coagulation time measurement reagent is also observed. That is, in a sample derived from an LA positive patient, coagulation when using a second coagulation time measurement reagent containing a low concentration of PS than using a first coagulation time measurement reagent containing a high concentration of PS. The time is longer. On the other hand, in samples derived from blood coagulation factor-deficient patients, warfarin-administered patients, and heparin-administered patients, no significant difference in coagulation time is observed between the first coagulation time measurement reagent and the second coagulation time measurement reagent. Therefore, LA can be specifically detected based on the difference in coagulation time between the first coagulation time measurement reagent and the second coagulation time measurement reagent.
LAの検出は、第１凝固時間測定試薬と第２凝固時間測定試薬の差異によって判定することができるが、より精度よく判定するためには、正常血漿の凝固時間に対する患者由来の試料の凝固時間の比、例えばRosner Index(E.Rosner,et al.,Thromb.Haemast.1987,57:144-149）またはLupus Ratio(LR)（R.Schjetlein,et al.,Thromb.Res.1993,69:239-250）、LRと同じ原理ではあるが、検体と正常血漿の混合しない凝固時間比により、判定を行うことが好ましい。
正常血漿の場合、PS含有率は凝固時間に影響を及ぼさないので、第１凝固時間試薬と第２凝固時間試薬の比に該当するLR値は１程度である。また、血液凝固因子欠損患者、ワーファリン投与患者、またはヘパリン投与患者由来の場合であっても、正常血漿と比べて凝固時間は延長されるものの、PS濃度差による凝固時間の差はほとんど認められないため、LR値は１程度となる。これに対して、LA陽性の場合には、第１凝固時間測定試薬、第２凝固時間測定試薬の各濃度、組合わせにもよるが、第２凝固時間測定試薬の方が第１凝固時間測定試薬よりも凝固時間が延びるために、LR値を比較することによりLA陽性患者由来の試料を自動的に検出することができる。
The detection of LA can be determined by the difference between the first clotting time measuring reagent and the second clotting time measuring reagent, but in order to more accurately determine the clotting time of the patient-derived sample relative to the clotting time of normal plasma. Ratio, for example, the Rossner Index (E. Rosner, et al., Thromb. Haemast. 1987, 57: 144-149) or Lupus Ratio (LR) (R. Schjetlein, et al., Thromb. Res. 1993, 69: 239-250), which is based on the same principle as LR, but it is preferable to make a determination based on a clotting time ratio in which the specimen and normal plasma are not mixed.
In the case of normal plasma, since the PS content does not affect the clotting time, the LR value corresponding to the ratio of the first clotting time reagent and the second clotting time reagent is about 1. In addition, even when derived from blood coagulation factor-deficient patients, warfarin-treated patients, or heparin-treated patients, the clotting time is prolonged compared to normal plasma, but there is almost no difference in clotting time due to the difference in PS concentration. Therefore, the LR value is about 1. On the other hand, in the case of LA positive, the second clotting time measurement reagent measures the first clotting time measurement depending on the concentration and combination of the first clotting time measuring reagent and the second clotting time measuring reagent. Since the clotting time is longer than that of the reagent, the sample from the LA positive patient can be automatically detected by comparing the LR values.
以下の実施例は本発明を具体的に説明するものであるが、これによって本発明の範囲を制限するものではない。
（比較例１）
The following examples are illustrative of the invention but are not intended to limit the scope of the invention.
(Comparative Example 1)
活性化部分トロンボプラスチン時間測定の測定原理に基づくループスアンチコアグラント測定試薬（２試薬系）を下記に示す方法により調製した。
つまり、LA-Hは第１部分試薬と第２部分試薬とからなり、LA-Lは第３部分試薬と第４部分試薬とからなり、第１部分試薬の各成分の濃度はヘペスが50mM、エラグ酸が0.1mM、トリスが25mM、ＰＳが123μM、ＰＥが134μM、ＰＣが127μMであり、各成分添加後のpHは7.35ある。また、第３部分試薬の各成分の濃度はヘペスが50mM、エラグ酸が0.1mM、トリスが25mM、ＰＳが12.3μM、ＰＥが13.4μM、ＰＣが38.2μMであり、各成分添加後のpHは7.35である。
また、塩化カルシウム濃度が25mMになるように精製水で調製したものを、第２部分試薬、第４部分試薬とした。
A lupus anticoagulant measuring reagent (2 reagent system) based on the measurement principle of activated partial thromboplastin time measurement was prepared by the method shown below.
That is, LA-H consists of a first partial reagent and a second partial reagent, LA-L consists of a third partial reagent and a fourth partial reagent, and the concentration of each component of the first partial reagent is 50 mM in Hepes. Ellagic acid is 0.1 mM, Tris is 25 mM, PS is 123 μM, PE is 134 μM, PC is 127 μM, and the pH after addition of each component is 7.35. The concentration of each component in the third partial reagent is 50 mM for Hepes, 0.1 mM for ellagic acid, 25 mM for Tris, 12.3 μM for PS, 13.4 μM for PE, and 38.2 μM for PC. 7.35.
Moreover, what was prepared with purified water so that a calcium chloride concentration might be set to 25 mM was used as the 2nd partial reagent and the 4th partial reagent.
正常血漿及び測定試料をそれぞれ50μLづつ２セット準備し、一方のセットの各試料に、第１部分試薬（又は第３部分試薬）50μLを添加し、37℃に5分間加温した後、各試料に第２部分試薬（又は第４部分試薬）を50μL添加し、凝固時間を測定した。 凝固時間の測定は全自動血液凝固分析装置コアグレックス８００（島津製作所株式会社）を用いて、凝固時間を測定した。測定は２回行い、平均値を求めた。 Prepare 2 sets of normal plasma and 50μL of each sample, add 50μL of 1st partial reagent (or 3rd partial reagent) to each sample in one set, warm to 37 ℃ for 5 minutes, then each sample 50 μL of the second partial reagent (or the fourth partial reagent) was added to and the coagulation time was measured. The coagulation time was measured using a fully automatic blood coagulation analyzer Coagrex 800 (Shimadzu Corporation). The measurement was performed twice to obtain an average value.
正常血漿としてはコアグトロールN(シスメックス社製)を使用し、測定試料としては表１に示すLA陽性患者血漿(検体番号1〜21)、また、表２に示す健常人血漿（検体番号22〜29）、ワーファリン投与患者血漿（検体番号30〜39）、第ＶＩＩＩ因子欠乏患者血漿（検体番号40〜49）およびヘパリン投与患者血漿（検体番号50〜53）を用いた。 Coagtrol N (manufactured by Sysmex Corporation) is used as normal plasma, and LA positive patient plasma (sample numbers 1 to 21) shown in Table 1 is used as a measurement sample, and healthy human plasma (sample numbers 22 to 29) shown in Table 2 is used. ), Warfarin-administered patient plasma (sample numbers 30-39), factor VIII-deficient patient plasma (sample numbers 40-49) and heparin-administered patient plasma (sample numbers 50-53).
また、健常人血漿はジョージキングバイオメディカル社（USA）、アルファセラピューティック社(USA)から購入した。ＬＡ陽性患者血漿、ワーファリン投与患者血漿、ヘパリン投与患者血漿、凝固因子欠乏患者血漿は、ジョージキングバイオメディカル社（USA）、医学生物学研究所、American Diagnostic Inc (USA)、サンフコ社から購入した。 Healthy human plasma was purchased from George King Biomedical (USA) and Alpha Therapeutic (USA). LA positive patient plasma, warfarin-administered patient plasma, heparin-administered patient plasma, and coagulation factor-deficient patient plasma were purchased from George King Biomedical (USA), Institute of Medical Biology, American Diagnostic Inc (USA), and Sanfuco.
各試料について測定した凝固時間から、下式１で示す凝固時間比を算出した。
〔式１〕
凝固時間比 ＝（ｂ／ａ）／（ｄ／ｃ）＝ｂｃ／ａｄ
ここで、式１中のａ、ｂ、ｃ、およびｄは、下記に示す組み合わせで得られた測定値を表す。つまり、ａ：LA-Hの測定試料の秒数、ｂ；LA-Lの測定試料の秒数、ｃ；LA-Hの正常血漿の秒数、ｄ；LA-Lの正常血漿の秒数
各測定試料の凝固時間比を表１及び表２のHBR(-)として示した。また、凝固時間比が1.6以上のものをLA陽性(LA+)と判定した。
（比較例２）
From the coagulation time measured for each sample, the coagulation time ratio represented by the following formula 1 was calculated.
[Formula 1]
Solidification time ratio = (b / a) / (d / c) = bc / ad
Here, a, b, c, and d in Formula 1 represent measured values obtained by the combinations shown below. That is, a: seconds of measurement sample of LA-H, b: seconds of measurement sample of LA-L, c: seconds of normal plasma of LA-H, d: seconds of normal plasma of LA-L The solidification time ratio of the measurement sample is shown as HBR (-) in Tables 1 and 2. In addition, a coagulation time ratio of 1.6 or more was determined as LA positive (LA +).
(Comparative Example 2)
市販のＬＡ測定試薬である希釈ラッセル蛇毒試薬（医学生物学研究所社製）およびSTACLOT-LA試薬（ロシュ社製）を用いて、LA陽性患者血漿(表1に示す検体番号1〜21)凝固時間の測定を行った。
希釈ラッセル蛇毒試薬を用た各LA陽性患者血漿の測定は、用法容量に従い凝固時間を測定し「凝固時間の比率」を算出することにより行った。その結果をdRVVTとして表1に示した。
また、STACLOT-LA試薬を用いた各LA陽性患者血漿の測定は、用法用量に従い凝固時間を測定し、「凝固時間の差」を算出することにより行った。
Coagulation of LA positive patient plasma (Sample Nos. 1 to 21 shown in Table 1) using diluted Russell snake venom reagent (manufactured by Medical and Biological Laboratories) and STACLOT-LA reagent (Roche), which are commercially available LA measurement reagents Time was measured.
Measurement of each LA positive patient plasma using the diluted Russell snake venom reagent was performed by measuring the coagulation time according to the usage volume and calculating the “ratio of coagulation time”. The results are shown in Table 1 as dRVVT.
In addition, each LA positive patient plasma using STACLOT-LA reagent was measured by measuring the clotting time according to the dosage and calculating the “difference in clotting time”.
その結果をSTACLOTとして表1に示した。希釈ラッセル蛇毒試薬を用いて算出した凝固時間の比率が1.3以上のものをLA陽性と判定し、STACLOT-LA試薬を用いて算出した凝固時間の差が8秒以上のものを陽性と判定した The results are shown in Table 1 as STACLOT. When the ratio of coagulation time calculated using diluted Russell snake venom reagent was 1.3 or more, it was judged as LA positive, and when the difference in coagulation time calculated using STACLOT-LA reagent was 8 seconds or more, it was judged as positive.
（実施例１）
上記比較例１の第１部分試薬に1mg/mLになるようにHBR(Scantibodies社製)を添加した以外は比較例１と同様に測定及び判定を行った。その結果を表１及び表２のHBR(+)として示した。
Example 1
Measurement and determination were performed in the same manner as in Comparative Example 1 except that HBR (manufactured by Scantibodies) was added to the first partial reagent of Comparative Example 1 so as to be 1 mg / mL. The results are shown as HBR (+) in Tables 1 and 2.
表1に示すようにdRVVT試薬およびSTACLOT試薬とも陽性である検体（検体番号1〜13）はHBR(-)、HBR(+)とも陽性であったが、dRVVTおよびSTACLOTのいずれか一方が陽性である弱陽性検体（検体番号14〜21）につてはHBR(-)の試薬では2検体のみ陽性であったが、HBR(+)の試薬は全て陽性であり、LAが弱陽性であっても検出することが明らかとなった。また、表２に示す健常人血漿（検体番号22〜29）、ワーファリン投与患者血漿（検体番号30〜39）、第ＶＩＩＩ因子欠乏血漿（検体番号40〜49）およびヘパリン投与患者血漿（検体番号50〜53）につてはHBR(-)、HBR(+)とも陰性と判定され特異的にLAを検出することが判明した。
As shown in Table 1, specimens that were positive for both dRVVT reagent and STACLOT reagent (Sample Nos. 1 to 13) were positive for both HBR (-) and HBR (+), but either dRVVT or STACLOT was positive. For some weak positive specimens (specimen numbers 14-21), only 2 specimens were positive with the HBR (-) reagent, but all HBR (+) reagents were positive and LA was weakly positive. It became clear to detect. In addition, healthy human plasma (sample numbers 22 to 29), warfarin-administered patient plasma (sample numbers 30 to 39), factor VIII-deficient plasma (sample numbers 40 to 49), and heparin-administered patient plasma (sample number 50) shown in Table 2 -53) were determined to be negative for both HBR (-) and HBR (+) and were found to specifically detect LA.
（実施例２）
活性化部分トロンボプラスチン時間測定の測定原理に基づく凝固時間測定試薬（３試薬系）を下記に示す方法により調製し、実施例１で作成した活性化部分トロンボプラスチン時間測定の測定原理に基づく２試薬系の試薬との相関性を検討した。
(Example 2)
A coagulation time measurement reagent (3-reagent system) based on the measurement principle of activated partial thromboplastin time measurement was prepared by the method shown below, and a two-reagent system based on the measurement principle of activated partial thromboplastin time measurement prepared in Example 1 was used. The correlation with the reagent was examined.
つまり、LA-Hは第１部分試薬、第２部分試薬及び第３部分試薬からなり、LA-Lは第４部分試薬、第５部分試薬及び第６部分試薬からなる。第１部分試薬の各成分の濃度はヘペスが50mM、トリスが25mM、ＰＳが123μM、ＰＥが134μM、ＰＣが127μM、HBR(Scantibodies社製) が1mg/mLであり、各成分添加後のpHは7.35である。また、第４部分試薬の各成分の濃度はヘペスが50mM、トリスが25mM、ＰＳが12.3μM、ＰＥが13.4μM、ＰＣが38.2μMであり、各成分添加後のpHは7.35である。
また、エラグ酸濃度が0.1mMになるように精製水で調製したものを、第２部分試薬、第５部分試薬とした。
また、塩化カルシウム濃度が25mMになるように精製水で調製したものを、第３部分試薬、第６部分試薬とした。
That is, LA-H consists of a first partial reagent, a second partial reagent and a third partial reagent, and LA-L consists of a fourth partial reagent, a fifth partial reagent and a sixth partial reagent. The concentration of each component of the first partial reagent is 50 mM for Hepes, 25 mM for Tris, 123 μM for PS, 134 μM for PE, 127 μM for PC, 1 mg / mL for HBR (Scantibodies), and the pH after addition of each component is 7.35. The concentration of each component of the fourth partial reagent is 50 mM for Hepes, 25 mM for Tris, 12.3 μM for PS, 13.4 μM for PE, and 38.2 μM for PC, and the pH after addition of each component is 7.35.
Moreover, what was prepared with purified water so that an ellagic acid density | concentration might be set to 0.1 mM was used as the 2nd partial reagent and the 5th partial reagent.
Moreover, what was prepared with purified water so that a calcium chloride concentration might be set to 25 mM was made into the 3rd partial reagent and the 6th partial reagent.
測定試料をそれぞれ50μLづつ２セット準備し、一方のセットの各試料に、第１部分試薬（又は第４部分試薬）50μLを添加し37℃で1分間加温した後、第２部分試薬（又は第５部分試薬）を50μL添加し37℃で5分間加温、さらに、第３部分試薬（又は第６部分試薬）を50μL添加し、上記と同様に全自動血液凝固分析装置コアグレックス８００（島津製作所株式会社）を用いて凝固時間を測定し、凝固時間比を算出した。
相関性の検討に用いた測定試料はLA陽性患者血漿18検体、健常人血漿32検体の合計50検体を用いた。
Prepare two sets of measurement samples of 50 μL each, add 50 μL of the first partial reagent (or the fourth partial reagent) to each sample in one set, heat at 37 ° C. for 1 minute, and then add the second partial reagent (or 50 μL of the 5th partial reagent) was added and heated at 37 ° C. for 5 minutes. Further, 50 μL of the 3rd partial reagent (or the 6th partial reagent) was added, and the fully automated blood coagulation analyzer Core Grex 800 (Shimadzu) Coagulation time was measured using Seisakusho Co., Ltd., and the ratio of coagulation time was calculated.
A total of 50 samples including 18 samples of LA positive patient plasma and 32 samples of healthy human plasma were used as the measurement samples used for examining the correlation.
上記と同じ検体を実施例1で調製した２試薬系の試薬を用いて測定した、２試薬系の試薬と３試薬系の試薬のとの相関性を図1に示す。
図1に示すように２試薬系の試薬と３試薬系の試薬の相関性が認められ、３試薬系の試薬も２試薬系の試薬と同様に使用できることが明らかとなった。
FIG. 1 shows the correlation between the two-reagent reagent and the three-reagent reagent obtained by measuring the same specimen as described above using the two-reagent reagent prepared in Example 1.
As shown in FIG. 1, there was a correlation between the two-reagent reagent and the three-reagent reagent, and it became clear that the three-reagent reagent can be used in the same manner as the two-reagent reagent.
以上説明したように、LA が弱陽性検体であっても特異的に検出できる試薬キットを提供することが可能となり、臨床検査の分野に貢献できる。 As described above, it is possible to provide a reagent kit that can be specifically detected even if LA is a weakly positive sample, and can contribute to the field of clinical tests.
Claims (18)
第１凝固時間測定試薬が、リン脂質としてのホスファチジルセリンと、カルシウムイオンと、ヒトを除く脊椎動物の抗体、血清、血漿及び免疫グロブリンから成る群より選ばれる少なくとも１種の非ヒト由来物質とを含有し、
第２凝固時間測定試薬が、カルシウムイオンと、第１凝固時間測定試薬より低濃度のホスファチジルセリンとを含有することを特徴とするループスアンチコアグラント検出試薬キット。 In the lupus anticoagulant detection reagent kit comprising the first clotting time measuring reagent and the second clotting time measuring reagent,
The first clotting time measurement reagent comprises phosphatidylserine as a phospholipid, calcium ions, and at least one non-human substance selected from the group consisting of antibodies of vertebrates other than humans, serum, plasma and immunoglobulins. Contains,
The lupus anticoagulant detection reagent kit, wherein the second coagulation time measurement reagent contains calcium ions and a lower concentration of phosphatidylserine than the first coagulation time measurement reagent.
The lupus anticoagulant detection reagent kit according to claim 6, 10 or 14, wherein the tissue factor is derived from rabbit brain or human placenta.
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