【０００１】
【産業上の利用分野】
本願発明は、医療用医薬品の分野に関する。詳細には、関節リウマチ（Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：以下、ＲＡと称することがある）および若年性リウマチ（Ｊｕｖｅｎｉｌｅ Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：以下、ＪＲＡと称することがある）等のリウマチ様関節炎に対する新規な治療用薬剤に関する。さらに詳細には、ラクトフェリン（以下、ＬＦと称することがある）を本態とする関節リウマチおよび若年性関節リウマチの治療用薬剤に関する。
【０００２】
【従来の技術並びに発明が解決しようとする課題】
関節リウマチや若年性関節リウマチは、通常は免疫学的寛容の状態にある自己の抗原に対して応答するＴ細胞が何らかの原因で自己の組織内で活性化され、自己の抗原と応答するようになり、これが慢性的な炎症反応となって組織に障害を与えるようになることに起因する。この場合、抗原は自己の関節を構成しているＩＩ型コラーゲンである。これらの疾患の患者数は毎年微増の傾向にあるにも拘わらず、有効な治療薬は見出されていない。
現在これらの疾患の治療には、メトトレキシレート、サラゾピリン、６−アミノサリチル酸、アザチオプリン、６−ＭＰ、シクロスポリンＡ等の免疫抑制剤、抗ＴＮＦ−α抗体投与が対症療法的に使用されている（例えば、非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５参照）。しかしながら、これらの薬剤は長期投与した場合、重篤な副作用の原因となり、より安全で、有効な治療法の開発が望まれている。
【０００３】
【非特許文献１】
市川陽一ら：慢性関節リウマチにおけるメトトレキサート及びサラゾスルファピリジン長期投与の検討、リウマチ、３５巻、ｐ．６６３−６７０、（１９９２）
【非特許文献２】
柏崎禎夫：慢性関節リウマチにおけるオーラノフィンとメトトレキサートによる併用療法の検討、リウマチ、３６巻、ｐ．５２８−５４４（１９９６）
【非特許文献３】
古谷武文ら：慢性関節リウマチにおける低用量メトトレキキレート療法の有害事象、リウマチ、３６巻、ｐ．７４６−７５２、（１９９６）
【非特許文献４】
八倉隆保：免疫抑制療法・自己免疫疾患の治療、総合臨床、３０巻、ｐ．２３−５８、（１９８１）
【非特許文献５】
都外川新ら：慢性関節リウマチにおけるメトトレキサート療法の検討−有効性のより高い投与方法を求めて−、リウマチ、３７巻、ｐ．６８１−６８７（１９９７）
【０００４】
【課題を解決するための手段、発明の構成】
本願発明により提供されるリウマチ様関節炎に対する新規な治療用薬剤は、その主たる構成成分としてラクトフェリンを含有することに特徴がある。
ラクトフェリンは、哺乳動物の乳汁中に含まれる可溶性の鉄結合性の糖タンパク質で、分子量はウシで８６，０００、ヒトで８８，０００である。溶液中から鉄イオンを奪うことによって、抗菌活性を示す（今堀和友、山川民夫監修、生化学辞典第３版、ｐ．１４５７、東京化学同人、１９９８年）。したがって、治療薬よりもむしろ健康食品の中の成分として利用されてきた。しかしながら、ＬＦの持つ他の作用については明らかになっていなかった。このタンパク質が持つ本来の機能からＬＦが抗炎症的な作用を有することが想像される。例えばＬＦは、その抗菌作用から、細菌感染による炎症の惹起を抑制し激しい感染症から生体を防御するという役割を果たしている。
【０００５】
本願発明はＲＡやＪＲＡのような難治性の自己免疫疾患に対して、長期間投与し、生体に害を及ぼすことなく炎症の拡大を抑制し、最終的には治癒をもたらす薬剤に関するものである。本願発明でもたらされる治療用薬剤を投与した場合、免疫抑制剤を投与したときに観られる広範な免疫抑制、例えばＴ細胞のマイトゲンに対する増殖応答の低下、あるいは肝臓、腎臓などの機能障害は認められない。また乳汁や血液中の成分であることから、他のタンパク質性薬剤のように生物活性を阻害するようなことは少ない。
【０００６】
本願発明におけるＬＦは、ウシ、ヒトの乳汁あるいは遺伝子組換え技術によって発現された産物を含む原液からゲル電気泳動で単一バンドを示すくらいに公知の方法で高度に精製されたものであれば良く、特に調製法及び精製法を限定するものではない。
【０００７】
調製されたＬＦの活性を最大限に維持するために、本願発明の本態であるＬＦは新鮮であるか、４℃で保存する場合には保存後２ヶ月以内のものが好ましい。また凍結乾燥粉末として保存することもできる。本願発明のＬＦはゼラチン、塩、糖、糖アルコールまたはアミノ酸などの好適な安定化剤と共に凍結乾燥もしくは液体の状態で保存することができるし、さらには、ＬＦ溶液を凍結し保存することも可能である。本願発明では、かかる有効成分としてのＬＦとその誘導体と公知の賦形剤を組み合わせ、公知の方法で本願発明のＲＡ及びＪＲＡの治療用薬剤とすることができる。また本態となるＬＦもしくはその誘導体を市販の飲料水に溶解し経口的に摂取することも考えられ得る。薬剤中のＬＦの含有量については、１回の投与当たり０．１ｍｇ〜１０ｇ／Ｋｇ、好ましくは、１ｍｇ〜１ｇ／ＫｇのＬＦを含有する薬剤が好適である。
【０００８】
本願発明の治療用薬剤をＲＡあるいはＪＲＡの治療に使用する場合、以下のような機構が想定される。本願発明の本態であるＬＦは、培地から鉄イオンを奪うことによって細菌の増殖を抑制するという抗菌作用を示すことが知られているが、その他にもグラム陰性菌の細胞壁成分であるリポ多糖類（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ、以下、ＬＰＳと略することがある）と結合し、その活性を阻害することで抗炎症作用を発揮する。このような抗炎症作用は、間接的に単球や樹状細胞からの炎症性サイトカインの産生を抑制する。したがって、ＬＦを全身または関節腔に投与することでＲＡ及びＪＲＡの体内で起こっている炎症を抑制し、最終的に疾患の拡大を抑制する、また炎症を抑制することで新たなる自己反応性Ｔ細胞の活性化を抑制し疾患の拡大を抑えるものと推測できる。
【０００９】
【発明の効果】
本願発明によりもたらされた知見により、他の生物活性を阻害することなく安全性の高い新規なリウマチ様関節炎の治療剤を提供することができる。
【００１０】
以下に、実施例に従って本願発明を詳説するが、本願発明はこれら実施例に何等限定されるものではない。
【００１１】
【実施例】
実施例１
（ＬＦによるコラーゲン誘導関節炎の発症抑制）
６〜１６週齢のＤＢＡ／１Ｊ雌のマウスに０．１５ＭのＮａＣｌを含む５０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ８．０）に溶解したウシＩＩ型コラーゲン（コラーゲン技術研修会製、以下ＣＩＩと略すことがある）をフロイント完全アジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ａｄｊｕｖａｎｔ、以下ＦＣＡと略することがある）でエマルジョン化し、１匹当たり２００μｇの投与量で背部に皮内投与した。その３週間後にＣＩＩ２００μｇを溶液状態のままで腹腔内に投与した（ブースター免疫）。以後１週から３ヶ月間飼育することでコラーゲン誘導関節炎（ｃｏｌｌａｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ、以下ＣＩＡと略することがある， Ｔｒｅｎｔｈａｍ，Ｄ．Ｅ． ：Ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｓ ａ ｒｅｌｅｖａｎｔ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ． Ｒｈｅｕｍ． ２５：９１１−９１６，１９８２）が発症した。ＣＩＡの評価は、四肢の関節の関節炎を重症度に応じて１〜４点でスコア化することにより行なった。ＣＩＡの重症度は、各実験群にいて関節炎スコアの合計を個体数で割った値を用いた。
【００１２】
ＣＩＡは、ＣＩＩを腹腔内投与したあと１週間後に四肢の指の関節から発病し始め、１０〜１４日目にはほぼ１００％のマウスが発症した。最初の投与から約４週後にヒトＲＡ及びＪＲＡ様の症状を呈するようになり、その後の重症度は次第に上昇していった。このときマウスにＬＦを２ｍｇ／マウスの投与量で腹腔内投与しておいた実験群では、重症度は低く（０．８〜１．１）推移した。これに比べてＰＢＳ投与群（Ｎｏｎｅ）ではブースター後１０日目からの重症度が０．８５〜３．８であったので、ＬＦの腹腔内投与によりＣＩＡの重症度が抑制されていることが示された（図１参照）。
【図面の簡単な説明】
【図１】リウマチ様関節炎発症モデルでのラクトフェリンを本態とする薬剤の治療及び発症軽減効果を示す図である。[0001]
[Industrial applications]
The present invention relates to the field of prescription pharmaceuticals. More specifically, the present invention relates to a novel therapeutic agent for rheumatoid arthritis such as rheumatoid arthritis (hereinafter sometimes referred to as RA) and juvenile rheumatoid arthritis (hereinafter sometimes referred to as JRA). More specifically, the present invention relates to a drug for treating rheumatoid arthritis and juvenile rheumatoid arthritis, which is based on lactoferrin (hereinafter sometimes referred to as LF).
[0002]
2. Description of the Related Art
In rheumatoid arthritis and juvenile rheumatoid arthritis, T cells that respond to their own antigens, which are usually in an immunologically tolerant state, are activated in their tissues for some reason to respond to their own antigens. This results in a chronic inflammatory response that causes tissue damage. In this case, the antigen is type II collagen that makes up its own joint. Despite the slight increase in the number of patients with these diseases every year, no effective therapeutic agent has been found.
Currently, immunosuppressants such as methotrexylate, salazopyrine, 6-aminosalicylic acid, azathioprine, 6-MP, and cyclosporin A, and anti-TNF-α antibody administration are used symptomatically for the treatment of these diseases ( For example, see Non-Patent Document 1, Non-Patent Document 2, Non-Patent Document 3, Non-Patent Document 4, and Non-Patent Document 5. However, when these drugs are administered for a long period of time, they cause serious side effects, and it is desired to develop safer and more effective treatments.
[0003]
[Non-patent document 1]
Ichikawa, Y. et al .: Study of long-term administration of methotrexate and salazosulfapyridine in rheumatoid arthritis, rheumatism, volume 35, p. 663-670, (1992)
[Non-patent document 2]
Yoshio Kashiwazaki: Examination of combination therapy with auranofin and methotrexate in rheumatoid arthritis, rheumatism, volume 36, p. 528-544 (1996)
[Non-Patent Document 3]
Takefumi Furuya et al .: Adverse events of low-dose methotrexylate therapy in rheumatoid arthritis, rheumatism, volume 36, p. 746-752, (1996)
[Non-patent document 4]
Takayasu Hachikura: Immunosuppressive Therapy / Treatment of Autoimmune Diseases, General Clinical Practice, Volume 30, p. 23-58, (1981)
[Non-Patent Document 5]
Shin Totokawa et al .: Examination of methotrexate therapy in rheumatoid arthritis-In search of a more effective administration method-, Rheumatism, Volume 37, p. 681-687 (1997)
[0004]
Means for Solving the Problems, Structure of the Invention
The novel therapeutic agent for rheumatoid arthritis provided by the present invention is characterized by containing lactoferrin as a main component thereof.
Lactoferrin is a soluble iron-binding glycoprotein contained in mammalian milk and has a molecular weight of 86,000 for bovine and 88,000 for human. Shows antibacterial activity by depriving iron ions from solution (Kazutomo Imabori, Tamio Yamakawa, Biochemical Dictionary 3rd ed., P. 1457, Tokyo Kagaku Dojin, 1998). Therefore, it has been used as a component in health foods rather than a therapeutic drug. However, other effects of LF have not been clarified. From the original function of this protein, it is supposed that LF has an anti-inflammatory action. For example, LF plays a role of inhibiting the inflammation caused by bacterial infection and protecting the living body from severe infectious diseases due to its antibacterial action.
[0005]
The present invention relates to a drug which is administered for a long period of time to an intractable autoimmune disease such as RA or JRA, suppresses the spread of inflammation without harming the living body, and finally cures the disease. . When the therapeutic agent provided by the present invention is administered, the widespread immunosuppression observed when the immunosuppressant is administered, for example, a decrease in the proliferative response of T cells to mitogen, or dysfunction of the liver, kidney and the like is observed. Absent. Further, since it is a component in milk or blood, it rarely inhibits biological activity like other protein drugs.
[0006]
The LF in the present invention may be any one which has been highly purified by a known method so as to show a single band by gel electrophoresis from a bovine or human milk or a stock solution containing a product expressed by a gene recombination technique. The method for preparation and the method for purification are not particularly limited.
[0007]
In order to maintain the activity of the prepared LF to the maximum, the LF according to the present invention is preferably fresh or, when stored at 4 ° C., within 2 months after storage. It can also be stored as a lyophilized powder. The LF of the present invention can be freeze-dried or stored in a liquid state together with a suitable stabilizer such as gelatin, salt, sugar, sugar alcohol or amino acid, and furthermore, the LF solution can be frozen and stored. It is. In the present invention, LF as such an active ingredient, its derivative, and a known excipient are combined, and can be used as a therapeutic agent for RA and JRA of the present invention by a known method. Further, it may be considered that LF or its derivative in the present embodiment is dissolved in commercially available drinking water and taken orally. Regarding the content of LF in the drug, a drug containing 0.1 mg to 10 g / Kg, preferably 1 mg to 1 g / Kg LF per administration is suitable.
[0008]
When the therapeutic agent of the present invention is used for treating RA or JRA, the following mechanism is assumed. LF, which is the essential feature of the present invention, is known to exhibit an antibacterial effect of suppressing the growth of bacteria by depriving the medium of iron ions, but also lipopolysaccharide, a cell wall component of Gram-negative bacteria. (Lipopolysaccharide, hereinafter sometimes abbreviated as LPS) and exerts an anti-inflammatory effect by inhibiting its activity. Such an anti-inflammatory effect indirectly suppresses the production of inflammatory cytokines from monocytes and dendritic cells. Therefore, administration of LF to the whole body or joint cavity suppresses the inflammation occurring in the body of RA and JRA, and finally suppresses the spread of the disease and suppresses the inflammation to produce a new autoreactive T. It can be speculated that they suppress cell activation and suppress the spread of disease.
[0009]
【The invention's effect】
Based on the findings provided by the present invention, it is possible to provide a novel highly safe therapeutic agent for rheumatoid arthritis without inhibiting other biological activities.
[0010]
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
[0011]
【Example】
Example 1
(Suppression of collagen-induced arthritis by LF)
Bovine type II collagen dissolved in 50 mM Tris-HCl (pH 8.0) containing 0.15 M NaCl in 6 to 16-week-old DBA / 1J female mice (manufactured by Collagen Technology Workshop; hereinafter may be abbreviated as CII) Was emulsified with Freund's complete adjuvant (hereinafter sometimes abbreviated as FCA) and administered intradermally to the back at a dose of 200 μg per animal. Three weeks later, 200 μg of CII was administered intraperitoneally in a solution state (boost immunization). After cultivation for one week to three months, collagen-induced arthritis (hereinafter sometimes abbreviated as CIA), Trentham, DE: Collagen arthritis as a related model, 25: 911-916, 1982). CIA was evaluated by scoring arthritis of limb joints at 1 to 4 points according to severity. As the severity of CIA, a value obtained by dividing the total arthritis score by the number of individuals in each experimental group was used.
[0012]
CIA began to develop from the finger joints of the limbs one week after intraperitoneal administration of CII, and almost 100% of mice developed on days 10-14. Approximately 4 weeks after the first dose, human RA and JRA-like symptoms began to appear, after which the severity gradually increased. At this time, in the experimental group in which LF was intraperitoneally administered to the mice at a dose of 2 mg / mouse, the severity was low (0.8 to 1.1). In contrast, in the PBS administration group (None), the severity from day 10 after the booster was 0.85 to 3.8, so that the intraperitoneal administration of LF suppressed the severity of CIA. (See FIG. 1).
[Brief description of the drawings]
BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a graph showing the effects of lactoferrin-based drugs on treatment and reduction of the onset in a rheumatoid arthritis onset model.
