JP2004219390A - アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の評価方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の高い精度を有する評価方法を提供すること
【解決手段】（１）アトピー性皮膚炎を発症したＮＣ／Ｎｇａ系マウスの１．０秒以上の自発性掻痒行動を抽出して測定することを特徴とする、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の評価方法、及び（２）掻痒行動が、１．５秒以上のものを抽出して測定する請求項１記載の評価方法
【選択図】 なし
【解決手段】（１）アトピー性皮膚炎を発症したＮＣ／Ｎｇａ系マウスの１．０秒以上の自発性掻痒行動を抽出して測定することを特徴とする、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の評価方法、及び（２）掻痒行動が、１．５秒以上のものを抽出して測定する請求項１記載の評価方法
【選択図】 なし
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の評価方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アトピー性皮膚炎は、遺伝的に過敏な人にあらわれる慢性皮膚疾患である。近年、このアトピー性皮膚炎の患者は増大している。アトピー性皮膚炎は強い掻痒感を伴う。このため患者は患部を掻きむしり、角質層などの皮膚組織を破壊する。これが刺激となりまた掻痒感を生じさせ、また掻きむしるという悪循環となる。これが治療の妨げとなる。このため、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の開発が切望されている。
【０００３】
しかし、アトピー性皮膚炎の痒みの発生メカニズムは、十分に解明されていない。
【０００４】
最近の研究で、ＮＣ／Ｎｇａマウスが、アトピー性皮膚炎の病態マウスとして報告された（非特許文献１）。そして、このＮＣ／Ｎｇａマウスを用いて、主に皮膚症状のスコアを指標として評価していた（非特許文献２、非特許文献３）。しかし、試験に長期間かかることやスコア化は観察者の主観に左右され正確なデータを得ることができないこと等の問題点があった。
【０００５】
さらに、動物の掻痒行動に着目した評価法の研究が行われている。特に評価を正確に行うべく、動物の繰り返し行動を検出する装置が開発された。（特許文献１）。これは試験動物に永久磁石を備え付け、環状にコイルを巻き付けた空間に、当該マウスを収容する。当該マウスが行動するとそれに併せて磁石も動き、コイルに電流が生じる。これを信号として検出して測定するものである。しかし、当該装置では、掻痒感に起因する掻痒行動以外に、歩行など掻痒行動以外の動作や、動物が自然に行う一般症状としての掻痒行動も含められて測定されるため、誤差が生じてしまうといった問題があり、より正確に評価することに改良の余地があった。
【非特許文献１】
松田 外１０名 「ＮＣ／Ｎｇａ系マウスのアトピー性皮膚炎様皮膚組織のＩｇＥ値の上昇について」、国際免疫学、オックスフォード大学出版、平成７年９月、第９巻、第３号ｐ．４６１−４６６ （Ｈｉｒｏｓｉ．Ｍａｔｕｄａ ｅｔ ａｌ．，「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｔｏｐｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ−ｌｉｋｅ ｓｋｉｎ ｌｅｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ＩｇＥ ｈｙｐｅｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ＮＣ／Ｎｇａ ｍｉｃｅ」，“Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｎａｌ Ｉｍｍｎｏｌｏｇｙ”１９９７，Ｖｏｌ．９ Ｎｏ．３，ｐ．４６１−４６６）
【非特許文献２】
広井 外９名 「ＮＣ／Ｎｇａ系マウスの自発性皮膚炎に対するＦＫ５０６の効果」、日本薬理学会誌、日本薬理学会、平成８年、第７６巻、１７５−１８３、（Ｊｕｎ Ｈｉｒｏｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ Ｈｙｄｒａｔｅ（ＦＫ５０６） Ｏｉｎｔｍｅｎｔ ｏｎ Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ ｉｎ ＮＣ／Ｎｇａ Ｍｉｃｅ」，“Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ”，１９９８，Ｖｏｌ．７６，ｐ．１７５−１８３）
【非特許文献３】
平澤 康史、外８名、「ＮＣ／Ｎｇａマウスを用いたオウゴン、オウバク、オウレンなどからなる生薬配合製剤およびシコン、トウキ、ゴマ油などからなる生薬配合軟膏製剤のアトピー性皮膚炎に対する薬効確認試験」、応用薬理、２０００年、第５９巻、ｐ．１２３−１３４
【特許文献１】
特開２００２−１３１３０７号公報
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の高い精度を有する評価方法を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を進めた結果、マウスの掻痒行動は、掻痒感を伴うものと原因不明の自発性のものとが存在するが、アトピー性皮膚炎を発症したＮＣ／Ｎｇａマウスの掻痒行動は、様々な系統のマウスの掻痒行動と比較して１回の持続時間が長いものが非常に多いことに着目し、本発明を完成させた。
つまり、本発明は（１）アトピー性皮膚炎を発症したＮＣ／Ｎｇａ系マウスの１．０秒以上の自発性掻痒行動を抽出して測定することを特徴とする、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の評価方法、及び（２）掻痒行動が、１．５秒以上のものを抽出して測定する上記（１）記載の評価方法である。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下に、本発明の実施の形態について説明する。
【０００８】
本発明は、ＮＣ／Ｎｇａ系マウスを用いる。ＮＣ／Ｎｇａ系マウスは、アトピー性皮膚炎の病態マウスとして知られている。このマウスは、自然発症的に激しい掻痒行動と皮膚病変を惹起し、その病変部位への炎症性細胞の著明な湿潤や血中ＩｇＥ値のアトピー性皮膚炎類似の症状を呈する（Ｈ． Ｍａｔｓｕｄａ， ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ９（３） ，４６１−４６６（１９９７）； Ｈ． Ｓｕｔｏ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １２０（ｓｕｐｐｌ １）， ７０−７５（１９９９））。
【０００９】
本発明で用いるＮＣ／Ｎｇａ系マウスは、アトピー性皮膚炎を発症しているものであれば使用することができる。ＮＣ／Ｎｇａ系マウスは、生後約８週齢頃から自然発症を始める。本発明では１５〜２０週齢のものを用いるのが好ましい。
【００１０】
本発明の評価方法は、被検薬物及び対照薬物を当該マウスに投与することにより行う。投与の方法は、経口、塗布、皮内、腹腔内投与等を行うことができる。
【００１１】
薬物は、合成化合物、植物抽出液、動物組織抽出液及び細胞抽出液等を用いることができる。当該薬物は、公知の薬物であっても、新規の薬物であっても用いることができる。
【００１２】
掻痒行動の測定は、動物の繰返し行動を検出する装置によって行う。具体的には、アトピー性皮膚炎を発症したＮＣ／Ｎｇａ系マウスの両後肢に磁石を備え付け、環状にコイルを巻き付けた空間に、当該マウスを収容する。当該マウスが行動するとそれに併せて磁石も動き、コイルに電流が生じる。そして磁石の動きによって、電流の変化が生じ、これを検出し測定及び解析する。当該装置は、掻痒測定システム（ニューロサイエンス社製）として市販されている。
【００１３】
検出された掻痒行動を、掻痒時間の長さにより分類し、その頻度を集計し、統計解析を行う。掻痒時間は１．０秒以上のものを抽出する。さらに好ましくは１．５秒以上のものを抽出する。
【００１４】
【実施例】
［ＮＣ／Ｎｇａマウス自発性掻痒行動に対するタクロリムス及びデキサメタゾン外用の作用］
実験動物は体重約３０ｇのＮＣ／Ｎｇａ系雄性マウス、１群６匹を用いた。
【００１５】
本試験に際しては、市販の掻痒測定システムを用いた。 上記動物の後肢にスクラッチ測定用マグネットを挿入し、１匹ずつ測定用ケージに入れ、掻痒行動数を２４時間測定した（薬物投与前の値）。その後、１００％エタノールに溶解した０．１％のタクロリムス及びデキサメタゾン２００μｌを頭部及び背部皮膚に塗布し、再び掻痒行動数を２４時間記録した（薬物投与後の値）。対照群には１００％エタノールを塗布した。得られた結果から、１．５秒以上の足の動きを１回の掻痒行動として数値化し、統計解析処理を行い、薬物投与前の値、薬物投与後の値との間で有意差検定を行った。
（結果）
結果を表１に示した。
【００１６】
【表１】
【００１７】
ＮＣ／Ｎｇａ系マウスの自発性掻痒行動数に対するタクロリムス及びデキサメタゾン外用の作用を検討したところ、いずれの薬物においても塗布後有意に掻痒行動数が抑制された。
この結果より、これらの薬物がアトピー性皮膚炎に効果があることが確認された。
【００１８】
（試験例）
［ＩＣＲ、ＢＡＬＢ／ｃ、皮膚炎発症及び未発症ＮＣ／Ｎｇａマウスの自発性掻痒行動数の１回持続時間毎の比較］
実験動物はアトピー性皮膚炎様の症状を発症しているＮＣ／Ｎｇａ系雄性マウスと、対照群としてＩＣＲ、ＢＡＬＢ／ｃ、及び皮膚炎を発症していないＮＣ／Ｎｇａマウス、いずれも体重約３０ｇのものを用い、１群６匹とした。
【００１９】
掻痒行動の測定は、市販の掻痒測定システムを用いた。
上記動物の後肢にスクラッチ測定用マグネットを挿入し、１日後に試験を行った。実験動物を１匹ずつ測定用ケージに入れ、１時間馴化させた後、掻痒行動を２４時間測定した。
【００２０】
得られた結果より、マウスの掻痒時間が０．３〜０．５秒、０．５〜１．０秒、１．０〜１．５秒及び１．５秒以上のものに分類し、足の動きを１回の掻痒行動として数値化し、統計解析処理を行い、マウス系統間の有意差検定を行った。
（実験結果）
結果を表２に示した。
【００２１】
【表２】
【００２２】
各群の自発性掻痒行動数を測定したところ、０．３〜０．５秒及び０．５〜１．０秒の掻痒行動には差がなかったが、皮膚炎を発症しているＮＣ／Ｎｇａマウスにおいて１．０秒以上の掻痒行動が他群と比べて有意に多く、特に１．５秒以上の行動数は著明に多かった。
【００２３】
【発明の効果】
本発明は、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の評価を精度が高い水準で行うことができる。つまり、誤差の原因となる歩行など掻痒行動以外の動作や、動物が自然に行う一般症状としての掻痒行動と、アトピー性皮膚炎モデルマウス特有の激しい掻痒行動を区別して測定することにより、精度が高い水準で薬物の鎮痒効果を評価することができる。
【発明の属する技術分野】
本発明は、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の評価方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アトピー性皮膚炎は、遺伝的に過敏な人にあらわれる慢性皮膚疾患である。近年、このアトピー性皮膚炎の患者は増大している。アトピー性皮膚炎は強い掻痒感を伴う。このため患者は患部を掻きむしり、角質層などの皮膚組織を破壊する。これが刺激となりまた掻痒感を生じさせ、また掻きむしるという悪循環となる。これが治療の妨げとなる。このため、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の開発が切望されている。
【０００３】
しかし、アトピー性皮膚炎の痒みの発生メカニズムは、十分に解明されていない。
【０００４】
最近の研究で、ＮＣ／Ｎｇａマウスが、アトピー性皮膚炎の病態マウスとして報告された（非特許文献１）。そして、このＮＣ／Ｎｇａマウスを用いて、主に皮膚症状のスコアを指標として評価していた（非特許文献２、非特許文献３）。しかし、試験に長期間かかることやスコア化は観察者の主観に左右され正確なデータを得ることができないこと等の問題点があった。
【０００５】
さらに、動物の掻痒行動に着目した評価法の研究が行われている。特に評価を正確に行うべく、動物の繰り返し行動を検出する装置が開発された。（特許文献１）。これは試験動物に永久磁石を備え付け、環状にコイルを巻き付けた空間に、当該マウスを収容する。当該マウスが行動するとそれに併せて磁石も動き、コイルに電流が生じる。これを信号として検出して測定するものである。しかし、当該装置では、掻痒感に起因する掻痒行動以外に、歩行など掻痒行動以外の動作や、動物が自然に行う一般症状としての掻痒行動も含められて測定されるため、誤差が生じてしまうといった問題があり、より正確に評価することに改良の余地があった。
【非特許文献１】
松田 外１０名 「ＮＣ／Ｎｇａ系マウスのアトピー性皮膚炎様皮膚組織のＩｇＥ値の上昇について」、国際免疫学、オックスフォード大学出版、平成７年９月、第９巻、第３号ｐ．４６１−４６６ （Ｈｉｒｏｓｉ．Ｍａｔｕｄａ ｅｔ ａｌ．，「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｔｏｐｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ−ｌｉｋｅ ｓｋｉｎ ｌｅｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ＩｇＥ ｈｙｐｅｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ＮＣ／Ｎｇａ ｍｉｃｅ」，“Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｎａｌ Ｉｍｍｎｏｌｏｇｙ”１９９７，Ｖｏｌ．９ Ｎｏ．３，ｐ．４６１−４６６）
【非特許文献２】
広井 外９名 「ＮＣ／Ｎｇａ系マウスの自発性皮膚炎に対するＦＫ５０６の効果」、日本薬理学会誌、日本薬理学会、平成８年、第７６巻、１７５−１８３、（Ｊｕｎ Ｈｉｒｏｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ Ｈｙｄｒａｔｅ（ＦＫ５０６） Ｏｉｎｔｍｅｎｔ ｏｎ Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ ｉｎ ＮＣ／Ｎｇａ Ｍｉｃｅ」，“Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ”，１９９８，Ｖｏｌ．７６，ｐ．１７５−１８３）
【非特許文献３】
平澤 康史、外８名、「ＮＣ／Ｎｇａマウスを用いたオウゴン、オウバク、オウレンなどからなる生薬配合製剤およびシコン、トウキ、ゴマ油などからなる生薬配合軟膏製剤のアトピー性皮膚炎に対する薬効確認試験」、応用薬理、２０００年、第５９巻、ｐ．１２３−１３４
【特許文献１】
特開２００２−１３１３０７号公報
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の高い精度を有する評価方法を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を進めた結果、マウスの掻痒行動は、掻痒感を伴うものと原因不明の自発性のものとが存在するが、アトピー性皮膚炎を発症したＮＣ／Ｎｇａマウスの掻痒行動は、様々な系統のマウスの掻痒行動と比較して１回の持続時間が長いものが非常に多いことに着目し、本発明を完成させた。
つまり、本発明は（１）アトピー性皮膚炎を発症したＮＣ／Ｎｇａ系マウスの１．０秒以上の自発性掻痒行動を抽出して測定することを特徴とする、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の評価方法、及び（２）掻痒行動が、１．５秒以上のものを抽出して測定する上記（１）記載の評価方法である。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下に、本発明の実施の形態について説明する。
【０００８】
本発明は、ＮＣ／Ｎｇａ系マウスを用いる。ＮＣ／Ｎｇａ系マウスは、アトピー性皮膚炎の病態マウスとして知られている。このマウスは、自然発症的に激しい掻痒行動と皮膚病変を惹起し、その病変部位への炎症性細胞の著明な湿潤や血中ＩｇＥ値のアトピー性皮膚炎類似の症状を呈する（Ｈ． Ｍａｔｓｕｄａ， ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ９（３） ，４６１−４６６（１９９７）； Ｈ． Ｓｕｔｏ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １２０（ｓｕｐｐｌ １）， ７０−７５（１９９９））。
【０００９】
本発明で用いるＮＣ／Ｎｇａ系マウスは、アトピー性皮膚炎を発症しているものであれば使用することができる。ＮＣ／Ｎｇａ系マウスは、生後約８週齢頃から自然発症を始める。本発明では１５〜２０週齢のものを用いるのが好ましい。
【００１０】
本発明の評価方法は、被検薬物及び対照薬物を当該マウスに投与することにより行う。投与の方法は、経口、塗布、皮内、腹腔内投与等を行うことができる。
【００１１】
薬物は、合成化合物、植物抽出液、動物組織抽出液及び細胞抽出液等を用いることができる。当該薬物は、公知の薬物であっても、新規の薬物であっても用いることができる。
【００１２】
掻痒行動の測定は、動物の繰返し行動を検出する装置によって行う。具体的には、アトピー性皮膚炎を発症したＮＣ／Ｎｇａ系マウスの両後肢に磁石を備え付け、環状にコイルを巻き付けた空間に、当該マウスを収容する。当該マウスが行動するとそれに併せて磁石も動き、コイルに電流が生じる。そして磁石の動きによって、電流の変化が生じ、これを検出し測定及び解析する。当該装置は、掻痒測定システム（ニューロサイエンス社製）として市販されている。
【００１３】
検出された掻痒行動を、掻痒時間の長さにより分類し、その頻度を集計し、統計解析を行う。掻痒時間は１．０秒以上のものを抽出する。さらに好ましくは１．５秒以上のものを抽出する。
【００１４】
【実施例】
［ＮＣ／Ｎｇａマウス自発性掻痒行動に対するタクロリムス及びデキサメタゾン外用の作用］
実験動物は体重約３０ｇのＮＣ／Ｎｇａ系雄性マウス、１群６匹を用いた。
【００１５】
本試験に際しては、市販の掻痒測定システムを用いた。 上記動物の後肢にスクラッチ測定用マグネットを挿入し、１匹ずつ測定用ケージに入れ、掻痒行動数を２４時間測定した（薬物投与前の値）。その後、１００％エタノールに溶解した０．１％のタクロリムス及びデキサメタゾン２００μｌを頭部及び背部皮膚に塗布し、再び掻痒行動数を２４時間記録した（薬物投与後の値）。対照群には１００％エタノールを塗布した。得られた結果から、１．５秒以上の足の動きを１回の掻痒行動として数値化し、統計解析処理を行い、薬物投与前の値、薬物投与後の値との間で有意差検定を行った。
（結果）
結果を表１に示した。
【００１６】
【表１】
ＮＣ／Ｎｇａ系マウスの自発性掻痒行動数に対するタクロリムス及びデキサメタゾン外用の作用を検討したところ、いずれの薬物においても塗布後有意に掻痒行動数が抑制された。
この結果より、これらの薬物がアトピー性皮膚炎に効果があることが確認された。
【００１８】
（試験例）
［ＩＣＲ、ＢＡＬＢ／ｃ、皮膚炎発症及び未発症ＮＣ／Ｎｇａマウスの自発性掻痒行動数の１回持続時間毎の比較］
実験動物はアトピー性皮膚炎様の症状を発症しているＮＣ／Ｎｇａ系雄性マウスと、対照群としてＩＣＲ、ＢＡＬＢ／ｃ、及び皮膚炎を発症していないＮＣ／Ｎｇａマウス、いずれも体重約３０ｇのものを用い、１群６匹とした。
【００１９】
掻痒行動の測定は、市販の掻痒測定システムを用いた。
上記動物の後肢にスクラッチ測定用マグネットを挿入し、１日後に試験を行った。実験動物を１匹ずつ測定用ケージに入れ、１時間馴化させた後、掻痒行動を２４時間測定した。
【００２０】
得られた結果より、マウスの掻痒時間が０．３〜０．５秒、０．５〜１．０秒、１．０〜１．５秒及び１．５秒以上のものに分類し、足の動きを１回の掻痒行動として数値化し、統計解析処理を行い、マウス系統間の有意差検定を行った。
（実験結果）
結果を表２に示した。
【００２１】
【表２】
各群の自発性掻痒行動数を測定したところ、０．３〜０．５秒及び０．５〜１．０秒の掻痒行動には差がなかったが、皮膚炎を発症しているＮＣ／Ｎｇａマウスにおいて１．０秒以上の掻痒行動が他群と比べて有意に多く、特に１．５秒以上の行動数は著明に多かった。
【００２３】
【発明の効果】
本発明は、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の評価を精度が高い水準で行うことができる。つまり、誤差の原因となる歩行など掻痒行動以外の動作や、動物が自然に行う一般症状としての掻痒行動と、アトピー性皮膚炎モデルマウス特有の激しい掻痒行動を区別して測定することにより、精度が高い水準で薬物の鎮痒効果を評価することができる。
Claims (2)
- アトピー性皮膚炎を発症したＮＣ／Ｎｇａ系マウスの１．０秒以上の掻痒行動を抽出して測定することを特徴とする、アトピー性皮膚炎に対し鎮痒効果を有する薬物の評価方法。
- 掻痒行動が、１．５秒以上のものを測定することを特徴とする請求項１記載の評価方法。
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Cited By (1)
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| JP2008530138A (ja) * | 2005-02-14 | 2008-08-07 | ザイモジェネティクス，インコーポレイティド | Ｉｌ−３１アンタゴニストに対するアトピー性皮膚炎の治療応答を予測する方法 |
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