JP2004166749A - Method, apparatus and system for recovering leukocyte-removed blood remaining in leukocyte removing filter - Google Patents
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Abstract
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、白血球除去フィルターに残留する白血球捕捉後の白血球が除去された血液を回収する方法に関する。本発明の方法によると、捕捉された白血球や血小板からのサイトカイン、メディエーターの放出を抑制しつつ、白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収することができる。また、本発明は、この白血球が除去された血液を回収する装置、及び回収システムに関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、輸血分野に於いて、血液製剤中の白血球混入による副作用が数多く知られている。この副作用予防のため、ポリエステル製の不織布やコットン綿などの材料を用いた白血球除去フィルターにより輸血用血液製剤からの白血球除去が行われている。
【０００３】
一方、全身性エリトマトーデス、悪性関節リウマチ、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病等の自己免疫性疾患、白血病、癌などの治療、或いは移植前の免疫抑制の目的で白血球を白血球除去フィルターにて選択的に除去する技術が進歩してきた．現在、不織布等をフィルターとして用いた白血球除去器が開発されており、これら白血球除去器に於いては高い白血球の除去能力が要求されている。
【０００４】
従来こうした白血球除去フィルターを用いる場合、白血球除去処理後に、白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を生理食塩液で血液処理と同方向から回収することが多かった。しかしながら、この回収方法は、白血球や血小板が白血球除去フィルター内の濾材である多孔質体、平膜、不織布、織布、粒子等に吸着することで活性化されているため、生理食塩液による温度変化、粘度変化、ｐＨ変化および生理食塩液の注入による流速変化などに例示される様々な外部からの物理的、化学的刺激により白血球や血小板からサイトカインやメディエーターが放出され、回収後の血液にサイトカインやメディエーターが高濃度に混入する可能性があった。
【０００５】
特許文献１には、セルロースジアセテートからなるビーズ状の白血球除去材を用いて、リンパ球に比し 炎症性細胞への親和性が高い担体と接触させ、かくして 得られる炎症性細胞が吸着除去された処理血液を当該患者に戻すことを特徴とする炎症性疾患の処置方法が記載されているが、処理血液を戻す際に血液出口から生理的溶液を流入させ、白血球が除去された血液を回収する方法は開示されていない。
【０００６】
また、特許文献２には、血液を収容する上部バッグ・白血球除去フィルター・白血球除去後の血液を収容する下部バッグをこの順に繋ぎ、上部バッグと白血球除去フィルターの間に空気を送り込み、残存する血液量を少なくする回収法が開示されている．しかし、この方法は生理的溶液を用いずに血液処理と同方向から回収する方法で白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収する方法として十分ではなかった．
【０００７】
また特許文献３では、少なくとも有核細胞と赤血球を含む有核細胞含有液を、有核細胞を実質的に補足し赤血球は実質的に通過する細胞捕捉手段に導入し、赤血球を該細胞捕捉手段から導出させ、次に該細胞捕捉手段に回収液を導入して該細胞捕捉手段に捕捉されている有核細胞を回収する有核細胞分離回収方法について開示されている。しかし、この方法は捕捉した有核細胞を回収する方法であって、フィルター内に残留する白血球が除去された血液を回収する場合には、メディエーター上昇を十分に抑制することはできなかった。
【０００８】
【参考文献】
【特許文献１】
特開平７−１７８１６７号公報
【特許文献２】
特開平７−２９９１２０号公報
【特許文献３】
特開平１１−３２２６１８号公報
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、白血球を捕捉した白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収する際、サイトカインやメディエーターの濃度上昇のリスクを抑制して白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収する方法を提供することを目的とする。また本発明はこのような白血球が除去された血液を回収する装置及びそのシステムを提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、血液を回収する工程で、血液を流した後に血液を流すのと逆の方向から生理的溶液によって白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収することによって、サイトカインやメディエーターの濃度上昇のリスクを抑制することができることを見出し、サイトカインやメディエーターの濃度上昇が小さく、白血球が除去された血液を回収できることを確認し、本発明を成すに至った。
【００１１】
すなわち、本発明は、白血球除去フィルターに血液を流し、該白血球除去フィルターに白血球を捕捉させた後、白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収する方法において、血液を白血球除去フィルターの血液入口から白血球除去フィルターに流入させ、白血球除去フィルターの血液出口から白血球除去された血液を流出させた後、血液出口から生理的溶液を流入させ、白血球除去フィルター内に残留する白血球が除去された血液を該フィルターの血液入口から回収することを特徴とする白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収する方法に関する。また本発明は、このような方法に用いる白血球が除去された血液を回収する装置及び回収システムに関する。
【００１２】
【発明の実施の形態】
以下に、本発明を詳細に説明する。
本発明の白血球除去フィルターとは、血液入口と血液出口のある容器に白血球に親和性のある白血球除去材を充填したものをいう。白血球除去材は、白血球を除去できるものであれば特に限定はなく各種のものを用いることができ、多孔質体、平膜、不織布、織布、粒子等が例示できる。白血球除去の観点より好ましい形状は、多孔質体、不織布、織布が挙げられ、最も好ましくは不織布が良好に用いられる。
【００１３】
白血球除去材の形状が不織布の場合、フィラメントは、モノフィラメントでもマルチフィラメントでも構わないし、多孔質フィラメントでも異型フィラメントでも構わない。
【００１４】
また不織布では、平均繊維直径が ０．８μｍ以上５０μｍ未満の不織布が好ましい。繊維径が大きくなると基材の表面積確保が困難となり、白血球の吸着面積が減少し、白血球の除去性能が低下するため好ましくない。
一方、繊維径が小さくなると除去材の目詰まりの発生リスクが高まるため好ましくない。以上の観点より、更に好ましい平均繊維直径は１．０μｍ以上３０μｍ未満、最も好ましくは、１．５μｍ以上２５μｍ未満である。また、白血球除去フィルターには、アグリゲート等の除去を目的に白血球除去材の血液の導入部側に平均繊維直径２５μｍ以上１００μｍ未満のプレフィルターを配していても良好に用いられる。
【００１５】
更に、不織布の場合、白血球の除去効率を上げる上でその嵩密度が０．１０ｇ／ｃｍ３以上０．４５ｇ／ｃｍ３未満であることも重要である。嵩密度が０．１０ｇ／ｃｍ３未満の場合白血球の除去性能が低下するため好ましくない。一方嵩密度が０．４５ｇ／ｃｍ３以上の場合、目詰まりしやすくなるため好ましくない。更に、上記の観点より好ましくは０．１２ｇ／ｃｍ３以上０．４５ｇ／ｃｍ３未満、最も好ましくは０．１３ｇ／ｃｍ３以上０．４０ｇ／ｃｍ３未満である。
【００１６】
白血球除去材の形状が粒状の場合、球状、多角球状等いかなる形状であっても有用に用いられる。また表面は平滑であっても、凹凸があっても白血球を除去できる表面であれば有用に用いられる。また、粒径は、５０μｍ以上１０ｍｍ以下であれば有用に用いられる。粒径は５０μｍ未満であると粒子の流出防止が困難であり好ましくない。粒径が１０ｍｍより大きい場合十分な表面積が得られず好ましくない。従って、好ましくは、８０μｍ以上８ｍｍ未満、最も好ましくは１００μｍ以上６ｍｍ未満である。
【００１７】
本発明の白血球除去材の材質としては、血球にダメージを与えにくいものであれば特に限定はなく各種のものを用いることができ、有機高分子、無機高分子、金属等が例示できる。その中でも有機高分子は切断などの加工性に優れるため好ましい素材である。有機高分子等の材質は、セルロース、セルロースアセテート、セルロースジアセテート等のセルロース及び／またはその誘導体等の天然高分子、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート等のポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピレン等のポリオレフィン、ポリフッ化ビニリデン、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタン、ポリスルホン、ポリアクリロニトリル等の高分子材料を例示できる。またこれらに親水性を付与する目的で表面を高分子材料で修飾した材料も有用に用いられる。
【００１８】
これらの材料が表面修飾なしで白血球に対して親和性を有する場合は、そのまま用いることも可能である。また表面修飾なしでそれら機能を発揮できない場合は、機能発揮を目的としてコーティング等の表面改質をして用いることが好ましい。
特に、白血球を除去する目的で、表面にコーティング等の処理によって改質されているものが好ましく用いられる。
白血球除去材として、血小板の吸着性が低い材料を表面にコーティング等の処理することで、血小板の通過性を付与した白血球選択除去材を使用することも可能である。
一方、血小板の吸着性を高める材料の表面コーティング等の処理により、血小板の除去性を付与することも可能であり、いずれの白血球除去材も有用に用いられる。
【００１９】
以上、白血球除去材の形状と材質について述べたが、これらを総合すると、白血球除去材の好ましい実例として、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート等のポリエステル不織布、セルロース、セルロースモノアセテート、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート等のセルロース系ビーズあるいはこれら表面をコーティング、放射線グラフト等の方法で表面修飾した材料が好ましく用いられるが、これに限定されるものではない。
【００２０】
本発明における白血球除去フィルターは、白血球除去率が３０％以上である時に有用に用いられる。白血球除去率が高い場合は、白血球除去フィルターに捕捉される白血球数が多いことより、白血球が除去された血液を回収する際、メディエーター上昇のリスクがより高まり、本発明のメディエーター抑制効果が発揮されるため好ましい。
従って、更に好ましい白血球除去率は５０％以上、最も好ましくは７０％以上の時に有用に用いられる。
また、リンパ球、顆粒球、単球等の特定の白血球分画を除去する場合は、特定の白血球分画での白血球除去率を用いることができる。
白血球除去率は、処理中或いは目標血液処理時の白血球除去フィルター前後の血液の白血球数から求めることができる、また処理中のサンプリングを複数回した場合、それらの除去率の平均値から求めることもできる。
【００２１】
本発明において、血液とは、全血、顆粒球含有液、リンパ球含有液、単球含有液又はこれら全てを含む等の白血球含有液、血小板含有液などの血球成分を含有する血液も含む。また、アレルギー、炎症性疾患等の活性化した血液について用いた場合、特に有用に用いられる。
【００２２】
これら血液を処理するときは、血液の抗凝固目的で抗凝固剤を血液中に加えることができる。抗凝固剤を例示すると、抗凝固活性を有する化合物であれば、特に限定されないが、ヘパリン、低分子ヘパリン、メシル酸ナファモスタット、メシル酸ガベキサート等の蛋白分解酵素阻害剤、ＡＣＤ−Ａ、ＣＰＤ等のクエン酸等が好適な例として挙げられ、最も好ましくは、ヘパリン、メシル酸ナファモスタット、クエン酸が良好に用いられる。
【００２３】
本発明の回収とは、白血球除去フィルター内に残留する白血球が除去された血液を回収する操作を言い、血小板も回収することが好ましい。本発明では、フィルターに残留する血液を回収する方向は白血球除去フィルターの血液出口から血液入口へ向かって回収する。
【００２４】
血液を白血球除去フィルターの血液入口から白血球除去フィルターに流入させ、白血球を除去する場合、処理後の白血球除去フィルター内に捕捉されえたメディエーター産生細胞が血液と同方向から導入される生理的食塩液等の生理的溶液と接触した場合、セロトニン、ヒスタミン、トロンボキサン、ロイコトリエン等のメディエーターが産生される。
【００２５】
これに対して、本発明の回収方法のように生理食塩液を血液の出口より入れた場合、白血球が除去された回収血液のメディエーター濃度について、驚くべきほどの上昇抑制効果が認められた。本発明は、この効果に基づいて成されたものである。本発明の回収方法では、理由は定かではないが、生理的溶液が白血球除去フィルター入口付近に多く捕捉されているメディエーター産生細胞と接触する時間に遅れが生じ産生を遅延または抑制したものと推測される。
【００２６】
本発明で用いる生理的溶液とは、血液及び生体に対して悪影響を与えない溶液をいう。例示すると生理食塩液、リンゲル液、乳酸リンゲル液、酢酸リンゲル液、タイロード液等の生理的塩類溶液、ブドウ糖、デキストラン等の糖含有液、クエン酸塩、ヘパリン、メシル酸ナファモスタット、メシル酸ガベキサート等の蛋白分解酵素阻害剤、等の抗凝固剤含有液を言う。また、上記に列挙した生理的塩類溶液、糖含有液、抗凝固剤含有液を任意の割合で混合した混合液であっても良好に用いられる。更に、生体に対して悪影響を与えない他の溶液で、上記に例示した生理的塩類溶液、糖含有液、抗凝固剤含有液を少なくとも１つ以上加えた混合液を希釈した液も好ましく用いられる。
【００２７】
これらの中でも、生理的塩類溶液、乳酸リンゲル液、糖含有液、抗凝固剤含有液はそのまま、あるいは任意の割合で混合した混合液が良好に用いられ、より好ましくは、生理的塩類溶液、糖含有液や抗凝固剤含有をそのまま用いることである。
【００２８】
以下に、本発明の血液回収装置について説明する。
本発明の血液回収装置の第一の態様を図１に示す。図１に例示する装置は以下を含む、白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収するための装置である。
血液および生理的溶液導入部Ｉ；
血液入口および血液出口を有する白血球除去フィルターＩＩＩ；
血液および生理的溶液導入部と白血球除去フィルターの血液入口とを接続する第一の導管１；
血液導出部ＩＩ；
白血球除去フィルターの血液出口と血液導出部とを接続する第二の導管２；
第一の導管から分岐し、第二の導管に接続された第三の導管３；
第一の導管の、第三の導管分岐点よりも白血球除去フィルターの血液入口との間から分岐し、第二の導管に接続された第四の導管４；
なお、図１中、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは血液のおよび生理的溶液の流を確保するためのクランプである。
【００２９】
本発明の血液導入部とは、被処理される血液を取り出す部分のことをいい、例示するとスパイク針、ビン針、採血針、カテーテル等が挙げられる。
本発明でいう生理的溶液導入部とは生理的溶液を生理的溶液バッグから取り出す部分のことをいい、例示するとスパイク針、ピン針、採血針などが挙げられる。
本発明でいう血液および生理的溶液導入部は、血液および生理的溶液等の入った溶液バッグに液密に接合することが可能である。また、ルアーロック等を用いればシリンジポンプに接合することも可能である。さらに、回路内への気体の混入を防ぎ血液および生理的溶液等の注入口を清浄に保持する為に、ニードレス混注管であっても良い。また、生理的溶液導入部は、専用のものを用いても良いし、血液の導入部をそのまま転用することもできる。
【００３０】
本発明の導管とは、血液および生理的溶液等の溶液を送液できる導管であり、かつ生体にとって安全に送液できるものであればいかなる導管でも用いることができる。また、血液および生理的溶液等の溶液によって有害な物質が溶出しない材質であればいずれの材質でも用いることができる。例えば、塩化ビニル、シリコン、ポリプロピレン、ポリエチレン等が挙げられる。強度の観点から、好ましくは塩化ビニルが用いられる。
本発明の血液導出部とは、血液を返血する部分のことをいい、血液導入部と同じ物が例示できる。
【００３１】
本発明の装置において、導管には適宜、板クランプ、ローラークランプ、カンシ、機械クランプ等のクランプを用いることができる。好ましいクランプの位置は第一の導管、第二の導管、第三の導管、第四の導管に少なくとも１箇所あると操作上非常に有用である。
【００３２】
本装置には、ドリップチャンバー、加温バッグ、ポンプ用チューブ、圧力測定チューブ、圧力測定装置、ポンプ等を適宜加えて用いることができる。
【００３３】
さらに、本発明の装置の第二の態様を図２に示す。
血液および生理的溶液導入部Ｉ；
血液入口および血液出口を有する白血球除去フィルターＩＩＩ；
血液および生理的溶液導入部と白血球除去フィルターの血液入口とを接続する第一の導管１；
血液導出部ＩＩ；
白血球除去フィルターの血液出口と血液導出部とを接続する第二の導管２；
第一の導管から分岐し、第二の導管に接続された第三の導管３；
第一の導管の、第三の導管分岐点と実質的に同じ位置から分岐し、第二の導管に接続された第五の導管５；
を含む。なお、血液導入部と生理的溶液導入部は別個に設け、それぞれを第一の導管１に連結してもよく、また一つの装置で兼用してもよい。
さらに、第五の導管の実質的に同じ位置とは、第三の導管分岐点と白血球除去フィルターの間から分岐していればよいが、血液を効率的に回収するために、より第三の導管分岐点に近い位置から分岐していることが好ましい。
なお、図２中、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＦは血液および生理的溶液の流れを確保するためのクランプである。
【００３４】
以下に本発明のシステムについて詳細に説明する。
本発明のシステムの図１に基づいて説明する。血液および生理的溶液導入部Ｉ；血液入口および血液出口を有する白血球除去フィルターＩＩＩ；
血液および生理的溶液導入部Ｉと白血球除去フィルターＩＩＩの血液入口とを接続する第一の導管１；
血液導出部ＩＩ；
白血球除去フィルターＩＩＩの血液出口と血液導出部ＩＩとを接続する第二の導管２；
第一の導管１から分岐し、第二の導管２に接続された第三の導管３；
第一の導管１の、第三の導管分岐点と白血球除去フィルターＩＩＩの血液入口との間から分岐し、第二の導管に接続された第四の導管４；
を含む。なお、血液導入部と生理的溶液導入部は別個に設け、それぞれを第一の導管１に連結してもよく、または１つの装置で兼用してもよい。さらに、第四の導管は、第三の導管分岐点と白血球除去フィルター入口の間に残る血液を効率的に回収するために第三の導管分岐点に近いほど好ましい。
【００３５】
本発明のシステムにおいては、白血球除去フィルターＩＩＩに血液を流し、白血球除去フィルターＩＩＩに白血球を捕捉させるときは、血液が血液導入部Ｉ、第一の導管１、白血球除去フィルターＩＩＩ、第二の導管２、血液導出部ＩＩ、の順に流れる様に操作可能である。また、その後白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収するときは、生理的溶液が生理的溶液導入部Ｉから第三の導管３が分岐している部分までの第一の導管１、第三の導管３、第三の導管が接続されている部分から白血球除去フィルターＩＩＩまでの第二の導管２、白血球除去フィルターＩＩＩ、白血球除去フィルターから第四の導管が分岐している部分までの第一の導管１、第四の導管４、第四の導管が接続されている部分から血液導出部までの第二の導管２、血液導出部ＩＩの順に流れる様に操作が可能とされている。本発明は、このような白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収するためのシステムである。
【００３６】
本発明のシステムにおいて、導管には適宜、板クランプ、ローラークランプ、カンシ、機械クランプ等のクランプを用いることができる。好ましいクランプの位置は第一の導管、第二の導管、第三の導管、第四の導管に少なくとも１箇所あると操作上非常に有用である。
【００３７】
さらに、本発明のシステムの第二の態様を図２に基づいて説明する。
血液および生理的溶液導入部Ｉ；
血液入口および血液出口を有する白血球除去フィルターＩＩＩ；
血液および生理的溶液導入部と白血球除去フィルターの血液入口とを接続する第一の導管１；
血液導出部ＩＩ；
白血球除去フィルターの血液出口と血液導出部とを接続する第二の導管２；
第一の導管から分岐し、第二の導管に接続された第三の導管３；
第一の導管の、第三の導管分岐点と実質的に同じ位置から分岐し、第二の導管に接続された第五の導管５；
を含む。なお、血液導入部と生理的溶液導入部は別個に設け、それぞれを第一の導管１に連結してもよく、また一つの装置で兼用してもよい。
さらに、第五の導管の実質的に同じ位置とは、第五の導管が第三の導管分岐点に隣接して分岐していること、あるいは四方管のような流路でもって第三の導管に組み込まれていることをいう。分岐点がこの様な位置関係になると、返血時の血液回収ロスがもっとも少なくなるので好ましい。
【００３８】
本発明のシステムにおいては白血球除去フィルターＩＩＩに血液を流し、該白血球除去フィルターＩＩＩに白血球を捕捉させるときは、血液が血液導入部Ｉ、第一の導管１、白血球除去フィルターＩＩＩ、第二の導管２、血液導出部ＩＩ、の順に流れる様に操作可能である。一方、その後白血球除去フィルターに残留する白血球除去された血液を回収するときは、生理的溶液が生理的溶液導入部Ｉから第三の導管が分岐している部分までの第一の導管１、第三の導管３、第三の導管が接続されている部分から白血球除去フィルターまでの第二の導管２、白血球除去フィルターＩＩＩ、白血球除去フィルターから第五の導管が分岐している部分までの第一の導管１、第五の導管５、第五の導管が接続されている部分から血液導出部までの第二の導管２、血液導出部ＩＩの順に流れる様に操作可能である。本発明は、このような白血球除去フィルターに残留する白血球除去された血液を回収するためのシステムである。
【００３９】
【実施例】
次に、本発明の実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例１】
図１に示すような装置に、白血球除去フィルターＩＩＩとして、平均繊維直径２．７μｍのポリエステル繊維よりなる不織布（目付９０ｇ／ｍ２、厚さ０．４２ｍｍ）を７５ｍｍの円形に切断し、上下にポアサイズ９０μｍのポリエチレンフィルタで挟み、１０枚をカラムに充填して用いた。
【００４０】
図１の回路を用いて実施した。図１のクランプＣ、Ｅを閉じ、クランプＡ、Ｂ、Ｄを開いた状態で抗凝固剤としてメシル酸ナファモスタットを添加したヒト新鮮血液（白血球数：４，３７０／μＬ、血小板数：１０８，０００／μＬ）（メシル酸ナファモスタット濃度：０．０１２ｍｇ／ｍｌ）血液４００ｍｌを血液ポンプにて２０ｍｌ／分で流し、白血球を除去した。次に、クランプＡ、Ｂ、Ｄを閉じ、クランプＣ、Ｅを開いた状態で白血球除去フィルターの血液出口より生理食塩液４０ｍｌを流速２０ｍｌ／ｍｉｎで流し、白血球除去フィルターの血液入口より白血球除去フィルター内に残留する白血球除去された血液を回収し、流出する生理食塩液を合わせて回収液とした。処理前の血液と回収液４０ｍｌのヒスタミン濃度及びセロトニン濃度をＥＩＡキット（イムノテック社製）により測定した。ヒスタミン及びセロトニン濃度を測定し、それぞれの濃度上昇率を下式（１）、（２）より求めた。また、白血球除去フィルター処理前の血液と処理後の血液中の白血球数を多項目自動血球分析装置（Ｓｙｓｍｅｘ社製）により測定し、白血球除去率を下式（３）より求めた。結果を表１に示す。
【００４１】
ヒスタミン濃度上昇率＝生理食塩液により回収した回収液のヒスタミン濃度／処理前血液のヒスタミン濃度・・・・式（１）
セロトニン濃度上昇率＝生理食塩液により回収した回収液のセロトニン濃度／処理前血液のセロトニン濃度・・・・式（２）
白血球除去率＝｛１−（白血球除去フィルター処理後血液の白血球数／処理前血液の白血球数）｝×１００・・・・式（３）
【００４２】
【比較例１】
図１の回路を用いて実施した。実施例１と同様に、図１のクランプＣ、Ｅを閉じ、クランプＡ、Ｂ、Ｄを開いた状態で抗凝固剤としてメシル酸ナファモスタットを添加したヒト新鮮血液（白血球数：４，３７０／μＬ、血小板数：１８０，０００／μＬ）（メシル酸ナファモスタット濃度：０．０１２ｍｇ／ｍｌ）血液４００ｍｌを血液ポンプにて２０ｍｌ／分で流し、白血球を除去した。次に、クランプ操作を行わず、白血球除去フィルターの血液入口より生理食塩液４０ｍｌを流速２０ｍｌ／ｍｉｎで流し、白血球除去フィルターの血液出口より白血球除去フィルター内に残留する白血球が除去された血液を回収し、流出する生理食塩液を合わせて回収液とした。実施例１と全く同じ操作処理前の血液と回収液４０ｍｌのヒスタミン濃度及びセロトニン濃度の測定を行い、ヒスタミン濃度上昇率及びセロトニン濃度上昇率を実施例１記載の式（１）、（２）より求めた。また、実施例１と同様に白血球数を多項目血球分析装置（Ｓｙｓｍｅｘ社製）により測定し、白血球除去率を実施例１記載の式（３）より求めた。結果を表１に示す。
【００４３】
【表１】
【実施例２】
平均繊維直径２．７μｍのポリエステルの繊維よりなる不織布（９０ｇ／ｍ２目付）を幅１５０ｍｍ、長さ７６０ｍｍに切断し、直径３．４ｍｍのポリエチレン製円筒状メッシュの周囲に巻いた。次いで平均繊維直径１２μｍのポリエステル繊維からなる不織布（３０ｇ／ｍ２目付）を第１プレフィルターとし、幅１５０ｍｍで巻いた。更に平均繊維直径３３μｍのポリエステル繊維からなる不織布（５０ｇ／ｍ２目付）を第２プレフィルターとし、幅１５０ｍｍで巻いた。外側にポリエチレン製のメッシュを１５０ｍｍ巻いた。この円筒直径は３９ｍｍであった。この円筒の両端をウレタンで閉塞し、天井部と底部にそれぞれ血液の入口と出口を有する内径４１ｍｍの円筒状ポリカーボネート容器に、円筒の外周面が容器の血液入口に、内周面が血液の出口にそれぞれ通じるように納め、白血球除去フィルターＩＩＩとした。このフィルターを組み込んだ図２に示すよう装置を用いて白血球が除去された血液の回収を行った。
【００４５】
図２の回路を用いて実施した。図２のクランプＣ、Ｆを閉じ、クランプＡ、Ｂ、Ｄを開いた状態で抗凝固剤としてヘパリンを添加した牛新鮮血液（白血球数：４，５００／μＬ、血小板数：１５０，０００／μＬ）（ヘパリン濃度：１０００ＩＵ／Ｌ）３０００ｍＬを血液ポンプにて５０ｍＬ／分の一定流速で室温にて流し、白血球を除去した。次に、クランＡ、Ｂを閉じ、クランプＣ、Ｄ、Ｆを開いた状態で白血球除去フィルターの血液出口より生理食塩液４００ｍｌを流速５０ｍｌ／ｍｉｎで流し、白血球除去フィルターの血液入口より白血球除去フィルター内に残留する白血球除去された血液を回収し、流出する生理食塩液を合わせて回収液とした。処理前の血液と回収液４００ｍｌのヒスタミン濃度及びセロトニン濃度をＥＩＡキット（イムノテック社製）により測定した。回収前後のヒスタミン及びセロトニン濃度を実施例１と同様の方法で、それぞれの濃度上昇率を実施例１記載の式（１）、（２）より求めた。また、処理した血液全てをプールしたサンプルを実施例１と同様に白血球数を多項目自動血球分析装置（Ｓｙｓｍｅｘ社製）により測定し、白血球除去率を実施例１記載の式（３）より求めた。結果を表２に示す。
【００４６】
【比較例２】
図２の回路を用いて実施した。実施例２と同様に図２のクランプＣ、Ｆを閉じ、クランプＡ、Ｂ、Ｄを開いた状態で抗凝固剤としてヘパリンを添加した牛新鮮血液（白血球数：４，５００／μＬ、血小板数：１５０，０００／μＬ）（ヘパリン濃度：１０００ＩＵ／Ｌ）３０００ｍＬを血液ポンプにて５０ｍＬ／分の一定流速で室温にて流し、白血球を除去した。次に、クランプ操作を行わずに白血球除去フィルターの血液入口より生理食塩液４００ｍｌを流速５０ｍｌ／ｍｉｎで流し、白血球除去フィルターの血液出口より白血球除去フィルター内に残留する白血球が除去された血液を回収し、流出する生理食塩液を合わせて回収液とした。また、実施例２と全く同じ操作処理前の血液と回収液４００ｍｌのヒスタミン濃度及びセロトニン濃度の測定を行い、ヒスタミン濃度上昇率及びセロトニン濃度上昇率を実施例１記載の式（１）、（２）より求めた。また、実施例１と同様に白血球数を多項目自動血球分析装置（Ｓｙｓｍｅｘ社製）により測定し、白血球除去率を実施例１記載の式（３）より求めた。結果を表２に示す。
【００４７】
【表２】
【発明の効果】
本発明によると白血球捕捉後の白血球除去フィルターから白血球を除去された血液を回収する際、捕捉した白血球や血小板からのサイトカイン、メディエーターの放出を抑制することができる。
【００４９】
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の白血球除去フィルターに残留する白血球を除去された血液を回収するための装置またはシステムの構成例を示す平面図である。
【図２】本発明の白血球除去フィルターに残留する白血球を除去された血液を回収するための装置またはシステムの構成例を示す平面図である。
【００５０】
【符号の説明】
１：血液および生理的溶液等の導入部と白血球除去フィルターの血液入口とを接続する第一の導管；
２：白血球除去フィルターの血液出口と血液導出部とを接続する第二の導管；
３：第一の導管から分岐し、第二の導管に接続された第三の導管；
４：第一の導管の、第三の導管分岐点と白血球除去フィルターの血液入口との間から分岐し、第二の導管に接続された第四の導管；
５：第一の導管の、第三の導管分岐点と実質的に同じ位置から分岐し、第二の導管に接続された第五の導管；
【００５１】
Ａ：第一の導管の第三の導管との分岐点付近に存在するクランプＡ；
Ｂ：第二の導管の第四の導管との分岐点と第三の導管との分岐点との間に存在するクランプＢ；
Ｃ：第三の導管の第一の導管との分岐点付近に存在するクランプＣ；
Ｄ：第一の導管の第四の導管との分岐点付近に存在し、第四の導管分岐点よりも第三の導管との分岐点側に存在するクランプＤ；
Ｅ：第四の導管の第一の導管との分岐点付近に存在するクランプＥ；
Ｆ：第五の導管の第一の導管との分岐点付近に存在するクランプＦ；
【００５２】
Ｉ：血液および生理的溶液の導入部；
ＩＩ：血液導出部；
ＩＩＩ：白血球除去フィルター；[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for collecting blood from which leukocytes have been removed after capturing leukocytes remaining in a leukocyte removal filter. According to the method of the present invention, blood from which leukocytes remaining in a leukocyte removal filter have been removed can be collected while suppressing release of cytokines and mediators from captured leukocytes and platelets. The present invention also relates to a device for collecting the blood from which the white blood cells have been removed, and a collection system.
[0002]
[Prior art]
In recent years, in the field of blood transfusion, many side effects due to leukocyte contamination in blood products have been known. In order to prevent this side effect, leukocytes are removed from blood products for transfusion by a leukocyte removal filter using a material such as polyester nonwoven fabric or cotton cotton.
[0003]
On the other hand, leukocytes are used as a leukocyte removal filter for the treatment of autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus, malignant rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, ulcerative colitis, Crohn's disease, leukemia, cancer, or immunosuppression before transplantation. The technology for selective removal has been advanced. Currently, leukocyte removers using a nonwoven fabric or the like as a filter have been developed, and these leukocyte removers are required to have a high ability to remove leukocytes.
[0004]
Conventionally, when such a leukocyte removal filter is used, the blood from which the leukocytes remaining on the leukocyte removal filter have been removed after the leukocyte removal treatment is often collected with a physiological saline solution in the same direction as the blood treatment. However, in this recovery method, since leukocytes and platelets are activated by being adsorbed to a porous material, a flat membrane, a nonwoven fabric, a woven fabric, particles, and the like, which are filter media in a leukocyte removal filter, the temperature of a physiological saline solution increases. Change, viscosity change, pH change, flow rate change by injection of physiological saline, etc., various external physical and chemical stimuli release cytokines and mediators from leukocytes and platelets, and cytokine And mediators could be mixed in high concentrations.
[0005]
Patent Document 1 discloses that a bead-like leukocyte removing material made of cellulose diacetate is used to contact a carrier having a higher affinity for inflammatory cells than lymphocytes, and the inflammatory cells thus obtained are adsorbed and removed. A method for treating an inflammatory disease characterized by returning treated blood to the patient is described.When returning treated blood, a physiological solution is allowed to flow in from a blood outlet to collect blood from which leukocytes have been removed. No method is disclosed.
[0006]
Further, in Patent Document 2, an upper bag for storing blood, a leukocyte removal filter, and a lower bag for storing blood after leukocyte removal are connected in this order, and air is sent between the upper bag and the leukocyte removal filter to remove remaining blood. A recovery method to reduce the amount is disclosed. However, this method does not use a physiological solution and collects blood in the same direction as the blood processing, and is not sufficient as a method for recovering blood from which leukocytes remaining on the leukocyte removal filter have been removed.
[0007]
Further, in
[0008]
[References]
[Patent Document 1]
JP-A-7-178167
[Patent Document 2]
JP-A-7-299120
[Patent Document 3]
JP-A-11-322618
[0009]
[Problems to be solved by the invention]
The present invention, when recovering blood from which leukocytes have been removed from leukocyte-removing filters that have captured leukocytes, suppresses the risk of increased concentrations of cytokines and mediators and removes blood from which leukocytes have been removed from leukocyte-removing filters. It is intended to provide a method for recovery. Another object of the present invention is to provide an apparatus and a system for collecting such blood from which leukocytes have been removed.
[0010]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have conducted intensive studies to solve the above-described problems, and as a result, in the blood collecting step, the physiological solution was left in the leukocyte removal filter from the opposite direction of flowing the blood after flowing the blood. It was found that by collecting blood from which leukocytes had been removed, the risk of increased concentrations of cytokines and mediators could be suppressed, and that increases in the concentrations of cytokines and mediators were small, and that blood from which leukocytes had been removed could be recovered. Thus, the present invention has been accomplished.
[0011]
That is, the present invention provides a method for collecting blood from which leukocytes remaining in the leukocyte removal filter have been removed after flowing the blood through the leukocyte removal filter and causing the leukocyte removal filter to capture leukocytes. After flowing the leukocyte-removed filter from the blood inlet and the leukocyte-depleted blood flowing out from the blood outlet of the leukocyte-removing filter, a physiological solution was flowed from the blood outlet and the leukocytes remaining in the leukocyte-removing filter were removed. The present invention relates to a method for collecting blood from which leukocytes remaining in a leukocyte removal filter have been collected, wherein the blood is collected from a blood inlet of the filter. The present invention also relates to an apparatus and a collection system for collecting blood from which leukocytes have been removed, which is used in such a method.
[0012]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The leukocyte removal filter of the present invention refers to a filter in which a container having a blood inlet and a blood outlet is filled with a leukocyte removing material having affinity for leukocytes. The leukocyte-removing material is not particularly limited as long as it can remove leukocytes, and various materials can be used, and examples thereof include a porous body, a flat membrane, a nonwoven fabric, a woven fabric, and particles. Preferred shapes from the viewpoint of leukocyte removal include a porous body, a nonwoven fabric, and a woven fabric, and most preferably, a nonwoven fabric is favorably used.
[0013]
When the shape of the leukocyte removing material is a nonwoven fabric, the filament may be a monofilament or a multifilament, and may be a porous filament or an irregular filament.
[0014]
In the nonwoven fabric, a nonwoven fabric having an average fiber diameter of 0.8 μm or more and less than 50 μm is preferable. When the fiber diameter is large, it is difficult to secure the surface area of the substrate, the adsorption area of leukocytes decreases, and the performance of removing leukocytes decreases, which is not preferable.
On the other hand, if the fiber diameter is small, the risk of clogging of the removing material increases, which is not preferable. From the above viewpoints, the more preferable average fiber diameter is 1.0 μm or more and less than 30 μm, and most preferably 1.5 μm or more and less than 25 μm. Further, the leukocyte removal filter can be used favorably even if a prefilter having an average fiber diameter of 25 μm or more and less than 100 μm is arranged on the blood introduction part side of the leukocyte removal material for the purpose of removing aggregates and the like.
[0015]
Furthermore, in the case of a non-woven fabric, the bulk density is 0.10 g / cm in order to increase the efficiency of removing leukocytes. 3 0.45g / cm or more 3 It is also important to be less than. Bulk density 0.10g / cm 3 If the amount is less than the above range, the performance of removing leukocytes is undesirably reduced. On the other hand, the bulk density is 0.45 g / cm 3 The above case is not preferable because clogging is likely to occur. Furthermore, from the above viewpoint, more preferably 0.12 g / cm 3 0.45g / cm or more 3 Less than 0.13 g / cm 3 0.40 g / cm or more 3 Is less than.
[0016]
When the shape of the leukocyte removing material is granular, any shape such as a spherical shape and a polygonal spherical shape is usefully used. In addition, the surface is useful if it can remove leukocytes even if the surface is smooth or uneven. In addition, the particle size is useful if it is 50 μm or more and 10 mm or less. If the particle size is less than 50 μm, it is difficult to prevent outflow of the particles, which is not preferable. If the particle size is larger than 10 mm, a sufficient surface area cannot be obtained, which is not preferable. Therefore, it is preferably 80 μm or more and less than 8 mm, and most preferably 100 μm or more and less than 6 mm.
[0017]
The material of the leukocyte removing material of the present invention is not particularly limited as long as it does not easily damage blood cells, and various materials can be used, and examples thereof include organic polymers, inorganic polymers, and metals. Among them, organic polymers are preferable materials because of their excellent workability such as cutting. Materials such as organic polymers include natural polymers such as cellulose and / or derivatives thereof such as cellulose, cellulose acetate and cellulose diacetate; polyesters such as polyethylene terephthalate and polybutylene terephthalate; polyolefins such as polyethylene and polypropylene; and polyvinylidene fluoride. And polymer materials such as polyamide, polyimide, polyurethane, polysulfone, and polyacrylonitrile. Materials whose surfaces are modified with a polymer material for the purpose of imparting hydrophilicity to them are also usefully used.
[0018]
When these materials have an affinity for leukocytes without surface modification, they can be used as they are. When these functions cannot be exhibited without surface modification, it is preferable to use a surface-modified coating or the like for the purpose of exerting the functions.
In particular, for the purpose of removing leukocytes, those whose surface has been modified by a treatment such as coating are preferably used.
As the leukocyte-removing material, it is also possible to use a selective leukocyte-removing material imparted with platelet permeability by treating the surface with a material having a low platelet adsorption property such as coating.
On the other hand, platelet removability can be imparted by treatment such as surface coating of a material that enhances platelet adsorption, and any leukocyte-removing material is usefully used.
[0019]
As described above, the shape and material of the leukocyte removing material have been described.To summarize, as preferable examples of the leukocyte removing material, polyester non-woven fabrics such as polyethylene terephthalate and polybutylene terephthalate, cellulose, cellulose monoacetate, cellulose diacetate, and cellulose triacetate. Cellulose beads such as those described above, or materials whose surfaces are surface-modified by a method such as coating or radiation grafting are preferably used, but are not limited thereto.
[0020]
The leukocyte removal filter of the present invention is useful when the leukocyte removal rate is 30% or more. When the leukocyte removal rate is high, since the number of leukocytes captured by the leukocyte removal filter is large, when recovering blood from which leukocytes have been removed, the risk of mediator elevation increases, and the mediator suppression effect of the present invention is exerted. This is preferable.
Therefore, it is useful when the leukocyte removal rate is more preferably 50% or more, and most preferably 70% or more.
When removing a specific leukocyte fraction such as lymphocytes, granulocytes, monocytes, etc., the leukocyte removal rate of the specific leukocyte fraction can be used.
The leukocyte removal rate can be obtained from the number of white blood cells in the blood before and after the leukocyte removal filter during processing or at the time of target blood processing.If sampling is performed multiple times during processing, it can also be obtained from the average value of those removal rates. it can.
[0021]
In the present invention, the blood also includes blood containing a blood cell component such as a whole blood, a granulocyte-containing liquid, a lymphocyte-containing liquid, a monocyte-containing liquid, or a leukocyte-containing liquid such as those containing all of them, and a platelet-containing liquid. It is particularly useful when used on activated blood from allergies, inflammatory diseases and the like.
[0022]
When processing these bloods, an anticoagulant can be added to the blood for the purpose of blood anticoagulation. Examples of the anticoagulant include, but are not particularly limited to, compounds having anticoagulant activity, such as heparin, low molecular weight heparin, proteolytic enzyme inhibitors such as nafamostat mesilate and gabexate mesilate, ACD-A, CPD and the like. Suitable examples include citric acid and the like, and most preferably, heparin, nafamostat mesilate, and citric acid are preferably used.
[0023]
The collection of the present invention refers to an operation of collecting blood from which leukocytes remaining in a leukocyte removal filter have been removed, and it is preferable to collect platelets. In the present invention, the direction of collecting the blood remaining on the filter is from the blood outlet to the blood inlet of the leukocyte removal filter.
[0024]
When blood is allowed to flow into the leukocyte removal filter from the blood inlet of the leukocyte removal filter and leukocytes are removed, mediator-producing cells captured in the treated leukocyte removal filter are introduced in the same direction as the blood, such as physiological saline. When contacted with a physiological solution of, a mediator such as serotonin, histamine, thromboxane, leukotriene is produced.
[0025]
In contrast, when physiological saline was introduced from the blood outlet as in the recovery method of the present invention, a surprising effect of suppressing the increase in the mediator concentration of the recovered blood from which leukocytes had been removed was observed. The present invention has been made based on this effect. In the recovery method of the present invention, although the reason is not clear, it is presumed that the production solution was delayed or suppressed due to a delay in the time when the physiological solution was brought into contact with the mediator-producing cells, which had been largely captured near the leukocyte removal filter inlet. You.
[0026]
The physiological solution used in the present invention refers to a solution that does not adversely affect blood and a living body. For example, physiological saline, Ringer's solution, Ringer's lactate, Ringer's acetate, physiological saline such as Tyrode's solution, sugar-containing solutions such as glucose and dextran, citrate, heparin, proteins such as nafamostat mesilate and gabexate mesylate. Refers to a solution containing an anticoagulant such as a degrading enzyme inhibitor. Also, a mixed solution obtained by mixing the above-mentioned physiological salt solution, sugar-containing solution, and anticoagulant-containing solution at an arbitrary ratio can be used favorably. Furthermore, a solution obtained by diluting a mixture obtained by adding at least one of the physiological salt solution, the sugar-containing solution, and the anticoagulant-containing solution described above with another solution that does not adversely affect the living body is also preferably used. .
[0027]
Among these, physiological salt solution, Ringer's lactate solution, sugar-containing solution, anticoagulant-containing solution are used as they are, or a mixed solution mixed at an arbitrary ratio is preferably used. More preferably, physiological salt solution, sugar-containing solution is used. That is, the liquid or the anticoagulant content is used as it is.
[0028]
Hereinafter, the blood collection device of the present invention will be described.
FIG. 1 shows a first embodiment of the blood collection device of the present invention. The apparatus illustrated in FIG. 1 is an apparatus for collecting blood from which leukocytes remaining in a leukocyte removal filter have been removed, including the following.
Blood and physiological solution inlet I;
Leukocyte depletion filter III with blood inlet and blood outlet;
A first conduit 1 connecting the blood and physiological solution inlet and the blood inlet of the leukocyte removal filter;
Blood outlet II;
A second conduit 2 connecting the blood outlet of the leukocyte removal filter and the blood outlet;
A
A fourth conduit 4 branching from the first conduit between the third conduit branch point and the blood inlet of the leukocyte removal filter and connected to the second conduit;
In FIG. 1, A, B, C, D and E are clamps for securing the flow of blood and physiological solution.
[0029]
The blood introduction part of the present invention refers to a part from which blood to be processed is taken out, and examples thereof include a spike needle, a bottle needle, a blood collection needle, and a catheter.
In the present invention, the physiological solution introducing portion refers to a portion for removing a physiological solution from the physiological solution bag, and examples thereof include a spike needle, a pin needle, and a blood collection needle.
The blood and physiological solution introduction section referred to in the present invention can be liquid-tightly joined to a solution bag containing blood and physiological solution and the like. Also, if a luer lock or the like is used, it can be joined to a syringe pump. Further, in order to prevent gas from entering the circuit and keep the inlets for blood and physiological solution clean, a needleless mixed injection tube may be used. The physiological solution introduction unit may be a dedicated one, or the blood introduction unit may be diverted as it is.
[0030]
The conduit of the present invention is a conduit through which a solution such as blood and a physiological solution can be sent, and any conduit can be used as long as it can be sent safely to a living body. In addition, any material can be used as long as no harmful substance is eluted by a solution such as blood or a physiological solution. For example, vinyl chloride, silicon, polypropylene, polyethylene and the like can be mentioned. From the viewpoint of strength, vinyl chloride is preferably used.
The blood outlet of the present invention refers to a part that returns blood, and can be the same as the blood inlet.
[0031]
In the apparatus of the present invention, a clamp such as a plate clamp, a roller clamp, a cantilever, a mechanical clamp, or the like can be appropriately used for the conduit. It is very useful in operation if there are at least one preferred clamp location in the first, second, third, and fourth conduits.
[0032]
A drip chamber, a heating bag, a tube for a pump, a pressure measuring tube, a pressure measuring device, a pump, and the like can be appropriately added to the device.
[0033]
FIG. 2 shows a second embodiment of the apparatus of the present invention.
Blood and physiological solution inlet I;
Leukocyte depletion filter III with blood inlet and blood outlet;
A first conduit 1 connecting the blood and physiological solution inlet and the blood inlet of the leukocyte removal filter;
Blood outlet II;
A second conduit 2 connecting the blood outlet of the leukocyte removal filter and the blood outlet;
A
A fifth conduit 5 branching from the first conduit at substantially the same location as the third conduit branch point and connected to the second conduit;
including. In addition, the blood introduction part and the physiological solution introduction part may be provided separately, and each may be connected to the first conduit 1, or one apparatus may be used in common.
Furthermore, the substantially same position of the fifth conduit may be a branch from between the third conduit branch point and the leukocyte removal filter. It is preferable to branch from a position close to the conduit branch point.
In FIG. 2, A, B, C, D, and F are clamps for securing the flow of blood and physiological solution.
[0034]
Hereinafter, the system of the present invention will be described in detail.
The system of the present invention will be described with reference to FIG. Blood and physiological solution inlet I; leukocyte removal filter III with blood inlet and blood outlet;
A first conduit 1 connecting the blood and physiological solution inlet I and the blood inlet of the leukocyte removal filter III;
Blood outlet II;
A second conduit 2 connecting the blood outlet of the leukocyte removal filter III and the blood outlet II;
A
A fourth conduit 4 branched from the first conduit 1 between the third conduit branch point and the blood inlet of the leukocyte removal filter III and connected to the second conduit;
including. In addition, the blood introduction part and the physiological solution introduction part may be provided separately, and each may be connected to the first conduit 1, or may be shared by one device. Furthermore, the fourth conduit is preferably closer to the third conduit branch to efficiently collect blood remaining between the third conduit branch and the leukocyte depletion filter inlet.
[0035]
In the system of the present invention, when blood is caused to flow through the leukocyte removal filter III and leukocyte is captured by the leukocyte removal filter III, the blood is introduced into the blood introduction part I, the first conduit 1, the leukocyte removal filter III, and the second conduit. It can be operated so that it flows in the order of 2, blood outlet II. Further, when recovering blood from which leukocytes remaining in the leukocyte removal filter have been removed thereafter, the first conduit 1 from the physiological solution introducing portion I to the portion where the
[0036]
In the system of the present invention, a clamp such as a plate clamp, a roller clamp, a cantilever, a mechanical clamp, or the like can be appropriately used for the conduit. It is very useful in operation if there are at least one preferred clamp location in the first, second, third, and fourth conduits.
[0037]
Further, a second embodiment of the system of the present invention will be described with reference to FIG.
Blood and physiological solution inlet I;
Leukocyte depletion filter III with blood inlet and blood outlet;
A first conduit 1 connecting the blood and physiological solution inlet and the blood inlet of the leukocyte removal filter;
Blood outlet II;
A second conduit 2 connecting the blood outlet of the leukocyte removal filter and the blood outlet;
A
A fifth conduit 5 branching from the first conduit at substantially the same location as the third conduit branch point and connected to the second conduit;
including. In addition, the blood introduction part and the physiological solution introduction part may be provided separately, and each may be connected to the first conduit 1, or one apparatus may be used in common.
Further, substantially the same location of the fifth conduit is defined as the fifth conduit branching adjacent to the third conduit branch point or the third conduit having a flow path such as a four-way pipe. Means that it is incorporated into It is preferable that the branch points have such a positional relationship, since blood recovery loss at the time of blood return is minimized.
[0038]
In the system of the present invention, when blood is caused to flow through the leukocyte removal filter III and leukocytes are captured by the leukocyte removal filter III, the blood is introduced into the blood introduction part I, the first conduit 1, the leukocyte removal filter III, and the second conduit. It can be operated so that it flows in the order of 2, blood outlet II. On the other hand, when the leukocyte-depleted blood remaining in the leukocyte-removing filter is subsequently collected, the first conduit 1 from the physiological solution introducing portion I to the portion where the third conduit is branched from the physiological solution introducing portion I, The
[0039]
【Example】
Next, examples of the present invention will be described, but the present invention is not limited thereto.
Embodiment 1
In a device as shown in FIG. 1, a non-woven fabric made of polyester fiber having an average fiber diameter of 2.7 μm (a basis weight of 90 g / m 2) was used as a leukocyte removal filter III. 2 , 0.42 mm thick) was cut into a 75 mm circle, and sandwiched vertically with a polyethylene filter having a pore size of 90 μm, and 10 sheets were packed in a column for use.
[0040]
This was performed using the circuit of FIG. With the clamps C and E of FIG. 1 closed and the clamps A, B and D opened, human fresh blood (leukocyte count: 4,370 / μL, platelet count: 108, (000 / μL) (Nafamostat mesilate concentration: 0.012 mg / ml) 400 ml of blood was flowed at 20 ml / min by a blood pump to remove leukocytes. Next, with clamps A, B and D closed and clamps C and E open, 40 ml of physiological saline flow at a flow rate of 20 ml / min from the blood outlet of the leukocyte removal filter and the leukocyte removal filter from the blood inlet of the leukocyte removal filter. The leukocyte-depleted blood remaining in the blood was collected, and the physiological saline flowing out was combined to obtain a collected liquid. The histamine concentration and serotonin concentration of the blood before the treatment and 40 ml of the collected solution were measured using an EIA kit (manufactured by Immunotech). The histamine and serotonin concentrations were measured, and the respective rate of increase was determined by the following equations (1) and (2). The number of leukocytes in the blood before the leukocyte removal filter treatment and in the blood after the treatment was measured by a multi-item automatic blood cell analyzer (manufactured by Sysmex), and the leukocyte removal rate was determined by the following equation (3). Table 1 shows the results.
[0041]
Histamine concentration increase rate = Histamine concentration of the collected solution collected by physiological saline / Histamine concentration of the blood before treatment..formula (1)
Serotonin concentration increase rate = Serotonin concentration of collected solution collected by physiological saline / Serotonin concentration of blood before treatment: Formula (2)
Leukocyte removal rate = {1− (the number of white blood cells in the blood after the leukocyte removal filter treatment / the number of white blood cells in the blood before the treatment)} × 100 (3)
[0042]
[Comparative Example 1]
This was performed using the circuit of FIG. In the same manner as in Example 1, clamps C and E in FIG. 1 were closed, and clamps A, B and D were opened, and fresh human blood (white blood cell count: 4,370 / (μL, platelet count: 180,000 / μL) (nafamostat mesilate concentration: 0.012 mg / ml) 400 ml of blood was flowed at 20 ml / min by a blood pump to remove leukocytes. Next, without performing a clamping operation, 40 ml of physiological saline is flowed at a flow rate of 20 ml / min from the blood inlet of the leukocyte removal filter, and blood from which leukocytes remaining in the leukocyte removal filter have been removed is collected from the blood outlet of the leukocyte removal filter. Then, the physiological saline solution flowing out was combined to obtain a collected solution. The histamine concentration and the serotonin concentration of the blood and the collected liquid 40 ml before the same operation treatment as in Example 1 were measured, and the histamine concentration increase rate and the serotonin concentration increase rate were calculated from the formulas (1) and (2) described in Example 1. I asked. Further, the number of leukocytes was measured by a multi-item blood cell analyzer (manufactured by Sysmex) in the same manner as in Example 1, and the leukocyte removal rate was determined by the formula (3) described in Example 1. Table 1 shows the results.
[0043]
[Table 1]
Embodiment 2
Non-woven fabric (90 g / m2) made of polyester fiber having an average fiber diameter of 2.7 μm 2 Was cut into a width of 150 mm and a length of 760 mm and wound around a polyethylene cylindrical mesh having a diameter of 3.4 mm. Next, a nonwoven fabric (30 g / m2) made of polyester fiber having an average fiber diameter of 12 μm 2 Was used as a first pre-filter and wound with a width of 150 mm. Furthermore, a nonwoven fabric (50 g / m2) made of polyester fiber having an average fiber diameter of 33 μm 2 Weight) was used as a second prefilter, and wound with a width of 150 mm. A 150 mm polyethylene mesh was wound around the outside. The diameter of this cylinder was 39 mm. Both ends of this cylinder are closed with urethane, and a cylindrical polycarbonate container having an inner diameter of 41 mm having an inlet and an outlet for blood at the ceiling and the bottom respectively. The outer peripheral surface of the cylinder is the blood inlet of the container, and the inner peripheral surface is the blood outlet. To give a leukocyte removal filter III. Blood from which leukocytes had been removed was collected using an apparatus as shown in FIG. 2 incorporating this filter.
[0045]
This was performed using the circuit of FIG. With the clamps C and F in FIG. 2 closed and the clamps A, B and D opened, heparin added as an anticoagulant fresh bovine blood (white blood cell count: 4,500 / μL, platelet count: 150,000 / μL) ) (Heparin concentration: 1000 IU / L) 3000 mL was flowed at a constant flow rate of 50 mL / min at room temperature using a blood pump to remove leukocytes. Next, with clans A and B closed and clamps C, D and F opened, 400 ml of physiological saline flow at a flow rate of 50 ml / min from the blood outlet of the leukocyte removal filter, and the leukocyte removal filter from the blood inlet of the leukocyte removal filter. The leukocyte-depleted blood remaining in the blood was collected, and the physiological saline flowing out was combined to obtain a collected liquid. The histamine concentration and serotonin concentration of the blood before the treatment and 400 ml of the collected solution were measured by an EIA kit (manufactured by Immunotech). The histamine and serotonin concentrations before and after the collection were determined in the same manner as in Example 1, and the respective rate of increase in the concentrations were determined from the equations (1) and (2) described in Example 1. Further, in the sample obtained by pooling all the processed blood, the number of leukocytes was measured by a multi-item automatic blood cell analyzer (manufactured by Sysmex) in the same manner as in Example 1, and the leukocyte removal rate was obtained from the equation (3) described in Example 1. Was. Table 2 shows the results.
[0046]
[Comparative Example 2]
This was performed using the circuit of FIG. In the same manner as in Example 2, with the clamps C and F of FIG. 2 closed and the clamps A, B and D opened, heparin was added as an anticoagulant and fresh bovine blood (white blood cell count: 4,500 / μL, platelet count) : 150,000 / μL) (Heparin concentration: 1000 IU / L) 3000 mL was flowed at a constant flow rate of 50 mL / min at room temperature using a blood pump to remove leukocytes. Next, 400 ml of physiological saline is allowed to flow at a flow rate of 50 ml / min from the blood inlet of the leukocyte removal filter at a flow rate of 50 ml / min without performing a clamp operation, and blood from which leukocytes remaining in the leukocyte removal filter have been removed is collected from the blood outlet of the leukocyte removal filter. Then, the physiological saline solution flowing out was combined to obtain a collected solution. Further, the histamine concentration and the serotonin concentration of 400 ml of the blood and the collected liquid before the same operation treatment as in Example 2 were measured, and the histamine concentration increase rate and the serotonin concentration increase rate were determined by the formulas (1) and (2) described in Example 1. ). Further, the number of leukocytes was measured by a multi-item automatic blood cell analyzer (manufactured by Sysmex) in the same manner as in Example 1, and the leukocyte removal rate was determined from the equation (3) described in Example 1. Table 2 shows the results.
[0047]
[Table 2]
【The invention's effect】
According to the present invention, when recovering blood from which leukocytes have been removed from a leukocyte removal filter after capturing leukocytes, release of cytokines and mediators from the captured leukocytes and platelets can be suppressed.
[0049]
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a plan view showing a configuration example of an apparatus or a system for collecting blood from which leukocytes remaining in a leukocyte removal filter of the present invention has been removed.
FIG. 2 is a plan view showing a configuration example of an apparatus or a system for collecting blood from which leukocytes remaining in a leukocyte removal filter of the present invention have been removed.
[0050]
[Explanation of symbols]
1: a first conduit connecting an inlet, such as blood and physiological solution, to a blood inlet of a leukocyte removal filter;
2: a second conduit connecting the blood outlet of the leukocyte removal filter and the blood outlet;
3: a third conduit branched from the first conduit and connected to the second conduit;
4: a fourth conduit branched from the first conduit between the third conduit branch point and the blood inlet of the leukocyte removal filter and connected to the second conduit;
5: a fifth conduit branched from the first conduit at substantially the same location as the third conduit branch point and connected to the second conduit;
[0051]
A: Clamp A located near the junction of the first conduit with the third conduit;
B: clamp B present between the junction of the second conduit with the fourth conduit and the junction of the third conduit with the third conduit;
C: Clamp C present near the junction of the third conduit with the first conduit;
D: a clamp D which is present near the branch point of the first conduit with the fourth conduit and is present on the branch point side with the third conduit with respect to the fourth conduit branch point;
E: clamp E present near the junction of the fourth conduit with the first conduit;
F: Clamp F present near the junction of the fifth conduit with the first conduit;
[0052]
I: introduction of blood and physiological solution;
II: blood outlet;
III: leukocyte removal filter;
Claims (6)
血液入口および血液出口を有する白血球除去フィルター；
血液および生理的溶液導入部と白血球除去フィルターの血液入口とを接続する第一の導管；
血液導出部；
白血球除去フィルターの血液出口と血液導出部とを接続する第二の導管；
第一の導管から分岐し、第二の導管に接続された第三の導管；
第一の導管の、第三の導管分岐点と白血球除去フィルターの血液入口との間から分岐し、第二の導管に接続された第四の導管；
よりなる白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収するための装置。Blood and physiological solution inlets;
A leukocyte removal filter having a blood inlet and a blood outlet;
A first conduit connecting the blood and physiological solution inlet and the blood inlet of the leukocyte removal filter;
Blood outlet;
A second conduit connecting the blood outlet of the leukocyte removal filter and the blood outlet;
A third conduit branched from the first conduit and connected to the second conduit;
A fourth conduit branching from the first conduit between the third conduit branch point and the blood inlet of the leukocyte removal filter and connected to the second conduit;
An apparatus for recovering blood from which leukocytes remaining in a leukocyte removal filter.
血液入口および血液出口を有する白血球除去フィルター；
血液および生理的溶液導入部と白血球除去フィルターの血液入口とを接続する第一の導管；
血液導出部；
白血球除去フィルターの血液出口と血液導出部とを接続する第二の導管；
第一の導管から分岐し、第二の導管に接続された第三の導管；
第一の導管の、第三の導管分岐点と実質的に同じ位置から分岐し、第二の導管に接続された第五の導管；
よりなる白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収するための装置。Blood and physiological solution inlets;
A leukocyte removal filter having a blood inlet and a blood outlet;
A first conduit connecting the blood and physiological solution inlet and the blood inlet of the leukocyte removal filter;
Blood outlet;
A second conduit connecting the blood outlet of the leukocyte removal filter and the blood outlet;
A third conduit branched from the first conduit and connected to the second conduit;
A fifth conduit branching from the first conduit at substantially the same location as the third conduit branch point and connected to the second conduit;
An apparatus for recovering blood from which leukocytes remaining in a leukocyte removal filter.
血液入口および血液出口を有する白血球除去フィルター；
血液および生理的溶液導入部と白血球除去フィルターの血液入口とを接続する第一の導管；
血液導出部；
白血球除去フィルターの血液出口と血液導出部とを接続する第二の導管；
第一の導管から分岐し、第二の導管に接続された第三の導管；
第一の導管の、第三の導管分岐点と白血球除去フィルターの血液入口との間から分岐し、第二の導管に接続された第四の導管；
を含み、白血球除去フィルターに血液を流し、該白血球除去フィルターに白血球を捕捉させるときは、血液が血液導入部、第一の導管、白血球除去フィルター、第二の導管、血液導出部、の順に流れる様に操作可能、かつ、その後白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収するときは、生理的溶液が生理的溶液導入部から第一の導管と第三の導管とが分岐している部分までの第一の導管、第三の導管、第三の導管に接続されている部分から白血球除去フィルターまでの第二の導管、白血球除去フィルター、白血球除去フィルターから第四の導管が分岐している部分までの第一の導管、第四の導管、第四の導管に接続されている部分から血液導出部までの第二の導管、血液導出部の順に流れる様に操作可能な、白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収するためのシステム。Blood and physiological solution inlets;
A leukocyte removal filter having a blood inlet and a blood outlet;
A first conduit connecting the blood and physiological solution inlet and the blood inlet of the leukocyte removal filter;
Blood outlet;
A second conduit connecting the blood outlet of the leukocyte removal filter and the blood outlet;
A third conduit branched from the first conduit and connected to the second conduit;
A fourth conduit branching from the first conduit between the third conduit branch point and the blood inlet of the leukocyte removal filter and connected to the second conduit;
When blood is passed through the leukocyte removal filter and the leukocyte removal filter is caused to capture leukocytes, the blood flows in the order of the blood introduction part, the first conduit, the leukocyte removal filter, the second conduit, and the blood outlet part. When collecting blood from which the leukocytes remaining in the leukocyte-removing filter have been removed, the physiological solution branches off from the physiological solution introduction part into the first conduit and the third conduit. The first conduit, the third conduit, the second conduit from the part connected to the third conduit to the leukocyte removal filter, the leukocyte removal filter, the fourth conduit from the leukocyte removal filter to the part Leukocyte depletion operable to flow in the following order: a first conduit up to a portion, a fourth conduit, a second conduit from a portion connected to the fourth conduit to a blood outlet, and a blood outlet. System for recovering leukocytes remaining in Iruta was removed blood.
血液入口および血液出口を有する白血球除去フィルター；
血液および生理的溶液導入部と白血球除去フィルターの血液入口とを接続する第一の導管；
血液導出部；
白血球除去フィルターの血液出口と血液導出部とを接続する第二の導管；
第一の導管から分岐し、第二の導管に接続された第三の導管；
第一の導管の、第三の導管分岐点と実質的に同じ位置から分岐し、第二の導管に接続された第五の導管；
を含み、白血球除去フィルターに血液を流し、該白血球除去フィルターに白血球を捕捉させるときは、血液が血液導入部、第一の導管、白血球除去フィルター、第二の導管、血液導出部、の順に流れる様に操作可能、かつ、その後白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収するときは、生理的溶液が、生理的溶液導入部から第一の導管から第三の導管が分岐している部分までの第一の導管、第三の導管、第三の導管が接続されている部分から白血球除去フィルターまでの第二の導管、白血球除去フィルター、白血球除去フィルターから第五の導管が分岐している部分までの第一の導管、第五の導管、第五の導管が接続されている部分から血液導出部までの第二の導管、血液導出部の順に流れる様に操作可能な、白血球除去フィルターに残留する白血球が除去された血液を回収するためのシステム。Blood and physiological solution inlets;
A leukocyte removal filter having a blood inlet and a blood outlet;
A first conduit connecting the blood and physiological solution inlet and the blood inlet of the leukocyte removal filter;
Blood outlet;
A second conduit connecting the blood outlet of the leukocyte removal filter and the blood outlet;
A third conduit branched from the first conduit and connected to the second conduit;
A fifth conduit branching from the first conduit at substantially the same location as the third conduit branch point and connected to the second conduit;
When blood is passed through the leukocyte removal filter and the leukocyte removal filter is caused to capture leukocytes, the blood flows in the order of the blood introduction part, the first conduit, the leukocyte removal filter, the second conduit, and the blood outlet part. Operable, and when recovering blood from which leukocytes remaining in the leukocyte removal filter have been removed thereafter, the physiological solution is separated from the physiological solution introduction part by the third conduit from the first conduit. The first conduit, the third conduit, the second conduit from the part where the third conduit is connected to the leukocyte removal filter, the leukocyte removal filter, the fifth conduit from the leukocyte removal filter Leukocyte depletion operable to flow in the order of a first conduit, a fifth conduit, a fifth conduit, a second conduit from the portion to which the fifth conduit is connected to the blood outlet, and a blood outlet. System for recovering leukocytes have been removed blood remaining in the filter.
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