JP2005508625A - 抗精神病薬の分類方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2001年8月31日出願の米国仮出願60/316,338の、35 U.S.C. §119(e)による利益を請求する。この仮出願の全体を参考として本明細書中に取り入れるものとする。
本発明は、治療を必要とする患者の精神疾患を治療する能力について被試験薬剤を同定するための方法に関する。本発明はまた、抗精神病薬活性、好ましくは非定型抗精神病薬活性について候補薬剤をスクリーニングする方法であって、細胞又は組織と候補薬剤とを接触させ、該細胞又は組織内で細胞内シグナル伝達蛋白質、即ちDARPP-32、ERK1、ERK2及びCREBのリン酸化レベルを測定し、該蛋白質のリン酸化レベルのパターンを決定することを含む方法に関する。本発明の1つの態様において、候補薬剤に対する応答におけるDARPP-32、ERK1、ERK2及びCREBのリン酸化レベルのパターンを、既知の非定型抗精神病薬に対する応答におけるDARPP-32、ERK1、ERK2及びCREBのリン酸化レベルのパターンと比較する。
脳組織にはいくつかの重要な細胞内シグナル伝達蛋白質が存在し、これらの蛋白質は、うつ病、統合失調症(精神分裂病)及びパーキンソン病などの神経学的疾患に関連する神経伝達物質の調節と関わりを有している。これらの細胞内シグナル伝達蛋白質には、DARPP-32(ドーパミン及びcAMP調節ホスホプロテイン、Mr 32,000)、ERK1及びERK2(細胞外シグナル調節プロテインキナーゼ1及び2)、並びにCREB(cAMP応答要素結合蛋白質)が含まれる。
DARPP-32は、脳内のドーパミン(DA)とcAMPの主要な標的として見出された(Walaasら, 1983, Nature 301:69-71)。DARPP-32は、ドーパミン作動性ニューロンの2つの主要な突出領域、即ち前頭葉前部大脳皮質及び線条体に豊富に存在しており、ドーパミンの生物学的、電気生理学的、転写及び行動作用において必須の役割を演じている(Greengard, P.ら, 1999, Neuron 23:435-447)。ある研究によって、DARPP-32のレベルと、ある特定の抗うつ病薬化合物の薬理学的活性とが結び付けられた(Guitart, X.とE.J. Nestler, 1992, J. Neurochem. 59:1164-1167)。その研究者らは、ラットにリチウム、イミプラミン及びトラニルシプロミンを慢性投与すると、前頭葉前部大脳皮質においてDARPP-32の免疫反応性レベルが有意に増大するのに対して、ハロペリドール、モルヒネ及びコカインを投与してもDARPP-32の免疫反応性には全く影響が現れなかったことを実証した。リチウムは、躁うつ病の治療に使用されるが、一方、イミプラミンとトラニルシプロミンは抗うつ剤である。イミプラミンはノルエピネフリンの再取込みを阻害することによって作用するが、一方トラニルシプロミンはモノアミンオキシダーゼ阻害剤である。
ニューロンでは、種々のカルシウムチャネルを通してCa2+が流入すると、c-fosプロモーター内の血清応答因子(SRE)又はカルシウム応答要素(「CaRE」又は「CRE」)のいずれかを標的とする種々のシグナル伝達経路が活性化される(Ghoshら, J. Neurobiol, 1994, Mar; 25(3):294-303)。CREを介する転写は、cAMP応答要素結合蛋白質(CREB)のSer133での誘導リン酸化を必要とする。CREBは塩基性ドメイン/ロイシンジッパーモチーフを含み、二量体となってCREに結合する(De Cesareら, Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 2000; 64:343-69)。CREBなどのCRE結合蛋白質の活性化機能は、いくつかのキナーゼによるリン酸化によって調節され、またCBPやp300などの共活性化因子によって仲介される(De Cesareら, Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 2000; 64:343-69)。
細胞外シグナル調節キナーゼ1(ERK1)及び細胞外シグナル調節キナーゼ2(ERK2)は、有糸分裂誘導物質活性化キナーゼ(MAPキナーゼ、MAPK)スーパーファミリーの一部である。シグナル伝達カスケードのMAPKスーパーファミリーは、細胞分裂と分化の重要な調節因子(Sweatt, 2001, J. Neurochem. (Jan.) 76(1):1-10)であり、また学習と記憶にも関与している(Sweatt, 2001, J. Neurochem. (Jan.) 76(1):1-10)。MAPKカスケードは、連続リン酸化によって互いに調節する、3つの連続的に結合されたキナーゼのモチーフを共有するシグナル伝達カスケードのファミリーの一部である(Sweatt, 2001, J. Neurochem. (Jan.) 76(1):1-10)。MAPKシグナル伝達カスケードのスーパーファミリーには、細胞外シグナル調節キナーゼ(ERK)、JNK、及びp38ストレス活性化プロテインキナーゼが含まれる(Sweatt, 2001, J. Neurochem. (Jan.) 76(1):1-10)。
抗精神病薬は定型(typical)及び非定型(atypical)の2つの種類に分類される。定型抗精神病薬にはハロペリドールが含まれ、この薬剤は30年以上にわたって使用されている。しかし、定型抗精神病薬の効能は制限的であり、それらの副作用もまた、それら薬剤の使用を制限することが多い。その副作用には、急性の錐体外路副作用(extrapyramidal effects)、例えば急性筋失調症(異常な筋痙攣及び体位)、偽パーキンソン症候群及び静座不能が含まれる。定型抗精神病薬は、ドーパミンD2受容体でアンタゴニストとして作用することを通じて少なくとも部分的にそれら薬剤の薬理学的効果を生むように思われる(例えばSilverstone T., Acta Psychiatr Scand Suppl, 1990. 358:88-91)。
本発明は、治療を必要とする患者の精神疾患を治療する能力について被試験薬剤を同定するための方法であって、
(a) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(b) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(c) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(d) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(e) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(f) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(g) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(h) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(i) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(j) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(k) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-脱リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(l) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで、該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もしそれぞれ、
(i) Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化レベルの増加が段階(a)で検出されるか、あるいは、
(ii) Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化レベルの減少が段階(b)で検出されるか、あるいは、
(iii) Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの減少が段階(c)で検出されるか、あるいは、
(iv) Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの増加が段階(d)で検出されるか、あるいは、
(v) Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの減少が段階(e)で検出されるか、あるいは、
(vi) Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの増加が段階(f)で検出されるか、あるいは、
(vii) Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの減少が段階(g)で検出されるか、あるいは、
(viii) Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの増加が段階(h)で検出されるか、あるいは、
(ix) Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの減少が段階(i)で検出されるか、あるいは、
(x) Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの増加が段階(j)で検出されるか、あるいは、
(xi) Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化レベルの減少が段階(k)で検出されるか、あるいは、
(xii) Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化レベルの増加が段階(l)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的非定型抗精神病化合物として同定される、上記方法を提供する。
(m) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr34-脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(n) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr34-リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もし、
(xiii) Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化の増加が段階(m)で検出されるか、あるいは、
(xix) Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化の減少が段階(n)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的非定型抗精神病薬化合物として同定される、
方法を提供する。
(a) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(b) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(c) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(d) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(e) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(f) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(g) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(h) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(i) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(j) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(k) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-脱リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(l) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで、該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もしそれぞれ、
(i) Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化レベルの増加が段階(a)で検出されるか、あるいは、
(ii) Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化レベルの減少が段階(b)で検出されるか、あるいは、
(iii) Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの減少が段階(c)で検出されるか、あるいは、
(iv) Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの増加が段階(d)で検出されるか、あるいは、
(v) Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの減少が段階(e)で検出されるか、あるいは、
(vi) Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの増加が段階(f)で検出されるか、あるいは、
(vii) Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの減少が段階(g)で検出されるか、あるいは、
(viii) Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの増加が段階(h)で検出されるか、あるいは、
(ix) Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの減少が段階(i)で検出されるか、あるいは、
(x) Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの増加が段階(j)で検出されるか、あるいは、
(xi) Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化レベルの減少が段階(k)で検出されるか、あるいは、
(xii) Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化レベルの増加が段階(l)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的非定型抗精神病化合物として同定される、上記方法を提供する。
(m)細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr34-脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(n)細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr34-リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もし、
(xiii) Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化の増加が段階(m)で検出されるか、あるいは、
(xix) Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化の減少が段階(n)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的非定型抗精神病化合物として同定される。
(a) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(b) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(c) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(d) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(e) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(f) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(g) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(h) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(i) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(j) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(k) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-脱リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(l) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで、該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もしそれぞれ、
(i) Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化レベルの未変化又は減少が段階(a)で検出されるか、あるいは、
(ii) Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化レベルの未変化又は増加が段階(b)で検出されるか、あるいは、
(iii) Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの増加が段階(c)で検出されるか、あるいは、
(iv) Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの減少が段階(d)で検出されるか、あるいは、
(v) Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの増加が段階(e)で検出されるか、あるいは、
(vi) Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの減少が段階(f)で検出されるか、あるいは、
(vii) Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの増加が段階(g)で検出されるか、あるいは、
(viii) Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの減少が段階(h)で検出されるか、あるいは、
(ix) Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの増加が段階(i)で検出されるか、あるいは、
(x) Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの減少が段階(j)で検出されるか、あるいは、
(xi) Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化レベルの増加が段階(k)で検出されるか、あるいは、
(xii) Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化レベルの減少が段階(l)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的定型抗精神病化合物として同定される、上記方法を提供する。
(m) 潜在的薬剤とThr34-脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(n) 潜在的薬剤とThr34-リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もし、
(xiii) Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化の増加が段階(m)で検出されるか、あるいは、
(xix) Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化の減少が段階(n)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的定型抗精神病化合物として同定される。
本明細書中で使用される「調節する」又は「調節」なる用語は、その通常の意味を有するとともに、「増強する」、「阻害する」及び「摸倣する」なる用語の意味も包含する。活性の「調節」は、活性の増加又は減少のいずれかであるとし得る。
本発明は、定型及び非定型抗精神病薬がDARPP-32、CREB並びにERK1及びERK2を含む細胞内シグナル伝達蛋白質のリン酸化状態に示差的に影響を及ぼすという驚くべき知見に基づいている。この示差的なリン酸化パターンは、医薬開発の際に候補非定型抗精神病薬をスクリーニング、分類及び同定するための方法に使用できる。
一実施態様において、本発明は、非定型抗精神病薬活性について候補薬剤をスクリーニングする方法を提供し、該方法は、細胞又は組織と候補薬剤とを接触させ、該細胞又は組織中の細胞内シグナル伝達蛋白質DARPP-32、ERK1、ERK2及びCREBのリン酸化レベルを測定し、これら蛋白質のリン酸化レベルのパターンを決定することを含む。特定の実施態様では、DARPP-32、ERK1、ERK2及びCREBのリン酸化レベルのパターンは、非定型抗精神病薬の存在下のDARPP-32、ERK1、ERK2及びCREBのリン酸化レベルのパターンと比較される。非定型抗精神病薬には、クロザピン(clozapine)、リスペリドン(risperidone)、アイロペリドン(iloperidone)、オランザピン(olanzapine)、ケチアピン(quetiapine)、ゾテピン(zotepine)、ペロスピロン(perospirone)及びジプラシドン(ziprasidone)が含まれるが、これらに限定されない。
(a) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(b) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(c) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(d) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(e) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(f) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(g) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(h) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(i) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(j) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(k) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-脱リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(l) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで、該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もしそれぞれ、
(i) Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化レベルの増加が段階(a)で検出されるか、あるいは、
(ii) Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化レベルの減少が段階(b)で検出されるか、あるいは、
(iii) Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの減少が段階(c)で検出されるか、あるいは、
(iv) Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの増加が段階(d)で検出されるか、あるいは、
(v) Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの減少が段階(e)で検出されるか、あるいは、
(vi) Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの増加が段階(f)で検出されるか、あるいは、
(vii) Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの減少が段階(g)で検出されるか、あるいは、
(viii) Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの増加が段階(h)で検出されるか、あるいは、
(ix) Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの減少が段階(i)で検出されるか、あるいは、
(x) Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの増加が段階(j)で検出されるか、あるいは、
(xi) Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化レベルの減少が段階(k)で検出されるか、あるいは、
(xii) Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化レベルの増加が段階(l)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的非定型抗精神病化合物として同定される、上記方法を提供する。
(m) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr34-脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(n) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr34-リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もし、
(xiii) Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化の増加が段階(m)で検出されるか、あるいは、
(xix) Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化の減少が段階(n)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的非定型抗精神病化合物として同定される、
方法を提供する。
(a) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(b) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(c) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(d) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(e) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(f) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(g) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(h) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(i) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(j) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(k) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-脱リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(l) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで、該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もしそれぞれ、
(i) Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化レベルの増加が段階(a)で検出されるか、あるいは、
(ii) Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化レベルの減少が段階(b)で検出されるか、あるいは、
(iii) Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの減少が段階(c)で検出されるか、あるいは、
(iv) Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの増加が段階(d)で検出されるか、あるいは、
(v) Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの減少が段階(e)で検出されるか、あるいは、
(vi) Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの増加が段階(f)で検出されるか、あるいは、
(vii) Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの減少が段階(g)で検出されるか、あるいは、
(viii) Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの増加が段階(h)で検出されるか、あるいは、
(ix) Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの減少が段階(i)で検出されるか、あるいは、
(x) Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの増加が段階(j)で検出されるか、あるいは、
(xi) Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化レベルの減少が段階(k)で検出されるか、あるいは、
(xii) Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化レベルの増加が段階(l)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的非定型抗精神病化合物として同定される、上記方法を提供する。
(m) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr34-脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(n) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr34-リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もし、
(xiii) Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化の増加が段階(m)で検出されるか、あるいは、
(xix) Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化の減少が段階(n)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的非定型抗精神病化合物として同定される。
(a) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(b) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(c) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(d) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(e) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(f) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(g) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(h) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(i) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(j) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(k) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-脱リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(l) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで、該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もしそれぞれ、
(i) Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化レベルの未変化又は減少が段階(a)で検出されるか、あるいは、
(ii) Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化レベルの未変化又は増加が段階(b)で検出されるか、あるいは、
(iii) Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの増加が段階(c)で検出されるか、あるいは、
(iv) Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの減少が段階(d)で検出されるか、あるいは、
(v) Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの増加が段階(e)で検出されるか、あるいは、
(vi) Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの減少が段階(f)で検出されるか、あるいは、
(vii) Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの増加が段階(g)で検出されるか、あるいは、
(viii) Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの減少が段階(h)で検出されるか、あるいは、
(ix) Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの増加が段階(i)で検出されるか、あるいは、
(x) Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの減少が段階(j)で検出されるか、あるいは、
(xi) Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化レベルの増加が段階(k)で検出されるか、あるいは、
(xii) Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化レベルの減少が段階(l)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的定型抗精神病化合物として同定される、上記方法を提供する。
(m) 潜在的薬剤とThr34-脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(n) 潜在的薬剤とThr34-リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もし、
(xiii) Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化の増加が段階(m)で検出されるか、あるいは、
(xix) Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化の減少が段階(n)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的定型抗精神病化合物として同定される。
90:10700-4 (1993); Ohlmeyerら, Proc Natl. Acd. Sci. USA 90:10922-10926 (1993); Lamら, 国際特許公開WO92/00252; Kocisら, 国際特許公開WO94/28028。これらの各々はその全体を参考として本明細書に取り入れるものとする。)及びそれらに類するものを用いて、本発明に従い、Thr34-DARPP-32及びThr75-DARPP-32、ホスホ-Thr202ERK1、ホスホ-Tyr204ERK1、ホスホ-Thr185ERK2、ホスホ-Tyr187ERK2、並びにホスホ-Ser133CREBのリン酸化の調節剤についてスクリーニングすることができる。一旦潜在的調節剤が同定されると、化学類似体を、市販の化成品ライブラリー(例えばカリフォルニア州サンジエゴのChembridge Corporation又は英国アービンドンのEvotec OAIから入手可能)から選択するか、又はde novoで合成することができる。見込みのある薬剤(医薬)を標準アッセイにかけて、その薬剤がThr34-DARPP-32及びThr75-DARPP-32、ホスホ-Thr202ERK1、ホスホ-Tyr204ERK1、ホスホ-Thr185ERK2、ホスホ-Tyr187ERK2、並びにホスホ-Ser133CREBのリン酸化に及ぼす作用を試験する。その後、Thr34-DARPP-32及びThr75-DARPP-32のリン酸化を増加させ、かつ、ホスホ-Thr202ERK1、ホスホ-Tyr204ERK1、ホスホ-Thr185ERK2、ホスホ-Tyr187ERK2及びホスホ-Ser133CREBのリン酸化を減少させる非定型抗精神病薬として医薬を選択する。
潜在的非定型又は定型抗精神病化合物として薬剤を同定するための上記方法の特定の実施態様において、リン酸化又は脱リン酸化のレベルがリン酸特異抗体を用いて検出される。ペプチド基質のリン酸化は、リン酸化状態特異(「リン酸特異」)抗体の直接的結合によって、あるいは、競合体ホスホペプチドからのリン酸特異抗体の置換を測定することによって検出されうる(例えばParker, Lawら、2000, 「蛍光偏光法を使用するハイスループットスクリーニングアッセイ:核受容体-リガンド結合及びキナーゼ/ホスファターゼアッセイの開発」(Development of high throughput screening assays using fluorescence polarization: nuclear receptor-ligand-binding and kinase/phosphatase assays), J. Biomolec. Screening 5(2):77-88参照)。リン酸化ペプチドはまた、Baderらの方法(2001, 「時間分解蛍光共鳴エネルギー移動に基づいたハイスループットスクリーニングのためのcGMP依存性プロテインキナーゼアッセイ」(A cGMP-dependent protein kinase assay for high throughput screening based on time-resolved fluorescence resonance energy transfer), Journal of Biomolecular Screening 6(4):255-64)を用いて検出されうる。
本発明のある特定の実施態様において、DARPP-32、ERK1、ERK2及び/又はCREBのリン酸化パターンにおける調節もまた、DARPP-32、ERK1、ERK2及び/又はCREBをリン酸化するキナーゼの活性、並びに/或いは、DARPP-32、ERK1、ERK2及び/又はCREBを脱リン酸化するホスファターゼの活性の変化を監視することによってアッセイしうる。特定の実施態様では、(Thr75をリン酸化する)Cdk5、(Thr34及びSer133CREBをリン酸化する)PKA、及び/又は(ERK1及びERK2をリン酸化する)p90リボソームS6キナーゼ(「p90RSK」)活性の変化が監視される。
本発明はさらに、DARPP-32、ERK1、ERK2及びCREBリン酸化の調節剤としての活性をもつ新規の化合物を設計するための方法を包含し、この方法では、これらの新規の化合物は、DARPP-32、ERK1、ERK2及びCREBリン酸化を刺激するか又は阻害するいずれかの能力をもつすべての化合物を含むが、これらに限定されないし、また、該化合物は、細胞内に送達可能な低分子量有機分子を包含するが、これらに限定されない。
リン酸化の増加や、Thr202及び/又はTyr204ERK1、Thr185及び/又はTyr187ERK2及び/又はSer133-CREBのリン酸化の減少が、上記疾患の症状を示す個体において症状の軽減を促進する。
本発明の方法によれば、精神疾患又は精神疾患のためのモデル動物は、以下のものに限定されないが、精神性うつ病、産後のうつ病、情緒障害、分裂感情性障害、分裂病性(schizophreniform)障害、統合失調症、妄想性障害、一時的精神(brief psychotic)障害、共有性精神(shared psychotic)障害、境界線的人格(borderline personality)障害、躁うつ障害、強迫障害、ハンチントン病、トウレット症候群(Tourette’s syndrome)、及びチック障害のモデル動物をアッセイに使用して、DARKK-32、ERK1、ERK2及びCREBの活性を調節する化合物について、あるいは精神疾患の症状を軽減する化合物について、スクリーニングすることができる。
本発明は、上述の発明の薬剤、医薬又は化合物の医薬組成物を提供する。これらの薬剤、医薬又は化合物、あるいはそれらの医薬上許容可能な塩又は溶媒和物は、注射による投与、あるいは、経口、局所、鼻腔、吸入、(口もしくは鼻からの)吹き入れ、頬、非経口(腸管外)、直腸投与、又は他の投与剤型に製剤化されうる。本発明は、有効量の本発明の薬剤を、医薬上許容可能な希釈剤、保存剤、溶解剤、乳化剤、増強剤(アジュバント)、賦形剤及び/又は担体と一緒に含む医薬組成物を提供する。そのような組成物には、種々の緩衝剤成分(例えばTris-HCl、酢酸塩、リン酸塩)、pH及びイオン強度の希釈剤;海面活性剤や溶解剤(例えばTween80、ポリソルベート80)、酸化防止剤(例えばアスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム)、保存剤(例えばチメロサール、ベンジルアルコル)、及び増量剤(例えばラクトース、マンニトール)などの添加剤が含まれる。
上記の化合物の毒性及び治療効能は、例えばLD50(集団の50%致死量)やED50(集団の50%治療有効量)を決定するために、培養細胞又は実験動物で標準医薬手法によって決定できる。毒性と治療効果との間の用量比は治療指数であり、LD50/ED50比として表される。大きい治療指数を示す化合物が好ましい。毒性副作用を示す化合物を使用することもできるが、影響を受けた組織に該化合物をターゲットして、影響を受けていない細胞に対する潜在的損傷を最少にし、副作用を低下させるような送達系を設計するように注意が払われるべきである。
本発明の治療組成物の単一又は複数成分は、非経口的に、局所的に、又は経粘膜的に(例えば経口的に、経鼻的に、もしくは経直腸的に)、あるいは経皮的に投与されうる。好ましい投与は、非経口投与、例えば静脈注射、であり、また以下のものに限定されないが、動脈内投与、筋内投与、皮内投与、経皮投与、腹腔内投与、経脳室投与、及び経頭蓋投与を含む。好適実施態様では、本発明の治療組成物の単一又は複数成分は、経口的に又は非経口的に投与される。
BUI=[(脳3H/脳14C)/(注射物3H/注射物14C)]X100
(式中、14C参照化合物が14Cブタノールまたは類似の溶媒である。)を用いて、脳取込み指数(BUI)を測定すること;(2)脳潅流実験;(3)静脈内ボーラス注射実験、及び(4)培養大脳毛細血管内皮を使用した実験、を含む。
ハロペリドール、クロザピン又はエチクロプリドを使用したin vivo治療はDARPP-32、CREB、ERK1及びERK2の異なるリン酸化を生じさせる
本実施例は、ハロペリドール、クロザピン又はエチクロプリドを使用したin vivo治療が、DARPP-32、CREB、ERK1及びERK2の異なるリン酸化を生じさせることを実証する。これらのデータは、定型及び非定型抗精神病薬が、細胞内シグナル伝達蛋白質のリン酸化パターンに基づいて識別又は区別できることを実証する。これらのデータにより、候補薬剤を、DARPP-32、CREB、ERK1及びERK2の特異のリン酸化パターンに基づいてスクリーニングして、それらの活性を定型又は非定型抗精神病薬として分類し、そして、さらなる試験と開発のために適当な候補を同定できることが示される。
雄C57/BL6マウス(6匹ずつの群)に、ハロペリドール(定型抗精神病薬)、クロザピン(非定型抗精神病薬)又はエチクロプリド(選択的ドーパミンD2受容体アンタゴニスト)の3種類の抗精神薬化合物の1つを腹腔内注射により投与した。注射の15分、30分又は60分後に、斬首によって全てのマウスを犠牲にした。斬首後、直ぐに頭を6秒間液体窒素に浸漬して、全ての蛋白質活性を不活化した。その後、氷冷した表面上で脳を切開し、線条体(striata)を取り出して750μlの1%SDS中で音波処理し、ついで10分間沸騰下に置いた。その後、リン酸化されたDARPP-32、CREB、ERK1及びERK2のレベルを測定した。
Claims (46)
- 治療を必要とする患者の精神疾患を治療する能力について被試験薬剤を同定するための方法であって、
(a) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(b) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(c) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(d) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(e) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(f) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(g) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(h) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(i) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(j) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(k) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-脱リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(l) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで、該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もしそれぞれ、
(i) Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化レベルの増加が段階(a)で検出されるか、あるいは、
(ii) Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化レベルの減少が段階(b)で検出されるか、あるいは、
(iii) Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの減少が段階(c)で検出されるか、あるいは、
(iv) Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの増加が段階(d)で検出されるか、あるいは、
(v) Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの減少が段階(e)で検出されるか、あるいは、
(vi) Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの増加が段階(f)で検出されるか、あるいは、
(vii) Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの減少が段階(g)で検出されるか、あるいは、
(viii) Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの増加が段階(h)で検出されるか、あるいは、
(ix) Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの減少が段階(i)で検出されるか、あるいは、
(x) Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの増加が段階(j)で検出されるか、あるいは、
(xi) Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化レベルの減少が段階(k)で検出されるか、あるいは、
(xii) Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化レベルの増加が段階(l)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的非定型抗精神病化合物として同定される、上記方法。 - 段階(a)から(l)のいずれか1つをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 段階(a)から(l)のいずれか2つをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 段階(a)から(l)のいずれか3つをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 段階(a)から(l)のいずれか4つをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 段階(a)から(l)のいずれか5つをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 段階(a)から(l)のいずれか6つをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 下記の更なる段階、すなわち、
(m) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr34-脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(n) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr34-リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もし、
(xiii) Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化の増加が段階(m)で検出されるか、あるいは、
(xix) Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化の減少が段階(n)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的非定型抗精神病化合物として同定される、
請求項1に記載の方法。 - 前記精神疾患を治療する能力が試験され、もし前記化合物が該精神疾患を改善する場合、非定型抗精神病化合物が同定される、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記精神疾患が統合失調症である、請求項9に記載の方法。
- 前記精神疾患を治療する能力が統合失調症モデル動物で試験される、請求項9に記載の方法。
- 前記検出段階が、前記接触段階後15分以上30分以下に実施される、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記検出段階が、前記接触段階後30分以上60分以下に実施される、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記検出段階が、前記接触段階後30分以上60分以下に実施される、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 治療を必要とする患者の精神疾患を治療する能力について被試験薬剤を同定するための方法であって、
(a) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(b) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(c) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(d) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(e) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(f) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(g) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(h) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(i) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(j) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(k) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-脱リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(l) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで、該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もしそれぞれ、
(i) Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化レベルの増加が段階(a)で検出されるか、あるいは、
(ii) Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化レベルの減少が段階(b)で検出されるか、あるいは、
(iii) Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの減少が段階(c)で検出されるか、あるいは、
(iv) Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの増加が段階(d)で検出されるか、あるいは、
(v) Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの減少が段階(e)で検出されるか、あるいは、
(vi) Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの増加が段階(f)で検出されるか、あるいは、
(vii) Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの減少が段階(g)で検出されるか、あるいは、
(viii) Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの増加が段階(h)で検出されるか、あるいは、
(ix) Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの減少が段階(i)で検出されるか、あるいは、
(x) Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの増加が段階(j)で検出されるか、あるいは、
(xi) Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化レベルの減少が段階(k)で検出されるか、あるいは、
(xii) Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化レベルの増加が段階(l)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的非定型抗精神病化合物として同定される、上記方法。 - 下記の更なる段階、すなわち、
(m) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr34-脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(n) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr34-リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もし、
(xiii) Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化の増加が段階(m)で検出されるか、あるいは、
(xix) Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化の減少が段階(n)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的非定型抗精神病化合物として同定される、
請求項15に記載の方法。 - 前記精神疾患を治療する能力が試験され、もし前記化合物が該精神疾患を改善する場合、非定型抗精神病化合物が同定される、請求項15又は16に記載の方法。
- 前記精神疾患が統合失調症である、請求項17に記載の方法。
- 前記精神疾患を治療する能力が統合失調症モデル動物で試験される、請求項17に記載の方法。
- 前記検出段階が、前記接触段階後15分以上30分以下に実施される、請求項15又は16に記載の方法。
- 前記検出段階が、前記接触段階後30分以上60分以下に実施される、請求項15又は16に記載の方法。
- 前記検出段階が、前記接触段階後30分以上60分以下に実施される、請求項15又は16に記載の方法。
- 治療を必要とする患者の精神疾患を治療する能力について被試験薬剤を同定するための方法であって、
(a) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(b) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr-75リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(c) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(d) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr202-リン酸化ERK1とを接触させて、Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(e) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-脱リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(f) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr204-リン酸化ERK1とを接触させて、Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(g) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(h) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とThr185-リン酸化ERK2とを接触させて、Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(i) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-脱リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(j) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とTyr187-リン酸化ERK2とを接触させて、Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化量を検出する段階、あるいは、
(k) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-脱リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(l) 細胞又は組織内で潜在的薬剤とSer133-リン酸化CREBとを接触させて、Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで、該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もしそれぞれ、
(i) Thr-75脱リン酸化DARPP-32のリン酸化レベルの未変化又は減少が段階(a)で検出されるか、あるいは、
(ii) Thr-75リン酸化DARPP-32の脱リン酸化レベルの未変化又は増加が段階(b)で検出されるか、あるいは、
(iii) Thr202-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの増加が段階(c)で検出されるか、あるいは、
(iv) Thr202-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの減少が段階(d)で検出されるか、あるいは、
(v) Tyr204-脱リン酸化ERK1のリン酸化レベルの増加が段階(e)で検出されるか、あるいは、
(vi) Tyr204-リン酸化ERK1の脱リン酸化レベルの減少が段階(f)で検出されるか、あるいは、
(vii) Thr185-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの増加が段階(g)で検出されるか、あるいは、
(viii) Thr185-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの減少が段階(h)で検出されるか、あるいは、
(ix) Tyr187-脱リン酸化ERK2のリン酸化レベルの増加が段階(i)で検出されるか、あるいは、
(x) Tyr187-リン酸化ERK2の脱リン酸化レベルの減少が段階(j)で検出されるか、あるいは、
(xi) Ser133-脱リン酸化CREBのリン酸化レベルの増加が段階(k)で検出されるか、あるいは、
(xii) Ser133-リン酸化CREBの脱リン酸化レベルの減少が段階(l)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的定型抗精神病化合物として同定される、上記方法。 - 下記の更なる段階、すなわち、
(m) 潜在的薬剤とThr34-脱リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化量を検出する段階、あるいは、
(n) 潜在的薬剤とThr34-リン酸化DARPP-32とを接触させて、Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化量を検出する段階、
を含み、ここで該潜在的薬剤の存在下で対照レベルに対して、もし、
(xiii) Thr34-脱リン酸化DARPP-32のリン酸化の増加が段階(m)で検出されるか、あるいは、
(xix) Thr34-リン酸化DARPP-32の脱リン酸化の減少が段階(n)で検出される、
場合に、該薬剤が潜在的定型抗精神病化合物として同定される、
請求項23に記載の方法。 - 前記精神疾患を治療する能力が試験され、もし前記化合物が該精神疾患を改善する場合、定型抗精神病化合物が同定される、請求項23又は24に記載の方法。
- 前記精神疾患が統合失調症である、請求項25に記載の方法。
- 前記精神疾患を治療する能力が統合失調症モデル動物で試験される、請求項25に記載の方法。
- 前記検出段階が、前記接触段階後15分以上30分以下に実施される、請求項23又は24に記載の方法。
- 前記検出段階が、前記接触段階後30分以上60分以下に実施される、請求項23又は24に記載の方法。
- 前記検出段階が、前記接触段階後30分以上60分以下に実施される、請求項23又は24に記載の方法。
- 前記リン酸化レベル又は脱リン酸化レベルがリン酸特異抗体を用いて検出される、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- 前記リン酸化レベル又は脱リン酸化レベルがキナーゼ活性の測定により検出される、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- 前記リン酸化レベル又は脱リン酸化レベルがホスファターゼ活性の測定により検出される、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- 前記細胞又は組織がヒト細胞又はヒト組織である、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- 前記細胞又は組織が細胞である、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- 前記細胞又は組織が組織である、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- 前記細胞又は組織が全動物である、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- 前記細胞又は組織がヒトである、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- DARPP-32がヒトDARPP-32である、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- CREBがヒトCREBである、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- ERK1がヒトERK1である、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- ERK2がヒトERK2である、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- DARPP-32がマウスDARPP-32である、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- CREBがマウスCREBである、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- ERK1がマウスERK1である、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
- ERK2がマウスERK2である、請求項1〜8、15、16、23及び24のいずれか1項に記載の方法。
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