JP2004261086A - Method for producing pipecolic acid - Google Patents
Method for producing pipecolic acid Download PDFInfo
- Publication number
- JP2004261086A JP2004261086A JP2003055011A JP2003055011A JP2004261086A JP 2004261086 A JP2004261086 A JP 2004261086A JP 2003055011 A JP2003055011 A JP 2003055011A JP 2003055011 A JP2003055011 A JP 2003055011A JP 2004261086 A JP2004261086 A JP 2004261086A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acid
- amino
- pipecolic acid
- acetyl
- pipecolic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Hydrogenated Pyridines (AREA)
Abstract
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は Ｌ−ピペコリン酸およびＤ−ピペコリン酸を低原価で量産できるピペコリン酸の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
光学活性ピペコリン酸は、図１に示すように天然に存在する種々の有用な生理活性物質の構成要素として含まれ、また合成医薬品の原料としても重要な化合物である。天然物質の構成成分としてはＦＫ５０６ （免疫抑制剤）、Ｒａｐａｍｉｃｉｎ （免疫抑制剤）、や Ｔｒａｐｏｘｉｎ Ａ （ＨＤＡＣ阻害剤）が、合成医薬品では ＶＸ７１０ （抗がん剤）や Ｂｕｐｉｖａｃａｉｎｅ （局部麻酔剤）が挙げられる。また、Ｌ−ピペコリン酸を含む天然物に Ｃｙｌ−２（非特許文献１）、及び Ｓａｎｄｒａｍｙｃｉｎ（非特許文献２）がある。
さらに、人工的に設計され、薬理活性を有するため有用である化合物中にも Ｌ−ピペコリン酸が構成要素として導入されている。例えば、ＶＸ７１０ （非特許文献３）および Ｌ−３６５，２０９（非特許文献４）が挙げられる。
Ｄ−ピペコリン酸を含む天然物には例えば、Ｔｒａｐｏｘｉｎ Ａ（非特許文献５）と Ａｐｉｃｉｄｉｎ（非特許文献６）とが挙げられる。
これらの構造を元に新規様々な薬理活性を有する医薬品の開発および製造を行なおうとする時、分子構造の組み立て上、Ｌ−ピペコリン酸または Ｄ−ピペコリン酸が必要であるが、特殊な環状イミノ酸であるピペコリン酸を完全な光学活性体で安価に入手する事が困難であり、創薬上のネックになっていた。そこで過去２０年以上に渡って、主として天然物の生理活性と構造との相関解明のために、必要とされる光学活性ピペコリン酸の合成および製造が数々試みられてきた。
【０００３】
（１）例えば、ピペコリン酸の製造方法として（非特許文献７）には、Ｌ− または Ｄ−リシン、或いはその他のアミノ酸からの誘導法が、また、（非特許文献８）には酵素を用いた方法として、リパーゼ、アミダ―ゼ、または酪酸ビニル存在下でアシラーゼを用いる方法が記載されている。
（２）（特許文献１）や（非特許文献９）には、比較的安価な ＤＬ−ピペコリン酸に対して酒石酸、キラルなパラジウム複核錯体、または Ｏ−フェニル乳酸を反応させ、分別沈殿による光学分割法が開示されており、ここでは、ＤＬ−ピペコリン酸を混合物媒体中で光学活性フェノキシプロピオン酸と反応させ、得られた難溶性ジアステレオマー塩を水に溶解又は懸濁し、これに当量又は過剰の酸を加えて複分解して光学的に純粋な Ｄ−ピペコリン酸又は Ｌ−ピペコリン酸を製造する方法が記載されている。
（３）（非特許文献１０）には、不斉触媒を用いたり、不斉点を導入したりするなどの不斉合成法が試みられており、（非特許文献１１）には、ハロゲン化アルキルに対するアミン類の分子内 ＳＮ２ 反応を用いてピペリジン環を形成する方法が記載されている。
（４）（非特許文献１２）には、Ｌ−リシンを原料として２種の酵素 （ｌｙｓｉｎｅ ６−ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ および Ｌ−Δ１−ｐｉｐｅｒｉｄｅｉｎｅ ６−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ） を応用した方法が提案されている。
【０００４】
【非特許文献１】
（Ｈｉｒｏｔａ， Ａ．， Ｓｕｚｕｋｉ， Ａ．， Ａｉｚａｗａ， Ｋ．， ａｎｄ Ｔａｍｕｒａ， Ｓ． （１９７３）． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｃｙｌ−２， ａ ｎｏｖｅｌ ｃｙｃｌｏｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ ｆｒｏｍ Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃｌａｄｉｕｍ ｓｃｏｐａｒｉｕｍ． Ａｒｇ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ３７， ９５５−９５６）、Ｒａｐａｍｙｃｉｎ （Ｖｅｚｉｎａ， Ｃ．， Ｋｕｄｅｌｓｋｉ， Ａ．， ａｎｄ Ｓｅｈｇａｌ， Ｓ． Ｎ． （１９７５）． Ｒａｐａｍｙｃｉｎ （ＡＹ−２２，９８９）， ａ ｎｅｗ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ． Ｉ． Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔｅ ａｎｄ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ． Ｊ． Ａｎｔｉｂｉｏｔ． ２８， ７２１−７２６）、ＦＫ５０６ （Ｔａｎａｋａ， Ｈ．， Ｋｕｒｏｄａ， Ａ．， Ｍａｒｕｓａｗａ， Ｈ．， Ｈａｔａｎａｋａ， Ｈ．， Ｋｉｎｏ， Ｔ．， Ｇｏｔｏ， Ｔ．， ａｎｄ Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ， Ｍ． （１９８７）． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＦＫ５０６： ａ ｎｏｖｅｌ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ． Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １０９， ５０３１−５０３３）
【非特許文献２】
（Ｂｏｇｅｒ， Ｄ． Ｌ．， Ｃｈｅｎ， Ｊ． Ｈ．， ａｎｄ Ｓａｉｏｎｚ， Ｋ． Ｗ． （１９９６）． （−）−Ｓａｎｄｒａｍｙｃｉｎ： Ｔｏｔａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ． Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １１８， １６２９−１６４４）
【非特許文献３】
（Ｇｅｒｍａｎｎ， Ｕ． Ａ．， Ｓｈｌｙａｋｈｔｅｒ， Ｄ．， Ｍａｓｏｎ， Ｖ． Ｓ．， Ｚｅｌｌｅ， Ｒ． Ｅ．， Ｄｕｆｆｙ， Ｊ． Ｐ．， Ｇａｌｕｌｌｏ， Ｖ．， Ａｒｍｉｓｔｅａｄ， Ｄ． Ｍ．， Ｓａｕｎｄｅｒｓ， Ｊ． Ｏ．， Ｂｏｇｅｒ， Ｊ．， ａｎｄ Ｈａｒｄｉｎｇ， Ｍ． Ｗ． （１９９７）． Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＶＸ−７１０ ａｓ ａ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ： Ｒｅｖｅｒｓａｌ ｏｆ Ｐ−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ． Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ８， １２５−１４０）、Ｂｕｐｉｖａｃａｉｎｅ （Ａｄｇｅｒ， Ｂ．， Ｄｙｅｒ， Ｕ．， Ｈｕｔｔｏｎ， Ｇ．， ａｎｄ Ｗｏｏｄｓ， Ｍ． （１９９６）． Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｎａｅｓｔｈｅｔｉｃ ｌｅｖｏｂｕｐｉｖａｃａｉｎｅ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． ３７， ６３９９−６４０２）、
【非特許文献４】
（Ｐｅｔｔｉｂｏｎｅ， Ｄ． Ｊ．， Ｃｌｉｎｅｓｃｈｍｉｄｔ， Ｂ． Ｖ．， Ａｎｄｅｒｓｏｎ， Ｐ． Ｓ．， Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ， Ｒ． Ｍ．， Ｌｕｎｄｅｌｌ， Ｇ． Ｆ．， Ｋｏｕｐａｌ， Ｌ． Ｒ．， Ｓｃｈｗａｒｔｚ， Ｃ． Ｄ．， Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ， Ｊ． Ｍ．， Ｇｏｅｔｚ， Ｍ． Ａ．， Ｈｅｎｓｅｎｓ， Ｏ． Ｄ．， Ｌｉｅｓｃｈ， Ｊ． Ｍ．， ａｎｄ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ， Ｊ． Ｐ． （１９８９）． Ａ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｌｙ ｕｎｉｑｕｅ， ｐｏｔｅｎｔ， ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｏｘｙｔｏｃｉｎ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｉｌｖｅｎｓｉｓ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １２５， ２１７−２２２）
【非特許文献５】
（Ｉｔａｇａｋｉ， Ｈ．， Ｎａｇａｓｈｉｍａ， Ｋ．， Ｓｕｇｉｔａ， Ｋ．， Ｙｏｓｈｉｄａ， Ｈ．， Ｋａｗａｍｕｒａ， Ｙ．， Ｙａｓｕｄａ， Ｙ．， Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ， Ｋ．， Ｉｓｈｉｉ， Ｋ．， Ｕｏｔａｎｉ， Ｎ．， Ｎａｋａｉ， Ｈ．， Ｔｅｒｕｉ， Ａ．， ａｎｄ Ｙｏｓｈｉｍａｔｓｕ， Ｓ． （１９９０）． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｗ ｃｙｃｌｏｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅｓ， Ｔｒａｐｏｘｉｎｓ Ａ ａｎｄ Ｂ， ｈａｖｉｎｇ ｄｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｓ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｇｅｎｔｓ． Ｊ． Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ４３， １５２４−１５３２）
【非特許文献６】
（Ｄａｒｋｉｎ−Ｒａｔｔｒａｙ， Ｓ． Ｊ．， Ｇｕｒｎｅｔｔ， Ａ． Ｍ．， Ｍｙｅｒｓ， Ｒ． Ｗ．， Ｄｕｌｓｋｉ， Ｐ． Ｍ．， Ｃｒｕｍｌｅｙ， Ｔ． Ｍ．， Ａｌｌｏｃｃｏ， Ｊ． Ｊ．， Ｃａｎｎｏｖａ， Ｃ．， Ｍｅｉｎｋｅ， Ｐ． Ｔ．， Ｃｏｌｌｅｔｔｉ， Ｓ． Ｌ．， Ｂｅｄｎａｒｅｋ， Ｍ． Ａ．， Ｓｉｎｇｈ， Ｓ． Ｂ．， Ｇｏｅｔｚ， Ｍ． Ａ．， Ｄｏｍｂｒｏｗｓｋｉ， Ａ． Ｗ．， Ｐｏｌｉｓｈｏｏｋ， Ｊ． Ｄ．， ａｎｄ Ｓｃｈｍａｔｚ， Ｄ． Ｍ． （１９９６）． Ａｐｉｃｉｄｉｎ： Ａ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉｐｒｏｔｏｚｏａｌ ａｇｅｎｔ ｔｈａｔ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐａｒａｓｉｔｅ ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． ＵＳＡ ９３， １３１４３−１３１４７， Ｓｉｎｇｈ， Ｓ． Ｂ．， Ｚｉｎｋ， Ｄ． Ｌ．， Ｌｉｅｓｃｈ， Ｊ． Ｍ．， Ｍｏｓｌｅｙ， Ｒ． Ｔ．， Ｄｏｍｂｒｏｗｓｋｉ， Ａ． Ｗ．， Ｂｉｌｌｓ， Ｇ． Ｆ．， Ｄａｒｋｉｎ−Ｒａｔｔｒａｙ， Ｓ． Ｊ．， Ｓｃｈｍａｔｚ， Ｄ． Ｍ．， ａｎｄ Ｇｏｅｔｚ， Ｍ． Ａ． （２００２）． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ａｐｉｃｉｄｉｎｓ， ａ ｃｌａｓｓ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｃｙｃｌｉｃ ｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ａ ｔｅｒｍｉｎａｌ ａ−ｋｅｔｏ ｅｐｏｘｉｄｅ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｐｒｏｔｏｚｏａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ． Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ６７， ８１５−８２５）
【非特許文献７】
（Ｆｕｊｉｉ， Ｔ． ａｎｄ Ｍｉｙｏｓｈｉ， Ｍ． （１９７５）． Ａ ｎｏｖｅｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｌ−ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ． Ｂｕｌｌ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｊｐｎ． ４８， １３４１−１３４２； Ｋｉｓｆａｌｕｄｙ， Ｌ．， ａｎｄ Ｋｏｒｅｎｃｚｋｉ， Ｆ． （１９８２）． Ｏｎｅ−ｓｔｅｐ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｌ−ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ． Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ９， １６３； Ｏｈｔａｎｉ， Ｂ．， Ｔｓｕｒｕ， Ｓ．， Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ， Ｓ．， ａｎｄ Ｋａｇｉｙａ， Ｔ． （１９９０）． Ｐｈｏｔｏｃａｔａｌｙｔｉｃ ｏｎｅ−ｓｔｅｐ ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ ｏｆ ｃｙｃｌｉｃ ｉｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｂｙ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｅｍｉｃｏｎｄｕｃｔｏｒ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ． Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ５５， ５５５１−５５５３）。
【非特許文献８】
（Ｎｇ−Ｙｏｕｎ−Ｃｈｅｎ， Ｍ． Ｃ．， Ｓｅｒｒｅｑｉ， Ａ． Ｎ．， Ｈｕａｎｇ， Ｑ． Ｌ．， ａｎｄ Ｋａｚｌａｕｓｋａｓ， Ｒ． Ｊ． （１９９４）． Ｋｉｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｕｓｉｎｇ ｐａｒｔｉａｌｌｙ−ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｌｉｐａｓｅ ｆｒｏｍ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ． Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ５９， ２０７５−２０８１； Ｅｉｃｈｈｏｒｎ， Ｅ．， Ｒｏｄｕｉｔ， Ｊ．， Ｓｈａｗ， Ｎ．， Ｈｅｉｎｚｍａｎｎ， Ｋ．， ａｎｄ Ｋｉｅｎｅｒ， Ａ． （１９９７）． Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ （Ｓ）−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ， （Ｒ）−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ， ａｎｄ （Ｓ）−ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ ｋｉｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｒａｃｅｍｉｃ ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅｓ ｗｉｔｈ ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｍｉｄａｓｅｓ ｉｎ ｗｈｏｌｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｅｌｌｓ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ： Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ ８， ２５３３−２５３６； Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｓａｎｃｈｏ， Ｆ． ａｎｄ Ｈｅｒｒａｄｏｎ， Ｂ． （１９９８）． Ｓｈｏｒｔ ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ ｏｆ （Ｓ）−ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ， （Ｒ）−ｃｏｎｉｉｎｅ， ａｎｄ （Ｓ）−ｄ−ｃｏｎｉｃｅｉｎｅ ｕｓｉｎｇ ｂｉｏｃａｔａｌｙｔｉｃａｌｌｙ−ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｃｈｉｒａｌ ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｂｌｏｃｋｓ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ： Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ ９， １９５１−１９６５）
【非特許文献９】
（Ｐｏｒｔｏｇｈｅｓｅ， Ｐ． Ｓ．， Ｐａｚｄｅｒｎｉｋ， Ｔ． Ｌ．， Ｋｕｈｎ， Ｗ． Ｌ．， Ｈｉｔｅ， Ｇ．， Ｓｈａｆｉ’ｅｅ， Ａ． （１９６８） Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ａｇｅｎｔｓ． Ｖ． Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｉｐｒａｄｒｏｌ ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ． Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １１， １２−１５； Ｈａｒｄｔｍａｎｎ， Ｇ． Ｅ．， Ｈｏｕｌｉｈａｎ， Ｗ． Ｊ．， ａｎｄ Ｇｉｇｅｒ， Ｒ． Ｋ． Ａ． （１９８８）． Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｃ ｑｕｉｎａｚｏｌｉｎ−ｏｎｅｓ ｈａｖｉｎｇ ｔｒａｎｑｕｉｌｉｚｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ． ＵＳ ｐａｔｅｎｔ ４７６００６５； Ｈｏｃｈｌｅｓｓ， Ｄ． Ｃ． Ｒ．， Ｍａｙａｄｕｎｎｅ， Ｒ． Ｃ．， ａｎｄ Ｗｉｌｄ， Ｓ． Ｂ． （１９９５）． Ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ （±）−ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ （（±）−ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ） ｂｙ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｌｌａｄｉｕｍ（ＩＩ） ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｏｒｔｈｏｍｅｔａｌｌａｔｅｄ （Ｓ）−（−）−１−［１−（Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｅｔｈｙｌ］ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ： Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ ６， ３０３１−３０３７）
【非特許文献１０】
（Ｂｅｒｒｉｅｎ， Ｊ． Ｆ．， Ｒｏｙｅｒ， Ｊ．， Ｈｕｓｓｏｎ， Ｈ． Ｐ． （１９９４）． Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ． ３２． Ａ ｎｅｗ ａｃｃｅｓｓ ｔｏ ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃａｌｌｙ ｐｕｒｅ （Ｓ）−（−）−ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ２− ｏｒ ６−ａｌｋｙｌａｔｅｄ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ． Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ５９， ３７６９−３７７４； Ｆｏｔｉ， Ｃ．， Ｊ． ａｎｄ Ｃｏｍｉｎｓ， Ｄ． Ｌ． （１９９５）． Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａ−（ｔｒｉｆｌｕｒｏｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌｏｘｙ）ｅｎｅｃａｒｂａｍａｔｅｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｆｒｏｍ Ｎ−ａｃｙｌｌａｃｔａｍｓ． Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ６０， ２６５６−２６５７； Ａｇａｍｉ， Ｃ．， Ｋａｄｏｕｒｉ−Ｐｕｃｈｏｔ， Ｃ．， ａｎｄ Ｋｉｚｉｒｉａｎ， Ｊ． Ｃ． （２０００）． Ａ ｎｅｗ ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ （２Ｓ）−ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ． Ｓｙｎｔｈ． Ｃｏｍｍｍｕｎ． ３０， ２５６５−２５７２； Ｇｉｎｅｓｔａ， Ｘ．， Ｐｅｒｉｃａｓ， Ｍ． Ａ．， Ｒｉｅｒａ， Ａ． （２００２）． Ｓｔｒａｉｇｈｔｆｏｒｗａｒｄ ｅｎｔｒｙ ｔｏ ｔｈｅ ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｎｕｃｌｅｕｓ． Ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｂａｉｋｉａｉｎ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ｌｅｔｔ． ４３， ７７９−７８２）。
【非特許文献１１】
（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｇａｒｃｉａ， Ｃ．， ａｎｄ ＭｃＫｅｒｖｅｙ， Ｍ． Ａ． （１９９５）． Ａ ｓｈｏｒｔ ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ： Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ ６， ２９０５−２９０６； Ｍｙｅｒｓ， Ａ． Ｇ．， Ｇｌｅａｓｏｎ， Ｊ． Ｌ．， Ｙｏｏｎ， Ｔ．， ａｎｄ Ｋｕｎｇ， Ｄ． Ｗ． （１９９７）． Ｈｉｇｈｌｙ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｄ− ａｎｄ Ｌ−ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ， Ｎ−ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ， ａｎｄ Ｎ−ｍｅｔｈｙｌ−ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ． Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １１９， ６５６−６７３； Ｎａｚａｂａｄｉｏｋｏ， Ｓ．， Ｐｅｒｅｚ， Ｒ． Ｊ．， Ｂｒｉｅｖａ， Ｒ．， ａｎｄ Ｇｏｔｏｒ， Ｖ． （１９９８）． Ｃｈｅｍｏｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ （Ｓ）−２−ｃｙａｎｏｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ， ａ ｋｅｙ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｕｔｅ ｔｏ （Ｓ）−ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ２−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ ａｌｋａｌｏｉｄｓ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ： Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ ９， １５９７−１６０４）。
【非特許文献１２】
（Ａｇｅｍａｔｓｕ， Ｈ．， ａｎｄ Ｆｕｊｉｉ， Ｔ． （２００２）． Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｌ−ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ａｔ ａｎ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｓｃａｌｅ． Ｂｉｏ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ １９， ４０−４７）。
【０００５】
【特許文献１】
特開２０００−１７８２５３号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、前記の従来の技術では以下のような課題があった。
（ａ）非特許文献７に記載のリシンなどのアミノ酸からの誘導法は、 α−位およびε−位のアミノ基の選択反応を必要とし、アミノ基の官能基変換の際に水酸化等の副反応が多く起こるため低収率、低純度であり、試薬の使用に危険が伴うなど操作上の問題があり、安価な供給が困難であるという課題があった。
（ｂ）非特許文献８に記載のリパーゼ、アミダ―ゼ、または酪酸ビニル存在下でアシラーゼを用いる方法では、ジアステレオマー選択性が不十分である の理由で実用的な製造法となるに到らず、酵素の立体特異性の応用面で効率化を図る点で不十分であるという課題があった。
（ｃ）特許文献１や非特許文献９などに記載の分別沈殿法では、 ＤＬ−ピペコリン酸を原料として光学分割するので、光学異性体を別途準備し、使用後それを回収する必要がある点で非効率的であるという課題があった。
（ｄ）非特許文献１０に記載の不斉合成法は、不斉点を導入する試薬そのもの が高価であり、規模も実験室レベルであるため量産性に欠け実用的ではなく 工業的な適用が困難であるという課題があった。
（ｅ）非特許文献１１に記載のアミン類の分子内 ＳＮ２ 反応を用いてピペリジン環を形成する方法では、ピペリジン環のものに限定されるため直接ピペコリン酸に到らず低収率であり、また、酵素による光学分割法ではないため 不要のジアステレオマーも副生してしまい高純度のものが得られ難いという課題があった。
（ｆ）非特許文献１２の Ｌ−リシンを原料として２種の酵素を適用した方法は、Ｌ−体の立体特異性を持った酵素を用いるため、また、Ｄ−体の立体特異性を有する同様酵素が開発されていないために Ｄ−ピペコリン酸の製造には適用できないという課題があった。
【０００７】
本発明は前記従来の課題を解決するためになされたもので、高純度に光学分割されたピペコリン酸を高収率で安価に供給することができるピペコリン酸の製造方法を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
請求項１に記載のピペコリン酸の製造方法は、ハロゲン基を側鎖末端に有するアミノ酸誘導体のラセミ体溶液にアミノアシラーゼを添加する調整工程と、前記アミノ酸誘導体の分子内環化反応条件に前記溶液を保持させ前記アミノアシラーゼのエナンチオマー特異的作用により光学活性ピペコリン酸を生成させる生成工程と、前記溶液から前記光学活性ピペコリン酸を溶媒抽出する抽出工程と、を備えて構成されている。
これによって、高純度に光学分割されたピペコリン酸を高収率で安価に製造することができる。すなわち、ハロゲン基を側鎖末端に有するアミノ酸誘導体に光学活性なアミノアシラーゼを作用させることによって、アミノ酸誘導体をエナンチオマー特異的に加水分解させ、その直後に起こる分子内環化反応によって光学活性ピペコリン酸を効率的に生成させることができる。
【０００９】
ここで、アミノ酸誘導体としては、ＤＬ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸などのアミノアシラーゼによるエナンチオマー特異的加水分解作用により分子内環化してピペコリン酸を生成可能なラセミ体やラセミ体を光学分割されたものが適用できる。
ハロゲン基は、アミノ酸誘導体の分子内環化反応を誘発して脱離するするためのもので、臭素、塩素、ヨウ素などのハロゲン元素の他、アルキルまたはアリルスルホン酸エステルを適用することができる。なお、アミノ酸誘導体の側鎖末端とは、アミノ酸誘導体におけるα−炭素から伸長した原子団の末端をいう。
アミノアシラーゼは微生物などから抽出され、アミノ酸誘導体のアミド結合を加水分解させる酵素であり、アスペルギルスジーナス（ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｅｎｕｓ ）Ｌ−アミノアシラーゼ、アルカリジーナスキシロースオキシダンス（ Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｙｄａｎｓ ）Ｄ−アミノアシラーゼなどが含まれる。
分子内環化反応は、図３に例示されるようにアミノ酸誘導体を自己環化させて特殊なイミノ酸を生成させる反応である。アミノ酸誘導体を所定の分子内環化反応条件に保持してアミノアシラーゼの作用で加水分解させることにより自己環化させることができる。すなわち、アミノアシラーゼの酵素的エナンチオマー特異的加水分解およびこの加水分解に伴う分子内環化反応によって光学活性なピペコリン酸（ Ｌ−ピペコリン酸および Ｄ−ピペコリン酸）を製造できる。
【００１０】
請求項２に記載のピペコリン酸の製造方法は、請求項１に記載の発明において、前記分子内環化反応条件が、前記ラセミ体溶液におけるｐＨ６〜９、温度が２０〜５０℃、保持時間が１０〜３０時間であるように構成されている。
これによって、アミノアシラーゼによるエナンチオマー特異的加水分解およびこれに伴う分子内環化反応を適正に維持させることができ、高純度の光学活性ピペコリン酸をさらに高収率で得ることができる。
ここで、ラセミ体溶液におけるｐＨが６より低くなると、特異的加水分解の反応速度などが低下する傾向が現れ、逆にｐＨが９を超えるとアミノアシラーゼが変性して光学活性なピペコリン酸を有効に得ることができなくなる傾向が現れるので好ましくない。
ラセミ体溶液における温度が２０℃より低くなると、反応速度などが極端に低下する傾向が現れ、逆に温度が５０℃を超えるとアミノアシラーゼが変性して光学活性なピペコリン酸を有効に得ることができなくなる傾向が現れるので好ましくない。
溶液における分子内環化反応の保持時間が１０時間より短くなると、特異的加水分解の反応速度などが低下する傾向が現れ、逆に保持時間が３０時間より長くなるとアミノアシラーゼが変性して光学活性なピペコリン酸を有効に得ることができなくなる傾向が現れるので好ましくない。
【００１１】
請求項３に記載のピペコリン酸の製造方法は、請求項１又は２に記載の発明において、前記アミノ酸誘導体が ＤＬ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸、ＤＬ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−クロロヘキサン酸、ＤＬ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−ヨードヘキサン酸、ＤＬ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−メタンスルフォキシヘキサン酸、ＤＬ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−トシルオキシヘキサン酸のいずれか１のラセミ体であって、前記アミノアシラーゼがアスペルギルス・ジーナス（ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｅｎｕｓ ）Ｌ−アミノアシラーゼ又はアルカリジーナスキシロースオキシダンス（ Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｙｄａｎｓ ）Ｄ−アミノアシラーゼであるように構成されている。
これによって、光学活性なピペコリン酸を高収率で得ることができ、酵素を用いる光学分割によって得られるアミノ酸誘導体を中間体として、簡便かつ好収率で Ｄ−および Ｌ−ピペコリン酸を製造することができる。
ここで、Ｌ−アミノアシラーゼとしては、前記以外に（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｅｎｕｓ， Ｔｈｅｒｍｏｃｏｃｃｕｓ ｅｉｔｏｒａｌｉｓ）及びアシラーゼＩ（ブタスイ臓、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｍｅｌｌｅｕｓ）を用いることもできる。
【００１２】
請求項４に記載のピペコリン酸の製造方法は、請求項１乃至３の内いずれか１項に記載の発明において、前記抽出工程により Ｌ−ピペコリン酸が抽出除去された残溶液から Ｄ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸を回収する工程と、前記回収されたＤ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸にアルカリジーナスキシロースオキシダンス（ Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｙｄａｎｓ ）Ｄ−アミノアシラーゼを添加し、その Ｄ−エナンチオマー特異的作用により脱アセチル化させ、分子内環化させて Ｄ−ピペコリン酸を生成する工程とを備えて構成されている。
これによって、Ｌ−ピペコリン酸を抽出した残溶液を有効に用いて、付加価値の高い Ｄ−ピペコリン酸を無駄なく生成でき、生産性に優れたピペコリン酸製造システムを構成することができ、特殊なイミノ酸である光学活性なピペコリン酸の供給不足に対応して両光学異性体の供給を容易化して医療開発研究などを押し進めることができる。
【００１３】
請求項５に記載のピペコリン酸の製造方法は、請求項１乃至３の内いずれか１項に記載の発明において、前記抽出工程によりＤ−ピペコリン酸が抽出除去された残溶液からＬ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸を回収する工程と、前記回収されたＬ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸にアスペルギルス・ジーナス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｅｎｕｓ）Ｌ−アミノアシラーゼを添加し、そのＬ−エナンチオマー特異的作用により脱アセチル化させ、分子内環化させて Ｌ−ピペコリン酸を生成する工程とを備えて構成されている。
これによって、Ｄ−ピペコリン酸を抽出した残溶液を有効に用いて、付加価値の高いＬ−ピペコリン酸を無駄なく生成でき、生産性に優れたピペコリン酸製造システムを実現できる。
【００１４】
請求項６に記載のピペコリン酸の製造方法は、請求項３乃至５の内いずれか１項に記載の発明において、前記 ＤＬ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸が、アセタミドマロン酸ジエチルと １， ４−ジブロモブタンを反応させてアセタミド−４−ブロモブチルマロン酸ジエチルを生成させる工程と、前記アセタミド−４−ブロモブチルマロン酸を半ケン化して加熱脱炭酸し ＤＬ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチル得る工程と、前記 ＤＬ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチルをケン化、結晶化させる工程とを順次実行して製造されるように構成されている。
これによって、比較的安価で入手しやすいアセタミドマロン酸ジエチルを出発原料として、ピペコリン酸製造のため中間体となるＤＬ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸を制御しやすい容易な工程で効率的に製造することができ、生産性に優れた製造システムを構築できる。
ここで、半ケン化の条件は、アセタミド−４−ブロモブチルマロン酸に氷冷下、１当量強のアルカリを添加する条件であり、加熱脱炭酸の条件はトルエンまたは酢酸エチル溶液を添加して加熱還流させる条件である。
【００１５】
請求項７に記載のピペコリン酸の製造方法は、ｔ−ベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基などの脱着時に前記ハロゲン基を保護して温和な条件により脱着可能なウレタン型の保護基がアミノ基に結合され側鎖末端にハロゲン基を備えたアミノ酸誘導体の溶液を前記保護基の脱着条件に保持して、この脱着に伴う前記アミノ酸誘導体の分子内環化反応によってピペコリン酸を生成させることように構成されている。
これによって、保護基の脱着や加水分解に伴う分子内環化反応によってピペコリン酸を有効に生成することができる。すなわち、図４に例示されるようにアミノ酸誘導体の保護基（アミノ基を修飾するｔ−ブトキシカルボニル基の部分）を所定の条件下で加水分解させ、これに続く分子内環化反応によってピペコリン酸を効率的に生成させるものである。こうして、Ｌ−ピペコリン酸および Ｄ−ピペコリン酸並びにそれらの誘導体を個別に、安価に供給することができる。
保護基はジブロモブタンとの反応時におけるアミノ酸誘導体のアミノ基を保護するために導入される官能基であって、また分子内環化反応直前までアミノ基のブロモ結合炭素との反応を抑えるための保護基であり、ベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基などが用いられる。
【００１６】
請求項８に記載のピペコリン酸の製造方法は、請求項７に記載の発明において、前記保護基の脱着条件が、室温下におけるパラジウム炭を触媒とする水素添加反応条件又は、塩化水素含有ジオキサン溶液又は酢酸エチル溶液中での脱着反応条件であるように構成される。
これによって、光学活性のピペコリン酸を得るために必要な脱着条件を適正に保持させることができ、１００％近い高純度のピペコリン酸を８０〜９０％の高収率で得ることができ、保護基を有するアミノ酸誘導体を用いて、工業的な規模でのピペコリン酸の製造を可能にする。
ここで、塩化水素の濃度は２モル濃度でアミノ酸誘導体に対し約１０当量用いられる。
【００１７】
請求項９に記載のピペコリン酸の製造方法は、請求項７又は８に記載の発明において、前記アミノ酸誘導体が（１）Ｎ−保護−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸や（２）Ｎ−保護−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸であって、（１）前記Ｎ−保護−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸が、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−アミノマロン酸ジエチル、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−アミノマロン酸ジエチル等の保護基を有するアミノマロン酸誘導体と １， ４−ジブロモブタンを反応させて Ｎ−保護−アミノ−４−ブロモブチルマロン酸ジエチルを生成せしめた後、氷冷下で希薄強アルカリ水を添加して半ケン化し、次いで加熱脱炭酸して得られる ＤＬ−Ｎ−保護−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチルをタンパク質分解酵素またはエステラーゼの加水分解作用によって生成されたものであり、
（２）前記Ｎ−保護−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸が、前記Ｎ−保護−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸の生成後の溶液から回収された Ｎ−保護− Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチルを氷冷下で希薄強アルカリ水を添加してケン化して生成されるように構成されている
これによって、光学活性ピペコリン酸（ Ｄ−ピペコリン酸、Ｌ−ピペコリン酸）製造の際に（１）Ｎ−保護−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸や（２） Ｎ−保護−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸を中間原料として、効率的な生産システムを構成することができ、医薬品原料となるような光学活性ピペコリン酸を低原価で量産することができる。
ここで、温和な条件とは、アミノ酸誘導体の反応保持温度が０℃以下であるような条件をいい、これによって半ケン化及びケン化の程度などを制御することができる。
タンパク質分解酵素としては、エステル分解作用を有するキモトリプシン、ズブチリシン、アルカリプロテアーゼなどや、立体特異性が厳密であるエステラーゼなどが好適に用いられる。
希薄強アルカリ水としては、水酸化ナトリウムや水酸化カリウム等の約０．１Ｎ溶液が用いられる。
【００１８】
【発明の実施の形態】
本発明者らは、Ｌ−ピペコリン酸および Ｄ−ピペコリン酸を構成要素として含有する生理活性天然物をリードとする抗がん剤の開発ならびに特殊人工アミノ酸の開発中に、偶然ピペコリン酸を生成する副反応を発見した。この反応を利用すれば新規にＬ−ピペコリン酸および Ｄ−ピペコリン酸並びにそれら誘導体を簡便に製造することができるのではないかと考え、上記課題を解決するため鋭意研究を行なった結果、図３に示すようにハロゲン基を側鎖末端に有するラセミのアミノ酸誘導体がアスペルギルスジーナス（ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｅｎｕｓ ）Ｌ−アミノアシラーゼ及び、アルカリジーナスキシロースオキシダンス（ Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｙｄａｎｓ ）Ｄ−アミノアシラーゼの作用により、定量的にＬ−ピペコリン酸および Ｄ−ピペコリン酸を生成することを確認した。また、アミノ基をウレタン型等の保護基で保護し、側鎖末端にハロゲン基、アルキルスルホキシ基を有するラセミ体の２−アミノヘキサン酸エステルを、スブチリシン、キモトリプシン、酸性プロテアーゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、中性プロテアーゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ， Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）又はアルカリプロテアーゼ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ， Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｍｅｌｌｅｕｓ， Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｍｉｓ）等のプロテアーゼで処理した後に、保護基の除去と同時にＬ−ピペコリン酸および Ｄ−ピペコリン酸が生成することを確認した。本発明者らはこの酵素的エナンチオマー特異的加水分解および自動環化反応をＬ−ピペコリン酸および Ｄ−ピペコリン酸の簡便な製造法に利用できることを見出して本発明を完成させた。
すなわち本発明は、以下の Ｌ−ピペコリン酸および Ｄ−ピペコリン酸の製造方法を包含するものである。
［１］ アセタミドマロン酸ジエチルよりＮ−アセチル−ＤＬ−２−アミノ−６−ハロゲノへキサン酸を原料として調製する方法。
［２］ ラセミ体中のＬ−体にＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｅｎｕｓ Ｌ−アミノアシラーゼを、Ｄ−体にＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｙｄａｎｓ Ｄ−アミノアシラーゼを作用させて、Ｌ−ピペコリン酸および Ｄ−ピペコリン酸を生成せしめる方法。
［３］ Ｎ−アシル−ＤＬ−２−アミノ−６−ハロゲノへキサン酸エステルにプロテアーゼを作用させた後、アシル基を除去すると同時にＬ−ピペコリン酸を生成させる方法。
［４］ 回収した Ｄ−Ｎ−アシル−２−アミノ−６−ハロゲノへキサン酸エステルより、脱保護によってＤ−ピペコリン酸またはその誘導体を生成せしめる方法。
【００１９】
すなわち、本実施の形態の概要は以下のとおりである。
アセタミドマロン酸ジエチルと１，４−ジブロモブタンを定法で反応させ、温和な条件でケン化反応を２回行い、得られるＮ−アセチル−ＤＬ−２−アミノ−６−へキサン酸をＬ−アミノアシラーゼによって処理すれば、酵素特異的光学分割によって生成したＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸は、反応溶液中で直ちにＬ−ピペコリン酸に変わる。続いて定量的に回収するＮ−アセチル−Ｄ−２−アミノ−６−へキサン酸に更にＤ−アミノアシラーゼを作用させ、同様にＤ−ピペコリン酸を得る事ができる。
【００２０】
一方、図４に示すように、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−アミノマロン酸ジエチルのように脱着可能な保護基を用いる場合、同様に１，４−ジブロモブタンと反応させ、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノ−４−ブロモブチルマロン酸ジエチルを得、上記と同様に半ケン化、脱炭酸のステップを経て得られるＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−ＤＬ−２−アミノ−６−ブロモヘキサン酸エチルをズブチリシン等のタンパク質分解酵素またはエステラーゼによって処理すると、エチルエステルの酵素的、立体特異的加水分解によってＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモヘキサン酸と、酵素作用を受けないＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモヘキサン酸エチルとが得られる。両者は容易に分離可能である。Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモヘキサン酸エチルを、更にエタノール中で氷冷下ケン化を行ない、定量的にＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモヘキサン酸に変換する。Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモヘキサン酸を酸処理し、次いで中和すると生成したＬ−２−アミノ−６−ブロモヘキサン酸は自動的に分子内環化反応を起こして、Ｌ−ピペコリン酸を生成する。同様にしてＤ−ピペコリン酸を得る。
【００２１】
ベンジルオキシカルボニル基をアミノマロン酸ジエチルのアシル保護基として用いる場合、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸をメタノール中でパラジウム等の触媒存在下、接触還元すれば、生成したＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸は自動的に分子内環化反応により、Ｌ−ピペコリン酸を生成する。Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸からは同様にＤ−ピペコリン酸が得られる。ｔ−ブトキシカルボニル基以外の、ベンジルオキシカルボニル基等温和に脱着可能な保護基も用い得る。また、エチルエステル以外のエステルも用い得る。
【００２２】
本実施の形態において、２−アミノ−６−ハロゲノへキサン酸のアミノ保護基として、アセチル基以外にその他の置換アシル基およびウレタン型のアシル基を含む。同等の作用が得られるからである。 Ｌ−アミノアシラーゼおよび Ｄ−アミノアシラーゼのエナンチオマー特異的（光学特異性、立体特異性）加水分解活性が充分であればよい。エステラーゼ活性を示す酵素はエナンチオマー特異的（光学特異性、立体特異性）加水分解活性が充分であれば、その対象エステルの種類と本来の酵素反応の特異性を問わない。
【００２３】
以上のように本実施の形態のピペコリン酸の製造方法は、ＤＬ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸にＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｅｎｕｓ Ｌ−アミノアシラーゼを作用させ、酵素による光学分割に続いて速やかに分子内環化反応を起こさせるＬ−ピペコリン酸を生成させる。また、この反応から回収されるＤ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸を更にＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｙｄａｎｓ Ｄ−アミノアシラーゼで処理すると、同様にＤ−ピペコリン酸が得られる。このように側鎖にブロモアルキル基を有するラセミ体アミノ酸の酵素分割を利用して、Ｌ−およびＤ−ピペコリン酸を高純度、高収率で合成できる優れた生産システムを構築できる。
【００２４】
以下、実施例により図面を用いてさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に制限されるものではない。
（実施例１）
図２にＮ−アセチル−ＤＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸の合成の概要を示す。
（１）アセタミド−４−ブロモブチルマロン酸ジエチルの合成
３００ ｍｌ ナスフラスコ中で脱水 エタノール （１００ ｍｌ） に金属ナトリウム （２．１９ ｇ， ９５ ｍｍｏｌ） を加え ３０ 分間攪拌後、アセタミドマロン酸ジエチル （２１．０８ ｇ， １００ ｍｍｏｌ） を加え ３０ 分間加熱（１２０℃）下攪拌した。そこに １， ４−ジブロモブタン （５９ ｍｌ， ５００ ｍｍｏｌ） を加えて ５ 時間の還流を行った。放冷後、酢酸 （０．２９ ｍｌ， ５ ｍｍｏｌ） を加え、エタノールと １， ４−ジブロモブタンをそれぞれ留去した。酢酸エチル （３００ ｍｌ） で目的物を抽出した後、シリカゲルクロマトグラフィー （φ４．７ ｃｍ ｘ １７ ｃｍ， 酢酸エチル／ヘキサン＝ １ ： １） で精製した。溶媒を留去してアセタミド−４−ブロモブチルマロン酸ジエチルの白色結晶を得た。収量 ： ２６．２ ｇ、収率 ： ７３ ％、Ｒｆ値 ： ０．８２（ＣＨＣｌ３ ／ ＭｅＯＨ ＝ ９ ： １）。
（２）アセトアミド−４−ブロモブチルマロン酸モノエチルの合成
アセトアミド−４−ブロモブチルマロン酸ジエチル （２６．２ ｇ， ７４．４ ｍｍｏｌ） をエタノール （８０ ｍｌ） に溶解し、氷冷下で ２ Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液 （４０ ｍｌ） を ３０ 分毎に ５ 回に分けて加えた。３ 時間後、反応溶液を濃縮しエーテルおよび４％ 炭酸水素ナトリウム水溶液と振った。４％ 炭酸水素ナトリウム水溶液をクエン酸で中和、酸性とした後、析出油状物を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去してアセトアミド−４−ブロモブチルマロン酸モノエチルの白色結晶を得た。収量 ： ２０．４ ｇ、収率 ： ８５％、 Ｒｆ値 ： ０．６４（ＣＨＣｌ３ ／ ＭｅＯＨ ／ ＡｃＯＨ ＝ ９０ ： １０ ： ２）。
（３）Ｎ−アセチル−ＤＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチルの合成
アセトアミド−４−ブロモブチルマロン酸モノエチル （２０．４ ｇ， ６３．１ ｍｍｏｌ） を酢酸エチル （１００ ｍｌ） に溶解し、トルエンや酢酸エチル中で３時間加熱還流し脱炭酸を行った。溶液を濃縮し、エーテルに溶解させ４％ 炭酸水素ナトリウム水溶液、及び飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去してＮ−アセチル−ＤＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチルの油状物を得た。収量 ： １７．０ ｇ、収率 ： ９７％、 Ｒｆ値 ： ０．６２ （ＣＨＣｌ３ ／ ＭｅＯＨ ＝ ９ ： １）。
（４）Ｎ−アセチル−ＤＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸の合成
Ｎ−アセチル−ＤＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチル （１７．０ ｇ， ６０．９ ｍｍｏｌ） をエタノール （５０ ｍｌ） に溶解し、氷冷下で ２ Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液 （２５ ｍｌ） を ３０ 分毎に ５ 回に分けて加えた。３ 時間後、溶液を濃縮しエーテルおよび４％ 炭酸水素ナトリウム水溶液と振った。４％ 炭酸水素ナトリウム水溶液をクエン酸で中和し、酸性とした後、目的物を酢酸エチルに抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去してＮ−アセチル−ＤＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸の白色結晶を得た。収量 ： １２．５ ｇ、 収率 ： ８１％、Ｒｆ値 ： ０．５４ （ＣＨＣｌ３ ／ ＭｅＯＨ ／ ＡｃＯＨ ＝ ９０ ： １０ ： ２ ）。
【００２５】
（実施例２）
次に、Ｌ−アミノアシラーゼによるＬ−ピペコリン酸の合成、 Ｎ−アセチル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸の回収、およびＤ−アミノアシラーゼによるＤ−ピペコリン酸の合成について説明する。
図３はその合成などの概要を示す図である。
（１）Ｎ−アセチル−ＤＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸 （１０．３ ｇ， ４１．０ ｍｍｏｌ） を ０．１ Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液 （約２００ ｍｌ） に溶解し、ｐＨ を ７．０ に調整した。この溶液に ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ （４８ ｍｇ） および Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｅｎｕｓ Ｌ−アミノアシラーゼ （東京化成， ２．０ ｇ） を加え ３８℃ で２４ 時間反応させた。反応溶液を濃縮し １ Ｎ 塩酸を加えて ｐＨ ３ とした後、Ｎ−アセチル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸を酢酸エチルで抽出した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去してＮ−アセチル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸を白色結晶として得た。収量 ： ４．５９ ｇ、 収率 ： ８９％、Ｒｆ値 ： ０．５２（ＣＨＣｌ３ ／ ＭｅＯＨ ／ ＡｃＯＨ ＝ ９０ ： １０ ： ２）、 Ｒｔ ： １３．３８ ｍｉｎ ［Ｂ： ０％−１００％ ３０ｍｉｎ， （Ａ： １００％ ＡｃＣＮ ／ Ｈ２Ｏ ／ ０．１％ＴＦＡ， Ｂ： １００％ ＡｃＣＮ ／ ０．１％ＴＦＡ） ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−Ａ １５０ ｘ ４．６ ｍｍ， ｌ ＝ ２２０ ｎｍ］ 。
（２）また、Ｎ−アセチル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸の抽出後の水溶液を水酸化ナトリウムで ｐＨ ７ に調整した後、溶液陽イオン交換樹脂 （Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０， ２００ ｍｌ） カラムに投じ、１ Ｍ アンモニア水溶液で溶出した。溶出液を濃縮乾固してＬ−ピペコリン酸を白色結晶として得た。収量 ： １．８４ ｇ、収率 ： ８０％、 ［α］Ｄ ： −２６．３ （ｃ １．０， Ｈ２Ｏ）、 ＦＡＢＨＲＭＳ ： ［Ｍ＋Ｈ］＋ （１３０．０８４２）， Ｃ６Ｈ１２Ｏ２Ｎ （１３０．０８６８）。
（３）Ｎ−アセチル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸 （３．５ ｇ， １４ ｍｍｏｌ） を ０．１ Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液 （約７ ｍｌ） に溶解し、ｐＨ を ７．０ に調整した。この溶液に Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｙｄａｎｓ Ｄ−アミノアシラーゼ （４５ ｍｇ／４５ ｍｌ） を加え ３８℃ で ３ 日間反応させた。反応溶液を濃縮後、陽イオン交換樹脂 （Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０， ２００ ｍｌ）カラムに投じ、１ Ｍ アンモニア水溶液で溶出した。溶出液を濃縮乾固してＤ−ピペコリン酸を白色結晶として得た。収量 ： １．５５ ｇ、収率 ： ８５％、［α］Ｄ ： ＋２６．３ （ｃ １．０， Ｈ２Ｏ）、 ＦＡＢＨＲＭＳ ：［Ｍ＋Ｈ］＋ （１３０．０８７７）， Ｃ６Ｈ１２Ｏ２Ｎ （１３０．０８６８）。
【００２６】
（実施例３）
次に、Ｎ−アシル−ＤＬ−２−アミノ−６−ハロゲノへキサン酸エステルの合成とプロテアーゼ作用および脱アシル基による Ｌ−ピペコリン酸の合成について説明する。
（１）Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノ−４−ブロモブチルマロン酸ジエチルの合成
３００ ｍｌ ナスフラスコ中で脱水 エタノール （１００ ｍｌ） に金属ナトリウム （２．３ ｇ， １００ ｍｍｏｌ） を加え ３０ 分間攪拌後、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノマロン酸ジエチル （２７．６ ｇ， １００ ｍｍｏｌ） を加え ３０ 分間加熱攪拌した。そこに １， ４−ジブロモブタン （６０ ｍｌ， ５００ ｍｍｏｌ） を加えて ５ 時間の還流を行った。放冷後、クエン酸を加え中和、ＮａＢｒ をろ過後、エタノールと １， ４−ジブロモブタンをそれぞれ留去した。酢酸エチル （３００ ｍｌ） で目的物を抽出、溶媒を留去しＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノ−４−ブロモブチルマロン酸ジエチルの油状物を得た。収量 ： ３７．０ ｇ、収率 ： ９２ ％、Ｒｆ値 ： ０．９０（ＣＨＣｌ３ ／ ＭｅＯＨ ＝ ９ ： １）。
（２）Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノ−４−ブロモブチルマロン酸モノエチルの合成
Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノ−４−ブロモブチルマロン酸ジエチル （３７．０ ｇ， ９２ ｍｍｏｌ） をエタノール （１００ ｍｌ） に溶解し、氷冷下で ２ Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液 （４６ ｍｌ） を ３０ 分毎に ５ 回に分けて加えた。３ 時間後、反応溶液を濃縮しエーテルおよび４％ 炭酸水素ナトリウム水溶液と振った。４％ 炭酸水素ナトリウム水溶液をクエン酸で中和、酸性とした後、析出油状物を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去してＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノ−４−ブロモブチルマロン酸モノエチルの白色結晶を得た。収量 ： ２７．５ ｇ、収率 ： ８０％、Ｒｆ値 ： ０．６８（ＣＨＣｌ３ ／ ＭｅＯＨ ／ ＡｃＯＨ ＝ ９０ ： １０ ： ２）。
（３）Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−ＤＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチルの合成
Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノ−４−ブロモブチルマロン酸モノエチル （２７．５ ｇ， ７３ ｍｍｏｌ） をトルエン （１５０ ｍｌ） に溶解し、３時間加熱還流した。溶液を濃縮して、シリカゲルクロマトグラフィー （φ４．７ ｃｍ ｘ １８ ｃｍ， 酢酸エチル／ヘキサン＝ １ ： ８） で精製した。溶媒を留去してＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−ＤＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチルの油状物を得た。収量 ： １９．３ ｇ、収率： ８５％、Ｒｆ値 ： ０．７０ （ＣＨＣｌ３ ／ ＭｅＯＨ ＝ ９ ： １）。
（４）Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸の合成
図４にその合成方法の概要を示す。
Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−ＤＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチル（１９．３ ｇ， ５８．６ ｍｍｏｌ） をＤＭＦ （５０ ｍｌ）、Ｈ２Ｏ （１５０ ｍｌ） に溶解し、１ Ｍ ＮＨ３ａｑでｐＨを８．０に調整し、ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ （６０ ｍｇ） を加え３７℃で １２ 時間反応させた。エーテルおよび ４％ 炭酸水素ナトリウム水溶液と振り無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去してＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸及びＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチルを得た。その後４％炭酸水素ナトリウム水溶液をクエン酸で酸性とした後、析出油状物を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去してＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸を油状で得た。収量 ： ８．０ ｇ、収率 ： ８９％、 Ｒｆ値 ： ０．５５（ＣＨＣｌ３ ／ ＭｅＯＨ ／ ＡｃＯＨ ＝ ９０ ： １０ ： ２）。
（５）Ｌ−ピペコリン酸の合成
Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸 （１．２４ ｇ， ４．０ ｍｍｏｌ） を室温で２時間、２ＭＨＣｌ／ジオキサン（２０ｍｌ， １０当量）（溶媒）で処理し、次いで溶媒を留去した後、ＤＭＦ （１０ ｍｌ） に溶解し氷冷下でトリエチルアミン （８ ｍｍｏｌ， １．１ ｍｌ） を加えてｐＨを ８．０ に調整し ５ 時間反応させた。塩をろ過後、反応液を酢酸で中和、濃縮してアセトンを加え Ｌ−ピペコリン酸の白色結晶として得た。収量 ： ４９４ ｍｇ、収率 ： ９５％。
【００２７】
（実施例４）
Ｎ−アシル−Ｄ−２−アミノ−６−ハロゲノへキサン酸の合成と脱アシル基による Ｄ−ピペコリン酸の合成
（１）Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸の合成
Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチル （４．６３ ｇ， １３．６ ｍｍｏｌ） をエタノール（２０ ｍｌ）に溶解し、氷冷下で ２ Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液 （７ ｍｌ） を３０ 分毎に ５ 回に分けて加えた。３ 時間後、反応溶液を濃縮しエーテルおよび４％ 炭酸水素ナトリウム水溶液と振った。４％ 炭酸水素ナトリウム水溶液をクエン酸で酸性とした後、析出油状物を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去してＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸を油状で得た。収量 ： ４．３３ ｇ、収率 ： １００％、 Ｒｆ値 ： ０．５５（ＣＨＣｌ３ ／ ＭｅＯＨ ／ ＡｃＯＨ ＝ ９０ ： １０ ： ２）。
（２）Ｄ−ピペコリン酸の合成
Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸 （４．３３ ｇ， １４．０ ｍｍｏｌ） を室温で２時間、２ＭＨＣｌ／ジオキサン（２０ｍｌ， １０当量）（溶媒）で処理した後、溶媒を留去し、次いで、ＤＭＦ （１５ ｍｌ） に溶解し氷冷下でトリエチルアミン （２８ ｍｍｏｌ， ３．９２ ｍｌ） を加えてｐＨを ８．０ に調整し ５ 時間反応させた。塩をろ過後、反応液を酢酸で中和、濃縮してアセトンを加え Ｄ−ピペコリン酸の白色結晶として得た。収量 ： １．７１ ｍｇ、収率 ： ９４％
【００２８】
【発明の効果】
請求項１に記載のピペコリン酸の製造方法によれば、高純度に光学分割されたピペコリン酸を高収率で低原価で製造することができる。
【００２９】
請求項２に記載のピペコリン酸の製造方法によれば、請求項１記載の効果に加えて、高純度の光学活性ピペコリン酸を高収率で得ることができ生産性に優れる。
【００３０】
請求項３に記載のピペコリン酸の製造方法によれば、請求項１又は２に記載の効果に加えて、光学活性なピペコリン酸を高収率で得ることができ、高い生産性で低原価でＤ−および Ｌ−ピペコリン酸を量産することができる。
【００３１】
請求項４に記載のピペコリン酸の製造方法によれば、請求項１乃至３の内いずれか１項に記載の効果に加えて、Ｌ−ピペコリン酸を抽出した残溶液を有効に用いて、付加価値の高い Ｄ−ピペコリン酸を無駄なく生成でき、生産性に優れたピペコリン酸製造システムを構成することができ、特殊なイミノ酸である光学活性なピペコリン酸の供給不足に対応して両光学異性体の供給を容易化して医療開発研究などを押し進めることができる。
【００３２】
請求項５に記載のピペコリン酸の製造方法によれば、請求項１乃至３の内いずれか１項に記載の効果に加えて、Ｄ−ピペコリン酸を抽出した残溶液を有効に用いて、付加価値の高いＬ−ピペコリン酸を無駄なく生成でき、生産性に優れたピペコリン酸製造システムを実現できる。
【００３３】
請求項６に記載のピペコリン酸の製造方法によれば、請求項３乃至５に記載の効果に加えて、比較的安価で入手しやすいアセタミドマロン酸ジエチルを出発原料として、ピペコリン酸製造のため中間体となるＤＬ−Ｎ−アセチル−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸を制御しやすい容易な工程で効率的に製造することができ、生産性や経済性に優れた製造システムを構築できる。
【００３４】
請求項７に記載のピペコリン酸の製造方法によれば、保護基の脱着に伴う分子内環化反応によってピペコリン酸を有効に生成することができる。すなわち、アミノ酸誘導体の保護基を所定の条件下で脱着させ、これに続く分子内環化反応によってピペコリン酸を効率的に生成でき、Ｌ−ピペコリン酸および Ｄ−ピペコリン酸並びにそれらの誘導体を個別かつ、安価に製造できる。
【００３５】
請求項８に記載のピペコリン酸の製造方法によれば、請求項７記載の効果に加えて、光学活性のピペコリン酸を得るために必要な脱着条件や加水分解条件を適正に保持させることができ、高純度のピペコリン酸を高収率で得ることができ、保護基を有するアミノ酸誘導体を用いて、工業的な規模でのピペコリン酸製造を可能にする。
【００３６】
請求項９に記載のピペコリン酸の製造方法によれば、請求項７又は８に記載の効果に加えて、光学活性ピペコリン酸（ Ｄ−ピペコリン酸、Ｌ−ピペコリン酸）製造の際に（１）Ｎ−保護−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸や（２）Ｎ−保護−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸を中間原料として、効率的な生産システムを構成することができ、医薬品原料となるような光学活性ピペコリン酸を安価に提供できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】Ｌ− または Ｄ−ピペコリン酸を含む生理活性天然物および医薬品の例
【図２】Ｎ−アセチル−ＤＬ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸の合成のフローチャート
【図３】Ｌ−アミノアシラーゼの作用による Ｌ−ピペコリン酸の合成反応および Ｄ−アミノアシラーゼの作用による Ｄ−ピペコリン酸の合成反応のフローチャート
【図４】脱着可能保護基を用いる場合のプロテアーゼ作用を含む Ｌ− および Ｄ−ピペコリン酸の合成法のフローチャート[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for producing pipecolic acid, which can mass-produce L-pipecolic acid and D-pipecolic acid at low cost.
[0002]
[Prior art]
Optically active pipecolic acid is a compound that is included as a component of various useful physiologically active substances that exist naturally as shown in FIG. 1 and is also an important raw material for synthetic pharmaceuticals. Constituents of natural substances include FK506 (immunosuppressant), Rapamicin (immunosuppressant) and Trapoxin A (HDAC inhibitor), and synthetic drugs include VX710 (anticancer agent) and Bupivacaine (local anesthetic). Can be Natural products containing L-pipecolic acid include Cyl-2 (Non-Patent Document 1) and Sandramycin (Non-Patent Document 2).
Furthermore, L-pipecolic acid is introduced as a constituent element in compounds that are artificially designed and have useful pharmacological activity. For example, VX710 (Non-patent document 3) and L-365, 209 (Non-patent document 4) are mentioned.
Natural products containing D-pipecolic acid include, for example, Trapoxin A (Non-Patent Document 5) and Apicidin (Non-Patent Document 6).
When trying to develop and manufacture new drugs having various pharmacological activities based on these structures, L-pipecolic acid or D-pipecolic acid is necessary for assembling the molecular structure. It has been difficult to obtain the acid, pipecolic acid, as a completely optically active substance at low cost, which has been a bottleneck in drug discovery. Over the past two decades, many attempts have been made to synthesize and produce the required optically active pipecolic acid, mainly for elucidating the correlation between the physiological activity and structure of natural products.
[0003]
(1) For example, as a method for producing pipecolic acid (Non-patent Document 7), a method for deriving L- or D-lysine or other amino acids is used, and for (Non-patent Document 8), an enzyme is used. For example, a method using acylase in the presence of lipase, amidase or vinyl butyrate is described.
(2) (Patent Document 1) and (Non-Patent Document 9) disclose that relatively inexpensive DL-pipecolic acid is reacted with tartaric acid, a chiral palladium binuclear complex, or O-phenyllactic acid, and is subjected to optical separation by fractional precipitation. A resolution method is disclosed, in which DL-pipecolic acid is reacted with an optically active phenoxypropionic acid in a mixture medium, and the resulting sparingly soluble diastereomer salt is dissolved or suspended in water and the equivalent or A method for producing optically pure D-pipecolic acid or L-pipecolic acid by metathesis by adding an excess acid is described.
(3) (Non-Patent Document 10) attempts to use an asymmetric synthesis method such as using an asymmetric catalyst or introducing an asymmetric point. A method for forming a piperidine ring using an intramolecular SN2 reaction of amines to alkyl is described.
(4) (Non-Patent Document 12) proposes a method in which L-lysine is used as a raw material and two kinds of enzymes (lysine 6-aminotransferase and L-Δ1-piperideine 6-carboxylate reductase) are applied.
[0004]
[Non-patent document 1]
(Hirota, A., Suzuki, A., Aizawa, K., and Tamura, S. (1973). Structure of Cyl-2, anovectrom.com.com. , Rapamycin (Vezina, C., Kudelski, A., and Sehgal, SN (1975). Rapamycin (AY-22, 989), a new antimicrobial antibiotic antioxidant antibiotics. principal.J. Antibiot. 28, 721-726), FK506 (Tanaka, H., Kuroda, A., Marusawa, H., Hatanaka, H., Kino, T., Goto, T., and Hashimoto, 87). Structure of FK506: a novel immunosuppressed isolated from Streptomyces. J. Am. Chem. Soc. 109, 5031-5033)
[Non-patent document 2]
(Boger, D.L., Chen, JH, and Saionz, KW (1996). (-)-Sandramycin: Total synthesis and characterization of DNA binding proofing. , 1629-1644)
[Non-Patent Document 3]
(Germann, U.A., Shlyakhter, D., Mason, V.S., Zelle, R.E., Duffy, J.P., Galullo, V., Armistad, D.M., Saunders. O., Boger, J., and Harding, M. W. (1997) Cellular and biochemical characterization of VX-710 as a chemosensitizer:.. Reversal of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance in vitro Anticancer Drugs 8, 125-140 ), Bupivacaine (Adger, B., Dyer, U., Hut) on, G., and Woods, M. (1996). Stereospecific synthesis of the anaesthetic levobupivacaine. Tetrahedron Lett. 37, 6399-6402),
[Non-patent document 4]
(Pettibone, DJ, Clineschmidt, BV, Anderson, PS, Freidinger, RM, Lundell, GF, Koupal, L.R., Schwartz, C.W. Williamson, J.M., Goetz, M.A., Hensens, O.D., Liesch, J.M., and Springer, J.P. (1989). from Streptomyces silvensis. Endocrinology 125, 217-222)
[Non-Patent Document 5]
(Itagaki, H., Nagashima, K., Sugita, K., Yoshida, H., Kawamura, Y., Yasuda, Y., Matsumoto, K., Ishii, K., N.K., K., N., K., K., K., K., K., K., K., K., N., K., K., N., K., K., K., K., K., K., K., Ishii, K., K., K., K., K., Ishii, K., K., K., Ishii, K., K., Ishii, K., Nishi, K., K., Ishii, K., K., Ishii, K., K., Ishii, K., Ishii, K., Ishii, K., Ishii, K., Ishii, K., Ishii, K., Ishii, K., Ishii, K.I. , Terui, A., and Yoshimatsu, S. (1990). Isolation and structural elucidation of new cyclotetrapeptides, Trapoxins A and B, having detransformation activities as antitumor agents. J. Antibiotics 43, 1524-1532)
[Non-Patent Document 6]
(Darkin-Rattray, SJ, Gurnett, A.M., Myers, R.W., Dulski, P.M., Crumley, T.M., Allocco, J.J., Cannova, C., Meinke, PT, Colletti, SL, Bednarek, M.A., Singh, S.B., Goetz, M.A., Dombrowski, A.W., Polishook, J.D. Schmatz, DM (1996) Apicidin: A novel antiprotozoal agent that inhibits parasite histone deacetylase. Proc. Natl. Acad. , Singh, SB, Zink, DL, Liesch, JM, Mosley, RT, Dombrowski, AW, Bills, GFF, Darkin-Rattray, S.T. ., Schmatz, D. M., and Goetz, M. A. (2002). Structure and chemistry of apicidins, a class of novel cyclic tetrapeptides without a terminal a-keto epoxide as inhibitors of histone deacetylase with potent antiprotozoal activities. J Org. Chem. 67, 815-825).
[Non-Patent Document 7]
(Fujii, T. and Miyoshi, M. (1975). A novel synthesis of L-pipecolic acid. Bull. Chem. Soc. Jpn. 48, 1341-1342; Kisdal, Kisdal. One-step synthesis of L-piperidine-2-carboxylic acid. Synthesis 9, 163; Ohtani, B., Tsuru, S., Nishimoto, S., N., and a. Cyclic imino acids by aqueous semiconductor su J. Org. Chem. 55, 5551-5553).
[Non-Patent Document 8]
(Ng-Youn-Chen, MC, Serreqi, AN, Huang, QL, and Kazlauskas, RJ (1994). Kinetic resolution erosion guidance pediatric amica diponic acidification radicolysis pidalicoradicolysis, pi. J. Org.Chem.59, 2075-2081; Eichhorn, E., Roduit, J., Shaw, N., Heinzmann, K., and Kidner, A. (1997). 2-carboxylic acid, (R) -piperazine-2-carboxylic acid, and ( . S) -piperidine-2-carboxylic acid by kinetic resolution of the corresponding racemic carboxamides with stereoselective amidases in whole bacterial cells Tetrahedron:. Asymmetry 8, 2533-2536; Sanchez-Sancho, F. and Herradon, B. (1998) Short syntheses of (S) -pipecolic acid, (R) -coninee, and (S) -d-coneinee using biocatalytically-generalized chiral building block. . Tetrahedron: Asymmetry 9, 1951-1965)
[Non-Patent Document 9]
(Portogese, P.S., Pazdernik, T.L., Kuhn, W.L., Hite, G., Shafi'ee, A. (1968) Stereochemical slogistics on medical physic. J. Med. Chem. 11, 12-15; activity of pi pradrol enantiomers; Hardtmann, GE, Houlihan, WJ, and git ol, ti, ut, ti, ut, ti, ti, ut, ti, ut, ti, and so on. having tranqui US Patent 4760065; Hochless, DCR, Mayadune, RC, and Wild, SB (1995). ) -Pipecolic acid) by separation of palladium (II) diastereomers containing orthometallated (S)-(-)-1- (1- (Dimethylamino) ethyl1 phthalanethanol.
[Non-Patent Document 10]
(Berien, JF, Royer, J., Husson, HP (1994). Asymmetric synthesis. 32. A new access to enantiomerically pure (S)-(-)-pidicolicolic acid). J. Org. Chem. 59, 3769-3774; Foti, C., J. and Commins, D.L. (1995). Synthetic and reference reactions of refaction-of-reactions-of-reactions-of-reaction-of-reactions. Org.Chem.60, 2656-265. Agami, C., Kadouri-Puchot, C., and Kizirian, J.C. (2000) A new enantioselective synthesis of (2S) -pipelic acid.30th. , Pericas, MA, Riera, A. (2002) Straightforward entry to the pipecolic acid nucleus, Enantioselective synthesizing of the biopsy.
[Non-Patent Document 11]
(Fernandez-Garcia, C., and McKervey, M.A. (1995). A short enantioselective synthesis of piperic acid, Acid. Gy. A. Gy. John, T., and Kung, D.W. (1997) Highly practical methodology for the synthesis of D-and L-amino acids, N-protected amines, N-protected amines. Soc.119, 656-673; Ko, S., Perez, R. J., Brieva, R., and Gotor, V. (1998) Chemoenzymatic synthesis of (S) -2-cyanoepidemic edipea epidemate and 2-substituted pipeline alkaloids. Tetrahedron: Asymmetry 9, 1597-1604).
[Non-Patent Document 12]
(Agematsu, H., and Fujii, T. (2002). Production of L-pipecolic acid by recombinant Escherichia coli at an industrial scale.
[0005]
[Patent Document 1]
JP 2000-178253 A
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
However, the conventional technique has the following problems.
(A) The method for deriving from an amino acid such as lysine described in Non-Patent Document 7 requires a selective reaction of amino groups at the α-position and ε-position. Since there are many side reactions, the yield is low, the purity is low, there is a problem in operation such as the use of reagents is dangerous, and there has been a problem that it is difficult to supply inexpensively.
(B) The method using acylase in the presence of lipase, amidase or vinyl butyrate described in Non-Patent Document 8 is a practical production method because of insufficient diastereomeric selectivity. However, there is a problem that it is insufficient in terms of improving the efficiency in terms of application of the stereospecificity of the enzyme.
(C) In the fractional precipitation method described in Patent Literature 1 and Non-Patent Literature 9 and the like, since optical resolution is performed using DL-pipecolic acid as a raw material, it is necessary to separately prepare an optical isomer and recover it after use. And it was inefficient.
(D) In the asymmetric synthesis method described in Non-Patent Document 10, the reagent itself for introducing an asymmetric point is expensive, and the scale is at the laboratory level. There was a problem that it was difficult.
(E) In the method of forming a piperidine ring using the intramolecular SN2 reaction of amines described in Non-Patent Document 11, the yield is low without direct pipecolic acid because it is limited to the piperidine ring, In addition, since it is not an optical resolution method using an enzyme, unnecessary diastereomers are also produced as by-products, and there is a problem that it is difficult to obtain high-purity products.
(F) The method of Non-Patent Document 12 in which L-lysine is used as a raw material and two kinds of enzymes are used uses an enzyme having L-form stereospecificity, and also has D-form stereospecificity. Similarly, there has been a problem that the enzyme cannot be applied to the production of D-pipecolic acid because the enzyme has not been developed.
[0007]
The present invention has been made in order to solve the above-mentioned conventional problems, and an object of the present invention is to provide a method for producing pipecolic acid which can supply pipecolic acid optically resolved to high purity in high yield and at low cost. I do.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
The method for producing pipecolic acid according to claim 1, wherein the step of adjusting comprises adding an aminoacylase to a racemic solution of an amino acid derivative having a halogen group at a side chain terminal, and the solution comprising the step of: And an extraction step of solvent-extracting the optically active pipecolic acid from the solution by generating an optically active pipecolic acid by the enantiomer-specific action of the aminoacylase.
As a result, pipecolic acid optically resolved to high purity can be produced in high yield and at low cost. That is, the amino acid derivative having a halogen group at the side chain terminal is reacted with an optically active aminoacylase to hydrolyze the amino acid derivative in an enantiomer-specific manner, and the optically active pipecolic acid is converted by an intramolecular cyclization reaction that occurs immediately thereafter. It can be generated efficiently.
[0009]
Here, as the amino acid derivative, a racemic substance capable of intramolecularly cyclizing to produce pipecolic acid by enantiomeric-specific hydrolysis by an aminoacylase such as DL-N-acetyl-2-amino-6-bromohexanoic acid or the like, A solution obtained by optically resolving a racemic body can be applied.
The halogen group is for inducing elimination by inducing an intramolecular cyclization reaction of the amino acid derivative, and alkyl or allyl sulfonic acid ester in addition to halogen elements such as bromine, chlorine, and iodine can be applied. In addition, the side chain terminal of an amino acid derivative refers to the terminal of an atomic group extended from α-carbon in the amino acid derivative.
Aminoacylase is an enzyme that is extracted from a microorganism or the like and hydrolyzes an amide bond of an amino acid derivative, and includes Aspergillus genus L-aminoacylase, alkaline genus xylose oxydans (Alcaligenes xylosoxydans) D-aminoacylase, and the like. .
The intramolecular cyclization reaction is a reaction in which an amino acid derivative is self-cyclized to generate a special imino acid as illustrated in FIG. The amino acid derivative can be self-cyclized by being hydrolyzed by the action of aminoacylase while maintaining the conditions for the intramolecular cyclization reaction. That is, optically active pipecolic acids (L-pipecolic acid and D-pipecolic acid) can be produced by enzymatic enantiomer-specific hydrolysis of aminoacylase and an intramolecular cyclization reaction accompanying the hydrolysis.
[0010]
In the method for producing pipecolic acid according to
Thereby, enantiomer-specific hydrolysis by aminoacylase and the accompanying intramolecular cyclization reaction can be properly maintained, and high-purity optically active pipecolic acid can be obtained in higher yield.
Here, when the pH of the racemic solution is lower than 6, the reaction rate of the specific hydrolysis tends to decrease, and when the pH exceeds 9, the aminoacylase is denatured and optically active pipecolic acid is effectively used. This is not preferred because a tendency to become impossible appears.
When the temperature in the racemic solution is lower than 20 ° C., the reaction rate tends to be extremely reduced. Conversely, when the temperature is higher than 50 ° C., aminoacylase is denatured and optically active pipecolic acid can be effectively obtained. It is not preferable because it tends to be impossible.
When the retention time of the intramolecular cyclization reaction in the solution is shorter than 10 hours, the reaction rate of the specific hydrolysis tends to decrease, and when the retention time is longer than 30 hours, aminoacylase is denatured and the optical activity is reduced. It is not preferable because there is a tendency that the effective pipecolic acid cannot be obtained effectively.
[0011]
The method for producing pipecolic acid according to claim 3 is the method according to
Thereby, optically active pipecolic acid can be obtained in high yield, and D- and L-pipecolic acid can be produced easily and in good yield using an amino acid derivative obtained by optical resolution using an enzyme as an intermediate. Can be.
Here, as the L-aminoacylase, (Aspergillus genus, Thermococcus eitoralis) and acylase I (porcine watermelon, Aspergillus melleus) can also be used in addition to the above.
[0012]
The method for producing pipecolic acid according to claim 4 is the method according to any one of claims 1 to 3, wherein the L-pipecolic acid is extracted and removed from the remaining solution by the extraction step. A step of recovering 2-amino-6-bromohexanoic acid, and adding an alkaline genus xylose oxydans (D-aminoacylase) to the recovered D-acetyl-2-amino-6-bromohexanoic acid. Deacetylation by its D-enantiomer-specific action and intramolecular cyclization to produce D-pipecolic acid.
This makes it possible to effectively use the residual solution from which L-pipecolic acid has been extracted to produce high-value-added D-pipecolic acid without waste, and to configure a pipecolic acid production system with excellent productivity. In response to a shortage of supply of optically active pipecolic acid, which is an imino acid, the supply of both optical isomers can be facilitated to promote medical research and development.
[0013]
The method for producing pipecolic acid according to claim 5 is the method according to any one of claims 1 to 3, wherein L-acetyl- from the residual solution from which D-pipecolic acid has been extracted and removed in the extraction step. Recovering 2-amino-6-bromohexanoic acid, adding Aspergillus genus L-aminoacylase to the recovered L-acetyl-2-amino-6-bromohexanoic acid, Deacetylation by the L-enantiomer-specific action and intramolecular cyclization to produce L-pipecolic acid.
This makes it possible to effectively use the residual solution from which D-pipecolic acid has been extracted, to produce L-pipecolic acid with high added value without waste, and to realize a pipecolic acid production system with excellent productivity.
[0014]
The method for producing pipecolic acid according to claim 6 is the method according to any one of claims 3 to 5, wherein the DL-N-acetyl-2-amino-6-bromohexanoic acid is acetamide malonone. Reacting diethyl acetate with 1,4-dibromobutane to form diethyl acetamide-4-bromobutylmalonate; semi-saponifiing the acetamide-4-bromobutylmalonic acid, heating and decarboxylating the DL-N- Steps of obtaining ethyl acetyl-2-amino-6-bromohexanoate and steps of saponifying and crystallizing the ethyl DL-N-acetyl-2-amino-6-bromohexanoate are sequentially performed to produce the compound. It is configured to be.
This makes it easy to control DL-N-acetyl-2-amino-6-bromohexanoic acid, which is an intermediate for producing pipecolic acid, using diethyl acetamide malonate, which is relatively inexpensive and easily available, as a starting material. In this way, the manufacturing system can be efficiently manufactured, and a manufacturing system having excellent productivity can be constructed.
Here, the semi-saponification condition is a condition in which a little more than one equivalent of an alkali is added to acetamide-4-bromobutylmalonic acid under ice-cooling, and the condition of heat decarboxylation is the addition of a toluene or ethyl acetate solution. This is a condition for heating and refluxing.
[0015]
The method for producing pipecolic acid according to claim 7, wherein the urethane-type protecting group capable of protecting the halogen group at the time of desorption such as a t-benzyloxycarbonyl group, a t-butoxycarbonyl group and the like and being removable under mild conditions is an amino group. A solution of an amino acid derivative having a halogen group at a side chain terminal bonded to a group is maintained under the conditions for desorption of the protective group, and pipecolic acid is generated by an intramolecular cyclization reaction of the amino acid derivative accompanying the desorption. Is configured.
As a result, pipecolic acid can be effectively produced by an intramolecular cyclization reaction accompanying the desorption and hydrolysis of the protecting group. That is, as illustrated in FIG. 4, the protecting group of the amino acid derivative (the portion of the t-butoxycarbonyl group that modifies the amino group) is hydrolyzed under predetermined conditions, and the subsequent intramolecular cyclization reaction causes pipecolic acid to react. Is generated efficiently. Thus, L-pipecolic acid and D-pipecolic acid and their derivatives can be supplied individually and inexpensively.
The protecting group is a functional group introduced to protect the amino group of the amino acid derivative during the reaction with dibromobutane, and is used to suppress the reaction of the amino group with the bromo-bonded carbon until immediately before the intramolecular cyclization reaction. It is a protecting group, such as a benzyloxycarbonyl group or a t-butoxycarbonyl group.
[0016]
In the method for producing pipecolic acid according to claim 8, in the invention according to claim 7, the conditions for desorption of the protecting group are hydrogenation reaction conditions using palladium charcoal as a catalyst at room temperature or dioxane solution containing hydrogen chloride. Alternatively, it is configured to be a desorption reaction condition in an ethyl acetate solution.
This makes it possible to appropriately maintain the desorption conditions necessary for obtaining optically active pipecolic acid, to obtain pipecolic acid having a high purity of nearly 100% in a high yield of 80 to 90%, and to provide a protective group. The production of pipecolic acid on an industrial scale is enabled using an amino acid derivative having the following formula:
Here, the concentration of hydrogen chloride is about 2 equivalents to the amino acid derivative at 2 molar concentration.
[0017]
The method for producing pipecolic acid according to claim 9 is the method according to claim 7 or 8, wherein the amino acid derivative is (1) N-protected-L-2-amino-6-bromohexanoic acid or (2 A) N-protected-D-2-amino-6-bromohexanoic acid, wherein (1) said N-protected-L-2-amino-6-bromohexanoic acid is N-benzyloxycarbonyl-amino An aminomalonic acid derivative having a protecting group such as diethyl malonate or Nt-butoxycarbonyl-aminomalonate is reacted with 1,4-dibromobutane to give N-protected diethylamino-4-bromobutylmalonate. After the formation, the mixture is hemi-saponified by adding dilute strong alkaline water under ice-cooling, and then thermally decarboxylated to obtain DL-N-protected ethyl 2-amino-6-bromohexanoate, which is proteolytically decomposed. It is produced by the hydrolysis of an enzyme or esterase,
(2) The N-protected-D-2-amino-6-bromohexanoic acid is recovered from the solution after the formation of the N-protected-L-2-amino-6-bromohexanoic acid. Protection- It is configured to be produced by saponifying ethyl D-2-amino-6-bromohexanoate by adding a diluted strong alkaline water under ice-cooling.
Thus, when producing optically active pipecolic acid (D-pipecolic acid, L-pipecolic acid), (1) N-protected-L-2-amino-6-bromohexanoic acid or (2) N-protected-D An efficient production system can be constructed using -2-amino-6-bromohexanoic acid as an intermediate raw material, and optically active pipecolic acid to be used as a pharmaceutical raw material can be mass-produced at low cost.
Here, the mild condition refers to a condition in which the reaction holding temperature of the amino acid derivative is 0 ° C. or lower, whereby the degree of semi-saponification and the degree of saponification can be controlled.
As the proteolytic enzyme, chymotrypsin, subtilisin, alkaline protease having ester-degrading action, and esterase having strict stereospecificity are preferably used.
As the diluted strong alkaline water, an approximately 0.1 N solution of sodium hydroxide, potassium hydroxide or the like is used.
[0018]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
The present inventors accidentally produce pipecolic acid during the development of an anticancer agent led by a biologically active natural product containing L-pipecolic acid and D-pipecolic acid as constituents, and during the development of a special artificial amino acid. A side reaction was discovered. We thought that this reaction could be used to easily produce new L-pipecolic acid and D-pipecolic acid and their derivatives, and as a result of intensive research to solve the above problems, FIG. As shown, a racemic amino acid derivative having a halogen group at a side chain terminal is quantitatively determined by the action of Aspergillus genus L-aminoacylase and alkaline genus xylose oxydans (Alcaligenes xylosoxydans) D-aminoacylase. It was confirmed that pipecolic acid and D-pipecolic acid were produced. In addition, the amino group is protected with a protecting group such as a urethane type, and a racemic 2-aminohexanoic acid ester having a halogen group and an alkylsulfoxy group at a side chain terminal is converted into subtilisin, chymotrypsin, acidic protease (Aspergillus niger), After the treatment with a protease such as a neutral protease (Aspergillus oryzae, Bacillus subtilis) or an alkaline protease (Bacillus subtilis, Aspergillus melleus, Bacillus lichenifomis), the phosphoric acid generated during the removal of the protecting group and the L-pi-phosphoric acid simultaneously with the removal of the phosphoric acid from the phosphoric acid were removed. It was confirmed. The present inventors have found that this enzymatic enantiomer-specific hydrolysis and automatic cyclization reaction can be used for a simple method for producing L-pipecolic acid and D-pipecolic acid, and completed the present invention.
That is, the present invention includes the following methods for producing L-pipecolic acid and D-pipecolic acid.
[1] A method of preparing N-acetyl-DL-2-amino-6-halogenohexanoic acid as a raw material from diethyl acetamide malonate.
[2] A method of producing L-pipecolic acid and D-pipecolic acid by allowing Aspergillus genus L-aminoacylase to act on the L-form in the racemic form and Alcaligenes xylosoxydans D-aminoacylase to act on the D-form.
[3] A method in which a protease is allowed to act on an N-acyl-DL-2-amino-6-halogenohexanoic acid ester, and then the acyl group is removed and simultaneously L-pipecolic acid is produced.
[4] A method of producing D-pipecolic acid or a derivative thereof from the recovered DN-acyl-2-amino-6-halogenohexanoate by deprotection.
[0019]
That is, the outline of the present embodiment is as follows.
Diethyl acetamide malonate and 1,4-dibromobutane are reacted by a conventional method, and the saponification reaction is performed twice under mild conditions, and the obtained N-acetyl-DL-2-amino-6-hexanoic acid is converted to L-aminoacylase. , L-2-amino-6-bromohexanoic acid produced by enzyme-specific optical resolution is immediately converted to L-pipecolic acid in the reaction solution. Subsequently, D-aminoacylase is further allowed to act on N-acetyl-D-2-amino-6-hexanoic acid which is quantitatively recovered, and D-pipecolic acid can be obtained in the same manner.
[0020]
On the other hand, as shown in FIG. 4, when a detachable protecting group such as Nt-butoxycarbonyl-diethylaminomalonate is used, it is similarly reacted with 1,4-dibromobutane to form Nt-butoxycarbonyl. Ethyl Nt-butoxycarbonyl-DL-2-amino-6-bromohexanoate obtained through the steps of semi-saponification and decarboxylation in the same manner as described above to obtain diethyl 2-amino-4-bromobutylmalonate Is treated with Nt-butoxycarbonyl-L-2-amino-6-bromohexanoic acid by enzymatic and stereospecific hydrolysis of ethyl ester when treated with a proteolytic enzyme such as subtilisin or esterase. Ethyl Nt-butoxycarbonyl-D-2-amino-6-bromohexanoate is obtained. Both are easily separable. Ethyl Nt-butoxycarbonyl-D-2-amino-6-bromohexanoate was further saponified in ethanol under ice-cooling to quantitatively determine Nt-butoxycarbonyl-D-2-amino-6. -Convert to bromohexanoic acid. When Nt-butoxycarbonyl-L-2-amino-6-bromohexanoic acid is treated with an acid and then neutralized, the formed L-2-amino-6-bromohexanoic acid automatically undergoes an intramolecular cyclization reaction. To produce L-pipecolic acid. Similarly, D-pipecolic acid is obtained.
[0021]
When a benzyloxycarbonyl group is used as an acyl-protecting group for diethyl aminomalonate, N-benzyloxycarbonyl-L-2-amino-6-bromohexanoic acid can be catalytically reduced in methanol in the presence of a catalyst such as palladium. The generated L-2-amino-6-bromohexanoic acid automatically generates L-pipecolic acid by an intramolecular cyclization reaction. N-Benzyloxycarbonyl-D-2-amino-6-bromohexanoic acid similarly provides D-pipecolic acid. Protecting groups other than the t-butoxycarbonyl group, which can be gently removed, such as a benzyloxycarbonyl group, can also be used. Further, esters other than ethyl ester may be used.
[0022]
In the present embodiment, the amino-protecting group of 2-amino-6-halogenohexanoic acid includes, in addition to the acetyl group, other substituted acyl groups and urethane-type acyl groups. This is because an equivalent action can be obtained. It is sufficient that L-aminoacylase and D-aminoacylase have sufficient enantiomer-specific (optical specificity, stereospecificity) hydrolysis activity. As long as the enzyme having esterase activity has sufficient enantiomer-specific (optical specificity, stereospecificity) hydrolysis activity, the type of the target ester and the specificity of the original enzymatic reaction do not matter.
[0023]
As described above, the method for producing pipecolic acid according to the present embodiment comprises allowing Aspergillus genus L-aminoacylase to act on DL-N-acetyl-2-amino-6-bromohexanoic acid, followed by optical resolution by the enzyme. L-pipecolic acid, which rapidly causes an intramolecular cyclization reaction, is produced. Further, when the DN-acetyl-2-amino-6-bromohexanoic acid recovered from this reaction is further treated with Alcaligenes xylosoxydans D-aminoacylase, D-pipecolic acid is obtained similarly. By utilizing the enzymatic resolution of a racemic amino acid having a bromoalkyl group in the side chain, an excellent production system capable of synthesizing L- and D-pipecolic acid with high purity and high yield can be constructed.
[0024]
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the drawings using examples. However, the present invention is not limited to the following examples.
(Example 1)
FIG. 2 shows an outline of the synthesis of N-acetyl-DL-2-amino-6-bromohexanoic acid.
(1) Synthesis of diethyl acetamide-4-bromobutylmalonate
In a 300 ml eggplant flask, metallic sodium (2.19 g, 95 mmol) was added to dehydrated ethanol (100 ml), and the mixture was stirred for 30 minutes. Then, diethyl acetamide malonate (21.08 g, 100 mmol) was added, and the mixture was heated for 30 minutes (120). C) under stirring. Thereto was added 1,4-dibromobutane (59 ml, 500 mmol), and the mixture was refluxed for 5 hours. After cooling, acetic acid (0.29 ml, 5 mmol) was added, and ethanol and 1,4-dibromobutane were distilled off. After the target substance was extracted with ethyl acetate (300 ml), it was purified by silica gel chromatography (φ4.7 cm × 17 cm, ethyl acetate / hexane = 1: 1). The solvent was distilled off to obtain white crystals of diethyl acetamide-4-bromobutylmalonate. Yield: 26.2 g, Yield: 73%, Rf value: 0.82 (CHCl3 / MeOH = 9: 1).
(2) Synthesis of monoethyl acetamido-4-bromobutylmalonate
Diethyl acetamido-4-bromobutylmalonate (26.2 g, 74.4 mmol) was dissolved in ethanol (80 ml), and a 2N aqueous sodium hydroxide solution (40 ml) was added every 30 minutes under ice-cooling for 5 minutes. Added in batches. After 3 hours, the reaction solution was concentrated and shaken with ether and 4% aqueous sodium bicarbonate. After neutralizing and acidifying a 4% aqueous sodium hydrogen carbonate solution with citric acid, the precipitated oil was extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate layer was washed with saturated saline and dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was distilled off to obtain white crystals of monoethyl acetamido-4-bromobutylmalonate. Yield: 20.4 g, Yield: 85%, Rf value: 0.64 (CHCl3 / MeOH / AcOH = 90: 10: 10: 2).
(3) Synthesis of ethyl N-acetyl-DL-2-amino-6-bromohexanoate
Monoethyl acetamido-4-bromobutylmalonate (20.4 g, 63.1 mmol) was dissolved in ethyl acetate (100 ml), and the mixture was heated under reflux for 3 hours in toluene or ethyl acetate to perform decarboxylation. The solution was concentrated, dissolved in ether, and washed with a 4% aqueous sodium hydrogen carbonate solution and saturated saline. After drying over anhydrous magnesium sulfate, the solvent was distilled off to obtain an oily ethyl N-acetyl-DL-2-amino-6-bromohexanoate. Yield: 17.0 g, Yield: 97%, Rf value: 0.62 (CHCl3 / MeOH = 9: 1).
(4) Synthesis of N-acetyl-DL-2-amino-6-bromohexanoic acid
Ethyl N-acetyl-DL-2-amino-6-bromohexanoate (17.0 g, 60.9 mmol) was dissolved in ethanol (50 ml), and a 2N aqueous sodium hydroxide solution (25 ml) was added under ice cooling. ml) was added in 5 portions every 30 minutes. After 3 hours, the solution was concentrated and shaken with ether and 4% aqueous sodium bicarbonate. After neutralizing the 4% aqueous sodium hydrogen carbonate solution with citric acid to make it acidic, the target product was extracted into ethyl acetate. The ethyl acetate layer was washed with saturated saline and dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was distilled off to obtain white crystals of N-acetyl-DL-2-amino-6-bromohexanoic acid. Yield: 12.5 g, Yield: 81%, Rf value: 0.54 (CHCl3 / MeOH / AcOH = 90: 10: 2).
[0025]
(Example 2)
Next, the synthesis of L-pipecolic acid by L-aminoacylase, the recovery of N-acetyl-D-2-amino-6-bromohexanoic acid, and the synthesis of D-pipecolic acid by D-aminoacylase will be described.
FIG. 3 is a diagram showing an outline of the synthesis and the like.
(1) N-acetyl-DL-2-amino-6-bromohexanoic acid (10.3 g, 41.0 mmol) was dissolved in a 0.1 N aqueous sodium hydroxide solution (about 200 ml), and the pH was adjusted. It was adjusted to 7.0. Add CoCl to this solution 2 ・ 6H 2 O (48 mg) and Aspergillus genus L-aminoacylase (Tokyo Kasei, 2.0 g) were added and reacted at 38 ° C. for 24 hours. After the reaction solution was concentrated and adjusted to pH 3 with 1N hydrochloric acid, N-acetyl-D-2-amino-6-bromohexanoic acid was extracted with ethyl acetate. After drying over anhydrous magnesium sulfate, the solvent was distilled off to obtain N-acetyl-D-2-amino-6-bromohexanoic acid as white crystals. Yield: 4.59 g, Yield: 89%, Rf value: 0.52 (CHCl3 / MeOH / AcOH = 90: 10: 2), Rt: 13.38 min [B: 0% -100% 30min, ( A: 100% AcCN / H2O / 0.1% TFA, B: 100% AcCN / 0.1% TFA) YMC-Pack ODS-A 150 x 4.6 mm, 1 = 220 nm].
(2) Further, after the aqueous solution after extraction of N-acetyl-D-2-amino-6-bromohexanoic acid was adjusted to pH 7 with sodium hydroxide, a solution cation exchange resin (Amberlite IR-120, 200) was used. ml) and eluted with a 1 M aqueous ammonia solution. The eluate was concentrated to dryness to obtain L-pipecolic acid as white crystals. Yield: 1.84 g, Yield: 80%, [α] D: −26.3 (c 1.0, H2O), FABHRMS: [M + H] + (130.0842), C6H12O2N (130.0868).
(3) N-acetyl-D-2-amino-6-bromohexanoic acid (3.5 g, 14 mmol) was dissolved in 0.1 N aqueous sodium hydroxide solution (about 7 ml), and the pH was adjusted to 7. Adjusted to zero. Alcaligenes xylosoxydans D-aminoacylase (45 mg / 45 ml) was added to this solution, and the mixture was reacted at 38 ° C. for 3 days. After concentrating the reaction solution, it was poured into a cation exchange resin (Amberlite IR-120, 200 ml) column and eluted with a 1 M aqueous ammonia solution. The eluate was concentrated to dryness to obtain D-pipecolic acid as white crystals. Yield: 1.55 g, Yield: 85%, [α] D: +26.3 (c 1.0, H2O), FABHRMS: [M + H] + (130.0877), C6H12O2N (130.0868).
[0026]
(Example 3)
Next, the synthesis of N-acyl-DL-2-amino-6-halogenohexanoate, the action of protease and the synthesis of L-pipecolic acid by a deacyl group will be described.
(1) Synthesis of diethyl Nt-butoxycarbonyl-2-amino-4-bromobutylmalonate
In a 300 ml eggplant flask, metallic sodium (2.3 g, 100 mmol) was added to dehydrated ethanol (100 ml), and the mixture was stirred for 30 minutes. Then, diethyl Nt-butoxycarbonyl-2-aminomalonate (27.6 g, (100 mmol), and the mixture was heated and stirred for 30 minutes. 1,4-Dibromobutane (60 ml, 500 mmol) was added thereto, and the mixture was refluxed for 5 hours. After cooling, citric acid was added for neutralization, and NaBr was filtered off, and ethanol and 1,4-dibromobutane were distilled off. The desired product was extracted with ethyl acetate (300 ml), and the solvent was distilled off to obtain an oily diethyl Nt-butoxycarbonyl-2-amino-4-bromobutylmalonate. Yield: 37.0 g, Yield: 92%, Rf value: 0.90 (CHCl3 / MeOH = 9: 1).
(2) Synthesis of monoethyl Nt-butoxycarbonyl-2-amino-4-bromobutylmalonate
Diethyl Nt-butoxycarbonyl-2-amino-4-bromobutylmalonate (37.0 g, 92 mmol) was dissolved in ethanol (100 ml), and a 2N aqueous sodium hydroxide solution (46 ml) was added under ice-cooling. ) Was added in 5 portions every 30 minutes. After 3 hours, the reaction solution was concentrated and shaken with ether and 4% aqueous sodium bicarbonate. After neutralizing and acidifying a 4% aqueous sodium hydrogen carbonate solution with citric acid, the precipitated oil was extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate layer was washed with saturated saline, dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was distilled off to obtain white crystals of monoethyl Nt-butoxycarbonyl-2-amino-4-bromobutylmalonate. Yield: 27.5 g, Yield: 80%, Rf value: 0.68 (CHCl3 / MeOH / AcOH = 90: 10: 10: 2).
(3) Synthesis of ethyl Nt-butoxycarbonyl-DL-2-amino-6-bromohexanoate
Monoethyl Nt-butoxycarbonyl-2-amino-4-bromobutylmalonate (27.5 g, 73 mmol) was dissolved in toluene (150 ml) and heated under reflux for 3 hours. The solution was concentrated and purified by silica gel chromatography (φ4.7 cm × 18 cm, ethyl acetate / hexane = 1: 8). The solvent was distilled off to obtain an oily substance of ethyl Nt-butoxycarbonyl-DL-2-amino-6-bromohexanoate. Yield: 19.3 g, Yield: 85%, Rf value: 0.70 (CHCl3 / MeOH = 9: 1).
(4) Synthesis of Nt-butoxycarbonyl-L-2-amino-6-bromohexanoic acid
FIG. 4 shows an outline of the synthesis method.
Ethyl Nt-butoxycarbonyl-DL-2-amino-6-bromohexanoate (19.3 g, 58.6 mmol) was dissolved in DMF (50 ml) and H2O (150 ml), and 1 M NH3aq was added. The pH was adjusted to 8.0 with, subtilisin (60 mg) was added, and the mixture was reacted at 37 ° C for 12 hours. After drying with ether and a 4% aqueous sodium hydrogen carbonate solution and shaking anhydrous magnesium sulfate, the solvent is distilled off to give Nt-butoxycarbonyl-L-2-amino-6-bromohexanoic acid and Nt-butoxycarbonyl-. Ethyl D-2-amino-6-bromohexanoate was obtained. Thereafter, a 4% aqueous sodium hydrogen carbonate solution was acidified with citric acid, and the precipitated oil was extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate layer was washed with saturated saline and dried over anhydrous magnesium sulfate, and then the solvent was distilled off to obtain Nt-butoxycarbonyl-L-2-amino-6-bromohexanoic acid as an oil. Yield: 8.0 g, Yield: 89%, Rf value: 0.55 (CHCl3 / MeOH / AcOH = 90: 10: 10: 2).
(5) Synthesis of L-pipecolic acid
Treat Nt-butoxycarbonyl-L-2-amino-6-bromohexanoic acid (1.24 g, 4.0 mmol) at room temperature for 2 hours with 2M HCl / dioxane (20 ml, 10 eq) (solvent). Then, after the solvent was distilled off, the residue was dissolved in DMF (10 ml), and triethylamine (8 mmol, 1.1 ml) was added thereto under ice-cooling to adjust the pH to 8.0, followed by a reaction for 5 hours. After filtering the salt, the reaction solution was neutralized with acetic acid and concentrated, and acetone was added to obtain L-pipecolic acid as white crystals. Yield: 494 mg, yield: 95%.
[0027]
(Example 4)
Synthesis of N-acyl-D-2-amino-6-halogenohexanoic acid and synthesis of D-pipecolic acid by deacyl group
(1) Synthesis of Nt-butoxycarbonyl-D-2-amino-6-bromohexanoic acid
Ethyl Nt-butoxycarbonyl-D-2-amino-6-bromohexanoate (4.63 g, 13.6 mmol) was dissolved in ethanol (20 ml), and 2N sodium hydroxide was added under ice cooling. The aqueous solution (7 ml) was added in 5 portions every 30 minutes. After 3 hours, the reaction solution was concentrated and shaken with ether and 4% aqueous sodium bicarbonate. After acidifying the 4% aqueous sodium hydrogen carbonate solution with citric acid, the precipitated oil was extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate layer was washed with brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was distilled off to obtain Nt-butoxycarbonyl-D-2-amino-6-bromohexanoic acid as an oil. Yield: 4.33 g, Yield: 100%, Rf value: 0.55 (CHCl3 / MeOH / AcOH = 90: 10: 10: 2).
(2) Synthesis of D-pipecolic acid
Treat Nt-butoxycarbonyl-D-2-amino-6-bromohexanoic acid (4.33 g, 14.0 mmol) with 2M HCl / dioxane (20 ml, 10 equiv) (solvent) at room temperature for 2 hours. After that, the solvent was distilled off, then dissolved in DMF (15 ml), and added with triethylamine (28 mmol, 3.92 ml) under ice-cooling to adjust the pH to 8.0 and reacted for 5 hours. After filtering the salt, the reaction solution was neutralized and concentrated with acetic acid, and acetone was added thereto to obtain white crystals of D-pipecolic acid. Yield: 1.71 mg, yield: 94%
[0028]
【The invention's effect】
According to the method for producing pipecolic acid according to the first aspect, pipecolic acid optically resolved to high purity can be produced in high yield and at low cost.
[0029]
According to the method for producing pipecolic acid according to
[0030]
According to the method for producing pipecolic acid according to claim 3, in addition to the effects described in
[0031]
According to the method for producing pipecolic acid according to the fourth aspect, in addition to the effect according to any one of the first to third aspects, the addition is performed by effectively using the remaining solution obtained by extracting L-pipecolic acid. Highly valuable D-pipecolic acid can be produced without waste, a pipecolic acid production system with excellent productivity can be constructed, and both optical isomers can be prepared in response to the shortage of supply of optically active pipecolic acid, a special imino acid. It can facilitate the supply of the body and promote medical development research.
[0032]
According to the method for producing pipecolic acid according to the fifth aspect, in addition to the effect according to any one of the first to third aspects, the residual solution obtained by extracting D-pipecolic acid is effectively used and added. Highly valuable L-pipecolic acid can be produced without waste, and a pipecolic acid production system with excellent productivity can be realized.
[0033]
According to the method for producing pipecolic acid according to claim 6, in addition to the effects according to claims 3 to 5, an intermediate for producing pipecolic acid using diethyl acetamide malonate as a starting material, which is relatively inexpensive and easily available. DL-N-acetyl-2-amino-6-bromohexanoic acid can be efficiently produced in an easy process that is easy to control, and a production system excellent in productivity and economy can be constructed.
[0034]
According to the method for producing pipecolic acid according to claim 7, pipecolic acid can be effectively produced by an intramolecular cyclization reaction accompanying the desorption of a protecting group. That is, the protecting group of the amino acid derivative is desorbed under predetermined conditions, and pipecolic acid can be efficiently produced by the subsequent intramolecular cyclization reaction. , And can be manufactured at low cost.
[0035]
According to the method for producing pipecolic acid according to claim 8, in addition to the effect described in claim 7, it is possible to appropriately maintain desorption conditions and hydrolysis conditions necessary for obtaining optically active pipecolic acid. And pipecolic acid of high purity can be obtained in high yield, and pipecolic acid can be produced on an industrial scale using an amino acid derivative having a protecting group.
[0036]
According to the method for producing pipecolic acid according to claim 9, in addition to the effect according to claim 7 or 8, when producing optically active pipecolic acid (D-pipecolic acid, L-pipecolic acid) (1) To construct an efficient production system using N-protected-L-2-amino-6-bromohexanoic acid and (2) N-protected-D-2-amino-6-bromohexanoic acid as intermediate raw materials. Thus, optically active pipecolic acid that can be used as a drug material can be provided at low cost.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1. Examples of bioactive natural products and pharmaceuticals containing L- or D-pipecolic acid
FIG. 2 is a flowchart of the synthesis of N-acetyl-DL-2-amino-6-bromohexanoic acid.
FIG. 3 is a flowchart of a synthesis reaction of L-pipecolic acid by the action of L-aminoacylase and a synthesis reaction of D-pipecolic acid by the action of D-aminoacylase.
FIG. 4 is a flowchart of a method for synthesizing L- and D-pipecolic acid including a protease action when a removable protecting group is used.
Claims (9)
（１）前記Ｎ−保護−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸が、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−アミノマロン酸ジエチル、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−アミノマロン酸ジエチル等の保護基を有するアミノマロン酸誘導体と １， ４−ジブロモブタンを反応させて Ｎ−保護−アミノ−４−ブロモブチルマロン酸ジエチルを生成せしめた後、氷冷下で希薄強アルカリ水を添加して半ケン化し、次いで加熱脱炭酸して得られる ＤＬ−Ｎ−保護−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチルをタンパク質分解酵素またはエステラーゼの加水分解作用によって作成されたものであり、
（２）前記Ｎ−保護−Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸が、前記Ｎ−保護−Ｌ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸の作成後の溶液から回収された Ｎ−保護− Ｄ−２−アミノ−６−ブロモへキサン酸エチルを氷冷下で希薄強アルカリ水を添加してケン化して作成されたものであることを特徴とする請求項７又は８に記載のピペコリン酸の製造方法。The amino acid derivative is (1) N-protected-L-2-amino-6-bromohexanoic acid or (2) N-protected-D-2-amino-6-bromohexanoic acid,
(1) The N-protected-L-2-amino-6-bromohexanoic acid has a protective group such as diethyl N-benzyloxycarbonyl-aminomalonate and diethyl Nt-butoxycarbonyl-aminomalonate. After reacting the aminomalonic acid derivative with 1,4-dibromobutane to form diethyl N-protected-amino-4-bromobutylmalonate, dilute strong alkaline water is added under ice-cooling to semi-saponify, Then, DL-N-protected ethyl 2-amino-6-bromohexanoate obtained by heating and decarboxylation is prepared by the hydrolysis of a protease or esterase,
(2) The N-protected-D-2-amino-6-bromohexanoic acid was recovered from the solution after the preparation of the N-protected-L-2-amino-6-bromohexanoic acid. 9. The method according to claim 7 or 8, wherein the protected-D-2-amino-6-bromohexanoate is saponified by adding diluted strong alkaline water under ice-cooling. A method for producing pipecolic acid.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003055011A JP4452820B2 (en) | 2003-02-28 | 2003-02-28 | Method for producing pipecolic acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003055011A JP4452820B2 (en) | 2003-02-28 | 2003-02-28 | Method for producing pipecolic acid |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2004261086A true JP2004261086A (en) | 2004-09-24 |
| JP4452820B2 JP4452820B2 (en) | 2010-04-21 |
Family
ID=33119137
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003055011A Expired - Lifetime JP4452820B2 (en) | 2003-02-28 | 2003-02-28 | Method for producing pipecolic acid |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4452820B2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108752253A (en) * | 2018-06-27 | 2018-11-06 | 深圳市茵诺圣生物科技有限公司 | A kind of polynary aza-cyclic Non-natural chiral amino acid and its synthetic method |
-
2003
- 2003-02-28 JP JP2003055011A patent/JP4452820B2/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108752253A (en) * | 2018-06-27 | 2018-11-06 | 深圳市茵诺圣生物科技有限公司 | A kind of polynary aza-cyclic Non-natural chiral amino acid and its synthetic method |
| CN108752253B (en) * | 2018-06-27 | 2020-11-24 | 深圳市茵诺圣生物科技有限公司 | Multi-nitrogen heterocyclic non-natural chiral amino acid and synthesis method thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4452820B2 (en) | 2010-04-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2123769B1 (en) | Method for producing optically active 3-aminopiperidine or salt thereof | |
| TW200846307A (en) | Preparation of pregabalin and related compounds | |
| JP2007532125A (en) | Stereoselective bioconversion of aliphatic dinitriles to cyanocarboxylic acids. | |
| AU2008307573A1 (en) | Production of monatin stereoisomers | |
| US20140256003A1 (en) | R-praziquantel preparation method | |
| JP2008525515A (en) | Method for preparing optically active indoline-2-carboxylic acid | |
| EP2017259A2 (en) | Preparation of gamma-amino acids having affinity for the alpha-2-delta protein | |
| KR20080086463A (en) | Improved method for the production of ramipril | |
| Watanabe et al. | An efficient access to both enantiomers of pipecolic acid | |
| WO2013114173A1 (en) | A novel process for the preparation of sitagliptin | |
| Fauq et al. | Synthesis of (2S)-2-amino-3-(1H-4-indolyl) propanoic acid, a novel tryptophan analog for structural modification of bioactive peptides | |
| Winkler et al. | Nitrilase‐Catalyzed Enantioselective Synthesis of Pyrrolidine‐and Piperidinecarboxylic Acids | |
| JP4452820B2 (en) | Method for producing pipecolic acid | |
| JPWO2012176715A1 (en) | 1-amino-2-vinylcyclopropanecarboxylic acid amide and salt thereof, and production method thereof | |
| JP3744171B2 (en) | Process for producing optically active N-substituted azetidine-2-carboxylic acid compound | |
| JPH09143101A (en) | Production of optically active carboxylic acid | |
| JP3847934B2 (en) | γ-oxo-homophenylalanine derivative and method for producing homophenylalanine derivative obtained by reducing the same | |
| JP5329973B2 (en) | From racemic 4- (1-aminoethyl) benzoic acid methyl ester to (R)-and (S) -4- (1-ammoniumethyl) by enantioselective acylation using a lipase catalyst followed by precipitation with sulfuric acid. Method for preparing benzoic acid methyl ester sulfate | |
| JP5697998B2 (en) | Process for producing optically active succinimide derivative and intermediate thereof | |
| WO2010019469A2 (en) | Preparation of (s)-2-aminobutyric acid | |
| JP3192791B2 (en) | Method for producing optically active DN-piperonyl-2-amino- (benzo [b] thiophen-3-yl) -propionylamide | |
| WO2003087033A1 (en) | Process for the preparation of enantiomerically enriched compounds | |
| WO2004070045A1 (en) | Process for producing optically active 6-formyl-1,4-benzodioxin-2-carboxylic acid derivative | |
| JPH10158239A (en) | Production of 4-hydroxy-2-pyrrolidinone and its purification | |
| JP4544385B2 (en) | Process for producing optically active 2,6-diaminoheptanoic acid |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060228 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20060228 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20060228 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20060302 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080916 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081117 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20081218 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090213 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091020 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20091209 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100105 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4452820 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |