JP2005522996A - Ｒｓｖタンパク質、抗体、組成物、方法および使用 - Google Patents

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Abstract

本発明は、少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質をコードする単離された核酸を含む少なくとも１種の新規のＲＳＶタンパク質、抗体、ＲＳＶベクター、宿主細胞、トランスジェニック動物または植物、および治療用組成物、方法およびデバイスを含み、それらを製造および使用する方法に関する。

Description

本発明は、少なくとも１種の呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）タンパク質またはその断片、および特定の部分または変種を含み、従って特異性である抗体、ならびにこのようなＲＳＶタンパク質をコードする核酸、断片、抗体、相補的核酸、ベクター、宿主細胞、および治療製剤、投与およびデバイスを含むそれらを製造および使用する方法に関する。
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）は、通常上部および下部気道に感染するニューモウイルス属のパラミクソウイルスである。２歳で、高い割合の小児がこれに感染するほどこれは感染性である。さらに、４歳では、実際的にすべてのヒトがＲＳＶに免疫を有する。典型的には、ＲＳＶ感染は温和であり、上部気道内に局在して残存しそして大規模な治療は必要としない通常の風邪に類似した症状を起こす。しかし、一部の個体、例えば免疫抑制個体、例えば小児、老齢者または潜伏している心肺疾患を有する患者では、ウイルスは下部気道に浸透し入院および呼吸介助を必要とすることもある。これらの事例の一部では、ＲＳＶ感染は永久的肺障害または生命の危険をももたらすこともある。米国だけでも、ＲＳＶは毎年９０，０００人の入院をもたらし、そして約４５００人の死亡となっている。
ＲＳＶは、主として付着性糖タンパク質Ｇに関連する血清学的相違に基づいて、２種の主要な系統サブグループ、ＡおよびＢ、として現れる。主要な表面糖タンパク質、すなわち９０ｋＤ Ｇタンパク質は、単離物間のアミノ酸レベルで５０％まで異なることができる。反対に、潜在的な治療標的、すなわち７０ｋＤ融合（Ｆ）タンパク質は、異なるＲＳＶ系統間で高度に、すなわちアミノ酸レベルで約８９％が保存される。その上、与えられたタイプのＦ−タンパク質に対して誘発された抗体は他のタイプと交差反応性であることが知られている。
Ｆ−タンパク質はヘテロ二量体であり、それぞれ４８および２３ｋＤのジスルフィド結合断片よりなる線型前駆体より生成される。ポリクローナル抗体による合胞体形成の阻害は、２３ｋＤ断片への著しい反応と関連している。知られているように、ＲＳＶ感染は通常温和であるが、一部の個体ではＲＳＶ感染は生命に危険となることがある。
しかし、ＲＳＶに特異性のヒト化およびＦａｂ断片の従来公開された報告にもかかわらず、改善された治療能力を有する改善された抗−ＲＳＶ抗体、具体的にはＲＳＶ感染を有効に中和しそして防止してＲＳＶ Ｆ−タンパク質に高い親和性および特異性を有する抗−ＲＳＶ抗体に対する著しい必要性がまだ存在する。
ヒト以外の哺乳動物、キメラ、ポリクローナル（例えば血清）および／またはモノクローナル抗体（Ｍａｂ類）および断片（例えばそれらのタンパク質分解性消化または融合タンパク質産物）は、ある種の疾患を治療する試みとしてある場合に研究されている保存的な治療剤である。しかし、このような抗体または断片は、ヒトに投与された場合に免疫反応を誘発する可能性がある。このような免疫反応は、循環から抗体または断片の免疫複合体−媒介クリアランスをもたらすことができ、そして治療のための反復投与を不適当とし、これにより患者への治療利益を低下しそして抗体または断片の再投与を制限する。例えば、ヒト以外の部分を含んでなる抗体または断片の反復投与は、血清疾患および／または過敏症となり得る。それらおよびその他の問題を避けるために、当該技術分野では周知のようなキメラ化およびヒト化を含むそれらのこのような抗体および部分の免疫原性が低下されるように多数の手段が採用されている。しかし、それらおよびその他の手段も一部の免疫原性、低い親和性、低い結合活性（ａｖｉｄｉｔｙ）または細胞カルチャー、規模拡大、製造、および／または低収率に問題を有する抗体または断片をもたらす可能性がある。従って、このような抗体または断片は、治療タンパク質としての製造または使用のための適合が理想より遠い可能性がある。
従って、それらの問題の１種またはそれ以上を克服するＲＳＶタンパク質もしくは抗体または断片ならびに公知のタンパク質もしくは抗体またはそれらの断片の改善を提供する要求がある。
本発明は、単離されたヒト、霊長類、げっ歯類、哺乳動物、キメラ、またはヒトＲＳＶタンパク質、抗体、免疫グロブリン、切断産物およびその他の特定のタンパク質およびそれらの変種、ならびにＲＳＶタンパク質または抗体組成物、コード化または相補性核酸、ベクター、宿主細胞、組成物、製剤、デバイス、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物、およびこれらの製造および使用の方法を提供し、それらは当該技術分野で公知のものと組み合わせて本明細書中に記載されそして可能となる。
本発明は、本明細書中に記載されたような少なくとも１種の単離されたＲＳＶ抗体も提供する。本発明に従う抗体は、免疫グロブリン分子の少なくとも一部分、例えば、これらに限定はされないが、重鎖もしくは軽鎖可変領域の少なくとも１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）（超可変領域またはＨＶとも呼ばれる）、またはそれらのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖の定常領域、フレームワーク領域、またはそれらのいずれかの部分を含んでなる分子を含むいずれのタンパク質またはペプチドも含むことができ、ここで、抗体は本発明の抗体内に組み込まれることができる。本発明の抗体は、あらゆる哺乳動物、例えば、これらに限定はされないが、ヒト、マウス、ラビット、ラット、げっ歯類、霊長類、またはそれらのあらゆる組み合わせなどを含みまたはそれらより誘導されることができる。
本発明は、一つの局面では、少なくとも１個の特定の配列、ドメイン、部分もしくはそれらの変種を含んでなる特定のＲＳＶタンパク質もしくは抗体をコードするポリヌクレオチドを含んでなる相補性であるか、またはそれらにハイブリダイズする単離された核酸分子を提供する。本発明はさらに、少なくとも１種の該ＲＳＶタンパク質または抗体をコードするかもしくは相補性の核酸分子を含んでなる組換えベクター、このような核酸および／または組換えベクターを含む宿主細胞、ならびにこのような抗体核酸、ベクターおよび／または宿主細胞を製造および／または使用する方法も提供する。
本発明の少なくとも１個の抗体は、少なくとも１個のＲＳＶタンパク質、サブユニット、断片、部分またはそれらのあらゆる組み合わせに特異性の少なくとも１個の特定のエピトープを結合する。少なくとも１個のエピトープは、該タンパク質の少なくとも１個の部分を含んでなる少なくとも１個の抗体結合領域を含んでなることができ、そのエピトープは、好ましくはその少なくとも一部分の少なくとも１〜５個のアミノ酸を含んでなり、例えばそれらに限定はされないが、該タンパク質の少なくとも１個の機能性、細胞外、可溶性、親水性、外部もしくは細胞質ドメインまたはそれらのいずれかの部分を含んでなることができる。
少なくとも１種の抗体は、場合により少なくとも１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば重鎖または軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３）の少なくとも１個の特定部分および場合により少なくとも１個の定常または可変フレームワーク領域またはそれらのいずれかの部分を含んでなることができる。少なくとも１個の抗体アミノ酸配列は、さらに場合により、本明細書中に記載または当該技術分野で公知の少なくとも１個の特定の置換、挿入または欠失を含んでなることができる。
本発明は、本明細書中に記載の少なくとも１種のＲＳＶタンパク質または抗体も提供し、ここで、抗体は少なくとも１種の活性、例えば、それらに限定はされないが、いずれかのＲＳＶ生物学的活性を有する。従って、ＲＳＶタンパク質抗体は、公知の方法に従って相当する活性、例えば、これらに限定はされないが、ＲＳＶタンパク質またはタンパク質関連機能に対する少なくとも１種の生物学的活性に関してスクリーニングできる。
本発明は、さらに本発明の少なくとも１種の抗体に対する少なくとも１種のＲＳＶ抗−イディオタイプ抗体を提供する。抗−イディオタイプ抗体には、免疫グロブリン分子の少なくとも１部分、例えば、これらに限定はされないが、軽鎖もしくは重鎖の少なくとも１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそれらのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖の可変領域、重鎖もしくは軽鎖の定常領域、フレームワーク領域、または本発明の抗体内に組み込むことができるそれらのいずれかの部分を含んでなる分子を含むあらゆるタンパク質またはペプチドが含まれる。本発明の抗体は、あらゆる哺乳動物、例えば、これらに限定はされないが、ヒト、マウス、ラビット、ラット、げっ歯類、霊長類などを含むかまたはそれらより誘導できる。本発明は、一つの局面では、少なくとも１個の特定の配列、ドメイン、部分もしくはそれらの変種を含んでなる少なくとも１種のＲＳＶ抗−イディオタイプ抗体をコードするポリヌクレオチドを含んでなるか、相補性であるか、またはハイブリダイゼーションする単離された核酸分子を提供する。本発明は、さらに、該ＲＳＶ抗−イディオタイプ抗体をコードする核酸分子を含んでなる組換えベクター、このような核酸および／または組換えベクターを含む宿主細胞、ならびにこのような抗−イディオタイプ抗体核酸、ベクターおよび／または宿主細胞を製造および／または使用する方法を提供する。
本発明は、少なくとも１種のＲＳＶ抗体が検出可能および／または回収可能な量で発現される条件下で本明細書記載のように宿主細胞を培養することを含んでなる、少なくとも１種のＲＳＶタンパク質もしくは抗体、またはＲＳＶ抗−イディオタイプ抗体を宿主細胞中で発現するための少なくとも１種の方法も提供する。
本発明は、（ａ）単離されたＲＳＶタンパク質もしくは抗体をコードする核酸および／または本明細書中に記載のタンパク質もしくは抗体および（ｂ）適当なキャリヤもしくは希釈剤を含んでなる少なくとも１種の組成物も提供する。キャリヤまたは希釈剤は、場合により製薬学的に許容できるものであり、例えば、これらに限定はされないが、公知のキャリヤまたは希釈剤であることができる。組成物は、場合により、さらに少なくとも１種の別の化合物、タンパク質または組成物を含んでなることができる。
本発明は、さらに、当該技術分野で公知および／または本明細書中に記載するような、細胞、組織、器官、動物もしくは患者内の少なくとも１種のＲＳＶ関連症状および／または関連症状の前、その後もしくは同時に緩和もしくは治療するために治療的な有効量を投与するための少なくとも１種のＲＳＶタンパク質または抗体、方法または組成物を提供する。
本発明は、本発明に従う少なくとも１種のＲＳＶタンパク質または抗体の治療的または予防的な有効量の送達のための少なくとも１種の組成物、デバイスおよび／または方法も提供する。
本発明は、さらに、当該技術分野で公知および／または本明細書中に記載するような、細胞、組織、動物または患者内の少なくとも１種のＲＳＶ関連症状および／または関連症状の前、その後、もしくは同時の診断のための少なくとも１種のＲＳＶタンパク質もしくは抗体、方法または組成物を提供する。
本発明は、本発明に従う少なくとも１種のＲＳＶタンパク質または抗体の診断のための少なくとも１種の組成物、デバイスおよび／または送達のための方法も提供する。
少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶタンパク質をコードする単離された核酸、単離された核酸を含んでなる単離された核酸ベクター、および／または単離された核酸を含んでなる原核もしくは真核宿主細胞も提供する。宿主細胞は、場合により原核もしくは真核細胞、またはそれらの融合細胞、例えば、これらに限定はされないが、哺乳動物、植物または昆虫、例えば、これらに限定はされないが、ＣＨＯ、骨髄腫、もしくはリンパ腫細胞、細菌細胞、酵母細胞、カイコ細胞、またはそれらのいずれかの誘導体、不死化または形質転換した細胞より選択される少なくとも１種であることができる。例えばＲＳＶタンパク質は検出可能または回復可能な量で発現されるようにｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｓｉｔｕの条件下でタンパク質をコードする核酸を翻訳することを含んでなる少なくとも１種のＲＳＶタンパク質を産生するための方法も提供される。
少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶタンパク質および少なくとも１種の製薬学的に許容できるキャリヤまたは希釈剤を含んでなる組成物も提供される。本組成物は、場合によりさらに、検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＴＨＥ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、疥癬薬、コルチコステロイド、同化ステロイド、エリスロポイエチン、免疫化剤、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン代替薬、放射性薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬剤、ベータアゴニスト、吸入用ステロイド、エピネフリン（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）または類似薬、サイトカイン、またはサイトカインアンタゴニストの少なくとも１種より選ばれる少なくとも１種の化合物またはタンパク質の有効量を含んでなることができる。
細胞、組織、器官もしくは動物を用いるか、またはそれらへ、本発明の少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶタンパク質の有効量を含んでなる組成物を接触または投与することを含んでなる、細胞、組織、器官もしくは動物中のＲＳＶ関連症状を診断または治療するための方法も提供される。本方法は、場合によりさらに、細胞、組織、器官または動物のｋｇあたりに０．００００００１〜５００ｍｇの有効量を用いることを含んでなることができる。本方法は、場合によりさらに、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、窩内、腔体内、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻内もしくは経皮より選ばれる少なくとも１種の様式による接触または投与を用いることを含んでなることができる。本方法は、場合によりさらに接触または投与の前、同時またはその後に、少なくとも１種の検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、抗炎症薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＴＨＥ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、疥癬薬、コルチコステロイド、同化ステロイド、エリスロポイエチン、免疫化剤、免疫グロブリン、免疫抑制剤、ホルモン、ホルモン代替薬、放射性薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬剤、ベータアゴニスト、吸入用ステロイド、エピネフリンまたは類似薬、サイトカイン、またはサイトカインアンタゴニストから選択される少なくとも１種の化合物またはタンパク質の有効量を含んでなる少なくとも１種の組成物を投与することを含んでなることができる。
本発明の少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶタンパク質を含んでなる少なくとも１種の医療用デバイスも提供され、ここで、デバイスは非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、窩内、腔体内、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻内もしくは経皮から選択される少なくとも１種の様式により少なくとも１種のＲＳＶタンパク質と接触またはこれを投与するために適する。
包装材料および本発明の少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶタンパク質からの溶液または冷凍乾燥された形を含んでなる容器を含んでなる、ヒト薬剤または診断使用のための製品も提供される。本製品は、場合により、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、窩内、腔体内、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻内もしくは経皮送達デバイスまたはシステムの構成要素として容器を有することを含んでなることができる。
タンパク質を回収可能な量で発現できる宿主細胞またはトランスジェニック動物またはトランスジェニック植物または植物細胞を提供することを含んでなる、本発明の少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶタンパク質を産生するための方法も提供される。さらに上記の方法により製造された少なくとも１種のＲＳＶタンパク質も本発明内で提供される。
別の局面では、本発明は、配列番号７〜１２、図３〜４のいずれかの部分または図２Ａ〜Ｇもしくは５Ａ〜Ｆのいずれかの部分によりコードされるアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１個の可変領域を含んでなる、少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体を提供する。
別の局面では、本発明は、配列番号１〜６、図３〜４のいずれかの部分または図２Ａ〜Ｇもしくは５Ａ〜Ｆのいずれかの部分によりコードされるアミノ酸配列を含んでなる重鎖のすべてもしくは軽鎖のすべての相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列を含んでなる、少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体を提供する。
別の局面では、本発明は、配列番号１〜６の少なくとも１個の少なくとも一部のアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲを含んでなる、少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体を提供する。
別の局面では、本発明は、いずれかの公知のＲＳＶタンパク質、例えばＦ糖タンパク質のアミノ酸配列に少なくとも１〜３個ないしすべてを含んでなる少なくとも１個のエピトープを抗体が特異的に結合する、少なくとも１種のヒトＣＤＲを含んでなる、少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体を提供する。
この少なくとも１種の抗体は、場合により、少なくとも１０−９Ｍ、少なくとも１０−１０Ｍ、少なくとも１０−１１Ｍ、もしくは少なくとも１０−１２Ｍより選択される少なくとも１種の親和性をもって少なくとも１種のＲＳＶをさらに結合でき、少なくとも１種のＲＳＶタンパク質の少なくとも１種の活性を本質的に中和する。少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体をコードする単離された核酸、単離された核酸を含んでなる単離された核酸ベクター、および／または単離された核酸を含んでなる原核もしくは真核宿主細胞も提供する。宿主細胞は、場合により、原核もしくは真核細胞、またはそれらの融合細胞、例えば、これらに限定はされないが、哺乳動物、植物もしくは昆虫、例えばこれらに限定はされないが、ＣＨＯ、骨髄腫、もしくはリンパ腫細胞、細菌細胞、酵母細胞、カイコ細胞、またはそれらのいずれかの誘導体、不死化または形質転換された細胞より選択される少なくとも１種であることができる。また、ＲＳＶ抗体は検出可能または回収可能な量で発現されるように、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｓｉｔｕの条件下で抗体をコードする核酸を翻訳することを含んでなる、少なくとも１種のＲＳＶタンパク質を産生するための方法も提供される。
少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体および少なくとも１種の製薬学的に許容できるキャリヤまたは希釈剤を含んでなる組成物も提供される。本組成物は、場合によりさらに、検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＴＨＥ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、疥癬薬、コルチコステロイド、同化ステロイド、エリスロポイエチン、免疫化剤、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン代替薬、放射性薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬剤、ベータアゴニスト、吸入用ステロイド、エピネフリンまたは類似薬、サイトカイン、またはサイトカインアンタゴニストの少なくとも１種より選ばれる少なくとも１種の化合物またはタンパク質の有効量を含んでなることができる。
本発明は、さらに、本発明の少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体を特異的に結合する抗イディオタイプ抗体または断片を提供する。
細胞、組織、器官もしくは動物を用いるか、またはそれらへ、本発明の少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体の有効量を含んでなる組成物を接触または投与することを含んでなる、細胞、組織、器官もしくは動物中のＲＳＶ関連症状を診断または治療するための方法も提供される。本方法は、場合によりさらに、細胞、組織、器官または動物のｋｇあたりに０．０００１〜５００ｍｇの有効量を用いることを含んでなることができる。本方法は、場合によりさらに、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、窩内、腔体内、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻内もしくは経皮より選ばれる少なくとも１種の様式により接触または投与を用いることを含んでなることができる。本方法は、場合によりさらに接触または投与の前、同時またはその後に、少なくとも１種の検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻薬、抗炎症薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＴＨＥ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、疥癬薬、コルチコステロイド、同化ステロイド、エリスロポイエチン、免疫化剤、免疫グロブリン、免疫抑制剤、ホルモン、ホルモン代替薬、放射性薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬剤、ベータアゴニスト、吸入用ステロイド、エピネフリンまたは類似薬、サイトカイン、またはサイトカインアンタゴニストから選択される少なくとも１種の化合物またはタンパク質の有効量を含んでなる少なくとも１種の組成物を投与することを含んでなることができる。
本発明の少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体を含んでなる少なくとも１種の医療用デバイスも提供され、ここで、デバイスは非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、窩内、腔体内、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻内もしくは経皮から選択される少なくとも１種の様式により少なくとも１種のＲＳＶタンパク質と接触またはこれを投与するために適する。
包装材料および本発明の少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶタンパク質からの溶液または冷凍乾燥された形を含んでなる容器を含んでなる、ヒト薬剤または診断使用のための製品も提供される。製品は、場合により、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、窩内、腔体内、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻内もしくは経皮送達デバイスまたはシステムの構成要素として容器を有することを含んでなることができる。
抗体を回収可能な量で発現できる宿主細胞またはトランスジェニック動物またはトランスジェニック植物または植物細胞を提供することを含んでなる、本発明の少なくとも１種の哺乳動物ＲＳＶ抗体を産生するための方法を提供することも提供される。さらに上記の方法により製造された少なくとも１種のＲＳＶ抗体も本発明内で提供される。
本発明は、本明細書中に記載するあらゆる発明も提供する。
［発明の詳細な記述］
本発明は、単離、組換えおよび／または合成されたＲＳＶヒト、霊長類、げっ歯類、哺乳動物、キメラ、ヒト化またはＣＤＲグラフト化、抗体およびそのＲＳＶ抗イディオタイプ抗体、ならびに少なくとも１種のＲＳＶ抗体または抗−イディオタイプ抗体をコードする少なくとも１種のポリヌクレオチドを含んでなる組成物およびコーディング核酸分子を提供する。本発明は、診断および治療組成物、方法およびデバイスを含むこのような核酸および抗体、抗−イディオタイプ抗体作製および使用の方法をさらに含むがこれらに限定はされない。
本明細書中に使用される場合に、「呼吸器合胞体ウイルス抗体」、「ＲＳＶ抗体」などは、免疫グロブリン分子の少なくとも一部分、例えば、これらに限定はれないが、重鎖もしくは軽鎖もしくはそれらのリガンド結合部分の少なくとも１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、もしくはそれらのあらゆる部分、断片もしくはそれらの変種、またはＲＳＶレセプターもしくは結合タンパク質の少なくとも１個の部分を含んでなる分子を含むあらゆるタンパク質またはペプチドを含み、それらは本発明のＲＳＶ抗体内に組み込むことができる。
抗体は、少なくとも１個のＣＤＲ、少なくとも１個の可変領域、少なくとも１個の定常領域、少なくとも１個の重鎖（例えばγ１、γ２、γ３、γ４、μ、α１、α２、δ、ε）、少なくとも１個の軽鎖（例えばκおよびλ）、またはそれらのあらゆる部分もしくは断片の１種またはそれ以上を含むことができ、そしてさらに鎖間および鎖内ジスルフィド結合、ヒンジ領域、ヒンジ領域により分離されることができるグリコシル化部位、ならびに重鎖および軽鎖を含んでなることができる。軽鎖は典型的には約２５Ｋｄの分子量を有し、そして重鎖は典型的には５０Ｋ〜７７Ｋｄの範囲内にある。軽鎖は２種類の区別されるタイプまたはイソタイプ、すなわちカッパ（κ）およびラムダ（λ）として存在でき、それらはいずれの重鎖タイプとも組み合うことができる。すべての軽鎖は少なくとも１個の可変領域および少なくとも１個の定常領域を有する。ＩｇＧ抗体は典型的な抗体構造と考えられそして軽鎖内に２個の鎖内ジスルフィド結合を有し（１個は可変領域内そして１個は定常領域内）、重鎖内には４個を有し、そしてこのような結合は、鎖内に約１１０アミノ酸の「ドメイン」を含んでなるアミノ酸約６０〜７０アミノ酸のペプチドループを包含する。ＩｇＧ抗体は、４種、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４に特性化できる。
それぞれの免疫グロブリンのクラスは、一組の異なる機能を有する。下記は免疫グロブリンクラスおよびサブクラスそれぞれの物理化学的性質を要約したものである。
免疫グロブリン種と亜種の物理化学的性質
Figure 2005522996
下記の表には、ヒト抗体クラスおよびサブクラスの抗体エフェクター機能の非限的な例を要約する。
Figure 2005522996
従って、抗体のタイプまたはそれらの断片は、特定の治療もしくは診断使用、例えば、これらに限定はされないが、血清半減期、脈管内分布、補体結合などに対して望まれる所望の特性および機能に基づいて本発明による使用のために選択できる。
抗体の多様性は、少なくとも５種の機構により発生し、すなわち、（１）抗体の部分をコードする同義遺伝子の使用、（２）体細胞変異、例えば種々のＢ細胞クローン中に種々のＶ遺伝子を産生するＢ細胞個体発生の間の始原Ｖ遺伝子変異、（３）体細胞組換え、例えばＢ個体発生の間のＶ領域遺伝子の主要部分を結合する遺伝子セグメントＪ１−Ｊｎ組換え、（４）擬Ｖ領域の成員からＤＮＡのセクションをＶ領域内にコピーしてＤＮＡ配列を改変できる遺伝子変換、および（５）ヌクレオチド付加、例えばＶおよびＪが切断される場合、結合の前に、そして余分のヌクレオチドを追加のアミノ酸をコードするために挿入してもよいことを含む。限定ではない例としては、これらに限定はされないが、（ｉ）生殖系列からＢ細胞クローンへＶκ、Ｊ、およびＣκ領域を選択／組換えてカッパ鎖を生成する、（ｉｉ）生殖系列からＢ細胞クローンへＶκ、Ｊ、およびＣκ領域を選択／組換えにラムダ鎖を生成する、（ｉｉｉ）ＶＨ、ＤＩ−Ｄ３０およびＪＨ１−ＪＨ６遺伝子の選択／組換えして重鎖可変領域をコードする機能性ＶＤＪ遺伝子を形成する。上記の機構は、抗体多様性および特異性を発生するために同調する様式で作動する。
「抗体」の用語は、さらに抗体、消化断片、それらの特定の部分および変種を包含することを意図し、これには抗体擬態物を含みまたは抗体もしくはその特定の断片もしくは部分の構造および／または機能を模擬する抗体の部分を含んでなり、これには一本鎖抗体およびその断片も含まれる。機能性断片は、哺乳動物ＲＳＶに結合する抗原−結合性断片を含む。例えば、Ｆａｂ（例えばパパイン消化による）、Ｆａｂ’（例えばペプシン消化および部分還元による）およびＦ（ａｂ’）２（例えばペプシン消化による）、Ｆａｂｃ（例えばプラスミン消化による）、ｐＦｃ’（例えばペプシンまたはプラスミン消化による）、Ｆｄ（例えばペプシン消化、部分還元および再凝集による）、ＦｖまたはｓｃＦｖ（例えば分子生物学技術による）断片を含み、これらに限定はされないがＲＳＶへ結合できる抗体断片またはその部分は、本発明内に包含される（例えばコリガン「免疫学」、下記参照）。
このような断片は、当該技術分野では公知であるかおよび／または本明細書中に記載されているようにして酵素切断、合成または組換え技術により作製できる。抗体は、１個またはそれ以上の終止コドンが本来の終止部位の上流側に導入されている抗体遺伝子を用いてさまざまな短小化形として産生されることもできる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２重鎖部分をコードする組み合わせ遺伝子は、重鎖のＣＨ１ ドメインおよび／またはヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含むように設計できる。抗体の種々の部分は、慣用の技術により化学的に一緒に結合でき、または遺伝子工学技術を用いて隣接タンパク質として調製できる。
本明細書中に使用する場合に、用語「ヒト抗体」は、本質的にすべてのタンパク質の部分（例えばＣＤＲ、フレームワーク、ＣＬ、ＣＨドメイン（例えばＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）、ヒンジ、（ＶＬ、ＶＨ））が本質的にヒト内で非−免疫原性であり、僅かな配列変化または変更のみを有する抗体を呼ぶ。同様に、霊長類（サル、ヒヒ、チンパンジー、など）、げっ歯類（マウス、ラット、ラビット、テンジクネズミ、ハムスター、など）および他の哺乳動物を指定する抗体は、その種、亜属、属、亜科、科に特定の抗体を指定する。さらに、キメラ抗体は上記のあらゆる組み合わせを含む。このような変更または変化は場合によりそして好ましくは非−変性抗体と比較してヒトまたはその他の種内の免疫原性を維持または低下する、従って、ヒト抗体はキメラまたはヒト化抗体とは区別される。ヒト抗体は、機能的に組換えヒト免疫グロブリン（例えば重鎖および／または軽鎖）遺伝子を発現できる非−ヒトの動物または原核もしくは真核細胞により産生できることが指摘される。さらに、ヒト抗体が一本鎖抗体である場合に、本来のヒト抗体内には見いだされないリンカーペプチドを含んでなることができる。例えば、Ｆｖは、リンカーペプチド、例えば２〜約８個のグリシンまたはその他のアミノ酸残基を含んでなることができ、これらは重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域とを連結する。このようなリンカーペプチドは、ヒト由来と考えられる。
二重特異性、異種特異性、異種共役性または同様の抗体は、少なくとも二種の異なる抗原への結合特異性を有するモノクローナルで好ましくはヒトまたはヒト化された抗体であるものも使用できる。この場合に、結合特異性の一つは少なくとも１種のＲＳＶタンパク質に対して、他のものはいずれかの他の抗原に対するものである。二重特異性抗原の製法は、当該技術分野では公知である。伝統的に、二重特異性抗体の組換え産生は、２種の免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づき、ここで、２種の重鎖は異なる特異性を有する（ミルステインおよびクエロ（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな組合のために、これらのハイブリドーマ（クワドローマ（Ｑｕａｄｒｏｍａ））は、１０種の異なる抗体分子の潜在性混合物を産生し、この中で１種のみが正しい二重特異性構造を有する。通常はアフィニティークロマトグラフィー操作で行われる正しい分子の精製は、どちらかというと煩瑣であり、そして生成物収率は低い。同様な手順は、例えばＷＯ９３／０８８２９、米国特許（ＵＳ Ｐａｔｅｎｔ）第６２１０６６８号、第６１９３９６７号、第６１３２９９２号、第６１０６８３３号、第６０６０２８５号、第６０３７４５３号、第６０１０９０２号、第５９８９５３０号、第５９５９０８４号、第５９５９０８３号、第５９３２４４８号、第５８３３９８５号、第５８２１３３３号、第５８０７７０６号、第５６４３７５９号、第５６０１８１９号、第５５８２９９６号、第５４９６５４９号、第４６７６９８０号、ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／００３７３、欧州特許（ＥＰ）第０３０８９号、トラウネッカーら（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）），スレシュら（Ｓｕｒｅｓｈ ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １２１：２１０（１９８６））中に開示され、それぞれ引用することによりすべてを本明細書に編入される。
このような抗体は、場合によりさらに特定のリガンドに対し、例えば、これらに限定はされないが、このような抗体がｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｓｉｔｕおよび／またはｉｎ
ｖｉｖｏで少なくとも１種のＲＳＶ活性または結合、またはＲＳＶレセプター活性または結合、を調節、低下、増加、拮抗、作動、緩和、軽減、遮断、阻害、阻止および／または干渉して影響する。非限定の例として、本発明の適合するＲＳＶ抗体、特定の部分または変種は少なくとも１種のＲＳＶ、またはその特定の部分、変種またはドメインと結合できる。適合するＲＳＶ抗体、特定の部分または変種は少なくとも１種のＲＳＶ活性または機能、例えば、これらに限定はされないが、ＲＮＡ、ＤＮＡもしくはタンパク質合成、ＲＳＶ放出、ＲＳＶレセプター信号伝達、膜ＲＳＶ切断、ＲＳＶ活性、ＲＳＶ産生および／または合成に場合により影響もできる。
本発明の方法および組成物中で有用なＲＳＶ抗体（ＲＳＶ抗体とも呼ぶ）は、場合によりＲＳＶへの高い親和性結合を特徴としそして場合によりかつ好ましくは低い毒性を有することができる。特に、本発明の抗体、特定の断片または変種は、個別の成分、例えば可変領域、定常領域およびフレームワークが個別および／または集団的に、場合によりそして好ましくは低い免疫原性を有する場合に、本発明内で有用である。本発明内で使用できる抗体は、場合により患者を長期間治療して測定できるような症状を緩和するそれらの能力および低いおよび／または受容できる毒性を特徴とする。低いまたは受容できる免疫原性および／または高い親和性、ならびにその他の適合する性質は、達成される治療結果に寄与できる。「低い免疫原性」とは、本明細書中では、治療される患者の約７５％未満、または好ましくは約５０％未満で著しいＨＡＨＡ、ＨＡＣＡ、またはＨＡＭＡ反応を上昇し、および／または治療される患者内の低い力価を上昇するとして定義される（二重抗原酵素免疫アッセイで測定して約３００未満、好ましくは約１００未満）（エリオットら（Ｅｌｌｉｏｔ ｅｔ ａｌ，Ｌａｎｃｅｔ ３４４：１１２５−１１２７（１９９７））、引用することにより全体を本明細書中に編入する）。
有用性
本発明の単離された核酸は、少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはそれらの特定の変種の製造のために使用でき、それらは細胞、組織、器官もしくは動物（哺乳動物およびヒトを含む）内の処置または効果のため、少なくとも１種の免疫障害もしくは疾患、心血管障害もしくは疾患、感染性、悪性、および／もしくは神経学的障害もしくは疾患、またはその他の既知もしくは特定のＲＳＶ関連病状より選択され、これらに限定はされない少なくとも１種のＲＳＶ病状の診断、監視、調節、処置、軽減、影響防止を援助、または症状の低下のために使用できる。
このような方法は、症状、効果もしくは機構におけるこのような調節、処置、軽減、防止、もしくは低下を必要とする細胞、組織、器官、動物もしくは患者に対して少なくとも１種のＲＳＶ抗体を含んでなる組成物もしくは薬剤組成物の有効量を投与することを含んでなることができる。有効量は、単回（例えばボーラス）、複数回もしくは連続投与あたりに約０．００１〜５００ｍｇ／ｋｇの量、または単回、複数回もしくは連続投与あたりに血清濃度０．０１〜５０００μｇ／ｍｌの血清濃度に到達するため、または公知方法を用いて実行および決定されるいずれかの効果的な範囲もしくはその間の値を含んでなることができ、これは本明細書中に記載もしくは当該技術分野で公知である。
引用文献
本明細書中に引用するすべての刊行物または特許は、これらが本発明の時点における当該分野の状態を示すとしておよび／または本発明の記載および可能性を提供するために引用することによりすべてを編入される。刊行物とは、あらゆる科学的もしくは特許刊行物、またはすべての記録、電子的もしくは印刷された形態を含みあらゆる媒体形態で利用できるあらゆるその他の情報を呼ぶ。下記の引用文献は、引用することによりすべてを本明細書に編入される：オースベルら編集「分子生物学における最近のプロトコール」（Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ（１９８７−２００１））；サンブルックら「分子クローニング：実験マニュアル」第二版（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ．Ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９））；ハーロウおよびレーン「抗体：実験マニュアル」（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９））；コリガンら編集「免疫学における最近のプロトコール」（Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４−２００１））；コリガンら「タンパク質科学における最近のプロトコール」（Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ（１９９７−２００１））。
本発明の抗体
本発明の少なくとも１種のＲＳＶ抗体は、場合により細胞株、混合細胞株、不死化細胞もしくは不死化細胞のクローン集団により、同様に当該技術分野では公知のようにして産生できる。例えば、オースベルら編集「分子生物学における最近のプロトコール」（Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ（１９８７−２００１））；サンブルックら「分子クローニング：実験マニュアル」第二版（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ．Ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９））；ハーロウおよびレーン「抗体：実験マニュアル」（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９））；コリガンら編集「免疫学における最近のプロトコール」（Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４−２００１））；コリガンら「タンパク質科学における最近のプロトコール」（Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ（１９９７−２００１））（これらはすべて引用することにより本明細書に編入される）を参照のこと。
ヒトＲＳＶタンパク質またはそれらの断片に対して特異性であるヒト抗体は、適当な免疫原性抗原、例えば単離されおよび／またはＲＳＶタンパク質もしくはその一部分（合成分子、例えば合成ペプチドを含む）に対して培養できる。その他の特異性または一般的哺乳動物抗体も同様に培養できる。免疫原性抗原の調製、およびモノクローナル抗体作製は、あらゆる適合する技術を用いて行うことができる。
一つの方法では、ハイブリドーマは適当な不死化細胞株を融合して産生される（例えば、骨髄腫細胞株、例えば、これらに限定はされないが、Ｓｐ２／０、Ｓｐ２／０−ＡＧ１４、ＮＳＯ、ＮＳ１、ＮＳ２、ＡＥ−１、Ｌ．５、＞２４３、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、Ｓｐ２ ＳＡ３、Ｓｐ２ ＭＡＩ、Ｓｐ２ ＳＳ１、Ｓｐ２ ＳＡ５、Ｕ９３７、ＭＬＡ１４４、ＡＣＴ ＩＶ、ＭＯＬＴ４、ＤＡ−１、ＪＵＲＫＡＴ、ＷＥＨＩ、Ｋ−５６２、ＣＯＳ、ＲＡＪＩ、ＮＩＨ ３Ｔ３、ＨＬ−６０、ＭＬＡ１４４、ＮＡＭＡＩＷＡ、ＮＥＵＲＯ ２Ａ、など、またはヘテロ骨髄腫、それらの融合産物、またはそれらより誘導されたあらゆる細胞もしくは融合細胞、または当該技術分野で公知のあらゆるその他の適合する細胞株である。例えばｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ、ｗｗｗ．ｌｉｆｅｔｅｃｈ．ｃｏｍ．、などで、抗体産生細胞、例えば、これらに限定はされないが、単離またはクローニングされた脾臓、末梢血、リンパ、扁桃腺、またはその他の免疫もしくはＢ細胞を含む細胞、または重鎖もしくは軽鎖定常もしくは可変もしくはフレームワークもしくはＣＤＲ配列を発現するいずれかのその他の細胞であって、内因性もしくは異種核酸として、組換えもしくは内因性のウイルス、細菌、藻類、原核生物、両棲類、昆虫類、爬虫類、魚類、哺乳動物、げっ歯類、ウマ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、霊長類、真核生物、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｒＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡもしくはＲＮＡ、葉緑体ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、一本鎖、二本鎖、三本鎖、ハイブリダイズ化、などおよびそれらのあらゆる組み合わせとしてのいずれかを参照のこと。例えば引用することによりすべて本明細書に編入するオースベル（上記）、およびコリガン「免疫学」（上記）第２章を参照のこと。
抗体産生細胞は、末梢血液より、または好ましくは関連する抗原を用いて免疫化されたヒトまたはその他の適当な動物の脾臓もしくはリンパ節より得ることができる。あらゆるその他の適当な宿主細胞も本発明の抗体、特定の断片またはその変種をコードする異種または内因性核酸を発現するために使用できる。融合細胞（ハイブリドーマ）または組換え細胞は、選択的培養条件またはその他の適当な公知の方法を用いて単離し、そして限界希釈もしくは細胞選別、またはその他の公知方法によりクローニングできる。所望の特異性を有する抗体を産生する細胞は、適合するアッセイ（例えばＥＬＩＳＡ）により選択できる。
必要な特異性の抗体を産生または単離するその他の適当な方法は、ペプチドもしくはタンパク質ライブラリーより組換え抗体を選択する方法（例えば、これらに限定はされないが、バクテリオファージ、リボソーム、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、などを表示するライブラリー；例えばケンブリッジ抗体テクノロジーズ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ
ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ，ＵＫ）；モルフォシス（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ，Ｍａｒｔｉｎｓｒｅｉｄ／Ｐｌａｎｅｇｇ，ＤＥ）；バイオヴェーション（Ｂｉｏｖａｔｉｏｎ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ．ＵＫ）；バイオインヴェント（ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ，Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ）；ダイアックス社（Ｄｙａｘ Ｃｏｒｐ．）、エンゾン（Ｅｎｚｏｎ）、アフィマックス／バイオサイト（Ａｆｆｙｍａｘ／Ｂｉｏｓｉｔｅ）；キソマ（Ｘｏｍａ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ）；イクシス（Ｉｘｓｙｓ）より入手可能。例えば欧州特許（ＥＰ）第３６８，６８４号、ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４、ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１７５５、ＰＣＴ／ＧＢ９２／００２２４０、ＰＣＴ／ＧＢ９２／００８８３、ＰＣＴ／ＧＢ９３／００６０５、米国特許（ＵＳ）０８／３５０２６０号（５／１２／９４）、ＰＣＴ／ＧＢ９４／０１４２２、ＰＣＴ／ＧＢ９４／０２６６２、ＰＣＴ／ＧＢ９７／０１８３５、（ＣＡＴ／ＭＲＣ）、ＷＯ９０／１４４４３、ＷＯ９０／１４４２４、ＷＯ９０／１４４３０、ＰＣＴ／ＵＳ９４／１２３４、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９６／０７７５４、（スクリップス（Ｓｃｉｐｐｓ））、欧州特許（ＥＰ）第６１４，９８９号（モルホシス）、ＷＯ９５／１６０２７（バイオインヴェント）、ＷＯ８８／０６６３０、ＷＯ９０／３８０９（ダイアックス）、米国特許（ＵＳ）第４，７０４，６９２号（エンゾン）、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０２９８９（アフィマックス）、ＷＯ８９／０６２８３、欧州特許（ＥＰ）第３７１，９９８号、欧州特許（ＥＰ）第５５０，４００号、（キソマ）、欧州特許（ＥＰ）第２２９，０４６号、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０７１４９（イクシス）、または確率的に産生されるペプチドもしくはタンパク質−米国特許（ＵＳ）第５７２３３２３号、第５７６３１９２号、第５８１４４７６号、第５８１７４８３号、第５８２４５１４号、第５９７６８６２号、ＷＯ８６／０５８０３、欧州特許（ＥＰ）第５９０ ６８９号（イクシル、現在はアプライド モレキュラー エヴォリューション（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ、ＡＭＥ））、いずれも引用することによりすべて本明細書に編入される）またはトランスジェニック動物の免疫化に依存する方法（例えばＳＣＩＤマウス、（エングイエンら（Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：９０１−９０７（１９９７））；サンズら（Ｓａｎｚｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：９５−１１８（１９９６））；エレンら（Ｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．９３：１５４−１６１（１９９８））それぞれ関連特許および出願も同様に引用することによりすべて本明細書に編入される）を含み、これらに限定はされないが、使用が可能であり、これらは当該技術分野では公知のようにおよび／または本明細書中に記載のように、ヒト抗体のある範囲を産生できる。このような技術には、リボソームディスプレイ（ヘインズら（Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：４９３７−４９４２（Ｍａｙ，１９９７））；ヘインズら（Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５：１４１３０−１４１３５（Ｎｏｖ，１９９７）））；単一細胞抗体産生技術（例えば選択されたリンパ球抗体法（”ＳＬＡＭ”）（米国特許（ＵＳ）第５，６２７，０５２号、ウエンら（Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８８７−８９２（１９８７））；バクコックら（Ｂａｂｃｏｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：７８４３−７８４８（１９９６）））、ゲル小滴およびフロー細胞測定（パウエルら（Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：３３３−３３７（１９９０））；ワンセルシステムズ（Ｏｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）；グレイら（Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．１８２：１５５−１６３（１９９５））；ケニーら（Ｋｅｎｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１３：７８７−７９０（１９９５）））、Ｂ細胞選択（スティーンバッカーズら（Ｓｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｏｒｔｓ １９：１２５−１３４（１９９４））；ジョナクら（Ｊｏｎａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｖｏｌ．５，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｏｒｒｅｎｂａｅｃｋ ｅｄ．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｂ．Ｖ．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ（１９８８））参照）が含まれるがこれらに限定はされない。
非ヒトまたはヒト抗体の操作またはヒト化のための方法も使用できそして当該技術分野では周知である。一般に、ヒト化または操作した抗体は、ヒト以外、例えば、これらに限定はされないが、マウス、ラット、ラビット、ヒト以外の霊長類またはその他の哺乳動物である起源からの１個またはそれ以上のアミノ酸残基を有する。これらのヒトアミノ酸残基はしばしば「外来（ｉｍｐｏｒｔｅｄ）」残基と呼ばれ、それらは典型的には既知のヒト配列の「外来」可変、定常またはその他のドメインより取られる。既知のヒトＩｇ配列は、例えば下記に開示され、それらはそれぞれ引用することによりすべて本明細書に編入される。
Figure 2005522996
このような外来の配列は、免疫原性を低下するため、または結合、親和性、オンレート（ｏｎ−ｒａｔｅ）、オフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）、結合活性、特異性、半減期、もしくはその他のいずれかの適合する当該技術分野で公知のようにして特性を低下、増進もしくは変更するために使用できる。一般に、非−ヒトまたはヒトＣＤＲ配列の一部または全体は、可変および定常領域の非−ヒト配列がヒトまたは他のアミノ酸により置換されている間は保持される。抗体も場合により抗原およびその他の好ましい生物学的性質への高い親和性の保持を伴ってヒト化できる。この目的を達成するために、ヒト化された抗体は、場合により親およびヒト化配列の三次元モデルを用いて親配列および種々の概念的ヒト化産物の分析のプロセスにより産生できる。三次元免疫グロブリンモデルは、一般的に入手ができそして当該技術分野の熟練者には熟知されている。選択された候補免疫グロブリン配列の可能な三次元配置構造を説明および表示するコンピュータープログラムが利用できる。これらの表示の検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の予想される役割の分析、すなわちその抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響する残基の分析を可能とする。この方法で、所望の抗体特性、例えば標的抗原に対する増大した親和性が達成されるようにコンセンサスおよび外来配列からＦＲ残基が選択および組み合わせできる。一般に、ＣＤＲ残基は抗原結合に影響する際に直接的そして最も本質的に関与する。本発明の抗体のヒト化または操作は、いずれかの公知の技術、例えば、これらに限定はされないが、ウインター（Ｗｉｎｔｅｒ）（ジョーンズら（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６））、リーチマンら（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８））、フェルフイエンら（Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８））、シムズら（Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３））、コティアおよびレスク（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７））、カーターら（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５（１９９２））、プレスタら（Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３））、米国特許（ＵＳ）第５７２３３２３号、第５９７６８６２号、第５８２４５１４号、第５８１７４８３号、第５８１４４７６号、第５７６３１９２号、第５７２３３２３号、第５７６６８８６号、第５７１４３５２号、第６２０４０２３号、第６１８０３７０号、第５６９３７６２号、第５５３０１０１号、第５５８５０８９号、第５２２５５３９号、第４８１６５６７号、ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０、ＵＳ９６／１８９７８、ＵＳ９１／０９６３０、ＵＳ９１／０５９３９、ＵＳ９４／０１２３４、ＧＢ８９／０１２３４、ＧＢ９１／０１１３４、ＧＢ９２／０１７５５、ＷＯ９０／１４４４３、ＷＯ９０／１４４２４、ＷＯ９０／１４４３０、欧州特許（ＥＰ）第２２９２４６号に記載されたものに従って実施でき、これらはその中に引用された引用文献も含め、それぞれ引用することにより本明細書に編入される。
ＲＳＶ抗体は、本明細書中の記載のようにしておよび／または当該技術分野で公知のようにして、ヒト抗体の一定の範囲を産生できるトランスジェニック動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ヒト以外の霊長類、など）の免疫化により場合により生成できる。ヒトＲＳＶ抗体を産生する細胞は、適当な方法、例えば本明細書中の記載の方法を用いてこのような動物より単離しそして不死化できる。
ヒト抗原に結合するヒト抗体のある範囲を産生できるトランスジェニックマウスは、公知の方法により産生できる（例えば、これらに限定はされないが、ロンバーグら（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．）に発行された米国特許（ＵＳ）第５，７７０，４２８号、第５，５６９，８２５号、第５，５４５，８０６号、第５，６２５，１２６号、第５，６２５，８２５号、第５，６３３，４２５号、第５，６６１，０１６号および第５，７８９，６５０号、ヤコボヴィッツら（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．）ＷＯ９８／５０４３３、ヤコボヴィッツら（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．）ＷＯ９８／２４８８３、ロンバーグら（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．）ＷＯ９８／２４８８４、ロンバーグら（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．）ＷＯ９７／１３８５２、ロンバーグら（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．）ＷＯ９４／２５５８５、クヘルラパテら（Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ
ｅｔ ａｌ．）ＷＯ９６／３４０９６、クヘルラパテら（Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ ｅｔ ａｌ．）欧州特許（ＥＰ）第０４６３ １５１ Ｂ１号、クヘルラパテら（Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ ｅｔ ａｌ．）欧州特許（ＥＰ）第０７１０ ７１９ Ａ１号、スラニら（Ｓｕｒａｎｉ ｅｔ ａｌ．）米国特許（ＵＳ）第５，５４５，８０７号、ブルッゲマンら（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．）ＷＯ９０／０４０３６、ブルッゲマンら（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．）欧州特許（ＥＰ）第０４３８ ４７４ Ｂ１号、ロンバーグら（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．）欧州特許（ＥＰ）第０８１４ ２５９ Ａ２号、ロンバーグら（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．）英国特許（ＧＢ）第２ ２７２ ４４０号、ロンバーグら（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９（１９９４））、テイラーら（Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（４）５７９−５９１（１９９４））、グリーンら（Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３−２１（１９９４））、メンデスら（Ｍｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４５−１５６（１９９７））、テイラーら（Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０（２３）：６２８９−６２９５（１９９２））、テュエロンら（Ｔｕｅｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０（８）：３７２０−３７２４（１９９３））、ロンバーグら（Ｌｏｎｂｅｒｇ
ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（１）；６５−９３（１９９５））およびフィシュワルドら（Ｆｉｓｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４（７）：８４５−８５１（１９９６）））、これらはそれぞれ引用することによりすべて本明細書に編入される）。一般に、これらのマウスは機能的に再構成されたか、または機能的再構成を受けることができる少なくとも１個のヒト免疫グロブリン遺伝子座よりのＤＮＡを含んでなる少なくとも１個の導入遺伝子を含んでなる。このようなマウス内の内因性免疫グロブリン遺伝子座は、内因性遺伝子によりコードされる抗体を産生するための動物の能力を排除するために破壊または欠失できる。
類似のタンパク質または断片に特異的に結合する抗体のスクリーニングは、ペプチド表示ライブラリーを用いて都合よく達成できる。この方法には、所望の機能または構造を有する個別成員に関するペプチドの大きい集団のスクリーニングが含まれる。ペプチド表示ライブラリーの抗体スクリーニングは、当該技術分野では周知である。表示されたペプチド配列は、アミノ酸３〜５０００個またはそれ以上の長さ、しばしば５〜１００個のアミノ酸長さ、そして多くは約８〜２５個のアミノ酸長さであることができる。ペプチドライブラリーを生成するための直接化学合成方法に加えて、数種の組換えＤＮＡ法が記載されている。一つのタイプでは、バクテリオファージまたは細胞の表面上のペプチド配列の表示が含まれる。それぞれのバクテリオファージまたは細胞は、特定の表示されたペプチド配列をコードするヌクレオチド配列を含む。このような方法は、ＰＣＴ特許公開第９１／１７２７１号、第９１／１８９８０号、第９１／１９８１８号、および第９３／０８２７８号に記載されている。ペプチドのライブラリーを発現するための他のシステムは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ化学合成および組換え法の双方の局面を有する。ＰＣＴ特許公開第９２／０５２５８号、第９２／１４８４３号、および第９６／１９２５６号参照。また、米国特許（ＵＳ）第５，６５８，７５４号および第５，６４３，７６８号も参照のこと。ペプチド表示ライブラリー、ベクターおよびスクリーニングキットは、インヴィトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、およびケンブリッジ抗体技術（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ，ＵＫ）などの供給者より容易に入手できる。例えば、エンゾン（Ｅｎｚｏｎ）に譲渡された米国特許（ＵＳ）第４７０４６９２号、第４９３９６６６号、第４９４６７７８号、第５２６０２０３号、第５４５５０３０号、第５５１８８８９号、第５５３４６２１号、第５６５６７３０号、第５７６３７３３号、第５７６７２６０号、第５８５６４５６号、ダイアックス（Ｄｙａｘ）に譲渡された第５２２３４０９号、第５４０３４８４号、第５５７１６９８号、第５８３７５００号、アフィマックス（Ａｆｆｙｍａｘ）に譲渡された第５４２７９０８号、第５５８０７１７号、ケンブリッジ抗体技術（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に譲渡された第５８８５７９３号、ジェネンテック（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）に譲渡された第５７５０３７３号、キソマ（Ｘｏｍａ）に譲渡された第５６１８９２０号、第５５９５８９８号、第５５７６１９５号、第５６９８４３５号、第５６９３４９３号、第５６９８４１７号、上記のコリガン、上記のオースベル、上記のサンブルック参照。上記の特許および刊行物それぞれは引用することにより本明細書にすべて編入される。
本発明の抗体は、その乳中にこのような抗体を産生するトランスジェニック動物または哺乳動物、例えばヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジなどを提供するために、少なくとも１種のＲＳＶ抗体をコードする核酸を用いてでも製造できる。このような動物は、既知の方法を用いて提供できる。例えば、これらに限定はされないが、米国特許（ＵＳ）第５，８２７，６９０号、第５，８４９，９９２号、第４，８７３，３１６号、第５，８４９，９９２号、第５，９９４，６１６号、第５，５６５，３６２号、第５，３０４，４８９号など参照。上記のそれぞれは引用することにより本明細書にすべて編入される。
本発明の抗体は、このような抗体、特定の部分または変種を植物の部分内たはそれより培養された細胞内に産生するトランスジェニック植物および培養植物細胞（例えば、これらに限定はされないが、タバコおよびメイズ）を提供するために少なくとも１種のＲＳＶ抗体をコードする核酸を用いて追加的に調製できる。非限定の例として、組換えタンパク質を発現するトランスジェニックタバコ葉は、例えば誘導可能なプロモーターを用いて大量の組換えタンパク質を提供するために使用して成功した。例えば、クレーマーら（Ｃｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４０：９５−１１８（１９９９））およびその中に引用された文献を参照。また、トランスジェニックメイズは、他の組換えシステムで産生または天然起源から精製されたものと同等の生物学的活性を有して、商業生産レベルで哺乳動物タンパク質を産生するために使用された。例えばフードら（Ｈｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４６４：１２７−１４７（１９９９））およびその中に引用された文献を参照。例えばタバコ種子およびバレイショ塊茎を含む一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）のような抗体断片を含むトランスジェニック植物種子より、抗体が大量に生産された。例えばコンラッドら（Ｃｏｎｒａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８：１０１−１０９（１９９８））およびその中に引用された文献参照。従って、本発明の抗体は、既知の方法に従ってトランスジェニック植物を用いてでも生産できる。例えばフィシャーら（Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０：９９−１０８（Ｏｃｔ．，１９９９））、マら（Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５２２−７（１９９５））、マら（Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ
Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０９：３４１−６（１９９５））、ワイトラムら（Ｗｈｉｔｅｌａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２２：９４０−９４４（１９９４））およびそれらの中に引用された文献を参照。一般的に、抗体の植物発現に関して、これらに限定はされないが、参照すること。上記それぞれの引用文献は、引用することによりすべて本明細書に編入される。
本発明の抗体は、広範囲の親和性（ＫＤ ）を有するヒトＲＮＡを結合できる。好ましい態様では、本発明の少なくとも１種のヒトｍＡｂは、場合により高い親和性でヒトＲＳＶを結合できる。例えば、ヒトｍＡｂは、約１０−７Ｍと同等またはそれ以下、例えば、これらに限定はされないが、０．１〜９．９（またはその間のあらゆる範囲もしくは値）Ｘ１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０ 、１０−１１ 、１０−１２ 、１０−１３ またはその間のいずれかの範囲もしくは値のＫＤ をもってヒトＲＮＡを結合できる。
抗原に対する抗体の親和性または結合活性は、いずれの適合する方法を用いてでも実験的に決定できる（例えばベルゾフスキーら「抗体−抗原相互作用」（Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ，ｅｔ ａｌ．，”Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”Ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．Ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９８４））、クビー、ジャニス「免疫学」（Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９２））、およびその中に記載の方法参照）。特定の抗体抗原相互作用の測定された親和性は、異なる条件下（例えば塩濃度、ｐＨ）で測定された場合には変化する可能性がある。従って、親和性およびその他の抗原結合パラメーター（例えばＫＤ 、Ｋａ 、Ｋｄ ）の測定は、好ましくは抗体および抗原の標準化された溶液、および標準化された緩衝液、例えば本明細書中に記載の緩衝液を用いて行われる。
核酸分子
本明細書で提供される情報、例えば配列番号７〜１２のいずれかの５〜５００個のアミノ酸部分、図３〜４のいずれかの部分もしくは図２Ａ〜Ｇもしくは５Ａ〜Ｆのいずれかの部分によりコードされるアミノ酸の少なくとも１種の連続アミノ酸の少なくとも７０〜１００％をコードするヌクレオチド配列、それらの特定の断片、変種またはコンセンサス配列、またはそれらの配列の少なくとも一個を含んでなる寄託された（ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ）ベクターなどを用いて、少なくとも１種のＲＳＶ抗体をコードする本発明の核酸分子が、本明細書中に記載の方法または当該技術分野で公知のようにして得ることができる。
本発明の核酸分子は、ＲＮＡの形、例えばｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡもしくはその他の形、またはＤＮＡの形であることができ、それには、これらに限定はされないが、クローニングにより得られるかもしくは合成して作製されるｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ、またはそれらのあらゆる組み合わせも含まれる。ＤＮＡは、三本鎖、二本鎖もしくは一本鎖、またはそれらのあらゆる組み合わせであることができる。ＤＮＡもしくはＲＮＡの少なくとも１本の鎖のいかなる部分もコーディング鎖であることができ、これはセンス鎖としても知られ、またはこれは非−コーディング鎖であることもでき、これはアンチセンス鎖とも呼ばれる。
本発明の単離された核酸分子は、場合により１種またはそれ以上のイントロン、例えば、これらに限定はされないが、少なくとも１個の重鎖もしくは軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３としての少なくとも１個のＣＤＲの少なくとも１個の特定の部分を場合により有するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含んでなる核酸分子；ＲＳＶ抗体または可変領域のコーディング配列を含んでなる核酸分子（例えば配列番号７〜１２のいずれかの５〜５００個のアミノ酸部分、図３〜４のいずれかの部分もしくは図２Ａ〜Ｇもしくは５Ａ〜Ｆのいずれかの部分によりコードされるもの）；および上記のものとは本質的に異なるがしかし、本明細書中に記載のようにおよび／または当該技術分野で公知のように遺伝子コードの縮退により、それでもまだ少なくとも１種のＲＳＶ抗体をコードするヌクレオチド配列を含んでなる核酸分子を含むことができる。当然ながら、遺伝子コードは当該技術分野では周知である。従って、当該技術分野の熟練者にとって、本発明の特定のＲＳＶ抗体をコードするこのような縮退核酸変種を生成することは日常的である。例えば、上記のオースベル参照、そしてこのような核酸変種は本発明中に含まれる。本発明の単離された核酸分子の限定ではない例には、配列番号７〜１２のいずれかの５〜５００個のアミノ酸部分、図３〜４のいずれかの部分もしくは図２Ａ〜Ｇもしくは５Ａ〜Ｆのいずれかの部分によりコードされるＣＤＲ配列が含まれ、それらはそれぞれＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、ＬＣ ＣＤＲ３、ＨＣ変種領域およびＬＣ変種領域をコードする核酸の非限定例に相当する。
本明細書中に指摘するように、ＲＳＶ抗体をコードする核酸を含んでなる本発明の核酸分子は、抗体断片のアミノ酸配列を自体でコードするもの；抗体全部もしくはその一部分のコーディング配列；抗体、断片もしくは部分のコーディング配列、ならびに追加の配列、例えば上記の追加的なコーディング配列、例えば少なくとも１個のイントロンを持つかもしくは持たない少なくとも１個のシグナルリーダーもしくは融合ペプチドのコーディング配列、スプライシングおよびポリアデニル化シグナル（例えばリボソーム結合およびｍＲＮＡの安定化）を含む非−コーディング５’および３’配列、例えば転写の際に役割を果たす転写された非翻訳配列ｍＲＮＡプロセシングを含み、これらに限定はされない；追加のアミノ酸、例えば追加の機能を提供するものをコードする追加コーディング配列を含むことができるが、これらに限定はされない。従って、抗体をコードする配列は、マーカー配列、例えば抗体断片または部分を含んでなる融合抗体の精製を容易にするペプチドをコードする配列に融合できる。
本明細書中に記載のポリヌクレオチドに選択的ハイブリダイズするポリヌクレオチド
本発明は、本明細書に開示のポリヌクレオチドに選択的ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする単離された核酸を提供する。従って、本態様のポリヌクレオチドは、このようなポリヌクレオチドを含んでなる核酸を単離、検出、および／または定量化するために使用できる。例えば、本発明のポリヌクレオチドは、寄託ライブラリー中の部分または全長クローンを同定、単離または増幅するために使用できる。ある態様では、ポリヌクレオチドは、ヒトまたは哺乳動物核酸ライブラリーよりのｃＤＮＡを単離され、またはこれに相補的なゲノムまたはｃＤＮＡ配列である。
好ましくは、ｃＤＮＡライブラリーは、全長配列の少なくとも８０％、好ましくは全長配列の少なくとも８５％〜９０％、そして最も好ましくは全長配列の少なくとも９５％を含んでなる。ｃＤＮＡライブラリーは、稀な配列の表現を増加するために、標準化できる。低いかまたは温和なストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件は、典型的には、しかし独占的ではなく、相補配列に関して低い配列一致性を有する配列を使用する。温和ないし高いストリンジェンシー条件は、一致性がより高い配列に対して場合により使用できる。低いストリンジェンシー条件は、約７０％の配列一致を有する配列の選択的ハイブリダイゼーションを可能としそしてオルソログまたはパラログ配列を同定するために利用できる。
場合により、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に記載したポリヌクレオチドによりコードされる抗体の少なくとも一部分をコードする。本発明のポリヌクレオチドは、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドに選択的ハイブリダイゼーションするために利用できる核酸配列を包含する。例えば、上記のオースベル、上記のコリガン参照。それぞれ引用することにより本明細書にすべて編入される。
核酸の構築
本発明の単離された核酸は、当該技術分野では周知のように、（ａ）組換え法、（ｂ）合成技術、（ｃ）精製技術、またはそれらの組み合わせを用いて作製できる。
核酸は、好都合には、本発明のポリヌクレオチドに加えて複数の配列を含んでなることができる。例えば、１個またはそれ以上のエンドヌクレアーゼ制限部位を含んでなるマルチクローニング部位は、ポリヌクレオチドの単離を援助するために核酸内に挿入できる。同様に、翻訳可能な配列は本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離を援助するために挿入できる。例えば、ヘキサ−ヒスチジンマーカー配列は、本発明のタンパク質を精製するための好都合な手段を提供する。本発明の核酸は、コーディング配列を除外して、場合により本発明のポリヌクレオチドのクローニングおよび／または発現のためのベクター、アダプター、またはリンカーである。
追加の配列は、クローニングおよび／または発現の際のそれらの機能を最適化するため、ポリヌクレオチドの単離を援助するため、または細胞内へのポリヌクレオチドの導入を改善するためにこのようなクローニングおよび／または発現配列に追加できる。クローニングベクター、発現ベクター、アダプター、およびリンカーの使用は、当該技術分野では周知である（例えば上記のオースベル、または上記のサンブルック参照）。
核酸構築のための組換え方法
本発明の単離された核酸組成物、例えばＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはそれらのいずれの組み合わせも、当該技術分野の専門家には公知の数種のクローニング手段を用いて生物学的起源より得ることができる。ある態様では、ストリンジェント条件下で、本発明のポリヌクレオチドに選択的ハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブが、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡライブラリー内の所望の配列を同定するために使用される。ＲＮＡの単離、およびｃＤＮＡおよびゲノムライブラリーの構築は、当該技術分野の通常の熟練者には周知である（例えば上記のオースベル、または上記のサンブルック参照）。
核酸スクリーニングおよび単離方法
ｃＤＮＡまたはゲノムライブラリーは、本発明のポリヌクレオチドの配列に基づくプローブ、例えば本明細書中に記載のものを用いてスクリーニングできる。同一または異なる生物体内の同種遺伝子を単離するためにゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ配列を用いてハイブリダイゼーションするためにプローブに使用できる。当該技術分野の熟練者は、ハイブリダイゼーションの種々の段階のストリンジェンシーがアッセイで使用でき、そしてハイブリダイゼーションまたは洗浄媒体のいずれかがストリンジェントであることができることを認めるであろう。ハイブリダイゼーションの条件がストリンジェントになるほど、二本鎖形成が起きるためにプローブと標的との間の相補性のさらに高い段階とならなければならない。ストリンジェンシーの段階は、１種またはそれ以上の温度、イオン強度、ｐＨおよび部分変性する溶剤、例えばホルムアミドの存在により制御できる。例えば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、例えば０％〜５０％の範囲内のホルムアミド濃度の操作を介して反応溶液の極性を変化することにより都合よく変化される。検出可能な結合のために必要な相補性（配列一致）の程度は、ハイブリダイゼーション媒体および／または洗浄媒体のストリンジェンシーに従って変化するであろう。相補性の程度は、場合により１００％、または７０〜１００％、またはその間のいずれかの範囲または値である。しかし、プローブおよびプライマー内の小さい配列変化がハイブリダイゼーションおよび／または洗浄媒体のストリンジェンシーを低下により補償できることを理解しなければならない。
ＲＮＡまたはＤＮＡの増幅の方法は、当該技術分野では周知でありそして本明細書中に提出する教示および指図に基づいて、過度な実験を伴うことなく本発明に従って使用できる。
ＤＮＡまたはＲＮＡ増幅の既知方法には、これらに限定はされないが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＯＣＲ）および関連する増幅プロセス（例えばムリスら（Ｍｕｌｌｉｓ，ｅｔ ａｌ．）への米国特許（ＵＳ）第４，６８３，１９５号、第４，６８３，２０２号、第４，８００，１５９号、第４，９６５，１８８号、テイバーら（Ｔａｂｏｒ，ｅｔ ａｌ．）への米国特許（ＵＳ）第４，７９５，６９９号および第４，９２１，７９４号、イニス（Ｉｎｎｉｓ）への米国特許（ＵＳ）第５，１４２，０３３号、ウイルソンら（Ｗｉｌｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．）への米国特許（ＵＳ）第５，１２２，４６４号、イニス（Ｉｎｎｉｓ）への米国特許（ＵＳ）第５，０９１，３１０号、ジレンステンら（Ｇｙｌｌｅｎｓｔｅｎ，ｅｔ ａｌ．）への米国特許（ＵＳ）第５，０６６，５８４号、ジェルファンドら（Ｇｅｌｆａｎｄ，ｅｔ ａｌ．）への米国特許（ＵＳ）第４，８８９，８１８号、シルヴァーら（Ｓｉｌｖｅｒ，ｅｔ ａｌ．）への米国特許（ＵＳ）第４，９９４，３７０号、ビスワス（Ｂｉｓｗａｓ）への米国特許（ＵＳ）第４，７６６，０６７号、リンゴルド（Ｒｉｎｇｏｌｄ）への米国特許（ＵＳ）第４，６５６，１３４号）および二本鎖ＤＮＡ合成のための鋳型として標的配列へアンチセンスＲＮＡを使用するＲＮＡ媒介増幅（マレクら（Ｍａｌｅｋ，ｅｔ ａｌ．）への米国特許（ＵＳ）第５，１３０，２３８号、商標ＮＡＳＢＡ）、これらの引用文献の全内容は、引用することにより本明細書に編入される（上記のオースベルまたは上記のサンブルック参照）。
例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術は、本発明のポリヌクレオチド配列および関連遺伝子をゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡライブラリーから直接増幅するために使用できる。ＰＣＲおよびその他のｉｎ ｖｉｔｒｏ増幅方法は、例えば発現されるべきタンパク質をコードする核酸配列をクローンするため、試料中の所望のｍＲＮＡの存在を検出するためのプローブとして使用する核酸を作製するため、核酸配列決定のため、またはその他の目的のためにも有用であり得る。ｉｎ ｖｉｔｒｏ増幅方法を介して熟練者に指示するために十分な技術の例は、上記のバーガー、上記のサンブルック、および上記のオースベル中、ならびにムリスら（Ｍｕｌｌｉｓ，ｅｔ ａｌ．米国特許（ＵＳ）第４，６８３，２０２号（１９８７））、およびイニスら（Ｉｎｎｉｓ，ｅｔ ａｌ．）「ＰＣＲプロトコール、方法および応用へのガイド」（ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）に見出される。ゲノムＰＣＲ増幅のために市場で入手できるキットは、当該技術分野では公知である。例えばアドヴァンテージ−ＧＣ−ゲノムＰＣＲ（Ａｄｖａｎｔａｇｅ−ＧＣ−Ｇｅｎｏｍｉｃ ＰＣＲ，クロンテク（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）参照。さらに、例えばＴ４遺伝子３２タンパク質（ベーリンガー マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ））は、長いＰＣＲ産物の収率を改善するために使用できる。
核酸構築のための合成方法
本発明の単離された核酸は、既知方法による直接化学合成によってでも調製できる（例えば上記のオースベルら参照）。化学合成は、一般に一本鎖オリゴヌクレオチドを生成し、これは相補配列を用いるハイブリダイゼーションにより、または鋳型として一本鎖を用いるＤＮＡポリメラーゼを用いる重合により二本鎖ＤＮＡに変換できる。当該技術分野の専門家は、ＤＮＡの化学合成が約１００個またはそれ以上の塩基の配列に限定でき、それより長い配列は、より短い配列の連結により得ることができることを認めるであろう。
組換え発現カセット
本発明は、さらに本発明の核酸を含んでなる組換え発現カセットも提供する。本発明の核酸配列、例えば本発明の抗体をコードするｃＤＮＡまたはゲノム配列は、少なくとも１個の所望の宿主細胞内に導入できる組換え発現カセットを構築するために使用できる。組換え発現カセットは、典型的には、意図する宿主細胞内でポリヌクレオチドの転写を実行する転写開始調節配列に操作的に連結した本発明のポリヌクレオチドを含んでなる。異種および同種（すなわち内因性）の双方のプロモーターは、本発明の核酸の直接発現を実行するために使用できる。
ある態様では、プロモーター、エンハンサー、またはその他の要素として働く単離された核酸は、本発明のポリヌクレオチドの発現を上昇または下降調節するように、本発明のポリヌクレオチドの非−異種形の適当な位置（上流、下流またはイントロン内）に導入できる。例えば、内因性プロモーターは、変異、欠失および／または置換によりｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで改変できる。
ベクターおよび宿主細胞
本発明は、本発明の単離された核酸分子を含むベクター、組換えベクターを用いて遺伝子的に操作された宿主細胞、および組換え技術による少なくとも１種のＲＳＶ抗体の産生に関し、これらは当該技術分野では周知である。例えば、上記のサンブルックら、上記のオースベルら参照。それぞれ引用することによりすべて本明細書に編入される。
ポリヌクレオチドは、場合により宿主内の繁殖のための選択可能なマーカーを含むベクターに結合できる。一般に、プラスミドベクターは、沈降物、例えばリン酸カルシウム沈降物中、または荷電脂質との複合体中に導入される。ベクターがウイルスの場合には、適当なパッケージング細胞株を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏでパッケージングされ次いで宿主細胞内に形質導入できる。
ＤＮＡ挿入物は、適当なプロモーターに操作的に連結するべきである。発現構築物は、さらに転写開始、終止のための部位、および転写された領域内には翻訳のためのリボソーム結合部位を含む。構築物により発現された成熟転写物のコーディング部分は、好ましくは開始位置に翻訳開始および翻訳されるべきｍＲＮＡの末端に適切に位置する終止コドン（例えばＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を含み、ここでＵＡＡおよびＵＡＧが哺乳動物または真核細胞発現のためには好ましい。
発現ベクターは、好ましくはしかし場合により、少なくとも１個の検出可能なマーカーを含む。このようなマーカーは、例えば、これらに限定はされないが、メトトレキサート、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ、米国特許（ＵＳ）第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号、第４，６５６，１３４号、第４，９５６，２８８号、第５，１４９，６３６号、第５，１７９，０１７号）、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、マイコフェノール酸（Ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、または真核細胞カルチャーへのグルタミン合成酵素（ＧＳ、米国特許（ＵＳ）第５，１２２，４６４号、第５，７７０，３５９号、第５，８２７，７３９号）抵抗性、および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）およびその他の細菌もしくは原核生物内培養のためのテトラサイクリンもしくはアンピシリン抵抗性遺伝子（上記の特許は引用することによりすべて本明細書に編入される）を含む。上記の宿主細胞のために適当なカルチャー媒体および条件は、当該技術分野で公知である。適当なベクターは熟練者には直ちに明らかになる。宿主細胞内へのベクター構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染またはその他の公知の方法により行うことができる。このような方法は、当該技術分野では記載されており、例えば上記のサンブルック、第１〜４章および第１６〜１８章、上記のオースベル、第１、９、１３、１５、１６章である。
本発明の少なくとも１種の抗体は、変性された形、例えば融合タンパク質として発現されることができ、そして分泌シグナルのみならず追加の異種機能領域を含むことができる。例えば、追加のアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域は、抗体のＮ−末端に付加できて、精製の間、または引き続く処理および貯蔵の間に、宿主細胞内の安定性および存続性を改善する。同様に、ペプチド部分は精製を容易にするために本発明の抗体に追加できる。このような領域は、抗体またはその少なくとも１個の断片の最終調製の前に除去できる。このような方法は、多数の標準的実験マニュアル、例えば上記のサンブルックの第１７．２９〜１７．４２章および第１８．１〜１８．７４章、上記のオースベルの第１６、１７および１８章に記載されている。
当該技術分野の通常の熟練者は、本発明のタンパク質をコードする核酸の発現に利用できる多数の発現系に精通している。
あるいは、本発明の核酸は、本発明の抗体をコードする内因性ＤＮＡを含む宿主細胞内で（操作により）作動させることにより宿主細胞内に発現できる。このような方法は当該技術分野では周知であり、例えば米国特許（ＵＳ）第５，５８０，７３４号、第５，６４１，６７０号、第５，７３３，７４６号および第５，７３３，７６１号中に記載され、これらはすべて引用することにより本明細書に編入される。
抗体、特定の部分またはそれらの変種の産生のために有用な細胞カルチャーの例は哺乳動物細胞である。哺乳動物細胞懸濁液またはバイオリアクターも使用できるにもかかわらず、哺乳動物細胞系は、しばしば細胞の単層の形である。変化していないグリコシル化タンパク質を発現できる多数の適当な宿主細胞株が当該技術分野で開発され、そしてそれにはＣＯＳ−１（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５０）、ＣＯＳ−７（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ−１０）、ＣＨＯ（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ １６１０）およびＢＳＣ−１（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ−２６）細胞株、Ｃｏｓ−７細胞、ＣＨＯ細胞、ｈｅｐＧ２細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、ＳＰ２／０−Ａｇ１４，２９３細胞、ＨｅＬａ細胞などが含まれ、それらは例えばアメリカン タイプ カルチャー コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ）（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）より容易に入手できる。好ましい宿主細胞には、リンパ系起源の細胞、例えば骨髄腫およびリンパ腫細胞が含まれる。特に好ましい宿主細胞は、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣアクセッション（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ）番号ＣＲＬ−１５８０）およびＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞（ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＲＬ−１８５１）である。特に好ましい態様では、組換え細胞はＰ３Ｘ６３Ａｂ８．６５３またはＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞である。
これらの細胞のための発現ベクターは、１個またはそれ以上の下記の発現制御配列、例えば、これらに限定はされないが、複製の起点、プロモーター（例えば後期または初期ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター（米国特許（ＵＳ）第５，１６８，０６２号、第５，３８５，８３９号）、ＨＳＶ ｔｋプロモーター、ｐｇｋ（ホスホグリセリン酸キナーゼ）プロモーター、ＥＦ−１アルファプロモーター（米国特許（ＵＳ）第５，２６６，４９１号）、少なくとも１種のヒト免疫グロブリンプロモーター；エンハンサー、および／またはプロセシング情報部位、例えばリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位（例えばＳＶ４０ラージＴ ＡｇポリＡ付加部位）、および転写ターミネーター配列を含むことができる。例えば上記のオースベルら、上記のサンブルックら参照。本発明の核酸またはタンパク質の産生に有用な他の細胞は公知および／または例えば細胞株およびハイブリドーマのアメリカン タイプ カルチャー コレクションのカタログ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）またはその他の既知または商業的提供先より入手できる。
真核宿主細胞を使用する場合に、ポリアデニル化または転写ターミネーター配列は、典型的にはベクター内に組み込まれる。ターミネーター配列の一例は、ウシ成長ホルモン遺伝子よりのポリアデニル化配列である。転写物の正確なスプライシングのための配列も含むことができる。スプライシング配列の例は、ＳＶ４０からのＶＰ１イントロンである（スプラーグら（Ｓｐａｒａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：７７３−７８１（１９８３））。さらに、宿主細胞内の複製を制御するための遺伝子配列は、当該技術分野で公知のようにベクター内に組み込まれることができる。
抗体の精製
ＲＳＶ抗体は、タンパク質Ａ精製、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈降、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含み、これらに限定はされない周知の方法により組換え細胞より回収および精製できる。高速液体クロマトグラフィー（”ＨＰＬＣ”）も精製のために使用できる。例えばコリガン「免疫学における最近のプロトコール」または「タンパク質科学における最近のプロトコール」（Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｏｒ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ（１９９７−２００１））の例えば第１、４、６、８、９、１０章参照。いずれも引用することにより本明細書にすべて編入される。
本発明の抗体には、例えば酵母、高級植物、昆虫および哺乳動物細胞を含む真核生物宿主よりの天然に精製された産物、化学合成法の産物、および組換え技術により産生された産物が含まれる。組換え産生法で使用された宿主に応じて、本発明の抗体はグリコシル化されてもよく、またはグリコシル化されなくてもよく、ここでグリコシル化が好ましい、このような方法は、多数の実験マニュアル、例えば上記のサンブルック、第１７．３７〜１７．４２章、上記のオースベル第１０、１２、１３、１６、１８および２０章、上記のコリガン「タンパク質科学」第１２〜１４章に記載され、これらはいずれも引用することにより本明細書にすべて編入される。
ＲＳＶタンパク質および抗体
本発明の単離されたタンパク質および抗体は、いずれかの適当なポリヌクレオチドによりコードされ本明細書中に開示または記載された少なくとも１種のタンパク質および／または抗体アミノ酸配列、またはいずれかの少なくとも１種の単離もしくは調製されたタンパク質抗体を含んでなる。好ましくは、少なくとも１種のタンパク質は少なくとも１種のＲＳＶ抗体を有しそして少なくとも１種の抗体はヒトＲＳＶを結合しそして、これにより、少なくとも１個のＲＳＶタンパク質の少なくとも１種の構造的または生物学的活性を部分的または本質的に調節する。
本明細書中に使用される場合に、「ＲＳＶタンパク質」の用語とは、公知またはその他のＲＳＶタンパク質またはそれらの活性部分の活性の少なくとも１種のＲＳＶ依存性活性、例えば５〜１００００％、好ましくは少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％またはそれ以上をアッセイに依存して有する本明細書中に記載のタンパク質を呼ぶ。少なくとも１種のＲＳＶ依存性活性を有するＲＳＶタンパク質の能力は、本明細書中に記載されおよび／または当該技術分野では公知のようにして、好ましくは少なくとも１種の適当なＲＳＶタンパク質またはレセプターアッセイにより評価される。
本明細書中に使用される場合に、「中和性抗体」の用語とは、少なくとも１種のＲＳＶ依存性活性を約５〜１２０％、好ましくは少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％またはそれ以上をアッセイに依存して阻害できる抗体を呼ぶ。ＲＳＶ依存性活性を阻害するＲＳＶ抗体の能力は、本明細書中に記載されおよび／または当該技術分野では公知のようにして、好ましくは少なくとも１種の適当なＲＳＶタンパク質またはレセプターアッセイにより評価される。本発明の抗体は、いかなるクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、など）またはイソタイプであってもよくそしてカッパまたはラムダ軽鎖を含んでなることができる。一つの態様では、ヒト抗体はＩｇＧ重鎖または定義された断片、例えば少なくとも１種のイソタイプ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４を含んでなる。このタイプの抗体は、本明細書中に記載のようにおよび／または当該技術分野で公知のようにして、少なくとも１種のヒト軽鎖（例えばＩｇＧ、ＩｇＡ□およびＩｇＭ（例えばγ１、γ２、γ３、γ４）導入遺伝子を含んでなるトランスジェニックマウスまたはその他のトランスジェニック非−ヒト哺乳動物を使用して調製できる。他の態様では、ヒトＲＳＶヒト抗体はＩｇＧ１重鎖およびＩｇＧ１□軽鎖を含んでなる。
本発明の少なくとも１種の抗体は、少なくとも１種のＲＳＶタンパク質、サブユニット、断片、部分またはそれらのいずれかの組み合わせに特異性の少なくとも１種の特定のエピトープを結合する。少なくとも１種のエピトープは、タンパク質の少なくとも１個の部分を含んでなる少なくとも１個の抗体結合領域を含んでなることができ、そのエピトープは、場合によりタンパク質の少なくとも１種の細胞外、可溶性、親水性、外部または細胞質のタンパク質の部分の少なくとも１つの部分を含んでなることができる。少なくとも１種の特定のエピトープは、少なくとも１〜３個のアミノ酸の少なくとも１つのアミノ酸配列から、いずれかのＲＳＶタンパク質、例えばＦ糖タンパク質の連続アミノ酸のすべての特定の部分までのあらゆる組み合わせを含んでなることができる。
本発明の少なくとも１種の抗体は、好ましくは少なくとも１種のヒト相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）もしくは少なくとも１種の重鎖可変領域の変種および／または少なくとも１種のヒト相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）もしくは少なくとも１種の軽鎖可変領域の変種を含んでなる少なくとも１種の抗原結合領域を含んでなることができる。限定ではない例として、抗体は、少なくとも１種の配列番号１、２または３の少なくとも１種の重鎖ＣＤＲ；少なくとも１種の配列番号４、５および／または６の少なくとも１種の軽鎖ＣＤＲを含んでなることができる。特定の例では、タンパク質および抗体は、相当するＨＣ ＣＤＲ１、２および／または３のアミノ酸配列を有する少なくとも１個の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ（すなわちＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２および／またはＨＣ ＣＤＲ３）の少なくとも一部分を含んでなる抗原結合領域を有することができる。別の特定の態様では、抗体または抗原結合部分または変種は、少なくとも１個の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ（すなわちＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２および／またはＬＣ ＣＤＲ３）の少なくとも一部分を含んでなる少なくとも１個の抗原結合領域を有することができる。好ましい態様では、抗体の３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲまたは抗原結合断片は、本明細書中に記載のように、相当するｍＡｂ Ｈ１Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、Ｈ２Ｌ１、Ｈ２Ｌ２、Ｈ１Ｌ３、Ｈ２Ｌ３の少なくとも１個のＣＤＲのアミノ酸配列を有する。このような抗体は、慣用の技術を用いて抗体の種々の部分（例えばＣＤＲ、フレームワーク）を一緒に化学的に結合することにより、組換えＤＮＡ技術の慣用の技術を用いて抗体をコードする１種（すなわち１個またはそれ以上）の核酸分子を作製および発現することにより、またはその他のあらゆる適合する方法により作製できる。
ＲＳＶ抗体は、規定されたアミノ酸配列を有する重鎖または軽鎖可変領域の少なくとも１個を含んでなることができる。例えば、好ましい態様では、ＲＳＶ抗体は、場合により配列番号７、８および／または９の少なくとも１個のアミノ酸配列を有する少なくとも１個の重鎖可変領域、および／または場合により配列番号９、１０および／または１１の少なくとも１個のアミノ酸配列を有する少なくとも１個の軽鎖可変領域の少なくとも１個を含んでなる。ヒトＲＳＶに結合しそして規定された重鎖または軽鎖可変領域を含んでなる抗体は、適合する方法、例えばファージディスプレイ（カツベ Ｙ．ら（Ｋａｔｓｕｂｅ Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ，１（５）：８６３−８６８（１９８８）））または当該技術分野で公知のようにおよび／または本明細書中の記載のようにしてトランスジェニック動物を使用する方法を用いて作製できる。例えば、機能的に再構成されたヒト免疫グロブリン重鎖導入遺伝子および機能的再構成を受けることができるヒト免疫グロブリン軽鎖座よりのＤＮＡを含んでなる導入遺伝子を含んでなるトランスジェニックマウスは、ヒトＲＳＶまたはその断片を用いて不死化して抗体の産生を誘発することができる。望む場合には、抗体産生細胞を単離できそしてハイブリドーマまたはその他の免疫化した抗体産生細胞は、本明細書中の記載のようにおよび／または当該技術分野で公知のようにして作製できる。あるいは、抗体、特定の部分または変種は、適当な宿主細胞内でコーディング核酸またはその部分を用いて発現できる。
本発明は、本明細書中に記載のアミノ酸配列と本質的に同様である配列中のアミノ酸を含んでなる抗体、抗原結合断片、免疫グロブリン鎖およびＣＤＲにも関する。好ましくは、このような抗体または抗原結合断片およびこのような鎖またはＣＤＲを含んでなる抗体は、ヒトＲＳＶを高い親和性（例えば約１０−９Ｍに等しいかまたはそれ未満のＫＤ ）で結合できる。本明細書中に記載の配列と本質的に同様であるアミノ酸配列は、同類（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ）アミノ酸置換を含んでなる配列、ならびにアミノ酸欠失および／または挿入を含む。同類アミノ酸置換とは、第一のアミノ酸のものと類似する化学的および／または物理的性質（例えば電荷、構造、極性、疎水性／親水性）を有する第二のアミノ酸による第一のアミノ酸の置換を呼ぶ。同類置換は、下記グループ内の一個のアミノ酸の他のアミノ酸による置換を含む：リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）およびヒスチジン（Ｈ）；アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＤおよびＥ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）およびグリシン（Ｇ）；Ｆ、ＷおよびＹ；Ｃ、ＳおよびＴ。
アミノ酸コード
本発明のＲＳＶ抗体を作り上げているアミノ酸はしばしば短縮される。アミノ酸記号は、アミノ酸をその一文字コード、三文字コード、名称、または３個のヌクレオチドコドンによりアミノ酸を記号化して指定でき、これは当該技術分野では良く理解されている（アルバーツ、Ｂ．ら「細胞の分子生物学」第三版（Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｔｈｅ Ｃｅｌｌ，第三版、Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４参照）。
Figure 2005522996
本発明のＲＳＶ抗体は、本明細書中に規定のように、天然の変異またはヒトの操作のいずれかにより、１個またはそれ以上のアミノ酸置換、欠失または付加を含むことができる。
当然ながら、熟練者が作製するであろうアミノ酸置換の数は、上記のものを含め多数の因子に依存する。一般的には、いずれかの与えられたＲＳＶ抗体、断片または変種に対するアミノ酸置換、挿入または欠失の数は、本明細書中に同定するように、４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１個、例えば１〜３０個またはその間のいずれかの範囲または値を越えない。
機能のために必須である本発明のＲＳＶ抗体内のアミノ酸は、当該技術分野では公知の方法、例えば部位指定変異誘発またはアラニン−スキャンニング変異誘発（例えば上記のオースベル、第８、１５章、カニンガムおよびウエルズ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８５（１９８５））により同定できる。後者の操作は、分子のすべての残基で単一アラニン変化変異を導入する。次いで、得られた変異分子を生物学的活性、例えば、これらに限定はされないが、少なくとも１個のＲＳＶ中和活性に関して試験する。抗体結合に重要な部位は、構造分析、例えば結晶化、核磁気共鳴または光親和性標識によっても同定できる（スミスら（Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９４））およびデ フォスら（ｄｅ Ｖｏｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：３０６−３１２（１９９２）））。
本発明のＲＳＶタンパク質は、いずれかの少なくとも１個の公知ＲＳＶ Ｆタンパク質の隣接アミノ酸の３〜１００ないし全部から選択される少なくとも１個の部分、配列または組み合わせを含むことができるが、これらに限定はされない。本発明のＲＳＶ抗体は、配列番号１〜１２のいずれかの５〜５００アミノ酸部分、図３〜４のいずれかの部分もしくは図２Ａ〜Ｇもしくは５Ａ〜Ｆのいずれかの部分によりコードされる少なくとも１個の隣接アミノ酸の５個ないし全部から選択された少なくとも１個の部分、配列または組み合わせを含むことができるが、しかしこれらに限定はされず、好ましくそして場合により相当するＣＤＲの少なくとも１個を含む。
表示した活性の少なくとも１個を増強または維持できる非−限定の変種には、これらに限定はされないが、配列番号７〜１２のいずれかの５〜５００アミノ酸部分の少なくとも１個、図３〜４のいずれかの部分もしくは図２Ａ〜Ｇもしくは５Ａ〜Ｆのいずれかの部分によりコードされる１〜５０アミノ酸よりなる群より選択された少なくとも１個の置換に相当する少なくとも１個の変異をさらに含んでなる上記のポリペプチドのいずれかも含まれる。
ＲＳＶ抗体は、配列番号７〜１２のいずれかの５〜５００アミノ酸部分、図３〜４のいずれかの部分もしくは図２Ａ〜Ｇもしくは５Ａ〜Ｆのいずれかの部分によりコードされる少なくとも１個の隣接アミノ酸、またはそれらのいずれかの変種の７０〜１００％のいずれか１個のポリペプチドを場合により含んでなることができる。
一つの態様では、配列番号７〜１２のいずれかの５〜５００アミノ酸部分、図３〜４のいずれかの部分もしくは図２Ａ〜Ｇもしくは５Ａ〜Ｆのいずれかによりコードされるいずれか１個の相当する鎖のアミノ酸配列に対して、約７０〜１００の一致（例えば７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００またはその間のいずれかの範囲もしくは値）を有する。好ましくは、７０〜１００アミノ酸一致（すなわち、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００またはその間のいずれかの範囲もしくは値）は、当該技術分野で公知のように、適合するコンピューターアルゴリズムを用いて決定される。
例示的な重鎖および軽鎖可変領域配列は、配列番号７〜１２に提供される。本発明のタンパク質および抗体、または特定のそれらの変種は、本発明の抗体より隣接アミノ酸残基のいずれかの数を含んでなる、ここで、数はＲＳＶタンパク質または抗体内の隣接残基の数の１０〜１００％より成る整数の群より選択される。場合により、隣接アミノ酸のサブ配列（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅ）は、少なくとも長さが約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０もしくはそれ以上のアミノ酸長さ、またはそれらの間のいずれかの範囲もししくは値である。さらに、このようなサブ配列の数は、１〜２０よりなる群、例えば少なくとも２、３、４または５より選択されたいずれかの整数であることができる。
熟練者が認めるように、本発明は、本発明の少なくとも１種の生物学的に活性なタンパク質または抗体を含む。生物学的に活性なタンパク質または抗体は、特異的活性を、本来（非−合成）、内因性または関連しそして公知のタンパク質もししくは抗体のものの少なくとも２０％、３０％、もしくは４０％、そして好ましくは少なくとも５０％、６０％、もしくは７０％、そして最も好ましくは少なくとも８０％、９０％、もしくは９５％〜１０００％を有する。酵素活性および基質特異性のアッセイおよび定量測定の方法は、当該技術分野の専門家には周知である。
別の態様では、本発明は、本明細書中に記載のように、一つの部分の共有結合付着により変性された本発明のＲＳＶタンパク質または抗体に関する。このような変性は、改善された薬物動態学的性質（例えば上昇したｉｎ ｖｉｖｏ血清半減期）を有するＲＳＶタンパク質または抗体を産生できる。有機部分は、線状または分枝状親水性ポリマー基、脂肪酸基、または脂肪酸エステル基であることができる。特定の態様では、親水性ポリマー基は、約８００〜約１２０，０００ドルトンの分子量を有することができそしてポリアルカングリコール（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ））、炭水化物ポリマー、アミノ酸ポリマーまたはポリビニルピロリドンであることができ、そして脂肪酸または脂肪酸エステル基は炭素原子約８〜約４０個を含んでなることができる。
本発明の変性タンパク質および抗体は、抗体またはタンパク質に直接または間接的に共有結合している１個またはそれ以上の有機部分を含んでなることができる。本発明のタンパク質または抗体に結合しているそれぞれの有機部分は、独立して親水性ポリマー基、脂肪酸基または脂肪酸エステル基であることができる。本明細書中に使用される場合に、「脂肪酸」という用語は、モノカルボン酸またはジカルボン酸を包含する。用語が本明細書中に使用される場合に、「親水性ポリマー基」とは、オクタン中よりも水中に良く溶解できる有機ポリマーを呼ぶ。例えば、ポリリシンはオクタン中よりも水中に良く溶解する。従って、ポリリシンの共有結合により変性されたＲＳＶ抗体またはタンパク質は、本発明に包含される。本発明の抗体またはタンパク質を変性するために適当な親水性ポリマーは、線状または分枝状であることができそして例えば、ポリアルカングリコール（例えばＰＥＧ、モノメチルポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、ＰＰＧなど）、炭水化物（例えばデキストラン、セルロース、オリゴ糖類、多糖類、など）、親水性アミノ酸のポリマー（例えばポリリシン、ポリアルギニン、ポリアスパラギン酸など）、ポリアルカンオキシド（例えばポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシドなど）およびポリビニルピロリドンを含む。好ましくは、本発明のタンパク質または抗体を変性する親水性ポリマーは、分離した分子の本体として約８００〜約１５０，０００ドルトンの分子量を有する。例えば、ＰＦＧ５０００およびＰＥＧ２０，０００が使用でき、ここで下付き文字はポリマーの平均分子量をドルトンで表したものである。親水性ポリマー基は、１〜約６個のアルキル、脂肪酸または脂肪酸エステル基で置換できる。脂肪酸または脂肪酸エステル基で置換された親水性ポリマーは、適当な方法を用いて調製できる。例えば、アミン基を含んでなるポリマーは、脂肪酸または脂肪酸エステルのカルボキシレートにカプリングでき、そして脂肪酸または脂肪酸エステル上で活性化されたカルボキシレート（例えばＮ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールで活性化）は、ポリマー上のヒドロキシル基にカプリングできる。
本発明の抗体を変性するために適当な脂肪酸および脂肪酸エステルは飽和であることができまたは１個またはそれ以上の不飽和単位を含むことができる。本発明の抗体を変性するために適当な脂肪酸には、例えばｎ−ドデカン酸（Ｃ１２、ラウリン酸）、ｎ−テトラデカン酸（Ｃ１４、ミリスチン酸）、ｎ−オクタデカン酸（Ｃ１８、ステアリン酸）、ｎ−エイコサン酸（Ｃ２０、アラキドン酸）、ｎ−ドコサン酸（Ｃ２２、ベヘン酸）、ｎ−トリアコンタン酸（Ｃ３０）、ｎ−テトラコンタン酸（Ｃ４０）、シス−Δ９−オクタデカン酸（Ｃ１８、オレイン酸）すべてのシス−Δ５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸（Ｃ２０、アラキドン酸、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸などが含まれる。適当な脂肪酸エステルには、線状または分枝状低級アルキル基を含んでなるジカルボン酸のモノエステルが含まれる。低級アルキル基は、１〜約１２個、好ましくは１〜約６個の炭素原子を含んでなることができる。
変性されたヒトタンパク質および抗体は、適当な方法、例えば１種またはそれ以上の変性剤との反応を用いて調製できる。用語が本明細書中で使用される場合に、「変性剤」とは、活性化基を含んでなる適当な有機基（例えば親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）を呼ぶ。「活性化基」とは、適当な条件下で、第二の化学基と反応でき、それにより変性剤と第二の化学基との間に共有結合を形成する化学部分または官能基である。例えば、アミン−活性の活性化基には、親電子性基、例えばトシラート、メシラート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）などが含まれる。チオール類と反応できる活性化基には、例えばマレイミド、ヨードアセチル、アクリロイル、ピリジルジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）などが含まれる。アルデヒド官能基は、アミンまたはヒドラジンを含む分子にカプリングでき、そしてアジド基は三価のリン基と反応してホスホルアミデートまたはホスホルイミド結合を形成できる。分子内に活性化基を導入するために適当な方法は、当該技術分野では公知である（例えばヘルマンソン、Ｇ．Ｔ．「バイオコンジュゲート技術」（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ：ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９６））参照）。活性化基は、有機基（例えば親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）に直接結合するか、またはリンカー部分、例えば１個またはそれ以上の炭素原子がヘテロ原子、例えば酸素、窒素もしくは硫黄で置換されていてもよい二価Ｃ１〜Ｃ１２基を介して結合できる。適当なリンカー部分には、例えばテトラエチレングリコール、−（ＣＨ２）３−、−ＮＨ−（ＣＨ２）６−ＮＨ−、−（ＣＨ２）２−ＮＨ−、および−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ−ＮＨ−が含まれる。リンカー部分を含んでなる変性剤は、例えば、モノ−Ｂｏｃ−アルキルジアミン（例えばモノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、モノ−Ｂｏｃ−ジアミノヘキサン）と脂肪酸とを１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で反応させて遊離アミンと脂肪酸カルボキシレートとの間にアミド結合を形成させて調製できる。Ｂｏｃ保護基は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いる処理による上記の別のカルボキシレートにカプリングできる第一級アミンに暴露して生成物より除去できるか、または無水マレイン酸と反応させそして得られた生成物を環化して脂肪酸の活性化マレインイミド誘導体を生成できる（例えばトムソンら（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，ＷＯ９２／１６２２１参照、その全体を引用することにより本明細書に編入する）。
本発明の変性されたタンパク質または抗体は、タンパク質または抗体を変性剤と反応させて調製できる。例えば、アミン反応性変性剤、例えばＰＥＧのＮＨＳエステルを用いて、非−部位特異性の様式で有機部分を抗体またはタンパク質に結合できる。変性されたＲＳＶタンパク質または抗体は、タンパク質および抗体のジスルフィド結合（例えば鎖内ジスルフィド結合）を還元してでも調製できる。次いで還元されたタンパク質および抗体をチオール反応性変性剤と反応させて本発明の変性された抗体を調製できる。本発明の抗体の特定の部位に結合している有機部分を含んでなる変性されたタンパク質および抗体は、適当な方法、例えば逆タンパク質分解（フィッシュら（Ｆｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，３：１４７−１５３（１９９２））；ワーレンら（Ｗｅｒｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，５：４１１−４１７（１９９４））；クマランら（Ｋｕｍａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．６（１０）：２２３３−２２４１（１９９７））；イトーら（Ｉｔｏｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２４（１）：５９−６８（１９９６））；カペラスら（Ｃａｐｅｌｌａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．５６（４）：４５６−４６３（１９９７）））およびヘルマンソン、Ｇ．Ｔ．「バイオコンジュゲート技術」（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ：ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９６）））中に記載の方法を用いて調製できる。
ＲＳＶ抗体組成物へのイディオタイプ抗体
モノクローナルまたはキメラＲＳＶ抗体に加えて、本発明は、本発明のこのような抗体に特異性のイディオタイプ（Ｉｄ）抗体にも関する。抗−Ｉｄ−抗体は、他の抗体の抗原結合領域と一般的に関連するユニークな決定因子を認識する抗体である。Ｉｄは、Ｉｄ抗体の起源として同じ種および遺伝子タイプの動物（例えばマウス株）を抗体またはそのＣＤＲ含有領域を用いて免疫化して調製できる。免疫化した動物は、免疫化抗体のイディオタイプ決定因子を認識して反応し、そして抗−Ｉｄ抗体を産生する。抗−Ｉｄ抗体は、さらに他の動物内に免疫反応を誘発するための「免疫原」としても使用して、いわゆる抗Ｉｄ−抗体を産生してもよい。
ＲＳＶタンパク質および抗体組成物
本発明は、本来的には存在しない組成物、混合物または形状で提供される本明細書中に記載および／または当該技術分野で公知のような少なくとも１種、少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種、少なくとも５種、少なくとも６種またはそれを越えるＲＳＶ抗体またはそのタンパク質を含んでなる少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質組成物も提供する。このような組成物は、配列番号７〜１２のいずれかの５〜５００アミノ酸部分、図３〜４のいずれかの部分または図２Ａ〜Ｇもしくは５Ａ〜Ｆのいずれかの部分でコードされる隣接アミノ酸の５〜１００％、またはそれらの特定の断片、ドメインもしくは変種より成る群より選択された少なくとも１種または２種のＲＳＶ抗体またはタンパク質アミノ酸配列を含んでなる本来的には存在しない組成物を含んでなる。好ましいＲＳＶ抗体組成物は、配列番号７〜１２のいずれかの５〜５００アミノ酸部分、図３〜４のいずれかの部分または図２Ａ〜Ｇもしくは５Ａ〜Ｆのいずれかの部分でコードされるもの、またはそれらの特定の断片、ドメインもしくは変種の７０〜１００％のＲＳＶ抗体配列の部分を含む少なくとも１種のＣＤＲとして、少なくとも１種または２種の全長、断片、ドメインまたは変種を含む。さらに好ましい組成物は、配列番号７〜１２のいずれかの５〜５００アミノ酸部分、図３〜４のいずれかの部分または図２Ａ〜Ｇもしくは５Ａ〜Ｆのいずれかの部分でコードされるもの、またはそれらの特定の断片、ドメインもしくは変種の７０〜１００％の少なくとも１個の４０〜９９％を含んでなる。このような組成物百分率は、当該技術分野で公知のようにまたは本明細書中に記載のように、重量、体積、濃度、モル濃度、または液体もしくは乾燥溶液、混合物、懸濁液、エマルションもしくはコロイドとしてのモル濃度基準である。
本発明のＲＳＶ抗体またはタンパク質組成物は、このような調節、処置または治療を必要とする細胞、組織、器官、動物または患者への少なくとも１種のＲＳＶ抗体を含んでなることができ、場合によりさらに少なくとも１種のＴＮＦアンタゴニスト（例えば、これらに限定はされないが、ＴＮＦ抗体または断片、可溶性ＴＮＦレセプターまたは断片、それらの融合タンパク質、または小分子ＴＮＦアンタゴニスト）、抗リウマチ薬（例えばメトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、オーラノフィン（ａｕｒａｎｏｆｉｎ）、オーロチオグルコース（ａｕｒｏｔｈｉｏｇｌｕｃｏｓｅ）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）、金ナトリウムチオマレート（ｇｏｌｄ ｓｏｄｉｕｍ ｔｈｉｏｍａｌａｔｅ）、硫酸ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ）、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、スルファザルジン（ｓｕｌｆａｚａｌｚｉｎｅ））、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬（例えばアミノグリコシド）、抗真菌薬、駆虫薬、抗ウイルス薬、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）、セファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）、フルオルキノロン（ｆｌｕｏｒｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、その他の抗菌薬）、疥癬薬（ａｎｔｉｐｓｏｒｉａｔｉｃ）、コルチコステロイド、同化ステロイド（ａｎａｂｏｌｉｃ ｓｔｅｒｏｉｄ）、糖尿病関連薬剤、無機質、栄養薬、サイロイド薬、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、下痢止め薬、鎮咳薬、鎮吐薬、抗潰瘍薬、緩下剤、抗凝血薬、エリスロポイエチン（例えばエポエチンアルファ（ｅｐｏｅｔｉｎ ａｌｆａ））、フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（例えばＧ−ＣＳＦ、ノイポゲン（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ））、サルグラモスチム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（Ｇ−ＣＳＦ、ロイキン（Ｌｅｕｋｉｎｅ））、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬（例えばバシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）、サイクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ））、成長ホルモン、ホルモン代替薬、エストロゲンレセプター調節薬、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキル化薬、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、放射性薬品、抗うつ薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交感神経様作用薬、興奮薬、ドネペジル（ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ）、タクリン（ｔａｃｒｉｎ）、喘息薬、ベータ拮抗薬、吸入ステロイド、ロイコトリエン阻害薬、メチルキサンチン（ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ）、クロモリン（Ｃｒｏｍｏｌｙｎ）、エピネフリン（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）または類似薬、ドルナーゼ
アルファ（ｄｏｒｎａｓｅ ａｌｐｈａ）（プルモジム（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ））、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストより選択された少なくとも１種を含んでなる組成物または薬剤組成物のいずれかの適当でそして有効量の少なくとも１種を含んでなることができる。このようなサイトカインの非限定的な例は、これらに限定はされないが、ＩＬ−１〜ＩＬ−２３のいずれかを含む。適当な投与量は、当該技術分野で周知である。例えば、ウエルズら編集「薬物療法ハンドブック」第二版（Ｗｅｌｌｓ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２ｎｄ．Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ（２０００）；「ＰＤＲファルマコペイア」（ＰＤＲ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｏｃｋｅｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ ２０００，Ｄｅｌｕｘｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｌｏｍａ Ｌｉｎｄａ，ＣＡ（２０００））、これらの引用文献それぞれは、引用することによりすべて本明細書に編入される。
このような組成物は、本発明の少なくとも１種の抗体またはタンパク質と関連、結合、同時製剤または一緒に投与されるトキシン分子も含むことができる。トキシンは、場合により病原体細胞または組織を選択的に殺すように作用することができる。病原性細胞は、ガンまたはその他の細胞であることができる。このようなトキシンは、これらに限定はされないが、トキシンの少なくとも１種の機能性細胞毒性ドメイン、例えばリシン、ジフテリアトキシン、毒物トキシン（ｖｅｎｏｍ ｔｏｘｉｎ）、細菌トキシンの少なくとも１種より選択されたものを含んでなる精製または組換えられたトキシンまたはトキシン断片であることができる。トキシンという用語は、死亡をもたらすことができるトキシンショックを含むヒトおよびその他の哺乳動物内にいずれかの病状を起こすことができるいずれかの天然に存在、変異または組換え細菌またはウイルスにより産生されるエンドトキシンおよびエキソトキシンの双方も含む。このようなトキシンには、これらに限定はされないが、エンテロトキシン性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）非耐熱性エンテロトキシン（ＬＴ）、熱安定性エンテロトキシン（ＳＴ）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）細胞毒、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）エンテロトキシン、毒性ショック症候群トキシン−１（ＴＳＳＴ−１）、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）、Ｂ（ＳＥＢ）もしくはＣ（ＳＥＣ）、連鎖球菌エンテロトキシンなどが含まれてもよい。このような細菌には、これらに限定はされないが、エンテロトキシン産生性大腸菌（ＥＴＥＣ）、腸管出血性大腸菌（例えば血清型０１５７：Ｈ７の株）、ブドウ球菌種（例えば黄色ブドウ球菌、スタフィロコッカス・ピオゲネス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ））、赤痢菌種（例えば志賀赤痢菌、フレクスナー赤痢菌、ボイド赤痢菌、ソンネ赤痢菌）、サルモネラ種（例えばチフス菌、豚コレラ菌、腸炎菌）、クロストリジウム種（例えばウェルシュ菌、クロストリジウム・ディフィシレ（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｉｃｉｌｅ）、ボツリヌス菌）、カンフロバクター（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ）種（例えばカンフロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、カンフロバクターフェツス（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｔｕｓ）、ヘリオバクター（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ）種（例えばピロリ菌（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）種（例えばアエロモナス・ソブリア（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｏｂｒｉａ））、アエロモナス・ヒドロフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、アエロモナス・カヴィエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅ））、プレイソモナス・シゲロイデス（Ｐｌｅｉｓｏｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）、イェルシナ・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏｓ）種（例えばコレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏｓ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、腸炎ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏｓ ｐａｒａｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、およびストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）の種の株を含む。例えばスタイン編集「内科学」（Ｓｔｅｉｎ ｅｄ．ＩＮＴＥＲＮＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ、３ｒｄ ｅｄ．，１〜１３ページ、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ
Ｃｏ．，Ｂｏｓｔｏｎ（１９９０））、エヴァンスら編集「ヒトの細菌感染、疫学およびコントロール」（Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎｓ：Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，２ｄ．Ｅｄ、２３９−２５４ページ、Ｐｌｅｎｕｍ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９１））；マンデルら「感染疾患の原理と実際」（Ｍａｎｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，３ｄ Ｅｄ．．Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９０））；バーコフら編集「メルク・マニュアル」（Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ，ｅｄｓ．，Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，１９９２）；ウッドら（Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７６：１２１−１３４（１９９１））；マラックら（Ｍａｒｒａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４８：７０５−７１１（１９９０））参照。それらの引用文献の内容は、引用することによりすべて本明細書に編入される。
本発明のＲＳＶ抗体またはタンパク質化合物、組成物または組み合わせは、さらに少なくとも１種のいずれかの適当な助剤、例えば、これらに限定はされないが、希釈剤、結合剤、安定剤、緩衝剤、塩類、親油性溶剤、保存剤、アジュバントなどを含んでなることができる。製薬学的に許容できる助剤が好ましい。このような滅菌溶液を調整する非限定的例、およびその方法は、当該技術分野では周知であり、例えば、これらに限定はされないが、ジェンナロ編集「レミントンの薬剤科学」（Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）１９９０）参照。製薬学的に許容できるキャリヤは、当該技術分野で周知または本明細書中に記載のようにＲＳＶ抗体またはタンパク質組成物の投与の様式、溶解度および／または安定性のために適するように慣用的に選択できる。
本組成物中で有用な薬剤賦形剤および添加剤には、これらに限定はされないが、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、および炭水化物（例えば単糖類、二、三、四、およびオリゴ糖類または糖ポリマーを含む糖類、誘導（ｄｅｒｉｖｅｒｔｉｚｓｄ）糖類、例えばアルジトール（ａｌｄｉｔｏｌ）、アルドン酸（ａｌｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、エステル化糖類など；および多糖類または糖ポリマー）が含まれ、これらは単独または組み合わせて存在することができ、単独または組み合わせで１〜９９．９９％（重量または体積基準）を含んでなる。例示的であるが非限定的なタンパク質賦形剤には、血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼインなどが含まれる。緩衝能力としても機能できる代表的なアミノ酸／抗体成分には、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテームなどが含まれる。１種の好ましいアミノ酸はグリシンである。
本発明に使用するために適する炭水化物賦形剤には、例えば単糖類、例えば果糖、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなど；二糖類、例えばラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなど；多糖類、例えばラッフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなど；およびアルジトール類、例えばマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グリシトール）、ミオシトールなどが含まれる。本発明に使用するために好ましい炭水化物賦形剤は、マンニトール、トレハロース、およびラフィノースである。
ＲＳＶ抗体またはタンパク質組成物は、緩衝剤またはｐＨ調整剤を含んでもよく、典型的には、緩衝剤は有機酸または塩基より調製された塩である。代表的な緩衝剤には、有機酸塩、例えばクエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、またはフタル酸の塩；トリス（Ｔｒｉｓ）、塩酸トロメタミン、またはリン酸緩衝剤が含まれる。本組成物内に使用のために好ましい緩衝剤は、有機酸塩、例えばクエン酸塩である。
さらに、本発明のＲＳＶ抗体またはタンパク質は、ポリマー状賦形剤／添加剤、例えばポリビニルピロリドン、フィコール（ｆｉｃｏｌｌ、ポリマー状糖）、デキストレート（例えばシクロデキストリン、例えば２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、調味料、抗菌剤、甘味料、抗酸化剤、静電防止剤、界面活性剤（例えばポリソルベート、例えば「ＴＷＥＥＮ２０」および「ＴＷＥＥＮ８０」）、脂質（例えばリン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えばコレステロール）およびキレート剤（例えばＥＤＴＡ）を含むことができる。
本発明に従うＲＳＶ抗体またはタンパク質組成物中に使用するために適するそれらおよび追加の公知の薬剤賦形剤および／または添加剤は、当該技術分野では公知であり、例えば「レミントン：薬剤の科学および実際」（”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９ｔｈ ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５））および「医師の机上参考書」（”Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”，５２ｔｈ ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ（１９９８））に表示され、それらの開示は、引用することによりすべて本明細書に編入される。好ましいキャリヤまたは賦形剤は、炭水化物（例えば糖類およびアルディトール）および緩衝剤（例えばクエン酸塩）またはポリマー状剤である。
製剤
上記のように、本発明は安定な製剤を提供し、それは好ましくは生理食塩水または選択された塩類を含むリン酸緩衝液、ならびに保存剤を含む保存性溶液および製剤、ならびに薬剤または獣医薬への使用に適する多用途保存製剤であり、少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質を製薬学的に許容できる製剤中に含んでなる。保存される製剤は、少なくとも１種の公知の保存剤または場合により少なくとも１種のフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば６水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール（ｔｈｉｍｅｒｏｓａｌ）、またはそれらの混合物を水性希釈剤中に含むものよりなる群より選択されたものを含む。あらゆる適当な濃度または混合物が当該技術分野では公知のようにして使用でき、例えば０．００１〜５％、またはその間のいずれかの範囲または値、例えば、これらに限定はされないが、０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、またはその間のいずれかの範囲または値である。非限定的な例では、保存剤はなく、０．１〜２％ｍ−クレゾール（例えば０．２、０．３、０．４、０．５、０．９、１．０％）、０．１〜３％ベンジルアルコール（例えば０．５、０．９、１．１、１．５、１．９、２．０、２．５％）、０．００１〜０．５％チメロサール（例えば０．００５、０．０１）、０．００１〜２．０％フェノール（例えば０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５〜１．０％アルキルパラベン（類）（例えば０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、１．０％）などを含む。
上記のように、本発明は、包装材料、および指定された緩衝剤および／または保存剤を用い、場合により水性希釈剤中の少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質の溶液を含んでなる少なくとも１個の小瓶を含んでなる製品を提供し、ここで上記の包装材料はこのような溶液が１、２、３、４、５、６、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４０、４８、５４、６０、６６、７２時間またはそれ以上の期間維持できることを示したラベルを含んでなる。本発明は、さらに、包装材料、少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質を凍結乾燥して含んでなる第一の小瓶、指定された緩衝液または保存剤の水性希釈液を含んでなる第二の小瓶を含んでなる製品を含んでなり、ここで該包装材料は、水性希釈剤中の少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質を再構成するために、２４時間またはそれ以上の期間維持できる溶液を形成することを患者に指示するラベルを含んでなる。
本発明に従って使用される少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質は、哺乳動物細胞もしくはトランスジェニック調製よりのものを含み、組換え手段により産生されることができ、または本明細書中に記載されているかまたは当該技術分野では公知のように、他の生物学的起源より精製できる。
本発明の少なくとも１種の製品中の少なくとも１種のＲＳＶ抗体の範囲には、湿潤／乾燥系内の場合には約１．０ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの濃度を再構成して生成する量を含み、そしてより高いかまたはより低い濃度でも操作可能でありそしてそれでも意図する送達ビヒクルに依存し、例えば溶液製剤は経皮パッチ、肺、経粘膜、または浸透圧またはマイクロポンプ法とは異なる。
本発明の少なくとも１種の製品中の少なくとも１種のＲＳＶ抗体の範囲には、湿潤／乾燥系内で約１．０μｇ／ｍｌ〜約１０００ｍｇ／ｍｌの濃度を再構成して生成する量を含み、ここでより高いかまたはより低い濃度でも操作可能でありそしてそれでも意図する送達ビヒクルに依存し、例えば溶液製剤は経皮パッチ、肺、経粘膜、または浸透圧またはマイクロポンプ法とは異なる。
好ましくは、水性希釈剤は、場合により製薬学的に許容できる保存剤をさらに含んでなる。好ましいは保存剤には、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはそれらの混合物より成る群から選択されたものが含まれる。製剤中に使用される保存剤の濃度は、微生物効果を生むために十分な濃度である。このような濃度は選択された保存剤に依存しそして熟練者により容易に決定される。
他の賦形剤、例えば等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、保存増強剤は、場合によりそして好ましくは希釈剤に加えられることができる。等張剤、例えばグリセリンは、公知濃度で通常加えられる。生理学的に許容される緩衝剤は、好ましくは改善されたｐＨ制御を得るために使用される。製剤は、広範囲のｐＨ、例えば約ｐＨ４〜約ｐＨ１０、そして好ましい約ｐＨ５〜約ｐＨ９の範囲、そして最も好ましい約ｐＨ６．０〜約ｐＨ８．０の範囲をカバーできる。好ましくは、本発明の製剤は、約６．８〜約７．８の間のｐＨを有する。好ましい緩衝剤は、リン酸塩緩衝剤、最も好ましくはリン酸ナトリウム、とくにはリン酸緩衝された生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。
他の添加剤、例えば製薬学的に許容できる可溶化剤、例えばツウイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウリン酸塩）、ツイーン４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミチン酸塩）、ツイーン８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレイン酸塩）、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ６８（ポリオキシエチレン ポリオキシプロピレン ブロックコポリマー）、または非−イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）２０もしくは８０またはポロキサマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）１８４または１８８、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）（Ｒ） ポリオール、その他のブロックコポリマー、およびキレート化剤、例えばＥＤＴＡおよびＥＧＴＡは、場合により凝集を低下させるために製剤または組成物に加えることができる。それらの添加剤はポンプまたはプラスチックコンテナーが製剤を投与するために使用される場合に特に有用である。製薬学的に許容できる界面活性剤の存在は、タンパク質が凝集する傾向を低下させる。
本発明の製剤は、少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質と、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよっびチメロサール、またはそれらの混合物より成る群から選択された保存剤とを水性希釈剤中で混合することを含んでなるプロセスにより調製できる。少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質と保存剤との水性希釈剤中での混合は、慣用の溶解および混合操作を用いて実行される。例えば、適当な製剤を調製するために、緩衝溶液中で少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質の計量された量を、タンパク質および保存剤を所望の濃度で提供するために十分な量の緩衝溶液中の所望の保存剤とを一緒にする。この方法の変更は、当該技術分野の通常の専門家により認められるであろう。例えば、成分を添加する順序、追加の添加剤を使用するかどうか、製剤が調製される温度およびｐＨ、は、すべて使用される濃度および投与の手段について最適化できる因子である。
特許請求する製剤は、患者に、透明な溶液としてまたは水性希釈相中で、水、保存剤および／または賦形剤、好ましくはリン酸緩衝剤および／または生理食塩水および選択された塩を含む第二の小瓶を用いて再構成され凍結乾燥された少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質の一つの小瓶と含んでなる二重小瓶（ｄｕａｌ ｖｉａｌ）として提供できる。単一溶液小瓶または再構成を要する二重小瓶のいずれも、複数回数に再使用できそして患者処置の単一または複数サイクル処置に十分であり従って現在利用できるものよりはさらに好都合な処置手段を提供できる。
この現在の特許請求する製品は、即時または２４時間またはそれ以上の期間に渡って投与するために有用である。従って、この現在特許請求する製品は、患者に著しい利益を与える。本発明の製剤は、場合により約２〜約４０℃の温度で安全に貯蔵できそして長期間にわたってタンパク質の生物学的活性を保持し、従って、溶液が６、１２、１８、２４、３６、４８、７３、または９６時間またはそれ以上の期間にわたって維持および／または使用できると記載した包装ラベルを可能とする。保存性希釈剤を用いると、例えばこのラベルは１〜１２カ月、半年、１年、１．５年および／または２年までを含むことができる。
本発明における少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質の溶液は、水性希釈剤中に少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質を混合することを含んでなるプロセスにより調製できる。混合は、慣用の溶解および混合操作を用いて実行される。適当な希釈剤を調製するために、例えば、水または緩衝液中の少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質の測定された量を、所望の濃度でタンパク質および場合により保存剤または緩衝剤を提供するために十分な量と組み合わせる。この方法の変更は、当該技術分野の通常の専門家により認められるであろう。例えば、成分を加える順序、追加の添加剤を使用するかどうか、製剤が調製される温度およびｐＨは、すべて使用される濃度および投与の手段について最適化できる因子である。
特許請求する製品は、患者に、透明な溶液としてまた水性希釈液を含む第二の小瓶を用いて再構成される凍結乾燥された少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質の一つの小瓶を含んでなる二重小瓶として提供できる。単一溶液小瓶または再構成を要する二重小瓶のいずれでも、複数回再使用できそして患者処置の単一または複数サイクルに十分であり従って現在利用できるものよりはさらに好都合な処置手段を提供できる。
特許請求する製品は、薬局、診療所、またはその他のこのような病院または施設に、透明溶液または水性希釈剤を含む第二の小瓶を用いて再構成される凍結乾燥した少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質の小瓶を含んでなる二重小瓶を提供することにより患者に間接的に提供されることができる。この場合の透明溶液は、その量が１リットルまたはそれ以上であることができ、少なくとも１種の抗体またはタンパク質溶液の小さい部分が小瓶に移動するために一回または数回で小分けできそして薬局または診療所によりそれらの顧客および／または患者に提供されることができる大きい貯槽を提供する。
これらの単一小瓶システムを含んでなる承認されたデバイスには、溶液の送達のための以下のようなペン−注入デバイス、例えばＢＤペン、ＢＤオートジェクター（Ａｕｔｏｊｅｃｔｏｒ）（Ｒ）、ヒュマジェクト（Ｈｕｍａｊｅｃｔ）（Ｒ）、ノヴォペン（ＮｏｖｏＰｅｎ）（Ｒ）、ＢＤ（Ｒ）ペン（Ｐｅｎ）、オートペン（ＡｕｔｏＰｅｎ）（Ｒ）、およびオプティペン（ＯｐｔｉＰｅｎ）（Ｒ）、ジェノトロピンペン（ＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎＰｅｎ）（Ｒ）、ジェノトロノルムペン（ＧｅｎｏｔｒｏｎｏｒｍＰｅｎ）（Ｒ）、ヒュマトロペン（ＨｕｍａｔｒｏＰｅｎ）（Ｒ）、レコ−ペン（Ｒｅｃｏ−Ｐｅｎ）（Ｒ）、ロフェロンペン（ＲｏｆｅｒｏｎＰｅｎ）（Ｒ）、バイオジェクター（Ｂｉｏｊｅｃｔｏｒ）（Ｒ）、アイジェクト（ｉｊｅｃｔ）（Ｒ）、Ｊ−チップ ニードルフリー−インジェクター（Ｊ−ｔｉｐ Ｎｅｅｄｌｅ−Ｆｒｅｅ Ｉｎｊｅｃｔｏｒ）（Ｒ）、イントラジェクト（Ｉｎｔｒａｊｅｃｔ）（Ｒ）、メディ−ジェクト（Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ）（Ｒ）、が含まれ、例えばベクトン−ディッケンソン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ， Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ｗｗｗ．ｂｅｃｔｏｎｄｉｃｋｅｎｓｏｎ．ｃｏｍ）、ディセトロニック（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ，Ｂｕｒｇｄｏｒｆ，スイス，ｗｗｗ．ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ．ｃｏｍ）、バイオジェット（Ｂｉｏｊｅｔ，Ｐｏｒｔｌａｎｄ，Ｏｒｅｇｏｎ，ｗｗｗ．ｂｉｏｊｅｔ．ｃｏｍ）、ナショナル メディカル プロダクツ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ウエストン メディカル（Ｗｅｓｔｓｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｐｅｔｅｒｂｏｒｏｕｇｈ，ＵＫ，ｗｗｗ．ｗｅｓｔｏｎ−ｍｅｄｉｃａｌ，ｃｏｍ．）メディジェクト社（Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ Ｃｏｒｐ．，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ｗｗｗ．ｍｅｄｉｊｅｃｔ．ｃｏｍ）、により製作または開発されている。二重小瓶のシステムを含んでなる承認されたデバイスには、再構成溶液の送達のためカートリッジ中の凍結乾燥された薬剤を再構成のためのそれらのペンインジェクターシステムが含まれ、例えばヒュマトロペン（ＨｕｍａｔｒｏＰｅｎ）（Ｒ）である。
ここで特許請求する製品には、包装材料も含まれる。包装材料は、統制官庁により要求される情報に加えて、製品が使用できる条件を提供する。本発明の包装材料は、二個の小瓶、湿潤／乾燥、製品のために水性希釈液中で少なくとも１種のＲＳＶ抗体もしくはタンパク質を再構成し、溶液を調製しそして２〜２４時間、またはそれ以上の期間にわたって溶液を使用するための患者への指示を提供する。単一小瓶の溶液製品に対しては、ラベルは、このような製品が２〜２４時間、またはそれ以上の期間にわたって使用できることを示す。ここに特許請求する製品は、ヒト医薬製品使用のために有用である。
本発明の製剤は、少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質と選択された緩衝液、好ましくは生理食塩水または選択された塩を含むリン酸緩衝液とを混合することを含んでなるプロセスにより調製できる。水性希釈液中での少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質と緩衝液との混合は、慣用の溶解および混合操作を用いて実行される。適当な製剤を調製するために、例えば、水中または緩衝液中の少なくとも１種の抗体またはタンパク質の測定された量を、所望の濃度でタンパク質と緩衝液とを提供するために十分な量の水中で所望の緩衝剤と混和する。この方法の変更は、当該技術分野の通常の専門家により認められるであろう。例えば、成分を加える順序、追加の添加剤を使用するかどうか、製剤を調製する温度およびｐＨは、すべて使用される濃度および投与手段に関して最適化できる因子である。
特許請求する安定または保存された製剤は、透明溶液としてまたは水性希釈液中に保存剤もしくは緩衝剤と賦形剤とを含む第二の小瓶を用いて再構成された凍結乾燥の少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質の小瓶を含んでなる二重小瓶として患者に提供できる。単一溶液小瓶でもまたは再構成を要する二重小瓶のいずれでも複数回再使用できそして患者処置の単一または複数サイクルに十分であり、従って現在利用できるものよりもさらに好都合な処置方法を提供できる。
本明細書中に記載した安定または保存された製剤または溶液中のいずれかである少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質は、本発明に従って、ＳＣまたはＩＭ注入、経皮、肺、経粘膜、埋込、浸透圧ポンプ、カートリッジ、マイクロポンプ、または熟練者により承認されたその他の手段を含む各種の送達方法を介して患者に投与でき、これらは当該技術分野では周知である。
治療への適用
本発明は、当該技術分野で既知のようにしてまたは本明細書中に記載のようにして、本発明の少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質を用いて、細胞、組織、器官、動物または患者中の少なくとも１種のＲＳＶ関連疾患を調節または処理するための方法を提供する。
本発明は、下呼吸器感染、肺炎、気管気管支炎、細気管支炎、気管支炎を含み、これらに限定はされない細胞、器官、動物、もしくは患者における少なくとも１種の成人または小児のＲＳＶ関連疾患、およびあらゆる関連感染または炎症性疾患、例えば、これらに限定はされないが、少なくとも１種、または関連する炎症の少なくとも１種、全身炎症反応症候群、敗血症症候群、グラム陽性菌性敗血症、グラム陰性菌性敗血症、カルチャー陰性敗血症、真菌性敗血症、白血球減少熱病、尿性敗血症、髄膜炎菌菌血症、成人呼吸困難症候群、アレルギー性鼻炎、通年性鼻炎、喘息、全身性過敏症、レセプター過敏性反応、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、過敏性肺臓炎、細胞内器官による肉腫、薬物感受性、カヘキシー、嚢胞性繊維症、新生児慢性肺疾患；急性もしくは慢性細菌感染症、細菌、ウイルスおよび真菌感染症を含む急性もしくは慢性の寄生虫もしくは感染プロセス、ＨＩＶ感染症、ＨＩＶ神経疾患、髄膜炎、肝炎（Ａ、ＢまたはＣ、など）、敗血性関節炎、腹膜炎、肺炎、喉頭蓋炎、大腸菌０１５７：ｈ７、溶血尿毒症症候群、血栓崩壊性血小板減少性紫斑症、マラリア、デング出血性熱病、リーシュマニア症、らい病、トキシックショック症候群、連鎖球菌筋炎、ガス壊疽、ヒト型結核症、細胞内鳥型結核菌、ニューモシスティス カリーニー肺炎、骨盤炎症性疾患、睾丸炎、精巣上体炎、レジオネラ菌、ライム病、インフルエンザａ、エプスタイン−バー−ウイルス、ウイルス関連血球貪食症候群、バイタル（ｖｉｔａｌ）性脳炎、無菌性髄膜炎、などの少なくとも１種を含み、これらに限定はされないが、細胞、組織、器官、動物もしくは患者内の少なくとも１種の感染疾患を調節または処置するための方法も提供する。このような方法は、場合により、少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質を含んでなる組成物もしくは薬剤組成物の有効量をこのような調節、処置もしくは治療を必要とする細胞、組織、器官、動物もしくは患者に投与することを含んでなる。
本発明のいずれの方法も、少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質を含んでなる組成物もしくは薬剤組成物の有効量をこのような調節、処置もしくは治療を必要とする細胞、組織、器官、動物もしくは患者に投与することを含んでなることができる。このような方法は、場合によりさらにこのような疾患を処置するための同時投与または併用療法を含んでなることができ、ここで、上記の少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質、特定の部分もしくはそれらの変種の投与は、さらに少なくとも１種のＴＮＦアンタゴニスト（例えば、これらに限定はされないが、ＴＮＦ抗体または断片、可溶性ＴＮＦレセプターもしくは断片、それらの融合タンパク質、または小分子ＴＮＦアンタゴニスト）、抗リウマチ薬（例えばメトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、オーラノフィン（ａｕｒａｎｏｆｉｎ）、オーロチオグルコース（ａｕｒｏｔｈｉｏｇｌｕｃｏｓｅ）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）、金ナトリウムチオマレート（ｇｏｌｄ ｓｏｄｉｕｍ ｔｈｉｏｍａｌａｔｅ）、硫酸ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ）、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、スルファザルジン（ｓｕｌｆａｚａｌｚｉｎｅ））、筋弛緩薬、麻薬、非−ステロイド炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬（例えばアミノグリコシド）、抗真菌薬、駆虫薬、抗ウイルス薬、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）、セファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）、フルオルキノロン（ｆｌｕｏｒｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、その他の抗菌薬）、疥癬薬（ａｎｔｉｐｓｏｒｉａｔｉｃ）、コルチコステロイド、同化ステロイド（ａｎａｂｏｌｉｃ ｓｔｅｒｏｉｄ）、糖尿病関連薬剤、無機質、栄養薬、サイロイド薬、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、下痢止め薬、鎮咳薬、鎮吐薬、抗潰瘍薬、緩下剤、抗凝血薬、エリスロポイエチン（例えばエポエチンアルファ（ｅｐｏｅｔｉｎ ａｌｆａ））、フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（例えばＧ−ＣＳＦ、ノイポゲン（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ））、サルグラモスチム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（ＧＭ−ＣＳＦ、ロイキン（Ｌｅｕｋｉｎｅ））、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬（例えばバシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ、サイクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、デクリズマブ（ｄｅｃｌｉｚｕｍａｂ））、成長ホルモン、ホルモン代替薬、エストロゲンレセプター調節薬、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキル化薬、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、放射性薬品、抗うつ薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交感神経様作用薬、興奮薬、ドネペジル（ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ）、タクリン（ｔａｃｒｉｎ）、喘息薬、ベータ作動薬、吸入ステロイド、ロイコトリエン阻害薬、メチルキサンチン（ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｉｎｅ）、クロモリン（ｃｒｏｍｏｌｙｎ）、エピネフリン（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）または類似薬、ドルナーゼ アルファ（ｄｏｒｎａｓｅ ａｌｐｈａ）（プルモジム（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ））、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストより選択された少なくとも１種をその前、同時、および／またはその後に投与することを含んでなる。適当な投与量は、当該技術分野では周知である。例えばウエルズら編集「薬物療法ハンドブック」第二版（Ｗｅｌｌｓ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２ｎｄ．Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ（２０００）；「ＰＤＲファルマコペイア（ＰＤＲ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｏｃｋｅｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ ２０００，Ｄｅｌｕｘｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ， Ｌｏｍａ Ｌｉｎｄａ，ＣＡ（２０００））、これらの引用文献それぞれは、引用することにより本明細書に編入される。
本発明の組成物、併用治療、同時投与、デバイスおよび／または方法のために適するＴＮＦアンタゴニスト（さらに本発明の少なくとも１種のＲＳＶ抗体、特定の部分およびそれらの変種を含んでなる）には、これらに限定はされないが、ＴＮＦ抗体、それらの抗原結合断片、およびＴＮＦを特異的に結合するレセプター分子、ＴＮＦ合成、ＴＮＦ放出または標的細胞へのその作用を防止および／または阻害する化合物、例えばサリドマイド（ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、デニダプ（ｔｅｎｉｄａｐ）、ホスホジエステラーゼ阻害薬（例えばペントキシフィリン（ｐｅｎｔｏｘｉｆｙｌｌｉｎｅ）およびロリプラム（ｒｏｌｉｐｒａｍ））、Ａ２ｂアデノシンレセプターアゴニストおよびＡ２ｂアデノシンレセプターエンハンサー；ＴＮＦレセプター信号伝達を防止および／または阻害する化合物、例えばマイトジェン（ｍｉｔｏｇｅｎ）活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼ阻害剤；膜ＴＮＦ切断を遮断および／または阻害する化合物、例えばメタロプロテイナーゼ阻害剤；ＴＮＦ活性を遮断および／または阻害する化合物、例えばアンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（例えばカプトプリル（ｃａｐｔｏｐｒｉｌ））；およびＴＮＦ産生および／または合成を遮断および／または阻害する化合物、例えばＭＡＰキナーゼ阻害剤が含まれる。
本明細書中に使用する場合に、「腫瘍壊死因子抗体」、「ＴＮＦ抗体」、「ＴＮＦα抗体」、または断片などは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｓｉｔｕおよび／または好ましくはｉｎ ｖｉｖｏにおいてＴＮＦα活性を低下、遮断、阻害、阻止または干渉する。例えば、本発明の適当なＴＮＦヒト抗体はＴＮＦαを結合できそしてＴＮＦ抗体、その抗原結合断片、およびＴＮＦαに特異的に結合するそれらの特定の変異体またはドメインを含む。適当なＴＮＦ抗体または断片も、ＴＮＦ ＲＮＡ、ＤＮＡまたはタンパク質合成、ＴＮＦ放出、ＴＮＦレセプター信号伝達、膜ＴＮＦ切断、ＴＮＦ活性、ＴＮＦ産生および／または合成を低下、遮断、阻止、干渉、防止および／または阻害もできる。
キメラ抗体ｃＡ２は、Ａ２と呼ばれるマウス ヒトＴＮＦαＩｇＧ１抗体を中和する高親和性の抗原結合可変領域およびヒトＩｇＧ１、カッパ免疫グロブリンの定常領域よりなる。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、異質遺伝子型抗体エフェクター機能を改善し、循環血清半減期を増加しそして抗体の免疫原性を低下する。キメラ抗体ｃＡ２の結合活性およびエピトープ特異性は、マウス抗体Ａ２の可変領域より誘導される。特定の態様では、マウス（ｍｕｒｉｎｅ）抗体Ａ２の可変領域をコードする核酸の好ましい起源は、Ａ２ハイブリドーマ細胞株である。
キメラＡ２（ｃＡ２）は、投与量依存の様式で天然および組換えヒトＴＮＦαの双方の細胞毒効果を中和する。キメラ抗体ｃＡ２および組換えヒトＴＮＦαの結合アッセイより、キメラ抗体ｃＡ２の親和性定数が１．０４ｘ１０１０Ｍ−１と算出された。競合阻害によりモノクローナル抗体特異性および親和性を決定するための好ましい方法は、ハーロウら「抗体、実験マニュアル」（Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８）；コリガンら編集「免疫学における最近のプロトコール」（Ｃｏｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９２−２０００））；コズバーら（Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，４：７２−７９（１９８３））；オースベルら「分子生物学における最近のプロトコール」（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７−２０００））；およびムラー（Ｍｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，９２：５８９−６０１（１９８３））に見出すことができ、これらの参考文献は、引用することによりすべて本明細書に編入される。
特定の態様では、マウスモノクローナル抗体Ａ２は、ｃ１３４Ａと呼ばれる細胞株により産生される。キメラ抗体ｃＡ２は、ｃ１６８Ａと呼ばれる細胞株により産生される。
本発明中に使用できるモノクローナルＴＮＦ抗体の別の例は、当該技術分野で記載されている（例えば米国特許（ＵＳ）第５，２３１，０２４号；メラーら（Ｍｏｅｌｌｅｒ
ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ２（３）：１６２−１６９（１９９０））；米国特許出願番号０７／９４３，８５２号（１９９２年９月１１日出願）；ラジエンら（Ｒａｔｈｊｅｎ ｅｔ ａｌ．，）国際出願公開番号ＷＯ９１／０２０７８（１９９１年２月２１日公開）；ルビンら（Ｒｕｂｉｎ ｅｔ ａｌ．）ＥＰＯ特許公開第０ ２１８ ８６８号（１９８７年４月２２日公開）；ヨネら（Ｙｏｎｅ ｅｔ ａｌ．）ＥＰＯ特許公開番号第０ ２８８ ０８８号（１９８８年１０月２６日）；リャンら（Ｌｉａｎｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１３７：８４７−８５４（１９８６））；ミーガーら（Ｍｅａｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ６：３０５−３１１（１９８７））；フェンドリーら（Ｆｅｎｄｌｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ６：３５９−３６９（１９８７））；ブリングマンら（Ｂｒｉｎｇｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ６：４９８−５０７（１９８７））；およびヒライら（Ｈｉｒａｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．９６：５７−６２（１９８７））参照、これらの引用文献は、引用することによりすべて本明細書に編入される）。
ＴＮＦレセプター分子
本発明に有用な好ましいＴＮＦレセプター分子は、高い親和性でＴＮＦαと結合し（例えばフェルドマンら（Ｆｅｌｄｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，）国際特許公開番号ＷＯ９２／０７０７６（１９９２年４月３０日公開）；シャルら（Ｓｃｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６１：３６１−３７０（１９９０））；およびレチャーら（Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６１：３５１−３５９（１９９０）））参照、これらの引用文献は、引用することによりすべて本明細書に編入される）そして場合により低い免疫原性を有するものである。特に、５５ｋＤａ（ｐ５５ ＴＮＦ−Ｒ）および７５ｋＤａ（ｐ７５ ＴＮＦ−Ｒ）ＴＮＦ細胞表面レセプターは、本発明に有用である。レセプターまたはその機能性部分の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含んでなるこれらのレセプターの短縮形（例えばコルコランら（Ｃｏｒｃｏｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２３：８３１−８４０（１９９４））参照）は、本発明でも有用である。ＥＣＤを含んでなるＴＮＦレセプターの短縮形は、尿および血清中に３０ｋＤａおよび４０ｋＤａ
ＴＮＦα阻害性結合タンパク質として検出された（エンゲルマン，Ｈ．ら（Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１５３１−１５３６（１９９０））。ＴＮＦレセプター多量体分子およびＴＮＦ免疫レセプター融合分子、およびそれらの誘導体および断片または部分は、本発明の方法および組成物に有用なＴＮＦレセプター分子の別の例である。本発明で使用できるＴＮＦレセプター分子は、症状の良好ないしは優秀な軽減および低い毒性で患者を長期間処置するそれらの能力を特徴とする。低い免疫原性および／または高い親和性、ならびにその他の特定されない性質は、達成される治療結果に貢献できる。
本発明において有用なＴＮＦレセプター多量体分子は、１個またはそれ以上のポリペプチドリンカーまたはその他の非ペプチドリンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してリンクした２個またはそれ以上のＴＮＦレセプターのＥＣＤのすべてまたは機能性部分を含んでなる。多量体分子は、多量体分子発現を実行するために分泌されたタンパク質のシグナルペプチドをさらに含んでなることができる。これらの多量体分子およびそれらの産生の方法は、米国特許（ＵＳ）出願番号０８／４３７，５３３号（１９９５年５月９日出願）に記載されており、その内容は、引用することによりすべて本明細書に編入される。
本発明の方法および組成物に有用なＴＮＦ免疫レセプター融合分子は、１個またはそれ以上の免疫グロブリン分子の少なくとも一部分および１個またはそれ以上のＴＮＦレセプターのすべてまたは機能性部分を含んでなる。これらの免疫レセプター融合分子はモノマー、またはヘテロ−またはホモ−多量体として構築できる。免疫レセプター融合分子は一価または多価であることもできる。このようなＴＮＦ免疫レセプター融合分子の例は、ＴＮＦレセプター／ＩｇＧ融合タンパク質である。ＴＮＦ免疫レセプター融合分子およびそれらの製造のための方法は、当該技術分野で記載されている（レスラウアーら（Ｌｅｓｓｌａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：２８８３−２８８６（１９９１））；アシュケナージら（Ａｓｈｋｅｎａｚｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５−１０５３９（１９９１））；ペッペルら（Ｐｅｐｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１４８３−１４８９（１９９１））；コルズら（Ｋｏｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：２１５−２１９（１９９４））；バトラーら（Ｂｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ６（６）：６１６−６２３（１９９４））；ベーカーら（Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２０４０−２０４８（１９９４））；ボイトラーら（Ｂｅｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ）米国特許（ＵＳ）第５，４４７，８５１号および米国特許出願番号０８／４４２，１３３号（１９９５年５月１６日出願））、これらの引用文献それぞれは、引用することによりすべて本明細書に編入される。免疫レセプター融合分子を産生するための方法は、カポンら（Ｃａｐｏｎ ｅｔ ａｌ．）米国特許（ＵＳ）第５，１１６，９６４号、カポンら（Ｃａｐｏｎ ｅｔ
ａｌ．）米国特許（ＵＳ）第５，２２５，５３８号およびカポンら（Ｃａｐｏｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３７：５２５−５３１（１９８９））にも見出すことができ、これらの引用文献それぞれは、引用することによりすべて本明細書に編入される。
ＴＮＦレセプター分子の機能性等価体、誘導体、断片または領域とは、ＴＮＦレセプター分子の部分、または本発明に使用できるＴＮＦレセプター分子に機能的に類似するために十分な大きさおよび配列であるＴＮＦレセプター分をコードするＴＮＦレセプター分子の部分を呼ぶ（例えば、高い親和性を有しそして低い免疫原性を有する結合ＴＮＦ□を結合する）。ＴＮＦレセプター分子の機能性等価体は、本発明に使用できるＴＮＦレセプター分子に機能的に類似する変性ＴＮＦレセプター分子も含む（例えば高い親和性で結合ＴＮＦ□を結合しそして低い免疫原性を有するる）。例えば、ＴＮＦレセプター分子の機能性等価体は、「サイレント」コドンまたは１個もしくはそれ以上のアミノ酸置換、欠失または付加（例えば１個の酸性アミノ酸を他の酸性アミノ酸で置換、または同じまたは異なる疎水性アミノ酸のコドンを疎水性アミノ酸をコードする他のコドンで置換）を含むことができる。例えばオースベルら「分子生物学における最近のプロトコール」（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７−２０００））参照。
サイトカインにはあらゆる公知のサイトカインが含まれる。例えばＣｏｐｅｗｉｔｈＣｙｔｏｋｉｎｅｓ．ｃｏｍ．参照。サイトカインアンタゴニストは、これらに限定はされないが、あらゆる抗体、断片または擬似体、あらゆる可溶性レセプター、断片または擬似体、あらゆる小分子アンタゴニスト。またはそれらのあらゆる組み合わせを含む。
治療処置 本発明のいずれの方法も、少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質を含んでなる組成物または薬剤組成物の有効量をこのような調節、処置または治療を必要とする細胞、組織、器官、動物または患者に投与することを含んでなる、ＲＳＶ媒介障害または疾患を処置するための方法を含んでなることができる。このような方法は、このような障害または疾患を処置するための同時投与または併用治療を場合によりさらに含んでなることができ、ここで、上記の少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質の投与は、さらに少なくとも１種のＴＮＧアンタゴニスト（例えば、これらに限定はされないが、ＴＮＦ抗体または断片、可溶性ＴＮＤレセプターもしくは断片、それらの融合タンパク質、または小分子ＴＮＦアンタゴニスト）、抗リウマチ薬（例えばメトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、オーラノフィン（ａｕｒａｎｏｆｉｎ）、オーロチオグルコース（ａｕｒｏｔｈｉｏｇｌｕｃｏｓｅ）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）、金ナトリウムチオマレート（ｇｏｌｄ ｓｏｄｉｕｍ ｔｈｉｏｍａｌａｔｅ）、硫酸ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ）、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、スルファザルジン（ｓｕｌｆａｚａｌｚｉｎｅ）、筋弛緩薬、麻薬、非−ステロイド炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬（例えばアミノグリコシド）、抗真菌薬、駆虫薬、抗ウイルス薬、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）、セファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）、フルオルキノロン（ｆｌｕｏｒｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、その他の抗菌薬）、疥癬薬（ａｎｔｉｐｓｏｒｉａｔｉｃ）、コルチコステロイド、同化ステロイド（ａｎａｂｏｌｉｃ ｓｔｅｒｏｉｄ）、糖尿病関連薬剤、無機質、栄養薬、サイロイド薬、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、下痢止め薬、鎮咳薬、鎮吐薬、抗潰瘍薬、緩下剤、抗凝血薬、エリスロポイエチン（例えばエポエチンアルファ（ｅｐｏｅｔｉｎ ａｌｆａ））、フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（例えばＧ−ＣＳＦ、ノイポゲン（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ））、サルグラモスチム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（ＧＭ−ＣＳＦ、ロイキン（Ｌｅｕｋｉｎｅ））、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬（例えばバシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）、サイクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、デクリズマブ（ｄｅｃｌｉｚｕｍａｂ））、成長ホルモン、ホルモン代替薬、エストロゲンレセプター調節薬、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキル化薬、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、放射性薬品、抗うつ薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交感神経様作用薬、興奮薬、ドネペジル（ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ）、タクリン（ｔａｃｒｉｎ）、喘息薬、ベータ作動薬、吸入ステロイド、ロイコトリエン阻害薬、メチルキサンチン（ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｉｎｅ）、クロモリン（ｃｒｏｍｏｌｙｎ）、エピネフリン（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）または類似薬、ドルナーゼ アルファ（ｄｏｒｎａｓｅ ａｌｐｈａ）（プルモジム（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ））、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストより選択された少なくとも１種をその前、同時、および／またはその後に投与することを含んでなる。
タンパク質投与
典型的には、病理的状態の処置は、合計して、平均で、投与あたりに患者のキログラムあたりに少なくとも１種のＲＳＶタンパク質の少なくとも約０．００１ｎｇ〜５００ｍｇの範囲、そして好ましくは単回または複数回投与あたりに患者のｋｇあたりに少なくとも０．１ｎｇ〜１００ｍｇの抗体を、組成物中に含まれる比活性に応じて少なくとも１種のＲＳＶタンパク質組成物の有効量または投与量を投与して実行される。あるいは、有効血清濃度は、単回または複数回投与あたりに０．０００１ｎｇ〜０．０５ｍｇ／ｍｌの血清濃度を含んでなることができる。適当な投与量は、医師には公知でありそして、当然ながら、特定の疾患病状、投与される組成物の比活性、および処置される特定の患者に依存する。ある例では、所望の治療量に到達するために、反復投与、すなわち特定の監視または測定された投与の反復個別投与を与えることが必要であることがあり、ここで、個別投与は、所望の投与日量または効果が達成されるまで繰り返される。
少なくとも１種のタンパク質の好ましい投与量は、場合により０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９および／または１００〜５００マイクログラムまたはミリグラム／ｋｇ／投与またはその間のいずれかの範囲、値もしくは部分、または０．１、０．５、０．９、１．０、１．１、１．２、１．５、１．９、２．０、２．５、２．９、３．０、３．５、３．９、４．０、４．５、４．９、５．０、５．５、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、２０、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４．０、１４．５、４．９、５．０、５．５、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、１２、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４、１４．５、１５、１５．５、１５．９、１６、１６．５、１６．９、１７、１７．５、１７．９、１８、１８．５、１８．９、１９、１９．５、１９．９、２０、２０．５、２０．９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００および／または５０００ｎｇまたはμｇ／ｍｌ血清濃度の血清濃度またはそれらのいずれかの範囲、値または部分を単回または数回の投与あたりに達成するために含むことができる。
あるいは、投与される投与量は、公知の因子、例えば特定の薬剤の薬力薬理学的特性、およびその投与の様式および経路；レシピエントの年齢、健康、および体重；症状の性質および程度、同時に行う処置の種類、処置の頻度、および希望する効果に依存して変化できる。通常、活性成分の投与量は、体重ｋｇあたりに約０．１μｇ〜１００ｍｇであることができる。通常、投与または持続性放出剤型あたりに０．０００１〜５０、そして好ましくは０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇが所望の結果を得るために有効である。
非限定の例として、ヒトまたは動物の処置は、本発明の少なくとも１種の抗体の０．１〜１００μｇ／ｋｇ、例えば０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００もしくは３０００μｇ／ｋｇを一日あたりに、または０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００ｍｇ／ｋｇを一日あたりに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９もしくは４０日の少なくとも一期間、またはその代わりにまたは追加して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、もしくは５２週間の少なくとも一期間、またはその代わりまたは追加して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０年間の少なくとも一期間、またはそれらのいずれかの組み合わせで、単回、輸液または反復投与を用いて一回または定期投与として提供できる。
内部投与（ｉｎｔｅｒｎａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）に適する投与剤型（組成物）は、一般に単位または容器あたりに活性成分の約０．００００１ｍｇ〜約５００ｍｇを含む。それらの薬剤組成物内には、活性成分は、組成物の全重量に基づいて、約０．５〜９９．９９９重量％の量で通常存在する。
典型的には、病理状態の処置は、全体で、平均して、投与あたりに患者のｋｇあたりに少なくとも１種のＲＳＶ抗体を少なくとも約０．００００１〜約５００ｍｇの範囲、そして好ましくは単回または複数回投与あたりに少なくとも０．００００１〜１００ｍｇ／ｋｇ（患者）を組成物内に含まれる比活性に応じて少なくとも１種のＲＳＶ抗体組成物の有効量または投与量を投与して行われる。あるいは、有効血清濃度は、単回または複数回投与あたりに０．０００１〜５００μｇ／ｍｌの血清濃度を含んでなることができる。適当な投与は、医師には公知であり、当然ながら特定の疾患状態、投与される組成物の比活性、および処置を受ける特定の患者に依存する。ある例では、所望の治療量に到達するために、反復投与、すなわち特定の監視または測定された投与量の反復する個別投与を与えることが必要なことがあり、ここで、個別投与は所望の投与日量または効果が達成されるまで繰り返される。
抗体投与
典型的には、病理的状態の処置は、合計して、平均で、投与あたりに患者のｋｇあたりに少なくとも１種のＲＳＶ抗体の少なくとも約０．００１ｎｇ〜５００ｍｇ、そして好ましくは単回または複数回あたりに患者のｋｇ当たりに少なくとも約０．１ｎｇ〜１００ｍｇの抗体の範囲の組成物内に含まれる比活性に応じて少なくとも１種のＲＳＶ抗体組成物の有効量または投与量を投与して行われる。あるいは、有効血清濃度は、単回または複数回あたりに０．０００１ｎｇ〜０．０５ｍｇｍｌの血清濃度を含んでなることができる。適当な投与量は、医師には公知であり、そして当然ながら、特定の疾患病状、投与され組成物の比活性、および処置される特定の患者に依存する。ある例では、所望の治療量に到達するために、反復投与、すなわち特定の監視または測定された投与量の反復個別投与を与えることが必要であることがあり、ここで、個別投与は、所望の投与日量または効果が達成されるまで繰り返される。
少なくとも１種の抗体の好ましい投与量は、場合により０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９および／または１００〜５００ｍｇ／ｋｇ／投与、またはそれらのいずれかの範囲、値もしくは部分、または０．１、０．５、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．５、１．９、２．０、２．５、２．９、３．０、３．５、３．９、４．０、４．５、４．９、５．０、５．５、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、２０、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４．０、１４．５、４．９、５．０、５．５、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、１２、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４、１４．５、１５、１５．５、１５．９、１６、１６．５、１６．９、１７、１７．５、１７．９、１８、１８．５、１８．９、１９、１９．５、１９．９、２０、２０．５、２０．９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００および／または５０００μｇ／ｍｌ血清濃度の血清濃度またはそれらのどのような範囲、値または部分を単回または多数回投与あたりに達成するために、場合により含むことができる。
あるいは、投与される投与量は、公知の因子、例えば特定の薬剤の薬力薬理学的特性、およびその投与の様式および経路；レシピエントの年齢、健康、および体重；症状の性質および程度、同時に行う処置の種類、処置の頻度、および希望する効果に依存して変化できる。通常、活性成分の投与量は、体重ｋｇあたりに約０．１〜１００ｍｇであることができる。通常、投与または持続性放出剤型あたりに０．１〜５０、そして好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇが所望の結果を得るために有効である。
非限定の例として、ヒトまたは動物の処置は、本発明の少なくとも１種の抗体の０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｋｇを一日あたりに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０日の少なくとも一期間またはその代わりにまたは追加して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、または５２週間の少なくとも一期間、またはその代わりまたは追加して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０年間の少なくとも一期間、またはそれらのいずれかの組み合わせで、単回、輸液または反復投与を用いて一回または定期投与として提供できる。
内部投与（ｉｎｔｅｒｎａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）に適する投与形剤型（組成物）は、一般に単位または容器あたりに活性成分の約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇを含む。それらの薬剤組成物内には、活性成分は、組成物の全重量に基づいて、約０．５〜９９．９９９重量％の量で通常存在する。
投与
非経口投与のために、抗体またはタンパク質は、製薬学的に許容できる非経口ビヒクルと一緒に、または別途に分離して、液剤、懸濁剤、乳剤または凍結乾燥した散剤として製剤できる。このようなビヒクルの例は、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、および１〜１０％ヒト血清アルブミンである。リポソームおよび非水性ビヒクル、例えば不揮発性油も使用できる。ビヒクルまたは凍結乾燥粉末は、等張性（例えば塩化ナトリウム、マンニトール）および化学安定性（例えば緩衝剤および保存剤）を維持する添加剤を含むことができる。製剤は公知または適当な技術により滅菌される。
適当な薬剤キャリヤは、この分野での標準文献であるレミントンの薬剤科学（Ｒｅｍｉｎｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ａ．Ｏｓｏｌ）の最新版に記載されている。
別の投与
多数の公知および開発された様式が、本発明に従う少なくとも１種のＲＳＶ抗体の薬剤学的に有効な量を投与するために本発明に従って使用できる。肺投与は以下の記載で使用されるが、その他の投与様式は本発明に従って使用できて、適当な結果を得る。
本発明のＲＳＶ抗体は、キャリヤ中で、溶液、エマルション、コロイド、または懸濁液として、または乾燥粉末として、本明細書に記載または当該技術分野で公知の吸入またはその他の様式により投与するために適する種々のデバイスおよび方法のいずれかを用いて送達できる。
非経口製剤および投与
非経口投与のための製剤は、通常の賦形剤として、滅菌水または生理食塩水、ポリアルキレングリコール、例えばポリエチレングリコール、植物起源の油、水素化ナフタレンなどを含むことができる。注入のための水性または油性懸濁剤は、公知の方法に従って、適当な乳化剤または湿潤化剤および懸濁剤を用いて調製できる。注入のための薬剤は、無毒性、非経口投与可能な希釈剤、例えば水溶液または滅菌し注入可能な溶液または溶剤中の懸濁液であることができる。使用可能なビヒクルまたは溶剤として、水、リンゲル液、等張食塩水などが許容される。通常の溶剤または懸濁溶剤として、滅菌した不揮発性油が使用できる。それらの目的のために、天然または合成または半合成脂肪油または脂肪酸、天然または合成または半合成モノ−もしくはジ−もしくはトリ−グリセリドを含む不揮発性油および脂肪酸のいずれの種類でも使用できる。非経口投与は、当該技術分野では公知であり、そして、これらに限定はされないが、注入の慣用の手段、米国特許（ＵＳ）第５，８５１，１９８号に記載のガス加圧無針注入デバイス、および米国特許（ＵＳ）第５，８３９，４４６号に記載のレーザー穿孔器を含み、これらの文献は、引用することによりすべて本明細書に編入される。
別の送達
本発明は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、窩内、腔体内、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、腹膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻内もししくは経皮手段による少なくとも１種のＲＳＶ抗体の投与に関する。少なくとも１種のＲＳＶ抗体組成物は、非経口（皮下、筋肉内もしくは静脈内）もしくはいずれかのその他の投与、特には液体溶液もしくは懸濁液の形で使用するため；特に半固体形、例えばこれらに限定はされないが、クリーム剤および座薬での膣もしくは直腸投与に使用するため；例えば、これらに限定はされないが、錠剤もしくはカプセルの形での腹、または舌下投与のため；または例えば、これらに限定はされないが、散剤、鼻ドロップもしくはエーロゾルもしくはある種の薬剤の形での鼻内；または経皮、例えば、これらに限定はされないが、ゲル剤、膏薬、ローション剤、懸濁剤もしくは皮膚構造を変性するかまたは経皮貼付剤内の薬剤濃度を増加するための化学エンハンサー、例えばジメチルスルホキシドを用いる貼付剤送達系（ジャンジンジャーら（Ｊｕｎｇｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｉｎ”Ｄｒｕｇ Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ”；Ｈｓｉｅｈ，Ｄ．Ｓ．ｅｄｓ．，ｐｐ．５９−９０，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９９４）、引用することによりすべて本明細書に編入される）、または皮膚上にタンパク質およびペプチドを含む製剤の適用を可能とする酸化剤を用い（ＷＯ９８／５３８４７）、または例えばエレクトロポレーションのような一時的輸送経路を創成すため、または例えばイオン侵透療法（ｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）のような皮膚を通す荷電薬剤の移動性を増加するための電場の適用、または、例えばソノフォレシス（ｓｏｎｏｐｈｏｒｅｓｉｓ、米国特許（ＵＳ）第４，３０９，９８９号および第４，７６７，４０２号）のような超音波の適用（上記の出版物および特許は、引用することによりすべて本明細書に編入される）のために調製できる。
肺／鼻投与
肺投与のために、好ましくは少なくとも１種のＲＳＶ抗体組成物を、肺または血脈洞の下気道に到達するために有効な粒径で送達される。本発明に従って、少なくとも１種のＲＳＶ抗体は、吸入による治療薬剤の投与のために当該技術分野では公知の各種の吸入または鼻デバイスのいずれかにより送達できる。患者の血脈洞または胞内にエーロゾル化した製剤を沈着できるこれらのデバイスには、定量投与吸入器、ネブライザー、乾燥粉末発生器、噴霧器、などが含まれる。抗体の肺または鼻投与を実行するために適するその他のデバイスも当該技術分野で公知である。すべてのこのようなデバイスは、エーロゾル中の抗体の分配のための投与のために適する製剤を使用できる。このようなエーロゾルは、溶液（水性および非水性の双方）または固体粒子のいずれかより成ることができる。ヴェントリン（Ｖｅｎｔｏｌｉｎ）（Ｒ）計量投与吸入器のような計量投与吸入器は典型的には噴霧気体を使用しそして吸気の間の動作を必要とする（例えばＷＯ９４／１６９７０、ＷＯ９８／３５８８８参照）。タービュヘーラー（Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ）ＴＭ（アストラ（Ａｓｔｒａ））、ロタヘーラー（Ｒｏｔａｈａｌｅｒ）（Ｒ）（グラクソ（Ｇｌａｘｏ））、ディスクス（Ｄｉｓｋｕｓ）（Ｒ）（グラクソ）、スピロス（Ｓｐｉｒｏｓ）ＴＭ吸入器（デュラ（Ｄｕｒａ））、インヘール・セラペティクス（Ｉｎｈａｌｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）により市販されているデバイス、およびスピンヘーラー（Ｓｐｉｎｈａｌｅｒ）（Ｒ）粉末吸入器（ファイソンズ（Ｆｉｓｏｎｓ））などの散剤吸入器は、混合粉末の呼吸作動を利用している（米国特許第４６６８２１８号アストラ、欧州特許第２３７５０７号アストラ、ＷＯ９７／２５０８６グラクソ、ＷＯ９４／０８５５２デュラ、米国特許第５４５８１３５号インヘール、ＷＯ９４／０６４９８ファイソンズ、引用することによりすべて本明細書に編入される）。ネブライザー、例えばＡＥＲｘＴＭ（アラダイム（Ａｒａｄｉｇｍ））、ウルトラベント（Ｒ）ネブライザー（マリンクロト（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｔｈ））、およびアコーン（Ａｃｏｒｎ）ＩＩ（Ｒ）ネブライザー（マーケスト・メディカル製品（Ｍａｒｑｕｅｓｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（米国特許第５４０４８７１号アラダイム、ＷＯ９７／２２３７６）（上記の引用文献は引用することによりすべて本明細書に編入される）は、溶液よりエーロゾルを発生し、一方計量投与吸入器、乾燥粉末吸入器などは小粒子のエーロゾルを発生する。市場で入手できる吸入デバイスのこれらの特定の例示は、本発明の実施のために適する特定デバイスの代表であることを意図し、そして本発明の範囲を制限することは意図しない。好ましくは、少なくとも１種のＲＳＶ抗体を含んでなる組成物は、乾燥粉末吸入器または噴霧器により送達される。本発明の少なくとも１種の抗体を投与するための吸入デバイスには数点の特徴がある。例えば、吸入デバイスによる送達は、有利に信頼性があり、再現可能、そして正確である。吸入デバイスは、場合により小さい乾燥粉末、例えば１０μｍ以下、好ましくは約１〜５μｍを良好な吸入特性をもって送達できる。
スプレーとしてのＲＳＶ抗体組成物の投与
ＲＳＶ抗体組成物を含むスプレーは、少なくとも１種のＲＳＶ抗体の懸濁液または溶液を加圧したノズルを通って強制送出することにより発生できる。ノズルの大きさおよび形状、加える圧力、および液体の供給速度は、所望の送出量および粒径を達成するように選択できる。エレクトロスプレー（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ）は、例えば毛管またはノズル供給物と連結する電場により発生できる。有利には、噴霧器により供給される少なくとも１種のＲＳＶ抗体組成物の粒子は、約１０μｍ以下、好ましくは約１μｍ〜約５μｍ、そして最も好ましくは２μｍ〜約３μｍでの範囲内の粒径を有する。
噴霧器で使用するために適する少なくとも１種のＲＳＶタンパク質または抗体組成物の製剤は、典型的には溶液ｍｌあたりに少なくとも１種のＲＳＶ抗体またはタンパク質組成物の約０．００００００１ｍｇ〜約１０００ｍｇすなわちｍｇ／ｍｌ、またはその間のいずれかの範囲もしくは値、例えば、これらに限定はされないが、．１、．２、．３、．４、．５、．６、．７、．８、．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００ｎｇまたはμｇまたはｍｇ／ｍｌまたはｎｇまたはμｇまたはｍｇ／ｇｍの濃度で水溶液中に抗体またはタンパク質組成物を含む。製剤は、薬剤、例えば賦形剤、緩衝剤、等張剤、保存剤、界面活性剤、および、好ましくは亜鉛を含むことができる。製剤は、抗体組成物の安定化のための賦形剤または薬剤、例えば緩衝剤、還元剤、バルクタンパク質（ｂｕｌｋ ｐｒｏｔｅｉｎ）、または炭水化物も含むことができる。抗体組成物を製剤するために有用なバルクタンパク質には、アルブミン、プロタミンなどが含まれる。抗体組成物を製剤するために有用な典型的な炭水化物には、スクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコースなどが含まれる。抗体組成物製剤は、エーロゾル形成において溶液の噴霧により起きる抗体またはタンパク質組成物の表面誘発凝集を低下または防止できる界面活性剤も含むことができる。種々の慣用の界面活性剤が使用でき、例えばポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコール、およびポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルである。その量は一般に製剤に対して０．００１〜１４重量％の間の範囲にある。本発明の目的に特に好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０、ポリソルベート２０などである。タンパク質、例えばＲＳＶ抗体、または特定の部分もしくは変種の製剤のために当該技術分野で公知のその他の薬剤も製剤中に含まれることができる。
ネブライザーによるＲＳＶ抗体組成物の投与
抗体組成物は、ネブライザー、例えばジェットネブライザーまたは超音波ネブライザーにより投与できる。典型的には、ジェットネブライザーにおいては圧縮空気法がオリフィスを通る高速空気ジェットを作るために使用される。気体がノズルを通って膨脹すると、低圧領域が作られ、これは液体貯槽に連結している毛管を通って抗体組成物の溶液を吸引する。毛管からの液体流は、管を出る際に不安定なフィラメントおよび小滴に分断され、エーロゾルを作る。与えられたジェットネブライザーからの所望の性能特性を達成するために、一連の形状、流速、およびバッフル形式が使用できる。超音速ネブライザーの場合に、高周波電気エネルギーが、典型的には圧電変換器を使用して振動、機械的エネルギーを発生するために使用される。このエネルギーは、直接またはカプリング流体を介するかのいずれかで抗体組成物の製剤に伝達され、抗体組成物を含むエーロゾルを生成する。有利には、ネブライザーにより送達される抗体組成物の粒子は、約１０μｍ以下、好ましくは約１μｍ〜約５μｍ、そして最も好ましくは２μｍ〜約３μｍの範囲内の粒径を有する。
ジェットもしくは超音波のいずれかのネブライザーを使用するために適する少なくとも１種のＲＳＶ抗体の製剤は、典型的には、溶液ｍｌあたりに少なくとも１種のＲＳＶ抗体の約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇの濃度を含む。製剤は薬剤、例えば賦形剤、緩衝剤、等張剤、保存剤、界面活性剤、および好ましくは、亜鉛を含むことができる。製剤は、少なくとも１種のＲＳＶ抗体組成物の安定化のための添加剤または薬剤、例えば緩衝剤、還元剤、バルクタンパク質、または炭水化物も含むことができる。少なくとも１種のＲＳＶ抗体組成物を製剤するために有用なバルクタンパク質には、アルブミン、プロタミンなどが含まれる。少なくとも１種のＲＳＶ抗体組成物を製剤するために有用な典型的な炭水化物には、スクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコースなどが含まれる。少なくとも１種のＲＳＶ抗体組成物製剤は、エーロゾル形成において溶液の噴霧により起きる少なくとも１種のＲＳＶ抗体の表面誘発凝集を低下または防止できる界面活性剤も含むことができる。種々の慣用の界面活性剤が使用でき、例えばポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコール、およびポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルである。その量は一般に製剤に対して０．００１〜４重量％の間の範囲にある。本発明の目的に特に好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０などである。タンパク質、例えば抗体タンパク質の製剤のために当該技術分野で公知のその他の薬剤も製剤中に含まれることができる。
計量投与吸入器によるＲＳＶ抗体組成物の投与
計量投与吸入器（ＭＤＩ）においては、噴霧媒体、少なくとも１種のＲＳＶ抗体、およびいずれの賦形剤またはその他の添加剤が液化圧縮気体を含む混合物としてキャニスター中に含まれる。計量弁が作動すると混合物をエーロゾルとして、好ましくは約１０μｍ以下、好ましくは約１μｍ〜約５μｍ、そして最も好ましくは２μｍ〜約３μｍの粒径範囲内の粒子を含んで放出する。所望のエーロゾル粒径は、ジェット−ミル（ｊｅｔ−ｍｉｌｌｉｎｇ）、噴霧乾燥、臨界点凝縮などを含む当該技術分野の熟練者には公知の種々の方法により生成される抗体組成物の製剤を用いて得ることができる。好ましい計量投与吸入器には、３Ｍまたはグラクソにより製作されそしてフッ化炭化水素噴霧剤を使用するものが含まれる。
計量投与吸入デバイスを用いて使用するための少なくとも１種のＲＳＶ抗体の製剤は、一般に、例えば界面活性剤の助けをかりて噴霧剤中に懸濁される非水性媒体中の懸濁液として少なくとも１種のＲＳＶ抗体を含む微細に分割された粉末を含む。噴霧剤は、この目的に使用されるいずれかの慣用の物質、例えばクロロフルオロ炭素、ヒドロクロロフルオロ炭素、ヒドロフルオロ炭素、または炭化水素、であることができ、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノールおよび１，１，１，２−テトラフルオロエタン、ＨＦＡ−１３４ａ（ヒドロフルオロアルカン−１３４ａ）、ＨＦＡ−２２７（ヒドロフルオロアルカン−２２７）等を含む。好ましくは、噴霧剤はヒドロフルオロ炭素である。界面活性剤は、噴霧剤中の懸濁液として少なくとも１種のＲＳＶ抗体を安定化し、化学分解に対して活性剤を促進するなどのように選択される。適当な界面活性剤には、ソルビタントリオレイン酸、ダイズレシチン、オレイン酸などが含まれる。ある場合には、エタノールのような溶剤を用いる溶液エーロゾルが好ましい。タンパク質のようなタンパク質の製剤のために当該技術分野で公知の追加の薬剤も製剤中に含むことができる。
当該技術分野の通常の熟練者は、本明細書中に記載されていないデバイスを介して少なくとも１種のＲＳＶ抗体組成物の肺投与により本発明の方法が達成されることを認めるであろう。
経口製剤および投与
経口のための製剤は、腸壁の透過性を人工的に増加するためのアジュバント（例えばレゾルシノールおよび非イオン界面活性剤、例えばポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテル）の同時投与、ならびに酵素分解を阻害するための酵素阻害剤（例えば膵トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＦＦ）およびトラシロール（ｔｒａｓｙｌｏｌ））の同時投与に依存する。経口投与のための固体形投与剤型の活性成分化合物は、スクロース、ラクトース、セルロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デキストラン、デンプン、カンテン、アルギネート、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントゴム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成または半合成ポリマーおよびグリセリンを含む少なくとも１種の添加剤と混合できる。これらの投与剤型は、他のタイプの添加剤、例えば不活性希釈剤、滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、パラベン、保存剤例えばソルビン酸、アスコルビン酸、アルファ−トコフェロール、抗酸化剤例えばシステイン、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、甘味料、調味料、香料なども含むことができる。
錠剤および丸剤は、さらに腸溶被覆製剤に加工できる。経口投与のための液体製剤には、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁剤および医薬用途のために許容できる液剤製剤が含まれる。これらの製剤は、該分野に通常使用される不活性希釈剤、例えば水を含むことができる。リポソームもインスリンおよびヘパリンの薬剤送達系として記載されている（米国特許（ＵＳ）第４，２３９，７５４号）。さらに最近では、混合アミノ酸の人工ポリマーの微小球（プロテイノイド（ｐｒｏｔｅｉｎｏｉｄ））が薬剤を送達するために使用されている（米国特許（ＵＳ）第４，９２５，６７３号）。さらに、米国特許（ＵＳ）第５，８７９，６８１号および第５，８７１，７５３号に記載されたキャリヤ化合物が生物学的活性薬剤を経口送達するために使用されることは、当該技術分野では公知である。
粘膜製剤および投与
粘膜面を通る吸収のために、少なくとも１種のＲＳＶ抗体を投与する組成物および方法は、複数のサブミクロン粒子を含んでなるエマルション、粘膜付着性巨大分子、生活性ペプチド、およびエマルション粒子の粘膜付着を達成することによる粘膜表面を通る吸収を促進する水性連続相を含む（米国特許（ＵＳ）第５，５１４，６７０号）。本発明のエマルション適用に適する粘膜面には、角膜、結膜、頬、舌下、鼻、膣、肺、胃、腸、および直腸の投与経路が含まれる。膣または直腸投与のための製剤、例えば座薬は、賦形剤として、例えばポリアルキレングリコール、ワセリン、ココアバターなどを含むことができる。鼻内投与のための製剤は、固体であってそして賦形剤として、例えば、ラクトースを含むことができ、または鼻ドロップの水性または油性溶液であることができる。頬投与のために、賦形剤は、糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、プレゲル化（Ｐｒｅｇｅｌｉｎａｔｉｎｅｄ）デンプン、などが含まれる（米国特許（ＵＳ）第５，８４９，６９５号）。
経皮用製剤および投与
経皮投与のために、少なくとも１種のＲＳＶ抗体は、送達デバイス、例えばリポソームもしくはポリマー性ナノ粒子、マイクロ粒子、マイクロカプセル、またはマイクロスフェア（別途断らない限り集合的にマイクロ粒子と呼ぶ）中にカプセル化される。多数の適合するデバイスが公知でありそれには、合成ポリマー例えばポリヒドロキシ酸例えばポリ乳酸、ポリグリコール酸およびそれらのコポリマー、ポリオルトエステル、ポリ無水酸、およびポリホスファゼン、および天然ポリマー例えばコラーゲン、ポリアミノ酸、アルブミンおよびその他のタンパク質、アルギン酸塩および他の多糖類、およびそれらの組み合わせより作製されたマイクロ粒子が含まれる（米国特許（ＵＳ）第５，８１４，５９９号）。
長期投与および製剤
本発明の化合物を患者に長期にわたって、例えば、一週間から一年の間単回投与で送達することが望ましいことがあり得る。種々の徐放、デポー（ｄｅｐｏｔ）または埋込投与剤型が使用できる。例えば、投与剤型は、体液内に低い溶解度を有する化合物の製薬学的に許容できる無毒性塩、例えば（ａ）多塩基酸、例えばリン酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレン一−もしくは二−スルホン酸、ポリガラクツロン酸、などとの酸付加塩；（ｂ）多価金属陽イオン、例えば亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウムなどとの塩、または例えばＮ，Ｎ’−ジベンジル−エチレンジアミンまたはエチレンジアミンより形成される有機陽イオンとの塩；または（ｃ）（ａ）と（ｂ）との組み合わせ、例えばタンニン酸亜鉛を含むことができる。さらに、本発明の化合物、または好ましくは直前に記載したものなどの相対的に不溶性の塩が、ゲル、例えばモノステアリン酸アルミニウムゲル中で例えばゴマ油を用いて注入に適するように製剤できる。特に好ましい塩は亜鉛塩、タンニン酸亜鉛塩、パモ酸塩などである。注入のための徐放デポー製剤の別の例では、遅い分解性、無毒性、非抗原性ポリマー、例えばポリ乳酸／ポリグリコール酸ポリマー、例えば米国特許（ＵＳ）第３，７７３，９１９号に記載のポリマー中でカプセル化のために分散された化合物または塩を含む。化合物、または、好ましくは、比較的不溶性の塩、例えば上記のものは、コレステロールマトリックスシラスティック（ｓｉｌａｓｔｉｃ）ペレット中では、特に動物に使用のためにも製剤できる。その他の徐放、デポーまたは埋込製剤、例えば気体または液体リポソームは、文献中で公知である（米国特許（ＵＳ）第５，７７０，２２２号およびＪ．Ｒ．ロビンソン編集「持続性および制御放出薬剤送達システム」（”Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ”，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．，１９７８））。
本発明を一般的に説明したが、これは下記の実施例を参照してさらに容易に理解されるであろうが、この実施例は説明のために提供されるものであり限定とは意図しない。
大腸菌内のＲＳＶタンパク質または抗体の発現および精製
細菌発現ベクターｐＱＥ６０をこの実施例における細菌発現のために使用する（キアゲン社（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ））。ｐＱＥ６０はアンピシリン抗生物質抵抗性（”Ａｍｐｏｒ”）をコードしそして細菌複製起点（”ｏｒｉ”）、ＩＰＴＧ誘導性プロモーター、リボソーム結合部位（”ＲＢＳ”）、キアゲン社により販売されているニッケル−ニトリロ−トリ酢酸（”Ｎｉ−ＮＴＡ”）親和性樹脂を用いるアフィニティー精製を可能とするヒスチジン残基をコードする６個のコドン、および適当な単一制限酵素切断部位を含む。それらの要素は、タンパク質または抗体のカルボキシル末端に共有結合でリンクした６個のＨｉｓ残基（すなわち”６ Ｘ Ｈｉｓタグ”）を有するタンパク質または抗体を産生する様式で、そのタンパク質または抗体をコードするＤＮＡ断片が挿入できるように配列されている。しかし、タンパク質または抗体をコードする配列は、場合により、６個のＨｉｓコドンの翻訳が防止されそして、これにより、タンパク質または抗体が場合により６ Ｘ Ｈｉｓタグを持たないで産生されるように挿入できる。
疎水性リーダー配列を欠失するＲＳＶタンパク質または抗体の所望の部分をコードする核酸配列は、ＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いる寄託された（ｄｅｐｏｓｉｔ）ｃＤＮＡクローンより増幅される（提示された配列、例えば少なくとも１個の配列番号７〜１２、もしくはそれらのいずれかの部分もしくはそれらをコードする核酸、またはＲＳＶタンパク質または抗体の所望の部分のアミノ酸末端をコードするＤＮＡ配列に、およびｃＤＮＡコーディング配列に対し寄託された構築物３’内の配列にアニールする図２〜５のいずれかの部分中に提示されたものに基づく）。ｐＱＥ６０ベクター中のクローニングを促進する制限部位を含む別のヌクレオチドをそれぞれ５’および３’配列に付加する。
ＲＳＶタンパク質または抗体をクローニングするために、５’および３’プライマーはＲＳＶのコーディング配列の一部分に相当または相補的なヌクレオチド、例えば少なくとも１個の配列番号１〜１２、またはそれらのいずれかの部分もしくはそれらをコードする核酸、または図２〜５のいずれかの部分で示されるものを既知の方法の段階に従って有する。当該技術分野の通常の熟練者は、当然ながら、５’プライマーが開始するタンパク質または抗体コーディング配列内の点が、完全なタンパク質または抗体の所望の部分を成熟形よりも短くもしくは長く増幅するために変化できることを認めるであろう。
増幅されたＲＳＶ核酸断片およびベクターｐＱＥ６０は、適当な制限酵素を用いて消化され次いで消化されたＤＮＡを一緒に連結する。制限されたｐＱＥ６０ベクター内へのＲＳＶ ＤＮＡの挿入は、その関連する終止コドンを含むＲＳＶタンパク質または抗体コーディング領域をＩＰＴＧ誘導性プロモーターより下流にそして開始ＡＵＧコドンをインフレームに位置させる。関連する終止コドンは、挿入点より下流の６個のヒスチジンコドンの翻訳を防止する。
標準手順、例えばサンブルックら、１９８９、オースベル、１９８７〜１９９８に記載のものを用いて、連結混合物を適格な大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞内に形質転換する。ｌａｃレプッサーを発現しそしてカナマイシン抵抗性（”Ｋａｎｒ”）を与えるプラスミドｐＲＥＰ４の複数コピーを含む大腸菌株Ｍ１５／ｒｅｐ４を、本明細書中に記載する実施例の実行のために使用する。ＲＳＶタンパク質または抗体を発現するために適する多数の中で唯一であるこの株は、キアゲン社より商業的に入手できる。形質転換体はアンピシリンおよびカナマイシンの存在下でＬＢプレート上で増殖するそれらの能力により同定する。プラスミドＤＮＡは、抵抗性コロニーから単離しそしてクローニングされたＤＮＡの真正性は制限分析、ＰＣＲおよびＤＮＡ配列決定により確認される。
所望の構築物を含むクローンをアンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）およびカナマイシン（２５μｇ／ｍｌ）の双方を補足したＬＢ培地中の液体カルチャー内で一晩（”Ｏ／Ｎ”）培養する。ほぼ１：２５〜１：２５０の希釈で、大きいカルチャーに接種するためにＯ／Ｎカルチャーを使用した。６００ｎｍでの光学密度（”ＯＤ６００”）が０．４〜０．６の間となるまで細胞を培養した。次いでイソプロピルｂ−Ｄ−チオガラクトピラノシド（”ＩＰＴＧ”）を最終濃度１ｍＭまで加え、ｌａｃＩレプレサーを不活性化してｌａｃレプレッサー感受性プロモーターより転写を誘発させる。その後さらに３〜４時間、細胞をインキュベーションする。次いで遠心分離により細胞を採取する。
次いで、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ８中、４℃で３〜４時間細胞を攪拌する。細胞残さを遠心分離して除去し、そし２００ｍＭ ＮａＣｌを補足した５０ｍＭ酢酸Ｎａ緩衝液ｐＨ６に対してＲＳＶを含む上清を透析する。あるいは、プロテアーゼ阻害剤を含む５００ｍＭ ＮａＣｌ、２０％グリセロール、２５ｍＭトリス／ＨＣｌ ｐＨ７．４に対してそれを透析して、タンパク質または抗体のリフォールドに成功できる。
不溶性のタンパク質が生成した場合には、既知の方法手段に従ってタンパク質を可溶性とする。再生の後、タンパク質または抗体をイオン交換、疎水相互作用およびサイズ排除クロマトグラフィーにより精製する。あるいは、アフィニティークロマトグラフィー法、例えば抗体カラムを純粋のＲＳＶタンパク質または抗体を得るために使用する。精製したタンパク質または抗体を４℃で保存または−４０℃〜−１２０℃で冷凍する。
バキュロウイルス発現系内でのＲＳＶポリペプチドのクローニングおよび発現
この実施例では、バキュロウイルスリーダーおよびサマーズら「バキュロウイルスベクターおよび昆虫細胞カルチャー操作のための方法のマニュアル」（Ｓｕｍｍｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．，Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ，Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ．１５５５（１９８７））記載の方法を使用して、ＲＳＶタンパク質または抗体を発現するために、成熟したタンパク質または抗体をコードするクローニングしたＤＮＡをバキュロウイルス内に挿入するために、プラスミドシャトルベクターｐＡ２ ＧＰを使用する。この発現ベクターは、オートグラファ カリフォルニア 核多面性（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ）ウイルス（ＡｃＭＮＰＶ）の強いポリヘドリン（ｐｏｌｙｈｅｄｒｉｎ）プロモーター、次いでバキュロウイルスｇｐ６７タンパク質または抗体の分泌シグナルペプチド（リーダー）および好都合な制限部位、例えばＢａｍＨＩ、Ｘｂａ ＩおよびＡｓｐ７１８を含む。サルウイルス４０（”ＳＶ４０”）のポリアデニル化部位を効率的なポリアデニル化のために使用する。組換えウイルスの容易な選択のために、プラスミドは、同じ方向にある弱いショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）プロモーターの制御下の大腸菌よりのベータ−ガラクトシダーゼ遺伝子、次いでポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルを含む。挿入された遺伝子は、野生型ウイルスＤＮＡを用いる細胞媒介相同組換えのためのウイルス配列により両側に結合してクローニングしたポリヌクレオチドを発現する生存可能なウイルスを生成する。
その他のバキュロウイルスベクターを上記のベクターの代わりに使用し、これらは例えばｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１およびｐＡｃＩＭ１であり、構築物が、シグナルペプチドおよびインフレームＡＵＧを必要に応じて含む転写、翻訳、分泌などのための適当に位置したシグナルを提供する限り、当該技術分野の熟練者はこれを直ちに認めるであろう。このようなベクターは、例えばルコフら（Ｌｕｃｋｏｗ，ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９）に記載されている。
寄託されたクローンまたはその他のクローン中で成熟ＲＳＶタンパク質または抗体をコードし、ＡＵＧ開始コドンおよび天然に関連するヌクレオチド結合部位を欠失するｃＤＮＡ配列は、遺伝子の５’および３’配列に相当するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅される。非限定の例には、ＲＳＶタンパク質または抗体のコーディング配列の一部分に相当または相補的なヌクレオチドを有する５’および３’プライマーが含まれ、例えば既知の方法手段に従って配列番号１〜１２の少なくとも１個、またはそれらのいずれかの部分またはそれらをコードする核酸、または図２〜５のいずれかの部分で表される。
増幅された断片は、商業的に入手できるキット（例えばジーンクリーン（Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ，”ＢＩＯ １０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ））を用いて１％アガロースゲルより単離される。次いで断片を適当な制限酵素を用いて消化しそして再度、１％アガロースゲル上で精製する。この断片を本明細書では”Ｆ１”と呼ぶ。
プラスミドを適切な制限酵素を用いて消化しそして場合により、当該技術分野では公知の慣用の方法を用いて、コウシ腸ホスファターゼ（ｃａｌｆ ｉｎｓｔｅｔｉｎａｌ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）を用いて脱リン酸できる。次いで商業的に入手できるキット（ジーンクリーン（”Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ，”ＢＩＯ １０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ））を用いて１％アガロースゲルよりＤＮＡを単離する。このベクターＤＮＡを本明細書では”Ｖ１”と呼ぶ。
断片１および脱リン酸したプラスミドＶ１をＴ４ ＤＮＡリガーゼを用いて一緒に連結する。大腸菌ＨＢ１０１またはその他の適合する大腸菌宿主、例えばＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（ストラタジーン クローニングシステムズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ
Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ））細胞を連結混合物を用いて形質転換しそしてカルチャープレート上に拡げる。ＰＣＲ法を用いて細菌がヒトＲＳＶ遺伝子を有するプラスミドを含むと同定され、その中で遺伝子を増幅するために使用されるプライマーの１種および第二のプライマーが、ＲＳＶ遺伝子断片を含むこれらの細菌コロニーのみがＤＮＡの増幅を示すようにベクター内のウエル由来である。クローニングした断片の配列は、ＤＮＡ配列決定により確認する。このプラスミドを本明細書中ではｐＢａｃＲＳＶと呼ぶ。
プラスミドｐＢａｃＲＳＶの５μｇをフェルグナーら（Ｆｅｌｇｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１３−７４１７（１９８７））に記載のリポフェクション法を用いて、商業的に入手できる線型化バキュロウイルスＤＮＡ（”ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄＴＭ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＤＮＡ”，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））の１．０μｇを用いて同時トランスフェクションする。ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄＴＭウイルスＤＮＡの１μｇおよびプラスミドｐＢａｃＲＳＶの５μｇを血清を含まないグレース媒体（Ｇｒａｃｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ）（ライフ テクノロジーズ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｏｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ））の５０μｇを含むマイクロタイタープレートの滅菌ウエル内で混合する。その後、１０μｌリポフェクチンおよび９０μｇグレース媒体を添加し、混合しそして１５分間、室温でインキュベーションする。次いで、トランスフェクションした混合物を、血清を含まないグレース媒体１ｍｌを含む３５ｍｍ組織カルチャープレート内で接種したＳｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１７１１）に滴下して加える。プレートを前後に揺らして新たに加えた溶液を混合させる。次いでプレートを５時間、２７℃でインキュベーションする。５時間後にトランスフェクション溶液をプレートから取り出しそして１０％ウシ胎児血清を補足したグレース昆虫媒体１ｍｌを加える。プレートをインキュベーターに戻しそして２７℃で４日間培養を続ける。
４日後、上清を採取しそして公知の方法に従ってプラークアッセイを行う。ブルー ガル」（”Ｂｌｕｅ Ｇａｌ”、ライフ テクノロジーズ社（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ））を含むアガロースゲルを同定およびゲル発現クローンの単離を容易にするために使用し、これは青色染色プラークを産生する。（このタイプの「プラーク アッセイ」の詳細な説明は、ライフテノロジーズ社（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）により配付される昆虫細胞カルチャーおよびバキュロウイルス学のためのユーザー ガイド９〜１０ページにも見いだすことができる。適当なインキュベーションの後、青色染色したプラークをマイクロピペッター チップ（例えばエッペンドルフ）を用いて拾い上げる。次いで組換えウイルスを含むアガーをグレース媒体２００μｌを含むマイクロ遠心分離管内に再懸濁しそして組換えバキュロウイルスを含む懸濁液を３５ｍｍ皿内で接種したＳｆ９細胞を感染するために使用する。４日後、それらのカルチャー皿の上清を採取し次いでそれらを４℃で保存する。組換えウイルスをＶ−ＲＳＶと呼ぶ。
ＲＳＶ遺伝子の発現を確証するために、Ｓｆ９細胞を１０％熱不活性化ＦＢＳを補足したグレース媒体中で増殖させる。約２の感染倍率（”ＭＯＩ”）で組換えバキュロウイルスＶ−ＲＳＶを用いて細胞を感染させる。６時間後に媒体を取り去りそしてメチオニンおよびシステインを除いたＳＦ９００ＩＩ媒体（例えばライフテノロジーズ社（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）より入手できる）と置換する。放射能標識したタンパク質または抗体が望ましい場合には、４２時間後に、３５Ｓメチオニン５ｍＣｉおよび５ｍＣｉ ３５Ｓ−システイン（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）より入手できる）を加える。細胞をさらに１６時間インキュベーションし、次いでそれらを遠心分離で採取する。上清内のタンパク質または抗体ならびに細胞内タンパク質または抗体をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し次いでオートラジオグラフィーで分析する（放射能標識した場合）。精製したタンパク質または抗体のアミノ末端のアミノ酸配列のマイクロシークエンシングは、成熟タンパク質または抗体のアミノ末端配列次いで切断点および分泌シグナルペプチドの長さを決定するために使用できる。
哺乳動物細胞中のＲＳＶタンパク質または抗体のクローニングおよび発現
典型的な哺乳動物発現ベクターは少なくとも１個のプロモーター要素を含み、それはｍＲＮＡ、抗体コーディング配列、および転写物の転写およびポリアデニル化の終止に必要なシグナルの転写の開始を媒介する。別の要素には、エンハンサー、コザック配列、およびＲＮＡスプライシングのためのドナーおよびアクセプターが隣接した介在配列が含まれる。高度に効率的な転写は、ＳＶ４０よりの初期および後期プロモーター、レトロウイルスよりの長い末端重複（ＬＴＲＳ）、例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩおよびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて達成できる。しかし細胞要素も使用できる（例えばヒトアクチンプロモーター）。本発明の実施に使用するために適する発現ベクターには、例えば、ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｆｆ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｎ、ＰＬＸＳＮ、またはｐＬＮＣＸ（クローンテク・ラボズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ））、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐｃＤＮＡ／Ｚｅｏ（＋／−）またはｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒｏ（＋／−）（インヴィトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））、ＰＳＶＬおよびＰＭＳＧ（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ））、ｐＲＳＶｃａｔ（ＡＴＣＣ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ３７１４６）およびｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ６７１０９）のようなベクターが含まれる。使用できた哺乳動物宿主細胞には、ヒトＨｅｌａ２９３、Ｈ９、およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮ１Ｈ３Ｔ３およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ１，Ｃｏｓ７およびＣＶ１、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が含まれる。
あるいは、染色体内に組み込まれた遺伝子を含む安定細胞株内で遺伝子を発現できる。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、またはハイグロマイシンのような選択マーカーとの同時トランスフェクションは、トランスフェクションされた細胞の同定および単離を可能とする。
トランスフェクションされた遺伝子は、大量のコード化タンパク質または抗体、例えば配列番号１〜１２のいずれかの５〜５００アミノ酸部分、図３〜４のいずれかの部分または図２Ａ−Ｇもしくは５Ａ−Ｆのいずれかの部分でコードされる少なくとも１個の所望部分として発現するために増幅もできる。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）マーカーは関係する遺伝子の数百または数千ものコピーを有する細胞株を発生するために有用である。別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミン合成酵素（ＧＳ）（マーフィーら（Ｍｕｒｐｈｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１））；ベビントンら（Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６９−１７５（１９９２）））である。それらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞は選択媒体中で培養されそして最高の抵抗性を有する細胞が選択される。それらの細胞株は、染色体内に組み込まれた増幅された遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞は、本発明の抗体またはタンパク質の産生のために使用される。
発現ベクターｐＣ１およびｐＣ４は、ラウス肉腫ウイルスの強力プロモーター（ＬＴＲ）（カレンら（Ｃｕｌｌｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５））およびＣＮＶ−エンハンサーの断片（ボスハート（Ｂｏｓｈａｒｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５）））を含む。例えば制限酵素切断部位ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７１８を有する多重クローニング部位は、関係する遺伝子のクローニングを促進する。ベクターはその外にもラットプレプロインスリン遺伝子の３’イントロン、ポリアデニル化シグナルおよび終止シグナルを含む。
ＣＨＯ細胞内のクローニングおよび発現
ベクターｐＣ４は、例えば配列番号１〜１２のいずれかの５〜５００アミノ酸部分、図３〜４のいずれかの部分または図２Ａ−Ｇもしくは５Ａ−Ｆのいずれかの部分でコードされる少なくとも１個のためのコーディング配列を用いてＲＳＶ抗体またはタンパク質の発現のために使用される。プラスミドｐＣ４は、プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣアクセッション番号３７１４６）の誘導体である。プラスミドは、ＳＶ４０初期プロモーターの制御下にあるマウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。それらのプラスミドを用いてトランスフェクションされるジヒドロ葉酸活性を欠失するチャイニーズハムスター卵巣またはその他の細胞は、化学治療剤のメトトレキサートを補足された選択媒体（例えばアルファマイナスＭＥＭ、ライフテクノロジーズ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｏｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））内での細胞の培養により選択できる。メトトレキサート（ＭＴＸ）に抵抗性の細胞内でのＤＨＦＲ遺伝子の増幅は、多数報告されている（例えばＦ．Ｗ．アルトら（Ｆ．Ｗ．Ａｌｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７−１３８０（１９７８））；Ｊ．Ｌ．ハムリンおよびＣ．マ（Ｊ．Ｌ．Ｈａｍｌｉｎ ａｎｄ Ｃ．Ｍａ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０９７：１０１−１１３（１９９０））；およびＭ．Ｊ．ページおよびＭ．Ａ．サイデナム（Ｍ．Ｊ．Ｐａｇｅ ａｎｄ Ｍ．Ａ．Ｓｙｄｅｎｈａｍ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：６４−６８（１９９１））参照）。ＭＴＸの増加する濃度内で生育する細胞は、ＤＨＦＲ遺伝子の増幅の結果として、標的酵素、ＤＨＦＲを過剰産生して薬剤への抵抗性を発生する。第二の遺伝子がＤＨＦＲ遺伝子のリンクしていると、それは通常、同時増幅および過剰発現される。この方法は、増幅された遺伝子の１，０００コピー以上を有する細胞株を発生させるために使用できることは当該技術分野では公知である。その結果、メトトレキサートを取り去ると、宿主細胞の１個またはそれ以上の染色体内に組み込まれた増幅遺伝子を含む細胞株が得られる。
プラスミドｐＣ４は、ラウス肉腫ウイルスの長末端反復（ＬＴＲ）の強力プロモーターの制御下で関係する遺伝子（例えば配列番号１〜１２の少なくとも１種をコードするもの）を発現するためのコーディングＤＮＡ（カレンら（Ｃｕｌｌｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５））に加えてヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の最初期遺伝子のエンハンサーより単離された断片（ボスハート（Ｂｏｓｈａｒｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５）））を含む。プロモーターの下流には、遺伝子の組込みを許容するＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８制限酵素切断部位がある。それらのクローニング部位の後に、プラスミドはラットプレプロインスリン遺伝子の３’イントロンおよびポリアデニル化部位を含む。その他の高効率プロモーターは、例えばヒトｂ−アクチンプロモーター、ＳＶ４０初期および後期プロモーターまたは他のレトロウイルス、例えばＨＩＶおよびＨＴＬＶＩよりの長期反復を発現するためにも使用できる。クロンテック（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のＴｅｔ−ＯｆｆおよびＴｅｔ−Ｏｎ遺伝子発現系および同様の系は、哺乳動物細胞内で制御された様式でＲＳＶを発現するために使用できる（Ｍ．ゴッセンおよびＨ．ブジャード（Ｍ．Ｇｏｓｓｅｎ ａｎｄ Ｈ．Ｂｕｊａｒｄ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：５５４７−５５５１（１９９２）））。ｍＲＮＡのポリアデニル化のために、例えばヒト成長ホルモンまたはグロブリン遺伝子よりの他のシグナルも同様に使用できる。染色体内に組み込まれた関係する遺伝子を有する安定な細胞株も、選択マーカー、例えばｇｐｔ、Ｇ４１８またはハイグロマイシンを用いて同時トランスフェクションして選択できる。開始時期には一個を越える選択マーカー、例えばＧ４１８とメトトレキサートを使用すると有利であることができる。
プラスミドｐＣ４は、制限酵素を用いて設計され次いで当該技術分野では公知の操作によりコウシ腸ホスファターゼを用いて脱リン酸される。次いでベクターは１％アガロースゲルより単離される。
所望のＲＳＶ抗体またはタンパク質をコードするＤＮＡ配列、例えば配列番号１〜１２のいずれかの５〜５００アミノ酸部分、図３〜４のいずれかの部分または図２Ａ−Ｇもしくは５Ａ−Ｆのいずれかの部分でコードされる少なくとも１個をコードするＤＮＡまたはＲＮＡが使用され、それらは既知の方法段階に従って、本発明の少なくとも１種のＲＳＶ抗体タンパク質の少なくとも１部分に相当する。
単離されたコード化ＤＮＡおよび脱リン酸されたベクターを次いでＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて連結する。次いで大腸菌ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞を形質転換しそして例えば制限酵素分析を用いてプラスミドｐＣ４内に挿入された断片を含む細菌を同定する。
活性ＤＨＦＲ遺伝子を欠失するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞をトランスフェクションに使用する。発現プラスミドｐＣ４の５μｇをリポフェクチンを用いてプラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏの０．５μｇと同時トランスフェクションする。プラスミドｐＳＶ２ｎｅｏは、優性選択性マーカー、すなわちＧ４１８を含む抗生物質の群への抵抗性を与える酵素をコードするＴｎ５からのｎｅｏ遺伝子を含む。１μｇ／ｍｌ Ｇ４１８を補足したアルファマイナスＭＥＭ内に細胞を接種する。２日後、細胞をトリプシン処理しそしてメトトレキサート１０、２５、または５０ｎｇ／ｍｌおよび１μｇ／ｍｌ Ｇ４１８を補足したアルファマイナスＭＥＭ内でハイブリドーマクローニングプレート（グレイナー（Ｇｒｅｉｎｅｒ、ドイツ））内に接種する。約１０〜１４日後に単一クローンをトリプシン処理し次いでメトトレキサートの種々の濃度（５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を用いて６−ウエルペトリ皿または１０ｍｌフラスコ内に接種する。次いでメトトレキサートの最高濃度で増殖するクローンをさらに高いメトトレキサート濃度（１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）を含む新しい６−ウエルプレートに移す。濃度１００〜２００ｍＭで増殖するクローンが得られるまで同じ操作を反復する。例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロットによりまたは逆相ＨＰＬＣ分析により所望の遺伝子産物の発現を分析する。
トランスジェニックマウスを用いるヒトＲＳＶと反応性の抗体の発生
要約
１種またはそれ以上のＲＳＶ媒介疾患の処置のためにＲＳＶの作用を阻害するために治療的に使用できる高親和性、完全ヒト型のモノクローナル抗体を生成するためにヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニックマウスを使用した。重鎖および軽鎖の双方に対するヒト可変および定常領域抗体導入遺伝子を含む（ＣＢＡ／Ｊ ｘ
Ｃ５７／ＢＬ６／Ｊ）Ｆ２ ハイブリッドマウスをヒト組換えＲＳＶを用いて免疫化する（テイラーら（Ｔａｙｌｏｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５７９−５９１（１９９３））；ロンバーグら（Ｌｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９（１９９４））；ノイバーガー、Ｍ．（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：８２６（１９９６））；フィシュワイルドら（Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５−８５１（１９９６）））。数回の融合で完全にヒト型のＲＳＶ反応性ＩｇＧモノクローナル抗体の１個またはそれ以上のパネルが得られる。完全ヒト型ＲＳＶ抗体をさらに特性試験する。すべてＩｇＧ１κである。この抗体は１ｘ１０９ 〜９ｘ１０１２ の間のいずれかのアフィニティー定数を有することが見いだされる。これらの完全ヒト型モノクローナル抗体の高い親和性は、ＲＳＶ関連疾患、病理学または障害における治療への適用の適当な候補となる。
略字
ＢＳＡ−ウシ血清アルブミン
ＣＯ２ −二酸化炭素
ＤＭＳＯ−ジメチルスルホキシド
ＥＩＡ−酵素免疫アッセイ
ＦＢＳ−ウシ胎児血清
Ｈ２ Ｏ２ −過酸化水素
ＨＲＰ−ホースラディシュペルオキシダーゼ
ＩＤ−皮膚内
Ｉｇ−免疫グロブリン
ＲＳＶ−呼吸器合胞体ウイルス
ＩＰ−腹腔内
ＩＶ−静脈内
Ｍａｂ−モノクローナル抗体
ＯＤ−光学密度
ＯＰＤ−ｏ−フェニレンジアミン二塩酸
ＰＥＧ−ポリエチレングリコール
ＰＳＡ−ペニシリン、ストレプトマイシン、アンフォテリシン
ＲＴ−室温
ＳＱ−皮下
ｖ／ｖ−体積あたりの体積
ｗ／ｖ−体積あたりの重量
材料および方法
動物
ヒト抗体を発現できるトランスジェニックマウスは当該技術分野では公知である（そして商業的に入手でき（例えばジェンファームインターナショナル（ＧｅｎＰｈａｒｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）；アブジェニクス（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）など）、それらはヒト免疫グロブリンは発現するがマウスＩｇＭまたはＩｇκは発現しない。例えば、このようなトランスジェニックマウスは、ヒト配列免疫グロブリンの全範囲を生成するためにＶ（Ｄ）Ｊ結合、重鎖クラス切り替え、および体細胞変異を受けるヒト配列導入遺伝子を含む（ロンバーグら（Ｌｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９（１９９４）））。軽鎖導入遺伝子は、例えば生殖系列ヒトＶκ領域のほぼ半分を含む酵母人工染色体クローンよりの一部分は誘導できる。その上、重鎖導入遺伝子は、ヒトμおよびヒトγ１（フィシュワイルドら（Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５−８５１（１９９６））および／またはガンマ３定常領域の双方をコードできる。適当な遺伝子型より誘導されたマウスは、ＲＳＶへの完全ヒト型モノクローナル抗体を生成する免疫化および融合プロセスに使用できる。
免疫化
公知の方法（例えば実施例１に記載の方法）に従って生成したような免疫原としての少なくとも１種のＲＳＶタンパク質を使用する１種またはそれ以上の免疫化スケジュールは、ＲＳＶヒトハイブリドーマを生成するために使用できる。最初の数回の融合は、下記の例示としての免疫化プロトコールに従って行えるが、しかしその他の同様の公知プロトコールも使用できる。数匹の１４〜２０週齢の雌および／または外科的に去勢した雄マウスを、等量のＴＩＴＥＲＭＡＸまたは完全フロイントアジュバントを用いて最終体積１００〜４００μＬ（例えば２００）となるように乳化した組換えヒトＲＳＶタンパク質の１〜１０００μｇを用いてＩＰおよび／またはＩＤ免疫化する。それぞれのマウスは、場合により２ＳＱ部位それぞれに１００μＬ生理食塩水中の１〜１０μｇも受けることができる。マウスは、次いで１〜７、５〜１２、１０〜１８、１７〜２５および／または２１〜３１日後に、等量のＴＩＴＥＲＭＡＸまたは不完全フロイントアジュバントを用いて乳化したＲＳＶを用いてＩＰ（１〜４００μｇ）およびＳＱ（１〜４００μｇｘ２）で免疫化できる。１２〜２５および２５〜４０日後に凝血剤を用いない眼窩後穿刺によりマウスを放血する。次いで血液を室温、１時間で凝固させ、そして血清を採取しそして公知の方法に従ってＲＳＶ ＥＩＡアッセイを用いて力価検定する。反復した注入が力価を上昇させない場合に融合を行う。その場合、１００μＬ生理食塩水中で希釈した１〜４００μｇ ＲＳＶの最終ＩＶブースター注入をマウスに与えることができる。３日後に、マウスを脊椎脱臼により安楽死させそして脾臓を無菌で取り出しそして１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、および０．２５μｇ／ｍＬアンフェテリシンＢ（ＰＳＡ）を含む冷リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）１０ｍＬ中に浸漬する。ＰＳＡ−ＰＢＳを用いて脾臓を無菌で灌流して脾臓細胞を採取する。細胞を冷ＰＳＡ−ＰＢＳ中で１回洗浄し、トリパン染料排除を用いて計数しそして２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓを含むＲＰＭＩ １６４０媒体中に再懸濁する。
細胞融合
融合は、公知方法、例えば当該技術分野で公知のような方法に従って生存可能な脾臓細胞にマウス骨髄腫細胞を１：１〜１：１０の比率で行うことができる。非制限的な例として、脾臓細胞および骨髄腫細胞を一緒にペレット化できる。ペレットを３０秒間で、３７℃の５０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ／ＰＢＳ溶液（ＰＥＧ分子量１，４５０（シグマ（Ｓｉｇｍａ））の１ｍＬ中にゆっくりと再懸濁できる。次いで２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓを含むＰＲＭＩ １６４０媒体（３７℃）１０．５ｍＬを１分間でゆっくりと加えて融合を停止できる。融合細胞を５００〜１５００ｒｐｍで５分間遠心分離する。次いで、細胞をＨＡＴ媒体（２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、１０％胎児クローンＩ血清（ハイクロン（Ｈｙｃｌｏｎｅ））、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、４ｍＭ Ｌ−グルタミン、１０μｇ／ｍＬゲンタマイシン、２．５％オリジェン（Ｏｒｉｇｅｎ）培養サプリメント（フィッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ））、１０％６５３−条件調整ＲＰＭＩ １６４０／Ｈｅｐｅｓ媒体、５０μＭ ２−メルカプトエタノール、１００μＭヒポキサンチン、０．４μＭアミノプテリン、および１６μＭチミジンを含むＲＰＭＩ １６４０媒体）中に再懸濁し、次いで１５枚の９６−ウエル平底組織カルチャープレート内に２００μＬ／ウエルでプレーティングする。次いでプレートを５％ＣＯ２ および９５％空気を含む湿度調整した３７℃のインキュベーター中に７〜１０日間置く。
マウス血清内のヒトＩｇＧ ＲＳＶ抗体の検出
固相ＥＩＡは、ヒトＲＳＶタンパク質に特異性のヒトＩｇＧ抗体に関してマウス血清をスクリーニングするために使用できる。要約すると、プレートはＰＢＳ中で２μｇ／ｍＬのＲＳＶタンパク質を一晩用いてコートできる。０．０２％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎを含む０．１５ｍ生理食塩水を用いて洗浄した後、１時間、室温でＰＢＳ中の１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを２００μｌ／ウエルで用いてウエルをブロックできる。プレートは直ちに使用するかまたは将来の使用のために−２０℃に冷却する。マウス血清希釈液を５０μｌ／ウエルのＲＳＶコートプレート上、室温で１時間インキュベーションする。プレートを洗浄し次いで、１％ＢＳＡ−ＰＢＳ中のＦｃ特異性希釈１：３０，０００した５０μｌ／ウエルのＨＲＰ標識ヤギヒトＩｇＧを用いて、１時間、室温でプローブする。次いでプレートを再度洗浄しそしてクエン酸−リン酸基質溶液（０．１Ｍクエン酸および０．２Ｍリン酸ナトリウム、０．０１％Ｈ２Ｏ２および１ｍｇ／ｍＬ ＯＰＤ）の１００μＬ／ウエルを１５分間、室温で加える。次いで停止溶液（４Ｎ硫酸）を２５μＬ／ウエルで加えそしてＯＤを自動化プレート分光光度計を用いて４９０ｎｍで読み取る。
ハイブリドーマ上清中の完全ヒト型免疫グロブリンの検出
完全ヒト型免疫グロブリンを分泌する培養陽性ハイブリドーマは、適当なＥＩＡを用いて検出できる。要約すると、９６ウエルポップアウトプレート（ＶＷＲ，６１０７４４）を炭酸ナトリウム緩衝液中の１０μｇ／ｍＬヤギヒトＩｇＧ Ｆｃを一晩、４℃で用いてコートできる。次いでプレートを洗浄しそして１％ＰＳＡ−ＰＢＳ中、１時間、３７℃でブロックしそして直ちに使用するかまたは−２０℃で冷凍する。非希釈ハイブリドーマ上清をプレート上、１時間、３７℃でインキュベーションする。プレートを洗浄しそして１％ＢＳＡ−ＰＢＳ中で１：１０，０００に希釈したＨＲＰ標識ヤギヒトカッパを用い、１時間、３７℃でプローブする。次いでプレートを上記と同様に基質溶液と一緒にインキュベーションする。
完全ヒト型ＲＳＶ反応性の決定
ハイブリドーマは、上記と同様に適当なＲＩＡまたはアッセイを用いてＲＳＶへの反応性を同時にアッセイできる。例えば、上清を上記と同様にしてヤギヒトカッパＩｇＧ Ｆｃプレート上でインキュベーションし、洗浄し次いでウエルあたりに適当なカウントを有する放射能標識ＲＳＶを用いて１時間、室温でプローブする。ウエルを２回、ＰＢＳを用いて洗浄しそして結合した放射能標識ＲＳＶを適当なカウンターを用いて定量する。
ヒトＩｇＧ１κ ＲＳＶ分泌ハイブリドーマを細胞カルチャー内で増大させ、そして限界希釈によりシリーズにサブクローンできる。得られたクローン集団を増大し、そして冷媒（９５％ＦＢＳ、５％ＤＭＳＯ）中で冷凍保存しそして液体窒素中で保管できる。
イソタイプ決定
抗体のイソタイプ決定は、特定の力価に関してマウス免疫血清をスクリーニングするために使用すると同様のフォーマットでＥＩＡを用いて達成できる。ＲＳＶタンパク質は、上記のように９６−ウエルプレート上にコートできそして精製された２μｇ／ｍＬの抗体をプレート上で１時間室温でインキュベーションできる。プレートを洗浄しそして１％ＢＳＡ−ＰＢＳ中で１：４，０００に希釈したＨＲＰ標識ヤギヒトＩｇＧ１またはＨＲＰ標識ヤギヒトＩｇＧ３を用い、１時間、室温でプローブする。プレートを再度洗浄しそして上記と同様に基質溶液を用いてインキュベーションする。
ヒトＲＳＶを用いるヒトヒトＲＳＶ抗体の結合キネティクス
抗体の結合特性は、例えば、ＲＳＶ捕捉ＥＩＡおよびＢＩＡｃｏｒｅ技術を用いて適切にアッセイできる。精製したヒトＲＳＶ抗体の段階濃度を上記のようなアッセイにおいてＲＳＶの２μｇ／ｍＬでコートしたＥＩＡプレートへの結合に関して評価できる。次いで、ＯＤは、相対結合効率を示す半対数プロットとして表される。
定量結合定数は、例えば下記のようにして、または他の公知の適当な方法により得ることができる。ＢＩＡｃｏｒｅ ＣＭ−５（カルボキシメチル）チップをＢＩＡｃｏｒｅ２０００単位内に配置する。ＨＢＳ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．３Ｍ ＥＤＴＡ、０．００５％ｖ／ｖ Ｐ２０界面活性剤、ｐＨ７．４）をチップのフローセル上に、安定な基線が得られるまで５μＬ／分で流す。２００μＬ水中のＥＤＣ（Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチル−アミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩）の１５ｍｇの溶液（１００μＬ）を、２００μＬ水中のＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）の２．３ｍｇの溶液１００μＬに加える。得られた溶液４０μＬをチップ上に注加する。ヒトＲＳＶ（１０ｍＭ酢酸ナトリウム中の１５μｇ／ｍＬ、ｐＨ４．８）の溶液６μＬをチップ上に注加すると、約５００ＲＵの増加をもたらす。緩衝液をＴＢＳ／Ｃａ／Ｍｇ／ＢＳＡランニングバッファー（２０ｍＭトリス、０．１５Ｍ塩化ナトリウム、２ｍＭ塩化カルシウム、２ｍＭ酢酸マグネシウム、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、２５μｇ／ｍＬ ＢＳＡ、ｐＨ７．４）に変更しそしてチップ上を一晩流してそれを平衡化しそしてあらゆる未反応スクシンイミドエステルを加水分解するかまたはそれをキャップする。
抗体をランニングバッファー中に３３．３３、１６．６７、８．３３および４．１７ｎＭに溶解させる。流量を３０μＬ／分にそして装置温度を２５℃に調節する。２個のフローセルをキネティック試験に使用し、その一個ではその上にＲＳＶタンパク質を不動体化し（試料）そして第二のものは非誘導化フローセル（ブランク）である。それぞれの抗体濃度の１２０μＬをフローセル上に３０μＬ／分で注加し（会合相）、次いで中断されない３６０秒間の緩衝液流を続ける（解離相）。２Ｍチオシアン酸グアニジンのそれぞれ３０μＬの２回の連続注加によりチップの表面を再生（呼吸器合胞体ウイルス／抗体複合体解離）する。
データの分析は、当該技術分野では公知のように、ＢＡＩ評価３．０またはＣＬＡＭＰ２．０を用いて行われる。それぞれの抗体濃度に対して、ブランクセンソグラム（ｓｅｎｓｏｇｒａｍ）を試料センソグラムより差し引く。全般的な適合を解離（ｋｄ、秒−１）および会合（ｋａ、秒−１）の双方について行いそして解離定数（ＫＤ、モル）を算出した（ｋｄ／ｋａ）。抗体親和性が、捕捉された抗体のＲＵが＞１００であるために十分高い場合に、抗体の追加希釈を行う。
結果および考察
ヒトＲＳＶモノクローナル抗体の生成
数回の融合を行いそしてそれぞれの融合では１５枚のプレート内に接種し（プレート１４４０枚／融合）これはヒトＲＳＶタンパク質に特異性の数ダースの抗体を生成する。これらの内で、一部はヒトおよびマウスＩｇ鎖の組み合わせより成ることが見いだされる。残存したハイブリドーマ分泌ＲＳＶ抗体は、ヒト重鎖および軽鎖のみよりなる。ヒトハイブリドーマの中ですべてがＩｇＧ１κであると期待される。
ヒトヒトＲＳＶ抗体の結合キネティクス
ＥＬＩＳＡ分析は、これらのハイブリドーマの大部分またはすべてからの精製抗体が濃度依存性の様式でＲＳＶタンパク質を結合することを確認する。図１〜２は、これら抗体の相対結合効率の結果を示す。この場合に、その同族体抗原（エピトープ）に対する抗体の結合活性を測定する。ＥＡＩプレートへＲＳＶを直接結合させることがタンパク質の変性を起こすことがあり、そしてみかけの結合親和性は非変性タンパク質への結合の反映ではないことを認めなければならない。５０％結合が濃度の一定の範囲内で見いだされる。
定量結合定数がヒト抗体のＢＩＡｃｏｒｅ分析を用いて得られそしてヒトモノクローナル抗体の数種が１ｘ１０−８〜７ｘ１０−１２の範囲内のＫＤを有する非常に高い親和性であることを明らかにする。
結論
ヒトＲＳＶを用いて免疫化されたヒト可変および定常領域抗体導入遺伝子を含むハイブリッドマウスよりの脾細胞を用いて数回の融合を行う。ＩｇＧ１κイソタイプの数種の完全ヒト型ＲＳＶ反応性ＩｇＧモノクローナル抗体の一組が生成する。完全ヒト型ＲＳＶ抗体をさらに特性試験する。数種の生成した抗体は１ｘ１０８〜９ｘ１０１２の範囲内の親和性定数を有する。これらの完全ヒト型モノクローナル抗体の予想以上に高い親和性は、ＲＳＶ依存性疾患、病理または関連病状における治療適用に適させる。
本発明が上記の説明および実施例に特定して記載されたものとは異なった様式で実施できることは明らかである。
本発明の多数の変更および変種が上記の教示を参考にして可能であり、従って特許請求の範囲内にある。
図１は、本発明のＲＳＶ抗体をコードする二種の重鎖および軽鎖抗体アミノ酸配列を示す。 図２Ａ〜Ｇは、本発明のＲＳＶ抗体をコードする二種の重鎖領域コーディングＤＮＡの非限定例を示す。 図３は、図２Ａ〜Ｇ中のＤＮＡ配列に相当する二種の重鎖アミノ酸配列の非限定例を示し、ここでＣＤＲ１、２＆３、可変および定常領域およびシグナルペプチドを示し、ならびに別の配列との間の変化を示す。 図４は、本発明のＲＳＶ抗体内に使用できる四種の異なる軽鎖アミノ酸配列の非限定例を示し、ここでＣＤＲ１、２＆３、可変および定常領域およびシグナルペプチドを示し、ならびに別の配列との間の変化を示す。 図５Ａ〜Ｆは、図４中のアミノ酸配列に相当する本発明のＲＳＶ抗体をコードする四種の別の軽鎖領域コーディングＤＮＡ配列の非限定例を示す。
【配列表】
Figure 2005522996
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Claims (24)

  1. 配列番号７ないし１２の少なくとも１個の重鎖および少なくとも１個の軽鎖を含んでなる少なくとも１個の可変領域を含んでなる、少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体。
  2. （ｉ）配列番号１ないし３の少なくとも１個の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列の少なくとも２個、または（ｉｉ）配列番号４ないし６の少なくとも１個の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の少なくとも２個のいずれかを含んでなる、少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体。
  3. 配列番号１ないし６の少なくとも１個のアミノ酸配列を有する少なくとも１個の重鎖または軽鎖ＣＤＲを含んでなる、少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体。
  4. 配列番号１、２、３、４、５、または６の少なくとも１個のアミノ酸配列を有する少なくとも１個の重鎖または軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体と、ＲＳＶポリペプチドの同じ領域に結合する、少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体。
  5. 配列番号７〜１２の少なくとも１から３個ないし全アミノ酸配列を含んでなる少なくとも１個のエピトープに特異的に結合し、少なくとも１個のヒトＣＤＲを含んでなる、少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体。
  6. 少なくとも１０−９Ｍ、少なくとも１０−１０Ｍ 少なくとも１０−１１ Ｍ、または少なくとも１０−１２Ｍより選択される少なくとも１種の親和性でＲＳＶに結合する、請求項１ないし５のいずれかに記載のＲＳＶ抗体。
  7. 少なくとも１個のＲＳＶポリペプチドの少なくとも１つの活性を本質的に調節する、請求項１ないし６のいずれかに記載のＲＳＶ抗体。
  8. 請求項１ないし６に従いそして配列番号１ないし６の少なくとも１個のヒトＣＤＲを有する、少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体をコードする単離された核酸。
  9. 請求項９に記載の単離された核酸を含んでなる、単離された核酸ベクター。
  10. 請求項９に記載の単離された核酸を含んでなる、原核または真核宿主細胞。
  11. 該宿主細胞が、ＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１、ＣＨＯ、ＢＳＣ−１、Ｈｅｐ Ｇ２、６５３、ＳＰ２／０、２９３、ＨｅＬａ、骨髄腫、もしくはリンパ腫細胞、またはそれらのいずれかの誘導体、不死化、もしくは形質転換した細胞より選択される少なくとも１種である、請求項１０に記載の宿主細胞。
  12. ＲＳＶ抗体が検出可能または回収可能な量で発現されるように、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｓｉｔｕの条件下で請求項９に記載の核酸を翻訳することを含んでなる、少なくとも１種のＲＳＶ抗体を産生するための方法。
  13. 配列番号９の少なくとも１から３個ないし全アミノ酸配列を含んでなる少なくとも１個のエピトープに特異的に結合し、少なくとも１個のヒトＣＤＲを有する請求項１ないし６のいずれかに記載の少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体、および少なくとも１種の製薬学的に許容できるキャリヤまたは希釈剤を含んでなる組成物。
  14. 少なくとも１個の検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸管（ＧＩ）薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質バランスに関する薬、血液剤、抗腫瘍薬、免疫抑制剤、眼、耳もしくは鼻の薬剤、局所薬、栄養剤、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストより選ばれる少なくとも１種の化合物またはポリペプチドをさらに含んでなる、請求項１３に記載の組成物。
  15. 請求項１ないし６のいずれかに記載の少なくとも１種のＲＳＶ抗体に特異的に結合する、抗イディオタイプ抗体または断片。
  16. （ａ）請求項１ないし６のいずれかに記載の少なくとも１種の抗体の有効量を含んでなる組成物を、細胞、組織、器官または動物と接触またはそれらに投与する
    ことを含んでなる、細胞、組織、器官または動物のＲＳＶ関連状態を診断または処置するための方法。
  17. 上記有効量が、該細胞、組織、器官または動物の１キログラムあたり、０．００１〜５０ｍｇである、請求項１６に記載の方法。
  18. 上記の接触または上記の投与が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、窩内、腔体内、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、損傷内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻内または経皮より選択される少なくとも１種の様式による、請求項１６に記載の方法。
  19. 上記（ａ）の接触または投与を行なう前、同時またはその後に少なくとも１個の検出可能な標識もしくはレポーター、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸管（ＧＩ）薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質バランスに関する薬剤、血液剤、抗腫瘍薬、免疫抑制剤、眼、耳もしくは鼻に関する薬剤、局所薬、栄養剤、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストより選ばれる少なくとも１種の化合物またはポリペプチドの有効量を含んでなる少なくとも１種の組成物を投与することをさらに含んでなる、請求項１６に記載の方法。
  20. 非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、窩内、腔体内、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、損傷内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻内または経皮より選択される少なくとも１種の様式により、請求項１ないし６のいずれかに記載の少なくとも１種のＲＳＶ抗体を接触または投与するために適する、上記の少なくとも１種のＲＳＶ抗体を含んでなる医療用デバイス。
  21. 包蔵材料および請求項１ないし６のいずれかに記載の少なくとも１種のＲＳＶ抗体の溶液または凍結乾燥された形を含んでなる容器を含んでなる、ヒトの薬剤学的または診断の用途に使用するための製品。
  22. 該容器が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、窩内、腔体内、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、損傷内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻内または経皮送達デバイスまたはシステムの構成要素である、請求項２１に記載の製品。
  23. 請求項１ないし６に記載の少なくとも１種の単離された哺乳動物ＲＳＶ抗体を産生する方法であって、該抗体の回収可能な量を発現できる宿主細胞またはトランスジェニック動物またはトランスジェニック植物または植物細胞を提供することを含んでなる上記方法。
  24. 請求項２３に記載された方法により生産された少なくとも１種のＲＳＶ抗体。
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