【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、早産防止剤に関するものである。詳しくは、ヒトプロテインカイネースＣ（以下ＰＫＣという）のβアイソフォーム（以下ＰＫＣ−βという）阻害活性を示す化合物を含有することを特徴とする早産防止剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
早産防止剤としてはこれまで、β２−アドレナリン受容体（以下β２−ＡＲという）刺激剤の塩酸リトドリン等が一般に用いられている。β２−ＡＲは子宮だけでなく心臓や血管にも存在する。従って、β２−ＡＲ刺激剤は子宮に対すると同時に心臓や血管に対しても作用し、心拍数や血圧などに影響を及ぼす。
【０００３】
具体的には、動悸、頻脈、手指振戦、顔面紅潮、吐き気などの副作用を起こしやすく、さらに、極めてまれではあるが、肺水腫・心不全、汎血球減少・無顆粒球症、不整脈、肝機能障害・黄疸、横紋筋融解症、血清カリウム低下、胸水、腸閉塞、新生児心室中隔壁肥大などの重大な副作用を引き起こすこともあることなどが報告されている。
【０００４】
このように、β２−ＡＲ刺激剤は、少なからず心臓作用に伴う副作用発現が避けられない。従って、全く別の作用による早産防止剤が求められている。
【０００５】
ＰＫＣについては現在まで約１０種類のアイソフォームが知られており、その特性によって３種に大別されている。
すなわち、αアイソフォーム（以下ＰＫＣ−αという）、ＰＫＣ−βおよびγアイソフォーム（以下ＰＫＣ−γという）はコンベンショナルＰＫＣアイソフォームに、δアイソフォーム（以下ＰＫＣ−δという）、εアイソフォーム（以下ＰＫＣ−εという）、ηアイソフォーム（以下ＰＫＣ−ηという）およびθアイソフォーム（以下ＰＫＣ−θという）はノーベルＰＫＣアイソフォームに、ιアイソフォーム（以下ＰＫＣ−ιという）、λアイソフォーム（以下ＰＫＣ−λという）およびζアイソフォーム（以下ＰＫＣ−ζという）はアティピカルＰＫＣアイソフォームに、それぞれ分類されている。なお、ＰＫＣ−βについて、β１アイソフォーム（以下ＰＫＣ−β１という）とβ２アイソフォーム（以下ＰＫＣ−β２という）の２種が存在すると言われていたが、最近両者は同じアイソフォームであるとの見解が出されている。
【０００６】
また、ＰＫＣアイソフォームの組織局在についても研究がなされており、大動脈および心臓ではＰＫＣ−β（β２）が、網膜ではＰＫＣ−α、ＰＫＣ−β（β１、β２）およびＰＫＣ−εが、糸球体ではＰＫＣ−α、ＰＫＣ−β（β１）、ＰＫＣ−δおよびＰＫＣ−εがそれぞれ活性化していると報告されている。
【０００７】
以上のような知見から、ＰＫＣ−β阻害剤については、これまで、ＰＫＣ−βが活性化している大動脈、心臓、網膜および糸球体をターゲットとする、糖尿病および糖尿病性腎症や糖尿病性網膜症などの糖尿病合併症、虚血、炎症、中枢神経疾患、心臓血管疾患、皮膚科学的疾患及び癌などの治療剤としての試みがなされている。
【０００８】
一方、本発明者の一部は、ＰＫＣを活性化することによって、消化管平滑筋の収縮が抑制されることを確認し、既に報告している。（アメリカン ジャーナル
オブ フィジオロジー、２６３巻、Ｃ１１６０〜１１７１、１９９２）
【０００９】
ＰＫＣ−β阻害作用を有する化合物として、これまで、式
【化６】
（式中のＲ１はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜４のアルキル、ＯＨ、Ｃ１〜４のアルコキシ、Ｃ１〜４のハロアルキル、ニトロ、アミノ、置換アミノ、Ｃ１〜４のアミノカルボニルアルキルであり、Ｒ２はＨ、アシル、アミノまたはＯＨであり、Ｗは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＯ−、Ｃ１〜４のアルキレン、置換アルキレン、Ｃ２〜６のアルケニレン、アリール、アルアルコキシ、複素環基、複素環アルコキシ、二環式縮合環基、二環式縮合環アルコキシ、置換イミノ、アルキルオキシイミノ、カルバモイルまたはアミノカルボニルであり、Ｘ及びＹはそれぞれ独立してＣ１〜４のアルキレンまたは置換アルキレンであるか、Ｘ、ＹおよびＷが一緒になって、−（ＣＨ２）ｎ−ＡＡ−を形成するもの（ｎは２〜５の整数であり、ＡＡはアミノ酸残基である）であり、ｍは０または１〜３の整数である）で表されるＮ，Ｎ’−架橋ビスインドリルマレイイミド化合物が報告されている。（特開平７−２１５９７７号公報）
【００１０】
上記特開平７−２１５９７７号公報には、上記式（Ｉ）で表されるＮ，Ｎ’−架橋ビスインドリルマレイイミド化合物がＰＫＣ−β選択的阻害活性を有しており、糖尿病および合併症、虚血、炎症、中枢神経疾患、心臓血管疾患、皮膚科学的疾患および癌の治療剤として有効であることが記載されている。
しかしながら、これまでＰＫＣ−βがヒト子宮筋の収縮に関与することは全く知られておらず、ＰＫＣ−β阻害剤が早産防止剤として有用であることを示唆する報告も全くない。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
本発明で解決しようとする課題は、従来のβ２−ＡＲ刺激剤とは全く別の作用を有し、子宮筋収縮抑制作用が強く、且つ、副作用発現の少ない、有効且つ安全な早産防止剤を開発することである。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明者は平滑筋収縮のメカニズムについて検討を行い、平滑筋収縮メカニズムにおけるＰＫＣの関与に注目し、鋭意研究を行った結果、ヒト子宮筋の収縮にＰＫＣ−βが関与しているという知見を得、本発明を成すに至った。
【００１３】
すなわち、本発明者らはまず、フォルボール １２，１３−ジブチルエステル（以下ＰＤＢｕという）によってＰＫＣを活性化することにより、ヒト子宮筋が持続的に収縮することを見出し、さらに、このＰＤＢｕによる収縮は妊娠子宮筋において顕著であることを確認した。
【００１４】
一方、本発明者らは、子宮筋におけるＰＫＣアイソフォームの局在についてイムノ・ブロッティング法（ウェスターン・ブロッティング法）により確認し、更にメッセンジャーＲＮＡ（以下ｍＲＮＡという）の変化を、定量的ＲＴ−ＰＣＲ法（以下ＲＴ−ＰＣＲ法という）によって測定することによって、ヒト妊娠子宮筋においてＰＫＣ−β（β１、β２）が非妊娠子宮筋に比べ顕著に増大していることを見出した。
【００１５】
本発明者らは、以上の知見から、ヒト子宮筋、特に妊娠子宮筋においては、ＰＫＣ−βが収縮に関与していると推測し、妊娠子宮筋の収縮に対するＰＫＣの関与について更に確認すべく、ウェイ（Ｗａｙ，Ｋ．Ｊ．）らが、コンベンショナルＰＫＣアイソフォームの非特異的阻害剤として報告している（トレンズ インファーマコロジカル サイエンス、２１、１８１〜１８７、２０００）、Ｇｏ６９７６、Ｇｏ６９８３およびＧｏ６８５０を用いてＰＤＢｕによるヒト子宮筋収縮に対する作用を確認したところ、これらのＰＫＣ阻害剤がＰＤＢｕによる子宮筋収縮に対する抑制作用を示し、しかも、妊娠子宮筋の収縮は抑制するものの、非妊娠子宮筋の収縮に対しては抑制しないことを見出した。
【００１６】
さらに、本発明者らは、ＰＫＣ−βに対する選択性が高いことが報告されている、式
【化７】
で表されるＬＹ−３３３５３１（以下ＬＹ−３３３５３１という）を用いて、ヒト妊娠子宮筋のＰＤＢｕによる収縮およびオキシトシンによる収縮に対する作用を確認したところ、ＬＹ−３３３５３１は妊娠中期（２２週）子宮筋ならびに妊娠後期（３７週）子宮筋において極めて顕著な子宮筋収縮抑制作用を示した。さらに、オキシトシンによる収縮に対しても抑制作用を示し、ＰＫＣ−β阻害剤が早産防止剤として極めて有用であることを見出した。本発明は、以上のような知見に基づくものである。
【００１７】
これまで、ＰＫＣ−β阻害剤として、前記のように、前記式（Ｉ）で表されるＮ，Ｎ’−架橋ビスインドリルマレイイミド化合物が知られており、糖尿病及びその合併症、虚血、炎症、中枢神経疾患、心臓血管疾患、皮膚科学的疾患および癌の治療剤として有用であることが報告されているが、これまで、ＰＫＣ−β阻害剤が子宮筋収縮抑制作用を示し、早産防止剤として有用である事は全く報告も示唆もされていない。
【００１８】
本発明は、活性成分として、ＰＫＣ−β阻害活性を示す化合物を含有することを特徴とする早産防止剤を提供するものである。
【００１９】
本発明の早産防止剤において活性成分として含有されるＰＫＣ−β阻害活性を示す化合物としては、例えば前記式（Ｉ）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩、それらの溶媒和物またはプロドラッグなどを挙げることができ、好ましくは、式、
【化８】
（式中のＲ１はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜４のアルキル、ＯＨ、Ｃ１〜４のアルコキシ、Ｃ１〜４のハロアルキル、ニトロ、アミノ、置換アミノ、Ｃ１〜４のアミノカルボニルアルキルであり、Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ１〜４のアルキル基であるか互いに結合してＣ２〜８の環状アミンを形成していてもよく、Ｚは−Ｏ−、Ｃ１〜４のアルキレン基、Ｃ１〜４のアルキレンオキシまたはＣ１〜４のオキシアルキレンであり、ｍは０または１〜３の整数である）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩、それらの溶媒和物またはプロドラッグを挙げることができる。
【００２０】
より好ましくは、式
【化９】
（式中のＲ１はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜４のアルキル基、ＯＨ、Ｃ１〜４のアルコキシ、Ｃ１〜４のハロアルキル、ニトロ、アミノ、置換アミノ、Ｃ１〜４のアミノカルボニルアルキルであり、Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ１〜４のアルキルであるか互いに結合してＣ２〜８の環状アミンを形成していてもよく、ｍは０または１〜３の整数である）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩、それらの溶媒和物またはプロドラッグを挙げることができる。
【００２１】
上記式（ＩＩＩ）で表される化合物の中で、式
【化１０】
（式中＊を付した炭素原子は、Ｓ配置、Ｒ配置またはそれらの混合を意味する）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩、それらの溶媒和物またはプロドラッグが特に好ましく、更に、前記式（Ｖ）で表されるＬＹ−３３３５３１またはその薬理学的に許容される塩、それらの溶媒和物またはプロドラッグが最も好ましい。
【００２２】
本発明において、前記式（Ｉ）乃至式（ＩＩＩ）で表される化合物で、立体異性体が存在する場合、全ての異性体および混合物を用いることができる。例えば、不斉炭素を有する場合、それぞれの光学活性体、その混合物、ラセミ体、エナンチオマー等の何れでも用いることができる。
【００２３】
また、本発明の早産防止剤において活性成分として含有される前記式（Ｉ）乃至式（Ｖ）で表される化合物の塩としては、化合物の活性その他に影響がなく、薬理学的に許容されるものであればどのようなものでもよく、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸およびリン酸などの無機酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、酢酸、酪酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、酒石酸、安息香酸などの有機酸の酸付加塩を挙げることができる。
【００２４】
さらに、本発明においては、前記式（Ｉ）乃至式（ＶＩ）で表される化合物の各種のプロドラッグも用いることができる。プロドラッグとは、安定性、吸収性或いは持続性等を改善し、しかも、体内に吸収された後、効率的に活性体に変換させる目的で官能基を修飾したもので、薬理学的に許容できる基で修飾したものであれば、どのようなものでもよい。
【００２５】
本発明の前記式（Ｉ）乃至式（Ｖ）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩は公知の方法、例えば前記特開平７−２１５９７７号公報記載の方法などにより容易に製造することができる。
【００２６】
本発明の前記式（Ｉ）乃至式（Ｖ）で表されるＮ，Ｎ’−架橋ビスインドリルマレイイミド化合物またはその薬理学的に許容される塩は早産防止剤として極めて有用な化合物であり、従って、本発明の前記式（Ｉ）乃至式（Ｖ）で表されるＮ，Ｎ’−架橋ビスインドリルマレイイミド化合物またはその薬理学的に許容される塩を活性成分として含有させ、医薬品添加物と混合する事により、早産防止剤として極めて有用な医薬品組成物を製造する事ができる。
【００２７】
本発明の医薬品組成物を実際の治療に用いる場合、種々の剤型にして経口的あるいは非経口的に投与されるが、経口投与剤としては、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ドライシロップ剤など、非経口投与剤としては、注射剤、座剤などを挙げる事ができる。
【００２８】
これらの医薬品組成物は、通常の調剤学的手法に従い、その剤型に応じ適当な賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤などの医薬品添加物を適宜混合し、常法に従い調剤する事により製造する事ができる。
【００２９】
例えば、散剤は、活性成分に必要に応じ、適当な賦形剤、滑沢剤などを加え、よく混和して散剤とする。
錠剤は、活性成分に必要に応じ、適当な賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤などを加え、常法に従い打錠して錠剤とする。さらに必要に応じ、適宜コーティングを施し、フィルムコート錠、糖衣錠、腸溶性皮錠などにする。
カプセル剤は、活性成分に必要に応じ、適当な賦形剤、滑沢剤などを加え、よく混和した後、あるいは又、常法により、顆粒あるいは細粒とした後、適当なカプセルに充填してカプセル剤とする。
さらに、このような経口用製剤の場合は治療方法に応じて速放性あるいは徐放性製剤とすることもできる。
【００３０】
本発明の医薬品組成物を実際の治療に使用する場合、活性成分の投与量は、患者の年齢、体重、妊娠周期、症状の程度等および投与方法によって適宜決定されるが、概ね、１日当たり、本発明の前記式（Ｉ）で表されるＮ，Ｎ’−架橋ビスインドリルマレイイミド化合物またはその薬理学的に許容される塩を、０．０１〜５０ｍｇ、好ましくは０．０５〜２０ｍｇの範囲で投与する。症状に応じて適宜増減してもよい。
【００３１】
本発明の医薬品組成物は従来のβ２−ＡＲ刺激剤を活性成分として含有させてもよく、また、従来のβ２−ＡＲ刺激剤を活性成分として含有する早産防止剤と併用してもよい。このような場合、活性成分の投与量を減らすことができ、副作用の軽減に有効である。
【００３２】
【発明の実施の形態】
本発明の内容を詳細に説明するために、以下に試験例、製造例、実施例および処方例を挙げるが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
【００３３】
【実施例】
試験例 １
ＰＤＢｕによる子宮筋収縮確認試験
ヒト子宮筋収縮に対するＰＤＢｕの作用を確認した。なお、妊娠子宮筋および非妊娠子宮筋標本は、帝王切開患者子宮および良性の疾患患者摘出子宮の子宮筋からそれぞれ採取した。帝王切開は特に記載した場合を除き３７〜３８週の施術である。筋標本は、北沢らの方法（ジャーナル オブ バイオロジカルケミストリー、２６４巻：５３３９−５３４２、１９８９）に従い、黄色ブドウ球菌のα−トキシンを用いて脱膜化し、幅０．１〜０．２ｍｍ、長さ１〜２ｍｍに調製した。また、筋収縮は、４０ｍＭのカリウムイオンによって惹起される収縮度を対照として測定した。
【００３４】
試験方法および結果
上記ヒト妊娠子宮筋および非妊娠子宮筋標本を、張力１０ミリニュートン（ｍＮ）で装置に固定し、タイロード液（組成（ｍＭ）：塩化ナトリウム１３６．９、塩化カリウム５．４、塩化カルシウム１．５、塩化マグネシウム１．０、炭酸水素ナトリウム２３．８、グルコース５．５、エチレンジアミン四酢酸０．０１）に２０分間浸けて平衡化した後、収縮反応が安定するまで繰り返し高カリウムイオン溶液（４０ｍＭ塩化カリウム溶液）を作用させたのち各試験を行った。
【００３５】
なお、高カリウムイオン溶液は、上記タイロード液の塩化ナトリウムに替えて等モルの塩化カリウムを加え、３７℃、ｐＨ７．４で、酸素９５％、二酸化炭素５％の混合気を飽和させたものを使用した。
各標本に、ＰＤＢｕを１μＭ添加し、筋収縮を測定した。結果は図１および図２に示すとおり、ＰＤＢｕ添加により、子宮筋は持続的な収縮を惹起し、収縮度は妊娠子宮において顕著であった。２９週の妊娠子宮筋と３７〜３８週の妊娠子宮筋標本を用い、ＰＤＢｕを１μＭ添加した時の筋収縮を測定した。結果は図３に示すとおり、２９週の妊娠子宮筋より３７〜３８週の妊娠子宮の収縮度の方が顕著であった。
【００３６】
試験例 ２
ＰＫＣアイソザイム確認試験その１
妊娠子宮筋におけるＰＫＣアイソザイムをイムノ・ブロッティング法（ウェスターン・ブロッティング法）により確認した。
【００３７】
試験方法および結果
妊娠子宮筋から分画したタンパク質５０μｇを、７．５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で電機泳動にかけ、分離されたタンパク質をポリビニリデンジフルオリドメンブランに移し、各ＰＫＣアイソザイムに対する特異的モノクローナル抗体と接触させた後、メンブランをホルセラディッシュ過酸化酵素結合ヒツジ抗マウスＩｇＧまたはロバ抗ウサギＩｇＧとインキュベートし、高性能ケミルミネッセンスシステムにかけて検出した。結果は図４に示すとおり、コンベンショナルＰＫＣおよびノーベルＰＫＣについては全てのＰＫＣアイソフォームが検出されたが、アティピカルＰＫＣについてはＰＫＣ−ζだけが検出され、ＰＫＣ−ιおよびＰＫＣ−λは検出されなかった。
【００３８】
試験例 ３
ＰＫＣアイソザイム確認試験その２（ＲＴ−ＰＣＲ試験）
各子宮筋の全ＲＮＡを抽出し、定量ＲＴ−ＰＣＲ法により各子宮筋におけるコンベンショナルＰＫＣアイソザイムの量を測定した。
【００３９】
試験方法および結果
表１に記載したオリゴヌクレオチドプライマーのシーケンスを用い、ＰＣＲ生成物を得たのち、０．１％のエチジウムブロミドを含む２％アガロースゲル上で電気泳動にかけ、紫外線（ＵＶ）−トランスルミネーターで蛍光バンドを検出、定量した。結果は図５に示すとおり、妊娠子宮筋において、コンベンショナルＰＫＣアイソザイムの中でＰＫＣ−β（β１、β２）が際だって増加していた。
【００４０】
【表１】
【００４１】
製造例 １
３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（ヒドロキシ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン
ビス−（３，３’−インドリル）−１−メチルピロール−２，５−ジオン１７．９ｇ（５２．２ミリモル、３当量）のジメチルホルムアミド２５０ｍｌ溶液に、炭酸セシウム６８．４ｇ（４当量）を窒素気流下に加え、これに、１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−３−（２−ヨードエトキシ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）−ブタン１０．７ｇ（１７．５ミリモル）を加え、室温で１８時間攪拌した。反応終了後、反応液を酢酸エチル１２００ｍｌ中に注ぎ、酢酸エチル溶液を１Ｎ−塩酸４００ｍｌで洗浄した。洗浄液を適量の酢酸エチルで逆抽出し、酢酸エチル層を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下に濃縮した。濃縮物をジクロロメタン−アセトニトリル混液、ジクロロメタンおよび酢酸エチル中でトリチュレーションして赤色固体を得た。濾液を減圧下に濃縮し、残留物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフにかけ、ヘキサン−酢酸エチル（５：１）混合溶媒で副生成物のジアルキル化合物を溶出した後、ヘキサン−酢酸エチル（３：１）混合溶媒で溶出して、目的物のモノアルキル体ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテル化合物、３−［（Ｎ−１−（２−エトキシ）−（３’’’（Ｏ）−４’’’−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ） −１’’’−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−ブタン））−インドール−３−イル］−４−［インドール−３−イル］−１Ｎ−（メチル）−ピロール−２，５−ジオン８．２ｇ（収率５７％）を得た。
【００４２】
上記、３−［（Ｎ−１−（２−エトキシ）−（３’’’（Ｏ）−４’’’−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ） −１’’’−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−ブタン））−インドール−３−イル］−４−［インドール−３−イル］−１Ｎ−（メチル）−ピロール−２，５−ジオン８．２ｇ（９．９ミリモル）のメタノール４５０ｍｌ溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸・一水和物０．１６ｇ（０．０８５当量）を、窒素気流下、５℃で加え、２時間攪拌した。反応終了後、反応液を炭酸水素ナトリウムでクエンチングし、メタノール溶液を減圧下に濃縮した。濃縮物を酢酸エチルに溶解し、０．１−Ｎ水酸化ナトリウム水溶液および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下に濃縮した。濃縮物をシリカゲルパッドにのせ、ヘキサン−酢酸エチル（２：１）混合溶媒で未反応のｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテル化合物を溶出した後、ヘキサン−酢酸エチル（１：１）混合溶媒およびヘキサン−酢酸エチル（１：２）混合溶媒でジアルキル化合物を分離溶出して、目的物のアルコール化合物、３−［（Ｎ−１−（２−エトキシ）−（３’’’（Ｏ）−４’’’−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ） −１’’’−（ヒドロキシ）−ブタン））−インドール−３−イル］−４−［インドール−３−イル］−１Ｎ−（メチル）−ピロール−２，５−ジオン６．４ｇ（収率９１％）を得た。
【００４３】
上記、３−［（Ｎ−１−（２−エトキシ）−（３’’’（Ｏ）−４’’’−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ） −１’’’−（ヒドロキシ）−ブタン））−インドール−３−イル］−４−［インドール−３−イル］−１Ｎ−（メチル）−ピロール−２，５−ジオン６．３６ｇ（８．９ミリモル）の無水エーテル５００ｍｌ溶液に、窒素気流下、トリエチルアミン１．９ｍｌ（１．５当量）および塩化メタンスルホニル１．０ｍｌ（１．５当量）を５℃で加えた。３時間後、さらにトリエチルアミン１．２５ｍｌ（１．０当量）および塩化メタンスルホニル０．７ｍｌ（１．０当量）を加えた後、１時間攪拌した。反応終了後、反応液にエーテル２５０ｍｌを加え、水、０．１Ｎ塩酸および食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下に濃縮して目的物のメタンスルホネート化合物、３−［（Ｎ−１−（２−エトキシ）−（３’’’（Ｏ）−４’’’−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ） −１’’’−（メタンスルホニルオキシ）−ブタン））−インドール−３−イル］−４−［インドール−３−イル］−１Ｎ−（メチル）−ピロール−２，５−ジオン７．０ｇを得た。
【００４４】
上記、３−［（Ｎ−１−（２−エトキシ）−（３’’’（Ｏ）−４’’’−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ） −１’’’−（メタンスルホニルオキシ）−ブタン））−インドール−３−イル］−４−［インドール−３−イル］−１Ｎ−（メチル）−ピロール−２，５−ジオン７．０ｇ（８．９ミリモル）のアセトン２００ｍｌ溶液に、ヨウ化ナトリウム１３．３ｇ（１０当量）および炭酸水素ナトリウム７５ｍｇ（０．１当量）を窒素気流下に加え、５０℃で１３時間攪拌した。反応液を減圧下に濃縮し、残留物をシリカゲルパッドにのせ、ヘキサン／酢酸エチル（１：１）混液およびヘキサン／酢酸エチル（１：２）混液を用いて分離溶出し、目的物のヨウ化物、３−［（Ｎ−１−（２−エトキシ）−（３’’’（Ｏ）−４’’’−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ） −１’’’−（ヨード）−ブタン））−インドール−３−イル］−４−［インドール−３−イル］−１Ｎ−（メチル）−ピロール−２，５−ジオン７．６ｇを得た。
【００４５】
炭酸セシウム１２．０ｇ（４当量）のジメチルホルムアミド１ｌ懸濁液に、上記、３−［（Ｎ−１−（２−エトキシ）−（３’’’（Ｏ）−４’’’−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ） −１’’’−（ヨード）−ブタン））−インドール−３−イル］−４−［インドール−３−イル］−１Ｎ−（メチル）−ピロール−２，５−ジオン７．６ｇ（９．２ミリモル）を窒素気流下に加え、これを注射器ポンプによりジメチルホルムアミド２５ｍｌに、６５時間かけて滴下、溶解した。滴下後３時間攪拌した後、反応液を減圧下に濃縮した。残留物を酢酸エチル７００ｍｌに溶解し、水３００ｍｌで２回洗浄し、水層を酢酸エチル２００ｍｌで２回逆抽出し、合わせた酢酸エチル液を食塩水２００ｍｌで２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧下に濃縮した。残留物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにかけ、ヘキサン／酢酸エチル（３：１）混液、次いでヘキサン／酢酸エチル（１：１）混液で分離溶出して、目的物の大環状化合物、３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン５．２ｇ（収率８２％）を得た。
【００４６】
上記、３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオンを５Ｎ水酸化カリウム水溶液１５０ｍｌおよびエタノール３００ｍｌの混合液に懸濁し、室温で６５時間、次いで６０℃で１時間攪拌した。反応液を減圧下に約１５０ｍｌまで濃縮し、濃縮液を適量の水に懸濁して、５℃に冷却下、濃塩酸で酸性（ｐＨ３）にした。酢酸エチル２００ｍｌで４回抽出し、抽出液を乾燥後減圧下に濃縮して、目的物の酸無水物、２，３−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（ヒドロキシ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−フラン−１，４−ジオン３．３ｇを得た。
【００４７】
上記、２，３−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（ヒドロキシ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−フラン−１，４−ジオン３．３ｇ（７．５ミリモル）のジメチルホルムアミド２５０ｍｌ溶液に、１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン３２ｍｌ（２当量）およびメタノール３ｍｌ（１０当量）を窒素気流下に加え、室温で１６時間攪拌し、次いで６０℃で２時間加熱した。１Ｎ塩酸５０ｍｌを加え、１５分間攪拌した後反応液を減圧下に濃縮し、酢酸エチル１ｌと水２５０ｍｌの混合液に分配し、析出物をろ取、乾燥して、目的物の３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（ヒドロキシ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン０．９２ｇ（収率２８％）を得た。また、酢酸エチル層を濃縮して、目的物０．２６ｇ（収率８％）を得た。
上記粗生成物の５０ｍｇをシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにかけ、ジクロロメタン、５％アセトニトリル／ジクロロメタン混液、次いで１０％アセトニトリル／ジクロロメタン混液で分離溶出して、精製物３８ｍｇを得た。
【００４８】
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ１．９６（１Ｈ，ｍ）、２．０９（１Ｈ，ｍ）、３．３１（１Ｈ，ｍ）、３．４０（１Ｈ，ｍ）、３．５１（１Ｈ，ｍ）、３．６２（１Ｈ，ｍ）、３．８９（１Ｈ，ｍ）、４．１８（１Ｈ，ｍ）、４．３５（１Ｈ，ｍ）、４．６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２Ｈｚ）、７．１１（２Ｈ，ｍ）、７．１９（２Ｈ，ｍ）、７．４４（１Ｈ，ｓ）、７．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ）、７．５１（１Ｈ，ｓ）、７．５３（１Ｈ，ｄ）、７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）、１０．９１（１Ｈ，ｓ）。
【００４９】
製造例 ２
３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（ヒドロキシ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン４７２ｍｇ（１．０７ミリモル）の無水ジクロロメタン１４０ｍｌ懸濁液に、ピリジン２６０μｌ（３当量）および無水メタンスルホン酸２４２ｍｇ（１．３当量）を窒素気流下に加え、４時間攪拌した。反応液を適量のジクロロメタンで希釈し、０．１Ｎ塩酸で洗浄し、不溶物の出発物質（５４ｍｇ）をろ去した後、ジクロロメタン液を食塩水で洗浄し、乾燥後減圧下に濃縮した。残留物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにかけ、ジクロロメタン、５％アセトニトリル／ジクロロメタン混液、次いで１０％アセトニトリル／ジクロロメタン混液で順次分離溶出して、目的物のメタンスルホネート、３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（メタンスルホニルオキシ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン２８８ｍｇ（収率５２％）を得た。
【００５０】
上記、３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（メタンスルホニルオキシ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン３０４ｍｇ（０．５９ミリモル）のテトラヒドロフラン２０ｍｌ溶液にジメチルアミン８．９Ｍテトラヒドロフラン溶液７ｍｌ（１０当量）を加え、オートクレーブ中、６５℃で２４時間加熱した。反応液を酢酸エチル２００ｍｌで希釈し、食塩水で洗浄し、乾燥した後減圧下に濃縮した。濃縮物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチル／ヘキサン（３：１）混液および２％イソプロピルアミン／酢酸エチル混液で順次分離溶出して、目的物のジメチルアミノ体、３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオンの粗生成物１９３ｍｇ（収率７０％）を得た。
【００５１】
上記粗生成物を、逆層サイズ排除ＨＰＬＣを用いてアセトニトリル／０．０１％トリフルオロ酢酸水溶液（８５：１５）混液で溶出して、３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・トリフルオロ酢酸塩を得た。このトリフルオロ酢酸塩を酢酸エチルに懸濁し、０．０１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液５０ｍｌで２回緩やかに洗浄し、次いで食塩水で洗浄し、乾燥した後、減圧下に濃縮して遊離体の３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオンを得た。この遊離体の３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオンを無水メタノール５０ｍｌに懸濁し、これに１Ｎ塩化水素無水エーテル溶液１３ｍｌ（５０当量）を加えた後、溶媒を留去し、残留物を減圧乾燥して、目的物の、３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオンを得た。この遊離体の３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩を得た。
【００５２】
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ２．０３（１Ｈ，ｍ）、２．２６（１Ｈ，ｍ）、２．６８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ）、３．２４（１Ｈ，ｍ）、３．２８（１Ｈ，ｍ，Ｄ２Ｏ処理後）、３．６４（１Ｈ，ｍ）、３．７７（２Ｈ，ｍ）、４．０７〜４．３８（４Ｈ，ｍ）、７．０８（２Ｈ，ｍ）、７．１７（２Ｈ，ｍ）、７．４３（３Ｈ，ｍ）、７．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．７９（２Ｈ，ｍ）、１０．３３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、１０．９２（１Ｈ，ｓ）。
【００５３】
製造例 ３
（Ｓ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
（Ｓ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（メタンスルホニルオキシ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン２．８ｇ（５．３９ミリモル）のテトラヒドロフラン３０ｍｌ溶液に、４０％ジメチルアミン水溶液１００ｍｌを加え、オートクレーブ中、５０℃で２４時間加熱した。反応液を減圧下に濃縮し、残留物をシリカゲルパッドにのせ、酢酸エチル、次いで、１０％トリエチルアミン酢酸エチル溶液で分離溶出して、遊離体の、（Ｓ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン１．７ｇ（収率６７％）
【００５４】
上記遊離体、（Ｓ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン１．７ｇ（３．６ミリモル）をメタノール３００ｍｌに懸濁し、これに０．１Ｎ塩化水素エーテル溶液１００ｍｌ（１０ミリモル）を加え、室温下、３０分間攪拌した後、析出物をろ取し、エーテルで洗浄した後、減圧乾燥して、目的物の、（Ｓ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩１．４ｇ（収率７７％）を得た。
【００５５】
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ２．１（１Ｈ，ｍ）、２．３５（１Ｈ，ｍ）、２．６８（６Ｈ，ｓ）、３．２（１Ｈ，ｍ）、３．３３（１Ｈ，ｍ）、３．６６（１Ｈ，ｂｒ．ｔ）、３．８（１Ｈ，ｂｒ．ｔ）、３．８５（１Ｈ，ｍ）、４．１７（１Ｈ，ｍ）、４．２〜４．４（３Ｈ，ｍ）、７．１（１Ｈ，ｄ）、７．１３（１Ｈ，ｄ）、７．２（２Ｈ，ｍ）、７．４４（１Ｈ，ｓ）、７．４８（１Ｈ，ｓ）、７．５（１Ｈ，ｄ）、７．５６（１Ｈ，ｄ）、７．８２（２Ｈ，ｂｒ．ｔ）、１０．５９（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、１０．９６（１Ｈ，ｓ）。
【００５６】
製造例 ４〜２８
製造例１〜３とほぼ同様にして、以下の化合物を製造した。なお、構造はマススペクトル（ＭＳ）、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）または元素分析により確認した。
【００５７】
製造例 ４： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（３’’−プロポキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（ヒドロキシ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン
製造例 ５： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（アミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・トリフルオロ酢酸塩
製造例 ６： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（（Ｏ）−メチレン）−４’’’−（ヒドロキシ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン
製造例 ７： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（（Ｏ）−メチレン）−４’’’−（Ｎ−ピロリジノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン
製造例 ８： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（（Ｏ）−メチレン）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
製造例 ９： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（３’’−プロポキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（アミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン
製造例 １０： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（３’’−プロポキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（アミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
製造例 １１： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（３’’−プロポキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
【００５８】
製造例 １２： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（３’’−プロポキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−ピロリジノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
製造例 １３： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（３’’−プロポキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−ベンジルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
製造例 １４： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（３’’−プロポキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−アセチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン
製造例 １５： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（３’’−プロポキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−フェニルスルホニルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン
製造例 １６： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（３’’−プロポキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン
製造例 １７： （Ｓ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−メチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
製造例 １８： （Ｓ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−ベンジルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
製造例 １９： （Ｒ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−ベンジルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
【００５９】
製造例 ２０： （Ｒ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−アセチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン
製造例 ２１： （Ｒ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−ピロリジノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
製造例 ２２： （Ｓ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−ピロリジノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
製造例 ２３： （Ｒ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−ベンゼンスルホニルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン
製造例 ２４： （Ｓ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−ベンゼンスルホニルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン
製造例 ２５： ３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−ピリジルメチルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
製造例 ２６： （Ｓ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−（４−メチルピペラジン−１−イル）アミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
製造例 ２７： （Ｓ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−モルホリノアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン・塩酸塩
製造例 ２８： （Ｒ）−３，４−［（Ｎ，Ｎ’−１，１’−（（２’’−エトキシ）−３’’’（Ｏ）−４’’’−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ブタン）−ビス−（３，３’−インドリル））］−１（Ｈ）−ピロール−２，５−ジオン
【００６０】
実施例 １
ＰＤＢｕによる子宮筋収縮に対するコンベンショナルＰＫＣアイソザイム非特異的阻害剤であるＧｏ６９７６の作用
試験例１記載の方法によるＰＤＢｕの子宮筋収縮作用に対するコンベンショナルＰＫＣアイソザイム非特異的阻害剤であるＧｏ６９７６の作用を確認した。
試験方法および結果
試験例１と同様に、高カリウムイオン溶液により収縮を測定した後、Ｇｏ６９７６（１μＭ）存在下または非存在下に、ＰＤＢｕを１μＭ添加し、各子宮筋の収縮度を測定した。結果は図６に示すとおり、Ｇｏ６９７６は、妊娠子宮筋ではＰＤＢｕによる収縮を顕著に抑制するが、非妊娠子宮筋では殆ど抑制しない。
【００６１】
実施例 ２
ＰＤＢｕによる妊娠子宮筋収縮に対する各種コンベンショナルＰＫＣアイソザイム非特異的阻害剤の作用
実施例１と同様にして、ＰＤＢｕの妊娠子宮筋収縮作用に対する各種ＰＫＣ阻害剤の作用を確認した。結果は図７に示すとおり、コンベンショナルＰＫＣアイソザイム非特異的阻害剤であるＧｏ６９７６、Ｇｏ６９８３およびＧｏ６８５０はいずれも、妊娠子宮筋におけるＰＤＢｕによる収縮を顕著に抑制した。
【００６２】
実施例 ３
妊娠子宮筋収縮に対するＰＫＣ−β特異的阻害剤、ＬＹ−３３３５３１の作用
実施例２と同様にして、妊娠子宮筋（２２週および３７週）のＰＤＢｕによる収縮作用に対するＰＫＣ−β特異的阻害剤であるＬＹ−３３３５３１の作用を確認し、さらに、妊娠子宮筋（３７週）のオキシトシンによる収縮作用に対するＬＹ−３３３５３１の作用を確認した。結果は図８、図９および図１０に示すとおり、ＬＹ−３３３５３１は、妊娠中期（２２週）子宮筋におけるＰＤＢｕによる収縮に対しては殆ど完全に抑制するが、妊娠後期（３７週）子宮筋におけるＰＤＢｕによる収縮に対する抑制は比較的緩やかで、対照の高カリウムイオン溶液による収縮程度にまで抑制する。さらに、オキシトシン（０．１μＭ）による収縮に対しても抑制作用を示した。
【００６３】
処方例
以下のような処方に従い、各種製剤を製する。なお、剤型の種類および処方は調剤例として挙げたものに限るものではない。
【００６４】
（Ａ）錠剤（５ｍｇ）
活性成分５ｇ、乳糖５０ｇ、６％ＨＰＣ乳糖４０ｇ、バレイショデンプン３ｇおよびステアリン酸タルク２ｇをよく混和して打錠し、１錠中活性成分５ｍｇを含有する錠剤、１０００錠を製する。
【００６５】
（Ｂ）錠剤（１０ｍｇ）
活性成分１０ｇ、乳糖５０ｇ、６％ＨＰＣ乳糖３５ｇ、バレイショデンプン３ｇおよびステアリン酸タルク２ｇをよく混和して打錠し、１錠中活性成分１０ｍｇを含有する錠剤、１０００錠を製する。
【００６６】
（Ｃ）カプセル剤
活性成分５ｇ、乳糖８５ｇ、バレイショデンプン６ｇおよびステアリン酸カルシウム４ｇをよく混和し、硬カプセルに充填し、１カプセル中活性成分５ｍｇを含有するカプセル剤、１０００カプセルを製する。
【００６７】
（Ｄ）散剤
活性成分５ｇと乳糖９９５ｇをよく混和し、１ｇ中活性成分５ｍｇを含有する散剤、１０００ｇを製する。
【００６８】
【発明の効果】
本明細書に記載したように、従来用いられてきた、β２−ＡＲ刺激剤とは全く異なる作用のＰＫＣ−β阻害活性を示す化合物を活性成分として含有させることにより、従来用いられてきた、β２−ＡＲ刺激剤を活性成分として含有する早産防止剤のような心臓や血管に対する影響が少ない、安全で効果的な早産防止剤を製造することができる。
【００６９】
【図面の簡単な説明】
【図１】非妊娠および妊娠ヒト子宮筋に対する塩化カリウムおよびＰＤＢｕの作用を示したグラフである。上段が非妊娠子宮筋、下段が妊娠子宮筋であり、縦軸は収縮強度（ｍＮ）、横軸は時間（分）を示す。
【００７０】
【図２】非妊娠および妊娠（３７〜３８週）ヒト子宮筋に、ＰＤＢｕ１μＭを添加したときの筋収縮度を示したグラフである。−●−の折れ線グラフが妊娠（３７〜３８週）子宮筋、−○−の折れ線グラフが非妊娠子宮筋であり、縦軸は収縮（％）、横軸は時間（分）を示す。
【００７１】
【図３】非妊娠および妊娠（２９週、３７〜３８週）ヒト子宮筋に、ＰＤＢｕ１μＭを添加したときの筋収縮度を示したグラフである。縦軸は収縮（％）、横軸は子宮筋の種類を示す。
【００７２】
【図４】妊娠子宮筋におけるＰＫＣアイソザイムを示した図である。上段はコンベンショナルＰＫＣアイソザイム、中段はノーベルＰＫＣアイソザイム、下段はアティピカルＰＫＣアイソザイムであり、横軸は各ＰＫＣアイソザイムの種類を示す。
【００７３】
【図５】非妊娠および妊娠子宮筋におけるコンベンショナルＰＫＣアイソザイムを示した図である。縦軸はＰＫＣアイソザイムの量（β２マイクログロブリン％）であり、横軸は子宮筋および各ＰＫＣアイソザイムの種類を示す。
【００７４】
【図６】非妊娠および妊娠ヒト子宮筋のＰＤＢｕによる筋収縮に対するコンベンショナルＰＫＣアイソザイム非特異的阻害剤であるＧｏ６９７６の作用を示したグラフである。左のグラフが非妊娠子宮筋、右のグラフが妊娠子宮筋であり、上段は対照、下段は薬物添加の場合であり、縦軸は収縮強度（ｍＮ）、横軸は時間（分）を示す。
【００７５】
【図７】妊娠ヒト子宮筋のＰＤＢｕによる筋収縮に対するコンベンショナルＰＫＣアイソザイム非特異的阻害剤であるＧｏ６９７６、Ｇｏ６９８３およびＧｏ６８５０の筋収縮抑制作用を示したグラフである。縦軸は収縮（％）、横軸はコンベンショナルＰＫＣアイソザイム非特異的阻害剤の種類を示す。
【００７６】
【図８】妊娠（２２週）ヒト子宮筋のＰＤＢｕによる筋収縮に対するＰＫＣ−β特異的阻害剤であるＬＹ３３３５３１の作用を示したグラフである。縦軸は収縮強度（ｍＮ）、横軸は時間（分）を示す。
【００７７】
【図９】妊娠（３７週）ヒト子宮筋のＰＤＢｕによる筋収縮に対するＰＫＣ−β特異的阻害剤であるＬＹ３３３５３１の作用を示したグラフである。縦軸は収縮強度（ｍＮ）、横軸は時間（分）を示す。
【００７８】
【図１０】妊娠（３７週）ヒト子宮筋のオキシトシンによる筋収縮に対するＰＫＣ−β特異的阻害剤であるＬＹ３３３５３１の作用を示したグラフである。縦軸は収縮強度（ｍＮ）、横軸は時間（分）を示す。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to an agent for preventing premature birth. More specifically, the present invention relates to an agent for preventing premature birth, which comprises a compound exhibiting a β-isoform (hereinafter referred to as PKC-β) inhibitory activity of human protein kinase C (hereinafter referred to as PKC).
[0002]
[Prior art]
Hitherto, as a premature birth inhibitor, ritodrine hydrochloride, a β2-adrenergic receptor (hereinafter referred to as β2-AR) stimulant, has been generally used. β2-AR is present not only in the uterus but also in the heart and blood vessels. Therefore, the β2-AR stimulant acts not only on the uterus but also on the heart and blood vessels, affecting the heart rate and blood pressure.
[0003]
Specifically, side effects such as palpitations, tachycardia, finger tremor, flushing of the face, and nausea are likely to occur, and, very rarely, pulmonary edema / heart failure, pancytopenia / agranulocytosis, arrhythmia, hepatic arrhythmia It has been reported that dysfunction may cause serious side effects such as jaundice, rhabdomyolysis, decreased serum potassium, pleural effusion, ileus, and neonatal ventricular septal hypertrophy.
[0004]
As described above, the β2-AR stimulant inevitably produces side effects associated with cardiac action. Therefore, there is a need for a premature birth inhibitor having a completely different action.
[0005]
About 10 isoforms of PKC have been known so far, and are roughly classified into 3 types according to their characteristics.
That is, α isoform (hereinafter referred to as PKC-α), PKC-β and γ isoforms (hereinafter referred to as PKC-γ) are classified into conventional PKC isoforms, δ isoforms (hereinafter referred to as PKC-δ), and ε isoforms (hereinafter referred to as PKC-δ). PKC-ε), η isoform (hereinafter referred to as PKC-η) and θ isoform (hereinafter referred to as PKC-θ) are Nobel PKC isoforms, ι isoform (hereinafter referred to as PKC-ι), λ isoform (hereinafter referred to as λ isoform). PKC-λ) and ζ isoform (hereinafter referred to as PKC-ζ) are classified into atypical PKC isoforms, respectively. It has been said that two types of PKC-β exist, a β1 isoform (hereinafter referred to as PKC-β1) and a β2 isoform (hereinafter referred to as PKC-β2). Opinions are given.
[0006]
Studies have also been made on the tissue localization of PKC isoforms, with PKC-β (β2) in the aorta and heart, and PKC-α, PKC-β (β1, β2) and PKC-ε in the retina. It has been reported that PKC-α, PKC-β (β1), PKC-δ and PKC-ε are activated in spheres, respectively.
[0007]
From the above-mentioned findings, regarding PKC-β inhibitors, diabetes and diabetic nephropathy and diabetic retinopathy targeting the aorta, heart, retina and glomerulus where PKC-β is activated have been hitherto described. Attempts have been made to treat diabetic complications such as ischemia, inflammation, central nervous system diseases, cardiovascular diseases, dermatological diseases and cancer.
[0008]
On the other hand, some of the present inventors have confirmed that activation of PKC suppresses contraction of gastrointestinal smooth muscle, and has already reported. (American Journal
Of Physiology, Volume 263, C1160-1171, 1992)
[0009]
As a compound having a PKC-β inhibitory action,
Embedded image
[0010]
JP-A-7-215977 discloses that an N, N′-bridged bisindolylmaleimide compound represented by the above formula (I) has a PKC-β selective inhibitory activity, and is used for diabetes and complications. , Ischemic, inflammation, central nervous disease, cardiovascular disease, dermatological disease and cancer.
However, PKC-β has never been known to be involved in contraction of human uterine muscle, and there is no report suggesting that a PKC-β inhibitor is useful as an agent for preventing premature birth.
[0011]
[Problems to be solved by the invention]
The problem to be solved by the present invention is to provide an effective and safe premature birth preventive agent that has a completely different effect from the conventional β2-AR stimulant, has a strong inhibitory effect on uterine muscle contraction, and has few side effects. It is to develop.
[0012]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have studied the mechanism of smooth muscle contraction, focused on the involvement of PKC in the mechanism of smooth muscle contraction, and conducted intensive research. As a result, the inventors found that PKC-β is involved in contraction of human uterine muscle. As a result, the present invention has been accomplished.
[0013]
That is, the present inventors first found that by activating PKC with phorbol 12,13-dibutyl ester (hereinafter referred to as PDBu), the human uterine muscle was continuously contracted. Confirmed that it was prominent in pregnant myometrium.
[0014]
On the other hand, the present inventors confirmed the localization of PKC isoforms in the uterine muscle by immunoblotting (Western blotting), and further examined changes in messenger RNA (hereinafter referred to as mRNA) by quantitative RT-PCR. It was found that PKC-β (β1, β2) was significantly increased in human pregnant uterine muscle as compared with non-pregnant uterine muscle by measuring by the method (hereinafter referred to as RT-PCR method).
[0015]
The present inventors presumed from the above findings that PKC-β is involved in contraction in human uterine muscle, particularly in pregnant uterine muscle, and to further confirm the involvement of PKC in contraction of pregnant uterine muscle. Way, KJ., Et al., Reported as non-specific inhibitors of conventional PKC isoforms (Trens Inpharmacology Science, 21, 181-187, 2000), Go6976, Go6983 and Go6850. The effect of PDBu on human uterine muscle contraction was confirmed by using these compounds. As a result, these PKC inhibitors showed an inhibitory effect on PDBu-induced uterine muscle contraction. Was not suppressed.
[0016]
Furthermore, the inventors have reported that the selectivity for PKC-β is high, the formula
Embedded image
Using LY-333531 (hereinafter referred to as LY-333531), the effect of PDBu on contraction of human pregnant uterine muscle and contraction by oxytocin was confirmed. In the third trimester of pregnancy (37 weeks), the uterine muscle showed a remarkably repressive action on myometrial contraction. Furthermore, they also showed an inhibitory effect on contraction by oxytocin, and found that a PKC-β inhibitor was extremely useful as an agent for preventing premature birth. The present invention is based on the above findings.
[0017]
Heretofore, as described above, N, N'-bridged bisindolylmaleimide compounds represented by the formula (I) have been known as PKC-β inhibitors, as described above, for diabetes and its complications and ischemia. Has been reported to be useful as a therapeutic agent for inflammation, central nervous disease, cardiovascular disease, dermatological disease, and cancer. No usefulness as an inhibitor has been reported or suggested.
[0018]
The present invention provides an agent for preventing premature birth, comprising a compound exhibiting PKC-β inhibitory activity as an active ingredient.
[0019]
Examples of the compound exhibiting PKC-β inhibitory activity contained as an active ingredient in the premature birth inhibitor of the present invention include, for example, the compound represented by the above formula (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a solvate thereof. Or a prodrug, preferably a compound represented by the formula:
Embedded image
(R in the formula 1 Is independently H, halogen, C 1-4 Alkyl, OH, C 1-4 An alkoxy, C 1-4 Haloalkyl, nitro, amino, substituted amino, C 1-4 Aminocarbonylalkyl of the formula 3 And R 4 Is independently H or C 1-4 Or an alkyl group of 2-8 May form a cyclic amine of the formula: Z is -O-, C 1-4 Alkylene group, C 1-4 Alkyleneoxy or C 1-4 And m is an integer of 0 or 1 to 3) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, a solvate or a prodrug thereof.
[0020]
More preferably, the formula
Embedded image
(R in the formula 1 Is independently H, halogen, C 1-4 Alkyl group, OH, C 1-4 An alkoxy, C 1-4 Haloalkyl, nitro, amino, substituted amino, C 1-4 Aminocarbonylalkyl of the formula 3 And R 4 Is independently H or C 1-4 Or are linked to each other to form C 2-8 Wherein m is an integer of 0 or 1 to 3, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, a solvate or a prodrug thereof. Can be.
[0021]
Among the compounds represented by the above formula (III),
Embedded image
(Where the carbon atom marked with * represents the S configuration, the R configuration, or a mixture thereof) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, a solvate or a prodrug thereof. Preferably, LY-33353 represented by the above formula (V) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, a solvate or a prodrug thereof is most preferred.
[0022]
In the present invention, when stereoisomers are present in the compounds represented by the formulas (I) to (III), all isomers and mixtures can be used. For example, when it has an asymmetric carbon, any of the respective optically active substances, a mixture thereof, a racemic body, an enantiomer and the like can be used.
[0023]
The salt of the compound represented by the formula (I) to the formula (V) contained as an active ingredient in the premature birth inhibitor of the present invention does not affect the activity of the compound or the like and is pharmacologically acceptable. Any one may be used, for example, inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, sulfuric acid and phosphoric acid, p-toluenesulfonic acid, methanesulfonic acid, acetic acid, butyric acid, propion Acid addition salts of organic acids such as acids, oxalic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, citric acid, tartaric acid and benzoic acid can be mentioned.
[0024]
Further, in the present invention, various prodrugs of the compounds represented by the formulas (I) to (VI) can also be used. Prodrugs are those that have been modified with a functional group for the purpose of improving stability, absorption or sustainability, etc. and, after being absorbed into the body, efficiently converting them to active forms. Any material may be used as long as it is modified with a possible group.
[0025]
The compounds represented by the formulas (I) to (V) or pharmacologically acceptable salts thereof of the present invention can be easily produced by a known method, for example, the method described in JP-A-7-215977. can do.
[0026]
The N, N'-bridged bisindolylmaleimide compounds of the present invention represented by the above formulas (I) to (V) or pharmacologically acceptable salts thereof are extremely useful compounds for preventing premature birth. Therefore, the N, N'-bridged bisindolylmaleimide compound represented by the formula (I) to (V) of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is contained as an active ingredient, By mixing with an additive, a pharmaceutical composition which is extremely useful as an agent for preventing premature birth can be produced.
[0027]
When the pharmaceutical composition of the present invention is used for actual treatment, it is administered orally or parenterally in various dosage forms. Examples of oral administration agents include powders, granules, tablets, capsules, Parenteral preparations such as dry syrups include injections and suppositories.
[0028]
These pharmaceutical compositions are prepared according to a conventional method by appropriately mixing excipients, excipients, disintegrants, binders, and pharmaceutical additives such as lubricants, which are appropriate for the dosage form, in accordance with ordinary pharmaceutical techniques. It can be manufactured by things.
[0029]
For example, a powder is prepared by adding an appropriate excipient, lubricant and the like to the active ingredient, if necessary, and thoroughly mixing to obtain a powder.
Tablets are added to the active ingredient, if necessary, with appropriate excipients, disintegrants, binders, lubricants, and the like, and are tabletted in a conventional manner to give tablets. Further, if necessary, the composition is appropriately coated to give film-coated tablets, sugar-coated tablets, enteric-coated tablets and the like.
Capsules are added to an active ingredient, if necessary, with an appropriate excipient, a lubricant, and the like, mixed well, or formed into granules or fine granules by a conventional method, and filled in an appropriate capsule. Into capsules.
Further, in the case of such an oral preparation, an immediate release or sustained release preparation can be prepared depending on the treatment method.
[0030]
When the pharmaceutical composition of the present invention is used for actual treatment, the dose of the active ingredient is appropriately determined according to the patient's age, body weight, gestational cycle, degree of symptoms, etc., and the administration method. The N, N'-bridged bisindolylmaleimide compound of the present invention represented by the formula (I) or a pharmacologically acceptable salt thereof is used in an amount of 0.01 to 50 mg, preferably 0.05 to 20 mg. Administer in the range. It may be increased or decreased as appropriate according to the symptoms.
[0031]
The pharmaceutical composition of the present invention may contain a conventional β2-AR stimulant as an active ingredient, or may be used in combination with a premature birth inhibitor containing a conventional β2-AR stimulant as an active ingredient. In such a case, the dose of the active ingredient can be reduced, which is effective in reducing side effects.
[0032]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
In order to explain the content of the present invention in detail, Test Examples, Production Examples, Examples and Formulation Examples are given below, but the scope of the present invention is not limited thereto.
[0033]
【Example】
Test example 1
Uterine muscle contraction confirmation test by PDBu
The effect of PDBu on human uterine muscle contraction was confirmed. Pregnant and non-pregnant myometrium specimens were collected from the uterus muscle of the uterus of the cesarean section patient and the uterus isolated from the benign disease patient, respectively. Caesarean section is a 37-38 week procedure unless otherwise noted. Muscle specimens were delaminated using α-toxin of Staphylococcus aureus according to the method of Kitazawa et al. (Journal of Biological Chemistry, 264: 5339-5342, 1989), and were 0.1-0.2 mm wide and 0.1-0.2 mm long. The thickness was adjusted to 1 to 2 mm. Muscle contraction was measured using the degree of contraction induced by 40 mM potassium ion as a control.
[0034]
Test method and results
The above-mentioned human pregnant myometrium and non-pregnancy myometrium specimens were fixed to the apparatus with a tension of 10 millinewtons (mN), and Tyrode's solution (composition (mM): sodium chloride 136.9, potassium chloride 5.4, calcium chloride 1) 0.5, magnesium chloride 1.0, sodium bicarbonate 23.8, glucose 5.5, ethylenediaminetetraacetic acid 0.01) for 20 minutes to equilibrate, and then repeatedly until the contraction reaction is stabilized, the high potassium ion solution ( (40 mM potassium chloride solution), and then each test was performed.
[0035]
The high potassium ion solution was prepared by adding equimolar potassium chloride in place of the sodium chloride of the Tyrode's solution, and saturating a mixture of 95% oxygen and 5% carbon dioxide at 37 ° C and pH 7.4. It was used.
1 μM of PDBu was added to each sample, and muscle contraction was measured. As shown in FIG. 1 and FIG. 2, the uterine muscle induced a continuous contraction by adding PDBu, and the contraction degree was remarkable in the pregnant uterus. Muscle contraction when 1 μM of PDBu was added was measured using a 29-week pregnant myometrium and a 37-38 week pregnant myometrium sample. As shown in FIG. 3, the contraction degree of the 37-38 week pregnant uterus was more remarkable than that of the 29 week pregnant myometrium.
[0036]
Test example 2
PKC isozyme confirmation test 1
PKC isozymes in pregnant uterine muscle were confirmed by immunoblotting (Western blotting).
[0037]
Test method and results
50 μg of protein fractionated from pregnant myometrium was electrophoresed on a 7.5% SDS-polyacrylamide gel and the separated proteins were transferred to a polyvinylidene difluoride membrane and contacted with a specific monoclonal antibody against each PKC isozyme. After that, the membrane was incubated with Forseladish peroxidase conjugated sheep anti-mouse IgG or donkey anti-rabbit IgG and detected by a high performance chemiluminescence system. As shown in FIG. 4, all PKC isoforms were detected for conventional PKC and Nobel PKC, but only PKC-ζ was detected for atypical PKC, and PKC-ι and PKC-λ were not detected. .
[0038]
Test example 3
PKC isozyme confirmation test 2 (RT-PCR test)
Total RNA of each myometrium was extracted, and the amount of a conventional PKC isozyme in each myometrium was measured by a quantitative RT-PCR method.
[0039]
Test method and results
A PCR product was obtained using the sequence of the oligonucleotide primers described in Table 1, and then subjected to electrophoresis on a 2% agarose gel containing 0.1% ethidium bromide, followed by fluorescence with an ultraviolet (UV) -transluminator. Bands were detected and quantified. As shown in FIG. 5, PKC-β (β1, β2) was significantly increased among the conventional PKC isozymes in pregnant myometrium.
[0040]
[Table 1]
[0041]
Production Example 1
3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ″ ′-(hydroxy) -butane) -bis- (3, 3'-Indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione
To a solution of bis- (3,3′-indolyl) -1-methylpyrrole-2,5-dione (17.9 g, 52.2 mmol, 3 equivalents) in 250 ml of dimethylformamide, 68.4 g (4 equivalents) of cesium carbonate was added. Under a nitrogen stream, 10.7 g (17.5 mmol) of 1- (tert-butyldimethylsilyloxy) -3- (2-iodoethoxy) -4- (tert-butyldiphenylsilyloxy) -butane was added thereto. Was added and stirred at room temperature for 18 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was poured into 1200 ml of ethyl acetate, and the ethyl acetate solution was washed with 400 ml of 1N hydrochloric acid. The washing solution was back-extracted with an appropriate amount of ethyl acetate, and the ethyl acetate layers were combined, washed with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate and brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was triturated in a dichloromethane-acetonitrile mixture, dichloromethane and ethyl acetate to give a red solid. The filtrate was concentrated under reduced pressure, and the residue was subjected to silica gel flash chromatography. The dialkyl compound as a by-product was eluted with a mixed solvent of hexane and ethyl acetate (5: 1), and then mixed with hexane and ethyl acetate (3: 1). The mixture was eluted with a solvent to give the desired monoalkyl tert-butyldimethylsilyl ether compound, 3-[(N-1- (2-ethoxy)-(3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(tert) -Butyldiphenylsilyloxy) -1 ′ ″-(tert-butyldimethylsilyloxy) -butane))-indol-3-yl] -4- [indol-3-yl] -1N- (methyl) -pyrrole- 8.2 g (57% yield) of 2,5-dione was obtained.
[0042]
The above, 3-[(N-1- (2-ethoxy)-(3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(tert-butyldiphenylsilyloxy) -1 ′ ″-(tert-butyldimethylsilyl) Oxy) -butane))-indol-3-yl] -4- [indol-3-yl] -1N- (methyl) -pyrrole-2,5-dione (8.2 g, 9.9 mmol) in methanol in 450 ml Then, 0.16 g (0.085 equivalent) of p-toluenesulfonic acid monohydrate was added at 5 ° C. under a nitrogen stream, followed by stirring for 2 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was quenched with sodium hydrogen carbonate, and the methanol solution was concentrated under reduced pressure. The concentrate was dissolved in ethyl acetate, washed successively with a 0.1-N aqueous sodium hydroxide solution and saturated saline, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The concentrate is placed on a silica gel pad, and the unreacted tert-butyldimethylsilyl ether compound is eluted with a mixed solvent of hexane-ethyl acetate (2: 1), followed by a mixed solvent of hexane-ethyl acetate (1: 1) and hexane-acetic acid. The dialkyl compound is separated and eluted with a mixed solvent of ethyl (1: 2) to give the desired alcohol compound, 3-[(N-1- (2-ethoxy)-(3 ′ ″ (O) -4 ′ ″). -(Tert-butyldiphenylsilyloxy) -1 ′ ″-(hydroxy) -butane))-indol-3-yl] -4- [indol-3-yl] -1N- (methyl) -pyrrole-2, 6.4 g of 5-dione (91% yield) was obtained.
[0043]
The above, 3-[(N-1- (2-ethoxy)-(3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(tert-butyldiphenylsilyloxy) -1 ′ ″-(hydroxy) -butane) To a solution of 6.36 g (8.9 mmol) of) -indol-3-yl] -4- [indol-3-yl] -1N- (methyl) -pyrrole-2,5-dione in 500 ml of anhydrous ether was flushed with nitrogen. Below, 1.9 ml (1.5 equivalents) of triethylamine and 1.0 ml (1.5 equivalents) of methanesulfonyl chloride were added at 5 ° C. After 3 hours, 1.25 ml (1.0 equivalent) of triethylamine and 0.7 ml (1.0 equivalent) of methanesulfonyl chloride were further added, and the mixture was stirred for 1 hour. After completion of the reaction, 250 ml of ether was added to the reaction solution, which was washed with water, 0.1N hydrochloric acid and brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, concentrated under reduced pressure, and concentrated under reduced pressure to obtain the desired methanesulfonate compound, 3-[(N -1- (2-ethoxy)-(3 "" (O) -4 ""-(tert-butyldiphenylsilyloxy) -1 ""-(methanesulfonyloxy) -butane))-indole-3 -Yl] -4- [indol-3-yl] -1N- (methyl) -pyrrole-2,5-dione (7.0 g) was obtained.
[0044]
The above, 3-[(N-1- (2-ethoxy)-(3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(tert-butyldiphenylsilyloxy) -1 ′ ″-(methanesulfonyloxy)- Butane))-indol-3-yl] -4- [indol-3-yl] -1N- (methyl) -pyrrole-2,5-dione was dissolved in a solution of 7.0 g (8.9 mmol) of acetone in 200 ml of acetone. 13.3 g (10 equivalents) of sodium chloride and 75 mg (0.1 equivalents) of sodium hydrogen carbonate were added under a nitrogen stream, and the mixture was stirred at 50 ° C for 13 hours. The reaction solution is concentrated under reduced pressure, and the residue is placed on a silica gel pad, and separated and eluted using a hexane / ethyl acetate (1: 1) mixed solution and a hexane / ethyl acetate (1: 2) mixed solution to obtain the desired iodide. , 3-[(N-1- (2-ethoxy)-(3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(tert-butyldiphenylsilyloxy) -1 ′ ″-(iodo) -butane)) 7.6 g of -indol-3-yl] -4- [indol-3-yl] -1N- (methyl) -pyrrole-2,5-dione were obtained.
[0045]
To a suspension of 12.0 g (4 equivalents) of cesium carbonate in 1 liter of dimethylformamide was added 3-[(N-1- (2-ethoxy)-(3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(tert) -Butyldiphenylsilyloxy) -1 ′ ″-(iodo) -butane))-indol-3-yl] -4- [indol-3-yl] -1N- (methyl) -pyrrole-2,5-dione 7.6 g (9.2 mmol) was added under a nitrogen stream, and this was dropped and dissolved in 25 ml of dimethylformamide by a syringe pump over 65 hours. After stirring for 3 hours after the dropwise addition, the reaction solution was concentrated under reduced pressure. The residue was dissolved in 700 ml of ethyl acetate, washed twice with 300 ml of water, the aqueous layer was back-extracted twice with 200 ml of ethyl acetate, and the combined ethyl acetate solution was washed twice with 200 ml of brine and dried over anhydrous magnesium sulfate. After drying, it was concentrated under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel flash chromatography, and separated and eluted with a hexane / ethyl acetate (3: 1) mixed solution, and then with a hexane / ethyl acetate (1: 1) mixed solution to obtain the desired macrocyclic compound, 3,4-[( N, N'-1,1 '-((2 "-ethoxy) -3'" (O) -4 '"-(tert-butyldiphenylsilyloxy) -butane) -bis- (3,3 '-Indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione (5.2 g, yield 82%).
[0046]
3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(tert-butyldiphenylsilyloxy) -butane) ) -Bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione was suspended in a mixture of 150 ml of 5N aqueous potassium hydroxide solution and 300 ml of ethanol, and then suspended at room temperature for 65 hours, and then for 65 hours. Stirred at 60 ° C. for 1 hour. The reaction solution was concentrated under reduced pressure to about 150 ml, the concentrated solution was suspended in an appropriate amount of water, and acidified (pH 3) with concentrated hydrochloric acid under cooling to 5 ° C. The mixture was extracted four times with 200 ml of ethyl acetate, and the extract was dried and concentrated under reduced pressure to obtain the desired acid anhydride, 2,3-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″- (Ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(hydroxy) -butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-furan-1,4-dione 3.3 g was obtained.
[0047]
As described above, 2,3-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(hydroxy) -butane) -bis- ( 3,3′-Indolyl))] To a solution of 3.3 g (7.5 mmol) of furan-1,4-dione in 250 ml of dimethylformamide was added 32 ml of 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazane. (2 equivalents) and 3 ml (10 equivalents) of methanol were added under a nitrogen stream, stirred at room temperature for 16 hours, and then heated at 60 ° C. for 2 hours. 50 ml of 1N hydrochloric acid was added, and after stirring for 15 minutes, the reaction solution was concentrated under reduced pressure, partitioned between a mixture of 1 l of ethyl acetate and 250 ml of water, and the precipitate was collected by filtration, dried and dried to obtain the desired product, 3,4- [(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(hydroxy) -butane) -bis- (3,3′-indolyl ))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione 0.92 g (yield 28%) was obtained. The ethyl acetate layer was concentrated to obtain 0.26 g (yield: 8%) of the desired product.
50 mg of the above crude product was subjected to silica gel flash chromatography, and separated and eluted with dichloromethane, a 5% acetonitrile / dichloromethane mixture, and then a 10% acetonitrile / dichloromethane mixture to obtain 38 mg of a purified product.
[0048]
1 H NMR (d 6 -DMSO): δ 1.96 (1H, m), 2.09 (1H, m), 3.31 (1H, m), 3.40 (1H, m), 3.51 (1H, m), 3 .62 (1H, m), 3.89 (1H, m), 4.18 (1H, m), 4.35 (1H, m), 4.68 (1H, t, J = 2 Hz), 7. 11 (2H, m), 7.19 (2H, m), 7.44 (1H, s), 7.46 (1H, d, J = 9 Hz), 7.51 (1H, s), 7.53 (1H, d), 7.79 (1H, d, J = 8 Hz), 7.83 (1H, d, J = 8 Hz), 10.91 (1H, s).
[0049]
Production Example 2
3,4-[(N, N'-1,1 '-((2 "-ethoxy) -3""(O)-4""-(N, N-dimethylamino) -butane)- Bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ″ ′-(hydroxy) -butane) -bis- (3, 3′-Indolyl))] In a suspension of 472 mg (1.07 mmol) of -1 (H) -pyrrole-2,5-dione in 140 ml of anhydrous dichloromethane, 260 μl (3 equivalents) of pyridine and 242 mg (1 (3 equivalents) under a nitrogen stream and stirred for 4 hours. The reaction solution was diluted with an appropriate amount of dichloromethane, washed with 0.1N hydrochloric acid, and the insoluble starting material (54 mg) was filtered off. The dichloromethane solution was washed with brine, dried and concentrated under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel flash chromatography, and separated and eluted sequentially with dichloromethane, a 5% acetonitrile / dichloromethane mixture, and then with a 10% acetonitrile / dichloromethane mixture to give the desired product, methanesulfonate, 3,4-[(N, N'-1). , 1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(methanesulfonyloxy) -butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 ( 288 mg (52% yield) of H) -pyrrole-2,5-dione were obtained.
[0050]
3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(methanesulfonyloxy) -butane) -bis -(3,3'-Indolyl))] To a solution of 304 mg (0.59 mmol) of -1 (H) -pyrrole-2,5-dione in 20 ml of tetrahydrofuran was added 7 ml (10 equivalents) of a 8.9 M solution of dimethylamine in tetrahydrofuran. And heated in an autoclave at 65 ° C. for 24 hours. The reaction solution was diluted with 200 ml of ethyl acetate, washed with brine, dried and concentrated under reduced pressure. The concentrate was subjected to silica gel flash chromatography, which was sequentially separated and eluted with a mixed solution of ethyl acetate / hexane (3: 1) and a mixed solution of 2% isopropylamine / ethyl acetate to give the desired dimethylamino compound, 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N, N-dimethylamino) -butane) -bis- (3,3′- Indolyl))] 193 mg (yield 70%) of a crude product of -1 (H) -pyrrole-2,5-dione was obtained.
[0051]
The above crude product was eluted with a mixed solution of acetonitrile / aqueous solution of 0.01% trifluoroacetic acid (85:15) using reverse layer size exclusion HPLC to give 3,4-[(N, N′-1,1 ′). -((2 "-ethoxy) -3 '" (O) -4'"-(N, N-dimethylamino) -butane) -bis- (3,3'-indolyl))]-1 ( H) -Pyrrole-2,5-dione trifluoroacetate was obtained. This trifluoroacetate was suspended in ethyl acetate, washed twice gently with 50 ml of a 0.01N aqueous sodium hydroxide solution, then washed with brine, dried and concentrated under reduced pressure to give the free form of 3,3. 4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N, N-dimethylamino) -butane) -bis- (3,3'-Indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione was obtained. 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N, N-dimethylamino) -Butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione suspended in 50 ml of anhydrous methanol, and 13 ml of a 1N hydrogen chloride anhydrous ether solution (50 equivalents). Was added, the solvent was distilled off, and the residue was dried under reduced pressure to obtain the target compound, 3,4-[(N, N'-1,1 '-((2 "-ethoxy) -3'). '' (O) -4 '''-(N, N-dimethylamino) -butane) -bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione. Was. 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N, N-dimethylamino) -Butane) -bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride.
[0052]
1 H NMR (d 6 -DMSO): δ 2.03 (1 H, m), 2.26 (1 H, m), 2.68 (6 H, t, J = 5 Hz), 3.24 (1 H, m), 3.28 (1 H, m) m, D 2 O treatment), 3.64 (1H, m), 3.77 (2H, m), 4.07 to 4.38 (4H, m), 7.08 (2H, m), 7.17 (2H) , M), 7.43 (3H, m), 7.52 (1H, d, J = 8 Hz), 7.79 (2H, m), 10.33 (1H, br.s), 10.92 ( 1H, s).
[0053]
Production Example 3
(S) -3,4-[(N, N'-1,1 '-((2 "-ethoxy) -3'" (O) -4 '"-(N, N-dimethylamino) -Butane) -bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
(S) -3,4-[(N, N'-1,1 '-((2 "-ethoxy) -3'" (O) -4 '"-(methanesulfonyloxy) -butane) -Bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione (2.8 g, 5.39 mmol) in tetrahydrofuran (30 ml) was added with a 40% aqueous dimethylamine solution (100 ml). Heated at 50 ° C. for 24 hours in an autoclave. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was placed on a silica gel pad, and separated and eluted with ethyl acetate and then with a 10% ethyl acetate solution of triethylamine to give the free form of (S) -3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N, N-dimethylamino) -butane) -bis- (3,3′- Indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione 1.7 g (67% yield)
[0054]
The educt, (S) -3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N, N -Dimethylamino) -butane) -bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione (1.7 g, 3.6 mmol) was suspended in methanol (300 ml). To the mixture was added 100 ml (10 mmol) of a 0.1N hydrogen chloride ether solution, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The precipitate was collected by filtration, washed with ether, dried under reduced pressure, and dried under reduced pressure. -3,4-[(N, N'-1,1 '-((2 "-ethoxy) -3""(O)-4""-(N, N-dimethylamino) -butane) -Bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride (1.4 g, yield 77%).
[0055]
1 H NMR (d 6 -DMSO): δ2.1 (1H, m), 2.35 (1H, m), 2.68 (6H, s), 3.2 (1H, m), 3.33 (1H, m), 3 .66 (1H, br.t), 3.8 (1H, br.t), 3.85 (1H, m), 4.17 (1H, m), 4.2-4.4 (3H, m ), 7.1 (1H, d), 7.13 (1H, d), 7.2 (2H, m), 7.44 (1H, s), 7.48 (1H, s), 7.5 (1H, d), 7.56 (1H, d), 7.82 (2H, br.t), 10.59 (1H, br.s), 10.96 (1H, s).
[0056]
Production Examples 4-28
The following compounds were produced in substantially the same manner as in Production Examples 1 to 3. The structure was confirmed by mass spectrum (MS), nuclear magnetic resonance spectrum (NMR) or elemental analysis.
[0057]
Production Example 4: 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((3 ″ -propoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(hydroxy) -butane) -bis -(3,3'-Indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione
Production Example 5: 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(amino) -butane) -bis -(3,3'-Indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione trifluoroacetate
Production Example 6: 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ ((O) -methylene) -4 ′ ″-(hydroxy)- Butane) -bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione
Production Example 7: 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ ((O) -methylene) -4 ′ ″-(N-pyrrolidino ) -Butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione
Production Example 8: 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ ((O) -methylene) -4 ′ ″-(N, N -Dimethylamino) -butane) -bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
Production Example 9: 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((3 ″ -propoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(amino) -butane) -bis -(3,3'-Indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione
Production Example 10: 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((3 ″ -propoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(amino) -butane) -bis -(3,3'-Indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
Production Example 11: 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((3 ″ -propoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N, N-dimethylamino) -Butane) -bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
[0058]
Production Example 12: 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((3 ″ -propoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N-pyrrolidino) -butane) -Bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
Production Example 13: 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((3 ″ -propoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N-benzylamino) -butane ) -Bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
Production Example 14: 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((3 ″ -propoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N-acetylamino) -butane ) -Bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione
Production Example 15: 3,4-[(N, N'-1,1 '-((3 "-propoxy) -3'" (O) -4 '"-(N-phenylsulfonylamino)- Butane) -bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione
Production Example 16: 3,4-[(N, N′-1,1 ′-((3 ″ -propoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N-benzyloxycarbonylamino) -Butane) -bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione
Production Example 17: (S) -3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N-methyl Amino) -butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
Production Example 18: (S) -3,4-[(N, N'-1,1 '-((2 "-ethoxy) -3'" (O) -4 '"-(N-benzyl Amino) -butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
Production Example 19: (R) -3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N-benzyl) Amino) -butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
[0059]
Production Example 20: (R) -3,4-[(N, N'-1,1 '-((2 "-ethoxy) -3'" (O) -4 '"-(N-acetyl Amino) -butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione
Production Example 21: (R) -3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N-pyrrolidino ) -Butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
Production Example 22: (S) -3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N-pyrrolidino ) -Butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
Production Example 23: (R) -3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N-benzene Sulfonylamino) -butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione
Production Example 24: (S) -3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N-benzene Sulfonylamino) -butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione
Production Example 25: 3,4-[(N, N'-1,1 '-((2 "-ethoxy) -3'" (O) -4 '"-(N-pyridylmethylamino)- Butane) -bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
Production Example 26: (S) -3,4-[(N, N'-1,1 '-((2 "-ethoxy) -3'" (O) -4 '"-(N- ( 4-methylpiperazin-1-yl) amino) -butane) -bis- (3,3'-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
Production Example 27: (S) -3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N-morpholino) Amino) -butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione hydrochloride
Production Example 28: (R) -3,4-[(N, N′-1,1 ′-((2 ″ -ethoxy) -3 ′ ″ (O) -4 ′ ″-(N-benzyl Oxycarbonylamino) -butane) -bis- (3,3′-indolyl))]-1 (H) -pyrrole-2,5-dione
[0060]
Example 1
Effect of Go6976, a non-specific inhibitor of conventional PKC isozyme, on myometrial contraction by PDBu
The effect of Go6976, a non-specific PKC isozyme non-specific inhibitor, on the uterine muscle contraction effect of PDBu by the method described in Test Example 1 was confirmed.
Test method and results
As in Test Example 1, after measuring contraction with a high potassium ion solution, 1 μM of PDBu was added in the presence or absence of Go6976 (1 μM), and the degree of contraction of each uterine muscle was measured. As shown in the results in FIG. 6, Go6976 remarkably suppresses contraction by PDBu in pregnant myometrium but hardly inhibits it in non-pregnant myometrium.
[0061]
Example 2
Effects of non-specific inhibitors of various conventional PKC isozymes on PDBu-induced contraction of uterine myometrium
In the same manner as in Example 1, the effects of various PKC inhibitors on the contractile action of PDBu on pregnant uterine muscles were confirmed. As shown in FIG. 7, all of the conventional non-specific PKC isozyme inhibitors Go6976, Go6983, and Go6850 significantly suppressed PDBu-induced contraction in pregnant myometrium.
[0062]
Example 3
Effect of LY-333531, a PKC-β specific inhibitor on pregnancy uterine muscle contraction
In the same manner as in Example 2, the effect of LY-333531, which is a PKC-β specific inhibitor, on the contractile action of PDBu on pregnant myometrium (22 weeks and 37 weeks) was confirmed. The effect of LY-333531 on the contraction by oxytocin was confirmed. As shown in FIG. 8, FIG. 9 and FIG. 10, LY-333531 almost completely suppresses contraction by PDBu in the uterine muscle in the second trimester (22 weeks), while LY-333531 in the third trimester (37 weeks) The inhibition of the contraction by PDBu in Comparative Example 1 was relatively gradual, and was suppressed to the degree of contraction by the high potassium ion solution of the control. Furthermore, it also exhibited an inhibitory effect on contraction caused by oxytocin (0.1 μM).
[0063]
Prescription example
Various formulations are prepared according to the following prescription. The type and formulation of the dosage form are not limited to those listed as examples of preparation.
[0064]
(A) Tablet (5 mg)
The active ingredient (5 g), lactose (50 g), 6% HPC lactose (40 g), potato starch (3 g) and talc stearate (2 g) are thoroughly mixed and tabletted to prepare 1,000 tablets each containing 5 mg of the active ingredient in one tablet.
[0065]
(B) Tablet (10 mg)
10 g of the active ingredient, 50 g of lactose, 35 g of 6% HPC lactose, 3 g of potato starch and 2 g of talc stearate are thoroughly mixed and tabletted to prepare 1000 tablets each containing 10 mg of the active ingredient.
[0066]
(C) Capsule
5 g of the active ingredient, 85 g of lactose, 6 g of potato starch and 4 g of calcium stearate are mixed well and filled into hard capsules to give 1000 capsules containing 5 mg of the active ingredient in 1 capsule.
[0067]
(D) powder
5 g of the active ingredient is mixed well with 995 g of lactose to prepare 1000 g of a powder containing 5 mg of the active ingredient in 1 g.
[0068]
【The invention's effect】
As described in the present specification, by containing, as an active ingredient, a compound exhibiting PKC-β inhibitory activity having a completely different action from the conventionally used β2-AR stimulant, the conventionally used β2 -It is possible to manufacture a safe and effective premature birth preventive agent having little effect on the heart and blood vessels, such as a premature birth preventive agent containing an AR stimulant as an active ingredient.
[0069]
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a graph showing the effects of potassium chloride and PDBu on non-pregnant and pregnant human uterine muscle. The upper row shows the non-pregnant myometrium and the lower row shows the pregnant myometrium, the vertical axis shows the contraction intensity (mN), and the horizontal axis shows the time (minutes).
[0070]
FIG. 2 is a graph showing the degree of muscle contraction when 1 μM of PDBu was added to non-pregnant and pregnant (37-38 weeks) human uterine muscle. The line graph of-●-indicates the myometrium of pregnancy (37 to 38 weeks), and the line graph of-○-indicates the non-pregnancy myometrium, the vertical axis indicates contraction (%), and the horizontal axis indicates time (minutes).
[0071]
FIG. 3 is a graph showing the degree of muscle contraction when 1 μM of PDBu was added to non-pregnant and pregnant (29 weeks, 37 to 38 weeks) human uterine muscle. The vertical axis indicates contraction (%), and the horizontal axis indicates the type of uterine muscle.
[0072]
FIG. 4 shows PKC isozymes in pregnant myometrium. The upper row shows the conventional PKC isozyme, the middle row shows the Nobel PKC isozyme, the lower row shows the atypical PKC isozyme, and the horizontal axis shows the type of each PKC isozyme.
[0073]
FIG. 5 shows conventional PKC isozymes in non-pregnant and pregnant uterine muscles. The vertical axis indicates the amount of PKC isozyme (% of β2 microglobulin), and the horizontal axis indicates uterine muscle and the type of each PKC isozyme.
[0074]
FIG. 6 is a graph showing the effect of Go6976, a non-specific inhibitor of conventional PKC isozyme, on muscle contraction by PDBu in non-pregnant and pregnant human uterine muscle. The left graph shows the non-pregnant myometrium and the right graph shows the pregnant myometrium, the upper row shows the control, the lower row shows the case of drug addition, the vertical axis shows the contraction intensity (mN), and the horizontal axis shows the time (minute). .
[0075]
FIG. 7 is a graph showing the muscle contraction inhibitory effects of Go6976, Go6983, and Go6850, which are non-specific inhibitors of conventional PKC isozymes, on muscle contraction by PDBu of pregnant human uterine muscle. The vertical axis shows the contraction (%), and the horizontal axis shows the type of the conventional PKC isozyme non-specific inhibitor.
[0076]
FIG. 8 is a graph showing the effect of LY333531, a PKC-β-specific inhibitor, on PDBu-induced muscle contraction of pregnant (22 weeks) human uterine muscle. The vertical axis indicates the contraction strength (mN), and the horizontal axis indicates the time (minute).
[0077]
FIG. 9 is a graph showing the effect of LY333531, a PKC-β-specific inhibitor, on PDBu-induced muscle contraction of pregnant (37-week) human uterine muscle. The vertical axis indicates the contraction strength (mN), and the horizontal axis indicates the time (minute).
[0078]
FIG. 10 is a graph showing the effect of LY333531, a PKC-β-specific inhibitor, on oxytocin-induced muscle contraction of pregnant (37 week) human uterine muscle. The vertical axis indicates the contraction strength (mN), and the horizontal axis indicates the time (minute).
