JP2003520250A - 一部の癌の治療における抗フェリチンモノクローナル抗体の使用 - Google Patents

一部の癌の治療における抗フェリチンモノクローナル抗体の使用

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Abstract

(57)【要約】 【課題】 一部の癌の治療における抗フェリチンモノクローナル抗体の使用 【解決手段】 本発明は、細胞がｍｙｃファミリー遺伝子産物の過剰発現を示す癌の治療のための薬剤の製造において、抗フェリチンモノクローナル抗体またはその断片を使用することに関し、かかる抗体またはその断片は、酸性及び塩基性ヒトフェリチンに共通のエピトープを認識する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、Ｍｙｃファミリー遺伝子産物の過剰発現を特徴とする癌の診断と治
療のための新規手段を提供することを目的とする。これらの手段は基本的に、酸
性及び塩基性イソフェリチンに共通のエピトープを認識するモノクローナル抗体
の使用を含む。 フェリチンは、細胞における鉄の貯蔵のために使用される、分
子量４４０，０００ｋｄａのタンパク質である。Ｇｒａｎｉｃｋが肝臓のフェリ
チンを分離した１９４２年以来、近年までこの分子は、主として肝臓、脾臓及び
骨髄に局在する、もっぱら細胞中の鉄の貯蔵タンパク質とみなされてきた。この
分子は、重大な鉄の過負荷の場合あるいは血管腔へのこの組織タンパク質の放出
を伴う肝壊死の際にのみ血漿中に発現すると思われていた。放射性、酵素または
蛍光トレーサを用いて実施されるより感受性の高い検出方法によって、血漿フェ
リチンの基礎濃度の存在が明らかにされ、様々な病理のプロセスにおけるその変
動を検討することが可能となった。これらの作業と平行して、いくつかの研究チ
ームが： ‐組織フェリチンの生化学的構造に関する知識を高め、 ‐「イソフェリチン」の名称で示される分子形態の異質性の意味を明確にし、 ‐血漿からあるいは種々の正常または病的器官から抽出されるフェリチンの特
性の相違を比較する、 ことを目指している。
【０００２】 現在のデータは、フェリチンが、殻の形態の糖タンパク質構造であるアポフェ
リチンから成る高分子構築物であることを示しており、アポフェリチンはそのタ
ンパク質成分であって、それが構成する腔の内部に第二鉄結晶として分布する鉄
原子の金属核を含む。
【０００３】 フェリチンのＸ線による結晶構造解析は、厳密な対称に従って分布する２４の
サブユニットの存在を明らかにした。サブユニットはＨとＬの２タイプである。
【０００４】 これらのサブユニットの各々をコードする遺伝子がクローニングされており、
それらの染色体上の位置が知られている（Ｍｕｒｏｗ Ｈ．Ｎ．，Ａｚｉｚ Ｎ
．，Ｌｅｉｂｏｌｄ Ｅ．Ａ．ら、フェリチン遺伝子の発現と調節（Ｔｈｅ Ｆ
ｅｒｒｉｔｉｎ ｇｅｎｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔ
ｉｏｎ）、Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９８８，５２８ １１３）。分
子量２１，０００のＨ型サブユニットは、ＨｅＬａ細胞から抽出されるフェリチ
ンあるいは心臓由来のフェリチン（Ｈ＝ｈｅａｒｔ）のような最も酸性度の高い
イソフェリチンの中で大半を占めるが、より少量ながら肝臓や脾臓においても存
在する。分子量１６，０００の２番目のタイプのサブユニット（Ｌ）は、肝臓（
Ｌ＝ｌｉｖｅｒ）または脾臓由来の最も塩基性の分子においてより特異的に主流
を構成する。
【０００５】 フェリチン中に貯蔵された鉄は、機能成分として第一鉄または第二鉄を組み込
んだタンパク質（ヘモグロビン及びシトクロムやカタラーゼのような酵素）の合
成のために動員される。肝臓、脾臓及び骨髄におけるフェリチンの主たる機能は
、一方では、鉄、水及び酸素との相互作用から生じるフリーラジカルによって引
き起こされ酸化と損傷から組織を保護することであり、他方では、ヘモグロビン
の合成のために鉄を再利用することである。その他の器官あるいは血漿中では、
フェリチンはほとんどあるいは全く鉄を含まず、その機能は現在のところ十分に
は理解されていない。
【０００６】 フェリチンに種々の表現型（イソフェリチン）が存在することはずっと以前か
ら知られていた（Ｄｒｙｓｄａｌｅ Ｊ．Ｗ．（１９７７年）、構造と代謝（Ｓ
ｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ）、（Ｃｉｂａ Ｆｏｕｎｄ
ａｔｉｏｎ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ５１ Ｎｅｗ ｓｅｒｉｅｓ）、４１‐５７
頁）。１９６５年に早くもＲｉｃｈｔｅｒが、ヒト肝臓及びＨｅＬａ類表皮癌細
胞から調製したフェリチンが、鉄含量の差では説明できない異なった電気泳動速
度を示すことを明らかにした。全体では、約２０のイソフェリチンが特性付けら
れた。
【０００７】 焦点電気泳動、イオン交換クロマトグラフィー、変性条件での二次元電気泳動
のような手法により、イソフェリチンがＨとＬの２つのサブユニットの様々な比
率での組合せによって形成されることが示された（Ｍｕｒｏｗら、前出）。
【０００８】 塩基性イソフェリチンの役割、特に鉄の代謝に直接結びつく現象における血清
フェリチンの役割はよく知られている。酸性フェリチンの役割については論争が
ある：多くの著者がヒトにおける腫瘍マーカーであるとしている。１９６８年か
ら、様々な新形成に罹患した患者の血清中に存在するα２Ｈグロブリンが記述さ
れ、これが後にα２Ｈイソフェリチンと命名された（Ｂｕｆｆｅ Ｄ．ら、悪性
疾患に罹患した被験者の血清における組織由来のタンパク質、α２Ｈグロブリン
の存在、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（１９６８）３：８５０‐８５６）。その後
Ｍａｒｃｕｓ Ｄ．ら（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｔｉ．（１９７５
）５５：７９１‐７９５）は、乳癌を発症した患者の血清中の異常なフェリチン
を記述した。Ｄｒｙｓｄａｌｅ Ｊ．ら（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９７４）
３４：３３５２‐３３６１）は、ＨｅＬａ細胞に含まれるフェリチンと同じであ
り、様々な種類の新形成において特にその濃度が高い酸性イソフェリチンを記述
した。Ｍｏｒｏｚ Ｃ．，ら（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（
１９７７）２９：３０‐７６）は、特に乳癌とホジキン病において存在するＴリ
ンパ球のサブ個体群によって分泌される、イソフェリチンである１つの因子を記
述した。最後に、ヒトの新形成プロセスの大部分（ホジキン病、乳癌、卵巣癌、
膵臓癌、肺癌、頭部及び頚部の類表皮癌、神経芽細胞腫、リンパ芽球性急性白血
病（ＬＡＬ）、カポジ肉腫、等々）が、血清フェリチン比率の上昇を伴うことは
周知である。すべての症例において、高い血清フェリチンレベルは否定的な予後
因子である（Ｈａｎｎ Ｈ．Ｗ．，Ｅｖａｎｓ Ａ．Ｅ．，Ｓｉｅｇｅｌ Ｓ．
Ｅ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，（１９８５年）４５、２８４３‐２８４８、
Ｊａｃｏｂｓ Ａ．，Ｓｌａｔｅｒ Ａ．，Ｗｉｔｔａｋｅｒ Ｊ．Ａ．ら、Ｊ
．Ｃａｎｃｅｒ，（１９７６年）３４：５３３）。
【０００９】 さらに、いくつかの種類の癌において組織フェリチンの腫瘍特有の局所的上昇
が示されたが、この過剰のフェリチンの間質反応性あるいは純粋に腫瘍性の由来
は明確にされていない。しかしながら、それが酸性フェリチンであると考えるこ
とについてはすべての著者が一致している。
【００１０】 画像においてあるいは特定の疾患の治療のために抗体、特にモノクローナル抗
体を開発することは、極めて多くの研究開発の対象であった。
【００１１】 これらの開発の総説が１９９８年に発表された（Ｐ．Ｓ．Ｍｕｌｔａｎｉら（
１９９８年）、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、
１１、１６巻：３６９１‐３７１０）。病理細胞を特異的に排除するための選択
的毒性を持つ物質による細胞ターゲティングシステムにおける抗体の診断上また
は治療上の使用は、「マジックブリット」のアングロサクソン名で知られている
。
【００１２】 この概念でのモノクローナル抗体の使用の様々な可能性は、大ざっぱには次の
通りである： ａ）抗腫瘍治療における、ＣＤＣＣ（補体依存性細胞障害）あるいはＡＤＣＣ
（抗体依存性細胞障害）作用に基づく免疫エフェクターとしての自然抗体の使用
。そのＦａｂ断片を通してこの標的細胞に対してある種の特異性を持つ抗体は、
その後同じ抗体のＦｃ断片によって細胞性免疫反応を引き起こすことができる。
また標的細胞のレセプタの遮断あるいは腫瘍抗原に特異的な抗イディオタイプ性
ワクチン接種も可能である、 ｂ）抗体は毒素あるいは薬剤に結合することができる、その場合抗体は、前記
毒素あるいは薬剤を標的に輸送するベクターである、 ｃ）抗体はまた、細胞毒性物質あるいは薬剤を導入することができるリポソー
ムまたは他の類似システム、すなわちアンチセンスオリゴヌクレオチド、等々と
の結合によって生薬系ベクターの役割を果たすこともできる。
【００１３】 ｄ）抗体は直接または間接的に放射標識することができ（キレートあるいは「
抗キレート、等々」の部位を持つ二特異性抗体）、その放射は治療あるいは画像
化目的に使用できる。使用される同位元素の中で、特に抗体の標識に関して、い
くつかの可能性が存在する。最も一般的に使用されるのはヨウ素１３１である。
この方法は多くの不都合を内包する（甲状腺へのヨウ素の固定、内因性デハロゲ
ナーゼの存在）。さらに、ヨウ素１３１は純粋なβ線を放射しない。そして最後
に、照射距離が短い（１．１ｍｍ）。
【００１４】 画像化のためのインジウム１１１あるいは治療のためのイットリウム９０との
結合も開発された。この場合には、結合は一般に抗体へのキレートの移植によっ
て実施され、キレートが、Ｓ．Ｍ．ＱｕａｄｒｉとＨ．Ｍ．Ｖｒｉｅｓｅｎｄｏ
ｒｐのグループによって開発され、記述された手法に従って（Ｖｒｉｅｓｅｎｄ
ｏｒｐ Ｈ．Ｍ．ら（１９９１）、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．９：９１８‐９
２８、Ｐ．Ｅ．Ｂｏｒｃｈａｒｄｔら（１９９８）、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３９：４７６‐４８４）放射性物質
を固定する。治療上の放射性同位元素としてのイットリウム９０の選択は、癌腫
学の見地からは適切である。これは実際には、純粋なβ線を放射する同位元素で
ある、その半減期は６７時間で、照射距離は６．６ｍｍである。充実性腫瘍塊の
治療、特にホジキン病と非ホジキン悪性リンパ腫の治療にも適すると思われる。
同じグループによって有望な結果が得られている（Ｈ．Ｍ．Ｖｒｉｅｓｅｎｄｏ
ｒｐら（１９９５）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５５：５８‐９２）。
これらの著者は、化学療法と体外放射線治療及び骨髄移植を組み合わせた古典的
治療方法に対して抵抗性のホジキン病を有する患者での、ＩＹ９０で標識した抗
フェリチンポリクローナル抗体による治療試験を記述している。
【００１５】 実際に、この疾患の生物学的特徴の１つは、周囲に存在する腫瘍細胞と反応性
細胞によるフェリチンの過剰発現である。Ｖｒｉｅｓｅｎｄｏｒｐら（１９９５
年）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５５：５８‐９２が記述したシステム
による腫瘍部位の画像（インジウム１１１）及びこの疾患の抵抗性形態の治療は
良好な結果を示した。
【００１６】 さらに、Ｍｙｃオンコジーンファミリー（最も重要なのはｃ、Ｎ、Ｌ）は、Ｄ
ＮＡに結びつく核タンパク質をコードすることが知られている。正常細胞では、
分裂促進シグナルに続く数時間のうちにＭｙｃ遺伝子の転写が上昇する。ｍｙｃ
ファミリーの遺伝子によってコードされるタンパク質は、「ロイシンジッパー」
モチーフを有する。この構造は、ヘテロダイマー（ｃ‐ｆｏｓまたはｃ‐ｊｕｎ
）またはホモダイマーの形成を可能にする。現在、ｃ‐ｍｙｃ産物の機能は、有
糸分裂の開始に関わる細胞遺伝子の転写の調節機能と考えられている。大ざっぱ
には、ｍｙｃ遺伝子はそれらの産物の過剰発現へと至る機序によってオンコジー
ン特性を獲得する。この過剰発現は、 ‐遺伝子の増幅、 ‐遺伝子転写の活性化、 ‐ｍＲＮＡの高い安定性を生じさせる転写後修飾 に副次的であると考えられる。トランスジェニック動物を作製することによる、
種々の組織におけるｍｙｃファミリー遺伝子産物の過剰発現に関するｉｎ ｖｉ
ｖｏ試験では、これらの事実を確認している。最後に、あらゆる増殖の増大は、
生理的びｍｙｃファミリー遺伝子の発現上昇を伴う。
【００１７】 ｍｙｃファミリーの主要な３つの成員（ｃ、Ｎ、Ｌ）は、ヒトの癌において、
これら３つの異なる機序により活性化された最も多く認められるオンコジーンで
ある。特に、悪性リンパ腫ではｃ‐ｍｙｃ、小細胞性肺癌及び神経芽細胞腫では
Ｌ‐ｍｙｃとＮ‐ｍｙｃが最も多く認められ、後者からＮ‐ｍｙｃが特性付けら
れた。ヒト悪性腫瘍の大部分において、ｍｙｃ遺伝子の発現の度合はマイナスの
予後因子である。
【００１８】 ｍｙｃファミリー遺伝子産物によって転写が調節される既知の標的遺伝子は多
くない。フェリチンのＨ鎖をコードする遺伝子は、ｃ‐ｍｙｃ遺伝子産物によっ
て負に調節されることが示されたばかりの最も新しい遺伝子である（Ｗｕら、鉄
制御遺伝子、Ｈフェリチン及びＩＲＰ２ ｃ‐ｍｙｃの協調調節（Ｃｏｏｒｄｉ
ｎａｔｅｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｒｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ
ｇｅｎｅｓ，Ｈ ｆｅｒｒｉｔｉｎ ａｎｄ ＩＲＰ２ ｃ‐ｍｙｃ）、Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ（１９９９年）２８３：６７６‐６７９）。すなわち、癌細胞におけ
るｃ‐ｍｙｃ遺伝子及び／またはこのファミリーの他の成員の発現はフェリチン
の発現に反比例する。
【００１９】 本発明は、ヒト脾臓から抽出され、精製されたフェリチンをマウスに免疫した
後の一部のモノクローナル抗体が、ｍｙｃ遺伝子を過剰発現した癌細胞または癌
のターゲティングに対して非常に大きな特異性を示したという、上記に述べた入
手可能なデータからは予測できない意外な所見からもたらされた。
【００２０】 使用するフェリチンの抽出‐精製手法からは、酸性と塩基性の２つの形態のフ
ェリチンを極めて高い純度で得ることができる。本発明で用いる抽出‐精製手法
は、特に小球状赤血球性貧血を発症した患者から抽出して精製したヒトフェリチ
ンの抽出、および精製を含む。意外にも、ＫｏｌｈｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎの古
典的手法を使用して得られる一部のモノクローナル抗体は、もっぱらヒトの酸性
及び塩基性のすべてのイソフェリチンに共通なエピトープを認識する（Ｊ．Ｋａ
ｄｏｕｃｈｅら、Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃ．Ｐａｒｉｓ（１９８２年）ｔ．２９
５ ｓｅｒｉｅｓ ＩＩＩ，４４３頁）。モノクローナル抗体のスクリーニング
は２段階で行われる：ｉ）動物の免疫に使用したものと同じフェリチンで被覆し
た固相上で抗フェリチン抗体を捕獲することによって選択する、ｉｉ）ヨウ素１
２５で放射標識した同じフェリチンを穴に添加して、この固相上に固定された抗
フェリチン特異的抗体が固定されたことを明らかにする。精製フェリチンとヨウ
素１２５で標識したフェリチンを使用する固相上での抗体の選択は、すべてのヒ
ト酸性及び塩基性イソフェリチンに共通で反復性のエピトープに対する抗体を選
択することを可能にする。「反復性エピトープ」とは、１つの分子上に複数存在
する同じエピトープを意味する。
【００２１】 本発明はまた、Ｗｕらの論文（前出）に鑑みて予測されるのに反して、２つの
形態のフェリチンに特異的なモノクローナル抗体が、Ｃ‐ｍｙｃ遺伝子が過剰発
現される腫瘍細胞、あるいは癌細胞を認識するという所見から導かれた。
【００２２】 本発明は、細胞がｍｙｃファミリー遺伝子産物の過剰発現を示す癌の治療のた
めの薬剤の製造において、抗フェリチンモノクローナル抗体またはその断片また
はそのような断片を含む構築物を使用することを対象とし、かかる抗体またはそ
の断片は、酸性及び塩基性ヒトフェリチンに共通のエピトープを認識する。
【００２３】 抗体の断片を含む構築物とは、前記断片と、アルブミン、オボアルブミンまた
はそれらの断片のような安定化または輸送の機能を有するポリペプチドをコード
するポリヌクレオチド配列の産物を意味する。同様に、抗体または抗体の断片を
、アジュバント及び／またはリポソーム、カチオンベシクル、ナノ粒子のような
前記抗体の輸送及び／または安定化を確保する分子または構造に結合した複合体
を意味する。また、アジュバント及び／または分子の輸送及び／または安定化を
確保する分子または構造に複合した、上述したような配列の産物の組合せでもあ
りうる。
【００２４】 モノクローナル抗体をｉｎ ｖｉｖｏで治療または診断に使用することは、モ
ノクローナル抗体が特異性、親和性及び無毒性という特殊な性質を合わせ持つこ
とを必要とする。無毒性とは、長期にわたって投与される、また反復投与される
可能性のある物質に対して免疫反応あるいは拒否反応を誘発しないという事を意
味する。特異性とは、当該モノクローナル抗体がフェリチン以外の他の抗原と交
叉反応を示さないことを意味する。
【００２５】 特異性という観点では、抗体は酸性イソフェリチン（新生プロセスの特異体、
Ｈ形態）と塩基性イソフェリチン（Ｌ形態の鉄分代謝）とを同時に認識すること
が重要である。
【００２６】 同様に、健常な組織または細胞内に対して毒性物質または治療物質をキャリア
とする場合、本発明によるモノクローナル抗フェリチン抗体は、対応する抗原に
対してこの抗体の拡散を最大限回避させるのに十分な親和性を持つ必要がある。
本発明の範囲内では、フェリチンに対する親和性は１０−９モル／リットルを上
回る必要がある。
【００２７】 さらに、酸性と塩基性のイソフェリチンに共通のエピトープは、反復性のエピ
トープであることが好ましい。イソフェリチン上の同一エピトープの反復によっ
て、いくつかの抗体を同一のフェリチン分子上に固定することが可能になる。こ
のようにして、これらの抗体が結合することによって、生成物を診断する特性、
および治療する特性が、有効に改善される。
【００２８】 本発明はまた、癌または腫瘍細胞の診断または治療のためのモノクローナル抗
フェリチン抗体を提供し、そこでは、ｍｙｃの遺伝子の過剰発現が観察され、下
記の特性が示された： −酸性と塩基性のフェリチンに共通のエピトープを認識し、ヒト以外のフェリ
チンを認識しないこと、好ましくは、この酸性と塩基性のフェリチンに共通のエ
ピトープは反復性のエピトープであることが最適である。
【００２９】 −その抗原に対する親和性は１０−９モル／リットルを上回る。
【００３０】 本発明による抗体は、Ｋａｐｐａ型の免疫グロブリンＩｇＧであることが好ま
しい。しかし、本発明による抗体はまた、エピトープ認識部位の多様性によって
、標的を改良することが可能なＩｇＭに関するものでもよい。病巣内に直接ｉｎ
ｖｉｖｏ注射を施す場合には、ＩｇＭが抗原に対して１０個の結合部位を有す
るので、より高い収率を示す範囲において好適である。
【００３１】 診断に関しては、ｉｎ ｖｉｔｒｏ診断の他に、免疫シンチグラフィー、或い
は部位特定を可能にするベクターとしてモノクローナル抗体を使用した、全ての
ｉｎ ｖｉｖｏ診断が知られている。
【００３２】 本発明に使用可能なモノクローナル抗体の品質とは、一方は免疫法のために使
用される抗原の品質であり、他方はその純度である。
【００３３】 モノクローナル抗体の獲得プロセスにおいてマウスの免疫化のために使用した
フェリチンは、Ｍｉｎｋｏｗｓｋｉ−Ｃｈａｕｆｆａｒｄ病を罹患した脾臓から
得られ、Ｇｒａｎｉｃｋ法によって硫酸アンモニウムおよび変性硫酸カドミウム
で抽出した。下記の実施例１内に記したプロトコルに基づいて、抽出して精製さ
れたこのフェリチンを、モノクローナル抗体を生産するハイブリドーマを得るた
めのマウスの免疫に使用した。
【００３４】 下記の表１では、本発明による抽出精製および免疫化の技術に基づいて得られ
たハイブリドーマをクローニングした後に得られた、いくつかの抗体の特徴を要
約している。
【００３５】 この表には、試験したモノクローナル及びポリクローナルの呼称、それらのア
イソタイプ特性、それらのフェリチンに対する親和性、並びに、Ｏｕｃｈｔｅｒ
ｌｏｎｙの免疫拡散技術による析出によって測定された一連の全てのフェリチン
に対する反応性が示されている。本発明に使用可能な抗体は、ヒト以外の全ての
細胞または組織、例えば馬の脾臓やＬＩＡ（レミア抑制活性に関して）に対して
、ネガティブな反応性を有する必要がある。ただし、ポリクローナル抗体または
Ｍ２１１モノクローナルに関してはこの限りではない。
【００３６】 本発明に使用可能な抗体の他の特徴は、それらの一定の親和性にある。この表
にある抗体の中では、Ｂ８とＭ２９のみが本発明に使用可能なように思われる。
【００３７】 つまり、一つの特有な実施形態において、本発明の抗体は、酸性と塩基性のイ
ソフェリチンに共通の反復性エピトープに対して向けられている。下記の実施例
２に記載され、図３に示されているように、サンドイッチ ＥＬＩＳＡ試験の助
けによって、このような抗体が明らかとなる。このような試験を実施することが
可能なことよって、いくつかの抗体が同じフェリチンの分子上に固定され得るこ
とが確認される。この特性は、診断または治療における使用方法を決定する利点
を提供する。
【００３８】
【表１】 しかしながら、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるマウスまたは動物モノクローナル抗体
の使用は、生物が異種抗体を生産して、反復注射を急速に無効にするどころか危
険になるために（過敏症、免疫コンプレックス症、抗イディオタイプ抗体の生産
）制限される。従って、これらのマウス抗体のＦｃ部位をヒト化するなり、再編
成するなりによって回避することが好ましい。キメラ抗体を産生させることによ
る解決法がたびたび採用された（Ｎａｔｕｒｅ３２１（１９８６年）３２１：５
２２−５２５）。今後は、ハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗
体の２本鎖をコードする遺伝子をクローニングすることが可能になり、これらの
生産はｉｎ ｖｉｔｒｏで操作可能であり、続いて、選択された細胞に適した発
現ベクター内に再挿入した後に、リンパ系、その他の分泌細胞内に再び導入され
る。かくして、マウスまたはラットの可変領域とヒトの定常領域とを備えた新し
いモノクローナル抗体が編成される。種々のタイプの免疫グロブリンを得ること
ができる。全ての事例において、これら免疫グロブリンの特異性は、使用した可
変領域のものと同じであると思われるが、編成中に選択されたアイソタイプによ
ってはヒトの免疫グロブリンに対して有効な特性を備えている。
【００３９】 ２番目のアプローチは、抗体の再編成にある（「抗体の再編成（Ｒｅｓｈａｐ
ｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８年）、Ｎａｔｕｒ
ｅ３３２：３２３−３２７）。概略的には、このアプローチの出発点は、抗体が
自己を認識する抗原のエピトープと接触する部位は、ハイパーバリアブルと呼ば
れる可変領域の所定の配列に局在しているという観察である。この技術は、「抗
原との補完性を決定する領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれるマウスの免疫グロブ
リンのハイパーバリアブル領域を、ヒト免疫グロブリンのクラスＧの可変領域に
移植するものである。
【００４０】 つまり、Ｃｋａｃｋｓｏｎら（Ｎａｔｕｒｅ（１９９１年）３５２：６２４−
６２８）および、Ｌｅｍｅｒ Ｈｕｓｅら（Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８９年）２４
６：１２７５−１２８１）の方法では、免疫グロブリンＧの重鎖のＶ遺伝子を発
現マウスにおいて増産させるために、ＰＣＲ技術を利用した。このようにして免
疫されたマウスの脾臓から抽出された遺伝子ＤＮＡから、種々のレパートリーが
作り出された。抗体の可変な遺伝子配列の全体を備えたベクターのライブラリー
が実現された。一つのλバクテリオファージをＥ．ｃｏｌｉ内の発現ベクターと
して使用した。この技術によって、抗体の単一鎖のＶＨドメインを得ることがで
きる。次に、ＰＣＲ技術を利用して、リンカーによりＶＫ領域と連結されたＶＨ
ドメインから得られた単一鎖Ｆｖ断片を生産する。すなわち、この方法によって
、非免疫原性の環境下において、特異的な断片を簡単で安価に生産することが可
能となる。
【００４１】 つまり、本発明によるモノクローナル抗体は、ＩｇＧまたはＩｇＭのいずれか
のタイプであろうが、単一特異性、二特異性、或いは多特異性であり得る。上記
の遺伝子操作技術は、一方はフェリチンに対して、他方では、標的としたい細胞
表面に特異的なレセプタまたは抗原に対する特異性を伴わせることを可能にする
。
【００４２】 「マジックブリット」の概念においてモノクローナル抗体を使用することは、
種々の可能性が存在する。第１は、抗腫瘍治療においてＣＤＣＣ（補体依存型細
胞毒性）、またはＡＤＣＣ（抗体依存型細胞毒性）型の活性に作用させることに
よって、免疫エフェクターとして抗体を使用することである。同様に、腫瘍細胞
のレセプタをブロックすること、または腫瘍抗原に特異的な抗イディオタイプの
ワクチン接種にも関連し得る。
【００４３】 本発明の利用において、抗体または抗体の断片は、Ｘ分子と結合することがで
きる。ここでＸ分子とは、毒性分子、薬剤またはプロドラッグ（ｐｒｏｄｒｏｇ
ｕｅ）、または核酸配列、または何らかの認識特異性を備えた第２の抗体である
。
【００４４】 ａ）Ｘは毒性分子である： 最初の例としては、Ｘが放射性アイソトープ、好ましくはβ放射である場合で
ある。タンパク質、特にモノクローナル抗体と放射線同位体を連結する方法には
、いくつかの可能性が存在する。実際に、インジウム１１１（Ｉｎ１１１）及び
イットリウム（Ｙ９０）でマーキングした抗フェリチンのポリクローナル抗体を
使用した実験では、一方では、好ましくはＩｎ１１１を用いた腫瘍部位のイメー
ジに関して、他方ではホジキン病の抗療形態の処理（Ｙ９０）に関する興味深い
結果が得られている（Ｐ．Ｅ．Ｂｏｒｃｈａｒｄｔら（１９８８年）Ｔｈｅ Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３９：Ｎｏ３、４７
６頁）。
【００４５】 ＩｇＭまたはＩｇＧにおいては、Ｂｏｒｃｈａｒｄｔら（上記参照）に記され
たキレート化技術によって、放射性同位元素が抗体と連結されている。
【００４６】 治療用の放射性元素として、イットリウム９０を選択することは、特に適切で
ある。これは、純粋なβ線を有するアイソトープであり、半減期は６７時間で、
放射線は６．６ｍｎである。これは、腫瘍塊、特にホジキン病、膵臓のリンパ腫
、または膵臓癌の治療に完全に適合するようである。
【００４７】 Ｘは、リチン、アルブリン、または、ジフテリア毒素Ａ鎖型毒性分子であって
もよい。これらのポリペプチドの毒性は既知である。また、カルボキシル型の結
合、または、タンパク質どうしの結合を可能にする全てのタイプの結合、特にそ
れらの残渣、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２、−ＳＨ等による結合、および当業者によっ
て知られている結合によって、免疫グロブリンと結合することも可能である。
【００４８】 ｂ）Ｘは細胞毒性分子である： いくつかの細胞毒性のある薬剤が知られており、開発中のものもある。これら
は、転写の阻害によって、翻訳の阻害によって、またはアポプトーゼ（ａｐｏｐ
ｔｏｓｅ）の誘導によって細胞分裂をブロックする性質を有する。例えば、ミト
マイシン、アドリアマイシン、タキソール等を挙げることができる。これらの薬
剤を使用する際に、常に存在する問題は、健常な細胞、または健常な組織に対す
る毒性である。本発明によるモノクローナル抗体の、フェリチンに対する単一特
異性、またはフェリチンとレセプタとの間の二特異性は、選択された細胞上に対
してこれらの物質をターゲットすることを可能にする。
【００４９】 ｃ）Ｘはガレヌス（ｇａｌｅｎｉｑｕｅ）のベクターまたはプロドラッグ（ｐ
ｒｏｄｒｏｇｕｅ）である： 安定性を改善し、生分解または健常細胞に対する毒性活性を回避するために、
本発明によるモノクローナル抗体は、リポゾーム型のベクター、或いは薬剤の投
与システムとして既に使用されている陽イオン型のエマルジョンに結合させるこ
とができる（Ｔｅｘｅｉｒａら（１９９９年）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１６：３０−３６）。同様に、Ｄ．Ｄｅｓｈｐａｎｄｅら（
１９９８年）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１５：１３４
０−１３４７）によって記されたような陽イオン脂質も重要である。このタイプ
のベクターは、細胞増殖の抑制、及び／またはアンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡの
細胞毒性分子を取り込ませるするために特に適している。しかしながら、上に引
用した理由により、標的に対する特異性を増大することと、利用可能な種々の毒
性の細胞毒性の減少することと、全てを見ると、ｂ）の観点で引用された分子は
、これらのベクターによって有効に提供されていた。
【００５０】 ｄ）Ｘは第２の抗体である： −いくつかのフェリチン分子と交差結合することが可能なフェリチンに対して
向けられるもの、 −リンパ細胞、樹状細胞、マクロファージ、またはナチュラルキラー型（例え
ばＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＨＮＫ１、ＣＤ５６など）の抗原に対して向
けられ、前記細胞の凝集と腫瘍細胞の近傍での活動を可能にするもの、 −標的腫瘍細胞上に位置するレセプタに対して向けられ、標的細胞のフェリチ
ンとの交差連結を可能にするもの。
【００５１】 上記のａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）の点に関して、Ｘはまた、エステラーゼに感受
性の炭素を含む鎖に連結することが可能である。この鎖は、５から１５個の長さ
の炭素原子からなり、線状または分岐状で、エステラーゼに感受性である。治療
の使用において、このタイプの鎖とＸ分子の結合が、癌細胞と対照的に正常細胞
が酵素システム、特にエステラーゼを有する場合に、特に興味深い。従って、こ
の実施形態においては、マーキングされた放射線同位体と結合した抗体によって
、癌細胞のみがマーキングされた。正常細胞内ではエステラーゼ活性によって、
一般的な循環下において放射線同位体を塩析させるため、癌細胞のみが特別で差
別的にマーキングの恩恵を受ける。
【００５２】 本発明は、同様に、個体における腫瘍または癌細胞の存在の判定、および部位
特定の方法を提供し、これらの腫瘍または癌細胞の中では、ｍｙｃの遺伝子が過
剰発現され、この方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖ
ｉｖｏにおいて、前記細胞または前記腫瘍を抗フェリチンのモノクローナル抗体
、または、シグナルを発する物質と結合した抗フェリチンのモノクローナル抗体
の断片によってマーキングする工程を有しする。前記抗体または前記断片は酸性
および塩基性のヒトフェリチンに共通のエピトープを認識する。この方法では、
抗体が放射性アイソトープに結合されていることが好ましい。例えば、免疫シン
チグラフィーにおいて本発明によるモノクローナル抗体を用いる際には、インジ
ウム１１１が特に適している。本発明によるモノクローナル抗体の品質、例えば
その特異性および親和性は、前述したように、本発明による判定、および部位特
定の方法において重要である。
【００５３】 当業者であれば、腫瘍または癌細胞の検出及び／または部位特定に適したシグ
ナルを、単一または二特異性の抗体に結合することを知っている。例えば、全て
の適切な方法によって抗体に結合された蛍光、またはルミネセンスの発光シグナ
ルを挙げることができる。広範に使用されている一つの例はアビジン／ビオチン
結合である。
【００５４】 本発明の他の目的は、前述したような、そして、ヒトのＨ及びＬフェリチンに
対する特異的な特性、かつ１０−９モル／リットルを上回る親和性を示すモノク
ローナル抗体と、下記によって構成されたグループから選択された物質Ｘとの結
合産物にある： −ベータ、アルファ、またはガンマ線放射性同位元素、 −リチン、アルブリンのＡ鎖型、またはジフテリアトキシンのＡ鎖型の細胞毒
性、 −メトトレキサート、ミトマイシン、タキソール、または、アドリアマイシン
の型の細胞溶解物質、 −アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡ。
【００５５】 本発明は、同様に、Ｘがリポゾーム、または陽イオンエマルジョン型のベクタ
ーによって安定化される結合産物に関する。本発明は、同様に、５から１５炭素
原子のカルボキシル鎖で構成されたスペーサーが結合産物に組み込まれており、
結合産物が内性のエステラーゼの存在下に置かれたときにＸ分子を放出できる結
合産物に関する。
【００５６】 上に記載された本発明の種々の態様の全体において、抗フェリチンのモノクロ
ーナル抗体、またはその断片を使用することは、それが放射性アイソトープ、細
胞毒性、または細胞増殖抑制性の物質と結合された場合に、ｍｙｃ遺伝子産物の
過剰発現を示す全ての腫瘍および癌細胞の診断、および治療に適用性があること
を見出すことできることは特に驚くべきことである。適用する分野を限定するも
のではないが、次に挙げる種々の癌は、このタイプの治療が特に適切と思われる
： ａ）ホジキン病： この病気の古典的な治療に抵抗性の患者を、イットリウム９０でマーキングさ
れた抗フェリチンポリクローナル抗体で治療することが可能であることは、既に
知られており、記述もされている（Ｈ．Ｍ．Ｖｒｉｅｓｅｎｄｏｒｐら（１９９
７年）、Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ、１２月１５日、第８０巻、Ｎｏ
１２、２７−２１頁）。
【００５７】 ｂ）膵臓癌： フランスでは、１年に８，０００件の新たなケースに膵臓癌が関係する。この
癌の予後は、５年間の生存率が３％以下である点で悲惨である。この癌は、余り
化学感応性でない。放射線感応性があるが、放射線不治療性である（重大な臓器
）。実際の治療においては、もし可能であれば外科手術、放射線治療、または手
術による放射線治療がなされる。放射性アイソトープ、特にイットリウム９０と
結合された抗フェリチンモノクローナル抗体を使用する利点は、投与可能な放射
線治療の分量が２０倍になり得る点であり、付随する二次毒性は非常に弱い。実
際に、ターゲットした結果、全体的な循環下における放射性同位体による破壊を
回避し、全体的な循環下において腫瘍の中心部に直接ターゲットされた。
【００５８】 ｃ）肝臓細胞の上皮種： この肝臓癌は、人口１００，０００人に対して約１５例が示されている。２０
％のケースが手術可能で、予後は５年間で４０％である。手術不可能な８０％の
ケースでは、予後は５年間で１０％である。放射性リピオドールを除くいかなる
治療もその効果が実証できていない。本発明の複合体（化合物）による治療は、
同様に放射性同位体を腫瘍へ直接投与するために、治療性指標（残留／放射の時
間）を、ヨード１３１でマーキングした放射性リピオドールに対して４から１０
に増大させることができる。
【００５９】 ｄ）頭部と頸部の上皮腫（上部消化気道の癌またはＶＡＤＳ）。
【００６０】 フランスでは、１年に１２，０００件の新たなケースにこれらの癌が関与し、
５年間で４０％の生存率を示し、これらの生存者の１５％が転移形成のリスクが
高まっている。
【００６１】 上に挙げたこれらの癌の全てにおいて、フェリチンが生産される。さらに、正
常細胞内では、腫瘍形成のプロセスにおいて、しばしばｃ−ｍｙｃと結合した形
で細胞内にのみフェリチンが発現されるが、このフェリチンは、細胞膜に発現さ
れる。従って、モノクローナル抗体と抗フェリチンと上で定義したようなＸ分子
との間の結合を自由に生産されれば、ｍｙｃ遺伝子の過乗発現という特異性を共
通に備えた腫瘍または腫瘍細胞において変化したスペクトルをターゲットするこ
とが可能になることが明らかとなる。代謝性の放射線治療による治療の場合には
、ＩｇＭの使用が、その緩慢な拡散と寿命の長さの点から興味深い。
【００６２】 引用された腫瘍の病理学のリストは、網羅的である。ニューロブラストーム、
肺または卵巣癌もまた、ｃ−ｍｙｃの過剰発現を示す。
【００６３】 以下の図を伴う実施例は、本発明とその効能を但し限定することなく示してい
る。
【００６４】 実施例１：抗フェリチンモノクローナル抗体の獲得： ａ）上で既に記したように、細胞を免疫するために使用する抗原は、相当に高
純度で得ることが重要である。使用した独創的な技術を以下の表ＩＩに示す。
【００６５】
【表２】 ＳＵＰＥＲＤＥＸ２００によるクロマトグラフィー後のクロマトグラムの分析
を図２に示す。
【００６６】 ｂ）マウスの免疫： マウスを免疫することによるモノクローナル抗体の獲得、およびクローニング
は、ＫｏｌｈｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎの古典的な方法によって実施した。
【００６７】 ｃ）ハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体の生産と精製： ハイブリドーマは、マルチトレイ上のｉｎ ｖｉｔｒｏの細胞培養システム内
で培養した（Ｎｕｎｃ，参照１６７９５）。
【００６８】 細胞は、ＲＰＭＩ４＋ＴＣＨ中でインキュベーターに置かれた。接種材料は、
２００ｍｌのＴＣＨ内に５×１０７で構成されている。ＲＰＭＩ培地（約１００
から２００ｍｌ）を２日間にわたって合流まで添加した。細胞が死んでから約１
週間後に浮遊物を採集した。
【００６９】 浮遊物を、１０倍に濃縮し、次にプロテインＧセファロースＦＦ（Ｐｈａｒｍ
ａｓｉａ）クロマトグラフィーのカラムを充填し、半分に希釈した後に、２０ｍ
Ｍ、ｐＨ７のリン酸ナトリウムの緩衝液でクロマトグラフィーした後、抗体は０
．１ＭでｐＨ７のＨＣＬグリシン緩衝液で溶出し、カラムをすぐに０．２Ｍ、ｐ
Ｈ７のリン酸カリウムの緩衝液で脱塩した。得られた純度のパーセンテージは少
なくとも９５％であった。次にアイソタイプ、等電位点、免疫拡散による反応性
を、これらの精製されたプレパラート上で調査した。
【００７０】 得られた下記の表Ｉに示されている種々の抗体の中で、Ｂ８とＭ２９のモノク
ローナル抗体が、ヒト細胞に対する親和性と特異性の点で最も興味深いものと思
われる。これらの２つの抗体はＩｇＧ１カッパーのアイソタイプである。
【００７１】 組織化学の結果： 組織化学の実験は、ペロキシダーゼ結合Ｂ８モノクローナル抗体で実施した。
【００７２】 ａ）ホジキンのガングリオン上で ｂ）膵臓の腺癌。アルカリホスファターゼを用いた古典的な技術によって、Ｐ
ＢＳ緩衝液で１／２５０で希釈されたＡＭＢ８ＬＫ抗体による免疫組織化学の調
査を実施した。
【００７３】 ４％のパラフォルムアルデヒド、０．１ＭでｐＨ７．４のエタノールアミドの
バスによって、組織を固定して、パラフィン内に流した。５μの切片が得られた
。キシレンエタノールのバスにおいて脱パラフィン化した後、牛血清アルブミン
と保温することによって非特異的反応をブロックした。切片は、１／２５溶液の
ＡＭＢ８ＬＫ抗体で、室温において１時間保温した。ＡＭＢ８ＬＫの固定の可視
化は、ペロキシダーゼのシステムによって行った（Ｃｏｒｄｅｌｌ Ｊ．Ｌ．ら
、ヒストケム誌１９８４年３２：２１９−２２９）。
【００７４】 得られた結果を図１に示す。
【００７５】 写真ＡとＢの観察によって、Ｒｅｅｄ Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇの全ての腫瘍細胞
では、フェリチン発現に関して陽性であることが示された。
【００７６】 同様に、写真Ｃの観察によって、腫瘍自身は、フェリチン発現に関して強い陽
性であることが示された。
【００７７】 実施例２：サンドイッチＥＬＩＳＡ試験の結果 ヒト酸性および塩基性イソフェリチンに共通の反復性エピトープを認識するこ
とにより、抗体の診断および治療特性を改善することができる。
【００７８】 サンドイッチＥＬＩＳＡ試験では、反復性のエピトープに対して制御された抗
体を特定することができる。実際に、試験の原理は、同じ抗原を、一方では固相
上に固定された第１抗体と、他方では自由で且つマーカー（例えば酵素の）を有
する第２抗体と固定することに基づく。試験が機能するために、少なくとも２つ
の抗体で一つの分子を認識する必要がある。言い換えれば、認識された分子は少
なくとも２つの反復されるエピトープを含む必要がある。
【００７９】 本発明のモノクローナル抗体ＡＭＢ８ＬＫが、ヒトフェリチンを検出するため
のＥＬＩＳＡサンドイッチ試験を実施するために使用された。
【００８０】 より正確には、ＥＬＩＳＡ試験は以下のプロトコルに沿って実施した： ａ）保温： ５０μｌの標準または患者の血清を各ウエルにのせた。ペルオキシダーゼ結合
ＡＭＢ８ＬＫ抗フェリチン抗体を２００μｌ添加した。次に、各ウエルにＡＭＢ
８ＬＫ抗体で被覆されたボールを加えた。混合物を攪拌しながら室温で２時間保
温した。次に、１．５ｍｌの９％ＮａＣｌ、２％Ｔｗｅｅｎ２０の溶液で３回洗
浄した。
【００８１】 ｂ）着色反応： ３００μｌの基質（ＯＰＤ）を各チューブ内に配置した。混合物を遮光状態で
室温にて３０分間保温した。各チューブに１ＭのＨＣｌを２ｍｌ添加した。
【００８２】 ｃ）解釈： フェリチンによって固定された抗体量を反映する４９２ｎｍの吸収を測定した
。尚、フェリチン自身も固相の抗体に固定されている。
【００８３】 図３は、試験の結果を示している。
【００８４】 この試験によって元のヒトフェリチンを検出することができる： −脾臓の −肝臓の −心臓の −胎盤の ここに示された結果は、ＡＭＢ８ＬＫ抗体によるサンドイッチ試験が実施可能
であることを示している。これらの結果はこれらの抗体がヒト・イソフェリチン
における反復性の共通のエピトープを認識することを示している。
【図面の簡単な説明】
【図１】 以下に示す要領で処理して、抗フェリチン・モノクローナル抗体ＡＭＢ８ＬＫ
でマーキングした３つの組織化学断面の写真。 写真ＡとＢは、ホジキン病のガングリオンの断面である。写真Ｃは膵臓の腺癌
の断面である。
【図２】 表２に記された精製プロトコルにおけるスーパーデックス２００−カラム２６
／６０による精製の後に得られたクロマトグラムを示す図。
【図３】 ＥＬＩＳＡサンドイッチ試験の結果を示す図（固相上のＡＭＢ８ ＬＫ、ＡＭ
Ｂ８ ＬＫはヒト血清中のアルカリホスファターゼでマーキングされた）。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｋ 48/00 51/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｇ０１Ｎ 33/53 33/574 Ａ 33/574 Ｄ 33/577 Ｂ 33/577 33/58 Ｚ 33/58 33/60 Ｚ 33/60 Ａ６１Ｋ 43/00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 2G045 AA26 CB02 DA12 DA13 DA14 DA36 DA78 FB03 FB07 FB08 4C084 AA12 AA13 NA14 ZB262 4C085 AA14 AA26 AA27 BB37 CC29 EE01 4C086 AA02 AA03 EA16 MA01 MA04 NA14 ZB26

Claims (29)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 細胞がｍｙｃファミリー遺伝子産物の過剰発現を示す癌の治
    療のための薬剤の製造における、酸性及び塩基性ヒトフェリチンに共通のエピト
    ープを認識する、抗フェリチンモノクローナル抗体またはその断片またはそのよ
    うな断片を含む構築物の使用。
  2. 【請求項２】 酸性及び塩基性ヒトフェリチンに共通の上記エピトープが反
    復性である、請求項１に記載の使用。
  3. 【請求項３】 抗体またはその断片がＸ分子に結合されており、Ｘが毒性分
    子、薬剤、プロドラッグまたはその特異性に関わりなく第二の抗体である、請求
    項１または２に記載の使用。
  4. 【請求項４】 抗フェリチンモノクローナル抗体が１０−９以上の親和性を
    持つＩｇＧ Ｋであり、かかる抗体が単一または二特異性である、請求項１、２
    または３のいずれかに記載の使用。
  5. 【請求項５】 抗体が二特異性であるとき、第一パラトープがフェリチンの
    ためのものであり、第二パラトープが表面抗原に特異的なエピトープまたは標的
    細胞に特異的なレセプタのためのものである、請求項４に記載の使用。
  6. 【請求項６】 モノクローナル抗体がＩｇＭまたはその断片である、請求項
    １、２または３に記載の使用。
  7. 【請求項７】 Ｘがベータ線放射性同位元素である、請求項３に記載の使用
    。
  8. 【請求項８】 Ｘがリシン、アブリンのＡ鎖型またはジフテリア毒素のＡ鎖
    型毒性分子である、請求項３に記載の使用。
  9. 【請求項９】 Ｘがメトトレキセート、ミトマイシン、タキソールまたはア
    ドリアマイシン型の細胞溶解性物質である、請求項３に記載の使用。
  10. 【請求項１０】 ＸがアンチセンスＲＮＡ型の細胞溶解性及び／または細胞
    毒性物質である、請求項３に記載の使用。
  11. 【請求項１１】 Ｘがリポソーム型ベクターによって安定化される物質であ
    る、請求項３に記載の使用。
  12. 【請求項１２】 Ｘが腫瘍細胞に特異的なレセプタを認識する抗体である、
    請求項３に記載の使用。
  13. 【請求項１３】 Ｘがリンパ系細胞、樹状細胞、マクロファージまたはナチ
    ュラルキラー型細胞の抗原を認識する抗体である、請求項３に記載の使用。
  14. 【請求項１４】 Ｘがアルファ線放射性同位元素である、請求項３に記載の
    使用。
  15. 【請求項１５】 Ｘがガンマ線放射性同位元素である、請求項３に記載の使
    用。
  16. 【請求項１６】 スペーサーＣ５からＣ１５が結合産物の中に組み込まれて
    おり、結合産物がエステラーゼの存在下に置かれたときＸ分子を放出することが
    できる、請求項１から１５のいずれかに記載の使用。
  17. 【請求項１７】 個体において、ｍｙｃ遺伝子ファミリーの産物が過剰発現
    される腫瘍または癌細胞の存在の可能性を判定するまたは位置確認するための物
    質の製造における、シグナルを発する物質に直接または間接的に結合された、酸
    性及び塩基性ヒトフェリチンに共通のエピトープを認識する抗フェリチンモノク
    ローナル抗体またはその断片の使用。
  18. 【請求項１８】 酸性及び塩基性ヒトフェリチンに共通の上記エピトープが
    反復性である、請求項１７に記載の使用。
  19. 【請求項１９】 抗体が、イットリウム９０型のベータ線、インジウム１１
    １型のガンマ線またはアルファ線放射性の同位元素に結合されている、請求項１
    ７または１８に記載の使用。
  20. 【請求項２０】 抗体が、蛍光または発光シグナルを発する物質に結合され
    ている、請求項１７または１８に記載の使用。
  21. 【請求項２１】 抗体が１０−９以上の親和性を持ち、かかる抗体が単一ま
    たは二特異性である、請求項１７から２０のいずれかに記載の使用。
  22. 【請求項２２】 抗体が二特異性であるとき、第一パラトープがフェリチン
    のためのものであり、第二パラトープが表面抗原に特異的なエピトープまたは標
    的細胞に特異的なレセプタのためのものである、請求項２１に記載の使用。
  23. 【請求項２３】 少なくとも： ‐酸性及び塩基性ヒトフェリチンに共通な反復性のエピトープを認識し、 ‐抗原に対する親和性が１０−９モル／リットル以上である、 という特性を示す、癌またはｍｙｃファミリー遺伝子の過剰発現が認められる腫
    瘍細胞の診断試験または治療薬の製造のための抗フェリチンモノクローナル抗体
    またはその断片。
  24. 【請求項２４】 ＩｇＧ Ｋアイソタイプまたは誘導体である、請求項２３
    に記載の抗体。
  25. 【請求項２５】 ＩｇＭアイソタイプである、請求項２３に記載の抗体。
  26. 【請求項２６】 酸性及び塩基性ヒトフェリチンに共通なエピトープを認識
    し、抗原に対して１０−９モル／リットル以上の親和性を持つ、抗フェリチンモ
    ノクローナル抗体と、 ‐ベータ、アルファまたはガンマ線放射性同位元素、 ‐リシン、アブリンのＡ鎖型またはジフテリア毒素のＡ鎖型毒性分子、 ‐メトトレキセート、ミトマイシン、タキソールまたはアドリアマイシン型の
    細胞溶解性物質、 ‐アンチセンスＲＮＡ から成る群から選択される物質Ｘとの結合産物。
  27. 【請求項２７】 酸性及び塩基性ヒトフェリチンに共通の上記エピトープが
    反復性である、請求項２６に記載の結合産物。
  28. 【請求項２８】 Ｘがリポソーム型ベクターによって安定化される、請求項
    ２６に記載の結合産物。
  29. 【請求項２９】 スペーサーＣ５からＣ１５が結合産物の中に組み込まれて
    おり、結合産物がエステラーゼの存在下に置かれたときＸ分子を放出することが
    できる、請求項２６に記載の結合産物。
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