【特許請求の範囲】
【請求項１】 治療薬としての使用のためのＧタンパク質共役受容体のアゴニストおよび部分的アゴニストを同定するために、候補化合物をスクリーニングする方法であって、
ここで、該Ｇタンパク質共役受容体が、
（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列であって、
（ｉ）配列番号８２のアミノ酸位置４３のプロリンのアラニンへの置換；
（ｉｉ）配列番号８２のアミノ酸位置９７のリジンのアスパラギンへの置換；および
（ｉｉｉ）配列番号８２のアミノ酸位置１３０のイソロイシンのフェニルアラニンへの置換；
からなる群より選択される１個以上のアミノ酸置換を含む、配列番号８２のアミノ酸配列：
（ｃ）配列番号８２のアミノ酸配列であって、ここで、配列番号８２のアミノ酸配列が、配列番号８２のアミノ酸位置４３のプロリンのアラニンへの置換、配列番号８２のアミノ酸位置９７のリジンのアスパラギンへの置換；および配列番号８２のアミノ酸位置１３０のイソロイシンのフェニルアラニンへの置換を有する、アミノ酸配列；
（ｄ）核酸配列を含むポリヌクレオチドによってコードされた、Ｇタンパク質共役受容体のアミノ酸配列であって、該核酸配列は、特異的プライマーである配列番号７９および配列番号８０を用いて、ヒトＤＮＡサンプルにおいて、ＰＣＲを行うことによって得られる配列である、アミノ酸配列；
（ｅ）ヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされたＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列であって、該ヌクレオチド配列は、厳しい条件下で、配列番号８１の相補体とハイブリダイズする、アミノ酸配列；
（ｆ）配列番号１３４のアミノ酸配列；
（ｇ）配列番号１３４のアミノ酸配列であって、ここで、配列番号１３４のアミノ酸配列が、
（ｉ）配列番号１３４のアミノ酸位置４３のアラニンのプロリンへの置換；
（ｉｉ）配列番号１３４のアミノ酸位置９７のアスパラギンのリジンへの置換；および
（ｉｉｉ）配列番号１３４のアミノ酸位置１３０のフェニルアラニンのイソロイシンへの置換；
からなる群より選択される１個以上のアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列；
（ｈ）配列番号１３４のアミノ酸配列であって、ここで、配列番号１３４のアミノ酸配列が、配列番号１３４のアミノ酸位置４３のアラニンのプロリンへの置換、配列番号１３４のアミノ酸位置９７のアスパラギンのリジンへの置換；および配列番号１３４のアミノ酸位置１３０のフェニルアラニンのイソロイシンへの置換を有する、アミノ酸配列；ならびに
（ｉ）配列番号８２から、１個または数個のアミノ酸の欠失、置換、および／または付加によって誘導され、配列番号８２のポリペプチドの活性を有する、構成的に活性化されたＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列、または配列番号１３４から、１個または数個のアミノ酸の欠失、置換、および／または付加によって誘導され、配列番号１３４のポリペプチドの活性を有する、構成的に活性化されたＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列、
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、方法。
【請求項２】 請求項１に記載の方法であって、前記Ｇタンパク質共役受容体が、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、方法。
【請求項３】 請求項１に記載の方法であって、ここで、Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号８２のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号８２のアミノ酸配列は、
（ａ）配列番号８２のアミノ酸位置４３のプロリンのアラニンへの置換；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸位置９７のリジンのアスパラギンへの置換；および
（ｃ）配列番号８２のアミノ酸位置１３０のイソロイシンのフェニルアラニンへの置換；
からなる群より選択される１個以上のアミノ酸の置換を含む、方法。
【請求項４】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号８２のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号８２のアミノ酸配列は、配列番号８２のアミノ酸位置４３のプロリンのアラニンへの置換、配列番号８２のアミノ酸位置９７のリジンのアスパラギンへの置換；および配列番号８２のアミノ酸位置１３０のイソロイシンのフェニルアラニンへの置換を有する、方法。
【請求項５】 請求項１に記載の方法であって、前記Ｇタンパク質共役受容体は、核酸配列を含むポリヌクレオチドによってコードされたＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列を含み、該核酸配列は、特異的プライマーである配列番号７９および配列番号８０を用いて、ヒトＤＮＡサンプルにおいてＰＣＲを行うことによって得られる配列である、方法。
【請求項６】 請求項１に記載の方法であって、前記Ｇタンパク質共役受容体は、ヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされた、Ｇタンパク質共役受容体のアミノ酸配列を含み、該ヌクレオチド配列は、厳しい条件下において配列番号８１の相補体とハイブリダイズする、方法。
【請求項７】 請求項１に記載の方法であって、前記Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む、方法。
【請求項８】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１３４のアミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１３４のアミノ酸位置４３のアラニンのプロリンへの置換；
（ｂ）配列番号１３４のアミノ酸位置９７のアスパラギンのリジンへの置換；および
（ｃ）配列番号１３４のアミノ酸位置１３０のフェニルアラニンのイソロイシンへの置換；
からなる群より選択される１個以上のアミノ酸置換を含む、方法。
【請求項９】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１３４のアミノ酸配列は、配列番号１３４のアミノ酸位置４３のアラニンのプロリンへの置換、配列番号１３４のアミノ酸位置９７のアスパラギンのリジンへの置換、および配列番号１３４のアミノ酸１３０のフェニルアラニンのイソロイシンへの置換を有する、方法。
【請求項１０】 請求項１に記載の方法であって、前記Ｇタンパク質共役受容体が、配列番号８２から、１個または数個のアミノ酸の欠失、置換、および／または付加によって誘導され、配列番号８２のポリペプチドの活性を有する、構成的に活性化されたＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列、または配列番号１３４から、１個または数個のアミノ酸の欠失、置換、および／または付加によって誘導され、配列番号１３４のポリペプチドの活性を有する、構成的に活性化されたＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列である、方法。
【請求項１１】 請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法であって、前記Ｇタンパク質共役受容体は、Ｇタンパク質を有する融合タンパク質の一部を形成する、方法。
【請求項１２】 請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法であって、前記Ｇタンパク質共役受容体が組み換え型である、方法。
【請求項１３】 請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法であって、前記治療薬が、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増加させるためのものである、方法。
【請求項１４】 前記細胞が、ＴＤＡＧ８を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】 請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法であって、前記治療薬が、末梢血白血球における、細胞内ｃＡＭＰのレベルを増加させるためのものである、方法。
【請求項１６】 請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法であって、前記治療薬が、末梢血白血球における、細胞内ｃＡＭＰのレベルを上昇させることによって、回復される疾患または障害のためのものである、方法。
【請求項１７】 請求項１６に記載の方法であって、前記疾患または障害が、炎症性疾患または炎症性障害である、方法。
【請求項１８】 前記方法が、前記アゴニストまたは部分的アゴニストを、治療薬として処方する工程を包含する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】 前記方法が、前記候補化合物を、前記Ｇタンパク質共役レセプターを含む宿主細胞または該宿主細胞の膜に接触させる工程を包含する、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】 前記宿主細胞が、哺乳動物細胞である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】 前記宿主細胞が、酵母細胞である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】 末梢血白血球中のｃＡＭＰの細胞内レベルを上昇させることによって低減される疾患または障害の処置のための医薬の製造のための、ヒトＴＤＡＧ８のアゴニストまたは部分的アゴニストの使用。
【請求項２３】 前記医薬が、炎症性疾患または炎症性障害の処置のためのものである、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】 前記アゴニストまたは部分的アゴニストが、請求項１〜２１のいずれか１項に記載されるアゴニストまたは部分的アゴニストである、請求項２２または２３に記載の使用。
【請求項２５】 末梢血白血球において内在性発現される、Ｇｓ共役Ｇタンパク質共役受容体により媒介されるシグナル伝達を刺激する化合物を同定するためのプロセスであって、該プロセスが、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のスクリーニングにおいて、該Ｇタンパク質共役受容体を使用する工程を包含する、プロセス。
【請求項２６】 末梢血白血球において、前記Ｇタンパク質共役受容体により媒介される前記シグナル伝達が、炎症を調節する、請求項２５に記載のプロセス。
【請求項２７】 非内在性であり、構成性に活性化されるＧタンパク質共役受容体であって、該受容体が、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む、受容体。
【請求項２８】 非内在性であり、構成性に活性化されるＧタンパク質共役受容体であって、該受容体が、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、ここで、該配列番号１３４のアミノ酸配列が、以下：
（ａ）配列番号１３４のアミノ酸位置４３のアラニンのプロリンへの置換；
（ｂ）配列番号１３４のアミノ酸位置９７のアスパラギンのリジンへの置換；および
（ｃ）配列番号１３４のアミノ酸位置１３０のフェニルアラニンのイソロイシンへの置換
からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む、受容体。
【請求項２９】 非内在性であり、構成性に活性化されるＧタンパク質共役受容体であって、該受容体が、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、ここで、該配列番号１３４のアミノ酸配列が、配列番号１３４のアミノ酸位置４３のアラニンのプロリンへの置換、配列番号１３４のアミノ酸位置９７のアスパラギンのリジンへの置換、および配列番号１３４のアミノ酸位置１３０のフェニルアラニンのイソロイシンへの置換を有する、受容体。
【請求項３０】 Ｇタンパク質およびＧタンパク質共役受容体を含む融合タンパク質であって、ここで、Ｇタンパク質共役受容体が、請求項２７〜２９のいずれか１項に記載される受容体である、融合タンパク質。
【請求項３１】 請求項２７〜３０のいずれか１項に記載のＧタンパク質共役受容体もしくは融合タンパク質をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項３２】 請求項３１に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項３３】 前記ベクターが、発現ベクターである、請求項３２に記載のベクター。
【請求項３４】 請求項３２もしくは３３に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項３５】 前記宿主細胞が、哺乳動物細胞である、請求項３４に記載の宿主細胞。
【請求項３６】 前記宿主細胞が、酵母細胞である、請求項３４に記載の宿主細胞。
【請求項３７】 非内在性であり、構成性に活性化されるＧタンパク質共役受容体すなわちＧＰＣＲ融合タンパク質を生成するための方法であって、該方法が：
（ａ）請求項３３に記載の発現ベクターを宿主細胞にトランスフェクションし、それにより、トランスフェクションされた宿主細胞を生成する工程；および
（ｂ）該発現ベクターから、非内在性であり、構成性に活性化されるＧタンパク質共役受容体すなわちＧＰＣＲ融合タンパク質を発現するために十分な条件下で、該トランスフェクションされた宿主細胞を培養する工程
を包含する、方法。
【請求項３８】 非内在性であり、構成性に活性化されるＧタンパク質共役受容体のアゴニスト、部分的アゴニスト、もしくは反作用薬としての一つ以上の候補化合物を同定するための方法であって、ここで、該受容体が、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、該方法が、以下の工程：
（ａ）該一つ以上の化合物を、宿主細胞もしくは該受容体を発現する宿主細胞の膜と接触させる工程；および
（ｂ）該受容体の機能を阻害もしくは刺激する、該化合物の能力を測定する工程
を包含する、方法。
【請求項３９】 非内在性であり、構成性に活性化されるＧタンパク質共役受容体のアゴニスト、部分的アゴニスト、もしくは反作用薬としての一つ以上の候補化合物を同定するための方法であって、該受容体が、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、ここで、該配列番号１３４のアミノ酸が、以下：
（ａ）配列番号１３４のアミノ酸位置４３のアラニンのプロリンへの置換；
（ｂ）配列番号１３４のアミノ酸位置９７のアスパラギンのリジンへの置換；および
（ｃ）配列番号１３４のアミノ酸位置１３０のフェニルアラニンのイソロイシンへの置換
からなる群から選択される一つ以上のアミノ酸置換を含み、該方法が、以下の工程：
（ａ’）該一つ以上の化合物を、宿主細胞もしくは該受容体を発現する宿主細胞の膜と接触させる工程；および
（ｂ’）該受容体の機能を阻害もしくは刺激する、該化合物の能力を測定する工程
を包含する、方法。
【請求項４０】 非内在性であり、構成性に活性化されるＧタンパク質共役受容体のアゴニスト、部分的アゴニスト、もしくは反作用薬としての一つ以上の候補化合物を同定するための方法であって、該受容体が、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、ここで、該配列番号１３４のアミノ酸配列が、配列番号１３４のアミノ酸位置４３のアラニンのプロリンへの置換、配列番号１３４のアミノ酸位置９７のアスパラギンのリジンへの置換、および配列番号１３４のアミノ酸位置１３０のフェニルアラニンのイソロイシンへの置換を有し、該方法が、以下の工程：
（ａ）該一つ以上の化合物を、宿主細胞もしくは該受容体を発現する宿主細胞の膜と接触させる工程；および
（ｂ）該受容体の機能を阻害もしくは刺激する、該化合物の能力を測定する工程
を包含する、方法。
【請求項４１】 前記方法が、前記アゴニスト、部分的アゴニストまたは反作用薬を、治療薬として処方する工程をさらに包含する、請求項３８〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】 請求項３８〜４１のいずれか１項に記載の方法であって、ここで、前記宿主細胞が発現ベクターを含み、該発現ベクターが、非内在性であり、構成性に活性化されるＧタンパク質共役受容体をコードするポリヌクレオチドを含む、方法。
【請求項４３】 前記宿主細胞が哺乳動物細胞である、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】 前記宿主細胞が、酵母細胞である、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】 細胞内ｃＡＭＰのレベルを調節する化合物を同定するためのプロセスであって、該プロセスが、請求項３８〜４４のいずれか１項に記載の方法を実施する工程を包含する、プロセス。
【請求項４６】 前記細胞がＴＤＡＧ８を含む、請求項４５に記載のプロセス。
【請求項４７】 末梢血白血球において内在性発現される、Ｇｓ共役Ｇタンパク質共役受容体により媒介されるシグナル伝達を調節する化合物を同定するためのプロセスであって、該プロセスが、請求項３８〜４３のいずれか１項に記載のスクリーニングにおいて、該Ｇタンパク質共役受容体を使用する工程を包含する、プロセス。
【請求項４８】 末梢血白血球において、前記Ｇタンパク質共役受容体により媒介される前記シグナル伝達が、炎症を調節する、請求項４７に記載のプロセス。
【請求項４９】 末梢血白血球において、ｃＡＭＰの細胞内レベルを上昇させることによって改善される、疾患もしくは障害を処置するために使用するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物が、ヒトＴＤＡＧ８のアゴニストまたは部分的アゴニストを含有する、組成物。
【請求項５０】 前記薬学的組成物が、炎症性疾患もしくは炎症性障害の処置のためのものである、請求項４９に記載の薬学的組成物。
【請求項５１】 前記アゴニストまたは部分的アゴニストが、請求項１〜２１のいずれか１項に記載されるアゴニストまたは部分的アゴニストである、請求項４９または５０に記載の薬学的組成物。
【請求項５２】 末梢血白血球においてｃＡＭＰの細胞内レベルを上昇させることによって改善される疾患または障害を処置するために使用するための、ヒトＴＤＡＧ８の活性化。
【請求項５３】 前記薬学的組成物が、炎症性の疾患または障害の処置のためのものである、請求項５２に記載の活性化。
【請求項５４】 末梢血白血球においてｃＡＭＰの細胞内レベルを上昇させることによって軽減される疾患または障害を処置するために使用するための、ヒトＴＤＡＧ８のアゴニストまたは部分的アゴニスト。
【請求項５５】 前記薬学的組成物が、炎症性の疾患または障害の処置のためのものである、請求項５４に記載のアゴニストまたは部分的アゴニスト。
【請求項５６】 前記アゴニストまたは部分的アゴニストが、請求項１〜２１のいずれか１項に記載されるアゴニストまたは部分的アゴニストである、請求項５４または５５に記載のアゴニストまたは部分的アゴニスト。
[Claims]
1. For use as a therapeutic agentofTo identify agonists and partial agonists of G protein-coupled receptorsFor screening candidate compoundsAnd
Here, the G protein-coupled receptor is
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82;
(B) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82,
(I) substitution of proline for amino acid position 43 of SEQ ID NO: 82 with alanine;
(Ii) replacing lysine at amino acid position 97 of SEQ ID NO: 82 with asparagine; and
(Iii) substitution of isoleucine for amino acid position 130 of SEQ ID NO: 82 with phenylalanine;
The amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, comprising one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of:
(C) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 is the substitution of proline at amino acid position 43 of SEQ ID NO: 82 with alanine, and the asparagine of lysine at amino acid position 97 of SEQ ID NO: 82 Amino acid sequence having a substitution of isoleucine at amino acid position 130 of SEQ ID NO: 82 for phenylalanine;
(D) an amino acid sequence of a G protein-coupled receptor encoded by a polynucleotide comprising a nucleic acid sequence, wherein the nucleic acid sequence comprises a human DNA sample using specific primers SEQ ID NO: 79 and SEQ ID NO: 80. An amino acid sequence which is a sequence obtained by performing PCR;
(E) an amino acid sequence of a G protein-coupled receptor encoded by a polynucleotide comprising the nucleotide sequence, wherein the nucleotide sequence hybridizes under stringent conditions to the complement of SEQ ID NO: 81;
(F) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134;
(G) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134 is
(I) substitution of alanine at amino acid position 43 of SEQ ID NO: 134 with proline;
(Ii) substitution of asparagine at amino acid position 97 of SEQ ID NO: 134 for lysine; and
(Iii) substitution of phenylalanine at position 130 of SEQ ID NO: 134 with isoleucine;
An amino acid sequence comprising one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of:;
(H) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134 is the substitution of alanine at amino acid position 43 of SEQ ID NO: 134 with proline, the lysine of asparagine at amino acid position 97 of SEQ ID NO: 134 Amino acid sequence having a substitution of amino acid position 130 of SEQ ID NO: 134 with phenylalanine for isoleucine;And
(I) a constitutively activated G protein conjugate derived from SEQ ID NO: 82 by deletion, substitution and / or addition of one or several amino acids and having the activity of the polypeptide of SEQ ID NO: 82 Derived from the amino acid sequence of the receptor, or SEQ ID NO: 134, by deletion, substitution, and / or addition of one or several amino acids, and constitutively activated having the activity of the polypeptide of SEQ ID NO: 134 Amino acid sequence of a G protein-coupled receptor,
Comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of:Method.
2. The method according to claim 1,MethodWherein the G protein-coupled receptor comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82,Method.
3. The method according to claim 1,MethodWherein the G protein-coupled receptor comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 is
(A) substitution of proline for amino acid position 43 of SEQ ID NO: 82 with alanine;
(B) replacing lysine at amino acid position 97 of SEQ ID NO: 82 with asparagine; and
(C) substitution of isoleucine at amino acid position 130 of SEQ ID NO: 82 for phenylalanine;
Comprising one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of:Method.
4. The method according to claim 1,MethodWherein the G protein-coupled receptor comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82 replaces proline at amino acid position 43 of SEQ ID NO: 82 with alanine; Amino acid of SEQ ID NO: 82positionSubstitution of lysine for 97 to asparagine; and amino acids of SEQ ID NO: 82position130 substitution of isoleucine for phenylalanineMethod.
5. The method according to claim 1,MethodWherein said G protein-coupled receptor comprises an amino acid sequence of a G protein-coupled receptor encoded by a polynucleotide comprising a nucleic acid sequence, said nucleic acid sequence comprising specific primers SEQ ID NO: 79 and SEQ ID NO: 80. Is a sequence obtained by performing PCR on a human DNA sample usingMethod.
6. The method according to claim 1,MethodWherein said G protein-coupled receptor comprises an amino acid sequence of a G protein-coupled receptor encoded by a polynucleotide comprising a nucleotide sequence, said nucleotide sequence comprising, under stringent conditions, the complement of SEQ ID NO: 81. Hybridize,Method.
7. The method according to claim 1,MethodWherein the G protein-coupled receptor comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134,Method.
8. The method according to claim 1,MethodWherein the G protein-coupled receptor comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134 is
(A) substitution of alanine at amino acid position 43 of SEQ ID NO: 134 with proline;
(B) substitution of asparagine at amino acid position 97 of SEQ ID NO: 134 for lysine; and
(C) substitution of phenylalanine at amino acid position 130 of SEQ ID NO: 134 with isoleucine;
Comprising one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of:Method.
9. The method according to claim 1,MethodWherein the G protein-coupled receptor comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134 replaces alanine at amino acid position 43 of SEQ ID NO: 134 with proline; Having a substitution of asparagine at amino acid position 97 of SEQ ID NO: 134 for lysine and a substitution of amino acid 130 of SEQ ID NO: 134 for phenylalanine for isoleucine;Method.
10. 2. The method of claim 1, wherein the G protein-coupled receptor is derived from SEQ ID NO: 82 by deletion, substitution, and / or addition of one or several amino acids, The amino acid sequence of a constitutively activated G protein-coupled receptor having the activity of a peptide, or a sequence derived from SEQ ID NO: 134 by deletion, substitution and / or addition of one or several amino acids, No. 134, wherein the amino acid sequence is a constitutively activated G protein-coupled receptor having the activity of the polypeptide.
Claims11Claim 110According to any one ofMethodWherein the G protein-coupled receptor forms part of a fusion protein having a G protein;Method.
Claims12Claim 111According to any one ofMethodWherein the G protein-coupled receptor is recombinantMethod.
Claims13Claim 112According to any one ofMethodWherein the therapeutic agent is for increasing the level of intracellular cAMP,Method.
Claims14The cell of claim 10, wherein said cell comprises TDAG8.13Described inMethod.
ClaimsFifteenClaim 112According to any one ofMethodWherein the therapeutic agent is for increasing the level of intracellular cAMP in peripheral blood leukocytes.Method.
Claims16Claim 112According to any one ofMethodWherein the therapeutic agent is for a disease or disorder that is restored by increasing the level of intracellular cAMP in peripheral blood leukocytes.Method.
Claims17Claims16Described inMethodWherein the disease or disorder is an inflammatory disease or disorder;Method.
18. 18. The method according to any one of the preceding claims, wherein the method comprises formulating the agonist or partial agonist as a therapeutic.
(19) 19. The method of any one of claims 1-18, wherein the method comprises contacting the candidate compound with a host cell comprising the G protein-coupled receptor or a membrane of the host cell.
20. 20. The method of claim 19, wherein said host cell is a mammalian cell.
21. 20. The method of claim 19, wherein said host cell is a yeast cell.
22. Use of an agonist or partial agonist of human TDAG8 for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease or disorder that is reduced by increasing intracellular levels of cAMP in peripheral blood leukocytes.
Claims23The method of claim 1, wherein said medicament is for the treatment of an inflammatory disease or disorder.22Use as described in.
24. 24. The use according to claim 22 or 23, wherein the agonist or partial agonist is an agonist or partial agonist according to any one of claims 1-21.
Claims25A process for identifying a compound that stimulates Gs-coupled G protein-coupled receptor-mediated signaling that is endogenously expressed in peripheral blood leukocytes, said process comprising the steps of:17A process comprising using the G protein-coupled receptor in the screening according to any one of the above.
Claims2610. The method of claim 1, wherein in peripheral blood leukocytes, the signaling mediated by the G protein-coupled receptor modulates inflammation.25The process described in.
Claims27A non-endogenous, constitutively activated G protein-coupled receptor, wherein the receptor comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134.
Claims28A non-endogenous, constitutively activated G protein-coupled receptor, wherein the receptor comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134 comprises: :
(A) substitution of alanine at amino acid position 43 of SEQ ID NO: 134 with proline;
(B) substitution of asparagine at amino acid position 97 of SEQ ID NO: 134 for lysine; and
(C) Substitution of phenylalanine at amino acid position 130 of SEQ ID NO: 134 with isoleucine
A receptor comprising one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of:
Claims29A non-endogenous, constitutively activated G protein-coupled receptor, wherein the receptor comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134 comprises the sequence A receptor having a substitution of alanine for proline at amino acid position 43 of SEQ ID NO: 134 with a substitution of lysine for asparagine at amino acid position 97 of SEQ ID NO: 134, and a substitution of phenylalanine for amino acid position 130 of SEQ ID NO: 134 with isoleucine.
Claims30A fusion protein comprising a G protein and a G protein coupled receptor, wherein the G protein coupled receptor comprises:27~29A fusion protein, which is the receptor according to any one of the above.
Claims31Claims27~30An isolated polynucleotide encoding the G protein-coupled receptor or the fusion protein according to any one of the above.
Claims32Claims31A vector comprising the polynucleotide according to 1.
Claims33The method of claim 11, wherein said vector is an expression vector.32The vector according to claim 1.
Claims34Claims32Or33A host cell comprising the vector according to 1.
Claims35The host cell is a mammalian cell.34The host cell according to item 1.
36. 35. The host cell according to claim 34, wherein said host cell is a yeast cell.
Claims37A method for producing a non-endogenous, constitutively activated G protein-coupled receptor or GPCR fusion protein, comprising:
(A) Claims33Transfecting a host cell with the expression vector described in 1 above, thereby producing a transfected host cell; and
(B) culturing the transfected host cells from the expression vector under conditions sufficient to express a non-endogenous, constitutively activated G protein-coupled receptor or GPCR fusion protein. Process
A method comprising:
Claims38A method for identifying one or more candidate compounds as non-endogenous, constitutively activated agonists, partial agonists, or agonists of a G protein-coupled receptor, comprising: The receptor comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, wherein the method comprises the following steps:
(A) contacting the one or more compounds with a membrane of a host cell or a host cell that expresses the receptor; and
(B) measuring the ability of the compound to inhibit or stimulate the function of the receptor
A method comprising:
Claims39A method for identifying one or more candidate compounds as agonists, partial agonists or antagonists of a non-endogenous and constitutively activated G protein-coupled receptor, said receptor comprising: Comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, wherein the amino acid of SEQ ID NO: 134 is:
(A) substitution of alanine at amino acid position 43 of SEQ ID NO: 134 with proline;
(B) substitution of asparagine at amino acid position 97 of SEQ ID NO: 134 for lysine; and
(C) Substitution of phenylalanine at amino acid position 130 of SEQ ID NO: 134 with isoleucine
Comprising one or more amino acid substitutions selected from the group consisting of:
(A ') contacting said one or more compounds with a membrane of a host cell or a host cell expressing said receptor; and
(B ') measuring the ability of the compound to inhibit or stimulate the function of the receptor
A method comprising:
Claims40A method for identifying one or more candidate compounds as agonists, partial agonists or antagonists of a non-endogenous and constitutively activated G protein-coupled receptor, said receptor comprising: Comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134ArrayHas a substitution of alanine at amino acid position 43 of SEQ ID NO: 134 with proline, a substitution of asparagine at amino acid position 97 of SEQ ID NO: 134 with lysine, and a substitution of phenylalanine at amino acid position 130 of SEQ ID NO: 134 with isoleucine. The method comprises the following steps:
(A) contacting the one or more compounds with a membrane of a host cell or a host cell that expresses the receptor; and
(B) measuring the ability of the compound to inhibit or stimulate the function of the receptor
A method comprising:
41. 41. The method of any one of claims 38 to 40, wherein the method further comprises formulating the agonist, partial agonist or antagonist as a therapeutic.
Claims42Claims38~41Wherein the host cell comprises an expression vector, wherein the expression vector encodes a non-endogenous, constitutively activated G protein-coupled receptor. A method comprising the polynucleotide of claim 1.
Claims43The host cell is a mammalian cell.38~42The method according to any one of claims 1 to 4.
44. 43. The method according to any one of claims 38 to 42, wherein the host cell is a yeast cell.
Claims45A process for identifying a compound that modulates the level of intracellular cAMP, the process comprising:38~44A process comprising performing the method of any one of the preceding claims.
Claims46The cell of claim 10, wherein said cell comprises TDAG8.45The process described in.
Claims47A process for identifying a compound that modulates signaling mediated by a Gs-coupled G protein-coupled receptor endogenously expressed in peripheral blood leukocytes, said process comprising:38~43A process comprising using the G protein-coupled receptor in the screening according to any one of the above.
Claims4810. The method of claim 1, wherein in peripheral blood leukocytes, the signaling mediated by the G protein-coupled receptor modulates inflammation.47The process described in.
Claims49A disease or disorder ameliorated by increasing intracellular levels of cAMP in peripheral blood leukocytesTotreatmentUsed toA pharmaceutical composition, wherein the pharmaceutical composition comprises:Of human TDAG8A composition comprising an agonist or a partial agonist.
Claims50The pharmaceutical composition is for the treatment of an inflammatory disease or disorder.49A pharmaceutical composition according to claim 1.
51. 52. The pharmaceutical composition according to claim 49 or 50, wherein the agonist or partial agonist is an agonist or partial agonist according to any one of claims 1-21.
52. Activation of human TDAG8 for use in treating a disease or disorder that is ameliorated by increasing intracellular levels of cAMP in peripheral blood leukocytes.
Claim 53 53. The activation of claim 52, wherein said pharmaceutical composition is for the treatment of an inflammatory disease or disorder.
54. An agonist or partial agonist of human TDAG8 for use in treating a disease or disorder that is alleviated by increasing intracellular levels of cAMP in peripheral blood leukocytes.
55. 55. The agonist or partial agonist of claim 54, wherein said pharmaceutical composition is for the treatment of an inflammatory disease or disorder.
56. 56. The agonist or partial agonist of claim 54 or 55, wherein the agonist or partial agonist is the agonist or partial agonist of any one of claims 1-21.