【０００１】
【産業上の利用分野】
【０００２】
本発明は、α2Bアドレナリン受容体サブタイプ選択的拮抗作用、α2Cアドレナリン受容体サブタイプ選択的拮抗作用又はα2B/2C（α2B及びα2Cを意味する。以下同じ。）アドレナリン受容体サブタイプ選択的拮抗作用を指標とする消化管運動調節用医薬のスクリーニング方法に関する。
また、本発明は、α2Bアドレナリン受容体サブタイプ選択的拮抗薬、α2Cアドレナリン受容体サブタイプ選択的拮抗薬又はα2B/2Cアドレナリン受容体サブタイプ選択的拮抗薬を有効成分として含有する消化管運動調節用医薬組成物に関する。
本発明医薬組成物は、消化管運動調節作用を有し、過敏性腸症候群の治療に有用である。
【０００３】
【従来の技術】
過敏性腸症候群(irritable bowel syndrome:ＩＢＳ)は大腸運動亢進と大腸知覚過敏を病態とし、便通異常(下痢、便秘)と腹部不定愁訴(腹痛、腹部不快感)を呈する慢性疾患である。発症や病態の悪化には心因的ストレスが重要な役割を果たしており、抑うつや不安傾向などの精神症状を伴うことが多い。診断基準や治療ガイドラインの不鮮明さ、及び疾患名が周知でないことなどにより、日本人のＩＢＳ患者数は明らかでないが、全人口の２.１％がＩＢＳと診断される。また、潜在患者数は人口の２割とも言われ、社会環境のストレスの増加やＩＢＳに対する患者意識の高まりを背景にＩＢＳ患者の増加が予想されている。
ＩＢＳの内科的治療は抗コリン薬、緩下薬、止瀉薬、整腸薬、消化管運動調節薬などの他、精神症状に応じて抗うつ薬、抗不安薬が使用されている。
【０００４】
ところで、α2アドレナリン受容体には３種のサブタイプの存在が知られている。最初にヒト血小板からα2Aアドレナリン受容体サブタイプがクローニングされ、その後ヒトゲノムのサザン解析およびｃＤＮＡライブラリーなどからα2Bアドレナリン受容体サブタイプとα2Cアドレナリン受容体サブタイプが同定された。α2A及びα2Cアドレナリン受容体サブタイプは脳を中心に末梢組織にも広く分布しているが、α2Bアドレナリン受容体サブタイプは末梢組織にのみ、その存在が報告されている。α2Aアドレナリン受容体サブタイプを介するアゴニスト作用として、鎮痛、鎮静、自発運動の抑制、体温低下、血圧低下、徐脈、小腸運動の抑制、消化管分泌の抑制などが報告されている（J. Pharmacol. Exp. Ther. 270: 958-972, 1994、Br. J. Pharmacol. 122: 1339-1344, 1997、Mol. Pharmacol. 56: 154-161, 1999、J. Pharmacol. Exp. Ther. 290: 403-412, 1999、Science 273: 801-803, 1996、Br. J. Pharmacol. 117: 787-792, 1996、Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 356: 248-256, 1997、Br. J. Pharmacol. 120: 892-898, 1997）。一方、α2B/2Cアドレナリン受容体サブタイプの生理的役割については、ほとんど解明されていない。
【０００５】
α2アドレナリン受容体拮抗薬がＩＢＳ治療に有効であることが知られているが（Neurogastroenterol. Mot. 10: 523-532, 1998、 Neurogastroenterol. Mot. 12: 249-255, 2000）、中枢および循環器系の副作用を有しているため医薬として用いられていない。副作用を軽減するためにα2アドレナリン受容体サブタイプ間の作用分離が必要である。
しかしながら、α2A、α2B、α2Cアドレナリン受容体サブタイプ（以下、それぞれ、α2A、α2B、α2Cアドレナリン受容体ともいう）の中で、いずれのサブタイプが消化管運動の恒常性を保つ作用、すなわち消化管運動調節作用に関与するかは知られていない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、優れた消化管運動調節作用を有し、安全性が高い過敏性腸症候群治療用医薬組成物及びそのスクリーニング方法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、α2Bアドレナリン受容体選択的拮抗薬、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬又はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬が上記目的を達成することを見出して本発明を完成した。
【０００８】
従って、本発明は、α2Bアドレナリン受容体選択的拮抗薬、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬又はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬を有効成分として含有する消化管運動調節用医薬組成物である。また、本発明は、α2Bアドレナリン受容体選択的拮抗作用、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗作用又はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗作用を指標とする消化管運動調節用医薬のスクリーニング方法である。
【０００９】
本発明の特徴は、α2Aアドレナリン受容体拮抗作用は消化管運動調節に関与せず、α2Bアドレナリン受容体拮抗作用、α2Cアドレナリン受容体拮抗作用又はα2B/2Cアドレナリン受容体拮抗作用が消化管運動調節作用に関与することにある。
【００１０】
α2Bアドレナリン受容体選択的拮抗作用、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗作用又はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗作用を指標として、消化管運動調節用医薬又は過敏性腸症候群治療用医薬をスクリーニングすることができる。
【００１１】
本発明医薬組成物の有効成分としては、α2Bアドレナリン受容体選択的拮抗薬、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬又はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬であれば、いかなる化学構造の化合物も本発明に用いることができる。
【００１２】
本発明において、α2Bアドレナリン受容体選択的拮抗作用とは、α2A及びα2Cアドレナリン受容体よりも優先的にα2Bアドレナリン受容体に結合し、α2Bアドレナリン受容体において作用薬の効果を阻害する作用を意味する。α2Bアドレナリン受容体に対する結合親和性は、α2A及びα2Cアドレナリン受容体結合親和性よりも５倍以上であることが好ましく、１０倍以上であることがより好ましく、５０倍以上であることがさらに好ましい。
α2Bアドレナリン受容体選択的拮抗薬とは、α2Bアドレナリン受容体選択的拮抗作用を示す化合物を意味する。
【００１３】
α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗作用とは、α2A及びα2Bアドレナリン受容体よりも優先的にα2Cアドレナリン受容体に結合し、α2Cアドレナリン受容体において作用薬の効果を阻害する作用を意味する。α2Cアドレナリン受容体に対する結合親和性は、α2A及びα2Bアドレナリン受容体結合親和性よりも５倍以上であることが好ましく、１０倍以上であることがより好ましく、５０倍以上であることがさらに好ましい。
α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬とは、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗作用を示す化合物を意味する。
【００１４】
α2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗作用とは、α2Aアドレナリン受容体よりも優先的にα2B及びα2Cアドレナリン受容体に結合し、α2B及びα2Cアドレナリン受容体において作用薬の効果を阻害する作用を意味する。α2B及びα2Cアドレナリン受容体に対する結合親和性は、α2Aアドレナリン受容体結合親和性よりも５倍以上であることが好ましく、１０倍以上であることがより好ましく、５０倍以上であることがさらに好ましい。
α2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬とは、α2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗作用を示す化合物を意味する。
【００１５】
α2A、α2B及びα2Cアドレナリン受容体に対する結合親和性は、公知の方法、例えばJ. Pharmacol. Exp. Ther. 271: 1558-1565, 1994に記載の方法に従って測定することができる。
各受容体に対する拮抗作用は、公知の方法、例えば薬物投与後の細胞内ｃ．ＡＭＰレベルを下げないことによって確認できる（Eur. J. Pharmacol. 335: 53-63, 1997、Eur. J. Pharmacol. 361: 1-15, 1998）。
【００１６】
本発明に係るα2Bアドレナリン受容体選択的拮抗薬、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬又はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬としては、消化管運動調節又はＩＢＳ治療のための用量に比して、毒性の低いものが選ばれる。
【００１７】
本発明に係るα2Bアドレナリン受容体選択的拮抗薬、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬又はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬の中で酸性基を有する化合物は、遊離の酸のまま医薬として用いることができるが、公知の方法により薬学的に許容される塩の形にして用いることもできる。このような塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩及びカルシウム塩などのアルカリ土類金属塩などを挙げることができる。
【００１８】
本発明に係るα2Bアドレナリン受容体選択的拮抗薬、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬又はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬の中で塩基性基を有する化合物は、遊離の塩基のまま医薬として用いることができるが、公知の方法により薬学的に許容される塩の形にして用いることもできる。このような塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸などの鉱酸の塩、酢酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、コハク酸、フマル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸などの有機酸の塩を挙げることができる。
【００１９】
本発明に係るα2Bアドレナリン受容体選択的拮抗薬、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬又はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬は、後記する試験例に示すように、優れた消化管運動調節作用を有し、また、中枢の副作用が軽微なので、消化管運動調節及びＩＢＳの治療に用いることができる。
【００２０】
本発明に係るα2Bアドレナリン受容体選択的拮抗薬、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬又はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬を医薬として投与する場合、本発明に係るα2Bアドレナリン受容体選択的拮抗薬、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬又はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬は、そのまま又は医薬的に許容される無毒性かつ不活性の担体中に、例えば 0.01〜99.5％、好ましくは 0.5〜90％含有する医薬組成物として、人を含む動物に投与される。担体としては、固形、半固形又は液状の希釈剤、充填剤及びその他の処方用の助剤一種以上が用いられる。医薬組成物は、投与単位形態で投与することが望ましい。本発明に係る医薬組成物は、経口投与、静脈内投与、組織内投与、局所投与（経皮投与等）又は経直腸的に投与することができる。これらの投与方法に適した剤型で投与されるのはもちろんである。経口投与及び静脈内投与が特に好ましい。
【００２１】
消化管運動調節用医薬組成物又はＩＢＳ治療用医薬組成物としての用量は、年齢、体重等の患者の状態、投与経路、病気の性質と程度等を考慮した上で設定することが望ましい。通常は、成人に対して本発明化合物の有効成分量としては、１日あたり、0.001〜1000mg ／ヒトの範囲、好ましくは 0.1〜100mg／ヒトの範囲が一般的である。
場合によっては、これ以下で足りるし、また逆にこれ以上の用量を必要とすることもある。また１日２〜４回に分割して投与することもできる。
【００２２】
経口投与は固形又は液状の用量単位、例えば、末剤、散剤、錠剤、糖衣剤、カプセル剤、顆粒剤、懸濁剤、液剤、シロップ剤、ドロップ剤、舌下錠その他の剤型によって行うことができる。
末剤は活性物質を適当な細かさにすることにより製造される。散剤は活性物質を適当な細かさと成し、ついで同様に細かくした医薬用担体、例えば澱粉、マンニトールのような可食性炭水化物その他と混合することにより製造される。必要に応じ風味剤、保存剤、分散剤、着色剤、香料その他のものを混じてもよい。
【００２３】
カプセル剤は、まず上述のようにして粉末状となった末剤や散剤又は錠剤の項で述べるように顆粒化したものを、例えばゼラチンカプセルのようなカプセル外皮の中へ充填することにより製造される。滑沢剤や流動化剤、例えばコロイド状のシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、固形のポリエチレングリコールのようなものを粉末状態のものに混合し、然るのちに充填操作を行うこともできる。崩壊剤や可溶化剤、例えばカルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムを添加すれば、カプセル剤が摂取されたときの医薬の有効性を改善することができる。
【００２４】
また、本品の微粉末を植物油、ポリエチレングリコール、グリセリン、界面活性剤中に懸濁分散し、これをゼラチンシートで包んで軟カプセル剤とすることができる。錠剤は賦形剤を加えて粉末混合物を作り、顆粒化もしくはスラグ化し、ついで崩壊剤又は滑沢剤を加えたのち打錠することにより製造される。粉末混合物は、適当に粉末化された物質を上述の希釈剤やベースと混合し、必要に応じ結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールなど）、溶解遅延化剤（例えば、パラフィンなど）、再吸収剤（例えば、四級塩）や吸着剤（例えばベントナイト、カオリン、リン酸ジカルシウムなど）をも併用してもよい。粉末混合物は、まず結合剤、例えばシロップ、澱粉糊、アラビアゴム、セルロース溶液又は高分子物質溶液で湿らせ、攪拌混合し、これを乾燥、粉砕して顆粒とすることができる。このように粉末を顆粒化するかわりに、まず打錠機にかけたのち、得られる不完全な形態のスラグを破砕して顆粒にすることも可能である。
【００２５】
このようにして作られる顆粒は、滑沢剤としてステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、ミネラルオイルその他を添加することにより、互いに付着することを防ぐことができる。このように滑沢化された混合物をついで打錠する。こうして製造した素錠にフィルムコーティングや糖衣を施すことができる。
また薬物は、上述のように顆粒化やスラグ化の工程を経ることなく、流動性の不活性担体と混合したのちに直接打錠してもよい。シェラックの密閉被膜からなる透明又は半透明の保護被覆、糖や高分子材料の被覆、及び、ワックスよりなる磨上被覆の如きも用いうる。
【００２６】
他の経口投与剤型、例えば溶液、シロップ、エリキシルなどもまたその一定量が薬物の一定量を含有するように用量単位形態にすることができる。シロップは、化合物を適当な香味水溶液に溶解して製造され、またエリキシルは非毒性のアルコール性担体を用いることにより製造される。懸濁剤は、化合物を非毒性担体中に分散させることにより処方される。可溶化剤や乳化剤（例えば、エトキシ化されたイソステアリルアルコール類、ポリオキシエチレンソルビトールエステル類）、保存剤、風味賦与剤（例えば、ペパミント油、サッカリン）その他もまた必要に応じ添加することができる。
必要とあらば、経口投与のための用量単位処方はマイクロカプセル化してもよい。該処方はまた被覆をしたり、高分子・ワックス等中にうめこんだりすることにより作用時間の延長や持続放出をもたらすこともできる。
【００２７】
組織内投与は、皮下・筋肉又は静脈内注射用としたところの液状用量単位形態、例えば溶液や懸濁剤の形態を用いることによって行うことができる。これらのものは、化合物の一定量を、注射の目的に適合する非毒性の液状担体、例えば水性や油性の媒体に懸濁し又は溶解し、ついで該懸濁液又は溶液を滅菌することにより製造される。注射液を等張にするために非毒性の塩や塩溶液を添加してもよい。更に、安定剤、保存剤、乳化剤のようなものを併用することもできる。
直腸投与は、化合物を低融点の水に可溶又は不溶の固体、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、半合成の油脂（例えば、ウイテプゾール、登録商標）、高級エステル類（例えばパルミチン酸ミリスチルエステル）及びそれらの混合物に溶解又は懸濁させて製造した坐剤等を用いることによって行うことができる。
【００２８】
【実施例】
以下に本発明化合物に係る参考例、試験例及び製剤例を掲げて本発明を更に詳しく説明する。
下記の参考例、試験例において、α2アドレナリン受容体作動薬として、キシラジン（xylazine、J. Pharmacol. Exp. Ther. 270: 958-972, 1994）、UK-14,304（J. Pharmacol. Exp. Ther. 270: 958-972, 1994）、クロニジン（clonidine、J. Pharmacol. Exp. Ther. 245: 32-40, 1988）を用いた。
α2Aアドレナリン受容体選択的拮抗薬として、BRL44408（J. Pharmacol. Exp. Ther. 270: 958-972, 1994）を用いた。
α2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬として、ARC239（J. Pharmacol. Exp. Ther. 270: 958-972, 1994）を用いた。
【００２９】
後記の試験例１と同一の動物種、薬物投与経路、投与用量において、BRL44408はα2Aアドレナリン受容体選択的拮抗作用を示し、ARC239はα2Aアドレナリン受容体拮抗作用を示さないことを確認するために、次の参考例１〜３の試験を実施した。
【００３０】
参考例１
酢酸ライシングに対する作用
J. Pharmacol. Exp. Ther., 270: 958-972 (1994)記載の方法に準じて試験を実施した。一晩絶食したマウス(C57BL/6J Jcl、雄、7週齢、１群４匹)に0.6%酢酸(10 ml/kg)を腹腔内投与し、投与５分後から１０分間のライシング数(もがき数)をカウントした。xylazine(2 mg/kg)を酢酸投与１０分前に皮下投与し、BRL44408(3 mg/kg)又はARC239(1 mg/kg)をxylazine投与３０分前に皮下投与した。ダネット(Dunnett)の多重比較検定により有意差検定を行った。結果を表１に示す。
【００３１】
【表１】
【００３２】
α2アドレナリン受容体作動薬xylazine(2 mg/kg)は酢酸誘発ライシングを抑制し、その作用はα2Aアドレナリン受容体選択的拮抗薬BRL44408（3 mg/kg）によりリバースされたが、α2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬ARC239(1 mg/kg)には影響されなかった。
【００３３】
参考例２
自発運動に対する作用
Br. J. Pharmacol., 122: 1339-1344 (1997) 記載の方法に準じて試験を実施した。マウス(C57BL/6J Jcl、雄、7週齢、１群４匹)を自発運動測定装置に入れ、３０分間の運動量を測定した。UK-14,304(0.1 mg/kg)を自発運動測定１０分前に皮下投与し、BRL44408(3 mg/kg)又はARC239(1 mg/kg)をUK-14,304投与３０分前に皮下投与した。ダネット(Dunnett)の多重比較検定により有意差検定を行った。結果を表２に示す。
【００３４】
【表２】
【００３５】
α2アドレナリン受容体作動薬UK-14,304(0.3 mg/kg)は自発運動を抑制し、その作用はα2Aアドレナリン受容体選択的拮抗薬BRL44408(3 mg/kg)によりリバースされたが、α2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬ARC239(1 mg/kg)には影響されなかった。
【００３６】
参考例3
大腸輸送に対する作用
Neurogastroenterol. Mot., 10: 523-532 (1998)記載の方法に準じて試験を実施した。マウス(C57BL/6J Jcl、雄、7週齢、１群４匹)をエーテル麻酔下にて開腹し、盲腸から近位結腸内0.5 cmの位置にカニューレを挿入固定した。カニューレの他端は背部より体外に導出後、開腹部を結紮した。術後６日目に、大腸カニューレからマーカー(5% チャコール/10% アラビアゴム)を注入し、３０分後の大腸輸送(%)を測定した。clonidine(0.03 mg/kg)をマーカー注入１０分前に皮下投与し、BRL44408(3 mg/kg)又はARC239(1 mg/kg)をclonidine投与３０分前に皮下投与した。ダネット(Dunnett)の多重比較検定により有意差検定を行った。結果を表３に示す。
【００３７】
【表３】
【００３８】
α2アドレナリン受容体作動薬clonidine(0.03 mg/kg)は大腸輸送を抑制し、その作用はα2Aアドレナリン受容体選択的拮抗薬BRL44408（3 mg/kg）によりリバースされたが、α2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬ARC239(1 mg/kg)には影響されなかった。
上記の参考例１〜３より、皮下投与において、中枢においても末梢においてもBRL44408（3 mg/kg）はα2Aアドレナリン受容体選択的拮抗作用を示すこと、及びARC239(1 mg/kg)はα2Aアドレナリン受容体拮抗作用を示さないことが判る。
【００３９】
試験例１
ＩＢＳモデルにおける作用
Gastroenterology 94: 611-621 (1988)記載の方法に準じて試験を実施した。マウス(C57BL/6J Jcl、雄、7週齢、１群８匹)をエーテルにて軽麻酔し、肛門から2 cm口側の結腸内に直径3 mmのテフロンボールを挿入した。前肢、両肩、胸部並びに背部をテーピング固定し、覚醒後からボール排出に要する時間を測定した。BRL44408(3 mg/kg)又はARC239(1 mg/kg)を拘束ストレス負荷３０分前に皮下投与した。ノーマル群に対してはストレスを負荷せずに、コントロール群に対してはストレスを負荷して薬物非投与でボール排出に要する時間を測定した。ダネット(Dunnett)の多重比較検定により有意差検定を行った。結果を表４に示す。
【００４０】
【表４】
【００４１】
拘束ストレス負荷により大腸輸送は亢進し、ボール排出時間は短縮された。この作用はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬ARC239(1 mg/kg)によりリバースされたが、α2Aアドレナリン受容体選択的拮抗薬BRL44408（3 mg/kg）には影響されなかった。
【００４２】
α2Aアドレナリン受容体選択的拮抗薬は消化管運動調節作用に関与しないことが明白であり、この作用はα2Bアドレナリン受容体拮抗作用及び／又はα2Cアドレナリン受容体拮抗作用によると推察される。また、前記の通り、α2Aアドレナリン受容体選択的拮抗薬は中枢および循環器系の副作用を示すことが知られている。従って、α2Aアドレナリン受容体拮抗作用を示さない、α2Bアドレナリン受容体選択的拮抗薬、α2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬又はα2B/2Cアドレナリン受容体選択的拮抗薬は、優れた消化管運動調節作用を有し、また、中枢および循環器系の副作用が軽微なので、消化管運動調節及びＩＢＳの治療に用いることができる。
【００４３】
製剤例１
錠剤（内服錠）
処方１錠200mg 中
ARC239 20 mg
コーンスターチ 88 mg
結晶セルロース 80 mg
カルボキシメチルセルロースカルシウム 10 mg
軽質無水ケイ酸 1 mg
ステアリン酸マグネシウム 1 mg
この混合末を打錠成形し内服錠とする。
【００４４】
【発明の効果】
以上に示したように、本発明医薬組成物は、消化管運動調節作用を有し、過敏性腸症候群の治療に有用である。[0001]
[Industrial application fields]
[0002]
The present invention relates to α 2B adrenergic receptor subtype selective antagonism, α 2C adrenergic receptor subtype selective antagonism or α 2B / 2C (meaning α 2B and α 2C ; the same shall apply hereinafter) adrenergic receptor sub. The present invention relates to a screening method for a drug for regulating gastrointestinal motility using type selective antagonism as an index.
The present invention also provides a digestion containing an α 2B adrenergic receptor subtype selective antagonist, an α 2C adrenergic receptor subtype selective antagonist or an α 2B / 2C adrenergic receptor subtype selective antagonist as an active ingredient. The present invention relates to a pharmaceutical composition for regulating tube movement.
The pharmaceutical composition of the present invention has a gastrointestinal motility regulating action and is useful for the treatment of irritable bowel syndrome.
[0003]
[Prior art]
Irritable bowel syndrome (IBS) is a chronic disease with increased bowel movements and hypersensitivity of the large intestine, and abnormal stool (diarrhea, constipation) and abdominal indefinite complaints (abdominal pain, abdominal discomfort). Psychological stress plays an important role in the onset and worsening of the disease state, and is often accompanied by mental symptoms such as depression and anxiety. Although the number of Japanese IBS patients is not clear due to unclear diagnostic criteria and treatment guidelines, and unknown disease names, 2.1% of the total population is diagnosed with IBS. In addition, the number of potential patients is said to be 20% of the population, and an increase in IBS patients is expected against the backdrop of increased stress in the social environment and increased patient awareness of IBS.
In addition to anticholinergic drugs, laxatives, antidiarrheals, bowel regulators, gastrointestinal motility regulators, etc., antidepressants and anxiolytic drugs are used for medical treatment of IBS.
[0004]
By the way, the existence of three subtypes is known for the α 2 adrenergic receptor. The α 2A adrenergic receptor subtype was first cloned from human platelets, and then the α 2B adrenergic receptor subtype and α 2C adrenergic receptor subtype were identified from Southern analysis of human genomes and cDNA libraries. The α 2A and α 2C adrenergic receptor subtypes are widely distributed in peripheral tissues mainly in the brain, but the existence of α 2B adrenergic receptor subtypes has been reported only in peripheral tissues. As agonist effects via the α 2A adrenergic receptor subtype, analgesia, sedation, suppression of spontaneous movement, hypothermia, blood pressure reduction, bradycardia, suppression of small intestinal motility, suppression of gastrointestinal secretion, etc. have been reported (J. Pharmacol. Exp. Ther. 270: 958-972, 1994, Br. J. Pharmacol. 122: 1339-1344, 1997, Mol. Pharmacol. 56: 154-161, 1999, J. Pharmacol. Exp. Ther. 290: 403-412, 1999, Science 273: 801-803, 1996, Br. J. Pharmacol. 117: 787-792, 1996, Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 356: 248-256, 1997, Br. J. Pharmacol. 120: 892-898, 1997). On the other hand, the physiological role of α 2B / 2C adrenergic receptor subtypes is hardly elucidated.
[0005]
Although α 2 adrenergic receptor antagonists are known to be effective in the treatment of IBS (Neurogastroenterol. Mot. 10: 523-532, 1998, Neurogastroenterol. Mot. 12: 249-255, 2000), central and circulating It is not used as a medicine because of its side effects. In order to reduce side effects, a separation of actions between α 2 adrenergic receptor subtypes is necessary.
However, among the α 2A , α 2B , and α 2C adrenergic receptor subtypes (hereinafter also referred to as α 2A , α 2B , and α 2C adrenergic receptors), any subtype has a homeostasis of gastrointestinal motility. It is not known whether it is involved in the action to preserve, that is, the gastrointestinal motility regulating action.
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for treating irritable bowel syndrome, which has an excellent gastrointestinal motility regulating action and is highly safe, and a screening method thereof.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have found that an α 2B adrenergic receptor selective antagonist, an α 2C adrenergic receptor selective antagonist, or an α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist achieves the above-mentioned object, and thus the present invention. completed.
[0008]
Accordingly, the present invention provides a pharmaceutical composition for regulating gastrointestinal motility comprising, as an active ingredient, an α 2B adrenergic receptor selective antagonist, an α 2C adrenergic receptor selective antagonist or an α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist. It is a thing. The present invention also relates to a method for screening a drug for regulating gastrointestinal motility using as an index α2B adrenergic receptor selective antagonism, α2C adrenergic receptor selective antagonism or α2B / 2C adrenergic receptor selective antagonism. It is.
[0009]
The feature of the present invention is that α 2A adrenergic receptor antagonistic action is not involved in gastrointestinal motility regulation, and α 2B adrenergic receptor antagonistic action, α 2C adrenergic receptor antagonistic action or α 2B / 2C adrenergic receptor antagonistic action is digested. It is involved in the regulation of tube movement.
[0010]
A drug for regulating gastrointestinal motility or a drug for treating irritable bowel syndrome using α 2B adrenergic receptor selective antagonism, α 2C adrenergic receptor selective antagonism or α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonism as an index Can be screened.
[0011]
The active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention can be any chemical structure as long as it is an α 2B adrenergic receptor selective antagonist, an α 2C adrenergic receptor selective antagonist, or an α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist. Compounds can also be used in the present invention.
[0012]
In the present invention, α 2B adrenergic receptor selective antagonism binds to α 2B adrenergic receptor preferentially over α 2A and α 2C adrenergic receptors and inhibits the effect of the agonist at α 2B adrenergic receptors. It means the action to do. The binding affinity for α 2B adrenergic receptors is preferably 5 times or more, more preferably 10 times or more, and more preferably 50 times or more than α 2A and α 2C adrenergic receptor binding affinities. Further preferred.
The α 2B adrenergic receptor selective antagonist means a compound that exhibits α 2B adrenergic receptor selective antagonism.
[0013]
The alpha 2C adrenergic receptor-selective antagonistic activity, than alpha 2A and alpha 2B adrenergic receptor binds preferentially to alpha 2C adrenergic receptor, means the effect of inhibiting the effect of agonists at alpha 2C adrenergic receptor To do. The binding affinity for α 2C adrenergic receptor is preferably 5 times or more, more preferably 10 times or more, and more preferably 50 times or more than α 2A and α 2B adrenergic receptor binding affinity. Further preferred.
An α 2C adrenergic receptor selective antagonist means a compound that exhibits α 2C adrenergic receptor selective antagonism.
[0014]
The alpha 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonism, the alpha than 2A adrenergic receptor binds preferentially to alpha 2B and alpha 2C adrenergic receptor, alpha 2B and alpha 2C effect of agonists at adrenergic receptor Means inhibiting action. The binding affinity for α 2B and α 2C adrenergic receptors is preferably 5 times or more, more preferably 10 times or more, more preferably 50 times or more than α 2A adrenergic receptor binding affinity. Further preferred.
The α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist means a compound that exhibits α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonism.
[0015]
The binding affinity for α 2A , α 2B and α 2C adrenergic receptors can be measured according to a known method, for example, the method described in J. Pharmacol. Exp. Ther. 271: 1558-1565, 1994.
Antagonism against each receptor is determined by a known method, for example, intracellular c. This can be confirmed by not lowering the AMP level (Eur. J. Pharmacol. 335: 53-63, 1997, Eur. J. Pharmacol. 361: 1-15, 1998).
[0016]
The α 2B adrenergic receptor selective antagonist, the α 2C adrenergic receptor selective antagonist or the α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist according to the present invention includes a dose for gastrointestinal motility regulation or IBS treatment. In comparison, those with low toxicity are selected.
[0017]
Among the α 2B adrenergic receptor selective antagonist, α 2C adrenergic receptor selective antagonist or α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist according to the present invention, the compound having an acidic group remains a free acid. Although it can be used as a medicine, it can also be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt by a known method. Examples of such salts include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt, and alkaline earth metal salts such as calcium salt.
[0018]
Among the α 2B adrenergic receptor selective antagonist, α 2C adrenergic receptor selective antagonist or α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist according to the present invention, the compound having a basic group is a free base. Although it can be used as a medicine as it is, it can also be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt by a known method. Such salts include salts of mineral acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, acetic acid, citric acid, tartaric acid, maleic acid, succinic acid, fumaric acid, p-toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, Mention may be made of salts of organic acids such as methanesulfonic acid.
[0019]
The α 2B adrenergic receptor selective antagonist, α 2C adrenergic receptor selective antagonist or α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist according to the present invention is an excellent gastrointestinal tract, as shown in the following test examples. Since it has a motor-regulating action and its central side effects are slight, it can be used for gastrointestinal motor regulation and IBS treatment.
[0020]
When the α 2B adrenergic receptor selective antagonist, α 2C adrenergic receptor selective antagonist or α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist according to the present invention is administered as a medicament, the α 2B adrenergic receptor according to the present invention is administered. The body selective antagonist, α 2C adrenergic receptor selective antagonist or α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist is intact or in a pharmaceutically acceptable non-toxic and inert carrier, for example 0.01- It is administered to animals including humans as a pharmaceutical composition containing 99.5%, preferably 0.5 to 90%. As the carrier, one or more solid, semi-solid or liquid diluents, fillers and other formulation aids are used. The pharmaceutical composition is desirably administered in dosage unit form. The pharmaceutical composition according to the present invention can be administered orally, intravenously, intratissuely, topically (such as transdermally) or rectally. Of course, it is administered in a dosage form suitable for these administration methods. Oral administration and intravenous administration are particularly preferred.
[0021]
The dose as a pharmaceutical composition for regulating gastrointestinal motility or a pharmaceutical composition for treating IBS is desirably set in consideration of the patient's condition such as age and weight, administration route, nature and degree of illness, and the like. Usually, the amount of the active ingredient of the compound of the present invention for an adult is generally in the range of 0.001 to 1000 mg / human, preferably in the range of 0.1 to 100 mg / human per day.
In some cases, this may be sufficient, and vice versa. Moreover, it can also be divided and administered in 2-4 times a day.
[0022]
Oral administration should be carried out in solid or liquid dosage units such as powders, powders, tablets, dragees, capsules, granules, suspensions, solutions, syrups, drops, sublingual tablets and other dosage forms. Can do.
The powder is manufactured by making the active substance fine. Powders are made by mixing the active substance with appropriate fineness and then mixing it with a similarly finely divided pharmaceutical carrier such as edible carbohydrates such as starch, mannitol and the like. A flavoring agent, a preservative, a dispersing agent, a coloring agent, a fragrance, and the like may be mixed as necessary.
[0023]
Capsules are produced by first filling a powdered powder, powder, or granulated powder as described above into a capsule shell such as a gelatin capsule. The Lubricants and fluidizing agents, such as colloidal silica, talc, magnesium stearate, calcium stearate, solid polyethylene glycol, etc., can be mixed in powder form and then filled. it can. Disintegrants and solubilizers such as carboxymethylcellulose, carboxymethylcellulose calcium, low-substituted hydroxypropylcellulose, croscarmellose sodium, carboxymethyl starch sodium, calcium carbonate, sodium carbonate The effectiveness of the medicine can be improved.
[0024]
In addition, the fine powder of this product can be suspended and dispersed in vegetable oil, polyethylene glycol, glycerin, and a surfactant and wrapped in a gelatin sheet to form a soft capsule. Tablets are made by adding excipients to make a powder mixture, granulating or slugging, then adding a disintegrant or lubricant and then tableting. The powder mixture is prepared by mixing an appropriate powdered substance with the above-mentioned diluent and base, and if necessary a binder (for example, sodium carboxymethylcellulose, methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, gelatin, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, etc.), A dissolution retardant (for example, paraffin), a resorbent (for example, quaternary salt), and an adsorbent (for example, bentonite, kaolin, dicalcium phosphate, etc.) may be used in combination. The powder mixture can be first wetted with a binder such as syrup, starch paste, gum arabic, cellulose solution or polymer solution, stirred and mixed, dried and pulverized into granules. Instead of granulating the powder in this way, it is also possible to first crush the tablet and then to crush the resulting incomplete slag into granules.
[0025]
The granules thus produced can be prevented from adhering to each other by adding stearic acid, stearate, talc, mineral oil or the like as a lubricant. The mixture thus lubricated is then tableted. Film coating or sugar coating can be applied to the uncoated tablets thus produced.
Further, the drug may be directly tableted after being mixed with a fluid inert carrier without going through the steps of granulation and slag as described above. A transparent or translucent protective coating made of a shellac hermetic coating, a coating of sugar or polymer material, and a polishing coating made of wax can also be used.
[0026]
Other oral dosage forms such as solutions, syrups, elixirs and the like can also be in dosage unit form so that a given quantity contains a certain amount of drug. Syrups are made by dissolving the compound in a suitable flavored aqueous solution, and elixirs are made by using a non-toxic alcoholic carrier. Suspensions are formulated by dispersing the compound in a non-toxic carrier. Solubilizers and emulsifiers (eg, ethoxylated isostearyl alcohols, polyoxyethylene sorbitol esters), preservatives, flavoring agents (eg, peppermint oil, saccharin) and others can also be added as needed. .
If necessary, dosage unit formulations for oral administration can be microencapsulated. The formulation can also provide extended action time or sustained release by coating or embedding in polymers, waxes, and the like.
[0027]
Intra-tissue administration can be performed by using a liquid dosage unit form for subcutaneous, intramuscular or intravenous injection, for example, a solution or suspension form. These are made by suspending or dissolving a certain amount of a compound in a non-toxic liquid carrier suitable for the purpose of injection, such as an aqueous or oily medium, and then sterilizing the suspension or solution. The Non-toxic salts or salt solutions may be added to make the injection solution isotonic. Further, stabilizers, preservatives, emulsifiers and the like can be used in combination.
Rectal administration involves the compound being soluble or insoluble in low melting water such as polyethylene glycol, cocoa butter, semi-synthetic oils (eg, Witepsol®), higher esters (eg, myristyl palmitate) and those It can be carried out by using a suppository or the like produced by dissolving or suspending in the mixture.
[0028]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference examples, test examples and formulation examples related to the compound of the present invention.
In the following Reference Examples and Test Examples, as α 2 adrenergic receptor agonists, xylazine (Xylazine, J. Pharmacol. Exp. Ther. 270: 958-972, 1994), UK-14,304 (J. Pharmacol. Exp. Ther 270: 958-972, 1994) and clonidine (J. Pharmacol. Exp. Ther. 245: 32-40, 1988).
BRL44408 (J. Pharmacol. Exp. Ther. 270: 958-972, 1994) was used as an α 2A adrenergic receptor selective antagonist.
ARC239 (J. Pharmacol. Exp. Ther. 270: 958-972, 1994) was used as an α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist.
[0029]
In order to confirm that BRL44408 shows α 2A adrenergic receptor selective antagonism and ARC239 does not show α 2A adrenergic receptor antagonism in the same animal species, drug administration route and administration dose as in Test Example 1 described later. Next, tests of the following reference examples 1 to 3 were performed.
[0030]
Reference example 1
Action on acetic acid licing
The test was performed according to the method described in J. Pharmacol. Exp. Ther., 270: 958-972 (1994). 0.6% acetic acid (10 ml / kg) was intraperitoneally administered to mice (C57BL / 6J Jcl, male, 7 weeks old, 4 mice per group) fasted overnight, and the number of slicing for 10 minutes (postcard) from 5 minutes after administration. Count). xylazine (2 mg / kg) was subcutaneously administered 10 minutes before the administration of acetic acid, and BRL44408 (3 mg / kg) or ARC239 (1 mg / kg) was subcutaneously administered 30 minutes before the administration of xylazine. Significance test was performed by Dunnett's multiple comparison test. The results are shown in Table 1.
[0031]
[Table 1]
[0032]
alpha 2 adrenergic receptor agonist xylazine (2 mg / kg) suppressed the acetic acid-induced writhing, but its effect was reverse by alpha 2A adrenoceptor selective antagonist BRL44408 (3 mg / kg), α 2B / It was not affected by the 2C adrenergic receptor selective antagonist ARC239 (1 mg / kg).
[0033]
Reference example 2
Effects on spontaneous movement
The test was performed according to the method described in Br. J. Pharmacol., 122: 1339-1344 (1997). Mice (C57BL / 6J Jcl, male, 7 weeks old, 4 mice per group) were placed in a spontaneous movement measuring device, and the amount of exercise for 30 minutes was measured. UK-14,304 (0.1 mg / kg) was subcutaneously administered 10 minutes before the measurement of locomotor activity, and BRL44408 (3 mg / kg) or ARC239 (1 mg / kg) was subcutaneously administered 30 minutes before UK-14,304 administration. Significance test was performed by Dunnett's multiple comparison test. The results are shown in Table 2.
[0034]
[Table 2]
[0035]
The α 2 adrenergic receptor agonist UK-14,304 (0.3 mg / kg) suppressed locomotor activity, and its action was reversed by the α 2A adrenergic receptor selective antagonist BRL44408 (3 mg / kg), but α 2B The / 2C adrenergic receptor selective antagonist ARC239 (1 mg / kg) was not affected.
[0036]
Reference Example 3
Effect on colonic transport
Neurogastroenterol. Mot., 10: 523-532 (1998). Mice (C57BL / 6J Jcl, male, 7 weeks old, 4 mice per group) were laparotomized under ether anesthesia, and a cannula was inserted and fixed at 0.5 cm in the proximal colon from the cecum. The other end of the cannula was led out of the body from the back, and then the laparotomy was ligated. On the sixth day after the operation, a marker (5% charcoal / 10% gum arabic) was injected from the large intestine cannula, and the large intestine transport (%) was measured 30 minutes later. Clonidine (0.03 mg / kg) was subcutaneously administered 10 minutes before the marker injection, and BRL44408 (3 mg / kg) or ARC239 (1 mg / kg) was subcutaneously administered 30 minutes before clonidine administration. Significance test was performed by Dunnett's multiple comparison test. The results are shown in Table 3.
[0037]
[Table 3]
[0038]
The α 2 adrenergic receptor agonist clonidine (0.03 mg / kg) inhibited colonic transport and its action was reversed by the α 2A adrenergic receptor selective antagonist BRL44408 (3 mg / kg), but α 2B / 2C It was not affected by the adrenergic receptor selective antagonist ARC239 (1 mg / kg).
From the above Reference Examples 1 to 3, BRL44408 (3 mg / kg) shows α 2A adrenergic receptor selective antagonism in both the central and the peripheral, and ARC239 (1 mg / kg) is α It can be seen that it does not show 2A adrenergic receptor antagonism.
[0039]
Test example 1
Action in the IBS model
The test was conducted according to the method described in Gastroenterology 94: 611-621 (1988). Mice (C57BL / 6J Jcl, male, 7 weeks old, 8 mice per group) were lightly anesthetized with ether, and a Teflon ball having a diameter of 3 mm was inserted into the colon 2 cm from the anus into the colon. The forelimbs, both shoulders, chest and back were fixed with taping, and the time required for ball discharge after awakening was measured. BRL44408 (3 mg / kg) or ARC239 (1 mg / kg) was administered subcutaneously 30 minutes before restraint stress loading. The normal group was not stressed, and the control group was stressed and the time required for ball discharge without drug administration was measured. Significance test was performed by Dunnett's multiple comparison test. The results are shown in Table 4.
[0040]
[Table 4]
[0041]
The restraint stress increased colon transport and shortened the ball discharge time. This effect was reversed by the α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist ARC239 (1 mg / kg), but was not affected by the α 2A adrenergic receptor selective antagonist BRL44408 (3 mg / kg).
[0042]
It is clear that the α 2A adrenergic receptor selective antagonist is not involved in the gastrointestinal motility regulating action, and this action is presumed to be due to the α 2B adrenergic receptor antagonistic action and / or the α 2C adrenergic receptor antagonistic action. As described above, α 2A adrenergic receptor selective antagonists are known to exhibit central and circulatory side effects. Therefore, α 2B adrenergic receptor selective antagonist, α 2C adrenergic receptor selective antagonist or α 2B / 2C adrenergic receptor selective antagonist that does not show α 2A adrenergic receptor antagonistic action is an excellent gastrointestinal tract. Since it has a motor regulating action and the side effects of the central and circulatory system are minor, it can be used for gastrointestinal motor regulation and treatment of IBS.
[0043]
Formulation Example 1
Tablet (internal tablet)
1 tablet 200mg
ARC239 20 mg
Corn starch 88 mg
Crystalline cellulose 80 mg
Carboxymethylcellulose calcium 10 mg
Light anhydrous silicic acid 1 mg
Magnesium stearate 1 mg
This mixed powder is formed into tablets to form internal tablets.
[0044]
【The invention's effect】
As shown above, the pharmaceutical composition of the present invention has a gastrointestinal motility regulating action and is useful for the treatment of irritable bowel syndrome.
