JP2004196769A

JP2004196769A - New cxcr4 antagonist

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Publication number: JP2004196769A
Application number: JP2003133380A
Authority: JP
Inventors: Nobutaka Fujii; 信孝藤井; Hideki Nakajima; 秀喜中島; C Piper Stephan; シー．パイパーステファン
Original assignee: ORPHAN LINK KK
Current assignee: ORPHAN LINK KK
Priority date: 2002-10-24
Filing date: 2003-05-12
Publication date: 2004-07-15
Anticipated expiration: 2023-05-12
Also published as: JP4391123B2

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new compound having CXCR4 antagonistic action and a prophylactic and/or a remedy using the compound and used for AIDS, chronic lymphocytic B-cell leukemia, cancer, and chronic rheumatoid arthritis. <P>SOLUTION: This new compound is a cyclic peptide represented by cyclo-(-A1-B1-B2-A2-C-) (wherein A1 and A2 are each aromatic amino acid or alanine; B1 and B2 are each arginine, homoarginine, citruline, 2,4-diaminobutyric acid, 2,3-diaminopropionic acid, lysine, ornithine, aspartic acid, glutamic acid, 2-aminohexane-1,6-dicarboxylic acid or alanine; C is glycine, alanine, sarcosine, 1-aminocyclopentyl-1-carboxylic acid, 1-aminocyclohexyl-1-carboxylic acid, β-alanine, 4-aminobutyric acid, 5-aminopentanoic acid, proline or pipecolic acid; and each amino-acid residue may be modified) or its physiologically acceptable salt and is used as the effective ingredient of a medicinal composition. <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO&NCIPI

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規環状ペプチド及び同ペプチドを含有する医薬組成物に関する。同ペプチドは、エイズ、慢性リンパ性白血病、癌ならびに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療剤として医薬、製薬分野等で有用であると考えられる。
【０００２】
【従来の技術】
多くのホルモンや神経伝達物質は、細胞膜に存在する特異的なレセプターを通じて生体の機能を調節している。これらのレセプターの多くは共役しているグアニンヌクレオチド結合性蛋白質（ｇｕａｎｉｎｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ−ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ、以下、Ｇ蛋白質と略称する場合がある）の活性化を通じて細胞内のシグナル伝達を行う。また、これらのレセプターは、７個の細胞膜貫通領域を有する共通した構造をもっていることから、Ｇ蛋白質共役型レセプターあるいは７回膜貫通型レセプター（７ＴＭＲ）と総称される。
【０００３】
このようなＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質の一つとして、ＣＸＣＲ４遺伝子によってコードされるヒト型レセプター蛋白質［非特許文献１］が知られている。
また、上記のＣＸＣＲ４に対するリガンドとして機能する生理活性ペプチドとして、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１（ｓｔｒｏｍａｌ−ｃｅｌｌｄｅｒｉｖｅｄｆａｃｔｏｒ−１）［非特許文献２］が知られている。
【０００４】
このリガンドが胎仔の生存、一次リンパ組織でのＢ細胞（Ｂリンパ球）の生成や骨髄球系血液細胞の定着または生成、心室中隔形成など造血や発生現象に必須であること、臓器を栄養する欠陥の形成や神経形成にも必須であることが次々に明らかになった。さらに、最近造血において血液細胞を標的細胞とし、生体におけるリンパ球系、骨髄球系造血の再構成にも必須であることが示された［非特許文献３］。
【０００５】
ＨＩＶ感染の病態生理は、極めて複雑であり、様々なウイルス因子、宿主因子、そして環境因子の影響に左右される。ＨＩＶが細胞に侵入する際にＣＤ４分子以外にいくつかのケモカイン受容体が様々なタイプのＨＩＶの共受容体として働くことが明らかとなった。その一つであるＣＸＣＲ４に対する拮抗剤が、抗ＨＩＶ因子としてＨＩＶの感染およびエイズの進行度に影響を与えることがわかった［非特許文献４］。
【０００６】
癌の転移は患者の余命を左右する重要な要素である。ＣＸＣＲ４は乳癌などにおいてその発現が亢進し、さらに転移先の臓器（リンパ節、肺、肝臓および骨）においてそのリガンドであるＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１の発現が亢進していることから［非特許文献５］、ＣＸＣＲ４−ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１相互作用が癌転移を規定する重要な要因の１つであることが示唆される。
【０００７】
慢性関節リューマチは、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の関節腔液への浸潤がその病状の進展に影響を与える。慢性関節リューマチ患者の関節腔液内のＣＤ４陽性記憶Ｔ細胞においてＣＸＣＲ４遺伝子発現が亢進し、関節滑膜組織においてＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１遺伝子発現が亢進していることから［非特許文献６］ＣＸＣＲ４−ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１相互作用が慢性関節リューマチを規定する重要な要因の１つであることが示唆される。
また、ＣＸＣＲ４の阻害剤が慢性リンパ性Ｂ細胞白血病のＢ細胞の活性化とマイグレーションを阻害することも明らかとなった［非特許文献７］。
【０００８】
以上よりエイズ，慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、癌ならびに慢性関節リューマチにおいて、ＣＸＣＲ４−ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１相互作用を阻害する物質は、予防薬および／または治療薬として有用であると想定され、研究が行われた。しかしながら、抗ＣＸＣＬ１２または抗ＣＸＣＲ４中和抗体は、ＣＸＣＲ４に対する阻害活性があるものの高濃度が必要であり、また膨大な治療コストがかかることから実用化に至っていない。
【０００９】
カブトガニの血中に存在する抗菌、抗ウイルス活性物質ｔａｃｈｙｐｌｅｓｉｎとｐｏｌｙｐｈｅｍｕｓｉｎを基盤化合物として合成されたアミノ酸１４個からなるＴ１４０は、強いＣＸＣＲ４阻害活性を示し、そのために必須な残基が、アルギニン^２、３−（２−ナフチル）アラニン^３、チロシン^５およびアルギニン^１４であることが明らかとなった［非特許文献８］。また、３−（２−ナフチル）アラニン^３は、他の芳香族アミノ酸残基に置換することによっても、同様の生物活性を示すことが明らかとなった［非特許文献９］。しかしながら、高分子であるためアレルギー性副作用のリスクと生体内での不安定さのために実用化に至っていない。
【００１０】
【非特許文献１】
ジャーナルオブバイオロジカルケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），第２７３巻，第４７５４頁（１９９８年）
【非特許文献２】
サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第２６１巻、６００−６０３頁（１９９３年）
【非特許文献３】
サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第２８３巻、８４５頁（１９９９年）
【非特許文献４】
ネイチャーメデイスン（Ｎａｔ．Ｍｅｄ．）、第４巻、７２−７７頁（１９９８年）
【非特許文献５】
ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、第４１０巻、５０−５６頁（２００１年）
【非特許文献６】
ジャーナルオブイムノロジー（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、第１６５巻、６５９０−９８頁（２０００年）
【非特許文献７】
ＩＷＣＣＬ（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＷｏｒｋｓｈｏｐｏｎＣｈｒｏｎｉｃＬｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃＬｅｕｋｅｍｉａＢ）要旨，２００２年３月２２〜２４日、米国サンジエゴ
【非特許文献８】
カレントオピニオンインインベスティゲイショナルドラッグス（Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ）、第２巻、１１９８頁（２００１年）
【非特許文献９】
バイオオーガニックアンドメディシナルケミストリー（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）、第１０巻、１４１７頁（２００２年）
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ＣＸＣＲ４拮抗作用を有する化合物を用いた新規なエイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、癌ならびに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療手段の提供を目的とする。また、本発明はエイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、癌ならびに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療活性を有する新規化合物、特に共通の構造を有する種々のオリゴペプチドを提供する。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、ＣＸＣＲ４拮抗作用を有し、低分子で生体内で安定な、エイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、転移を含む癌ならびに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療に対する有効性が期待される化合物を見出し、さらに研究を行った結果、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
（１）式Ｉ：
シクロ−（−Ａ１−Ｂ１−Ｂ２−Ａ２−Ｃ−）（Ｉ）：（配列番号１）
［式中、Ａ１及びＡ２は、独立して、側鎖に２０個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸、またはアラニンを表し；
Ｂ１及びＢ２は、独立して、アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、オルニチン、これらの誘導体、またはアスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１、６−ジカルボン酸、これらの側鎖アミド誘導体、またはアラニンを表し；
Ｃは、グリシン、アラニン、サルコシン、１−アミノシクロペンチル−１−カルボン酸、１−アミノシクロヘキシル−１−カルボン酸、β−アラニン、４−アミノ酪酸、５−アミノペンタン酸、プロリン、又はピペコリン酸を表し；
それぞれのアミノ酸残基は、アルファ−アミノ官能基が、１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基又はベンジル基で置換されていてもよく；
それぞれのアミノ酸残基はＤ体であってもＬ体であってもよい］で示される環状ペプチド、又はその生理学的に許容される塩。
（２）式ＩＩ〜ＶＩＩ：
シクロ−（−ＬＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）（ＩＩ）
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）（ＩＩＩ）
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）（ＩＶ）
シクロ−（−ＬＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）（Ｖ）：（配列番号２）
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）（ＶＩ）
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）（ＶＩＩ）
［式中、Ａ１及びＡ２は、独立して、側鎖に２０個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸、またはアラニンを表し；
Ｂ１及びＢ２は、独立して、アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、もしくはオルニチン、又はこれらの誘導体、またはアスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１、６−ジカルボン酸、これらの側鎖アミド誘導体、またはアラニンを表し；
Ｃは、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、サルコシン、１−アミノシクロペンチル−１−カルボン酸、１−アミノシクロヘキシル−１−カルボン酸、β−アラニン、４−アミノ酪酸、５−アミノペンタン酸、プロリン、又はピペコリン酸を表し；
それぞれのアミノ酸残基は、アルファ−アミノ官能基が、１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基又はベンジル基で置換されていてもよく；
ＬはＬ体を表し、ＤはＤ体を表す］で示される環状ペプチド、又はその生理学的に許容される塩。
（３）式ＶＩＩＩ−ＸＩＩＩ：
シクロ−（−ＬＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）ＶＩＩＩ
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）ＩＸ
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）Ｘ
シクロ−（−ＬＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）ＸＩ：（配列番号３）
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）ＸＩＩ
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）ＸＩＩＩ
［式中、Ａ１はチロシン、ヒドロキシフェニルグリシン、アラニン残基を表し；
Ａ２は、フェニルアラニン、トリプトファン、３−（２−ナフチル）アラニン、３−（１−ナフチル）アラニン、３−（２−ベンゾチエニル）アラニン、アラニン残基を表し、
Ｂ１およびＢ２は、アルギニン、ホモアルギニン、グルタミン酸、アラニン残基を表し、
Ｃは、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、β−アラニン、Ｌ−ピペコリン酸、サルコシン残基を表し；
ＬはＬ−体を表し；
ＤはＤ−体を表す］で示される環状ペプチド、およびそれらの生理学的に許容される塩。
（４）以下の配列１〜６のいずれかで表される環状ペプチドまたはその塩：
（配列１）シクロ−（−ＬＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列４）シクロ−（−ＬＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
：（配列番号４）
（配列５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列７）シクロ−（−ＤＡｌａ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列８）シクロ−（−ＤＡｌａ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列９）シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１０）シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１１）シクロ−（−ＤＨｐｇ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１２）シクロ−（−ＤＨｐｇ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１７）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１８）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＧｌｕ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１９）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２０）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２１）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＡｌａ−Ｇｌｙ−）
（配列２２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２７）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列２８）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列２９）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列３０）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３１）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｐｉｃ−）
（配列３４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
（配列３５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
［式中、ＬＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＤＴｙｒはＤ−チロシン残基を、ＬＡｒｇはＬ−アルギニン残基を、ＤＡｒｇはＤ−アルギニン残基を、ＬＮａｌはＬ−３−（２−ナフチル）アラニン残基を、ＤＮａｌはＤ−３−（２−ナフチル）アラニン残基を、Ｇｌｙはグリシン残基を、ＬＡｌａはＬ−アラニン残基を、ＤＡｌａはＤ−アラニン残基を、β−Ａｌａはβ−アラニン残基を、ＬＭｅＡｒｇはＬ−Ｎ−メチルアルギニン残基を、ＤＭｅＡｒｇはＤ−Ｎ−メチルアルギニン残基を、ＬＧｌｕはＬ−グルタミン酸残基を、ＤＨｐｇはＤ−４−ヒドロキシフェニルグリシン酸残基を、ＬＭｅＮａｌはＬ−Ｎ−メチル−２−ナフチルアラニン残基を、Ｐｉｃはピペコリン酸残基を、Ｓａｒはサルコシン残基を、ＤＭｅＴｙｒはＤ−Ｎ−メチルチロシン残基をそれぞれ示す］。
（５）（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物を含有することを特徴とする医薬組成物。
（６）ＣＸＣＲ４拮抗剤が予防又は治療に有効な疾患に用いられる（５）に記載の医薬組成物。
【００１４】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本明細書に記載されるペプチドは、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。
本明細書において、アミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎｏｎＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅによる略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体が存在する場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。
【００１５】
Ｇｌｙ：グリシン
Ａｌａ：アラニン
Ａｒｇ：アルギニン
Ｔｙｒ：チロシン
Ｎａｌ：３−（２−ナフチル）アラニン
Ｇｌｕ：グルタミン酸
Ｈｐｇ：ヒドロキシフェニルグリシン酸
Ｐｉｃ：ピペコリン酸
Ｓａｒ：サルコシン
【００１６】
また、本明細書中で繁用される置換基、保護基および試薬を下記の記号で表記する。
Ｂｏｃ：ｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｂｒ−Ｚ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル
Ｂｚｌ：ベンジル
Ｃｌ_２−Ｂｚｌ：２，６−ジクロロベンジル
ＤＮＰ：２，４−ジニトロフェニル
Ｆｍｏｃ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール
ＨＯＯＢｔ：３−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベンズトリアゾール
Ｍｅ：メチル
Ｐｂｆ：２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル
ｔ−Ｂｕ：ターシャリーブチル
Ｔｒｔ：トリチル
Ｚ：ベンジルオキシカルボニル
【００１７】
本発明は、ＣＸＣＲ４拮抗作用を有する化合物を提供する。また、本発明は、同化合物を含有する医薬組成物、例えばエイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、癌ならびに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療剤を提供する。
【００１８】
本発明のＣＸＣＲ４拮抗作用を有する化合物は、具体的には下記式Ｉで表される環状ペプチド又はその生理学的に許容される塩（以下、「本発明のペプチド」又は「本発明の環状ペプチド」と総称する場合もある）である。
シクロ−（−Ａ１−Ｂ１−Ｂ２−Ａ２−Ｃ−）（Ｉ）：（配列番号１）
［式中、Ａ１及びＡ２は、独立して、側鎖に２０個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸、またはアラニンを表し；
Ｂ１及びＢ２は、独立して、アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、オルニチン、これらの誘導体、またはアスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１、６−ジカルボン酸、これらの側鎖アミド誘導体、またはアラニンを表し；
Ｃは、グリシン、アラニン、サルコシン、１−アミノシクロペンチル−１−カルボン酸、１−アミノシクロヘキシル−１−カルボン酸、β−アラニン、４−アミノ酪酸、５−アミノペンタン酸、プロリン、又はピペコリン酸を表し；
それぞれのアミノ酸残基は、アルファ−アミノ官能基が、１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基又はベンジル基で置換されていてもよく；
それぞれのアミノ酸残基はＤ体であってもＬ体であってもよい］。
【００１９】
上記式Ｉで示されるＡ１は、側鎖に２０個以下、好ましくは１４個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸残基（例えば、チロシン、ヒドロキシフェニルグリシン、フェニルアラニン、トリプトファン、３−（２−ナフチル）アラニン）、またはアラニン（それぞれＬ体であってもＤ体であってもよい）を表し、好ましくは、チロシン、ヒドロキシフェニルグリシン、アラニンを表す。
【００２０】
上記式Ｉで示されるＡ２は、側鎖に２０個以下、好ましくは１４個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸残基（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、３−（２−ナフチル）アラニン）、またはアラニン（それぞれＬ体であってもＤ体であってもよい）を表し、好ましくは、フェニルアラニン、トリプトファン、３−（２−ナフチル）アラニン、アラニンを表す。前記Ａ１及びＡ２は、それぞれ同じアミノ酸残基であってもよく、異なるアミノ酸残基であってもよい。
【００２１】
上記式Ｉで示されるＢ１およびＢ２は、独立して、アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、オルニチン残基、これらの誘導体、またはアスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１、６−ジカルボン酸、これらの側鎖アミド誘導体、またはアラニン（それぞれＬ体であってもＤ体であってもよい）を表し、好ましくは、アルギニン、ホモアルギニン、グルタミン酸、アラニン残基を表す。「誘導体」としては、好ましくは前記アミノ酸残基の側鎖が修飾されたものが挙げられる。アミノ酸残基の側鎖が修飾されたものとしては、例えば、アルキル基、たとえば、Ｎ−メチル基、Ｎ，Ｎ−ジメチル基、エチル基、イソプロピル基；ホルミル基；アシル基、例えば、アセチル基、プロピオニル基；カルバモイル基、例えば、メチルオキシカルボニル基、イソブチルオキシカルボニル基；グアニジノ基、例えば、グアニジノ基、テトラメチルグアニジノ基；アミジノ基などで修飾されているもの等が挙げられるが、これらに限定されない。前記側鎖アミド誘導体としては、グルタミン、アスパラギン等が挙げられる。前記Ｂ１及びＢ２は、それぞれ同じアミノ酸残基であってもよく、異なるアミノ酸残基であってもよい。
【００２２】
Ａ１、Ａ２、Ｂ１、Ｂ２、及びＣの各アミノ酸残基は、各々のアルファ−アミノ官能基が１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基、好ましくは１〜７個の炭素原子を有するアルキル基、又はベンジル基で置換されていてもよい。
【００２３】
前記式Ｉにおいて、各々のアミノ酸残基は、ペプチド結合によって連結されている。
【００２４】
本発明のペプチドの塩としては、酸または塩基との生理学的に許容される塩が挙げられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸）との塩などが挙げられる。
【００２５】
本発明のペプチドの具体例として、下記式ＩＩ−ＶＩＩ
シクロ−（−ＬＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）ＩＩ
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）ＩＩＩ
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）ＩＶ
シクロ−（−ＬＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）Ｖ：（配列番号２）
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）ＶＩ
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）ＶＩＩ
［式中、Ａ１及びＡ２は、独立して、側鎖に２０個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸、またはアラニンを表し；
Ｂ１及びＢ２は、独立して、アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、オルニチン、これらの誘導体、またはアスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１、６−ジカルボン酸、これらの側鎖アミド誘導体、またはアラニンを表し；
Ｃは、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、サルコシン、１−アミノシクロペンチル−１−カルボン酸、１−アミノシクロヘキシル−１−カルボン酸、β−アラニン、４−アミノ酪酸、５−アミノペンタン酸、プロリン、又はピペコリン酸を表し；
それぞれのアミノ酸残基は、アルファ−アミノ官能基が、１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基又はベンジル基で置換されていてもよく；
ＬはＬ体を表し、ＤはＤ体を表す］で示される環状ペプチド、およびそれらの生理学的に許容される塩が挙げられる。
【００２６】
上記式ＩＩ−ＶＩＩ中のＡ１、Ａ２、Ｂ１、及びＢ２の意味及びそれぞれの好ましい態様は、前記と同様である。すなわち、これらのペプチドは、前記式Ｉで表されるペプチドにおいて、構成するアミノ酸残基を特定の光学異性体に限定したものである。
【００２７】
本発明の新規ペプチドとして、好ましくは以下の配列１〜６のアミノ酸配列を有する環状ペプチドが例示される。
（配列１）シクロ−（−ＬＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列４）シクロ−（−ＬＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
：（配列番号４）
（配列５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列７）シクロ−（−ＤＡｌａ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列８）シクロ−（−ＤＡｌａ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列９）シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１０）シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１１）シクロ−（−ＤＨｐｇ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１２）シクロ−（−ＤＨｐｇ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１７）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１８）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＧｌｕ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１９）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２０）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２１）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＡｌａ−Ｇｌｙ−）
（配列２２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２７）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列２８）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列２９）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列３０）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３１）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｐｉｃ−）
（配列３４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
（配列３５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
【００２８】
配列１〜３５に示されるアミノ酸配列を有する環状ペプチドをはじめとする本発明の環状ペプチドは、それ自体公知のペプチドの合成法に従って製造することができる。ペプチドの合成法としては、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによっても良い。すなわち、ペプチドを構成し得る部分ペプチド又はアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより、目的の環状ペプチドを製造することができる。公知の縮合方法や保護基の脱離としては、例えば、以下の（ｉ）〜（ｉｉ）に記載された方法が挙げられる。
【００２９】
（ｉ）Ｍ．ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＭ．Ａ．Ｏｎｄｅｔｔｉ、ペプチドシンセシス（ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ）、ＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９６６年）
（ｉｉ）ＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＬｕｅｂｋｅ、ザペプチド（ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅ）、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ（１９６５年）
（ｉｉｉ）泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、丸善（１９７５年）
（ｉｖ）矢島治明および榊原俊平、生化学実験講座１、蛋白質の化学ＩＶ、２０５、（１９７７年）
（ｖ）矢島治明監修、続医薬品の開発第１４巻ペプチド合成広川書店
【００３０】
具体的なペプチド合成法として、例えば、以下の方法が挙げられる。
通常、市販のポリペプチド合成用樹脂を用いることができる。そのような樹脂としては、例えば、２−クロロトリチル樹脂などを挙げることができる。このような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ酸を、目的とするポリペプチドの配列通りに、それ自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合させる。反応の最後に樹脂からポリペプチドを切り出し、さらに高希釈溶液中で分子内ペプチド結合形成反応を実施し、最後に各種保護基を除去し、目的の環状ペプチドを取得する。上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、ポリペプチド合成に使用できる各種活性化試薬を用いることができるが、特に、カルボジイミド類がよい。カルボジイミド類としては、例えば、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロリル）カルボジイミドなどが用いられる。これらによる活性化には、ラセミ化抑制添加剤（例えば、ＨＯＢｔ、ＨＯＯＢｔ、ＨＯＮＢ）とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するか、または、対称酸無水物またはＨＯＢｔエステルあるいはＨＯＯＢｔあるいはＨＯＮＢエステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なった後に樹脂に添加することができる。
【００３１】
保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用いられる溶媒としては、ポリペプチド縮合反応に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド類、塩化メチレン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジン，ジオキサン，テトラヒドロフランなどのエーテル類、アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類、酢酸メチル、酢酸エチルなどのエステル類あるいはこれらの適宜の混合物などが用いられる。反応温度はポリペプチド結合形成反応に使用され得ることが知られている範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は通常１．５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行うことなく縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセチルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化することができる。
【００３２】
原料アミノ酸のアミノ基の保護基としては、例えば、Ｚ、Ｂｏｃ、ターシャリーペンチルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、Ｃｌ−Ｚ、Ｂｒ−Ｚ、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノチオイル、Ｆｍｏｃなどが用いられる。カルボキシル基は、例えば、アルキルエステル化（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ターシャリーブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、２−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状もしくは環状アルキルエステル化）、アラルキルエステル化（例えば、ベンジルエステル、４−ニトロベンジルエステル、４−メトキシベンジルエステル、４−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシルエステル化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド化、ターシャリーブトキシカルボニルヒドラジド化、トリチルヒドラジド化などによって保護することができる。セリンの水酸基は、例えば、エステル化またはエーテル化によって保護することができる。このエステル化に適する基としては、例えば、アセチル基などの低級アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基などの炭酸から誘導される基などが用いられる。また、エーテル化に適する基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基などである。チロシンのフェノール性水酸基の保護基としては、例えば、ベンジル、Ｃｌ_２−Ｂｚｌ、２−ニトロベンジル、Ｂｒ−Ｚ、ターシャリーブチルなどが用いられる。ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、例えば、Ｔｏｓ、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、ＤＮＰ、ベンジルオキシメチル、Ｂｏｍ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｆｍｏｃなどが用いられる。
【００３３】
原料アミノ酸のカルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エステル［アルコール（例えば、ペンタクロロフェノール、２，４，５−トリメチルベンゼンスルホニルトリクロロフェノール、２，４−ジニトロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノール、ＨＯＮＢ、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、ＨＯＢｔ）とのエステル］などが用いられる。原料アミノ酸のアミノ基の活性化されたものとしては、例えば、対応するリン酸アミドが用いられる。
【００３４】
保護基の除去（脱離）方法としては、例えば、Ｐｄ−黒あるいはＰｄ−炭素などの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジンなどによる塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによる還元なども用いられる。上記酸処理による脱離反応は、一般に約−２０℃〜４０℃の温度で行なわれるが、酸処理においては、例えば、アニソール、フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、パラクレゾール、ジメチルスルフィド、１，４−ブタンジチオール、１，２−エタンジチオールなどのようなカチオン捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンのイミダゾール保護基として用いられる２，４−ジニトロフェニル基はチオフェノール処理により除去され、トリプトファンのインドール保護基として用いられるホルミル基は上記の１，２−エタンジチオール、１，４−ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニアなどによるアルカリ処理によっても除去される。
【００３５】
原料の反応に関与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段から適宜選択しうる。
【００３６】
環状ペプチドを得る別の方法としては、例えば、まず、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基をアルコール類と縮合しアミノ酸エステルとして保護した後、アミノ基側にペプチド鎖を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプチド鎖のＮ末端のα−アミノ基およびカルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基の保護基を除いたポリペプチドを製造し、このポリペプチドに上記したような高希釈溶液中で分子内ペプチド結合形成反応を実施する。縮合反応の詳細については上記と同様である。縮合により得られた保護ポリペプチドを精製した後、上記方法によりすべての保護基を除去し、所望の粗環状ペプチドを得ることができる。この粗環状ペプチドは既知の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥することで所望の環状ポリペプチド得ることができる。
【００３７】
反応後は、通常の精製法、たとえば、溶媒抽出・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー・再結晶などを組み合わせて本発明のペプチドを精製単離することができる。上記方法で得られるペプチドが遊離体である場合は、公知の方法によって適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法によって遊離体に変換することができる。
【００３８】
本発明の環状ペプチドは、ＣＸＣＲ４とその生理的リガンドであるＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１との結合を拮抗的に阻害する作用を有している。また、後述するように、抗ＨＩＶ活性を有することが実験的に確認されている。したがって、ＣＸＣＲ４拮抗剤が治療に有効な疾患に対する治療又は予防のための医薬組成物の有効成分として使用することができる。前記疾患としては、エイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、ＣＸＣＲ４を発現している癌種、例えば、口腔癌、咽頭癌、口唇癌、舌癌、歯肉癌、鼻咽頭癌、食道癌、胃癌、小腸癌、結腸癌を含む大腸癌、肝臓癌、胆のう癌、膵臓癌、鼻腔癌、肺癌、骨肉腫、軟部組織癌、皮膚癌、黒色腫、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、陰茎癌、膀胱癌、腎臓癌、脳腫瘍、甲状腺癌、リンパ腫、及び慢性関節リューマチ等が挙げられる。
【００３９】
本発明の環状ペプチドを医薬または動物薬として使用する場合は、常套手段に従って医薬組成物の調製を実施すればよい。例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、本発明の環状ペプチドを生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
【００４０】
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えばゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施にしたがって処方することができる。
【００４１】
注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例えばポリソルベート８０（商標）、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。注射用の油性液としてはゴマ油、大豆油などがあげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに無菌的に充填される。
【００４２】
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えばヒトや哺乳動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サル、マントヒヒ、チンパンジーなど）に対して投与することができる。
本発明の環状ペプチドの投与量は、適応症、症状などにより差異はあるが、経口投与する場合、体重６０ｋｇに対して一回につき通常約０．１から１０００ｍｇ、好ましくは約１．０から５００ｍｇ、より好ましくは約１．０から２００ｍｇである。非経口的に投与する場合は、体重６０ｋｇに対してその一回の投与量は投与対象、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば注射剤の形では一回につき通常約０．０１から３００ｍｇ程度、好ましくは約０．１から２００ｍｇ程度、より好ましくは約０．１から１００ｍｇ程度を静脈注射により投与すればよい。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００４３】
本発明の環状ペプチドは、他の薬物と併用して投与してもよい。本発明のペプチドと併用薬物との併用に際しては、本発明のペプチドと併用薬物の投与時期は限定されず、本発明の環状ペプチドと併用薬物とを、投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。併用薬物の投与量は、臨床上用いられている投与量に準ずればよく、投与対象、投与ルート、疾患、組み合わせ等により適宜選択することができる。
【００４４】
本発明の環状ペプチドと併用薬物との投与形態は、特に限定されず、本発明のポリペプチド又はその塩と併用薬物とが、同時又は時間差をおいて組み合わされていればよい。このような投与形態としては、例えば、（１）本発明の環状ペプチドと併用薬物とを同時に製剤化して得られる単一の製剤の投与、（２）本発明の環状ペプチドと併用薬物とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での同時投与、（３）本発明の環状ペプチドと併用薬物とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与、（４）本発明の環状ペプチドと併用薬物とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での同時投与、（５）本発明の環状ペプチドと併用薬物とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与（例えば、本発明の環状ペプチド→併用薬物の順序での投与、あるいは逆の順序での投与）などが挙げられる。以下、これらの投与形態をまとめて、本発明の併用剤と略記する。
【００４５】
適当な併用薬剤を用いた本発明の併用剤は、毒性が低く、例えば、本発明の環状ペプチド及び／又は上記併用薬物を自体公知の方法に従って、薬理学的に許容される担体と混合して医薬組成物、例えば錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤、（ソフトカプセルを含む）、液剤、注射剤、坐剤、徐放剤等として、経口的又は非経口的（例、局所、直腸、静脈投与等）に安全に投与することができる。注射剤は、静脈内、筋肉内、皮下、臓器内、鼻腔内、皮内、点眼、脳内、直腸内、膣内および腹腔内、腫瘍内部、腫瘍の近位などへの投与あるいは直接病巣に投与することができる。
【００４６】
本発明の併用剤の製造に用いられてもよい薬理学的に許容される担体としては、前記した本発明の医薬組成物に使用されるものと同様のものを使用することができる。
本発明の併用剤における本発明の環状ペプチドと併用薬物との配合比は、投与対象、投与ルート、疾患等により適宜選択することができる。
本発明の併用剤における併用薬物の含有量は、製剤の形態によって相違するが、通常製剤全体に対して約０．０１ないし１００重量％、好ましくは約０．１ないし５０重量％、さらに好ましくは約０．５ないし２０重量％程度である。
本発明の併用剤における担体等の添加剤の含有量は、製剤の形態によって相違するが、通常製剤全体に対して約１ないし９９．９９重量％、好ましくは約１０ないし９０重量％程度である。
【００４７】
【実施例】
以下に実施例を示して、本発明をより具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００４８】
【実施例１】環状ペプチド（配列１）の製造
シクロ−（−ＬＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
＜１＞保護ポリペプチド樹脂の合成
パラニトロフェニルカルボナートワング樹脂に対し、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）中抱水ヒドラジン（１０当量）処理することにより、ヒドラジンリンカーを有するワング樹脂を得た。本樹脂上で、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（５当量）を加え、ＤＭＦ中、ＤＩＰＣＤＩ（ジイソプロピルカルボジイミド）−ＨＯＢｔ法により縮合反応を行った。縮合反応の進行の程度は、Ｋａｉｓｅｒ，Ｅ．ら［アナリティカルバイオケミストリー（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、第３４巻、５９５頁（１９７０年）］のニンヒドリン試験により調べた。反応の完結を確認後、Ｆｍｏｃ基を２０％ピペリジン／ＤＭＦで除去した。
【００４９】
＜２＞各アミノ酸の導入
以下同様にして、順次、ＬＮａｌ、ＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）、ＤＡｒｇ（Ｐｂｆ）、ＬＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）残基を樹脂に導入し、保護基保護化ポリペプチド樹脂を得た。
【００５０】
＜３＞脱保護基および樹脂からの鎖状ペプチドの分離
保護基保護化ポリペプチド樹脂に対してＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）で２５℃、１．５時間反応させた。反応混合物から樹脂を濾別し、ＴＦＡで２回洗浄し、瀘液、洗液を合わせたものを減圧濃縮した。残渣を１Ｎ酢酸に溶解し、蒸留水で希釈した。本水溶液を大量分取型ＨＰＬＣ（コスモジール５Ｃ１８ＡＲ−ＩＩカラム：アセトニトリル−水）により精製し、鎖状保護ペプチドヒドラジドを得た。
【００５１】
＜４＞アジド法による環化および精製
上述の鎖状ペプチドヒドラジドのＤＭＦ溶液に、−２５℃で４ＭＨＣｌのＤＭＦ溶液（３当量）および亜硝酸イソアミル（６当量）を加え、−２０℃、３０分反応させた。あらかじめ冷却したＤＭＦで希釈後、ＤＩＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）（５０当量）にて塩基性にし、−２０℃、２４時間反応させた。反応混合物を減圧濃縮後、１Ｎ酢酸に溶解し、蒸留水で希釈した。本水溶液を大量分取型ＨＰＬＣ（コスモジール５Ｃ１８ＡＲ−ＩＩカラム：アセトニトリル−水）により精製し、単一ピークの環状ペプチドを得、凍結乾燥した。純度は、ＨＰＬＣにより確認した。
【００５２】
【実施例２】環状ペプチド（配列２）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
＜１＞保護ポリペプチド樹脂の合成
最初のグリシンを導入した２−クロロトリチル樹脂Ｈ−Ｇｌｙ−２ＣｌＴｒｔ樹脂に、Ｆｍｏｃ−ＤＮａｌ−ＯＨ（５当量）を加え、ＤＭＦ中、ＤＩＰＣＤＩ−ＨＯＢｔ法により縮合反応を行った。縮合反応の進行の程度は、Ｋａｉｓｅｒ，Ｅ．ら［アナリティカルバイオケミストリー（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、第３４巻、５９５頁（１９７０年）］のニンヒドリン試験により調べた。反応の完結を確認後、Ｆｍｏｃ基を２０％ピペリジン／ＤＭＦで除去した。
【００５３】
＜２＞各アミノ酸の導入
以下同様にして、順次、ＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）、ＤＡｒｇ（Ｐｂｆ）、ＤＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）残基を樹脂に導入し保護基保護化ポリペプチド樹脂を得た。
【００５４】
＜３＞樹脂からの鎖状ペプチドの分離
保護基保護化ポリペプチド樹脂に対して酢酸／ＴＦＥ（トリフルオロエタノール）／ＤＣＭ（ジクロロメタン）（１：１：３）で２５℃、２時間反応させた。反応混合物から樹脂を濾別し、酢酸／ＴＦＥ／ＤＣＭ（１：１：３）で２回洗浄し、瀘液、洗液を合わせたものを減圧濃縮した。
【００５５】
＜４＞ＤＰＰＡ（ジフェニルリン酸アジド）−ＮａＨＣＯ_３による環化
上述の鎖状ペプチドおよびＮａＨＣＯ_３（６．８当量）の高希釈ＤＭＦ溶液に、−４０℃でＤＰＰＡ（４．１当量）を加え、２５℃、３６時間反応させた。反応混合物からＮａＨＣＯ_３を濾別し、ＤＭＦで２回洗浄し、瀘液、洗液を合わせたものを減圧濃縮した。残さをＣＨＣｌ_３−メタノール（９：１）に溶解し、塩基性アルミナにより固相抽出処理を行うことにより無機塩を除去後、減圧濃縮し保護基保護化環状ペプチドを得た。
【００５６】
＜５＞脱保護基および精製
保護基保護化環状ペプチドに対して、９５％ＴＦＡ水溶液で２５℃、２時間反応させた。減圧濃縮後、１Ｎ酢酸に溶解し、蒸留水で希釈した。本水溶液を大量分取型ＨＰＬＣ（コスモジール５Ｃ１８ＡＲ−ＩＩカラム：アセトニトリル−水）により精製し、単一ピークの環状ペプチドを得、凍結乾燥した。純度は、ＨＰＬＣにより確認した。
【００５７】
【実施例３】環状ペプチド（配列３）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
製造例２と同様の方法により導入するアミノ酸を変更することで、以上に示した環状ペプチド（配列３）を製造することができる。
【００５８】
【実施例４】環状ペプチド（配列５）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
＜１＞保護ポリペプチド樹脂の合成
パラニトロフェニルカルボナートワング樹脂に対し、ＤＭＦ中抱水ヒドラジン（１０当量）処理することにより、ヒドラジンリンカーを有するワング樹脂を得た。本樹脂上で、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（５当量）を加えＤＭＦ中、ＤＩＰＣＤＩ−ＨＯＢｔ法により縮合反応を行った。縮合反応の進行の程度は、Ｋａｉｓｅｒ，Ｅ．ら［アナリティカルバイオケミストリー（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、第３４巻、５９５頁（１９７０年）］のニンヒドリン試験により調べた。反応の完結を確認後、Ｆｍｏｃ基を２０％ピペリジン／ＤＭＦで除去した。
【００５９】
＜２＞各アミノ酸の導入
以下同様にして、順次、ＬＮａｌ、ＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）、ＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）、ＤＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）残基を樹脂に導入し、保護基保護化ポリペプチド樹脂を得た。
【００６０】
＜３＞樹脂からの鎖状ペプチドの分離
保護基保護化ポリペプチド樹脂に対してＴＦＡ／ＤＣＭ（１：９）で２５℃、１．５時間反応させた。反応混合物から樹脂を濾別し、ＴＦＡ／ＤＣＭ（１：９）で２回洗浄し、瀘液、洗液を合わせたものを減圧濃縮した。
【００６１】
＜４＞アジド法による環化
上述の鎖状ペプチドのＤＭＦ溶液に、−２５℃で４ＭＨＣｌのＤＭＦ溶液（３当量）および亜硝酸イソアミル（６当量）を加え、−１０℃、２０分反応させた。あらかじめ冷却したＤＭＦで希釈後、ＤＩＥＡ（５０当量）にて塩基性にし、−２０℃、２４時間反応させた。反応混合物を減圧濃縮し、保護基保護化環状ペプチドを得た。
【００６２】
＜５＞脱保護基および精製
保護基保護化環状ペプチドに対して、９５％ＴＦＡ水溶液で２５℃、２時間反応させた。減圧濃縮後、１Ｎ酢酸に溶解し、蒸留水で希釈した。本水溶液を大量分取型ＨＰＬＣ（コスモジール５Ｃ１８ＡＲ−ＩＩカラム：アセトニトリル−水）により精製し、単一ピークの環状ペプチドを得、凍結乾燥した。純度は、ＨＰＬＣにより確認した。
【００６３】
【実施例５】環状ペプチド（配列９，１０）の製造
シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
Ｌ−２−ナフチルアラニンを導入した２−クロロトリチル樹脂Ｈ−ＬＮａｌ−２ＣｌＴｒｔ樹脂に、Ｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ（Ｌ−Ａｒｇ）、およびＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）を順次、縮合した。Ｆｍｏｃ基を除去した後、Ｎ−メチル基の導入とＧｌｙの縮合のために以下の操作を行った。ＤＣＭ中で２５℃、２時間、塩化ｏ−ニトロベンゼンスルホニル（３当量）、コリジン（６当量）と反応させた。樹脂を洗浄後、ＴＨＦ中で２５℃、２時間、ＭｅＯＨ（５当量）、トリフェニルホスフィン（５当量）、アゾジカルボン酸ジエチルエステル（５当量）と反応させた。続いて、樹脂を洗浄した後、ＤＭＦ中で２５℃、１．５時間、１，８−ジアザビシクロ−「５，４，０」−７−ウンデセン（５当量）、メルカプトエタノール（１０当量）と反応させた。以上の処理後の樹脂に対して、Ｇｌｙを、ヘキサフルオロリン酸ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム塩（４．９当量）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾ−ル（５当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１０当量）で２５℃、１．５時間反応させることにより導入した。環化、精製等は実施例２と同様にして行った。
【００６４】
【実施例６】環状ペプチド（配列１６，１７）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
実施例２に従って合成したが、Ｎ−メチル基の導入と続くＤＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）の縮合は実施例５と同様にして行った。
【００６５】
【実施例７】環状ペプチド（配列１８）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＧｌｕ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
実施例４と同様にして合成した。
【００６６】
【実施例８】環状ペプチド（配列１９，２０）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
実施例２に従って合成したが、Ｎ−メチル基の導入と続くＤＡｒｇ（Ｐｂｆ）もしくはＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）の縮合は実施例５と同様にして行った。
【００６７】
【実施例９】環状ペプチド（配列２２，２３）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
実施例２に従って合成したが、Ｎ−メチル基の導入と続くＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）の縮合は実施例５と同様にして行った。
【００６８】
【実施例１０】環状ペプチド（配列３３）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｐｉｃ−）
実施例２に従って合成したが、最初にＤ−アルギニンを導入した２−クロロトリチル樹脂Ｈ−ＤＡｒｇ（Ｐｂｆ）−２ＣｌＴｒｔ樹脂を用い、順次アミノ酸を縮合させた後、最後にＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）を縮合した。
【００６９】
【実施例１１】環状ペプチド（配列３４，３５）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
実施例２に従って合成したが、最初にＤ−チロシンを導入した２−クロロトリチル樹脂Ｈ−ＤＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−２ＣｌＴｒｔ樹脂を用い、順次アミノ酸を縮合させた後、最後にＤＡｒｇもしくはＬＡｒｇを縮合した。また、Ｎ−メチル基の導入と続くＬＮａｌの縮合は実施例５に従って行った。
【００７０】
その他の配列は、実施例２と同様にして合成した。
【００７１】
【試験例１】［^１２５Ｉ］−ＳＤＦ−１のＣＸＣＲ４受容体への結合に対する、本発明の環状ペプチドの阻害活性
恒常的にＣＸＣＲ４受容体を発現するＣＨＯ細胞（チャイニーズ・ハムスター卵巣細胞：Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３１３，１１８１−１１９３（２００１）に記載の方法に準じて調製した。）を培養した９６穴マイクロタイタープレートの各ウェルに、それぞれ０．０１、０．１、１、１０μＭの環状ペプチド存在下、１５０ｐＭの［^１２５Ｉ］−ＳＤＦ−１（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅから入手）を加え、４℃、１時間結合反応を行った。反応後、反応溶液を遠心分離し、非結合の［^１２５Ｉ］−ＳＤＦ−１を除去し、各ウェルの放射活性を測定した。被検化合物を添加しない場合の放射活性を１００％として、各被検化合物のＣＸＣＲ４とＳＤＦ−１との結合を阻害する活性を求めた。結果を以下の表１に示す。尚、表１中、「Ｔ１４０」は、アミノ酸１４個のＣＸＣＲ４拮抗剤［バイオケミカルバイオフィジカルリサーチコミュニケーション（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．）第２５３巻、８７７−８８２頁（１９９８年）］である。
【００７２】
【表１】

【００７３】
表１の結果から、本化合物は強いＣＸＣＲ４拮抗活性を有することが示された。
【００７４】
【試験例２】ＣＸＣＲ４受容体を介するＨＩＶ−１ＩＩＩＢの感染に対する、本発明の環状ペプチドの抗ウイルス活性
９６穴マイクロタイタープレート上、それぞれ５００μｇ／ｍＬから８段階にわたって５倍希釈した環状ペプチド存在下、ＨＩＶ−１ＩＩＩＢ感染ＭＴ−４細胞（Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０，３０９−３２１（１９８８）に記載の方法に準じて調製した）（２５０００／ｗｅｌｌ、ＭＯＩ：０．０１）を、感染直後に加え、３７℃、５日間培養した。ＭＴＴ（３’−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）法により生存細胞数を測定し、抗ウイルス活性を、ＨＩＶ感染による細胞障害を５０％抑制する濃度とした。結果を以下の表２に示す。
【００７５】
【表２】

【００７６】
表２の結果から、本発明の環状ペプチドは強い抗ＨＩＶ活性を有することが示された。
【００７７】
【試験例３】本発明の環状ペプチドと血清および肝ホモジネート中での安定性
マウス血清１００μＬまたはラット肝ホモジネート（２０％リン酸緩衝液）１００μＬと、本発明の環状ペプチド（配列５）１００ｎｍｏｌ（１００μＬ）を混合し、３７℃でインキュベートして経時的サンプリングを行い、残存する本発明の環状ペプチドの量をＨＰＬＣで定量した。
【００７８】
【表３】

【００７９】
表３の結果から、本化合物は血清および肝臓ホモジネート中で非常に安定であることが示された。
【００８０】
【発明の効果】
本発明のペプチドは、ＣＸＣＲ４とＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１との結合を阻害することから、エイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病の予防及び／又は治療薬、およびＣＸＣＲ４を発現している癌種予防及び／又は治療薬、並びに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療薬として有用である。
【００８１】
【配列表】

[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel cyclic peptide and a pharmaceutical composition containing the peptide. The peptide is considered to be useful in the pharmaceutical and pharmaceutical fields as a prophylactic and / or therapeutic agent for AIDS, chronic lymphocytic leukemia, cancer and rheumatoid arthritis.
[0002]
[Prior art]
Many hormones and neurotransmitters regulate biological functions through specific receptors present on cell membranes. Many of these receptors perform intracellular signal transduction through activation of a conjugated guanine nucleotide-binding protein (hereinafter sometimes abbreviated as a G protein). Further, since these receptors have a common structure having seven cell transmembrane regions, they are collectively referred to as G protein-coupled receptors or seven transmembrane receptors (7TMR).
[0003]
As one of such G protein-coupled receptor proteins, a human receptor protein encoded by the CXCR4 gene [Non-Patent Document 1] is known.
Further, as a physiologically active peptide that functions as a ligand for CXCR4, CXCL12 / SDF-1 (stromal-cell derived factor-1) [Non-Patent Document 2] is known.
[0004]
This ligand is essential for hematopoiesis and developmental phenomena such as fetal survival, generation of B cells (B lymphocytes) in primary lymphoid tissue, establishment or generation of myeloid blood cells, formation of ventricular septum, nutrition of organs It has become clear one after another that it is essential for the formation of defects and neurogenesis. Furthermore, it has recently been shown that blood cells are used as target cells in hematopoiesis and are essential for the reconstitution of lymphoid and myeloid hematopoiesis in vivo [Non-Patent Document 3].
[0005]
The pathophysiology of HIV infection is extremely complex and depends on the effects of various viral, host, and environmental factors. It has been shown that in addition to the CD4 molecule, several chemokine receptors act as co-receptors for various types of HIV when HIV enters cells. It has been found that an antagonist to CXCR4, one of which is an anti-HIV factor, affects HIV infection and the progress of AIDS [Non-patent Document 4].
[0006]
Cancer metastasis is an important factor in determining a patient's life expectancy. The expression of CXCR4 is enhanced in breast cancer and the like, and the expression of its ligand CXCL12 / SDF-1 is enhanced in organs to which metastases (lymph node, lung, liver and bone) [Non-patent Document 5 ], Suggesting that the CXCR4-CXCL12 / SDF-1 interaction is one of the important factors defining cancer metastasis.
[0007]
In rheumatoid arthritis, infiltration of CD4-positive T cells into joint fluid affects the progression of the condition. CXCR4 gene expression is enhanced in CD4 positive memory T cells in the joint cavity fluid of rheumatoid arthritis patients, and CXCL12 / SDF-1 gene expression is enhanced in synovial tissue [Non-Patent Document 6] CXCR4- It is suggested that the CXCL12 / SDF-1 interaction is one of the important factors defining rheumatoid arthritis.
It has also been found that a CXCR4 inhibitor inhibits the activation and migration of B cells in chronic lymphocytic B-cell leukemia [Non-Patent Document 7].
[0008]
From the above, a substance that inhibits the CXCR4-CXCL12 / SDF-1 interaction in AIDS, chronic lymphocytic B-cell leukemia, cancer and rheumatoid arthritis is considered to be useful as a prophylactic and / or therapeutic agent. It was conducted. However, anti-CXCL12 or anti-CXCR4 neutralizing antibodies, although having an inhibitory activity on CXCR4, require a high concentration, and require enormous treatment costs, and thus have not been put to practical use.
[0009]
T140 composed of 14 amino acids synthesized using the antibacterial and antiviral active substances tachyplesin and polyphemusin present in the blood of horseshoe crab exhibits a strong CXCR4 inhibitory activity, and an essential residue is arginine. ² , 3- (2-naphthyl) alanine ³ , Tyrosine ⁵ And arginine ¹⁴ [Non-Patent Document 8]. Also, 3- (2-naphthyl) alanine ³ Has been shown to show the same biological activity even when substituted with another aromatic amino acid residue [Non-Patent Document 9]. However, since it is a polymer, it has not been put to practical use because of the risk of allergic side effects and instability in vivo.
[0010]
[Non-patent document 1]
Journal of Biological Chemistry, 273, 4754 (1998)
[Non-patent document 2]
Science, 261: 600-603 (1993)
[Non-Patent Document 3]
Science, vol. 283, p. 845 (1999)
[Non-patent document 4]
Nature Med., Vol. 4, pp. 72-77 (1998).
[Non-Patent Document 5]
Nature, Vol. 410, pp. 50-56 (2001)
[Non-Patent Document 6]
Journal of Immunology, Vol. 165, pp. 6590-98 (2000)
[Non-Patent Document 7]
Summary of IWCCL (International Works on Chronic Lympholytic Leukemia B), March 22-24, 2002, San Diego, USA
[Non-Patent Document 8]
Current Opinion in Investigational Drugs (Curr. Opin. Investig. Drugs), Vol. 2, p. 1198 (2001)
[Non-Patent Document 9]
Bioorganic and Medicinal Chemistry (Bioorg. Med. Chem.), 10, 1417 (2002)
[0011]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a novel means for preventing and / or treating AIDS, chronic lymphocytic B-cell leukemia, cancer, and rheumatoid arthritis using a compound having a CXCR4 antagonistic action. The present invention also provides novel compounds having prophylactic and / or therapeutic activities for AIDS, chronic lymphocytic B-cell leukemia, cancer and rheumatoid arthritis, in particular, various oligopeptides having a common structure.
[0012]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have conducted intensive studies in order to solve the above-mentioned problems. As a result, the present invention has a CXCR4 antagonistic activity, is a low-molecular-weight, stable in vivo, AIDS, chronic lymphocytic B-cell leukemia, cancer including metastasis, and rheumatoid arthritis. The present inventors have found compounds that are expected to be effective for the prevention and / or treatment of, and conducted further studies. As a result, the present invention has been completed.
[0013]
That is, the present invention is as follows.
(1) Formula I:
Cyclo-(-A1-B1-B2-A2-C-) (I): (SEQ ID NO: 1)
[Wherein, A1 and A2 independently represent an aromatic amino acid having an aromatic or heterocyclic ring having 20 or less carbon atoms in a side chain, or alanine;
B1 and B2 are independently arginine, homoarginine, citrulline, 2,4-diaminobutyric acid, 2,3-diaminopropionic acid, lysine, ornithine, derivatives thereof, or aspartic acid, glutamic acid, 2-aminohexane- Represents 1,6-dicarboxylic acids, their side chain amide derivatives, or alanine;
C is glycine, alanine, sarcosine, 1-aminocyclopentyl-1-carboxylic acid, 1-aminocyclohexyl-1-carboxylic acid, β-alanine, 4-aminobutyric acid, 5-aminopentanoic acid, proline, or pipecolic acid. Represent;
Each amino acid residue may be substituted at the alpha-amino function with an alkyl or benzyl group having 1 to 18 carbon atoms;
Each amino acid residue may be D-form or L-form], or a physiologically acceptable salt thereof.
(2) Formulas II to VII:
Cyclo-(-LA1-DB1-LB2-LA2-C-) (II)
Cyclo-(-DA1-DB1-LB2-DA2-C-) (III)
Cyclo-(-DA1-DB1-LB2-LA2-C-) (IV)
Cyclo-(-LA1-LB1-LB2-LA2-C-) (V): (SEQ ID NO: 2)
Cyclo-(-DA1-LB1-LB2-LA2-C-) (VI)
Cyclo-(-DA1-LB1-LB2-DA2-C-) (VII)
[Wherein, A1 and A2 independently represent an aromatic amino acid having an aromatic or heterocyclic ring having 20 or less carbon atoms in a side chain, or alanine;
B1 and B2 independently represent arginine, homoarginine, citrulline, 2,4-diaminobutyric acid, 2,3-diaminopropionic acid, lysine, or ornithine, or a derivative thereof, or aspartic acid, glutamic acid, 2-amino acid; Represents hexane-1,6-dicarboxylic acid, a side chain amide derivative thereof, or alanine;
C is glycine, L-alanine, D-alanine, sarcosine, 1-aminocyclopentyl-1-carboxylic acid, 1-aminocyclohexyl-1-carboxylic acid, β-alanine, 4-aminobutyric acid, 5-aminopentanoic acid, Represents proline or pipecolic acid;
Each amino acid residue may be substituted at the alpha-amino function with an alkyl or benzyl group having 1 to 18 carbon atoms;
L represents L-form and D represents D-form], or a physiologically acceptable salt thereof.
(3) Formula VIII-XIII:
Cyclo-(-LA1-DB1-LB2-LA2-C-) VIII
Cyclo-(-DA1-DB1-LB2-DA2-C-) IX
Cyclo-(-DA1-DB1-LB2-LA2-C-) X
Cyclo-(-LA1-LB1-LB2-LA2-C-) XI: (SEQ ID NO: 3)
Cyclo-(-DA1-LB1-LB2-LA2-C-) XII
Cyclo-(-DA1-LB1-LB2-DA2-C-) XIII
[Wherein A1 represents tyrosine, hydroxyphenylglycine, alanine residue;
A2 represents phenylalanine, tryptophan, 3- (2-naphthyl) alanine, 3- (1-naphthyl) alanine, 3- (2-benzothienyl) alanine, or an alanine residue;
B1 and B2 represent arginine, homoarginine, glutamic acid, alanine residues,
C represents glycine, L-alanine, D-alanine, β-alanine, L-pipecolic acid, sarcosine residue;
L represents L-form;
D represents a D-form], and physiologically acceptable salts thereof.
(4) a cyclic peptide represented by any of the following sequences 1 to 6, or a salt thereof:
(Sequence 1) Cyclo-(-LTyr-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 2) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-Gly-)
(Sequence 3) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 4) Cyclo-(-LTyr-LArg-LArg-LNal-Gly-)
: (SEQ ID NO: 4)
(Sequence 5) Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 6) cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-DNal-Gly-)
(Sequence 7) cyclo-(-DAla-DAArg-LArg-DNal-Gly-)
(Sequence 8) Cyclo-(-DAla-DAArg-LARg-LNal-Gly-)
(Sequence 9) Cyclo-(-DMeTyr-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 10) Cyclo-(-DMeTyr-LArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 11) Cyclo-(-DHpg-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 12) cyclo-(-DHpg-LArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 13) Cyclo-(-DTyr-DAla-LARg-DNal-Gly-)
(Sequence 14) Cyclo-(-DTyr-DAla-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 15) Cyclo-(-DTyr-LALa-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 16) Cyclo-(-DTyr-DMeArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 17) Cyclo-(-DTyr-LMeArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 18) Cyclo-(-DTyr-LArg-LGlu-LNal-Gly-)
(Sequence 19) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LMeArg-LNal-Gly-)
(Sequence 20) Cyclo-(-DTyr-LArg-LMeArg-LNal-Gly-)
(Sequence 21) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LARG-DAla-Gly-)
(Sequence 22) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LMeNal-Gly-)
(Sequence 23) Cyclo-(-DTyr-LARG-LARG-LMeNal-Gly-)
(Sequence 24) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-LAla-)
(Sequence 25) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-LALa-)
(Sequence 26) cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-LALa-)
(Sequence 27) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-DAla-)
(Sequence 28) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-DAla-)
(Sequence 29) Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-DAla-)
(Sequence 30) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-βAla-)
(Sequence 31) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-βAla-)
(Sequence 32) Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-βAla-)
(Sequence 33) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-Pic-)
(Sequence 34) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LARg-LNal-Sar-)
(Sequence 35) Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-Sar-)
Wherein LTyr is an L-tyrosine residue, DTyr is a D-tyrosine residue, LARG is an L-arginine residue, DAArg is a D-arginine residue, and LNal is L-3- (2-naphthyl. ) Alanine residue, DNal a D-3- (2-naphthyl) alanine residue, Gly a glycine residue, LALa a L-alanine residue, DAla a D-alanine residue, β-Ala Represents a β-alanine residue, LMeArg represents an L-N-methylarginine residue, DMMeArg represents a DN-methylarginine residue, LGlu represents an L-glutamic acid residue, and DHpg represents D-4-hydroxyphenylglycine. Acid residue, LMeNal L-N-methyl-2-naphthylalanine residue, Pic a pipecolic acid residue, Sar a sarcosine residue, DMeTyr a DN-methyl Each tyrosine residue is shown].
(5) A pharmaceutical composition comprising the compound according to any one of (1) to (4).
(6) The pharmaceutical composition according to (5), wherein the CXCR4 antagonist is used for a disease effective for prevention or treatment.
[0014]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The peptide described herein has the N-terminus (amino terminus) at the left end and the C-terminus (carboxyl terminus) at the right end according to the convention of peptide labeling.
In the present specification, when an amino acid or the like is represented by an abbreviation, it is based on an abbreviation by IUPAC-IUBCommission on Biochemical Nomenclature or an abbreviation commonly used in the art, and examples thereof are described below. In addition, when an amino acid has an optical isomer, the L-form is indicated unless otherwise specified.
[0015]
Gly: glycine
Ala: Alanine
Arg: Arginine
Tyr: Tyrosine
Nal: 3- (2-naphthyl) alanine
Glu: glutamic acid
Hpg: hydroxyphenylglycinic acid
Pic: Pipecolic acid
Sar: Sarcosine
[0016]
Further, substituents, protecting groups and reagents frequently used in the present specification are represented by the following symbols.
Boc: t-butyloxycarbonyl
Br-Z: 2-bromobenzyloxycarbonyl
Bzl: benzyl
Cl ₂ -Bzl: 2,6-dichlorobenzyl
DNP: 2,4-dinitrophenyl
Fmoc: N-9-fluorenylmethoxycarbonyl
HOBt: 1-hydroxybenztriazole
HOOBt: 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-1,2,3-benztriazole
Me: methyl
Pbf: 2,2,4,6,7-pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulfonyl
t-Bu: tertiary butyl
Trt: Trityl
Z: benzyloxycarbonyl
[0017]
The present invention provides a compound having a CXCR4 antagonistic action. The present invention also provides a pharmaceutical composition containing the compound, for example, an agent for preventing and / or treating AIDS, chronic lymphocytic B-cell leukemia, cancer, and rheumatoid arthritis.
[0018]
The compound having a CXCR4 antagonistic activity of the present invention is specifically a cyclic peptide represented by the following formula I or a physiologically acceptable salt thereof (hereinafter, the “peptide of the present invention” or the “cyclic peptide of the present invention” In some cases).
Cyclo-(-A1-B1-B2-A2-C-) (I): (SEQ ID NO: 1)
[Wherein, A1 and A2 independently represent an aromatic amino acid having an aromatic or heterocyclic ring having 20 or less carbon atoms in a side chain, or alanine;
B1 and B2 are independently arginine, homoarginine, citrulline, 2,4-diaminobutyric acid, 2,3-diaminopropionic acid, lysine, ornithine, derivatives thereof, or aspartic acid, glutamic acid, 2-aminohexane- Represents 1,6-dicarboxylic acids, their side chain amide derivatives, or alanine;
C is glycine, alanine, sarcosine, 1-aminocyclopentyl-1-carboxylic acid, 1-aminocyclohexyl-1-carboxylic acid, β-alanine, 4-aminobutyric acid, 5-aminopentanoic acid, proline, or pipecolic acid. Represent;
Each amino acid residue may be substituted at the alpha-amino function with an alkyl or benzyl group having 1 to 18 carbon atoms;
Each amino acid residue may be D-form or L-form].
[0019]
A1 represented by the above formula I is an aromatic amino acid residue having an aromatic or heterocyclic ring having 20 or less, preferably 14 or less carbon atoms in a side chain (for example, tyrosine, hydroxyphenylglycine, phenylalanine, tryptophan , 3- (2-naphthyl) alanine) or alanine (each of which may be L-form or D-form), preferably tyrosine, hydroxyphenylglycine or alanine.
[0020]
A2 represented by the above formula I is an aromatic amino acid residue having an aromatic ring or heterocyclic ring having 20 or less, preferably 14 or less carbon atoms in a side chain (for example, phenylalanine, tryptophan, 3- (2- Naphthyl) alanine) or alanine (each of which may be L-form or D-form), preferably phenylalanine, tryptophan, 3- (2-naphthyl) alanine, or alanine. A1 and A2 may be the same amino acid residue or different amino acid residues.
[0021]
B1 and B2 represented by the above formula I are independently arginine, homoarginine, citrulline, 2,4-diaminobutyric acid, 2,3-diaminopropionic acid, lysine, ornithine residue, a derivative thereof, or aspartic acid. , Glutamic acid, 2-aminohexane-1,6-dicarboxylic acid, a side chain amide derivative thereof, or alanine (which may be L-form or D-form, respectively), preferably arginine, homoarginine , Glutamic acid and alanine residues. As the “derivative”, those in which the side chain of the amino acid residue is preferably modified are exemplified. Examples of the amino acid residue having a modified side chain include an alkyl group such as an N-methyl group, an N, N-dimethyl group, an ethyl group, an isopropyl group; a formyl group; an acyl group such as an acetyl group; A propionyl group; a carbamoyl group such as a methyloxycarbonyl group, an isobutyloxycarbonyl group; a guanidino group such as a guanidino group, a tetramethylguanidino group; those modified with an amidino group; . Examples of the side chain amide derivative include glutamine and asparagine. B1 and B2 may be the same amino acid residue or different amino acid residues.
[0022]
Each amino acid residue of A1, A2, B1, B2, and C is an alkyl group wherein each alpha-amino functional group has 1 to 18 carbon atoms, preferably an alkyl group having 1 to 7 carbon atoms. Or a benzyl group.
[0023]
In the above formula I, each amino acid residue is connected by a peptide bond.
[0024]
Examples of the salt of the peptide of the present invention include a physiologically acceptable salt with an acid or a base, and a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable. Such salts include, for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, lactic acid, fumaric acid, maleic acid) And succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, hyaluronic acid, and chondroitin sulfate.
[0025]
As specific examples of the peptide of the present invention, the following formulas II-VII
Cyclo-(-LA1-DB1-LB2-LA2-C-) II
Cyclo-(-DA1-DB1-LB2-DA2-C-) III
Cyclo-(-DA1-DB1-LB2-LA2-C-) IV
Cyclo-(-LA1-LB1-LB2-LA2-C-) V: (SEQ ID NO: 2)
Cyclo-(-DA1-LB1-LB2-LA2-C-) VI
Cyclo-(-DA1-LB1-LB2-DA2-C-) VII
[Wherein, A1 and A2 independently represent an aromatic amino acid having an aromatic or heterocyclic ring having 20 or less carbon atoms in a side chain, or alanine;
B1 and B2 are independently arginine, homoarginine, citrulline, 2,4-diaminobutyric acid, 2,3-diaminopropionic acid, lysine, ornithine, derivatives thereof, or aspartic acid, glutamic acid, 2-aminohexane- Represents 1,6-dicarboxylic acids, their side chain amide derivatives, or alanine;
C is glycine, L-alanine, D-alanine, sarcosine, 1-aminocyclopentyl-1-carboxylic acid, 1-aminocyclohexyl-1-carboxylic acid, β-alanine, 4-aminobutyric acid, 5-aminopentanoic acid, Represents proline or pipecolic acid;
Each amino acid residue may be substituted at the alpha-amino function with an alkyl or benzyl group having 1 to 18 carbon atoms;
L represents L-form, D represents D-form], and physiologically acceptable salts thereof.
[0026]
The meanings of A1, A2, B1, and B2 in the above formulas II-VII and their preferred embodiments are the same as described above. That is, in these peptides, the amino acid residues constituting the peptide represented by the formula I are limited to specific optical isomers.
[0027]
As the novel peptide of the present invention, a cyclic peptide preferably having the amino acid sequence of the following sequences 1 to 6 is exemplified.
(Sequence 1) Cyclo-(-LTyr-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 2) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-Gly-)
(Sequence 3) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 4) Cyclo-(-LTyr-LArg-LArg-LNal-Gly-)
: (SEQ ID NO: 4)
(Sequence 5) Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 6) cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-DNal-Gly-)
(Sequence 7) cyclo-(-DAla-DAArg-LArg-DNal-Gly-)
(Sequence 8) Cyclo-(-DAla-DAArg-LARg-LNal-Gly-)
(Sequence 9) Cyclo-(-DMeTyr-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 10) Cyclo-(-DMeTyr-LArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 11) Cyclo-(-DHpg-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 12) cyclo-(-DHpg-LArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 13) Cyclo-(-DTyr-DAla-LARg-DNal-Gly-)
(Sequence 14) Cyclo-(-DTyr-DAla-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 15) Cyclo-(-DTyr-LALa-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 16) Cyclo-(-DTyr-DMeArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 17) Cyclo-(-DTyr-LMeArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 18) Cyclo-(-DTyr-LArg-LGlu-LNal-Gly-)
(Sequence 19) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LMeArg-LNal-Gly-)
(Sequence 20) Cyclo-(-DTyr-LArg-LMeArg-LNal-Gly-)
(Sequence 21) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LARG-DAla-Gly-)
(Sequence 22) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LMeNal-Gly-)
(Sequence 23) Cyclo-(-DTyr-LARG-LARG-LMeNal-Gly-)
(Sequence 24) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-LAla-)
(Sequence 25) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-LALa-)
(Sequence 26) cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-LALa-)
(Sequence 27) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-DAla-)
(Sequence 28) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-DAla-)
(Sequence 29) Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-DAla-)
(Sequence 30) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-βAla-)
(Sequence 31) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-βAla-)
(Sequence 32) Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-βAla-)
(Sequence 33) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-Pic-)
(Sequence 34) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LARg-LNal-Sar-)
(Sequence 35) Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-Sar-)
[0028]
The cyclic peptides of the present invention, including the cyclic peptides having the amino acid sequences shown in SEQ ID NOS: 1 to 35, can be produced according to a peptide synthesis method known per se. As a method for synthesizing a peptide, for example, any of a solid phase synthesis method and a liquid phase synthesis method may be used. That is, the target cyclic peptide can be produced by condensing a partial peptide or amino acid capable of constituting a peptide with the remaining portion and, when the product has a protecting group, removing the protecting group. Examples of the known condensation method and elimination of the protecting group include the methods described in the following (i) to (ii).
[0029]
(I) M.I. Bodanszky and M.A. A. Ondetti, Peptide Synthesis, Interscience Publishers, New York (1966)
(Ii) Schroeder and Luebke, The Peptide, Academic Press, New York (1965)
(Iii) Nobuo Izumiya et al., Basics and Experiments on Peptide Synthesis, Maruzen (1975)
(Iv) Haruaki Yajima and Shunpei Sakakibara, Laboratory for Biochemical Experiments 1, Protein Chemistry IV, 205, (1977)
(V) Supervised by Haruaki Yajima, Development of Continuing Drugs Volume 14 Peptide Synthesis Hirokawa Shoten
[0030]
As a specific peptide synthesis method, for example, the following method can be mentioned.
Usually, a commercially available resin for polypeptide synthesis can be used. Examples of such a resin include a 2-chlorotrityl resin. Using such a resin, an amino acid having an α-amino group and a side chain functional group appropriately protected is condensed on the resin in accordance with the sequence of the target polypeptide according to various condensation methods known per se. At the end of the reaction, the polypeptide is cut out from the resin, and further, an intramolecular peptide bond formation reaction is performed in a highly diluted solution, and finally, various protecting groups are removed to obtain a target cyclic peptide. For the condensation of the above protected amino acids, various activating reagents that can be used for polypeptide synthesis can be used, and carbodiimides are particularly preferable. As the carbodiimides, for example, DCC (N, N′-dicyclohexylcarbodiimide), N, N′-diisopropylcarbodiimide, N-ethyl-N ′-(3-dimethylaminoprolyl) carbodiimide and the like are used. For activation by these, the protected amino acid is directly added to the resin together with a racemization inhibitor additive (eg, HOBt, HOOBt, HONB), or the protected amino acid is preliminarily prepared as a symmetric acid anhydride or HOBt ester or HOOBt or HONB ester. Can be added to the resin after activation.
[0031]
The solvent used for activating the protected amino acid or condensing with the resin can be appropriately selected from solvents known to be usable for the polypeptide condensation reaction. For example, acid amides such as N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride and chloroform, alcohols such as trifluoroethanol, dimethyl sulfoxide and the like. Examples thereof include sulfoxides, ethers such as pyridine, dioxane, and tetrahydrofuran; nitriles such as acetonitrile and propionitrile; esters such as methyl acetate and ethyl acetate; and appropriate mixtures thereof. The reaction temperature is appropriately selected from a range known to be usable for a polypeptide bond formation reaction, and is usually appropriately selected from a range of about -20 ° C to 50 ° C. The activated amino acid derivative is usually used in a 1.5 to 4-fold excess. As a result of the test using the ninhydrin reaction, if the condensation is insufficient, sufficient condensation can be performed by repeating the condensation reaction without removing the protecting group. When a sufficient condensation cannot be obtained by repeating the reaction, the unreacted amino acid can be acetylated using acetic anhydride or acetylimidazole.
[0032]
Examples of the protecting group for the amino group of the starting amino acid include Z, Boc, tertiary pentyloxycarbonyl, isobornyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl, Cl-Z, Br-Z, adamantyloxycarbonyl, and trifluoro. Acetyl, phthaloyl, formyl, 2-nitrophenylsulfenyl, diphenylphosphinothioyl, Fmoc and the like are used. The carboxyl group may be, for example, a linear, branched or cyclic alkyl ester such as an alkyl esterified ester (eg, methyl, ethyl, propyl, butyl, tertiary butyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, 2-adamantyl). ), Aralkyl esterification (eg, benzyl ester, 4-nitrobenzyl ester, 4-methoxybenzyl ester, 4-chlorobenzyl ester, benzhydryl esterification), phenacyl esterification, benzyloxycarbonylhydrazide, tertiary butoxy It can be protected by carbonylhydrazide, tritylhydrazide and the like. The hydroxyl group of serine can be protected, for example, by esterification or etherification. As a group suitable for this esterification, for example, a lower alkanoyl group such as an acetyl group, an aroyl group such as a benzoyl group, and a group derived from carbonic acid such as a benzyloxycarbonyl group and an ethoxycarbonyl group are used. Examples of a group suitable for etherification include a benzyl group, a tetrahydropyranyl group, and a t-butyl group. Examples of the protecting group for the phenolic hydroxyl group of tyrosine include benzyl, Cl and the like. ₂ -Bzl, 2-nitrobenzyl, Br-Z, tert-butyl and the like are used. As the imidazole protecting group for histidine, for example, Tos, 4-methoxy-2,3,6-trimethylbenzenesulfonyl, DNP, benzyloxymethyl, Bom, Boc, Trt, Fmoc and the like are used.
[0033]
Examples of the activated carboxyl group of the starting amino acid include the corresponding acid anhydride, azide, active ester [alcohol (eg, pentachlorophenol, 2,4,5-trimethylbenzenesulfonyltrichlorophenol, 2,4 Esters with dinitrophenol, cyanomethyl alcohol, paranitrophenol, HONB, N-hydroxysuccinimide, N-hydroxyphthalimide, HOBt) and the like. As the activated amino group of the starting amino acid, for example, a corresponding phosphoric amide is used.
[0034]
As a method for removing (eliminating) the protecting group, for example, catalytic reduction in a hydrogen stream in the presence of a catalyst such as Pd-black or Pd-carbon, or hydrogen fluoride anhydride, methanesulfonic acid, trifluoromethane, etc. Acid treatment with dichloromethane, trifluoroacetic acid or a mixture thereof, base treatment with diisopropylethylamine, triethylamine, piperidine, piperazine, etc., reduction with sodium in liquid ammonia, and the like are also used. The elimination reaction by the above-mentioned acid treatment is generally performed at a temperature of about -20 ° C to 40 ° C. -Addition of a cation scavenger such as butanedithiol, 1,2-ethanedithiol and the like is effective. Further, the 2,4-dinitrophenyl group used as an imidazole protecting group of histidine is removed by thiophenol treatment, and the formyl group used as an indole protecting group of tryptophan is the above 1,2-ethanedithiol, 1,4-butane. In addition to deprotection by acid treatment in the presence of dithiol or the like, it is also removed by alkali treatment with dilute sodium hydroxide solution, dilute ammonia or the like.
[0035]
The protection of the functional group that should not be involved in the reaction of the raw materials, the protective group, the elimination of the protective group, the activation of the functional group involved in the reaction, and the like can be appropriately selected from known groups or known means.
[0036]
As another method for obtaining a cyclic peptide, for example, first, after condensing the α-carboxyl group of the carboxy terminal amino acid with an alcohol and protecting it as an amino acid ester, extending the peptide chain to a desired chain length on the amino group side Producing a polypeptide from which the protecting group for the α-amino group at the N-terminus of the peptide chain and the α-carboxyl group of the amino acid at the carboxy terminal have been removed, and binding the intramolecular peptide to the polypeptide in a highly diluted solution as described above. Perform the formation reaction. Details of the condensation reaction are the same as described above. After purifying the protected polypeptide obtained by the condensation, all the protecting groups are removed by the above-mentioned method to obtain a desired crude cyclic peptide. This crude cyclic peptide can be purified by various known purification means, and the desired fraction can be obtained by freeze-drying the main fraction.
[0037]
After the reaction, the peptide of the present invention can be purified and isolated by a combination of ordinary purification methods such as solvent extraction, column chromatography, liquid chromatography, and recrystallization. When the peptide obtained by the above method is a free form, it can be converted into an appropriate salt by a known method, and when obtained by a salt, it can be converted into a free form by a known method. it can.
[0038]
The cyclic peptide of the present invention has an effect of competitively inhibiting the binding between CXCR4 and its physiological ligand, CXCL12 / SDF-1. Further, as described later, it has been experimentally confirmed that the compound has anti-HIV activity. Therefore, the CXCR4 antagonist can be used as an active ingredient of a pharmaceutical composition for treating or preventing a disease effective for treatment. Examples of the disease include AIDS, chronic lymphocytic B-cell leukemia, cancer types expressing CXCR4, for example, oral cancer, pharyngeal cancer, lip cancer, tongue cancer, gingival cancer, nasopharyngeal cancer, esophageal cancer, gastric cancer, small intestine Cancer, colon cancer including colon cancer, liver cancer, gallbladder cancer, pancreatic cancer, nasal cavity cancer, lung cancer, osteosarcoma, soft tissue cancer, skin cancer, melanoma, breast cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate cancer, testicular cancer, Penile cancer, bladder cancer, kidney cancer, brain tumor, thyroid cancer, lymphoma, rheumatoid arthritis and the like.
[0039]
When the cyclic peptide of the present invention is used as a drug or an animal drug, a pharmaceutical composition may be prepared according to a conventional method. For example, tablets, capsules, elixirs, microcapsules, and the like, which are sugar-coated as necessary, or sterile solution or suspension with water or other pharmaceutically acceptable liquids It can be used parenterally in the form of injections. For example, the cyclic peptide of the present invention is admixed with physiologically acceptable carriers, flavors, excipients, vehicles, preservatives, stabilizers, binders, and the like in unit dosage forms generally required for accepted pharmaceutical practice. Thus, it can be formulated. The amount of the active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose in the specified range can be obtained.
[0040]
Examples of additives that can be incorporated into tablets, capsules and the like include binders such as gelatin, corn starch, tragacanth gum, gum arabic, excipients such as crystalline cellulose, corn starch, gelatin, alginic acid and the like. Swelling agents, lubricants such as magnesium stearate, sweetening agents such as sucrose, lactose or saccharin, flavoring agents such as peppermint, reddish oil or cherry and the like are used. When the preparation unit form is a capsule, a liquid carrier such as oil and fat can be further contained in the above-mentioned type of material. Sterile compositions for injection can be formulated according to normal pharmaceutical practice such as dissolving or suspending the active substance in vehicles such as water for injection, and naturally occurring vegetable oils such as sesame oil, coconut oil and the like. .
[0041]
Aqueous liquids for injection include, for example, physiological saline, isotonic solutions containing glucose and other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.), and suitable solubilizing agents. For example, alcohols (eg, ethanol), polyalcohols (eg, propylene glycol, polyethylene glycol), nonionic surfactants (eg, Polysorbate 80 (trademark), HCO-50) may be used in combination. Oily liquids for injection include sesame oil and soybean oil, and may be used in combination with solubilizers such as benzyl benzoate and benzyl alcohol. In addition, buffers (eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer), soothing agents (eg, benzalkonium chloride, procaine hydrochloride, etc.), stabilizers (eg, human serum albumin, polyethylene glycol, etc.), storage Agents (eg, benzyl alcohol, phenol, etc.), antioxidants and the like. The prepared injection solution is usually aseptically filled in a suitable ampoule.
[0042]
Since the preparation obtained in this way is safe and has low toxicity, it can be used in humans and mammals (eg, mouse, rat, guinea pig, rabbit, sheep, pig, cow, cat, dog, monkey, baboon, chimpanzee, etc.). Can be administered.
The dose of the cyclic peptide of the present invention varies depending on indications, symptoms, etc., but when administered orally, it is usually about 0.1 to 1000 mg, preferably about 1.0 to 500 mg per dose per 60 kg body weight. , More preferably about 1.0 to 200 mg. In the case of parenteral administration, a single dose for a body weight of 60 kg varies depending on an administration subject, a symptom, an administration method, and the like. A dose, preferably about 0.1 to 200 mg, more preferably about 0.1 to 100 mg may be administered by intravenous injection. In the case of other animals, the amount can be administered in terms of the weight per 60 kg.
[0043]
The cyclic peptide of the present invention may be administered in combination with other drugs. When the peptide of the present invention is used in combination with the concomitant drug, the administration time of the peptide of the present invention and the concomitant drug is not limited, and the cyclic peptide of the present invention and the concomitant drug may be simultaneously administered to a subject to be administered. Alternatively, they may be administered with a time lag. The dose of the concomitant drug may be in accordance with the dose clinically used, and can be appropriately selected depending on the administration subject, administration route, disease, combination, and the like.
[0044]
The administration form of the cyclic peptide of the present invention and the concomitant drug is not particularly limited, as long as the polypeptide of the present invention or a salt thereof and the concomitant drug are combined simultaneously or with a time lag. Such administration forms include, for example, (1) administration of a single preparation obtained by simultaneously preparing the cyclic peptide of the present invention and a concomitant drug, and (2) separate administration of the cyclic peptide of the present invention and the concomitant drug. (3) Time difference of the two formulations obtained by separately formulating the cyclic peptide of the present invention and the concomitant drug by the same route of administration. (4) Simultaneous administration of two types of preparations obtained by separately formulating the cyclic peptide of the present invention and the concomitant drug by different administration routes, (5) Cyclic peptide of the present invention and concomitant drug (2) Administration of two preparations obtained by separately formulating the two preparations at different times by different administration routes (for example, administration in the order of the cyclic peptide of the present invention → concomitant drug, or administration in the reverse order). And the like. Hereinafter, these administration forms are collectively abbreviated as the concomitant drug of the present invention.
[0045]
The concomitant drug of the present invention using an appropriate concomitant drug has low toxicity, for example, by mixing the cyclic peptide of the present invention and / or the concomitant drug with a pharmacologically acceptable carrier according to a method known per se. Pharmaceutical compositions such as tablets (including sugar-coated tablets and film-coated tablets), powders, granules, capsules, (including soft capsules), liquids, injections, suppositories, sustained-release preparations and the like, orally or parenterally (Eg, topical, rectal, intravenous administration, etc.). Injectables can be administered intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intraorganically, intranasally, intradermally, instilled, intracerebrally, rectally, intravaginally and intraperitoneally, inside tumors, proximal to tumors, etc. or directly into lesions Can be administered.
[0046]
As the pharmacologically acceptable carrier that may be used in the production of the concomitant drug of the present invention, the same carriers as those used in the aforementioned pharmaceutical composition of the present invention can be used.
The mixing ratio of the cyclic peptide of the present invention and the concomitant drug in the concomitant drug of the present invention can be appropriately selected depending on the administration subject, administration route, disease and the like.
The content of the concomitant drug in the concomitant drug of the present invention varies depending on the form of the preparation, but is usually about 0.01 to 100% by weight, preferably about 0.1 to 50% by weight, more preferably about 0.1 to 50% by weight based on the whole preparation. It is about 0.5 to 20% by weight.
The content of additives such as carriers in the concomitant drug of the present invention varies depending on the form of the preparation, but is usually about 1 to 99.99% by weight, preferably about 10 to 90% by weight, based on the whole preparation. .
[0047]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to Examples, but these do not limit the scope of the present invention.
[0048]
Example 1 Production of cyclic peptide (sequence 1)
Cyclo-(-LTyr-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
<1> Synthesis of protected polypeptide resin
The paranitrophenyl carbonate wang resin was treated with hydrazine hydrate (10 equivalents) in DMF (dimethylformamide) to obtain a wang resin having a hydrazine linker. On this resin, Fmoc-Gly-OH (5 equivalents) was added, and a condensation reaction was performed in DMF by the DIPCDI (diisopropylcarbodiimide) -HOBt method. The degree of progress of the condensation reaction is described in Kaiser, E .; [Analytical Biochemistry, Anal. Biochem., Vol. 34, p. 595 (1970)]. After confirming the completion of the reaction, the Fmoc group was removed with 20% piperidine / DMF.
[0049]
<2> Introduction of each amino acid
Similarly, LNal, LArg (Pbf), DArg (Pbf) and LTyr (t-Bu) residues were successively introduced into the resin in the same manner to obtain a protecting group-protected polypeptide resin.
[0050]
<3> Deprotection group and separation of chain peptide from resin
The protecting group-protected polypeptide resin was reacted with TFA (trifluoroacetic acid) at 25 ° C. for 1.5 hours. The resin was filtered off from the reaction mixture, washed twice with TFA, and the combined filtrate and washings were concentrated under reduced pressure. The residue was dissolved in 1N acetic acid and diluted with distilled water. This aqueous solution was purified by large-scale preparative HPLC (Cosmozil 5C18 AR-II column: acetonitrile-water) to obtain a chain-protected peptide hydrazide.
[0051]
<4> Cyclization and purification by azide method
A DMF solution of 4M HCl (3 equivalents) and isoamyl nitrite (6 equivalents) were added to the DMF solution of the above-mentioned chain peptide hydrazide at −25 ° C., and reacted at −20 ° C. for 30 minutes. After dilution with DMF cooled in advance, the mixture was made basic with DIEA (diisopropylethylamine) (50 equivalents) and reacted at -20 ° C for 24 hours. After concentration under reduced pressure, the reaction mixture was dissolved in 1N acetic acid and diluted with distilled water. This aqueous solution was purified by large-scale preparative HPLC (Cosmozil 5C18 AR-II column: acetonitrile-water) to obtain a single peak cyclic peptide, which was lyophilized. Purity was confirmed by HPLC.
[0052]
Example 2 Production of cyclic peptide (sequence 2)
Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-Gly-)
<1> Synthesis of protected polypeptide resin
Fmoc-DNal-OH (5 equivalents) was added to the 2-chlorotrityl resin H-Gly-2ClTrt resin into which the first glycine was introduced, and a condensation reaction was carried out in DMF by the DIPCDI-HOBt method. The degree of progress of the condensation reaction is described in Kaiser, E .; [Analytical Biochemistry, Anal. Biochem., Vol. 34, p. 595 (1970)]. After confirming the completion of the reaction, the Fmoc group was removed with 20% piperidine / DMF.
[0053]
<2> Introduction of each amino acid
In the same manner as above, LArg (Pbf), DArg (Pbf) and DTyr (t-Bu) residues were sequentially introduced into the resin to obtain a protecting group-protected polypeptide resin.
[0054]
<3> Separation of chain peptide from resin
The protecting group-protected polypeptide resin was reacted with acetic acid / TFE (trifluoroethanol) / DCM (dichloromethane) (1: 1: 3) at 25 ° C. for 2 hours. The resin was filtered off from the reaction mixture, washed twice with acetic acid / TFE / DCM (1: 1: 3), and the combined filtrate and washings were concentrated under reduced pressure.
[0055]
<4> DPPA (diphenyl phosphate azide) -NaHCO ₃ Cyclization
The above-mentioned chain peptide and NaHCO ₃ DPPA (4.1 eq.) Was added to the highly diluted (6.8 eq.) DMF solution at −40 ° C., and reacted at 25 ° C. for 36 hours. NaHCO from the reaction mixture ₃ Was filtered off, washed twice with DMF, and the combined filtrate and washings were concentrated under reduced pressure. CHCl residue ₃ -Dissolved in methanol (9: 1) and subjected to solid phase extraction with basic alumina to remove inorganic salts, followed by concentration under reduced pressure to obtain a protective group-protected cyclic peptide.
[0056]
<5> Deprotection group and purification
The protected group-protected cyclic peptide was reacted with a 95% aqueous TFA solution at 25 ° C. for 2 hours. After concentration under reduced pressure, the residue was dissolved in 1N acetic acid and diluted with distilled water. This aqueous solution was purified by large-scale preparative HPLC (Cosmozil 5C18 AR-II column: acetonitrile-water) to obtain a single peak cyclic peptide, which was lyophilized. Purity was confirmed by HPLC.
[0057]
Example 3 Production of Cyclic Peptide (Sequence 3)
Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
The cyclic peptide (sequence 3) shown above can be produced by changing the amino acid to be introduced in the same manner as in Production Example 2.
[0058]
Example 4 Production of Cyclic Peptide (Sequence 5)
Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-Gly-)
<1> Synthesis of protected polypeptide resin
By treating the paranitrophenyl carbonate wang resin with hydrazine hydrate (10 equivalents) in DMF, a wang resin having a hydrazine linker was obtained. On this resin, Fmoc-Gly-OH (5 equivalents) was added, and a condensation reaction was performed in DMF by the DIPCDI-HOBt method. The degree of progress of the condensation reaction is described in Kaiser, E .; [Analytical Biochemistry, Anal. Biochem., Vol. 34, p. 595 (1970)]. After confirming the completion of the reaction, the Fmoc group was removed with 20% piperidine / DMF.
[0059]
<2> Introduction of each amino acid
Similarly, LNal, LArg (Pbf), LArg (Pbf) and DTyr (t-Bu) residues were successively introduced into the resin in the same manner to obtain a protecting group-protected polypeptide resin.
[0060]
<3> Separation of chain peptide from resin
The protecting group-protected polypeptide resin was reacted with TFA / DCM (1: 9) at 25 ° C. for 1.5 hours. The resin was filtered off from the reaction mixture, washed twice with TFA / DCM (1: 9), and the combined filtrate and washings were concentrated under reduced pressure.
[0061]
<4> Cyclization by azide method
A DMF solution of 4M HCl (3 equivalents) and isoamyl nitrite (6 equivalents) were added to the above-described chain peptide DMF solution at −25 ° C., and reacted at −10 ° C. for 20 minutes. After dilution with pre-cooled DMF, it was made basic with DIEA (50 equivalents) and reacted at -20 ° C for 24 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to obtain a protective group-protected cyclic peptide.
[0062]
<5> Deprotection group and purification
The protected group-protected cyclic peptide was reacted with a 95% aqueous TFA solution at 25 ° C. for 2 hours. After concentration under reduced pressure, the residue was dissolved in 1N acetic acid and diluted with distilled water. This aqueous solution was purified by large-scale preparative HPLC (Cosmozil 5C18 AR-II column: acetonitrile-water) to obtain a single peak cyclic peptide, which was lyophilized. Purity was confirmed by HPLC.
[0063]
Example 5 Production of Cyclic Peptide (Sequences 9 and 10)
Cyclo-(-DMeTyr-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
Cyclo-(-DMeTyr-LArg-LArg-LNal-Gly-)
L-Arg, D-Arg (L-Arg), and Tyr (t-Bu) were sequentially condensed on the 2-chlorotrityl resin H-LNal-2ClTrt resin into which L-2-naphthylalanine was introduced. After removing the Fmoc group, the following operation was performed for introduction of an N-methyl group and condensation of Gly. Reaction was carried out with o-nitrobenzenesulfonyl chloride (3 equivalents) and collidine (6 equivalents) in DCM at 25 ° C for 2 hours. After washing the resin, it was reacted with MeOH (5 equivalents), triphenylphosphine (5 equivalents), diethyl azodicarboxylate (5 equivalents) in THF at 25 ° C. for 2 hours. Subsequently, after washing the resin, it was reacted with 1,8-diazabicyclo- "5,4,0" -7-undecene (5 equivalents) and mercaptoethanol (10 equivalents) in DMF at 25 ° C for 1.5 hours. I let it. Gly was converted to o- (7-azabenzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium salt of hexafluorophosphate (4.9 equivalents) with respect to the resin after the above treatment. , 1-hydroxy-7-azabenzotriazole (5 eq) and N, N-diisopropylethylamine (10 eq) at 25 ° C. for 1.5 hours. Cyclization, purification, etc. were performed in the same manner as in Example 2.
[0064]
Example 6 Production of Cyclic Peptide (Sequences 16 and 17)
Cyclo-(-DTyr-DMeArg-LArg-LNal-Gly-)
Cyclo-(-DTyr-LMeArg-LArg-LNal-Gly-)
The synthesis was carried out according to Example 2, but the introduction of the N-methyl group and the subsequent condensation of DTyr (t-Bu) were carried out as in Example 5.
[0065]
Example 7 Production of Cyclic Peptide (Sequence 18)
Cyclo-(-DTyr-LArg-LGlu-LNal-Gly-)
Synthesized in the same manner as in Example 4.
[0066]
Example 8 Production of Cyclic Peptide (Sequences 19 and 20)
Cyclo-(-DTyr-DAArg-LMeArg-LNal-Gly-)
Cyclo-(-DTyr-LArg-LMeArg-LNal-Gly-)
The synthesis was carried out according to Example 2, but the introduction of the N-methyl group and the subsequent condensation of DArg (Pbf) or LArg (Pbf) were carried out as in Example 5.
[0067]
Example 9 Production of cyclic peptide (sequences 22 and 23)
Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LMeNal-Gly-)
Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LMeNal-Gly-)
The synthesis was carried out according to Example 2, but the introduction of the N-methyl group and the subsequent condensation of LArg (Pbf) were carried out as in Example 5.
[0068]
Example 10 Production of Cyclic Peptide (Sequence 33)
Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-Pic-)
Amino acids were sequentially synthesized using 2-chlorotrityl resin, H-DAArg (Pbf) -2ClTrt resin, into which D-arginine was first introduced, and then LARG (Pbf) was finally condensed. .
[0069]
Example 11 Production of cyclic peptide (sequences 34 and 35)
Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-Sar-)
Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-Sar-)
Amino acids were sequentially synthesized using a 2-chlorotrityl resin, H-DTyr (t-Bu) -2ClTrt resin, into which D-tyrosine was introduced, and then condensed with DAarg or LArg. did. The introduction of the N-methyl group and the subsequent condensation of LNal were performed according to Example 5.
[0070]
Other sequences were synthesized in the same manner as in Example 2.
[0071]
[Test Example 1] ¹²⁵ Inhibitory activity of the cyclic peptide of the present invention on the binding of [I] -SDF-1 to CXCR4 receptor
A 96-well microcell in which CHO cells that constantly express the CXCR4 receptor (prepared according to the method described in Chinese hamster ovary cells: J. Mol. Biol., 313, 1181-1193 (2001)) are cultured. In each well of the titer plate, 150 pM [ ¹²⁵ I] -SDF-1 (obtained from Perkin Elmer Life Science) was added, and the binding reaction was performed at 4 ° C. for 1 hour. After the reaction, the reaction solution is centrifuged and unbound [ ¹²⁵ I] -SDF-1 was removed, and the radioactivity of each well was measured. The activity of each test compound that inhibits the binding between CXCR4 and SDF-1 was determined, taking the radioactivity when no test compound was added as 100%. The results are shown in Table 1 below. In Table 1, "T140" is a CXCR4 antagonist of 14 amino acids [Biochemical Biophysical Research Communication (Biochem. Biophysics. Res. Commun.) Vol. 253, 877-882 (1998)]. .
[0072]
[Table 1]

[0073]
The results in Table 1 showed that the present compound has strong CXCR4 antagonistic activity.
[0074]
Test Example 2 Antiviral Activity of Cyclic Peptide of the Invention Against HIV-1IIIB Infection via CXCR4 Receptor
The method described in HIV-1IIIB infected MT-4 cells (J. Virol. Methods, 20, 309-321 (1988)) in a 96-well microtiter plate in the presence of a cyclic peptide diluted 5-fold from 500 μg / mL to 8 steps each. (Prepared according to the method) (25000 / well, MOI: 0.01) was added immediately after the infection, and the mixture was cultured at 37 ° C. for 5 days. The number of surviving cells was measured by the MTT (3 '-(4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) method, and the antiviral activity was suppressed by 50% and the cell damage due to HIV infection was suppressed by 50%. Concentration. The results are shown in Table 2 below.
[0075]
[Table 2]

[0076]
The results in Table 2 indicate that the cyclic peptides of the present invention have strong anti-HIV activity.
[0077]
Test Example 3 Stability of Cyclic Peptide of the Present Invention in Serum and Liver Homogenate
100 μL of mouse serum or 100 μL of rat liver homogenate (20% phosphate buffer) is mixed with 100 nmol (100 μL) of the cyclic peptide of the present invention (sequence 5), incubated at 37 ° C., and subjected to temporal sampling, and the remaining book The amount of the inventive cyclic peptide was quantified by HPLC.
[0078]
[Table 3]

[0079]
The results in Table 3 indicated that the compound was very stable in serum and liver homogenate.
[0080]
【The invention's effect】
Since the peptide of the present invention inhibits the binding between CXCR4 and CXCL12 / SDF-1, it is effective in preventing and / or treating AIDS and chronic lymphocytic B-cell leukemia, and preventing and / or treating cancer types expressing CXCR4. Or, it is useful as a therapeutic agent and a preventive and / or therapeutic agent for rheumatoid arthritis.
[0081]
[Sequence list]

Claims

Formula I:
Cyclo-(-A1-B1-B2-A2-C-) (I): (SEQ ID NO: 1)
[Wherein, A1 and A2 independently represent an aromatic amino acid having an aromatic or heterocyclic ring having 20 or less carbon atoms in a side chain, or alanine;
B1 and B2 are independently arginine, homoarginine, citrulline, 2,4-diaminobutyric acid, 2,3-diaminopropionic acid, lysine, ornithine, derivatives thereof, or aspartic acid, glutamic acid, 2-aminohexane- Represents 1,6-dicarboxylic acids, their side chain amide derivatives, or alanine;
C is glycine, alanine, sarcosine, 1-aminocyclopentyl-1-carboxylic acid, 1-aminocyclohexyl-1-carboxylic acid, β-alanine, 4-aminobutyric acid, 5-aminopentanoic acid, proline, or pipecolic acid. Represent;
Each amino acid residue may be substituted at the alpha-amino function with an alkyl or benzyl group having 1 to 18 carbon atoms;
Each amino acid residue may be D-form or L-form], or a physiologically acceptable salt thereof.

Formulas II-VII:
Cyclo-(-LA1-DB1-LB2-LA2-C-) (II)
Cyclo-(-DA1-DB1-LB2-DA2-C-) (III)
Cyclo-(-DA1-DB1-LB2-LA2-C-) (IV)
Cyclo-(-LA1-LB1-LB2-LA2-C-) (V): (SEQ ID NO: 2)
Cyclo-(-DA1-LB1-LB2-LA2-C-) (VI)
Cyclo-(-DA1-LB1-LB2-DA2-C-) (VII)
[Wherein, A1 and A2 independently represent an aromatic amino acid having an aromatic or heterocyclic ring having 20 or less carbon atoms in a side chain, or alanine;
B1 and B2 are independently arginine, homoarginine, citrulline, 2,4-diaminobutyric acid, 2,3-diaminopropionic acid, lysine, ornithine, derivatives thereof, or aspartic acid, glutamic acid, 2-aminohexane- Represents 1,6-dicarboxylic acids, their side chain amide derivatives, or alanine;
C is glycine, L-alanine, D-alanine, sarcosine, 1-aminocyclopentyl-1-carboxylic acid, 1-aminocyclohexyl-1-carboxylic acid, β-alanine, 4-aminobutyric acid, 5-aminopentanoic acid, Represents proline or pipecolic acid;
Each amino acid residue may be substituted at the alpha-amino function with an alkyl or benzyl group having 1 to 18 carbon atoms;
L represents L-form and D represents D-form], or a physiologically acceptable salt thereof.

Formula VIII-XIII:
Cyclo-(-LA1-DB1-LB2-LA2-C-) VIII
Cyclo-(-DA1-DB1-LB2-DA2-C-) IX
Cyclo-(-DA1-DB1-LB2-LA2-C-) X
Cyclo-(-LA1-LB1-LB2-LA2-C-) XI: (SEQ ID NO: 3)
Cyclo-(-DA1-LB1-LB2-LA2-C-) XII
Cyclo-(-DA1-LB1-LB2-DA2-C-) XIII
[Wherein A1 represents tyrosine, hydroxyphenylglycine, alanine residue;
A2 represents phenylalanine, tryptophan, 3- (2-naphthyl) alanine, 3- (1-naphthyl) alanine, 3- (2-benzothienyl) alanine, or an alanine residue;
B1 and B2 represent arginine, homoarginine, glutamic acid, alanine residues,
C represents glycine, L-alanine, D-alanine, β-alanine, L-pipecolic acid, sarcosine residue;
L represents L-form;
D represents a D-form], and physiologically acceptable salts thereof.

A cyclic peptide represented by any of the following sequences 1 to 6, or a salt thereof:
(Sequence 1) Cyclo-(-LTyr-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 2) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-Gly-)
(Sequence 3) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 4) Cyclo-(-LTyr-LArg-LArg-LNal-Gly-)
: (SEQ ID NO: 4)
(Sequence 5) Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 6) cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-DNal-Gly-)
(Sequence 7) cyclo-(-DAla-DAArg-LArg-DNal-Gly-)
(Sequence 8) Cyclo-(-DAla-DAArg-LARg-LNal-Gly-)
(Sequence 9) Cyclo-(-DMeTyr-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 10) Cyclo-(-DMeTyr-LArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 11) Cyclo-(-DHpg-DAArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 12) cyclo-(-DHpg-LArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 13) Cyclo-(-DTyr-DAla-LARg-DNal-Gly-)
(Sequence 14) Cyclo-(-DTyr-DAla-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 15) Cyclo-(-DTyr-LALa-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 16) Cyclo-(-DTyr-DMeArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 17) Cyclo-(-DTyr-LMeArg-LArg-LNal-Gly-)
(Sequence 18) Cyclo-(-DTyr-LArg-LGlu-LNal-Gly-)
(Sequence 19) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LMeArg-LNal-Gly-)
(Sequence 20) Cyclo-(-DTyr-LArg-LMeArg-LNal-Gly-)
(Sequence 21) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LARG-DAla-Gly-)
(Sequence 22) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LMeNal-Gly-)
(Sequence 23) Cyclo-(-DTyr-LARG-LARG-LMeNal-Gly-)
(Sequence 24) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-LAla-)
(Sequence 25) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-LALa-)
(Sequence 26) cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-LALa-)
(Sequence 27) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-DAla-)
(Sequence 28) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-DAla-)
(Sequence 29) Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-DAla-)
(Sequence 30) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-DNal-βAla-)
(Sequence 31) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-βAla-)
(Sequence 32) Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-βAla-)
(Sequence 33) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LArg-LNal-Pic-)
(Sequence 34) Cyclo-(-DTyr-DAArg-LARg-LNal-Sar-)
(Sequence 35) Cyclo-(-DTyr-LArg-LArg-LNal-Sar-)
Wherein LTyr is an L-tyrosine residue, DTyr is a D-tyrosine residue, LARG is an L-arginine residue, DAArg is a D-arginine residue, and LNal is L-3- (2-naphthyl. Alanine residue, DNal is D-3- (2-naphthyl) alanine residue, Gly is glycine residue, LALa is L-alanine residue, DAla is D-alanine residue, β-Ala is β-alanine residue, LMeArg is L-N-methylarginine residue, DMeArg is D-N-methylarginine residue, LGlu is L-glutamic acid residue, DHpg is D-4-hydroxyphenylglycinate. LMeNal is an LN-methyl-2-naphthylalanine residue, Pic is a pipecolic acid residue, Sar is a sarcosine residue, and DMeTyr is a D-N-methylthiol residue. The rosin residues are indicated respectively].

A pharmaceutical composition comprising the compound according to claim 1.

The pharmaceutical composition according to claim 5, wherein the CXCR4 antagonist is used for a disease effective for prevention or treatment.