【特許請求の範囲】
【請求項１】
幹細胞成長因子活性を有するポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、配列番号９、１１、１２、３１または３３のヌクレオチド配列またはそれらの成熟タンパク質コード部分、または幹細胞成長因子活性を保持するポリペプチドをコードするそれらの断片、類縁体、変異体もしくは誘導体を含むポリヌクレオチド。
【請求項２】
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号９、１１、１２、３１または３３のヌクレオチド配列の相補体にハイブリダイズする、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
配列番号９、１１、１２、３１または３３のヌクレオチド配列と約８５％よりも高い配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
配列番号９、１１、１２、３１または３３のヌクレオチド配列と約９０％よりも高い配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
配列番号９、１１、１２、３１または３３のヌクレオチド配列と約９２％よりも高い配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記ポリヌクレオチド配列は、配列番号４７のヌクレオチド配列から構成されない、請求項１、２または３のいずれかに記載のポリヌクレオチド配列。
【請求項７】
配列番号９、１１、１２、３１または３３の成熟タンパク質コード配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
【請求項８】
配列番号９、１１、１２、３１または３３のヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
【請求項９】
（Ａ）配列番号３２の少なくともアミノ酸残基２２〜２７９を含むアミノ酸配列、もしくは配列番号３４の少なくともアミノ酸残基２２〜２７２を含むアミノ酸配列を有するポリペプチド、又は
（Ｂ）配列番号３２の少なくともアミノ酸残基２２〜２７９を含むアミノ酸配列、もし
くは配列番号３４の少なくともアミノ酸残基２２〜２７２を含むアミノ酸配列中に、１個または数個のアミノ酸の欠失、置換もしくは挿入を含むアミノ酸配列を有し、かつ造血幹細胞又は造血前駆細胞の増殖もしくは生存を支持する活性を有するポリペプチド
をコードするＤＮＡであって、但しＣ末端アミノ酸配列は、配列番号４６のアミノ酸配列を含まない、請求項１に記載のＤＮＡ。
【請求項１０】
（ａ）配列番号３１の少なくともヌクレオチド５７４〜１３４７を含むＤＮＡ、又は
（ｂ）ストリンジェントな条件下で、配列番号３１のヌクレオチド配列または該配列から調製されるプローブとハイブリダイズ可能であり、かつ造血幹細胞又は造血前駆細胞の増殖もしくは生存を支持する活性を有するＤＮＡである、請求項１に記載のＤＮＡ。
【請求項１１】
ストリンジェントな条件は、６×ＳＳＣ／５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳおよび６８℃（ＳＳＣ ３Ｍ ＮａＣｌ、０．３Ｍ クエン酸ナトリウム）、５０×デンハルト溶液／１％ＢＳＡ／１％ポリビニルピロリドン、１％フィコール４００、又は６×ＳＳＣ、５×デンハルト、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミドおよび４２℃である、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１２】
（ａ）配列番号３３の少なくともヌクレオチド３２１〜１０７４を含むＤＮＡ、又は
（ｂ）ストリンジェントな条件下で、配列番号３３のヌクレオチド配列または該配列から調製されるプローブとハイブリダイズ可能であり、かつ造血幹細胞又は造血前駆細胞の増殖もしくは生存を支持する活性を有するＤＮＡである、請求項１に記載のＤＮＡ。
【請求項１３】
ストリンジェントな条件は、６×ＳＳＣ／５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳおよび６８℃（ＳＳＣ ３Ｍ ＮａＣｌ、０．３Ｍ クエン酸ナトリウム）、５０×デンハルト溶液／１％ＢＳＡ／１％ポリビニルピロリドン、１％フィコール４００、又は６×ＳＳＣ、５×デンハルト、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミドおよび４２℃である、請求項１２に記載のＤＮＡ。
【請求項１４】
ＤＮＡである、請求項１、２または３のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項１５】
請求項１、２または３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドの相補体を含む単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項１、２または３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１７】
請求項１、２または３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１８】
請求項１、２または３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを発現するように遺伝子操作された宿主細胞。
【請求項１９】
宿主細胞中で請求項１、２または３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドの発現を制御する調節配列と操作的に連結された、該ポリヌクレオチドを含むように遺伝子操作された宿主細胞。
【請求項２０】
内因性ポリヌクレオチドの発現を増加させる異種調節配列を含むように遺伝子操作された、請求項１９に記載の宿主細胞。
【請求項２１】
幹細胞成長因子活性を有するポリペプチドを製造する方法であって、前記ポリペプチドの発現を可能にする条件下で、培地中にて、請求項１９に記載の宿主細胞を成長させ、および前記宿主細胞または前記培地から前記ポリペプチドを単離する方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法により製造されるポリペプチド。
【請求項２３】
配列番号１０、１３、１６、３２または３４のアミノ酸配列またはそれらの成熟タンパク質部分、または幹細胞成長因子活性を保持するそれらの断片、類縁体、変異体もしくは誘導体を含む単離されたポリペプチド。
【請求項２４】
請求項２のポリヌクレオチドによりコードされる、請求項２３に記載のポリペプチド。
【請求項２５】
配列番号１０、１３、１６、３２または３４のアミノ酸配列と約８５％よりも高い配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載のポリペプチド。
【請求項２６】
配列番号１０、１３、１６、３２または３４のアミノ酸配列と約９２％よりも高い配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載のポリペプチド。
【請求項２７】
前記ポリペプチドは、配列番号４８のアミノ酸配列から構成されない、請求項２３に記載のポリペプチド。
【請求項２８】
配列番号１０、１３、１６、３２または３４の成熟タンパク質部分を含む単離されたポリペプチド。
【請求項２９】
前記ポリペプチドは、ラミニン型ＥＧＦ様ドメイン、膜攻撃複合体構成成分／パーフォリンドメイン、および神経下垂体ホルモンシグナチュアの群から選択される１つまたはそれ以上のモチーフを含む、請求項２３に記載のポリペプチド。
【請求項３０】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載のＤＮＡの発現産物であり、造血幹細胞又は造血前駆細胞の増殖もしくは生存を支持する活性を有するポリペプチドであって、但しＣ末端アミノ酸配列は、配列番号４６のアミノ酸配列を含まないポリペプチド。
【請求項３１】
配列番号３２の少なくともアミノ酸残基２２〜２７９を含むアミノ酸配列、又は配列番号３２の少なくともアミノ酸残基２２〜２７９を含むアミノ酸配列中に、１個又は数個のアミノ酸の欠失、置換もしくは挿入を含むアミノ酸配列を有する、請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項３２】
配列番号３４の少なくともアミノ酸残基２２〜２７２を含むアミノ酸配列、又は配列番号３４の少なくともアミノ酸残基２２〜２７２を含むアミノ酸配列中に、１個又は数個のアミノ酸の欠失、置換もしくは挿入を含むアミノ酸配列を有する、請求項２３に記載のポリペプチド。
【請求項３３】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、デキストラン、ポリ（Ｎ−ビニル−ピロリドン）、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドのコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリビニルアルコールからなる群から選択される１つまたはそれ以上の修飾剤により修飾される、請求項２３に記載のポリペプチド。
【請求項３４】
配列番号１０または１３由来の少なくとも１０個の連続アミノ酸を含む、請求項２３に記載のポリペプチド。
【請求項３５】
配列番号１０または１３のＣ末端の１７個のアミノ酸由来の少なくとも１０個の連続アミノ酸を含む、請求項２３に記載のポリペプチド。
【請求項３６】
生物活性を有するポリペプチドであって、少なくとも２７２個のアミノ酸を含み、かつ配列番号１０と少なくとも９８％の同一性を有するポリペプチド。
【請求項３７】
幹細胞成長因子活性を有する単離されたポリペプチドであって、配列番号１０、１３、または１６と少なくとも９０％の同一性を有し、かつアミノ酸配列ＧＩＥＶＴＬＡＥＧＬＴＳＶＳＱＲＴＱＰＴＰＣＲＲＲＹＬ（配列番号２９）（ここで、Ａ＝アラニン、Ｃ＝システイン、Ｄ＝アスパラギン酸、Ｅ＝グルタミン酸、Ｆ＝フェニルアラニン、Ｇ＝グリシン、Ｈ＝ヒスチジン、Ｉ＝イソロイシン、Ｋ＝リシン、Ｌ＝ロイシン、Ｍ＝メチオニン、Ｎ＝アスパラギン、Ｐ＝プロリン、Ｑ＝グルタミン、Ｒ＝アルギニン、Ｓ＝セリン、Ｔ＝トレオニン、Ｖ＝バリン、Ｗ＝トリプトファン、Ｙ＝チロシン）を欠くポリペプチド。
【請求項３８】
幹細胞成長因子活性を有する単離されたポリペプチドであって、配列番号１０、１３、または１６と少なくとも９０％の同一性を有し、かつアミノ酸配列ＧＩＥＶＴＬＡＥＧＬＴＳＶＳＱＲＴＱＰＴＰＣＲＲＲＹＬ（配列番号２９）（ここで、Ａ＝アラニン、Ｃ＝システイン、Ｄ＝アスパラギン酸、Ｅ＝グルタミン酸、Ｆ＝フェニルアラニン、Ｇ＝グリシン、Ｈ＝ヒスチジン、Ｉ＝イソロイシン、Ｋ＝リシン、Ｌ＝ロイシン、Ｍ＝メチオニン、Ｎ＝アスパラギン、Ｐ＝プロリン、Ｑ＝グルタミン、Ｒ＝アルギニン、Ｓ＝セリン、Ｔ＝トレオニン、Ｖ＝バリン、Ｗ＝トリプトファン、Ｙ＝チロシン）由来の任意の１０個の連続アミノ酸を欠くポリペプチド。
【請求項３９】
幹細胞成長因子活性を有する単離されたポリペプチドであって、アミノ酸配列ＳＶＳＶＳＴＶＨ（配列番号２７）またはＶＳＶＳＴＶＨ（配列番号２８）（ここで、Ａ＝アラニン、Ｃ＝システイン、Ｄ＝アスパラギン酸、Ｅ＝グルタミン酸、Ｆ＝フェニルアラニン、Ｇ＝グリシン、Ｈ＝ヒスチジン、Ｉ＝イソロイシン、Ｋ＝リシン、Ｌ＝ロイシン、Ｍ＝メチオニン、Ｎ＝アスパラギン、Ｐ＝プロリン、Ｑ＝グルタミン、Ｒ＝アルギニン、Ｓ＝セリン、Ｔ＝トレオニン、Ｖ＝バリン、Ｗ＝トリプトファン、Ｙ＝チロシン）を有するポリペプチド。
【請求項４０】
請求項２３〜請求項３９のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項４１】
請求項２３に記載のポリペプチドを含むキット。
【請求項４２】
幹細胞または生殖細胞の生存を維持するか、又はその増殖を促進するのに有効な量の請求項２３に記載のポリペプチドを含む培地。
【請求項４３】
請求項２３に記載のポリペプチド、および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物。
【請求項４４】
薬学的組成物である、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
造血幹細胞又は造血前駆細胞の増殖もしくは生存を支持する効果を有する薬学的組成物であって、
（Ａ）配列番号３２の少なくともアミノ酸残基２２〜２７９を含むアミノ酸配列、もしくは配列番号３４の少なくともアミノ酸残基２２〜２７２を含むアミノ酸配列を有するポリペプチド、又は
（Ｂ）配列番号３２の少なくともアミノ酸残基２２〜２７９を含むアミノ酸配列、もしくは配列番号３４の少なくともアミノ酸残基２２〜２７２を含むアミノ酸配列中に、１個または数個のアミノ酸の欠失、置換もしくは挿入を含むアミノ酸配列を有し、かつ造血幹
細胞又は造血前駆細胞の増殖もしくは生存を支持する活性を有するポリペプチド
を含む、請求項４４に記載の薬学的組成物。
【請求項４６】
請求項２３に記載のポリペプチドに結合する抗体。
【請求項４７】
配列番号１０、１３、１６、３２または３４のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合する、請求項１９に記載の抗体。
【請求項４８】
配列番号４８のアミノ酸配列を有するポリペプチドに結合しない、請求項２０に記載の抗体。
【請求項４９】
ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、抗体断片、キメラ抗体、またはヒト化抗体である、請求項１９に記載の抗体。
【請求項５０】
請求項１７に記載の抗体を含むキット。
【請求項５１】
試料中の請求項１に記載のポリヌクレオチドを検出する方法であって、
ａ）前記ポリヌクレオチドに結合して複合体を形成する化合物と、前記試料とを、前記複合体を形成するのに十分な時間接触させ、
ｂ）前記複合体を検出し、
その結果複合体が検出されると、前記ポリヌクレオチドが検出される、前記方法。
【請求項５２】
試料中の請求項１に記載のポリヌクレオチドを検出する方法であって、
ａ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下にある前記試料を、かかる条件下で前記ポリヌクレオチドにアニーリングする核酸プライマーと接触させ、
ｂ）前記ポリヌクレオチドの少なくとも一部を含む産物を増幅させ、
ｃ）前記産物を検出し、それにより前記試料中の前記ポリヌクレオチドを検出する、
前記方法。
【請求項５３】
前記ポリヌクレオチドは、請求項２３に記載のポリペプチドをコードするＲＮＡ分子であり、前記方法は、アニーリングしたＲＮＡ分子をｃＤＮＡポリヌクレオチドへ逆転写することをさらに含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
試料中の請求項２３に記載のポリペプチドを検出する方法であって、
ａ）前記ポリペプチドに結合して複合体を形成する化合物と、前記試料とを、前記複合体を形成する条件で、かつそれを形成するのに十分な時間接触させ、
ｂ）前記複合体の形成を検出し、その結果複合体の形成が検出されると、前記ポリペプチドが検出される、前記方法。
【請求項５５】
請求項２３に記載のポリペプチドに結合する化合物を同定する方法であって、
ａ）ポリペプチド／化合物複合体を形成する条件下で、かつそれを形成するのに十分な時間、前記化合物を前記ポリペプチドと接触させ、
ｂ）前記複合体を検出し、その結果前記ポリペプチド／化合物複合体が検出されると、前記ポリペプチドに結合する化合物が同定される、前記方法。
【請求項５６】
請求項２３に記載のポリペプチドに結合する化合物を同定する方法であって、
ａ）ポリペプチド／化合物複合体を形成するのに十分な時間、細胞中で前記化合物を前記ポリペプチドと接触させ（ここで、前記複合体は、細胞中のレポーター遺伝子配列の発現を駆動する）、
ｂ）前記レポーター遺伝子配列の発現を検出することにより、前記複合体を検出し、そ
の結果前記ポリペプチド／化合物複合体が検出されると、前記ポリペプチドに結合する化合物が同定される、前記方法。
【請求項５７】
アレイの表面に付着した、請求項１に記載のポリヌクレオチド、または請求項１に記載のポリヌクレオチドの特有セグメントを含む核酸アレイ。
【請求項５８】
前記アレイは、請求項１に記載のポリヌクレオチド、または該ポリヌクレオチドの特有セグメントに対する完全マッチを検出する、請求項５７に記載のアレイ。
【請求項５９】
前記アレイは、請求項１に記載のポリヌクレオチド、該ヌクレオチドの特有セグメントに対するミスマッチを検出する、請求項５７に記載のアレイ。
【請求項６０】
請求項２３に記載の幹細胞成長因子様ポリペプチドの活性または発現の増大が必要な患者を治療するための、薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物であって、
（ａ）治療に役立つ量の前記ポリペプチドのアゴニスト、
（ｂ）治療に役立つ量の前記ポリペプチド、又は
（ｃ）治療に役立つ量の前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
を含む組成物。
【請求項６１】
請求項２３に記載の幹細胞成長因子様ポリペプチドの活性または発現の減少が必要な患者を治療するための、薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物であって、
（ａ）治療に役立つ量の前記ポリペプチドのアンタゴニスト、
（ｂ）治療に役立つ量の、前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を抑制するポリヌクレオチド、又は
（ｃ）治療に役立つ量の、前記幹細胞成長因子様ポリペプチドと、そのリガンドに関して競合するポリペプチド
を含む組成物。
【請求項６２】
幹細胞又は生殖細胞の増殖もしくは生存を支持する方法であって、前記細胞の生存を維持するか、又はその増殖を促進するのに有効な量の請求項２３に記載のポリペプチドと、前記細胞を接触させる方法。
【請求項６３】
前記細胞は、始原生殖細胞、生殖系幹細胞、胚性幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、多分化能性細胞、または全能性細胞である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記ポリペプチドは、配列番号１０、１３、または１６のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号１０、１３、または１６の配列に対して９０％の同一性のアミノ酸配列を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記幹細胞成長因子様ポリペプチドは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号１０、１３、または１６をコードするポリヌクレオチドの相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる、請求項６２に記載の方法。
【請求項６６】
幹細胞又は生殖細胞の増殖もしくは生存を支持するのに有効な量で、請求項２３に記載のポリペプチドを発現するように遺伝子操作されたストローマ細胞。
【請求項６７】
前記細胞は、始原生殖細胞、生殖系幹細胞、胚性幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、多分化能性細胞、または全能性細胞である、請求項６６に記載のストローマ細胞。
【請求項６８】
幹細胞又は生殖細胞の増殖もしくは生存を支持するのに有効な量で、請求項２３に記載
のポリペプチドを発現するように遺伝子操作された細胞を含む移植片。
【請求項６９】
前記細胞は、始原生殖細胞、生殖系幹細胞、胚性幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、多分化能性細胞、または全能性細胞である、請求項６８に記載の移植片。
【請求項７０】
受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７１９８のもとで、２０００年６月２６日に、産業技術総合研究所の生命工学技術研究所（郵便番号３０５−８５６６、日本国茨城県つくば市東１−１−３）に寄託したプラスミドのタンパク質コードｃＤＮＡ挿入物を含む単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７１】
適切な宿主細胞中で、請求項７０に記載のポリヌクレオチドにより発現される成熟ポリペプチド。
【請求項７２】
受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７１９７のもとで、２０００年６月２６日に、産業技術総合研究所の生命工学技術研究所（郵便番号３０５−８５６６、日本国茨城県つくば市東１−１−３）に寄託したプラスミドのタンパク質コードｃＤＮＡ挿入物を含む単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７３】
適切な宿主細胞中で、請求項７２に記載のポリヌクレオチドにより発現される成熟ポリペプチド発現産物。
【請求項７４】
幹細胞又は生殖細胞の増殖もしくは生存を支持する方法であって、前記細胞を、請求項１、２又は３のいずれかに記載のポリヌクレオチドを発現するように遺伝子操作された宿主細胞とともに、前記ポリヌクレオチドを発現させることが可能な条件下で共培養し、前記ポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを宿主細胞に産生させて、該ポリペプチドを幹細胞又は生殖細胞と接触させることを含む方法。
【請求項７５】
宿主細胞が前記ポリヌクレオチドで形質転換したストローマ細胞である、請求項７４に記載の方法。
[Claims]
(1)
An isolated polynucleotide encoding a polypeptide having stem cell growth factor activity, which retains the nucleotide sequence of SEQ ID NOs: 9, 11, 12, 31, or 33 or a mature protein-encoding portion thereof, or stem cell growth factor activity A polynucleotide comprising a fragment, analog, variant or derivative thereof that encodes a polypeptide of interest.
(2)
2. The polynucleotide of claim 1, which hybridizes under stringent hybridization conditions to the complement of the nucleotide sequence of SEQ ID NOs: 9, 11, 12, 31, or 33.
(3)
2. The polynucleotide of claim 1, comprising a nucleotide sequence having greater than about 85% sequence identity with the nucleotide sequence of SEQ ID NOs: 9, 11, 12, 31, or 33.
(4)
2. The polynucleotide of claim 1, comprising a nucleotide sequence having greater than about 90% sequence identity with the nucleotide sequence of SEQ ID NOs: 9, 11, 12, 31, or 33.
(5)
4. The polynucleotide of claim 3, comprising a nucleotide sequence having greater than about 92% sequence identity with the nucleotide sequence of SEQ ID NOs: 9, 11, 12, 31, or 33.
6.
The polynucleotide sequence according to any of claims 1, 2 or 3, wherein said polynucleotide sequence does not consist of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 47.
7.
An isolated polynucleotide comprising the mature protein coding sequence of SEQ ID NO: 9, 11, 12, 31, or 33.
Claim 8.
An isolated polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NOs: 9, 11, 12, 31, or 33.
9.
(A) a polypeptide having an amino acid sequence containing at least amino acid residues 22 to 279 of SEQ ID NO: 32, or a polypeptide having an amino acid sequence containing at least amino acid residues 22 to 272 of SEQ ID NO: 34, or (B) at least an amino acid of SEQ ID NO: 32 An amino acid sequence comprising residues 22 to 279, or an amino acid sequence comprising at least amino acid residues 22 to 272 of SEQ ID NO: 34, wherein the amino acid sequence comprises a deletion, substitution or insertion of one or several amino acids; A DNA encoding a polypeptide having an activity of supporting the growth or survival of hematopoietic stem cells or hematopoietic progenitor cells, wherein the C-terminal amino acid sequence does not include the amino acid sequence of SEQ ID NO: 46. DNA.
10.
(A) DNA comprising at least nucleotides 574 to 1347 of SEQ ID NO: 31, or (b) Under stringent conditions, capable of hybridizing with the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 31 or a probe prepared from the sequence, and hematopoiesis The DNA according to claim 1, which is a DNA having an activity of supporting proliferation or survival of stem cells or hematopoietic progenitor cells.
11.
Stringent conditions include 6 × SSC / 5 × Denhardt solution, 0.5% SDS and 68 ° C. (SSC 3M NaCl, 0.3M sodium citrate), 50 × Denhardt solution / 1% BSA / 1% polyvinylpyrrolidone, The DNA according to claim 10, which is 1% Ficoll 400, or 6 × SSC, 5 × Denhardt, 0.5% SDS, 50% formamide and 42 ° C.
12.
(A) DNA comprising at least nucleotides 321 to 1074 of SEQ ID NO: 33, or (b) Under stringent conditions, capable of hybridizing with the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 33 or a probe prepared from the sequence, and hematopoiesis The DNA according to claim 1, which is a DNA having an activity of supporting proliferation or survival of stem cells or hematopoietic progenitor cells.
Claim 13
Stringent conditions include 6 × SSC / 5 × Denhardt solution, 0.5% SDS and 68 ° C. (SSC 3M NaCl, 0.3M sodium citrate), 50 × Denhardt solution / 1% BSA / 1% polyvinylpyrrolidone, The DNA according to claim 12, which is 1% Ficoll 400, or 6 × SSC, 5 × Denhardt, 0.5% SDS, 50% formamide and 42 ° C.
14.
The polynucleotide according to any one of claims 1, 2 and 3, which is DNA.
15.
An isolated polynucleotide comprising the complement of the polynucleotide of any one of claims 1, 2 or 3.
16.
A vector comprising the polynucleotide according to claim 1.
17.
An expression vector comprising the polynucleotide according to claim 1.
18.
A host cell that has been genetically engineered to express the polynucleotide of any one of claims 1, 2 or 3.
(19)
A host cell genetically engineered to contain the polynucleotide of claim 1, 2 or 3 operably linked to a regulatory sequence controlling the expression of the polynucleotide in the host cell.
20.
20. The host cell of claim 19, wherein the host cell has been genetically engineered to include a heterologous regulatory sequence that increases expression of an endogenous polynucleotide.
21.
20. A method for producing a polypeptide having stem cell growth factor activity, wherein the host cell according to claim 19 is grown in a medium under conditions allowing expression of said polypeptide, and wherein said host cell Alternatively, a method for isolating the polypeptide from the medium.
22.
A polypeptide produced by the method of claim 21.
23.
An isolated polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, 13, 16, 32 or 34 or a mature protein portion thereof, or a fragment, analog, variant or derivative thereof that retains stem cell growth factor activity.
24.
24. The polypeptide of claim 23, which is encoded by the polynucleotide of claim 2.
25.
24. The polypeptide of claim 23, comprising an amino acid sequence having greater than about 85% sequence identity with the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 10, 13, 16, 32, or 34.
26.
24. The polypeptide of claim 23, comprising an amino acid sequence having greater than about 92% sequence identity with the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 10, 13, 16, 32, or 34.
27.
24. The polypeptide of claim 23, wherein said polypeptide does not consist of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 48.
28.
An isolated polypeptide comprising the mature protein portion of SEQ ID NO: 10, 13, 16, 32 or 34.
29.
24. The polypeptide of claim 23, wherein the polypeptide comprises one or more motifs selected from the group of laminin-type EGF-like domain, membrane attack complex component / perforin domain, and pituitary hormone signature. Polypeptide.
30.
An expression product of the DNA according to any one of claims 1 to 15, which is a polypeptide having an activity of supporting the growth or survival of hematopoietic stem cells or hematopoietic progenitor cells, provided that the C-terminal amino acid sequence is a sequence. A polypeptide not comprising the amino acid sequence of No. 46.
31.
In the amino acid sequence containing at least amino acid residues 22 to 279 of SEQ ID NO: 32, or the amino acid sequence containing at least amino acid residues 22 to 279 of SEQ ID NO: 32, deletion, substitution or insertion of one or several amino acids is performed. The polypeptide according to claim 8, which has an amino acid sequence comprising:
32.
In the amino acid sequence containing at least amino acid residues 22 to 272 of SEQ ID NO: 34, or the amino acid sequence containing at least amino acid residues 22 to 272 of SEQ ID NO: 34, deletion, substitution or insertion of one or several amino acids is performed. 24. The polypeptide of claim 23 having an amino acid sequence comprising:
33.
One or more selected from the group consisting of polyethylene glycol (PEG), dextran, poly (N-vinyl-pyrrolidone), polypropylene glycol homopolymer, polypropylene oxide / ethylene oxide copolymer, polyoxyethylated polyol and polyvinyl alcohol. 24. The polypeptide of claim 23, wherein the polypeptide is modified with a modifying agent.
34.
24. The polypeptide of claim 23, comprising at least 10 contiguous amino acids from SEQ ID NO: 10 or 13.
35.
24. The polypeptide of claim 23, comprising at least 10 contiguous amino acids from the 17 C-terminal amino acids of SEQ ID NO: 10 or 13.
36.
A polypeptide having biological activity, comprising at least 272 amino acids, and having at least 98% identity to SEQ ID NO: 10.
37.
An isolated polypeptide having stem cell growth factor activity, having at least 90% identity to SEQ ID NO: 10, 13, or 16 and the amino acid sequence GIEVTLAEGLTSVSQRTQPTPCRRRYL (SEQ ID NO: 29) (where A = Alanine, C = cysteine, D = aspartic acid, E = glutamic acid, F = phenylalanine, G = glycine, H = histidine, I = isoleucine, K = lysine, L = leucine, M = methionine, N = asparagine, P = proline , Q = glutamine, R = arginine, S = serine, T = threonine, V = valine, W = tryptophan, Y = tyrosine).
38.
An isolated polypeptide having stem cell growth factor activity, having at least 90% identity to SEQ ID NO: 10, 13, or 16 and the amino acid sequence GIEVTLAEGLTSVSQRTQPTPCRRRYL (SEQ ID NO: 29) (where A = Alanine, C = cysteine, D = aspartic acid, E = glutamic acid, F = phenylalanine, G = glycine, H = histidine, I = isoleucine, K = lysine, L = leucine, M = methionine, N = asparagine, P = proline , Q = glutamine, R = arginine, S = serine, T = threonine, V = valine, W = tryptophan, Y = tyrosine).
39.
An isolated polypeptide having stem cell growth factor activity, wherein the amino acid sequence SVSVSTVH (SEQ ID NO: 27) or VSVSTVH (SEQ ID NO: 28) (where A = alanine, C = cysteine, D = aspartic acid, E = Glutamic acid, F = phenylalanine, G = glycine, H = histidine, I = isoleucine, K = lysine, L = leucine, M = methionine, N = asparagine, P = proline, Q = glutamine, R = arginine, S = serine, A polypeptide having (T = threonine, V = valine, W = tryptophan, Y = tyrosine).
40.
A polynucleotide encoding the polypeptide according to any one of claims 23 to 39.
41.
A kit comprising the polypeptide of claim 23.
42.
A medium comprising the polypeptide of claim 23 in an amount effective to maintain or promote the survival of stem cells or germ cells.
Claim 43
A composition comprising the polypeptide of claim 23 and a pharmaceutically acceptable carrier or diluent.
44.
44. The composition according to claim 43, which is a pharmaceutical composition.
45.
A pharmaceutical composition having an effect of supporting the proliferation or survival of hematopoietic stem cells or hematopoietic progenitor cells,
(A) a polypeptide having an amino acid sequence containing at least amino acid residues 22 to 279 of SEQ ID NO: 32, or a polypeptide having an amino acid sequence containing at least amino acid residues 22 to 272 of SEQ ID NO: 34, or (B) at least an amino acid of SEQ ID NO: 32 An amino acid sequence comprising residues 22 to 279, or an amino acid sequence comprising at least amino acid residues 22 to 272 of SEQ ID NO: 34, wherein the amino acid sequence comprises a deletion, substitution or insertion of one or several amino acids; The pharmaceutical composition according to claim 44, further comprising a polypeptide having an activity of supporting the proliferation or survival of hematopoietic stem cells or hematopoietic progenitor cells.
46.
An antibody that binds to the polypeptide of claim 23.
47.
20. The antibody of claim 19, which specifically binds to a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, 13, 16, 32, or 34.
48.
21. The antibody of claim 20, which does not bind to a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 48.
49.
20. The antibody of claim 19 which is a polyclonal, monoclonal, antibody fragment, chimeric, or humanized antibody.
50.
A kit comprising the antibody according to claim 17.
51.
A method for detecting the polynucleotide according to claim 1 in a sample,
a) contacting a compound that binds to the polynucleotide to form a complex with the sample for a time sufficient to form the complex;
b) detecting the complex;
The method wherein the polynucleotide is detected when the complex is detected as a result.
52.
A method for detecting the polynucleotide according to claim 1 in a sample,
a) contacting said sample under stringent hybridization conditions with a nucleic acid primer that anneals to said polynucleotide under such conditions;
b) amplifying a product comprising at least a part of said polynucleotide;
c) detecting the product, thereby detecting the polynucleotide in the sample;
The method.
Claim 53
53. The method of claim 52, wherein the polynucleotide is an RNA molecule encoding the polypeptide of claim 23, and wherein the method further comprises reverse transcribing the annealed RNA molecule to a cDNA polynucleotide.
54.
A method for detecting the polypeptide according to claim 23 in a sample, comprising:
a) contacting a compound that binds to the polypeptide to form a complex with the sample under conditions and for a time sufficient to form the complex;
b) The method as described above, wherein the formation of the complex is detected, such that if the formation of the complex is detected, the polypeptide is detected.
55.
A method for identifying a compound that binds to the polypeptide according to claim 23,
a) contacting said compound with said polypeptide under conditions and for a time sufficient to form a polypeptide / compound complex;
b) The method wherein the complex is detected and the resulting detection of the polypeptide / compound complex identifies a compound that binds to the polypeptide.
56.
A method for identifying a compound that binds to the polypeptide according to claim 23,
a) contacting the compound with the polypeptide in a cell for a period of time sufficient to form a polypeptide / compound complex, wherein the complex drives expression of a reporter gene sequence in the cell. ,
b) The method wherein the complex is detected by detecting the expression of the reporter gene sequence, such that a compound that binds to the polypeptide is identified when the polypeptide / compound complex is detected. .
Claim 57
A nucleic acid array comprising the polynucleotide of claim 1 or a unique segment of the polynucleotide of claim 1 attached to a surface of the array.
Claim 58
58. The array of claim 57, wherein the array detects a perfect match to the polynucleotide of claim 1, or a unique segment of the polynucleotide.
Claim 59
58. The array of claim 57, wherein the array detects mismatches to the polynucleotide of claim 1, a unique segment of the nucleotide.
60.
A composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier or diluent for treating a patient in need of increased activity or expression of the stem cell growth factor-like polypeptide of claim 23, comprising a pharmaceutically acceptable carrier or diluent.
(A) a therapeutically effective amount of an agonist of said polypeptide;
A composition comprising (b) a therapeutically effective amount of said polypeptide, or (c) a therapeutically effective amount of a polynucleotide encoding said polypeptide.
61.
A composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier or diluent for treating a patient in need of reduced activity or expression of the stem cell growth factor-like polypeptide of claim 23, comprising a pharmaceutically acceptable carrier or diluent.
(A) a therapeutically effective amount of an antagonist of said polypeptide;
(B) a therapeutically effective amount of a polynucleotide that suppresses the expression of a nucleotide sequence encoding the polypeptide; or (c) a therapeutically effective amount of a polynucleotide that competes with the stem cell growth factor-like polypeptide for its ligand. A composition comprising a peptide.
62.
A method for supporting the growth or survival of a stem cell or a germ cell, comprising the polypeptide of claim 23 in an amount effective to maintain or promote the survival of the cell, and the cell. How to make contact.
Claim 63
63. The method of claim 62, wherein the cells are primordial germ cells, germline stem cells, embryonic stem cells, hematopoietic stem cells, hematopoietic progenitor cells, pluripotent cells, or totipotent cells.
(64)
63. The polypeptide of claim 62, wherein the polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, 13, or 16, or comprises an amino acid sequence that is 90% identical to the sequence of SEQ ID NO: 10, 13, or 16. the method of.
Claim 65
63. The stem cell growth factor-like polypeptide is encoded by a polynucleotide that hybridizes under stringent hybridization conditions to the complement of a polynucleotide encoding SEQ ID NO: 10, 13, or 16. the method of.
66.
24. A stromal cell that has been genetically engineered to express the polypeptide of claim 23 in an amount effective to support the growth or survival of stem cells or germ cells.
Claim 67
67. The stromal cell of claim 66, wherein the cell is a primordial germ cell, germline stem cell, embryonic stem cell, hematopoietic stem cell, hematopoietic progenitor cell, pluripotent cell, or totipotent cell.
68.
An implant comprising cells engineered to express the polypeptide of claim 23 in an amount effective to support the growth or survival of stem cells or germ cells.
Claim 69
69. The graft of claim 68, wherein the cells are primordial germ cells, germline stem cells, embryonic stem cells, hematopoietic stem cells, hematopoietic progenitor cells, pluripotent cells, or totipotent cells.
70.
Under the accession number FERM BP-7198, on June 26, 2000, the Institute of Biotechnology, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (Zip code 305-8566, 1-1-3 Higashi, Tsukuba, Ibaraki, Japan) An isolated polynucleotide comprising the protein-encoding cDNA insert of the deposited plasmid.
71.
71. A mature polypeptide expressed by a polynucleotide of claim 70 in a suitable host cell.
72.
Under the accession number FERM BP-7197, on June 26, 2000, the Institute of Biotechnology, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (Zip code 305-8566, 1-1-3 Higashi 1-1-3, Tsukuba, Ibaraki, Japan) An isolated polynucleotide comprising the protein-encoding cDNA insert of the deposited plasmid.
73.
In a suitable host cell, the mature polypeptide expression product expressed by the polynucleotide of claim 7 2.
74.
A method for supporting the growth or survival of a stem cell or a germ cell, said cell comprising, together with a host cell genetically engineered to express the polynucleotide of any of claims 1, 2 or 3, A method comprising co-culturing under conditions capable of expressing nucleotides, producing a polypeptide encoded by said polynucleotide in a host cell, and contacting said polypeptide with a stem cell or germ cell.
75.
The host cell is a stromal cell transformed with said polynucleotide The method of claim 7 4.