【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、抗菌作用及び防カビ作用を有する抗微生物剤に関する。より詳細には、本発明は食経験のある植物の抽出物を有効成分とする抗微生物剤に関する。さらに本発明は、当該抗微生物剤の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
古くから、私たちの身の回りの製品には、保存、消毒及び防カビ等を目的として多くの抗菌剤が使用されている。さらに１９９０年代半ばに生じた抗菌・防カビ製品ブームが後押しとなって、多種多様の抗微生物剤並びにその新たな用途が開発され、提案されるにいたっている。
【０００３】
２１世紀は安全とともに快適さが求められる時代といわれている。このため、抗微生物剤の利用の目的は、従来からの、材料の腐朽防止、劣化防止、腐食防止、食品や各種製品の変敗防止や保存性向上等に加えて、院内感染（メチシリン耐性黄色ぶどう球菌やバンコマイシン耐性腸球菌など）や食中毒（病原性大腸菌０−１５７やサルモネラ菌など）の予防及びレジオネラ菌増殖抑制などを目的とした感染防止、環境汚染防止などの衛生向上、並びに快適な生活やメンテナンス軽減のための悪臭防止、美観向上、及び清潔感向上へと広がりつつある。そして、その用途も、食品（保存料、日持ち向上剤、鮮度保持剤などとしての使用）、家庭用品（ブラシ製品、文房具、靴中敷きなどの雑貨品、家具等のインテリア、壁・床・天井などの被覆材料、トイレ・風呂場・キッチンなど水回り設備や用品などの抗菌・防カビ用途）、生活資材（繊維製品、皮革・紙製品、衣類、包装材料、包装容器などの抗菌・防カビ用途）、土建・塗料（固定構造物、建築物の内外装材料などの抗菌・防カビ用途）、機械・器具（電気・家電製品、機械、乗り物、光学器械、医療・福祉・衛生用器具などの抗菌・防カビ用途）、水処理（用水処理、廃水処理、汚泥処理など）、分離（濾過装置、濾過材、濾過機材など）、並びにその他、医療用途（医薬品など）、畜産・漁業用途（飼料添加物）、及び農業用途（農薬など）等と多岐に亘っている。
【０００４】
食品分野においては、従来、微生物の汚染、増殖、変質、変敗および品質の劣化を防止するために、種々の抗微生物剤が用いられてきた。たとえば、現在、安息香酸ナトリウムが中性飲料、茶系飲料および果汁飲料などに広く利用されている。この抗微生物剤は食品を保存中あるいは食品購入後の開封状態での菌の汚染や増殖を防止するために利用されている。
【０００５】
上記安息香酸ナトリウムを始めとする合成保存料（例えば、ソルビン酸、ソルビン酸カリウムなど）は抗菌活性に優れているものの、安全性の面から一般に天然物に由来する抗微生物剤の使用が好まれる傾向にある。しかしながら、天然物由来の抗微生物剤は抗菌活性の点で十分に満足する効果を示しがたい。このため、特に飲料において異物混入と誤認されるカビや酵母の発生を有効に抑えることのできる天然物由来の抗微生物剤は未だ見出されていないのが現状である。更に、飲料に適用する場合、幅広い抗菌スペクトルと安全性に加えて、混濁、沈殿及び着色等を生じることなく飲料の透明性を維持し、しかも味や風味に違和感を与えることのない抗微生物剤が求められる。
【０００６】
このため、天然物に由来する抗微生物剤を求めて、これまでも種々の試みが行われてきた。たとえば、シナモン、グローブ、オルガノ、タイム、セージ、オールスパイス、トウガラシには強い抗菌活性があることが報告されている。しかしながら、グローブ及びオルガノはグラム陰性菌に対して強い抗菌活性を有するものの、中性条件下や真菌に対しては抗菌性が殆ど認められていない（上田成子ら、日食工、２９，１１１（１９８２）、Ｕｅｄａら、日食工、２９，３８９（１９８２））。また、メース、ローレル、コショウ及びナツメグにはボツリヌス菌の発育を選択的に阻止する抗菌活性があることが報告されている。しかし、広い抗菌スペクトルを有するとの知見には至っていない（Ｈｕｈｔａｎｅｎｎ：Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｔ．，４３，１９５（１９８０））。
【０００７】
さらに、７０種類の植物の精油の中からシンナムアルデヒド、ペリルアルデヒド及びシトラールなど、防カビ作用のある化合物が見いだされているが（Ｋｕｒｉｔａら：Ａｇｒ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４５，９４５（１９８１））、抗菌作用のある化合物については知られていない。
【０００８】
本発明が対象とするコショウに関しては、従来より、コショウから精油を取り除いた残渣（抽出滓）の含水エタノール抽出物を用いて、グラム陽性菌、グラム陰性菌、乳酸菌、酵母に対する抗菌作用が検討されている。その結果、上記含水エタノール抽出物は１％添加量でセレウス菌に対して抗菌作用を示すことが報告されている（赤羽：新殺菌工学実用ハンドブック、第４章、１６６−１７８（１９８７））。しかし、かかる含水エタノール抽出物は、抗菌活性が極めて低いことに加えて、抽出物に由来して特有の味や臭いを有しており、特に食品への適用には解決すべき多くの問題を含んでいる。また同様に、コショウから精油を取り除いた残渣（抽出滓）を用い、それを再度有機溶媒抽出あるいは水抽出することによって抗菌活性を有する画分が取得できることが報告されている（特開平７−１５５１５２号公報）。しかし、その活性成分は明らかにされておらず、抗菌活性が極めて低い上に（抽出物０．１〜５％で抗菌活性を発現）、１日しか持続しないなど、実用性において多くの問題がある。
【０００９】
さらに、コショウの種子抽出物に関しては、ヘリコバクター・ピロリ菌に対する生育抑制効果（特開平８−１１９８７２号公報）が知られているが、その有効成分については明らかにされていない。この他にも、コショウ抽出物に酸化防止作用があることが報告されているが（特公平１−２１９５１号公報）、当該文献には抗微生物作用について一切記載されていない。
【００１０】
このように、従来より天然物に由来する抗微生物剤を求めて検討が進められているが、抗菌・抗カビ作用（抗微生物作用）が高く、しかも幅広い抗菌スペクトルを持つ成分は見いだされていないのが実情である。特に、食品に使用する場合には、食品本来の味、風味及び色に影響を与えないように、それ自体が味や臭いを有さず、また着色していないことが望まれる。そこで、このような食品に好適に使用できる天然物に由来する抗微生物剤の開発が求められている。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、食経験のある植物の抽出分画物を有効成分とする天然素材の抗微生物剤を提供することである。さらに、本発明は、当該抗微生物剤の製造方法を提供することである。
【００１２】
【課題を達成するための手段】
本発明者らは、上記課題の解決を求めて鋭意研究を重ねていたところ、コショウの１−シンナモイルピペリジンを含む溶媒抽出分画物に高い抗菌性及び防カビ性があることを見いだし、当該抽出分画物が各種製品、特に食品の抗菌剤及び防カビ剤として有効に利用できることを確認した。さらに当該抽出分画物を食品に適用することよって、微生物の増殖が抑制されて食品の変質（変敗・腐敗）による品質劣化を有意に防止できることを確認した。本発明はかかる知見に基づいて完成したものである。
すなわち、本発明は下記（１）〜（３）に掲げるものである：
（１）１−シンナモイルピペリジンを含有するコショウ抽出分画物を有効成分とすることを特徴とする抗微生物剤。
（２）上記（１）に記載の抗微生物剤を含有することを特徴とする食品。
（３）コショウから、溶媒を用いて１−シンナモイルピペリジンを含有するコショウ抽出分画物を抽出分画する工程を有する、請求項１の抗微生物剤の製造方法。
【００１３】
なお、本発明において、抗微生物剤とは抗菌剤と防カビ剤を包括的に意味するものである。
【００１４】
【発明の実施の形態】
本発明の抗微生物剤は、１−シンナモイルピペリジンを含有するコショウ抽出分画物を有効成分とすることを特徴とするものである。
【００１５】
１−シンナモイルピペリジンは、従来より合成化合物として公知の化合物であり（ＣＡＳ ＲＮ：５４２２−８１−１）、その製造方法も特開昭６１−２０５２２１号公報（実施例１２）、及びＶｏｒａｅｎｄｅｒ， Ｈｅｒｒｍａｎｎ， ＪＬＡＣＢＦ， Ｊｕｓｔｕｓ Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎ． Ｃｈｅｍ．， ３２０ （１９０２），９１によって公知になっている。しかしながら、１−シンナモイルピペリジンが植物、特に本発明が対象とするコショウに含まれていることは本発明者らによって初めて見いだされた知見である。さらに、１−シンナモイルピペリジンに抗菌作用及び防カビ作用（抗微生物作用）があることについても、今まで知られておらず、本発明者らによって初めて見いだされた知見である（特願２００２−２６２４５６号）。なお、当該本件出願人による同日付けの特許出願（特願２００２−２６２４５６号）において、１−シンナモイルピペリジンに、合成保存料として用いられるソルビン酸や安息香酸以上の抗菌・防カビ活性があることを示している。
本発明は、食品などのように安全性が求められる分野に好適に利用できる抗微生物剤を提供するものである。
【００１６】
本発明で用いられるコショウは、コショウの果実であり、具体的にはコショウ科（Ｐｉｐｅｒａｃｅａｅ）コショウ（Ｐｉｐｅｒ ｎｉｇｒｕｍ ＬＩＮＮＥ）の実の完熟果（白コショウ）あるいは未熟な果実（黒コショウ）などを例示することができる。
【００１７】
本発明の抗微生物剤の有効成分として用いるコショウ抽出分画物は、コショウ抽出物の１−シンナモイルピペリジンを含有する画分であればよく、その限りにおいて抽出方法や分画方法を特に問うものではない。
【００１８】
具体的には、上記コショウをそのまま（生）若しくは破砕して、またはコショウ乾燥物をそのまま若しくは破砕して、溶媒抽出操作に供することができる。抽出操作に用いられる溶媒としては、亜酸化窒素、アセトン、エタノール、エチルメチルケトン、グリセリン、酢酸エチル、酢酸メチル、ジエチルエーテル、シクロヘキサン、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，２−トリクロロエテン、二酸化炭素、１−ブタノール、２−ブタノール、ブタン、１−プロパノール、２−プロパノール、プロパン、プロピレングリコール、ヘキサン、水、およびメタノールから選ばれる１種または２種以上の溶媒を挙げることができる。好ましくはエタノール、水、二酸化炭素、ヘキサン、酢酸エチル及び四塩化炭素から選ばれる１種または２種以上の組み合わせを挙げることができる。
有機溶媒と水との混合溶媒としては、好適にはエタノールと水との混合溶媒（含水エタノール）を挙げることができる。この場合、抽出に使用するコショウ０．１〜７５重量部に対して含水エタノールを２５〜９９．９重量部の割合で使用することが好ましく、さらにはコショウ６０〜４０重量部に対して含水エタノールを４０〜６０重量部の割合で使用することが好ましい。
また、本発明のコショウ抽出分画物は従来公知の方法、例えば、亜臨界抽出や超臨界抽出等によってコショウから抽出された１−シンナモイルピペリジンを含有する画分でもよい。
【００１９】
本発明が対象とする微生物としては、特に細菌類及び真菌類を挙げることができる。より具体的には、細菌類としては、バシラス属に属する芽胞形成グラム陽性桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ， Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ブドウ球菌属に属するグラム陽性球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）またはミクロコッカス属に属するグラム陽性球菌（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）、ラクトバチルス属に属する無芽胞グラム陽性嫌気性桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ， Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ［乳酸菌］）（以上、グラム陽性菌）；シュードモナス属に属するグラム陰性好気性桿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ［緑膿菌］）、腸内細菌科に属するグラム陰性通性嫌気性桿菌〔Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ［大腸菌］、Ｐｒｏｔｅｕｓ属に属する腸内細菌（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）〕（以上、グラム陰性菌）を挙げることができる。また、真菌類としては、麹カビ（Ａｓｐｅｕｇｉｌｌｕｓ属［Ａｓｐｅｕｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ］）、毛カビ（Ｍｕｃｏｒ属［Ｍｕｃｏｒ ｒｅｃｅｍｅｎｓｕｓ ｆ．ｓｐ．ｓｐｈａｒｏｓｐｏｒｏｕｓ］）及び黒色真菌（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ属［Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃｏｌｏｃａｓｉａｅ］）などの糸状菌、並びにカンジダ菌（Ｃａｎｄｉｄａ属［Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ］）、ピキア菌（Ｐｉｃｈｉａ属［Ｐｉｃｈｉａ ａｎｏｍａｌａ］）、サッカロミセス菌（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ 属［Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ］）等の酵母菌を挙げることができる。
本明細書でいう「抗微生物作用」とは、少なくとも上記細菌類及び真菌類の増殖を抑制する作用を意味する。ゆえに、本発明の「抗微生物剤」とは、対象物またはその表面における上記細菌類及び真菌類の増殖を抑制する目的で使用され、当該所期の効果を奏する物質を意味する。また本発明の「抗微生物処理」とは、対象物またはその表面における上記細菌類及び真菌類の増殖を抑制する目的で行われ、当該所期の効果を奏する処理を意味する。
【００２０】
本発明の抗微生物剤は、１−シンナモイルピペリジンを含有するコショウ分画抽出物を有効成分として含有するものであればよく、コショウ分画抽出物からなるものであってもよいし、また本発明の効果を損なわないことを限度として他の成分を含有していてもよい。
【００２１】
他の成分としては、抗微生物剤の適用対象物や用途によって異なり、規定することはできないが、一例として、例えば食品に用いる場合には通常食品衛生上許容される担体や添加剤を、また医薬用途、医薬部外用途、または香粧品用途に用いる場合には薬学上許容される担体や添加剤などを挙げることができる。具体的には、食品に用いる場合に用いられる添加剤としては、本発明の効果を妨げない範囲で、砂糖、果糖、ぶどう糖、デキストリン、環状オリゴ糖などの糖質；ソルビトールなどの糖アルコール；グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルなどの乳化剤；リゾチーム、ポリリジン、しらこたん白などのたんぱく系保存料；キトサン、キサンタンガムなどのガム質；ソーマチン、スクラロース、アリテーム、アスパルテーム等の高甘度甘味料；清酒、焼酎などの蒸留酒；油脂、グリシン、酢酸ナトリウムなど製造用剤を例示することができる。
【００２２】
また、上記担体としては水、エタノール等の低級アルコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコールが挙げられる。これらは１種単独で使用されてもまた２種以上の組み合わせで使用されてもよい。好ましくは水とエタノールとの混合物（含水エタノール）である。なお、かかる含水エタノールには、水とエタノールとの混合物の他、ウォッカや焼酎等の蒸留酒や清酒が含まれる。また、本発明の抗微生物剤の形態も、少なくとも上記細菌類及び真菌類の増殖を抑制する作用を有することを限度として特に制限されず、抗微生物剤の適用対象物や用途に応じて適宜選択調製することができる。例えば、食品分野においては、錠剤、顆粒、粉末状等の固形物、液状などの液体、またはペースト状等の半固形物の形態で用いることができる。例えは、必要に応じてデキストリン、シクロデキストリン、糖アルコールなどの賦形剤を加え、凍結乾燥、噴霧乾燥、凍結粉砕などの手法を用いて粉末化して使用することもできる。好ましくは、液状、特にエタノールを１０〜６０重量％の割合で含むエタノール製剤の形態である。
本発明の抗微生物剤は、少なくとも上記細菌類及び真菌類の増殖を抑制することが求められる各種製品または対象物の抗微生物処理に好適に使用することができる。かかる製品または対象物としては、（１）上記細菌類または上記真菌類が増殖することによって生じる製品の変質（変敗、腐敗）や劣化の防止が求められるもの―例えば、食品、香粧品、医薬品、医薬部外品、飼料、その他、各種工業用材料−、（２） 上記細菌類または上記真菌類が増殖することによって生じる製品または対象物の汚れや悪臭発生の防止が求められるもの―例えば、家庭用品（ブラシ製品、文房具、靴中敷きなどの雑貨品、家具等のインテリア、壁・床・天井などの被覆材料、トイレ・風呂場・キッチンなど水回り設備や用品）、生活資材（繊維製品、皮革・紙製品、衣類など）、機械・器具（電気・家電製品、乗り物など）、水（用水、廃水、汚泥など）、（３）上記細菌類または上記真菌類が増殖することによって生じる疾病（食中毒や感染症）発生の予防が求められるもの、または予防に有効なもの−例えば、食品、家庭用品（家具等のインテリア、壁・床・天井などの被覆材料）、機械・器具（医療・福祉・衛生用器具など）、生活資材（繊維製品、皮革・紙製品、衣類、包装材料、包装容器）、建築物の内外装材料など−、その他を挙げることができる。
【００２３】
本発明の抗微生物剤は、例えば該抗微生物剤を上記対象物に添加混合するか、対象物の表面に塗布若しくは噴霧するか、または対象物を抗微生物剤含有溶液中に浸漬するか、各種の処理方法によって、当該対象物に対してその抗微生物作用を発揮することができる。なお、対象物への添加配合は、対象製品の製造過程で行われてもよいし、また最終製品に対して行われても良い。斯くして抗微生物処理された対象物は、対象物そのものまたはその表面における微生物（細菌類、真菌類）の増殖が抑制され、抗微生物作用を有することができる。
【００２４】
本発明の抗微生物剤の対象物への適用量は、対象物の種類や用途によって種々異なり、一概に規定することができないが、本発明の抗微生物剤を対象物（製品）の一成分として配合して用いる場合を例にすると、最終製品中の抽出分画物が１００μｇ／ｍｌ以上、好ましくは２００μｇ／ｍｌ以上となるような割合を挙げることができる。好ましくは２００〜１０，０００μｇ／ｍｌの範囲である。
【００２５】
本発明の１−シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出分画物を有効成分とする抗微生物剤は、コショウの食経験に基づいて安全性が確認されていることから、食品用の抗微生物剤として好適に使用することができる。斯くして、食品における微生物の増殖を抑制することにより食品の変質（変敗や腐敗）を防止して、食品の品質保持を行うことができる。
【００２６】
本発明が対象とする食品としては、コーヒー飲料、乳飲料、栄養強化飲料、スポーツドリンク、果汁入り飲料、炭酸飲料等の飲料類、かまぼこ、ちくわ、はんぺん、魚肉ハム、ソーセージ、すり身製品、魚介乾燥品、くん製などの水産製品、ハム、ソーセージ、ウインナソーセージ、ベーコン、挽き肉類などの畜産肉製品、サラダ、ハンバーグ、ぎょうざ、シュウマイ、佃煮、煮豆などの惣菜類、はくさい、きゅうり、野菜類などの浅漬けやキムチ、ザーサイ、たくあんなどの漬物類、いか塩辛、たこ塩辛、海老塩辛などの半固形水産製品、たれ、つゆなどの調味液類、みそ、しょうゆなどの調味料、生めん、中華めん、ゆでめんなどのめん類、カット野菜、果物などの生野菜類及びこれらの半調理品、半加工のまま冷凍した食品類を例示することができる。なお、上記は単に例示であって、これらの食品のみに適用できるわけではなく、他の食品に対しても適用することができる。
【００２７】
また、本発明の抗微生物剤は、本発明の効果を損なわないことを限度として、他の抗微生物剤と併用して用いることもできる。
【００２８】
【実施例】以下、本発明の内容を以下の実験例及び実施例を用いて具体的に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【００２９】
（実験例１：コショウ抽出物の調製）
乾燥した白コショウ（マレーシア国サワラク産）１００ｇを粉砕し、これに９５％エタノールと水とを１：１の割合で混合し調製した５０％含水エタノールを９００ｍｌ添加し、冷蔵庫（４℃）で３時間抽出を行う。これにケイソウ土１００ｇを加えろ過した後、約９００ｍｌの淡黄色清澄な抽出物（試料１）を得る。この抽出物の固形分はＢｘ３（アタゴ社製糖度計による測定値）であった。このコショウ抽出物の風味は白コショウ特有の香りを有し、イオン交換水で約１００分の１に希釈した溶液の味、風味は刺激臭が少なく、まろやかな淡白なものであった。
試料１に含まれる１−シンナモイルピペリジンは０．００６３％であった。
コショウ抽出物（試料１）のガスクロマトグラムを図１に示す。保持時間１３３．４ｍｉｎに１−シンナモイルピペリジンのピークが認められた。
ガスクロマトグラフの測定条件は以下の通りである。
使用した機器：ＨＰ６８９０ＧＣシステム。ＨＰ５９７３ＭＳシステム。
カラム：Ｊ＆Ｗ ＤＢ−ＷＡＸキャピラリー６０．０ｍｍ×２５０μｍ×０．２５μｍ
温度：開始温度５０℃（３℃／ｍｉｎ上昇）
注入量：１μｌ−ｓｐｌｉｔｌｅｓｓ
コショウからの精油の分析については、多くの成分が報告されている（Ｍｅｎｏｎ ｅｌａｌ．：Ｊ．Ｅｓｓｅｎｔ．Ｏｉｌ．Ｒｅｓ．，１３，１６６−１６９，（２００１）ほか）が、これまで１−シンナモイルピペリジンが見出された報告はこれまでなく、抗微生物活性の高い物質が新規に見出されたものである。
【００３０】
（実験例２：コショウ抽出物の分画）
２−１．コショウのヘキサン分画物
実験例１で調製したコショウ抽出物４００ｍｌを、シリカゲルカラムに充填し、抽出溶媒としてｎ―ヘキサンを使用して溶出し、溶媒を留去したヘキサン分画物０．５ｇを調製した（試料２）。
試料２に含まれる１−シンナモイルピペリジンは０．２８％であった。
【００３１】
２−２．コショウの酢酸エチル分画物
実験例２−１のヘキサン抽出後の残渣３００ｍｌを酢酸エチルで抽出し、その溶媒を留去し、酢酸エチル分画物３ｇを調製した（試料３）。
試料３に含まれる１−シンナモイルピペリジンは０．０２２％であった。
【００３２】
２−３．コショウの水分画物
実験例２−２の酢酸エチル抽出後の残渣３００ｍｌを熱水で抽出し、その水溶液を減圧濃縮し、水分画物５ｇを調製した（試料４）。
試料４に含まれる１−シンナモイルピペリジンは０％であった。
【００３３】
２−４．黒コショウの抽出物
実験例１の白コショウを黒コショウに変え、同様の方法を用いて調製し、黒コショウ抽出分画物を調製した（試料５）。
試料５に含まれる１−シンナモイルピペリジンは０．０００６４％であった。
以上の試料１〜５について、これらのコショウ抽出分画物が防カビ活性を有することを確認するため、次のような試験を行った。
【００３４】
（実施例１）
ろ紙法によるコショウ抽出物蒸気の殺胞子活性の測定による判定は次のように行った。
【００３５】
カビ（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃｏｌｏｃａｓｉａ ＩＦＯ６６９８）の胞子懸濁液を調製し、滅菌した１０×１０ｍｍのろ紙４枚に、胞子の懸濁液をそれぞれ０．０１ｍｌずつ滴下し、乾燥させる。滅菌した３０×３０ｍｍのろ紙に試料１〜５をぞれぞれの添加量の段階（１００、２００、４００、８００μｌなど１／２倍量あるいは２倍量で調製させる）で付着させる。試料１〜５を付着させたろ紙をシャーレの中央に置き、その周囲に胞子のついたろ紙を置き、ふたをかぶせ、テープでシールする。２７℃に保温し、１日、４日及び７日目に胞子の付着したろ紙を取り出し、ポテトデキストロース寒天培地の上に貼り付けて培養し、７日後にカビの発育の有無を観察し、最小殺胞子量を求める方法に準じた。
【００３６】
既知の精油については、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍに対して最小殺胞子量がシダーリーフでは２００μｌ、ヒノキ油では２００μｌ、シンナムアルデヒド０．２μｌ、ぺリラアルデヒドでは２μｌ、リナロールでは４００μｌであることが報告されており、精油の効果を調べる方法として適切な方法であった。
【００３７】
（結果）
試料 添加量 カビの発育の有無
試料１ ２００μｌ なし
試料２ ２００μｌ なし
試料３ ２００μｌ なし
試料４ ２００μｌ あり
試料５ ２００μｌ なし
５０％エタノール ２００μｌ あり
以上の結果から、水抽出分画物（試料４）とエタノールを除いて、カビの発育抑制効果があることがわかった。
【００３８】
（実施例２）
（調製方法）
菌の調製方法は表１に示した被検菌１）から６）はＭＲＳ培地で２５℃１日間の前培養を行い、被検菌７）〜８）はＭＲＳ培地を用い、９）〜１５）はニュートリエントブロスを用いてそれぞれ３５℃１日間の前培養を行った。上記の培地で増殖させた菌を１０３〜１０４個／ｍｌとなるように培地に添加（１ｍｌ／シャーレ）し、上記の実施例２−２のコショウ抽出物の酢酸エチル抽出分画物２ｇを５０％含水エタノールで１００倍に希釈した溶液を使用したときの菌の抑制効果を調べ、最小阻止濃度（ＭＩＣ）を調べた。
培養の条件は被検菌１）から６）は２５℃で、被検菌７）〜８）は嫌気ジャー内３５℃で、被検菌９）〜１５）は３５℃で２４〜９６時間培養した。
抗微生物剤の濃度（添加段階は１００μｇ／ｍｌを基にして、１／２ずつあるいは２倍づつに調製したものを使用）を変化させ、菌の生育を阻害するために必要な抗微生物剤の量を判定し、最小生育阻止濃度とした。
【００３９】
【表１】
【００４０】
（結果）
抗菌スペクトル実験の結果を表１に示すが、広い範囲の菌に抑制効果を示した。カビ、酵母及び乳酸菌に顕著な効果を示し、抗微生物剤として有効なコショウ抽出分画物であることがわかった。
【００４１】
これらの結果から本抗微生物剤を使用できる用途は広く、清涼飲料、中性飲料、茶系飲料などを始めとする食品、飲料以外に、たとえば、冷蔵庫内のカビに代表される家電製品、食器、まな板などの台所調理用品、布団、タオルなどの繊維関連製品、化粧版、壁紙、ダンボールなどの建築あるいは物流用材料、トイレ、浴槽などのトイレタリー、折り紙などの紙製品、靴、かばんなどの皮革製品、紙粘土などの玩具、消しゴム、フレキシブルディスクなどの文房具、弁当などのプラスチック容器やバランシートなどへ利用や医薬、医療機具、化粧品分野、虫歯菌や歯周病抑制などの口腔衛生、歯磨き分野、野菜や果実の圃場や選果場での微生物制御にも利用が可能であることがわかった。
【００４２】
（実施例３：コーヒー飲料への適用）
以下の処方でコーヒー飲料を調製した。
【００４３】
【表２】
【００４４】
※三栄源エフ・エフ・アイ株式会社の登録商標
＊三栄源エフ・エフ・アイ株式会社製
１−シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出物分画物（試料３）を添加したコーヒー飲料は、保存料を添加しない場合に見られるような品質の劣化や味の変化が見られず、飲料としては良好なものであった。
【００４５】
（実施例４：バナナ乳飲料への適用）
以下の処方でバナナ乳飲料を調製した。
【００４６】
【表３】
【００４７】
※三栄源エフ・エフ・アイ株式会社の登録商標
＊三栄源エフ・エフ・アイ株式会社製
シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出分画物（試料３）を添加したバナナ乳飲料は、保存料を添加しない場合に見られるような品質の劣化や味の変化が見られず、飲料としては良好なものであった。
【００４８】
（実施例５：果汁入り飲料への適用）
以下の処方で果汁入り飲料を調製した。
【００４９】
【表４】
【００５０】
※三栄源エフ・エフ・アイ株式会社の登録商標
＊三栄源エフ・エフ・アイ株式会社製
１−シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出分画物（試料３）を添加した果汁入り飲料は、保存料を添加しない場合に見られるような品質の劣化や味の変化が見られず、飲料としては良好なものであった。
【００５１】
（実施例６：酸乳飲料への適用）
以下の処方で酸乳飲料を調製した。
【００５２】
【表５】
【００５３】
＊三栄源エフ・エフ・アイ株式会社製
１−シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出分画物（試料３）を添加した酸乳飲料は、保存料を添加しない場合に見られるような品質の劣化や味の変化が見られず、飲料としては良好なものであった。
【００５４】
（実施例７：炭酸飲料への適用）
以下の処方で炭酸飲料を調製した。
【００５５】
【表６】
【００５６】
＊三栄源エフ・エフ・アイ株式会社製
１−シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出分画物（試料３）を添加した炭酸飲料は、保存料を添加しない場合に見られるような品質の劣化（白濁・沈殿）や味の変化が見られず、飲料としては良好なものであった。
（実施例８：茶飲料への適用）
以下の処方で茶飲料を調製した。
【００５７】
【表７】
【００５８】
※三栄源エフ・エフ・アイ株式会社の登録商標
＊三栄源エフ・エフ・アイ株式会社製
１−シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出分画物（試料３）を添加した紅茶飲料は、保存料を添加しない場合に見られるような品質の劣化や味の変化が見られず、飲料としては良好なものであった。
【００５９】
（実施例９：ポテトサラダ）
じゃがいも（煮熟、カット品）３００ｇ、にんじん（煮熟、カット品）５０ｇ、スライス玉ねぎ６０ｇ、スライスキュウリ８０ｇ、食酢１２．５ｇ、食塩２ｇ、こしょう０．０５ｇ及びマヨネーズ１００ｇの配合量に対して、１−シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出分画物（試料３）を２，０００ｐｐｍ添加してポテトサラダを製造し、各試験区２００ｇを滅菌ポリエチレン袋（２００ｍｌ容量）に充填し、密封したのち、３０℃での保存性を調べた。１−シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出分画物（試料３）は、サラダに対してサラダの７日間の保存性を改善した。
【００６０】
（実施例１０：はくさいの一夜漬け）
市販のはくさいを水洗したのち、各区１ｋｇを１０％食塩水に室温で５時間浸漬し、水切りを行った。これに２％食塩、０．１％グルタミン酸ナトリウム及び実施例８で使用した１−シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出分画物（試料３）を５，０００ｐｐｍ添加した調味液２５０ｇを添加し、滅菌ポリエチレン袋に詰め、２０℃に保存し、外観判定により、にごり状態を観察し、保存効果を判定した。１−シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出分画物（試料３）は、はくさいの一夜漬の１４日間の保存性を改善した。
【００６１】
（実施例１１：ロースハム（スライス））
豚ロース１０００ｇに対して、予め調製した水２６５ｇ、重合リン酸塩４ｇ、食塩２５ｇ、砂糖６ｇからなるピックル液３００ｇをインジェクションして、１０℃３日間塩漬したのち、手動式スタッファーを用いてケーシングに詰めスモークハウスで４０分間乾燥、くん煙を行い、中心温度が７５℃になるように加熱を行って、ロースハムを作成した。このロースハムを１−シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出分画物（試料３）（１０，０００ｐｐｍ）に１分間浸漬したのち風乾し、スライサーにかけて、２ｍｍ厚の薄切りハムとした。次に真空包装して２０℃に保存し、菌数の変化を調べた。１−シンナモイルピペリジンを含むコショウ抽出分画物（試料３）は、ロースハムの６０日間の保存性を改善した。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、本発明のコショウ抽出物（試料１）のガスクロマトグラムを示す図である。
【図２】図２は、本発明のコショウ抽出物（試料１）のマススペクトルデータを示す図である。[0001]
[Industrial applications]
The present invention relates to an antimicrobial agent having an antibacterial action and an antifungal action. More specifically, the present invention relates to an antimicrobial agent containing an extract of a plant that has experienced eating as an active ingredient. Further, the present invention relates to a method for producing the antimicrobial agent.
[0002]
[Prior art]
Since ancient times, many antibacterial agents have been used in products around us for the purpose of preserving, disinfecting and preventing mold. Further, with the boom of antibacterial and antifungal products generated in the mid 1990s, a wide variety of antimicrobial agents and new uses thereof have been developed and proposed.
[0003]
The 21st century is said to be an era where safety and comfort are required. Therefore, the purpose of the use of antimicrobial agents is not only to prevent decay, deterioration, and corrosion of materials, to prevent deterioration of foods and various products and to improve the storage stability, but also to prevent hospital-acquired infections (methicillin-resistant yellow Improvement of hygiene such as prevention of infection for prevention of staphylococci and vancomycin-resistant enterococci, food poisoning (pathogenic Escherichia coli 0-157, Salmonella, etc.), suppression of Legionella bacterial growth, prevention of environmental pollution, and comfortable living. It is spreading to prevent odor, improve aesthetics, and improve cleanliness to reduce maintenance. Its uses include foods (use as preservatives, shelf life improvers, freshness preservatives, etc.), household goods (brush products, stationery, miscellaneous goods such as shoe insoles, furniture interiors, walls, floors, ceilings, etc. Coating materials, antibacterial and antifungal applications for plumbing equipment and supplies such as toilets, bathrooms and kitchens), living materials (antibacterial and antifungal applications for textiles, leather and paper products, clothing, packaging materials, packaging containers, etc.) ), Civil engineering and paints (for antibacterial and antifungal purposes such as fixed structures, building interior and exterior materials, etc.), machinery and appliances (electric and home appliances, machinery, vehicles, optical instruments, medical, welfare and sanitary appliances, etc.) Antibacterial and antifungal applications), water treatment (water treatment, wastewater treatment, sludge treatment, etc.), separation (filtration equipment, filtration media, filtration equipment, etc.), and other medical uses (pharmaceuticals, etc.), livestock and fisheries uses (feed) Additives) and agricultural applications ( It is diversified and medicine, etc.), and the like.
[0004]
In the food field, various antimicrobial agents have conventionally been used to prevent contamination, growth, deterioration, deterioration and deterioration of quality of microorganisms. For example, at present, sodium benzoate is widely used in neutral drinks, tea drinks, fruit juice drinks, and the like. This antimicrobial agent is used to prevent bacterial contamination and growth in the opened state after preserving food or after purchasing food.
[0005]
Synthetic preservatives such as the above-mentioned sodium benzoate (eg, sorbic acid, potassium sorbate, etc.) are excellent in antibacterial activity, but generally, use of antimicrobial agents derived from natural products is preferred in terms of safety. There is a tendency. However, antimicrobial agents derived from natural products are unlikely to exhibit sufficiently satisfactory effects in terms of antibacterial activity. For this reason, at present, antimicrobial agents derived from natural products that can effectively suppress the occurrence of mold and yeast, which are erroneously recognized as being contaminated in beverages, have not yet been found. Furthermore, when applied to beverages, in addition to a broad antibacterial spectrum and safety, an antimicrobial agent that maintains the transparency of the beverage without causing turbidity, sedimentation, coloring, etc., and does not give an unpleasant taste or flavor Is required.
[0006]
For this reason, various attempts have been made so far in search of antimicrobial agents derived from natural products. For example, cinnamon, glove, organo, thyme, sage, allspice, and pepper have been reported to have strong antibacterial activity. However, although gloves and organos have strong antibacterial activity against Gram-negative bacteria, little antibacterial properties are observed under neutral conditions and fungi (Nariko Ueda et al., Nissho, 29,111 ( 1982), Ueda et al., Nissho Kogaku, 29, 389 (1982)). It has also been reported that mace, laurel, pepper and nutmeg have an antibacterial activity that selectively inhibits the growth of Clostridium botulinum. However, they have not been found to have a broad antibacterial spectrum (Huhtannen: J. Food Prot., 43, 195 (1980)).
[0007]
Furthermore, compounds having a fungicidal action such as cinnamaldehyde, perylaldehyde and citral have been found in the essential oils of 70 kinds of plants (Kurita et al .: Agr. Biol. Chem., 45, 945 (1981)). There is no known compound having an antibacterial action.
[0008]
With respect to pepper targeted by the present invention, antibacterial activity against gram-positive bacteria, gram-negative bacteria, lactic acid bacteria, and yeast has been conventionally studied using a water-containing ethanol extract of a residue (extraction residue) obtained by removing essential oil from pepper. ing. As a result, it has been reported that the above-mentioned aqueous ethanol extract exhibits an antibacterial action against Bacillus cereus at an addition amount of 1% (Akabane: New Handbook of Sanitary Engineering, Chapter 4, 166-178 (1987)). However, such a hydrous ethanol extract, in addition to having extremely low antibacterial activity, has a unique taste and odor derived from the extract, and particularly has many problems to be solved for application to food. Contains. Similarly, it has been reported that a fraction having antibacterial activity can be obtained by using a residue (extraction residue) obtained by removing essential oil from pepper and extracting the residue again with an organic solvent or water (JP-A-7-155152). Publication). However, the active ingredient has not been clarified, and the antibacterial activity is extremely low (exhibiting the antibacterial activity in the extract of 0.1 to 5%). is there.
[0009]
Furthermore, a pepper seed extract is known to have a growth inhibitory effect against Helicobacter pylori (Japanese Patent Application Laid-Open No. H08-198772), but its active ingredient has not been clarified. In addition, it has been reported that pepper extract has an antioxidant effect (Japanese Patent Publication No. 1-21951), but the literature does not describe any antimicrobial effect.
[0010]
As described above, studies have been made in search of antimicrobial agents derived from natural products, but no component having a high antibacterial and antifungal action (antimicrobial action) and a broad antibacterial spectrum has been found. That is the fact. In particular, when used in foods, it is desired that the foods themselves have no taste or smell and are not colored so as not to affect the original taste, flavor and color of the foods. Therefore, development of antimicrobial agents derived from natural products that can be suitably used for such foods has been demanded.
[0011]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide an antimicrobial agent of a natural material, which contains an extract of a plant having a dietary experience as an active ingredient. Still another object of the present invention is to provide a method for producing the antimicrobial agent.
[0012]
[Means for achieving the object]
The present inventors have conducted intensive studies in search of the solution of the above problems, and found that the solvent-extracted fraction containing 1-cinnamoylpiperidine of pepper has high antibacterial and antifungal properties. It was confirmed that the extracted fraction could be effectively used as an antibacterial agent and a fungicide for various products, particularly foods. Furthermore, it was confirmed that by applying the extracted fraction to foods, the growth of microorganisms was suppressed, and quality deterioration due to deterioration (deterioration / rot) of the foods could be significantly prevented. The present invention has been completed based on such findings.
That is, the present invention provides the following (1) to (3):
(1) An antimicrobial agent comprising a pepper extract fraction containing 1-cinnamoylpiperidine as an active ingredient.
(2) A food comprising the antimicrobial agent according to (1).
(3) The method for producing an antimicrobial agent according to claim 1, further comprising a step of extracting and fractionating a pepper extract fraction containing 1-cinnamoylpiperidine from pepper using a solvent.
[0013]
In the present invention, the term "antimicrobial agent" means an antibacterial agent and a fungicide inclusively.
[0014]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
The antimicrobial agent of the present invention is characterized by using a pepper extract fraction containing 1-cinnamoylpiperidine as an active ingredient.
[0015]
1-cinnamoylpiperidine is a compound conventionally known as a synthetic compound (CAS RN: 5422-81-1), and its production method is also disclosed in JP-A-61-205221 (Example 12), and in Voraender, Herrmann. , JLABF, Justie Liebigs Ann. Chem. , 320 (1902), 91. However, the fact that 1-cinnamoylpiperidine is contained in plants, particularly the peppers targeted by the present invention, is a finding first found by the present inventors. Furthermore, the fact that 1-cinnamoylpiperidine has an antibacterial action and an antifungal action (antimicrobial action) has not been known so far, and is a finding first discovered by the present inventors (Japanese Patent Application No. 2002). 262456). In the same patent application (Japanese Patent Application No. 2002-262456) filed by the present applicant, 1-cinnamoylpiperidine has antibacterial and antifungal activity higher than sorbic acid and benzoic acid used as synthetic preservatives. Is shown.
The present invention provides an antimicrobial agent that can be suitably used in a field requiring safety, such as food.
[0016]
The pepper used in the present invention is a pepper fruit, and specifically, a ripe fruit (white pepper) or an unripe fruit (black pepper) of a pepper family (Piperaceae) pepper (Piper nigrum LINNE) is exemplified. be able to.
[0017]
The pepper extract fraction used as the active ingredient of the antimicrobial agent of the present invention may be a fraction containing 1-cinnamoylpiperidine of the pepper extract, and any extraction method or fractionation method may be used as long as it is within that range. is not.
[0018]
Specifically, the above-mentioned pepper can be used as it is (raw) or crushed, or the dried pepper can be used as it is or crushed for a solvent extraction operation. Solvents used in the extraction operation include nitrous oxide, acetone, ethanol, ethyl methyl ketone, glycerin, ethyl acetate, methyl acetate, diethyl ether, cyclohexane, dichloromethane, edible oils and fats, 1,1,1,2-tetrafluoroethane , 1,1,2-trichloroethene, carbon dioxide, 1-butanol, 2-butanol, butane, 1-propanol, 2-propanol, propane, propylene glycol, hexane, water, and one or two selected from methanol The above solvents can be mentioned. Preferably, one or a combination of two or more selected from ethanol, water, carbon dioxide, hexane, ethyl acetate and carbon tetrachloride can be exemplified.
As a mixed solvent of an organic solvent and water, a mixed solvent of ethanol and water (hydrous ethanol) can be preferably mentioned. In this case, it is preferable to use 25 to 99.9 parts by weight of water-containing ethanol with respect to 0.1 to 75 parts by weight of the pepper used for the extraction, and further, to use 60 to 40 parts by weight of water-containing ethanol. Is preferably used in a proportion of 40 to 60 parts by weight.
The pepper extract fraction of the present invention may be a fraction containing 1-cinnamoylpiperidine extracted from pepper by a conventionally known method, for example, subcritical extraction or supercritical extraction.
[0019]
Microorganisms targeted by the present invention include, in particular, bacteria and fungi. More specifically, as the bacteria, spore-forming gram-positive bacilli belonging to the genus Bacillus (Bacillus cereus, Bacillus subtilis), gram-positive staphylococci belonging to the genus Staphylococcus (Staphylococcus aureus) or gram-positive cocci belonging to the genus Micrococcus ( Micrococcus luteus, a spore-free gram-positive anaerobic bacterium belonging to the genus Lactobacillus (Lactobacillus brevis, Lactobacillus plantarum [lactic acid bacterium]) (all of which are Gram-positive bacteria); ]), Gram-negative facultative anaerobic bacilli belonging to the Enterobacteriaceae family [Escherichia coli [Escherichia coli]] Intestinal bacteria belonging to the genus Proteus (Proteus vulgaris)] (these are Gram-negative bacteria). Examples of fungi include koji mold (Aspeugillus niger), hairy mold (Mucor genus [Mucor recemensus f. Sp. Sparosporous]), black fungus (Cladosporium), and slime molds of Cladosporium and Cladoscoia siaco). Examples include yeasts such as Candida (Candida utilis), Pichia (Pichia anomala), and Saccharomyces (Saccharomyces cerevisiae).
As used herein, the term “antimicrobial action” means an action that suppresses the growth of at least the above bacteria and fungi. Therefore, the "antimicrobial agent" of the present invention means a substance which is used for the purpose of suppressing the growth of the above-mentioned bacteria and fungi on an object or its surface, and has the intended effect. The term “antimicrobial treatment” of the present invention means a treatment that is performed for the purpose of suppressing the growth of the bacteria and fungi on an object or its surface, and has the intended effect.
[0020]
The antimicrobial agent of the present invention may be any as long as it contains a pepper fraction extract containing 1-cinnamoylpiperidine as an active ingredient, and may be composed of a pepper fraction extract. Other components may be contained as long as the effects of the invention are not impaired.
[0021]
The other components differ depending on the application target and application of the antimicrobial agent and cannot be specified, but, for example, when used for food, for example, carriers and additives which are generally acceptable in food hygiene, When used for applications, quasi-drugs, or cosmetics, pharmaceutically acceptable carriers and additives can be mentioned. Specifically, additives used when used in foods include sugars such as sugar, fructose, glucose, dextrin, and cyclic oligosaccharides; sugar alcohols such as sorbitol; and glycerin as long as the effects of the present invention are not impaired. Emulsifiers such as fatty acid esters and sucrose fatty acid esters; protein-based preservatives such as lysozyme, polylysine, and shirako protein; gums such as chitosan and xanthan gum; high-sweetness sweeteners such as thaumatin, sucralose, alitame, and aspartame; And distilled spirits such as shochu; and agents for production such as oils and fats, glycine, and sodium acetate.
[0022]
Examples of the carrier include water, lower alcohols such as ethanol, and polyhydric alcohols such as propylene glycol and glycerin. These may be used alone or in combination of two or more. Preferably, it is a mixture of water and ethanol (hydrous ethanol). In addition, such water-containing ethanol includes a mixture of water and ethanol, as well as distilled liquor such as vodka and shochu, and sake. In addition, the form of the antimicrobial agent of the present invention is not particularly limited as long as it has an action of suppressing the growth of at least the above bacteria and fungi, and is appropriately selected depending on the application target and application of the antimicrobial agent. Can be prepared. For example, in the food field, it can be used in the form of solids such as tablets, granules and powders, liquids such as liquids, and semi-solids such as pastes. For example, if necessary, an excipient such as dextrin, cyclodextrin, or sugar alcohol may be added, and powdered using a technique such as freeze-drying, spray-drying, or freeze-pulverization. Preferably, it is in the form of a liquid, particularly an ethanol preparation containing ethanol in a proportion of 10 to 60% by weight.
The antimicrobial agent of the present invention can be suitably used for antimicrobial treatment of various products or objects which are required to suppress at least the growth of the above bacteria and fungi. As such products or objects, (1) those which are required to prevent deterioration (decay, decay) and deterioration of the products caused by propagation of the above-mentioned bacteria or fungi-for example, foods, cosmetics, and pharmaceuticals , Quasi-drugs, feeds, and other industrial materials. (2) Products that are required to prevent the generation of stains and odors on products or objects caused by the growth of the bacteria or fungi- Household goods (brush products, stationery, miscellaneous goods such as shoe insoles, furniture and other interior materials, covering materials such as walls, floors, ceilings, plumbing equipment and supplies such as toilets, bathrooms and kitchens), living materials (textile products, Leather and paper products, clothing, etc.), machinery and equipment (electricity and home appliances, vehicles, etc.), water (water, wastewater, sludge, etc.), (3) caused by the proliferation of the above bacteria or fungi For which the prevention of diseases (food poisoning and infectious diseases) is required or effective for prevention-for example, food, household goods (furniture and other interior materials, coating materials for walls, floors, ceilings, etc.), machinery and equipment ( Medical / welfare / sanitary appliances), living materials (textile products, leather / paper products, clothing, packaging materials, packaging containers), interior / exterior materials for buildings, and others.
[0023]
The antimicrobial agent of the present invention includes, for example, adding or mixing the antimicrobial agent to the object, coating or spraying the surface of the object, or immersing the object in an antimicrobial-containing solution, Can exert its antimicrobial action on the object. The addition and blending to the target object may be performed during the manufacturing process of the target product, or may be performed on the final product. Thus, the object subjected to the antimicrobial treatment can have an antimicrobial action by suppressing the growth of microorganisms (bacteria and fungi) on the object itself or its surface.
[0024]
The application amount of the antimicrobial agent of the present invention to a target varies depending on the type and use of the target, and cannot be specified unconditionally. However, the antimicrobial agent of the present invention is used as a component of the target (product). Taking the case of mixing and using as an example, the ratio may be such that the extracted fraction in the final product is at least 100 μg / ml, preferably at least 200 μg / ml. Preferably, it is in the range of 200 to 10,000 µg / ml.
[0025]
The antimicrobial agent containing the pepper extract fraction containing 1-cinnamoylpiperidine of the present invention as an active ingredient has been confirmed to be safe based on the eating experience of pepper, and thus is suitable as an antimicrobial agent for food. Can be used for Thus, by suppressing the growth of microorganisms in the food, deterioration (deterioration or spoilage) of the food can be prevented, and the quality of the food can be maintained.
[0026]
Foods targeted by the present invention include coffee drinks, milk drinks, enriched drinks, sports drinks, drinks with fruit juice, carbonated drinks, etc., kamaboko, chikuwa, hampan, fish ham, sausage, surimi products, dried seafood Products, marine products such as kun, ham, sausage, vienna sausage, bacon, meat products such as minced meat, salads, hamburgers, gyoza, shumai, tsukudani, boiled beans, etc., shallow dishes such as hakusai, cucumber and vegetables Pickles and pickles such as kimchi, zasai, and takuan, semi-solid marine products such as squid, octopus and prawns, seasonings such as sauce and soup, seasonings such as miso and soy sauce, raw noodles, chinese noodles, and noodles Examples of raw vegetables such as noodles, cut vegetables, fruits, etc. and their semi-cooked products, semi-processed frozen foods It is possible. Note that the above is merely an example, and the present invention is not limited to these foods, but can be applied to other foods.
[0027]
The antimicrobial agent of the present invention can be used in combination with other antimicrobial agents as long as the effects of the present invention are not impaired.
[0028]
EXAMPLES The contents of the present invention will be specifically described with reference to the following experimental examples and examples, but the present invention is not limited to these examples.
[0029]
(Experimental example 1: Preparation of pepper extract)
100 g of dried white pepper (produced by Sawarak, Malaysia) is pulverized, and 900 ml of 50% aqueous ethanol prepared by mixing 95% ethanol and water at a ratio of 1: 1 is added thereto. Perform time extraction. After adding 100 g of diatomaceous earth to this, about 900 ml of a pale yellow clear extract (sample 1) is obtained. The solid content of this extract was Bx3 (measured by a sugar meter manufactured by Atago Co.). The flavor of this pepper extract had a flavor peculiar to white pepper, and the taste and flavor of the solution diluted to about 1/100 with ion-exchanged water had little irritating odor and was mellow and pale.
The 1-cinnamoyl piperidine contained in Sample 1 was 0.0063%.
FIG. 1 shows a gas chromatogram of the pepper extract (sample 1). At a retention time of 133.4 min, a peak of 1-cinnamoyl piperidine was observed.
The measurement conditions of the gas chromatograph are as follows.
Equipment used: HP 6890 GC system. HP5973MS system.
Column: J & W DB-WAX capillary 60.0 mm × 250 μm × 0.25 μm
Temperature: Starting temperature 50 ° C (3 ° C / min rise)
Injection volume: 1 μl-splitless
Regarding the analysis of essential oil from pepper, many components have been reported (Menon eal .: J. Essent. Oil. Res., 13, 166-169, (2001), etc.), but 1-cinnamoyl has been reported so far. No report has ever found piperidine, and a substance having high antimicrobial activity has been newly discovered.
[0030]
(Experimental example 2: Fractionation of pepper extract)
2-1. Hexane fraction of pepper
400 ml of the pepper extract prepared in Experimental Example 1 was packed in a silica gel column, eluted using n-hexane as an extraction solvent, and 0.5 g of a hexane fraction from which the solvent was distilled off was prepared (sample 2). .
The 1-cinnamoyl piperidine contained in Sample 2 was 0.28%.
[0031]
2-2. Ethyl acetate fraction of pepper
300 ml of the residue after the hexane extraction of Experimental Example 2-1 was extracted with ethyl acetate, and the solvent was distilled off to prepare 3 g of an ethyl acetate fraction (sample 3).
The amount of 1-cinnamoyl piperidine contained in Sample 3 was 0.022%.
[0032]
2-3. Pepper moisture painting
300 ml of the residue after extraction with ethyl acetate in Experimental Example 2-2 was extracted with hot water, and the aqueous solution was concentrated under reduced pressure to prepare 5 g of a water fraction (Sample 4).
The 1-cinnamoyl piperidine contained in Sample 4 was 0%.
[0033]
2-4. Black pepper extract
The white pepper of Experimental Example 1 was changed to black pepper and prepared in the same manner to prepare a black pepper extract fraction (sample 5).
The 1-cinnamoyl piperidine contained in Sample 5 was 0.00064%.
The following tests were performed on the above Samples 1 to 5 in order to confirm that these pepper extract fractions had antifungal activity.
[0034]
(Example 1)
Determination by measuring the sporicidal activity of pepper extract vapor by the filter paper method was performed as follows.
[0035]
A spore suspension of mold (Cladosporium colocasia IFO6698) is prepared, and 0.01 ml each of the spore suspension is dropped on four sterilized 10 × 10 mm filter papers and dried. Samples 1 to 5 are adhered to sterilized 30 × 30 mm filter paper at the respective addition amounts (prepared in 1/2 or 2 times amount such as 100, 200, 400, 800 μl). The filter paper to which samples 1 to 5 are adhered is placed in the center of a Petri dish, and a filter paper with spores is placed around the filter paper, covered with a lid, and sealed with a tape. After keeping the temperature at 27 ° C., the filter paper on which the spores were adhered was taken out on days 1, 4 and 7, and was stuck on a potato dextrose agar medium and cultured. After 7 days, the presence or absence of mold growth was observed. According to the method for determining the amount of spores.
[0036]
With respect to known essential oils, it is reported that the minimum sporicidal amount for Cladosporium is 200 μl for cedar leaf, 200 μl for hinoki oil, 0.2 μl for cinnamaldehyde, 2 μl for perilaldehyde, and 400 μl for linalool. It was an appropriate method for examining the effects of
[0037]
(result)
Sample addition amount Mold growth
Sample 1 200μl None
Sample 2 200μl None
Sample 3 200μl None
Sample 4 200μl available
Sample 5 200μl None
50% ethanol 200μl available
From the above results, it was found that, except for the water-extracted fraction (sample 4) and ethanol, there was a mold growth inhibitory effect.
[0038]
(Example 2)
(Preparation method)
For the method of preparing the bacteria, test bacteria 1) to 6) shown in Table 1 were pre-cultured in MRS medium at 25 ° C. for 1 day, and test bacteria 7) to 8) used MRS medium, and 9) to 15). ) Was precultured at 35 ° C. for 1 day using a nutrient broth. The bacteria grown in the above medium were 3 -10 4 A solution obtained by adding 2 g of the ethyl acetate-extracted extract of the pepper extract of Example 2-2 to 100 times with 50% aqueous ethanol was used. The inhibitory effect of the bacterium upon the treatment was examined, and the minimum inhibitory concentration (MIC) was examined.
Culture conditions are as follows: test bacteria 1) to 6) are cultured at 25 ° C, test bacteria 7) to 8) are cultured at 35 ° C in an anaerobic jar, and test bacteria 9) to 15) are cultured at 35 ° C for 24 to 96 hours. did.
Change the concentration of the antimicrobial agent (in the addition step, use 100 μg / ml based on 100 μg / ml, and prepare the antimicrobial agent at a rate of 1/2 or 2 times). The amount was determined and defined as the minimum growth inhibitory concentration.
[0039]
[Table 1]
[0040]
(result)
The results of the antibacterial spectrum experiment are shown in Table 1, which showed an inhibitory effect on a wide range of bacteria. It showed a remarkable effect on mold, yeast and lactic acid bacteria, and was found to be a pepper extract fraction effective as an antimicrobial agent.
[0041]
Based on these results, the antimicrobial agent can be used in a wide range of applications, such as soft drinks, neutral drinks, tea-based drinks, and other foods and drinks, as well as home appliances such as mold in refrigerators and tableware , Kitchen utensils such as cutting boards, textile-related products such as futons and towels, decorative plates, wallpaper, materials for construction or logistics such as cardboard, toiletries such as toilets and bathtubs, paper products such as origami, leather such as shoes and bags. Use for products, toys such as paper clay, erasers, stationery such as flexible disks, plastic containers such as lunch boxes and balun sheets, pharmaceuticals, medical equipment, cosmetics, oral hygiene such as suppression of caries and periodontal disease, toothpaste It was also found that it can be used for controlling microorganisms in vegetable and fruit fields and fruit selection fields.
[0042]
(Example 3: Application to coffee beverage)
A coffee beverage was prepared according to the following formulation.
[0043]
[Table 2]
[0044]
* Registered trademark of Saneigen FFI Co., Ltd.
* Made by Saneigen FFI Co., Ltd.
The coffee beverage to which the pepper extract fraction containing 1-cinnamoylpiperidine (Sample 3) was added did not show deterioration in quality or change in taste as seen when no preservative was added, and as a beverage, It was good.
[0045]
(Example 4: Application to banana milk drink)
A banana milk drink was prepared according to the following formulation.
[0046]
[Table 3]
[0047]
* Registered trademark of Saneigen FFI Co., Ltd.
* Made by San-Ei Gen FFI Co., Ltd.
The banana milk drink to which the pepper extract fraction containing cinnamoyl piperidine (sample 3) was added did not show any deterioration in quality or change in taste as seen when no preservative was added, and was a good beverage. Was something.
[0048]
(Example 5: Application to fruit juice-containing beverage)
A juice-containing beverage was prepared according to the following formulation.
[0049]
[Table 4]
[0050]
* Registered trademark of Saneigen FFI Co., Ltd.
* Made by San-Ei Gen FFI Co., Ltd.
The juice-containing beverage to which the pepper extract fraction containing 1-cinnamoylpiperidine (Sample 3) is added does not show deterioration in quality or change in taste as seen when no preservative is added. It was good.
[0051]
(Example 6: Application to sour milk drink)
An acid milk beverage was prepared according to the following formulation.
[0052]
[Table 5]
[0053]
* Made by San-Ei Gen FFI Co., Ltd.
The acid milk beverage to which the pepper extract fraction containing 1-cinnamoylpiperidine (Sample 3) was added did not show any deterioration in quality or change in taste as seen when no preservative was added, and as a beverage It was good.
[0054]
(Example 7: Application to carbonated beverages)
A carbonated beverage was prepared according to the following formulation.
[0055]
[Table 6]
[0056]
* Made by Saneigen FFI Co., Ltd.
The carbonated beverage to which the pepper extract fraction containing 1-cinnamoyl piperidine (sample 3) was added did not show deterioration in quality (cloudiness / precipitation) or change in taste as seen when no preservative was added. It was a good beverage.
(Example 8: Application to tea beverage)
A tea beverage was prepared according to the following formulation.
[0057]
[Table 7]
[0058]
* Registered trademark of Saneigen FFI Co., Ltd.
* Made by Saneigen FFI Co., Ltd.
The black tea beverage to which the pepper extract fraction containing 1-cinnamoyl piperidine (sample 3) was added did not show any deterioration in quality or change in taste as seen when no preservative was added, and was good as a beverage. It was something.
[0059]
(Example 9: potato salad)
Potato (boiled, cut) 300g, carrot (boiled, cut) 50g, sliced onion 60g, sliced cucumber 80g, vinegar 12.5g, salt 2g, pepper 0.05g and mayonnaise 100g A pepper extract fraction containing 1-cinnamoyl piperidine (sample 3) was added at 2,000 ppm to produce a potato salad, and 200 g of each test plot was filled into a sterile polyethylene bag (200 ml capacity), sealed, and sealed. The storability at ℃ was examined. The pepper extract fraction containing 1-cinnamoyl piperidine (Sample 3) improved the 7-day shelf life of the salad over the salad.
[0060]
(Example 10: pickled overnight)
After washing commercially available clams with water, 1 kg of each section was immersed in 10% saline at room temperature for 5 hours, and drained. 250 g of a seasoning liquid to which 5,000 ppm of a pepper extract fraction (sample 3) containing 2% salt, 0.1% sodium glutamate and 1-cinnamoylpiperidine used in Example 8 was added, and sterilized polyethylene was added. It was packed in a bag, stored at 20 ° C., and the appearance was evaluated. The pepper extract fraction containing 1-cinnamoylpiperidine (sample 3) improved the storage stability of the pickled overnight pickles for 14 days.
[0061]
(Example 11: Loin ham (slice))
To 1000 g of pork loin, 300 g of a pickle solution composed of 265 g of water, 4 g of polymerized phosphate, 25 g of salt, and 6 g of sugar, which had been prepared in advance, was injected and salted at 10 ° C. for 3 days. The mixture was dried in a smoke house for 40 minutes, smoked, and heated to a central temperature of 75 ° C. to prepare roast ham. This loin ham was immersed in a pepper extract fraction (sample 3) (10,000 ppm) containing 1-cinnamoyl piperidine for 1 minute, air-dried, and sliced into a sliced ham of 2 mm thickness. Next, it was vacuum-packed and stored at 20 ° C., and the change in the number of bacteria was examined. The pepper extract fraction containing 1-cinnamoylpiperidine (sample 3) improved the storage stability of loin ham for 60 days.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a view showing a gas chromatogram of a pepper extract (sample 1) of the present invention.
FIG. 2 is a view showing mass spectrum data of a pepper extract (sample 1) of the present invention.
