JP2005515958A

JP2005515958A - Synthesis of panclastatin prodrug

Info

Publication number: JP2005515958A
Application number: JP2002583375A
Authority: JP
Inventors: アールペティットジョージ; オーアールアールブライアン; ダッキーシルビア
Original assignee: アリゾナボードオブリーゼンツ
Priority date: 2002-04-17
Filing date: 2002-04-17
Publication date: 2005-06-02

Abstract

（＋）パンクラチスタチンをテトラアセテイトで選択的に保護し、保護されたパンクラチスタチンをジベンジルクロロフォスフェイトでリン酸化し、その後、２当量のナトリュームメトキシドと反応させてジナトリューム（＋）パンクラチスタチンフォスフェイトを生じながら、ナトリュームメトキシドでアセテイトとベンジル保護基を分割することによってパンクラチスタチンプロドラッグを合成する。 (+) Pancratistatin is selectively protected with tetraacetate, and the protected pancratistatin is phosphorylated with dibenzyl chlorophosphate and then reacted with 2 equivalents of sodium methoxide to give dinatrum (+ ) Synthesize a panclastatin prodrug by cleaving the acetate and benzyl protecting groups with sodium methoxide while producing panclastatin phosphate.

Description

Detailed Description of the Invention

本件は２００１年４月１８日に提出したＳｅｒｉａｌＮｏ．６０／２８４，７１７のＵＳ特許出願に基づく。
（序文）
本発明は、概して（＋）−パンクラチスタチンフォスフェイトプロドラッグと１４金属およびそのアンモニュームカチオン誘導体の新しい有効な合成の発見に関する。図１に２ａで表示したパンクラチスタチンフォスフェイトプロドラッグは水に優れた可溶性を有し、従ってヒトのガンの治療に容易に投与できることが発見された。
この研究は、一部ＤｉｖｉｓｉｏｎｏｆＣａｎｃｅｒＴｒｅａｔｍｅｎｔ，ＮａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＤＨＨＳによって授与されたＯｕｔｓｔａｎｄｉｎｇＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒＧｒａｎｔＣＡ−４４３４４−０１−１１によっている。合衆国政府はこの発明に権利を有する。This case was reported in Serial No. filed on April 18, 2001. Based on US patent application 60 / 284,717.
(preface)
The present invention relates generally to the discovery of a new and effective synthesis of (+)-pancratistatin phosphate prodrug and 14 metals and their ammonium cation derivatives. It has been discovered that the pancratistatin phosphate prodrug, labeled 2a in FIG. 1, has excellent solubility in water and can therefore be easily administered for the treatment of human cancer.
This work is in part by Outstanding Investigator Grant CA-44344-01-11 awarded by Division of Cancer Treatment, National Cancer Institute, DHHS. The United States government has rights to this invention.

（発明の背景）
制ガン剤フェナンスリドン（＋）−パンクラチスタチン（１ａ）はＨａｗａｉａｎＨｙｍｅｎｏｃａｌｌｉｓ（公式にはＰａｎｃｒａｔｉｕｍ）ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓのバルブから遊離された（Ｐｅｔｔｉｔｅｔａｌ．，１９８４ａ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ，ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，１６９３；Ｐｅｔｔｉｔｅｔａｌ．，１９８４ｂ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ，４７，１０１８）。その構造はＮＭＲ分光法によって決定され、その７−メトキシ誘導体（１ｂ）のＸ−線結晶分析によって確認された。(Background of the Invention)
The anticancer drug phenanthridone (+)-pancratistatin (1a) was released from the valve of the Hawaian Hymenocallis (formally Pancranium) litoritalis (Pettet et al., 1984a, Journal of the Chemical et al. 93). , 1984b, Journal of Natural Products, 47, 1018). Its structure was determined by NMR spectroscopy and confirmed by X-ray crystallographic analysis of its 7-methoxy derivative (1b).

次に、パンクラチスタチン（１ａ）は、ガン細胞ラインのＵ．Ｓ．ＮａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）パネルに対して包含するｉｎｖｔｒｏ（生体外）における強力なガン細胞成長抑制活（Ｐｅｔｔｉｔｅｔａｌ．，１９８６，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ，４９，９９５；１９９３ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ，５６，１６８２）および一連のｉｎｖｉｖｏ（生体内）実験的ガンシステムを発揮することが発見された。関係分野の見込みはある範囲のＲＮＡウイルスに対するその活性を包含する（Ｇａｂｒｉｅｌｓｅｎｅｔａｌ．，１９９２，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ，５５，１５６９）。比較的低い自然発生量（乾燥バルブ〜０．０３９％）および臨床的に有用な抗ガン剤としてのその増大するポテンシャルにより、パンクラチスタチンは全合成に対する重要なターゲットとなった。（±）−パンクラチスタチンの最初の全合成は１９８９年に報告された（ＤａｎｉｓｈｅｆｓｋｙａｎｄＹｏｎＬｅｅ，１９８９，ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ１１１，４８２９）。天然の（＋）−パンクラチスタチン（１ａ）の六つの立体特異性の合成がその後完成された（Ｔｉａｎｅｔａｌ．，１９９５，ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ，１１７，３６４３；ＴｒｏｓｔａｎｄＰｕｌｌｅｙ，１９９５，ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ，１１７，１０１４３；Ｈｕｄｌｉｃｋｙｅｔａｌ．，１９９６，ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ，１１８，１０７５２；Ｄｏｙｌｅｅｔａｌ．，１９９７，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５３，１１１５３；ＭａｇｎｕｓａｎｄＳｅｂｈａｔ，１９９８，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５４，１５５０９；Ｐｅｔｉｔｅｔａｌ．，２０００，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｉｎｐｒｅｐｒａｔｉｏｎ）。一方、いくつかの部分合成が記載された（Ｌｏｐｅｓｅｔａｌ．，１９９２，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ，３３，６７７５；ＡｎｇｌｅａｎｄＬｏｕｉｓ，１９９３，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ，３４，４７５１；Ｇｒｕｂｂｅｔａｌ．，１９９９，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ，４０，２６９１）。 Next, pancratistatin (1a) is a U.S. cancer cell line. S. Potent cancer cell growth inhibitory activity in vitro (Petit et al., 1986, Journal of Natural Products, 49, 995; 1993 Journal of Natural Products 56) inclusive against the National Cancer Institute (NCI) panel. 1682) and a series of in vivo experimental cancer systems have been discovered. The promise of the relevant field encompasses its activity against a range of RNA viruses (Gabrielsen et al., 1992, Journal of Natural Products, 55, 1569). Due to its relatively low naturally occurring amount (dry valve ˜0.039%) and its increasing potential as a clinically useful anticancer agent, pancratistatin has become an important target for total synthesis. The first total synthesis of (±) -pancratisatin was reported in 1989 (Danishefsky and Yon Lee, 1989, Journal of the American Chemical Society 111, 4829). The synthesis of the six stereospecificities of natural (+)-pancratistatin (1a) was subsequently completed (Tian et al., 1995, Journal of the American Chemical Society, 117, 3643; Trost and Pulley, 1995, Journal of the American Chemical Society, 117, 10143; Hudricky et al., 1996, Journal of the American Chemical Society, 118, 10752; Doyle et al., 1997. 54, 15509; Peti et al., 2000, Journal of Organic Chemistry, in prepration). Meanwhile, some partial syntheses have been described (Lopes et al., 1992, Tetrahedron Letters, 33, 6775; Angle and Louis, 1993, Tetrahedron Letters, 34, 4751; Grubb et al., 1999, Tetrahedron 40 et al. , 2691).

パンクラチスタチン（１ａ）の臨床的開発は以前はその水溶性の低さ（５３μｇ／ｍｌ）によって妨害された。この問題は、著しく改良された水溶特性を発揮したフォスフェイトプロドラッグの合成を開発することによって解決され（Ｐｅｔｔｉｔｅｔａｌ．，１９９５ａ，Ａｎｔｉ−ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ，１０，２４３）、マウスＰ３８８リンパ性白血病細胞に対し均等な活性を発揮することが発見された。おそらく、ヒトの非時異性のホスホターゼはフォスフェイトプロドラッグを加水分解し続いて（＋）パンクラチスタチン（１ａ）を放出するので、フォスフェイトの結合もまた生体内システムに対して有益である。比較的不安定なリン酸化剤ジベンジル−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミド）−フォスフィンは、我々がフォスフェイト（２ａ）の最初の合成に使用したものであるが、決して望ましくなく、それ自体可変を示すリン酸化反応を生じるので（価値のある出発物質の回収なしに（５）の収率０〜９１％）、我々はより有効なアプローチを調査した。ここに、パンクラチスタチンプロドラッグ（２ａ）のより簡単な合成を記載する。この新しい合成は前臨床現象に対する量の面で純粋薬物（２ａ）を提供するのに使用されるだろう。更に、ヒトのガン細胞の生長および溶解性（水に対する）についての効果を評価するために、一連のフォスフェイト金属とアンモニュームカチオン塩誘導体（２ｂ−ｏ）を製造した。 The clinical development of pancratistatin (1a) was previously hampered by its low water solubility (53 μg / ml). This problem has been solved by developing the synthesis of phosphate prodrugs that exerted significantly improved water-soluble properties (Pettit et al., 1995a, Anti-Cancer Drug Design, 10, 243) and mouse P388 lymphocytic leukemia. It has been discovered that it exhibits an equivalent activity on cells. Presumably, the binding of phosphate is also beneficial for in vivo systems, since human non-isomeric phosphotases hydrolyze phosphate prodrugs and subsequently release (+) pancratistatin (1a). The relatively labile phosphorylating agent dibenzyl- (N, N-diisopropylamide) -phosphine, which we used in the initial synthesis of phosphate (2a), is never desirable and shows itself variable Since a phosphorylation reaction occurred (0-91% yield of (5) without recovery of valuable starting material), we investigated a more effective approach. Here, a simpler synthesis of panclastatin prodrug (2a) is described. This new synthesis will be used to provide pure drug (2a) in terms of quantity for preclinical phenomena. In addition, a series of phosphate metals and ammonium cation salt derivatives (2b-o) were prepared to evaluate the effects on growth and solubility (to water) of human cancer cells.

以下に見られるこれらの目的は、以下の詳細な記載から容易に認められるように、著しく予期されない態様において本発明によって容易に達成される。 These objectives found below are readily achieved by the present invention in a highly unexpected manner, as will be readily appreciated from the following detailed description.

（好ましい具体例の詳細な説明）
（＋）−パンクラチスタチン（１ａ）は前記のごとくＨｙｍｅｎｏｃａｌｌｉｓｌｉｔｔｏｒａｌｉｓから単離した（Ｐｅｔｔｉｔｅｔａｌ．，１９９５ｂ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ，５８，３７）。無水酢酸、ピリジン、ジベンジルフォスファイト、Ｎ−エチルジイソｐロピルアミンおよび１０％パラジューム炭素触媒はＬａｎｃａｓｔｅｒＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．から購入した。四塩化炭素、４−ジメチルアミノピリジン、無水硫酸マグネシュウム（ＭｇＳＯ_４ジヒドロゲンフォスフェイトカリューム、フォスフォモリブデン酸および酢酸亜鉛二水加物はＳｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．から購入した。ナトリュームメトキシド、水酸化リチューム一水加物、ピペラジン（無水）およびモルフォリンはＡｃｒｏｓＯｒｇａｎｉｃｓから購入した。酢酸カルシュームおよび酢酸マンガンはＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｏ．から、酢酸マグネシュームキニン、キニジンおよびイミダゾールはＪ．Ｔ．ＢａｋｅｒＣｈｅｍ．から購入した。炭酸ルビジュームおよび炭酸セシュームはＡｌｆａＰｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．から、そして酢酸カリュームはＭａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔから供給された。溶剤はすべて使用前に再蒸留し、必要に応じ乾燥した。水溶液の溶剤抽出物は硫酸マグネシュームで乾燥した。金属塩の１．０Ｍ溶液は蒸留水で、アミンの１．０Ｍ溶液は乾燥メタノールで製造した。(Detailed description of preferred embodiments)
(+)-Panclatistatin (1a) was isolated from Hymenocallis littoralis as described above (Pettit et al., 1995b, Journal of Natural Products, 58, 37). Acetic anhydride, pyridine, dibenzyl phosphite, N-ethyldiisopropylamine and 10% paradium carbon catalyst are available from Lancaster Synthesis, Inc. Purchased from. Carbon tetrachloride, 4-dimethylaminopyridine, anhydrous magnesium sulfate (MgSO ₄ dihydrogen phosphate calf, phosphomolybdic acid and zinc acetate dihydrate were purchased from Sigma-Aldrich Chemical Co. sodium methoxide, hydroxide Rituum monohydrate, piperazine (anhydrous) and morpholine were purchased from Acros Organics, calcium acetate and manganese acetate were purchased from Fisher Scientific Co., and magnesium quinine acetate, quinidine and imidazole were purchased from JT Baker Chem. Rubidium carbonate and sesame carbonate are supplied by Alfa Products, Inc. and caloric acetate is supplied by Mallinckrodt. All solvents were redistilled before use and dried as needed, solvent extracts of aqueous solutions were dried with magnesium sulfate, 1.0M metal salt solution was distilled water, 1.0M amine solution was dry methanol. Manufactured with.

反応はすべて特に示さない限り窒素気中で行われ、その進行はＡｎａｌｔｅｃｈシリカゲルＧＨＬＦＵｎｉｐｌａｔｅｓ（長−および短−波ＵＶ下で見える）を使用する薄層クロマトグラフィによって確認され、そしてフォスフォモリブジック酸試薬のエタノール溶液中で行われた。コラムンクロマトグラフィはＥ．Ｍｅｒｃｋからシリカゲル６０（２３０〜４００メッシュ）で行われた。ＳｅｐｈａｄｅｘＲＧ−１０は（使用前に）１Ｎ苛性ソーダ、水、１Ｎ酢酸で洗い、最後にｐＨが中性まで水洗した。 All reactions are carried out in nitrogen unless otherwise indicated, and the progress is confirmed by thin layer chromatography using Analtech silica gel GHLF Uniplates (visible under long- and short-wave UV) and phosphorophilic acid reagent In ethanol solution. Columnon chromatography Performed on Merck from silica gel 60 (230-400 mesh). Sephadex® G-10 was washed with 1N caustic soda, water, 1N acetic acid (before use) and finally with water until the pH was neutral.

融点はすべてＥｌｅｃｔｒｏｔｈｅｒｍａｌデジタル融点装置モデルＩＡ９２００で測定した。補正せず。光学回転値はＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ２４１偏光計を用いて記録した。ＩＲスペクトルはＮｉｃｏｌｅｔＦＴＩＲモデルＭＸ−１装置から記録した。ＥＩＭＳスペクトルはＭＡＴ３１２マススペクトロメーターで得た。高−および低−解像ＦＡＢスペクトルはグリセロール−トリグリセロールマトリックスを用いてＫｒａｔｏｓＭＳ−５０マススペクトロメーター（ＭｉｄｗｅｓｔＣｅｎｔｅｒｆｏｒＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＮｅｂｒａｓｋａ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，ＮＥ）で得られた。^１Ｈ−，^１３Ｃ−および^３１Ｐ−ＮＭＲスペクトルはＶａｒｉａｎＧｅｍｉｎｉ３００，４００または５００ＭＨｚ装置で記録した。元素分析はＧａｌｂｒａｉｔｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮ）によって測定した。All melting points were measured with an Electrothermal digital melting point model IA9200. Without correction. Optical rotation values were recorded using a Perkin Elmer 241 polarimeter. IR spectra were recorded from a Nicolet FTIR model MX-1 instrument. EIMS spectra were obtained on a MAT312 mass spectrometer. High- and low-resolution FAB spectra were obtained on a Kratos MS-50 mass spectrometer (Midwest Center for Mass Spectrometry, University of Nebraska, Lincoln, NE) using a glycerol-triglycerol matrix. ¹ H-, ¹³ C- and ³¹ P-NMR spectra were recorded on a Varian Gemini 300, 400 or 500 MHz instrument. Elemental analysis was performed by Galbraith Laboratories, Inc. (Knoxville, TN).

１，２，３，４−Ｏ−テトラアセトキシ−パンクラチスタチン（４）
次の方法は我々の以前の方法に対し有用な改良を表す（Ｐｅｔｔｉｔｅｔａｌ．，１９９５ａ，Ａｎｔｉ−ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ，１０，２４３）。ピリジン（５０ｍｌ）中（＋）パンクラチスタチン（１ａ，純度８２％、８．６ｇ，２１．７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に室温において無水酢酸（４５ｍｌ，０．４８ｍｏｌ）と４−ジメチルアミノピリジン（２００ｍｇ，１．６ｍｍｏｌ）を加えた。１６時間攪拌の後、混合物に氷（１００ｍｌ）を加え、更に１時間攪拌を続けた。得られた混合物をジクロロエタン（２ｘ１００ｍｌ）で抽出し、そして混合した有機抽出物は乾燥し、ろ過し、真空で乾固した。褐色油状の残留物（１４．３ｇ）にピリジン（８０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）とを加え、その混合物を１時間還流下で加熱した。氷（５０ｍｌ）を加え、冷却した混合物をジクロロメタン（２ｘ１００ｍｌ）で抽出した。混合した有機抽出物は乾燥し、ろ過し、真空で乾燥した。得られた残留物は、ジクロロメタン中１．５％メタノールで抽出するシリカゲル上カラムクロマトグラフィによって精製して白色無定形の粉末を得た。これをエタノールから再結晶して表題の化合物を無色針状物として得た（４、７．１ｇ，６６％）；ｍ．ｐ．２４０℃｛ｍ．ｐ．ｌｉｔ．（Ｐｅｔｔｉｔｅｔａｌ．，１９９５ａＡｎｔｉＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ，１０，２４３）２４３−２４６℃｝：［α］_Ｄ ^２７＋３１．５°（ｃ１．０４，ＤＣＭ）｛［α］_Ｄｌｉｔ．（ｐｅｔｔｉｔｅｔａｌ．，１９９５ａ，Ａｎｔｉ−ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ，１０，２４３）＋３０．４°（ｃ０．７２，ＤＣＭ）｝．得られたＩＲ，^１Ｈ−ＮＭＲおよび^１３Ｃ−ＮＭＲは前に報告した通りである。1,2,3,4-O-tetraacetoxy-pancratistatin (4)
The following method represents a useful improvement over our previous method (Pettit et al., 1995a, Anti-Cancer Drug Design, 10, 243). To a stirred solution of (+) pancratistatin (1a, 82% purity, 8.6 g, 21.7 mmol) in pyridine (50 ml) at room temperature with acetic anhydride (45 ml, 0.48 mol) and 4-dimethylaminopyridine (200 mg, 1.6 mmol) was added. After stirring for 16 hours, ice (100 ml) was added to the mixture and stirring was continued for an additional hour. The resulting mixture was extracted with dichloroethane (2 × 100 ml) and the combined organic extracts were dried, filtered and evaporated to dryness in vacuo. To the brown oily residue (14.3 g) was added pyridine (80 ml) and water (40 ml) and the mixture was heated at reflux for 1 hour. Ice (50 ml) was added and the cooled mixture was extracted with dichloromethane (2 × 100 ml). The combined organic extracts were dried, filtered and dried in vacuo. The resulting residue was purified by column chromatography on silica gel extracted with 1.5% methanol in dichloromethane to give a white amorphous powder. This was recrystallized from ethanol to give the title compound as colorless needles (4, 7.1 g, 66%); m. p. 240 ° C. {m. p. lit. (Pettit et al., 1995a Anti Cancer Drug Design, 10, 243) 243-246 ° C.}: [α] _D ²⁷ + 31.5 ° (c 1.04, DCM) {[α] _D lit. (Pettit et al., 1995a, Anti-Cancer Drug Design, 10, 243) + 30.4 ° (c 0.72, DCM)}. The obtained IR, ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR are as reported previously.

１，２，３，４−Ｏ−テトラアセトキシ−７−Ｏ−ジベンジルオキシフォスフォリル−パンクラチスタチン（５）
−３０℃（エチレングリコール／ドライアイス）に冷却したアセトニトリル（３０ｍｌ）中１，２，３，４−Ｏ−テトラアセトキシ−パンクラチスタチン（４，２．６０ｇ，５．２７ｍｏｌ）の溶液に、四塩化炭素（２．６ｍｌ，２６．９ｍｍｏｌ），Ｎ−エチルジイソプロピルアミン（２．０ｍｌ，１１．６ｍｍｏｌ）と４−ジメチルアミノピリジン（７１ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）を加えた。続いてジベンジルフォスファイト（１．８０ｍｌ，８．１５ｍｍｏｌ）を徐々にて滴下添加し、混合物を３時間攪拌した。反応はカリュームジハイドロゼンフォスフェイトの水溶液（０．５Ｍ，５０ｍｌ）の添加で終わり、室温で３０分攪拌した。得られた混合物はジクロロメタン（２ｘ５０ｍｌ）で抽出し、混合した有機抽出物は乾燥し、ろ過し、溶媒は真空で蒸発した。得られた黄色の油は、低温（４℃）において、シリカゲル上カラムクロマトグラフィによりそしてジクロロメタン中０．８％メタノールで抽出して精製した。与えられた処置により、出発物質１，２，３，４−Ｏ−テトラアセトキシ−パンクラチスタチン（４，０．３０ｇ，１１％）を、続いて無色の結晶性固体としてそのジベンジルフォスフェイト誘導体（５，３．４４ｇ，８７％）を回収した。
ｍ．ｐ．１１９℃［ｍ．ｐ．ｌｉｔ．（Ｐｅｔｔｉｔｅｔａｌ．，１９９５ａ，Ａｎｔｉ−ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ，１０，２４３）１１９−１２１℃］；［α］Ｄ^２７＋５９．３°（ｃ１．３３，ＤＣＭ）｛［α］Ｄ^３３ｌｉｔ．（Ｐｅｔｔｉｔｅｔａｌ．，１９９５ａ，Ａｎｔｉ−ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ，１０，２４３）＋６９．１°（ｃ０．８９，ＤＣＭ）｝；ｖ_ｍａｘ（ＫＢｒｄｉｓｃ）２９１０ｗ，１７５５ｓ，１６７４ｓ，１４８５ｓ，１３７３ｓ，１２２１ｓ，１０３７ｂ，８７１ｗ，７３８ｗ，４９３ｗｃｍ^−１；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）２．０４（３Ｈ，ｓ，ＯＡｃ），２．０６（３Ｈ，ｓ，ＯＡｃ），２．０７（３Ｈ，ｓ，ＯＡｃ），２．１６（３Ｈ，ｓ，ＯＡｃ），３．４０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ３，１３Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ），４．２６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１１，１３Ｈｚ，Ｈ−４ａ），５．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ３，１１Ｈｚ，Ｈ−４），５．２０（１Ｈ，ｔ，Ｊ３Ｈｚ，Ｈ−２），５．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ７，１２Ｈｚ，ＣＨ_ＡＨ_ＢＰｈ），５．２６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ７，１２Ｈｚ，ＣＨ_ＡＨ_ＢＰｈ），５．３１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ７，１２Ｈｚ，ＣＨ_ＣＨ_ＤＰｈ），５．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ７，１２Ｈｚ，ＣＨ_ＣＨ_ＤＰｈ），５．４３（１Ｈ，ｔ，Ｊ３Ｈｚ，Ｈ−３），５．５４（１Ｈ，ｔ，Ｊ３Ｈｚ，Ｈ−１），５．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ１Ｈｚ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ１Ｈｚ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），６．１０（１Ｈ，ｂｓ，５−ＮＨ），６．４３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１０），７．３０−７．４２（１０Ｈ，ｂｍ，２ｘＰｈ）；δｃ／ｐｐｍ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）１７０．１（Ｃ−１においてＣ＝Ｏ），１６９．７（Ｃ−３においてＣ＝Ｏ），１６９．０（Ｃ−４においてＣ＝Ｏ），１６８．２（Ｃ−２においてＣ＝Ｏ），１６２．６（Ｃ−６），１５２．４（Ｃ−９），１３９．３（ｄ，Ｊ_ＰＣ４Ｈｚ，Ｃ−８），１３６．０（ｄ，Ｊ_ＰＣ８Ｈｚ，ＣｏｆＰｈ），１３５．９（ｄ，Ｊ_ＰＣ８Ｈｚ，ＣｏｆＰｈ），１３４．１（ｄ，Ｊ_ＰＣ７Ｈｚ，Ｃ−７），１３３．０（Ｃ−１０ａ），１２８．４２（ＣＨｏｆＰｈ），１２８．３７（ＣＨｏｆＰｈ），１２８．３（ＣＨｏｆＰｈ），１２７．９（ＣＨｏｆＰｈ），１２７．７（ＣＨｏｆＰｈ），１１７．０（Ｃ−６ａ），１０２．７（ＯＣＨ_２Ｏ），１０１．５（Ｃ−１０），７１．６（Ｃ−４），７０．１（ｄ，Ｊ_ＰＣ５Ｈｚ，ＣＨ_２Ｐｈ），７０．０（ｄ，Ｊ_ＰＣ６Ｈｚ，ＣＨ_２Ｐｈ），６７．６（Ｃ−２），６６．７（Ｃ−３），６６．４（Ｃ−１），４７．６（Ｃ−４ａ），４０．３（Ｃ−１０ｂ），２０．７６（Ｃ−２においてＣＨ_３），２０．７３（Ｃ−３においてＣＨ３），２０．６７（Ｃ−４においてＣＨ_３），２０．５（Ｃ−１においてＣＨ_３）；δ_Ｐ／ｐｐｍ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，８５％Ｈ_３ＰＯ_４に対して）−６．６１（ｓ，^１Ｈ分離）；ｍ／ｚ（ＥＩ）４９３［Ｍ−Ｐ（Ｏ）（ＯＢｎ）_２，１０％］，２７１（３５），９１（４０），６１（４０，４４（１００）．1,2,3,4-O-tetraacetoxy-7-O-dibenzyloxyphosphoryl-pancratistatin (5)
To a solution of 1,2,3,4-O-tetraacetoxy-pancratistatin (4,2.60 g, 5.27 mol) in acetonitrile (30 ml) cooled to −30 ° C. (ethylene glycol / dry ice) Carbon chloride (2.6 ml, 26.9 mmol), N-ethyldiisopropylamine (2.0 ml, 11.6 mmol) and 4-dimethylaminopyridine (71 mg, 0.58 mmol) were added. Subsequently, dibenzyl phosphite (1.80 ml, 8.15 mmol) was slowly added dropwise and the mixture was stirred for 3 hours. The reaction was completed by the addition of an aqueous solution of calum dihydrozen phosphate (0.5 M, 50 ml) and stirred at room temperature for 30 minutes. The resulting mixture was extracted with dichloromethane (2 × 50 ml), the combined organic extracts were dried, filtered and the solvent was evaporated in vacuo. The resulting yellow oil was purified at low temperature (4 ° C.) by column chromatography on silica gel and extraction with 0.8% methanol in dichloromethane. Given the treatment, the starting material 1,2,3,4-O-tetraacetoxy-pancratistatin (4,0.30 g, 11%) was subsequently obtained as its colorless crystalline solid as its dibenzyl phosphate derivative. (5,3.44 g, 87%) was recovered.
m. p. 119 ° C. [m. p. lit. (Pettit et al., 1995a, Anti-Cancer Drug Design, 10, 243) 119-121 ° C.]; [α] D ²⁷ + 59.3 ° (c 1.33, DCM) {[α] D ³³ lit. (. Pettit et al, 1995a, Anti-Cancer Drug Design, 10,243) + 69.1 ° (c0.89, DCM)}; v max (KBr disc) 2910w, 1755s, 1674s, 1485s, 1373s, 1221s, 1037b , 871 w, 738 w, 493 w cm ⁻¹ ; δ _H / ppm (300 MHz, CDCl ₃ ) 2.04 (3H, s, OAc), 2.06 (3H, s, OAc), 2.07 (3H, s, OAc), 2.16 (3H, s, OAc), 3.40 (1H, dd, J3, 13Hz, H-10b), 4.26 (1H, dd, J11, 13Hz, H-4a), 5. 13 (1H, dd, J3, 11 Hz, H-4), 5.20 (1H, t, J3 Hz, H-2), 5.23 (1H, dd, J 7, 12 Hz, CH _A H _B Ph), 5.26 (1 H, dd, J 7, 12 Hz, CH _A H _B Ph), 5.31 (1 H, dd, J 7, 12 Hz, CH _C H _D Ph), 5 .41 (1H, dd, J7, 12 Hz, CH _C H _D Ph), 5.43 (1 H, t, J3 Hz, H-3), 5.54 (1 H, t, J3 Hz, H-1), 5.92 (1H, d, J1 Hz, OCH _A H _B O), 5.95 (1 H, d, J1 Hz, OCH _A H _B O), 6.10 (1 H, bs, 5-NH), 6 .43 (1H, s, H- 10), 7.30-7.42 (10H, bm, 2x Ph); δc / ppm (125MHz, CDCl 3) (C = O in C-1) 170.1, 169.7 (C = O in C-3), 169.0 (C = O in C-4), 168.2 C = O in the C-2), 162.6 (C -6), 152.4 (C-9), 139.3 (d, J PC 4Hz, C-8), 136.0 (d, J PC 8 Hz, C of Ph), 135.9 (d, J _PC 8 Hz, C of Ph), 134.1 (d, J _PC 7 Hz, C-7), 133.0 (C-10a), 128.42 ( CH of Ph), 128.37 (CH of Ph), 128.3 (CH of Ph), 127.9 (CH of Ph), 127.7 (CH of Ph), 117.0 (C-6a), 102.7 (OCH ₂ O), 101.5 (C-10), 71.6 (C-4), 70.1 (d, J _PC 5 Hz, CH ₂ Ph), 70.0 (d, J _PC) 6 Hz, CH ₂ Ph), 67.6 (C-2), 66.7 (C-3), 66.4 (C-1), 47.6 (C-4a), 40.3 (C-10b), 20.76 (CH _{3 in} C-2), 20.73 (CH3 in C-3), 20.67 (CH in C-4) ₃ ), 20.5 (CH ₃ in C-1); δ _P / ppm (for 200 MHz, CDCl ₃ , 85% H ₃ PO ₄ ) −6.61 (s, ¹ H separation); m / z (EI) 493 [MP (O) (OBn) ₂ , 10%], 271 (35), 91 (40), 61 (40, 44 (100).

ジナトリューム７−Ｏ−フォスフォリル−パンクラチスタチン（２ａ）
メタノール（５０ｍｌ）中ジベンジルパンクラチスタチンフォスフェイト（５ａ，２．００ｇ，２．６６ｍｍｏｌ）の溶液にナトリュームメトキシド（８７ｍｇ，１．６１ｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間攪拌し水（５０ｍｌ）を加えた。この水溶性の混合物をジクロロメタン（５ｘ５０ｍｌ）で抽出し、混合した有機抽出物は乾燥し、ろ過し、真空で蒸発（加熱なし）して、白色粉末（１．８ｇ）として租の脱アセチル化誘導体を得た。残渣は直ちにエタノール（５０ｍｌ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ触媒（２０１ｍｇ）を加えた。混合物は１気圧の水素下で２時間攪拌し、フルートろ紙を通してろ過した。触媒はメタノール（５０ｍｌ）で十分に洗い、ろ液は真空で蒸発（加熱なし）して租脱ベンジル化リン酸（６）を白色粉末（１，３ｇ）として得た。ｍ．ｐ．１９５℃ ｄｅｃ．δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．７０（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），５．９６（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．９３（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），４．２９（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．０３（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．８７（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．７４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４），３．６７（１Ｈ，ｔ，Ｊ１１Ｈｚ，Ｈ−４ａ），３．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ）；ｍ／ｚ（ＦＡＢ）４０６［（Ｍ＋Ｈ）^＋，２０％］，４０５［Ｍ^＋，２５］，１５４（１００）；Ｃ_１４Ｈ_１６ＮＯ_１１Ｐ４０５．０４６１に対する計算値ＨＲＦＡＢ４０５，０４６７．Dinatrium 7-O-phosphoryl-pancratistatin (2a)
Sodium methoxide (87 mg, 1.61 mol) was added to a solution of dibenzyl pancratistatin phosphate (5a, 2.00 g, 2.66 mmol) in methanol (50 ml). The mixture was stirred at room temperature for 2 hours and water (50 ml) was added. This aqueous mixture was extracted with dichloromethane (5 × 50 ml) and the combined organic extracts were dried, filtered and evaporated in vacuo (no heating) to give the deacetylated derivative as a white powder (1.8 g). Got. The residue was immediately dissolved in ethanol (50 ml) and 10% Pd / C catalyst (201 mg) was added. The mixture was stirred for 2 hours under 1 atmosphere of hydrogen and filtered through flute filter paper. The catalyst was thoroughly washed with methanol (50 ml), and the filtrate was evaporated in vacuum (without heating) to obtain a debenzylated phosphoric acid (6) as a white powder (1, 3 g). m. p. 195 ° C. dec. δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 6.70 (1H, bs, H-10), 5.96 (1H, s, OCH _A H _B O), 5.93 (1 H, s, OCH _A H _{B 2} O), 4.29 (1H, bs, H-1), 4.03 (1H, bs, H-2), 3.87 (1H, bs, H-3), 3.74 (1H, m , H-4), 3.67 (1H, t, J11 Hz, H-4a), 3.00 (1H, d, J12 Hz, H-10b); m / z (FAB) 406 [(M + H) ⁺ , 20%], 405 [M ⁺ , 25], 154 (100); calculated for C ₁₄ H ₁₆ NO ₁₁ P 405.0461 HRFAB405, 0467.

リン酸（６）は直ちにメタノール（５０ｍｌ）中で再蒸留し、ナトリュームメトキシド（３６１ｍｇ，６．７３ｍｏｌ）を加えた。混合物は一夜攪拌し、それから真空（熱なし）で濃縮して白色のペースト（１．６ｇ）を得た。残渣はＳｅｐｈａｄｅｘＲＧ−１０カラムで精製し水で抽出した。蛍光精留物は混合し凍結乾燥してジ−ナトリュームパンクラチスタチンプロドラッグ（２ａ）をふわふわした粉末（１．１ｇ，９２％）として得た。ｍ．ｐ．２０６℃（ｄｅｃ）；［α］_Ｄ ^２８＋７８．４°（ｃ１．０２，Ｈ_２Ｏ）；ｖ_ｍａｘＫＢｒｄｉｓｃ）３５００−３０００ｂ，２３６０Ｗ，１６７０ｂｓ，１４８０ｓ，１３５０ｗ，１０９０ｓ，９８０ｍ，７２０ｍｃｍ^−１；δ_Ｈ／ｐｐｍ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．５９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１０），５．９６（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．８７（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），４．３９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１），４．１１（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９３（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．８１（１Ｈ，ｂｄ，Ｊ９Ｈｚ，Ｈ−４），３．７３（１Ｈ，ｂｔ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−４ａ），３．００（１Ｈ，ｂｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ）；δ_Ｃ／ｐｐｍ（１００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）１７１．２（Ｃ＝Ｏ），１５２．３（Ｃ−９），１３９．１（Ｃ−８），１３７．３（Ｃ−７），１３５．３（Ｃ−１０ａ），１１７．６（Ｃ−６ａ），１０２．４（Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ），１０１．０（Ｃ−１０），７２．７（Ｃ−３），７０．７（Ｃ−２），７０．３（Ｃ−４），６８．８（Ｃ−１），４９．１（Ｃ−４ａ），４０．７（Ｃ−１０ｂ）；δ_Ｐ／ｐｐｍ（１６２ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ，８５％Ｈ_３ＰＯ_４に対して）０．９０（ｓ，^１Ｈ分離）；ｍ／ｚ（ＦＡＢ）４４９（Ｍ^＋，２０％）４２７［（Ｍ−Ｎａ）^＋，２０］，１５４（１００）．Phosphoric acid (6) was immediately redistilled in methanol (50 ml) and sodium methoxide (361 mg, 6.73 mol) was added. The mixture was stirred overnight and then concentrated in vacuo (no heat) to give a white paste (1.6 g). The residue was purified with a Sephadex® G-10 column and extracted with water. The fluorescent rectified product was mixed and lyophilized to obtain di-natrium panclastatin prodrug (2a) as a fluffy powder (1.1 g, 92%). m. p. 206 ° C. (dec); [α] _D ²⁸ + 78.4 ° (c 1.02, H ₂ O); v _max KBr disc) 3500-3000b, 2360W, 1670bs, 1480s, 1350w, 1090s, 980m, 720m cm ⁻¹ Δ _H / ppm (400 MHz, D ₂ O) 6.59 (1H, s, H-10), 5.96 (1 H, s, OCH _A H _B O), 5.87 (1 H, s, OCH _A) H _B O), 4.39 (1H, s, H-1), 4.11 (1H, bs, H-2), 3.93 (1H, bs, H-3), 3.81 (1H, bd, J9 Hz, H-4), 3.73 (1H, bt, J12 Hz, H-4a), 3.00 (1H, bd, J12 Hz, H-10b); δ _C / ppm (100 MHz, D ₂ O) 171.2 (C = O), 152.3 (C 9), 139.1 (C-8 ), 137.3 (C-7), 135.3 (C-10a), 117.6 (C-6a), 102.4 (O-CH 2 -O) , 101.0 (C-10), 72.7 (C-3), 70.7 (C-2), 70.3 (C-4), 68.8 (C-1), 49.1 ( C-4a), 40.7 (C-10b); δ _P / ppm (for 162 MHz, D ₂ O, 85% H ₃ PO ₄ ) 0.90 (s, ¹ H separation); m / z ( FAB) 449 (M ^<+> , 20%) 427 [(M-Na) ^<+> , 20], 154 (100).

パンクラチスタチンプロドラッグ（２ｂ−ｏ）の合成の一般的方法
パンクラチスタチンのリン酸誘導体の水性メタノール溶液（６，１ｍｌの水またはメタノール中５０ｍｇ）に、適当な金属塩（炭酸塩または酢酸塩）またはアミン遊離塩基の１．０Ｍ溶液（２５０μｌ）を加えた。溶液は濁り、混合物は６時間攪拌した。混合物は冷凍乾燥（または蒸発）して所望のプロドラッグ塩（２ｂ−ｏ）を得た。この塩を湿潤したメタノールおよび／またはジエチルエーテルと一緒に摩砕することによってさらに精製して未反応の出発物質を除いた。
ジリチュームパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｂ）：
黄色みがかった粉末（６１ｍｇ）；ｍ．ｐ．２４０℃ ｄｅｃ．：δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．６２（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），６００（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．９０（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨＡＨ_ＢＯ），４．４４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９７（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．８０（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４，Ｈ−４ａ），３．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ）．
ジカリュームパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｃ）：
無色の粉末（６６ｍｇ）；ｍ．ｐ．２８０℃ ｄｅｃ．；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．６８（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），６．００（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．５９（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），４．４５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１６（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．７９（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．８９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４），３．７８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４ａ），３．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ）．
ジルビジュームパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｄ）：
無色の粉末（０．１１ｇ）；ｍ．ｐ．２００℃（ｄｅｃ．）；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．６３（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），６．００（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．９０（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），４．４５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１６（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９８（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．８０（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４，Ｈ−４ａ），３．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ）；ｍ／ｚ（ＦＡＢ）５７３．９［（Ｍ＋Ｈ）^＋，５％］，２９８．９（３５），２１５．１（２５），１３５．１（１００）；Ｃ_１４Ｈ_１５ＮＯ_１１ＰＲｂ_２５７３．８６１９に対する計算値ＨＲＦＡＢ５７３．８５９８．
ジセシュームパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｅ）：
黄色いオイル（０．２２ｇ）；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．６３（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），６．０１（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．９０（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），４．４６（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１７（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９８（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４），３．７９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４ａ），３．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ）；ｍ／ｚ（ＦＡＢ）６６９．９［（Ｍ＋Ｈ）^＋，５０％］，２２５．０（１００）；Ｃ_１４Ｈ_１５ＮＯ_１１ＰＣ_Ｓ２６６９．８４９１に対する計算値ＨＲＦＡＢ６６９．８４６８．
マグネシュームパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｆ）：
無色の粉末（６４ｍｇ）；ｍ．ｐ．２２０℃ ｄｅｃ．；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．６６（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），６．０１（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．９４（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），４．４４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１６（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９８（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．８０（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４，Ｈ−４ａ），３．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ）．
カルシュームパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｇ）：無色の粉末（７７ｍｇ）；ｍ．ｐ．２３０℃（ｄｅｃ．）；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．６４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），５．９９（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．９６（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＤ），４．４１（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９７（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．７６（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４，Ｈ−４ａ），３．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ１１Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ）．亜鉛パンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｈ）：無色の結晶構造粉末（７６ｍｇ）；ｍ．ｐ．１９０℃（ｄｅｃ．）；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．６９（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），５．９６（２Ｈ，ｂｓ，ＯＣＨ_２Ｏ），４．４４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９８（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．８０（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４，Ｈ−４ａ），３．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ）．
マンガンパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｉ）：無色の粉末（８８ｍｇ）；ｍ．ｐ．２４０℃（ｄｅｃ．）；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．６５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），６．００（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．９５（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），４．４４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９９（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．７９（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４，Ｈ−４ａ），３．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ）．ピペラジンパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｊ）：無色の粉末（７８ｍｇ）；ｍ．ｐ．２００℃（ｄｅｃ．）；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．６２（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），５．９９（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．８８（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），４．４４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９６（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４），３．７７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４ａ），３．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ），２．９９−３．０１（８Ｈ，ｍ，４ｘＣＨ_２ピペラジン）；ｍ／ｚ（ＦＡＢ）４９２．２［（Ｍ＋Ｈ）^＋，３０％］，４６０．１（８５），１５４．１（１００）；Ｃ_１８Ｈ_２７Ｎ_３Ｏ_１１Ｐ４９２．１３８３に対する計算値ＨＲＦＡＢ４９２．１３７３．
モルフォリンパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｋ）：無色の粉末（７１ｍｇ）；ｍ．ｐ．１８０℃（ｄｅｃ．）；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）６．６３（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），５．９９（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．８９（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），４．４４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９６（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．７８−３．８２（６Ｈ，ｍ，Ｈ−４，Ｈ−４ａ，２ｘＣＨ_２Ｎモルフォリン），３．１０−３．１４（５Ｈ，ｍ，Ｈ−１０ｂ，２ｘＣＨ_２Ｏモルフォリン）；ｍ／ｚ（ＦＡＢ）４９３．２［（Ｍ＋Ｈ）^＋，１５％］，４０６．１（３０），１５４．１（００）；Ｃ_１８Ｈ_２６Ｎ_２Ｏ_１２Ｐ４９３．１２２２に対する計算値ＨＲＦＡＢ４９３．１２１５．
ピリジンパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｌ）：無色の粉末（６３ｍｇ）；ｍ．ｐ．２７０℃（ｄｅｃ．）；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．６６（２Ｈ，ｄ，Ｊ７Ｈｚ，Ｈ−２及びＨ−６ピリミジン），８．４９（１Ｈ，ｔ，Ｊ７Ｈｚ，Ｈ−４ピリミジン），７．９７（２Ｈ，ｔ，Ｊ７Ｈｚ，Ｈ−３及びＨ−５ピリミジン），６．４５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），５．９５（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_２Ｏ），４．４１（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９７（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．８９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４），３．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４ａ），３．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ）．
イミダゾールパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｍ）：無色の粉末（７１ｍｇ）；ｍ．ｐ．２５０℃（ｄｅｃ．）；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．２１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２イミダゾール），７．２１（２Ｈ，ｂｓ，Ｈ−４及びＨ−５イミダゾール），６．６５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１０），６．００（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．９５（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），４．４４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９７（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４），３．７５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４ａ），３．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ）．
キニンパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｎ）：白色のふわふわした粉末（０．１１ｇ）；ｍ．ｐ．１７３−１７５℃；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ４．５Ｈｚ，Ｈ−２’キニン），７．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ９Ｈｚ，Ｈ−８’キニン），７．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ４．５Ｈｚ，Ｈ−３’キニン），７．３６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ２，９Ｈｚ，Ｈ−５’キニン），７．２３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７’キニン），６．３４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１０），５．９１（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．８７（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_ＡＨ_ＢＯ），５．６６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１０キニン），５．５９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−９キニン），４．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ１７Ｈｚ，Ｈ−１１ａキニン），４．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ１１Ｈｚ，Ｈ−１１ｂキニン），４．３５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１２（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．８３−３．８７（５Ｈ，ｍ，ＯＭｅキニン，Ｈ−４，Ｈ−４ａ），３．８０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６ａキニン），３．２２（２Ｈ，ｍ，Ｈ−８キニン，Ｈ−２ａキニン），２．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ），２．７７（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２ｂキニン，Ｈ−６ｂキニン），２．０４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３キニン），１．９３（２Ｈ，ｍ，Ｈ−５ａキニン，Ｈ−７ａキニン），１．８６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４キニン），１．６２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５ｂキニン），１．２７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７ｂキニン）；ｍ／ｚ（ＦＡＢ）７３０．２［（Ｍ＋Ｈ）^＋，６０％］，３２５．２（１００）；Ｃ_３４Ｈ_４１Ｎ_３Ｏ_１３Ｐ７３０．２３７７に対する計算値ＨＲＦＡＢ７３０．２３７２．
キニジンパンクラチスタチン７−Ｏ−燐酸塩（２ｏ）：無色の粉末（０．１４ｇ）；ｍ．ｐ．１８３−１８５℃；δ_Ｈ／ｐｐｍ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）８．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ４．５Ｈｚ，Ｈ−２’キニジン），７．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ９Ｈｚ，Ｈ−８’キニジン），７．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ４．５Ｈｚ，Ｈ−３’キニジン），７．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ２，９Ｈｚ，Ｈ−５’キニジン），７．２５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７’キニジン），６．３４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１０），５．８９（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_２Ｏ），５．６６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１０キニジン），５．５９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−９キニジン），５．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ１７Ｈｚ，Ｈ−１１ａキニジン），４．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ１１Ｈｚ，Ｈ−１１ｂキニジン），４．３５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−１），４．１４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），３．９５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−３），３．８５−３．８９（５Ｈ，ｍ，ＯＭｅキニジン，Ｈ−４，Ｈ−４ａ），３．７９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６ａキニジン），３．２３（２Ｈ，ｍ，Ｈ−８及びＨ−２ａキニジン），２．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ），２．６５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２ｂ及びＨ−６ｂキニジン），２．０４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３キニジン），１．８８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−５ａ及びＨ−７ａキニジン），１．８６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４キニジン），１．６９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５ｂキニジン），１．４４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−７ｂキニジン）；ｍ／ｚ（ＦＡＢ）７３０［（Ｍ＋Ｈ）^＋，５％］，３２５（６５），１５４（１００）；Ｃ_３４Ｈ_４１Ｎ_３Ｏ_１３Ｐ７３０．２３７７に対する計算値ＨＲＦＡＢ７３０．２３８４．General method for the synthesis of panclastatin prodrug (2b-o) An aqueous metal solution of a phosphoric acid derivative of panclastatin (6,1 ml of water or 50 mg in methanol) in an appropriate metal salt (carbonate or acetate) ) Or a 1.0 M solution of amine free base (250 μl). The solution became cloudy and the mixture was stirred for 6 hours. The mixture was lyophilized (or evaporated) to give the desired prodrug salt (2b-o). The salt was further purified by trituration with wet methanol and / or diethyl ether to remove unreacted starting material.
Dillitum Pancratistatin 7-O-phosphate (2b):
Yellowish powder (61 mg); m. p. 240 ° C. dec. : Δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 6.62 (1H, bs, H-10), 600 (1H, s, OCH _A H _B O), 5.90 (1 H, s, OCHAH _B O) 4.44 (1H, bs, H-1), 4.15 (1H, bs, H-2), 3.97 (1H, bs, H-3), 3.80 (2H, m, H- 4, H-4a), 3.07 (1H, d, J12 Hz, H-10b).
Dicalum pancratistatin 7-O-phosphate (2c):
Colorless powder (66 mg); m. p. 280 ° C. dec. Δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 6.68 (1H, bs, H-10), 6.00 (1 H, s, OCH _A H _B O), 5.59 (1 H, s, OCH _A H _B O), 4.45 (1H, bs, H-1), 4.16 (1H, bs, H-2), 3.79 (1H, bs, H-3), 3.89 (1H, m, H-4), 3.78 (1H, m, H-4a), 3.13 (1H, d, J12 Hz, H-10b).
Zirbidium pancratistatin 7-O-phosphate (2d):
Colorless powder (0.11 g); p. 200 ° C. (dec.); Δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 6.63 (1H, bs, H-10), 6.00 (1 H, s, OCH _A H _B O), 5.90 ( 1H, s, OCH _A H _B O), 4.45 (1H, bs, H-1), 4.16 (1H, bs, H-2), 3.98 (1H, bs, H-3), 3.80 (2H, m, H-4, H-4a), 3.10 (1H, d, J12 Hz, H-10b); m / z (FAB) 573.9 [(M + H) ⁺ , 5%] , 298.9 (35), 215.1 (25), 135.1 (100); calculated for C ₁₄ H ₁₅ NO ₁₁ PRb ₂ 5733.8619 HRFAB573.8598.
Dishesum pancratistatin 7-O-phosphate (2e):
Yellow oil (0.22 g); δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 6.63 (1H, bs, H-10), 6.01 (1H, s, OCH _A H _B O), 5.90 (1H, s, OCH _A H _B O), 4.46 (1H, bs, H-1), 4.17 (1H, bs, H-2), 3.98 (1H, bs, H-3) , 3.85 (1H, m, H-4), 3.79 (1H, m, H-4a), 3.08 (1H, d, J12Hz, H-10b); m / z (FAB) 669. 9 [(M + H) ⁺ , 50%], 225.0 (100); calculated for C ₁₄ H ₁₅ NO ₁₁ PC _S2 669.8491 HRFAB6699.8468.
Magnesium Pancratistatin 7-O-phosphate (2f):
Colorless powder (64 mg); m. p. 220 ° C. dec. Δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 6.66 (1H, bs, H-10), 6.01 (1H, s, OCH _A H _B O), 5.94 (1 H, s, OCH _A _{H B O), 4.44 (1H} , bs, H-1), 4.16 (1H, bs, H-2), 3.98 (1H, bs, H-3), 3.80 (2H, m, H-4, H-4a), 3.07 (1H, d, J12 Hz, H-10b).
Calcium pancratistatin 7-O-phosphate (2 g): colorless powder (77 mg); p. 230 ° C. (dec.); Δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 6.64 (1H, bs, H-10), 5.99 (1H, s, OCH _A H _B O), 5.96 ( _{_{1H, s, OCH A H B}} D), 4.41 (1H, bs, H-1), 4.14 (1H, bs, H-2), 3.97 (1H, bs, H-3), 3.76 (2H, m, H-4, H-4a), 3.41 (1H, d, J11 Hz, H-10b). Zinc pancratistatin 7-O-phosphate (2h): colorless crystal structure powder (76 mg); m. p. 190 ° C. (dec.); Δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 6.69 (1H, bs, H-10), 5.96 (2H, bs, OCH ₂ O), 4.44 (1H, bs, H-1), 4.15 (1H, bs, H-2), 3.98 (1H, bs, H-3), 3.80 (2H, m, H-4, H-4a), 3.12 (1H, d, J12 Hz, H-10b).
Manganese pancratistatin 7-O-phosphate (2i): colorless powder (88 mg); m. p. 240 ° C. (dec.); Δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 6.65 (1H, bs, H-10), 6.00 (1 H, s, OCH _A H _B O), 5.95 ( 1H, s, OCH _A H _B O), 4.44 (1H, bs, H-1), 4.15 (1H, bs, H-2), 3.99 (1H, bs, H-3), 3.79 (2H, m, H-4, H-4a), 3.08 (1H, d, J12 Hz, H-10b). Piperazine Pancratistatin 7-O-phosphate (2j): colorless powder (78 mg); m. p. 200 ° C. (dec.); Δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 6.62 (1H, bs, H-10), 5.99 (1H, s, OCH _A H _B O), 5.88 ( 1H, s, OCH _A H _B O), 4.44 (1H, bs, H-1), 4.15 (1H, bs, H-2), 3.96 (1H, bs, H-3), 3.84 (1H, m, H-4), 3.77 (1H, m, H-4a), 3.10 (1H, d, J12Hz, H-10b), 2.99-3.01 (8H , M, 4 × CH ₂ piperazine); m / z (FAB) 492.2 [(M + H) ⁺ , 30%], 460.1 (85), 154.1 (100); C ₁₈ H ₂₇ N ₃ O ₁₁ P492 Calculated for 1383 HRFAB492.1373.
Morpholine Pancratistatin 7-O-phosphate (2k): colorless powder (71 mg); m. p. 180 ° C. (dec.); Δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 6.63 (1H, bs, H-10), 5.99 (1H, s, OCH _A H _B O), 5.89 ( 1H, s, OCH _A H _B O), 4.44 (1H, bs, H-1), 4.15 (1H, bs, H-2), 3.96 (1H, bs, H-3), 3.78-3.82 (6H, m, H- 4, H-4a, 2xCH 2 N morpholine), 3.10-3.14 (5H, m, H-10b, 2xCH 2 O morpholine); m / z (FAB) 493.2 [(M + H) ⁺ , 15%], 406.1 (30), 154.1 (00); calculated for C ₁₈ H ₂₆ N ₂ O ₁₂ P4933.1222 HRFAB4933.1215 .
Pyridine pancratistatin 7-O-phosphate (2 l): colorless powder (63 mg); m. p. 270 ° C. (dec.); Δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 8.66 (2H, d, J7 Hz, H-2 and H-6 pyrimidine), 8.49 (1H, t, J7 Hz, H−) 4 pyrimidine), 7.97 (2H, t, J7Hz, H-3 and H-5 pyrimidine), 6.45 (1H, bs, H-10), 5.95 (2H, s, OCH 2 O), 4.41 (1H, bs, H-1), 4.15 (1H, bs, H-2), 3.97 (1H, bs, H-3), 3.89 (1H, m, H-4) ), 3.84 (1H, m, H-4a), 3.10 (1H, d, J12Hz, H-10b).
Imidazole panclatistatin 7-O-phosphate (2 m): colorless powder (71 mg); p. 250 ° C. (dec.); Δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 8.21 (1H, s, H-2 imidazole), 7.21 (2H, bs, H-4 and H-5 imidazole), 6.65 (1H, bs, H-10), 6.00 (1H, s, OCH _A H _B O), 5.95 (1 H, s, OCH _A H _B O), 4.44 (1 H, bs) , H-1), 4.15 (1H, bs, H-2), 3.97 (1H, bs, H-3), 3.85 (1H, m, H-4), 3.75 (1H , M, H-4a), 3.38 (1H, d, J12 Hz, H-10b).
Quinine pancratistatin 7-O-phosphate (2n): white fluffy powder (0.11 g); m. p. 173-175 ° C .; δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 8.59 (1H, d, J4.5 Hz, H-2 ′ kinin), 7.86 (1H, d, J9 Hz, H-8 ′ kinin) ), 7.57 (1H, d, J4.5 Hz, H-3 ′ kinin), 7.36 (1H, dd, J2, 9 Hz, H-5 ′ kinin), 7.23 (1H, m, H−) 7 ′ kinin), 6.34 (1H, s, H-10), 5.91 (1H, s, OCH _A H _B O), 5.87 (1 H, s, OCH _A H _B O), 5. 66 (1H, m, H-10 kinin), 5.59 (1H, m, H-9 kinin), 4.98 (1H, d, J17 Hz, H-11a kinin), 4.93 (1H, d, J11 Hz, H-11b kinin), 4.35 (1H, bs, H-1), 4.12 (1H, bs, H-2), 3.95 (1H, b s, H-3), 3.83-3.87 (5H, m, OMe kinin, H-4, H-4a), 3.80 (1H, m, H-6a kinin), 3.22 (2H) , M, H-8 kinin, H-2a kinin), 2.93 (1H, d, J12 Hz, H-10b), 2.77 (2H, m, H-2b kinin, H-6b kinin), 2. 04 (1H, m, H-3 kinin), 1.93 (2H, m, H-5a kinin, H-7a kinin), 1.86 (1H, m, H-4 kinin), 1.62 (1H , M, H-5b kinin), 1.27 (1H, m, H-7b kinin); m / z (FAB) 730.2 [(M + H) ⁺ , 60%], 325.2 (100); C Calculated for ₃₄ H ₄₁ N ₃ O ₁₃ P 730.2377 HRFAB 730.2372.
Quinidine Pancratistatin 7-O-phosphate (2o): colorless powder (0.14 g); m. p. 183-185 ° C .; δ _H / ppm (300 MHz, D ₂ O) 8.62 (1H, d, J4.5 Hz, H-2 ′ quinidine), 7.88 (1H, d, J9 Hz, H-8 ′ quinidine) ), 7.61 (1H, d, J4.5 Hz, H-3 ′ quinidine), 7.41 (1H, dd, J2, 9 Hz, H-5 ′ quinidine), 7.25 (1H, m, H−) 7 ′ quinidine), 6.34 (1H, s, H-10), 5.89 (2H, s, OCH ₂ O), 5.66 (1H, m, H-10 quinidine), 5.59 (1H , M, H-9 quinidine), 5.09 (1H, d, J17Hz, H-11a quinidine), 4.95 (1H, d, J11Hz, H-11b quinidine), 4.35 (1H, bs, H -1), 4.14 (1H, bs, H-2), 3.95 (1H, bs, H-3), 3.85-3. 89 (5H, m, OMe quinidine, H-4, H-4a), 3.79 (1H, m, H-6a quinidine), 3.23 (2H, m, H-8 and H-2a quinidine), 2.93 (1H, d, J12 Hz, H-10b), 2.65 (2H, m, H-2b and H-6b quinidine), 2.04 (1H, m, H-3 quinidine), 1.88 (2H, m, H-5a and H-7a quinidine), 1.86 (1H, m, H-4 quinidine), 1.69 (1H, m, H-5b quinidine), 1.44 (1H, m , H-7b quinidine); m / z (FAB) 730 [(M + H) ⁺ , 5%], 325 (65), 154 (100); calculated for C ₃₄ H ₄₁ N ₃ O ₁₃ P 730.2377 HRFAB730. 2384.

結果と検討
発端から、リン酸塩中間体（５）へのより直接的アプローチが求められた。この点において、我々のグループ（Ｐｅｔｔｉｔｅｔａｌ．，１９９８，Ａｎｔｉ−ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ，１３，９８１）によるジベンジルフォスファイト技術の利用（Ｓｉｌｖｅｒｂｅｒｇｅｔａｌ．，１９９６，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ，３７，７７１）はアルキルアミドフォスファインメソード（ＰｅｒｒｉｃｈａｎｄＪｏｈｎｓ，１９８８，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１４２）に計り知れない手段であることを証明した。有機溶媒におけるその貧弱な溶解性およびＣ−環における四つの第二アルコール基の存在に依って、我々の注意深く調査したジベンジルフォスファイト法を適用する時、（＋）−パンクラチスタチン（１ａ）の直接フォスフォリレイションは生成物の非常に複雑な混合物並びに若干の未反応出発物質を与えた。従って、私たちの注目は、より可溶性で部分的に保護されたフォスフォリレイションの出発物質を与えるパンクラチスタチンのＣ−環ヒドロキシ基の選択的アセチル化に向けられた。パンクラチスタチン（１ａ）をピリジン中無水酢酸および４−ジメチルアミノピリジンと容易に反応させて１，２，３，４，７−Ｏ−ペンタアセトキシ誘導体（３）を得、次いで環流する水−ピリジン中で加熱することによって直ちに所望の１，２，３，４−Ｏ−ペンタアセトキシ（４）に変換（収率６６％）する時、その目的は容易に実現された。四塩化炭素、Ｎ−エチルジイソプロピルアミンおよび４−ジメチルアミノピリジンの存在下における後者とジベンジルフォスファイトとの反応は８７％の収率で感熱性のパンクラチスタチン７−Ｏ−ジベンジルフォスフェイト（５）を与えた。（５）の熱および／またはシリカゲルとの接触はフォスフェトクリービジュを（４）に戻した。ベンジルフォスファイト（５）は次にナトリウムメトキシドの存在において脱アセチル化した。接触水素化を用いてベンジルエステル基をクリーブして対応するリン酸誘導体（６）を得た。この酸は直ちに２当量のナトリュームメトキシドで処理してジナトリュームリン酸塩プロドラッグ（２ａ）（９２％）を得た。Results and discussion From the outset, a more direct approach to the phosphate intermediate (5) was sought. In this regard, our group (Pettit et al., 1998, Anti-Cancer Drug Design, 13, 981) uses dibenzyl phosphite technology (Silverberg et al., 1996, Tetrahedron Letters, 37, 771) is alkyl. It proved to be an immeasurable means in the Amidophos Fine Method (Perrich and Johns, 1988, Synthesis, 142). Due to its poor solubility in organic solvents and the presence of four secondary alcohol groups in the C-ring, (+)-pancratistatin (1a) when applying our carefully investigated dibenzyl phosphite method The direct phosphorylation of gave a very complex mixture of products as well as some unreacted starting material. Thus, our attention has been directed to the selective acetylation of the pancratistin C-ring hydroxy group which provides a more soluble and partially protected phosphorylation starting material. Pancratistatin (1a) is readily reacted with acetic anhydride and 4-dimethylaminopyridine in pyridine to give 1,2,3,4,7-O-pentaacetoxy derivative (3), followed by refluxing water-pyridine The objective was readily realized when immediately converted to the desired 1,2,3,4-O-pentaacetoxy (4) by heating in (yield 66%). The reaction of the latter with dibenzylphosphite in the presence of carbon tetrachloride, N-ethyldiisopropylamine and 4-dimethylaminopyridine is a 87% yield of thermosensitive pancratistatin 7-O-dibenzylphosphate ( 5). The heat of (5) and / or contact with silica gel returned the phosphate crevice back to (4). Benzyl phosphite (5) was then deacetylated in the presence of sodium methoxide. The benzyl ester group was cleaved using catalytic hydrogenation to give the corresponding phosphoric acid derivative (6). The acid was immediately treated with 2 equivalents of sodium methoxide to give dinatrine phosphate prodrug (2a) (92%).

（＋）−パンクラチスタチンプロドラッグ（２ａ）のこのより実用的合成は取りかかっていたが、私たちは親リン酸塩の種々のカチオン誘導体を合成し評価することに取りかかった。このプロドラッグリン酸プレカーサー（６）を適当な塩基で処理することによって、所要の塩（２ｂ−ｏ）が形成された。プロドラッグ（２ａ）のナトリュームカチオンを種々のカチオンで置き換えることによって、私たちは水溶性特性（ｍｇ／ｍｌ）を評価することができた。アンモニュームカチオンあるものもまた、ｐ−グリコプロテイン機構での障害による多剤耐性を無効にする能力を有する安定な水溶性薬剤を得る目的で、調査された（Ｓａｔｏｅｔａｌ．，１９９５，ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３５，２７１）。 Although this more practical synthesis of (+)-pancratistatin prodrug (2a) was underway, we began to synthesize and evaluate various cationic derivatives of the parent phosphate. The required salt (2b-o) was formed by treating the prodrug phosphate precursor (6) with an appropriate base. By replacing the sodium cation of prodrug (2a) with various cations, we were able to evaluate the water solubility properties (mg / ml). Some of the ammonium cations have also been investigated with the aim of obtaining stable water-soluble drugs that have the ability to abolish multidrug resistance due to disturbances in the p-glycoprotein mechanism (Sato et al., 1995, Cancer Chemotherapy). and Pharmacology, 35, 271).

すべての合成製品はネズミＰ３８８のリンパ性白血病細胞ラインおよびヒトのガン細胞ラインに対して評価された。プロドラッグ誘導体の大部分は（＋）−パンクラチスタチン（１ａ）およびナトリュームプロドラッグ（２ａ）に類似の活性を発揮した。マンガン（２ｉ）およびモルフォリン（２ｋ）誘導体は活性において１０〜２０倍の増加を示したけれども、その貧弱な水溶性が可能性あるプロドラッグとしてのさらに臨床前の進行に対しその使用を疑問視させた。その結果、ナトリューム誘導体（２ａ）は、その高い活性、適当な水溶性およびここに記載の効率的合成のため好ましい選択品であり続ける。 All synthetic products were evaluated against the murine P388 lymphocytic leukemia cell line and the human cancer cell line. Most of the prodrug derivatives exerted similar activity to (+)-pancratistatin (1a) and sodium prodrug (2a). Manganese (2i) and morpholine (2k) derivatives showed a 10-20 fold increase in activity, but questioned their use for further preclinical progression as prodrugs with potential poor water solubility I let you. As a result, the sodium derivative (2a) continues to be a preferred choice because of its high activity, adequate water solubility and the efficient synthesis described herein.

以上の記載から、新しく有用な抗新生成物薬の製造がここに記載され説明され、上記の目的のすべてを果たすことが容易に明らかである。この開示に対応する人に容易に起こるごとき修正、変更、適応は、本発明の範囲にあることは勿論理解されるべきである。 From the foregoing, it will be readily apparent that the manufacture of new and useful antineoplastic drugs is described and illustrated herein and serves all of the above objectives. It should, of course, be understood that modifications, changes, and adaptations that readily occur to those corresponding to this disclosure are within the scope of the present invention.

図１は本発明の合成をステップーバイーステップに示す。 FIG. 1 illustrates the synthesis of the present invention step by step.

Claims

(+) Pancratistatin is selectively protected with tetraacetate, which is then phosphorylated with dibenzylchlorophosphate and then reacted with 2 equivalents of sodium methoxide to give dinatrume. (+) A method of synthesizing a phosphate prodrug consisting of cleaving an acetoate and a benzyl protecting group with sodium methoxide while producing pancratistatin phosphate.

The process of claim 1 wherein the acetate and benzyl protecting groups are resolved at room temperature.

Natrium methoxide is a suitable metal salt (carbonate or acetate) selected from the group consisting of lithium, calumum, lisbidium, cesium, magnesum, calcium, zinc, manganese, piperazine, morpholine, pyridine, imidazole, quinine and quinidine. The process of claim 1 wherein the process is replaced by an amine free base.

The method of claim 3 wherein the acetate and benzyl protecting groups are resolved at room temperature.

An improved method of synthesizing pancratistin prodrugs comprising selecting panclastatin as a starting material and obtaining a protected phosphate intermediate by utilizing the dibenzyl chlorophosphite technique.

6. The process according to claim 5 comprising the step of selectively acetylating the C-ring hydroxyl group of said panclastatin to obtain a pentaacetoxy derivative.

A process according to claim 6 comprising the step of converting the pentaacetoxy derivative to a tetraacetate derivative.

8. A process according to claim 7 comprising the step of reacting the tetraacetate with the dibenzyl phosphite in the presence of carbon tetrachloride to obtain a dibenzyl phosphate derivative.

9. A process according to claim 8 wherein the dibenzyl phosphate is deacetylated in the presence of sodium methoxide.

10. A process according to claim 9 comprising the step of catalytic hydrogenation of the deacetylated dibenzyl phosphate.

10. A process according to claim 9 comprising the step of treating the phosphate derivative with sodium methoxide to give dinatrine phosphate pancratistatin prodrug.

The prodrug phosphate precursor (6) is treated with a suitable base so as to replace the hydrogen phosphate atom with an ion or molecule selected from the group of structures represented as 2a-2o in FIG. By the method.