JP2003501084A - 新規なカンジダ・アルビカンス遺伝子及びこれらの遺伝子によりコードされるタンパク質 - Google Patents
新規なカンジダ・アルビカンス遺伝子及びこれらの遺伝子によりコードされるタンパク質Info
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Abstract
(57)【要約】
この発明は、カンジダ・アルビカンス遺伝子のタンパク質(以後、ＰｃａＤＲ４７２、ＰｃａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、１ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１と呼ぶ)及びそれらの類似体並びに該タンパク質又は該タンパク質のポリペプチド類似体をコードするポリヌクレオチド(ＲＮＡ、ＤＮＡ)、該ポリペプチド及びポリヌクレオチドの製造方法、それらの、抗カビ剤として利用することのできる該タンパク質のインヒビターの製造のための利用及びかかるインヒビターを含む医薬組成物に関するものである。
Description
【０００１】
本発明は、新規なカンジダ・アルビカンス遺伝子及びこれらの遺伝子によりコ
ードされるタンパク質並びにこれらのタンパク質又はこれらのタンパク質のポリ
ペプチド類似体をコードするポリヌクレオチド(ＲＮＡ、ＤＮＡ)に関する。
ードされるタンパク質並びにこれらのタンパク質又はこれらのタンパク質のポリ
ペプチド類似体をコードするポリヌクレオチド(ＲＮＡ、ＤＮＡ)に関する。
【０００２】
本発明は又、これらのポリペプチド及びポリヌクレオチドの製造方法、病原性
真菌類特にカンジダ・アルビカンスの研究のための及び本発明のこれらの遺伝子
によりコードされるタンパク質のインヒビターの製造のためのそれらの利用にも
関係し、これらのインヒビターは、抗真菌剤として用いることができる。本発明
は又、かかるインヒビターを含む医薬組成物にも関係する。
真菌類特にカンジダ・アルビカンスの研究のための及び本発明のこれらの遺伝子
によりコードされるタンパク質のインヒビターの製造のためのそれらの利用にも
関係し、これらのインヒビターは、抗真菌剤として用いることができる。本発明
は又、かかるインヒビターを含む医薬組成物にも関係する。
【０００３】
従って、本発明は、特に、カンジダ・アルビカンスの新規なタンパク質及びこ
れらのタンパク質をコードするヌクレオチド配列、それらの製造方法及びそれら
の利用に関係する。
れらのタンパク質をコードするヌクレオチド配列、それらの製造方法及びそれら
の利用に関係する。
【０００４】
又、以下においては、次の略号を用いる：アミノ酸についてのＡＡ、核酸につ
いてのＮＡ、リボ核酸についてのＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡについてのｍＲ
ＮＡ、リボヌクレアーゼについてのＲＮアーゼ、デオキシリボ核酸についてのＤ
ＮＡ、相補的ＤＮＡについてのｃＤＮＡ、塩基対についてのｂｐ、ポリメラーゼ
連鎖反応についてのＰＣＲ、カンジダ・アルビカンスについてのＣ．ａ．又はＣ
．アルビカンス、大腸菌についてのＥ．ｃｏｌｉ及びサッカロミセス・セレビシ
エについてのＳ．セレビシエ。
いてのＮＡ、リボ核酸についてのＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡについてのｍＲ
ＮＡ、リボヌクレアーゼについてのＲＮアーゼ、デオキシリボ核酸についてのＤ
ＮＡ、相補的ＤＮＡについてのｃＤＮＡ、塩基対についてのｂｐ、ポリメラーゼ
連鎖反応についてのＰＣＲ、カンジダ・アルビカンスについてのＣ．ａ．又はＣ
．アルビカンス、大腸菌についてのＥ．ｃｏｌｉ及びサッカロミセス・セレビシ
エについてのＳ．セレビシエ。
【０００５】
以後用いる用語のスクリーニングは、アングロサクソン用語のスクリーニング
に対応する。用語ポリヌクレオチドは、以後、本発明のタンパク質をコードする
ポリヌクレオチド又はＤＮＡ配列を(及びＲＮＡをも)指し、同じ機能を有するタ
ンパク質をコードするそれらの同族体をも指す。
に対応する。用語ポリヌクレオチドは、以後、本発明のタンパク質をコードする
ポリヌクレオチド又はＤＮＡ配列を(及びＲＮＡをも)指し、同じ機能を有するタ
ンパク質をコードするそれらの同族体をも指す。
【０００６】
用語ポリペプチドは、以後、本発明のポリペプチド又は本発明のタンパク質又
は以下で定義する(それ故、同じ機能を有する)それらの機能的類似体若しくは同
族体を指す。
は以下で定義する(それ故、同じ機能を有する)それらの機能的類似体若しくは同
族体を指す。
【０００７】
用語真菌類は、以後、胞子を有する真核生物であって、吸着により栄養摂取が
起き、葉緑素を欠き、生殖を有性又は無性様式で行う当該真核生物を指す。
起き、葉緑素を欠き、生殖を有性又は無性様式で行う当該真核生物を指す。
【０００８】
真菌症は、病原性のカビにより引き起こされるヒト又は動物の感染症(浅在性
であっても深在性であってもよい)である。深在性真菌症の場合には、それらは
、非常に重く、予後は致死的であり得る。
であっても深在性であってもよい)である。深在性真菌症の場合には、それらは
、非常に重く、予後は致死的であり得る。
【０００９】
静真菌効果又は殺真菌効果を有する抗真菌性物質が、真菌症の治療において用
いられる。この治療は、治療剤のために利用可能な抗真菌性物質が少なく、それ
らは、しばしば、それらの使用を制限する副作用を有するので、困難なものであ
る。例えば、深在性真菌症のために選択される代表的治療剤のアンホテリシンＢ
は、腎毒性の副作用を有する。
いられる。この治療は、治療剤のために利用可能な抗真菌性物質が少なく、それ
らは、しばしば、それらの使用を制限する副作用を有するので、困難なものであ
る。例えば、深在性真菌症のために選択される代表的治療剤のアンホテリシンＢ
は、腎毒性の副作用を有する。
【００１０】
それ故、病原性のカビに対して有効であり且つ真菌感染症に対する治療剤にお
いて利用することのできる新規な物質に対する強い要求が存在している。これら
の物質は、免疫抑制の重い状態の場合の予防又は真菌感染症の医薬治療において
用いることができよう。加えて、これらの物質は、それらが真菌類の細胞の成長
を阻害し又は該細胞を殺すがヒトの細胞の必須機能を変化させない作用の特異的
様式を有するべきである。
いて利用することのできる新規な物質に対する強い要求が存在している。これら
の物質は、免疫抑制の重い状態の場合の予防又は真菌感染症の医薬治療において
用いることができよう。加えて、これらの物質は、それらが真菌類の細胞の成長
を阻害し又は該細胞を殺すがヒトの細胞の必須機能を変化させない作用の特異的
様式を有するべきである。
【００１１】
本発明の主題は、抗真菌性物質特にカンジダ属のカビによる感染症の治療を可
能にする物質の同定のための新規な標的を構成することのできる遺伝子を提供す
ることである。
能にする物質の同定のための新規な標的を構成することのできる遺伝子を提供す
ることである。
【００１２】
これらの遺伝子は、特に、これらの細胞の生存及び繁殖に欠くことのできない
必須遺伝子である。
必須遺伝子である。
【００１３】
種々の方法を用いて、ある遺伝子の産物がカビの生存に必須であるか又は感染
の確立若しくは維持に必須であるかどうかを測定することができる。遺伝子の必
須の性質の同定は、その機能に関する更なる情報を与え且つ、遺伝子産物が抗真
菌性物質のための有用な標的を構成する当該遺伝子の選択を可能にする。これら
の方法の例は、以下に、簡単にまとめてある。これらの方法は、下記の刊行物に
記載されている： − Guthrie C.及びFink G.R.編、Methods in Enzymology, Vol 194, 1991,
「Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology」、Academic Press Inc. − Pink A.H., A.E.Wheals and J.S.Harrison編、The yeast, Vol.6, 1995,
「Yeast Genetics」、Academic Press Inc. Ausubel F.等編、「Short Protocol
s in Molecular Biology」、1995, Wiley. − Brown A.J.P.及びTuite M.F.(編)「Yeast Gene Analysis」Methods in Mi
crobiology, Vol26, 1998, Academic Press Inc.
の確立若しくは維持に必須であるかどうかを測定することができる。遺伝子の必
須の性質の同定は、その機能に関する更なる情報を与え且つ、遺伝子産物が抗真
菌性物質のための有用な標的を構成する当該遺伝子の選択を可能にする。これら
の方法の例は、以下に、簡単にまとめてある。これらの方法は、下記の刊行物に
記載されている： − Guthrie C.及びFink G.R.編、Methods in Enzymology, Vol 194, 1991,
「Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology」、Academic Press Inc. − Pink A.H., A.E.Wheals and J.S.Harrison編、The yeast, Vol.6, 1995,
「Yeast Genetics」、Academic Press Inc. Ausubel F.等編、「Short Protocol
s in Molecular Biology」、1995, Wiley. − Brown A.J.P.及びTuite M.F.(編)「Yeast Gene Analysis」Methods in Mi
crobiology, Vol26, 1998, Academic Press Inc.
【００１４】
場合によっては、これらの記載された方法の一つ又は他のものを、求める結果
の関数として利用することとなろう。特に、この操作を、遺伝子の直接的不活性
化法により又は遺伝子の一時的不活性化法によって実施することができる。
の関数として利用することとなろう。特に、この操作を、遺伝子の直接的不活性
化法により又は遺伝子の一時的不活性化法によって実施することができる。
【００１５】
酵母サッカロミセス・セレビシエにおいて、最も一般的に利用される方法は、
酵母の染色体中の研究している遺伝子の不活性化である。野生型対立遺伝子を、
遺伝的マーカー(例えば、栄養要求性遺伝子又は耐性マーカー)の挿入によって不
活性化する。この挿入は、一般に、Guthrie C.及びFink G.R.編、Methods in En
zymology, Vol 194,1991,「Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology」
、Academic Press Inc.又はGultner等、Nucleic Acids Research,1996,24:2519-
2524に記載されたような公知の方法により調製される線状欠失用カセットを用い
る遺伝子変換法によって得られる。
酵母の染色体中の研究している遺伝子の不活性化である。野生型対立遺伝子を、
遺伝的マーカー(例えば、栄養要求性遺伝子又は耐性マーカー)の挿入によって不
活性化する。この挿入は、一般に、Guthrie C.及びFink G.R.編、Methods in En
zymology, Vol 194,1991,「Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology」
、Academic Press Inc.又はGultner等、Nucleic Acids Research,1996,24:2519-
2524に記載されたような公知の方法により調製される線状欠失用カセットを用い
る遺伝子変換法によって得られる。
【００１６】
この不活性化は、二倍体株において起き、次いで、減数分裂が、窒素欠乏培地
での増殖等の標準的方法により誘導されて、個々の子嚢に由来する４つの胞子を
顕微操作により単離する。必須遺伝子の不活性化は、選択マーカーを獲得した２
つの胞子(４つの内の)の生存力の喪失を生じる。これらの胞子の生存力は、野生
型遺伝子の１コピーを有する動原体又は複製可能なプラスミドの該株への導入に
より回復され得る。
での増殖等の標準的方法により誘導されて、個々の子嚢に由来する４つの胞子を
顕微操作により単離する。必須遺伝子の不活性化は、選択マーカーを獲得した２
つの胞子(４つの内の)の生存力の喪失を生じる。これらの胞子の生存力は、野生
型遺伝子の１コピーを有する動原体又は複製可能なプラスミドの該株への導入に
より回復され得る。
【００１７】
この操作は又、遺伝子の一時的な不活性化によって行うこともでき：制御可能
なプロモーターの利用も又、ある遺伝子が細胞の生存に必須であるか否かの決定
を可能にする。これを行うためには、その遺伝子のネイティブなプロモーターを
染色体上の又は染色体外プラスミド上の直接制御可能なプロモーターにより置き
換える。例えば、ＧＡＬプロモーター若しくはその誘導体又はｔｅｔＯプロモー
ターを利用することができる(Mumberg等、1994, Nucleic Acid Research,22:576
7-5768；Belli等、1998, Yeast,14:1127-1138)。従って、研究中の遺伝子の必須
の特性は、用いたプロモーターが、酵母Ｓ．セレビシエの一倍体株において又は
Ｃ．アルビカンス等の二倍体微生物中の第二の対立遺伝子の不活性化後に、抑制
されたときに認められる。
なプロモーターの利用も又、ある遺伝子が細胞の生存に必須であるか否かの決定
を可能にする。これを行うためには、その遺伝子のネイティブなプロモーターを
染色体上の又は染色体外プラスミド上の直接制御可能なプロモーターにより置き
換える。例えば、ＧＡＬプロモーター若しくはその誘導体又はｔｅｔＯプロモー
ターを利用することができる(Mumberg等、1994, Nucleic Acid Research,22:576
7-5768；Belli等、1998, Yeast,14:1127-1138)。従って、研究中の遺伝子の必須
の特性は、用いたプロモーターが、酵母Ｓ．セレビシエの一倍体株において又は
Ｃ．アルビカンス等の二倍体微生物中の第二の対立遺伝子の不活性化後に、抑制
されたときに認められる。
【００１８】
一の種において公知の必須遺伝子から出発して、他の真菌種における類似の機
能を有する相同遺伝子の同定を行うことができ：公知の方法を利用して、他の真
菌種において研究している遺伝子の相同遺伝子(いわゆる「オルソロガス」遺伝
子)又は研究している遺伝子と類似の機能を有する遺伝子を同定することができ
る。これらの方法は、下記の書籍に記載されている：
能を有する相同遺伝子の同定を行うことができ：公知の方法を利用して、他の真
菌種において研究している遺伝子の相同遺伝子(いわゆる「オルソロガス」遺伝
子)又は研究している遺伝子と類似の機能を有する遺伝子を同定することができ
る。これらの方法は、下記の書籍に記載されている：
【００１９】
Sambrook等、1989, Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Pre
ss。 − Ausubel F.等編、「Short Protocols in Molecular Biology」, 1995, Wi
ley。 − Guthrie C.及びFink G.R.編、Methods in Enzymology, Vol 194, 1991,「
Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology」, Academic Press Inc.
ss。 − Ausubel F.等編、「Short Protocols in Molecular Biology」, 1995, Wi
ley。 − Guthrie C.及びFink G.R.編、Methods in Enzymology, Vol 194, 1991,「
Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology」, Academic Press Inc.
【００２０】
この操作は、例えば、相同性によるスクリーニングにより、遺伝子相補性によ
り行うことができ又は病原性真菌類のゲノムＤＮＡライブラリー若しくは相補的
ＤＮＡ(ｃＤＮＡ)ライブラリーに由来する特異的プローブを用いるＰＣＲによる
増幅によっても行うことができる。
り行うことができ又は病原性真菌類のゲノムＤＮＡライブラリー若しくは相補的
ＤＮＡ(ｃＤＮＡ)ライブラリーに由来する特異的プローブを用いるＰＣＲによる
増幅によっても行うことができる。
【００２１】
ゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡライブラリーを公知の方法に従って調製することが
でき、得られたポリヌクレオチド断片を、Ｓ．セレビシエと同様に大腸菌中でも
有用である発現ベクター例えばｐＲＳ４２３又はその誘導体中に組み込む。この
バンクのスクリーニングは、それらの細菌コロニーについての標準的イン・シト
ゥーハイブリダイゼーション法によって行うことができる。これらのハイブリダ
イゼーション条件は、多かれ少なかれ研究している遺伝子との高い相同性を有す
る断片を同定するために、反応に望ましい緊縮度に適合される。
でき、得られたポリヌクレオチド断片を、Ｓ．セレビシエと同様に大腸菌中でも
有用である発現ベクター例えばｐＲＳ４２３又はその誘導体中に組み込む。この
バンクのスクリーニングは、それらの細菌コロニーについての標準的イン・シト
ゥーハイブリダイゼーション法によって行うことができる。これらのハイブリダ
イゼーション条件は、多かれ少なかれ研究している遺伝子との高い相同性を有す
る断片を同定するために、反応に望ましい緊縮度に適合される。
【００２２】
真菌類の他の種の遺伝子は、「遺伝子相補性」と呼ばれる公知の方法によって
も同定することができる。例えば、同定された必須遺伝子が制御可能なプロモー
ターの制御下に置かれたＳ．セレビシエ株を、研究している真菌類例えばＣ．ア
ルビカンスに対応するＤＮＡ又はｃＤＮＡバンクの代表的試料によってトランス
フォームすることができる。これらの酵母を、このプロモーターが抑制される条
件下で培養した場合には、最初の必須遺伝子と機能的に同等な研究している真菌
の配列を含む組換えベクターを有する酵母のみが生存できる。研究している真菌
の遺伝子の配列を、次いで、公知の方法によって、組換えベクターを単離して配
列決定することにより同定する。同様に、いわゆる「プラスミドシャッフル」法
は、最初の必須遺伝子の発現を失っており且つ他の真菌に由来する機能的に同等
な配列を含んでいる酵母の選択を可能にする。
も同定することができる。例えば、同定された必須遺伝子が制御可能なプロモー
ターの制御下に置かれたＳ．セレビシエ株を、研究している真菌類例えばＣ．ア
ルビカンスに対応するＤＮＡ又はｃＤＮＡバンクの代表的試料によってトランス
フォームすることができる。これらの酵母を、このプロモーターが抑制される条
件下で培養した場合には、最初の必須遺伝子と機能的に同等な研究している真菌
の配列を含む組換えベクターを有する酵母のみが生存できる。研究している真菌
の遺伝子の配列を、次いで、公知の方法によって、組換えベクターを単離して配
列決定することにより同定する。同様に、いわゆる「プラスミドシャッフル」法
は、最初の必須遺伝子の発現を失っており且つ他の真菌に由来する機能的に同等
な配列を含んでいる酵母の選択を可能にする。
【００２３】
この研究は、種々の種において行うことができ：必須遺伝子と機能的に同等の
遺伝子又は該必須遺伝子の配列における同族体を他の真菌類において、特にヒト
に影響を及ぼす種々の病原性真菌類において単離することができる。このために
は、特に、接合菌類、担子菌類、子嚢菌類及び不完全菌類綱を用いる。特に、こ
れらの真菌類は、次の亜綱に属する：カンジダ種、特に、カンジダ・アルビカン
ス、カンジダ・グラブラタ(glabrata)、カンジダ・トロピカリス(tropicalis)、
カンジダ・パラプシロシス(parapsilosis)及びカンジダ・クルゼイ(krusei)。こ
れらの真菌類は又、次の亜綱にも属している：アスペルギルス・フミガーツス(f
umigatus)、コクシジオイデス・イミチス(Coccidioides immitis)、クリプトコ
ッカス・ネオフォルマンス(neoformans)、ヒストプラスマ・キャプスラーツム(H
istoplasma capsulatum)、ブラストミセス・デルマチディス(dermatidis)、パラ
コクシジオイデス・ブラジリエンシス(Paracoccidioides brasiliensis)及びス
プロロトリクス・シェンキイ(Sprorothrix schenckii)。
遺伝子又は該必須遺伝子の配列における同族体を他の真菌類において、特にヒト
に影響を及ぼす種々の病原性真菌類において単離することができる。このために
は、特に、接合菌類、担子菌類、子嚢菌類及び不完全菌類綱を用いる。特に、こ
れらの真菌類は、次の亜綱に属する：カンジダ種、特に、カンジダ・アルビカン
ス、カンジダ・グラブラタ(glabrata)、カンジダ・トロピカリス(tropicalis)、
カンジダ・パラプシロシス(parapsilosis)及びカンジダ・クルゼイ(krusei)。こ
れらの真菌類は又、次の亜綱にも属している：アスペルギルス・フミガーツス(f
umigatus)、コクシジオイデス・イミチス(Coccidioides immitis)、クリプトコ
ッカス・ネオフォルマンス(neoformans)、ヒストプラスマ・キャプスラーツム(H
istoplasma capsulatum)、ブラストミセス・デルマチディス(dermatidis)、パラ
コクシジオイデス・ブラジリエンシス(Paracoccidioides brasiliensis)及びス
プロロトリクス・シェンキイ(Sprorothrix schenckii)。
【００２４】
それ故、本発明は、抗真菌性物質、例えば、特に、抗カンジダ・アルビカンス
物質の同定に関係する。
物質の同定に関係する。
【００２５】
それ故、本発明は、抗カビ剤として利用することのできるカビタンパク質のイ
ンヒビターに関係する。
ンヒビターに関係する。
【００２６】
こうして、ヒトに感染症を引き起こす微生物例えば病原性酵母カンジダ・アル
ビカンスが知られている。病気を治療する手段を見出す目的をもって、例えば、
本発明の細胞内タンパク質等の標的を選択することができ、本発明の遺伝子によ
りコードされる少なくとも一種の本発明のタンパク質をこれらの標的の一つ又は
幾つかであってよい。
ビカンスが知られている。病気を治療する手段を見出す目的をもって、例えば、
本発明の細胞内タンパク質等の標的を選択することができ、本発明の遺伝子によ
りコードされる少なくとも一種の本発明のタンパク質をこれらの標的の一つ又は
幾つかであってよい。
【００２７】
従って、本発明は、カンジダ・アルビカンスのタンパク質をコードするＤＮＡ
及びＲＮＡポリヌクレオチドを単離してそれらのヌクレオチド配列をもたらすこ
とを可能にする。
及びＲＮＡポリヌクレオチドを単離してそれらのヌクレオチド配列をもたらすこ
とを可能にする。
【００２８】
本発明のカンジダ・アルビカンスのタンパク質をコードする本発明の遺伝子は
、次のように呼ばれる：ＣａＤＲ４７２、ＣａＤＲ４８９、ＣａＤＲ５２７(２
つの異なる対立遺伝子形態即ち１ＣａＤＲ５２７及び２ＣａＤＲ５２７にて)、
ＣａＦＬ０２４、ＣａＮＬ２６０及びＣａＤＲ３６１。
、次のように呼ばれる：ＣａＤＲ４７２、ＣａＤＲ４８９、ＣａＤＲ５２７(２
つの異なる対立遺伝子形態即ち１ＣａＤＲ５２７及び２ＣａＤＲ５２７にて)、
ＣａＦＬ０２４、ＣａＮＬ２６０及びＣａＤＲ３６１。
【００２９】
これらの遺伝子(及びＣａＤＲ５２７の２つの対立遺伝子)のヌクレオチド配列
は、それぞれ、次のように呼ばれる： − ＣａＤＲ４７２のSEQ ID NO:１、 − ＣａＤＲ４８９のSEQ ID NO:３、 − ＣａＤＲ５２７の第一の対立遺伝子即ち１ＣａＤＲ５２７のSEQ ID NO:５、
− ＣａＤＲ５２７の第二の対立遺伝子即ち２ＣａＤＲ５２７のSEQ ID NO:７、
− ＣａＦＬ０２４のSEQ ID NO:９、 − ＣａＮＬ２６０のSEQ ID NO:１１ − 及びＣａＤＲ３６１のSEQ ID NO:１３。
は、それぞれ、次のように呼ばれる： − ＣａＤＲ４７２のSEQ ID NO:１、 − ＣａＤＲ４８９のSEQ ID NO:３、 − ＣａＤＲ５２７の第一の対立遺伝子即ち１ＣａＤＲ５２７のSEQ ID NO:５、
− ＣａＤＲ５２７の第二の対立遺伝子即ち２ＣａＤＲ５２７のSEQ ID NO:７、
− ＣａＦＬ０２４のSEQ ID NO:９、 − ＣａＮＬ２６０のSEQ ID NO:１１ − 及びＣａＤＲ３６１のSEQ ID NO:１３。
【００３０】
本発明の遺伝子によりコードされるタンパク質のポリペプチド配列は、それぞ
れ、次のように呼ばれる： − ＣａＤＲ４７２によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:２即ちＰＣａＤ
Ｒ４７２、 − ＣａＤＲ４８９によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:４即ちＰＣａＤ
Ｒ４８９、 − １ＣａＤＲ５２７によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:６即ち１ＰＣ
ａＤＲ５２７、 − ２ＣａＤＲ５２７によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:８即ち２ＰＣ
ａＤＲ５２７、 − ＣａＦＬ０２４によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:１０即ちＰＣａ
ＦＬ０２４、 − ＣａＮＬ２６０によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:１２即ちＰＣａ
ＮＬ２６０ − 及びＣａＤＲ３６１によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:１４即ちＰ
ＣａＤＲ３６１。
れ、次のように呼ばれる： − ＣａＤＲ４７２によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:２即ちＰＣａＤ
Ｒ４７２、 − ＣａＤＲ４８９によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:４即ちＰＣａＤ
Ｒ４８９、 − １ＣａＤＲ５２７によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:６即ち１ＰＣ
ａＤＲ５２７、 − ２ＣａＤＲ５２７によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:８即ち２ＰＣ
ａＤＲ５２７、 − ＣａＦＬ０２４によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:１０即ちＰＣａ
ＦＬ０２４、 − ＣａＮＬ２６０によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:１２即ちＰＣａ
ＮＬ２６０ − 及びＣａＤＲ３６１によりコードされるタンパク質のSEQ ID NO:１４即ちＰ
ＣａＤＲ３６１。
【００３１】
それ故、本発明の主題は、各々下記の群から選択するヌクレオチド配列を含む
単離されたポリヌクレオチドである： ａ）上で規定した及び以下で規定するSEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID N
O:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４から
選択する配列と同じ機能を有し且つ該配列と相同なアミノ酸配列を有するポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも５０％の又は少なくとも６０
％の、好ましくは少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド、 ｂ）ポリヌクレオチドａ）の相補的ポリヌクレオチド、 ｃ）ａ）及びｂ）に規定した少なくとも１５の連続する塩基を含むポリヌクレ
オチド。
単離されたポリヌクレオチドである： ａ）上で規定した及び以下で規定するSEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID N
O:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４から
選択する配列と同じ機能を有し且つ該配列と相同なアミノ酸配列を有するポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも５０％の又は少なくとも６０
％の、好ましくは少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド、 ｂ）ポリヌクレオチドａ）の相補的ポリヌクレオチド、 ｃ）ａ）及びｂ）に規定した少なくとも１５の連続する塩基を含むポリヌクレ
オチド。
【００３２】
それ故、本発明の主題は、ＤＮＡである上で規定したポリヌクレオチドである
。
。
【００３３】
それ故、本発明の主題は、ＲＮＡである上で規定したポリヌクレオチドである
。
。
【００３４】
本発明の一層正確な主題は、各々が、上で規定し及び以下で規定するSEQ ID N
O:１、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７、SEQ ID NO:９、SEQ ID NO:
１１及びSEQ ID NO:１３から選択するヌクレオチド配列を含む上で規定したポリ
ヌクレオチドである。
O:１、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７、SEQ ID NO:９、SEQ ID NO:
１１及びSEQ ID NO:１３から選択するヌクレオチド配列を含む上で規定したポリ
ヌクレオチドである。
【００３５】
それ故、本発明は、それぞれ、カンジダ・アルビカンスのタンパク質ＰＣａＤ
Ｒ４２７、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣ
ａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１をコードするＤＮＡ配列の
単離を可能にする。
Ｒ４２７、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣ
ａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１をコードするＤＮＡ配列の
単離を可能にする。
【００３６】
本発明は又、本発明の遺伝子の核酸配列及びこれらの遺伝子にコードされるタ
ンパク質ＰＣａＥＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａ
ＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１のアミノ
酸配列をもたらすことをも可能にする。
ンパク質ＰＣａＥＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａ
ＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１のアミノ
酸配列をもたらすことをも可能にする。
【００３７】
それ故、本発明の主題は、それぞれ、カンジダ・アルビカンスのタンパク質(
ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２
７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１と同じ機能を有す
るもの)をコードする遺伝子であり、各々、上で規定し及び以下で規定するSEQ I
D NO:１、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７、SEQ ID NO:９、SEQ ID
NO:１１及びSEQ ID NO:１３から選択するヌクレオチド配列を含むことを特徴と
する上記のポリヌクレオチドにより規定されるＤＮＡ配列である。
ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２
７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１と同じ機能を有す
るもの)をコードする遺伝子であり、各々、上で規定し及び以下で規定するSEQ I
D NO:１、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７、SEQ ID NO:９、SEQ ID
NO:１１及びSEQ ID NO:１３から選択するヌクレオチド配列を含むことを特徴と
する上記のポリヌクレオチドにより規定されるＤＮＡ配列である。
【００３８】
それ故、かかる本発明のSEQ ID NO:１は、７４７ヌクレオチドを含む。
【００３９】
それ故、かかる本発明のSEQ ID NO:３は、７１１ヌクレオチドを含む。
【００４０】
それ故、かかる本発明のSEQ ID NO:５は、１３８３ヌクレオチドを含む。
【００４１】
それ故、かかる本発明のSEQ ID NO:７は、１３８３ヌクレオチドを含む。
【００４２】
それ故、かかる本発明のSEQ ID NO:９は、２２６２ヌクレオチドを含む。
【００４３】
それ故、かかる本発明のSEQ ID NO:１１は、４４７ヌクレオチドを含む。
【００４４】
それ故、かかる本発明のSEQ ID NO:１３は、９６６ヌクレオチドを含む。
【００４５】
本発明の主題は又、各々、SEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:６、SEQ
ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４から選択するア
ミノ酸配列をコードする上で規定した遺伝子のＤＮＡ配列でもある。
ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４から選択するア
ミノ酸配列をコードする上で規定した遺伝子のＤＮＡ配列でもある。
【００４６】
それ故、タンパク質ＰＣａＤＲ４７２のSEQ ID NO:２は、２４８ＡＡを含む。
【００４７】
それ故、タンパク質ＰＣａＤＲ４８９のSEQ ID NO:４は、２３６ＡＡを含む。
【００４８】
それ故、タンパク質１ＰＣａＤＲ５２７のSEQ ID NO:６は、４６０ＡＡを含む
。
。
【００４９】
それ故、タンパク質２ＰＣａＤＲ５２７のSEQ ID NO:８は、４６０ＡＡを含む
。
。
【００５０】
それ故、タンパク質ＰＣａＦＬ０２４のSEQ ID NO:１０は、７５３ＡＡを含む
。
。
【００５１】
それ故、タンパク質ＰＣａＮＬ２６０のSEQ ID NO:１２は、１４８ＡＡを含む
。
。
【００５２】
それ故、タンパク質ＰＣａＤＲ３６１のSEQ ID NO:１４は、３２１ＡＡを含む
。
。
【００５３】
本発明の特別の主題は、上で規定したタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤ
Ｒ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣ
ａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１をコードするＤＮＡ配列並びにこれらとハイブ
リダイズし及び／又はこれらの配列若しくはこれらの断片との有意の相同性を与
え及び同じ機能を有するタンパク質をコードするＤＮＡ配列である。
Ｒ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣ
ａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１をコードするＤＮＡ配列並びにこれらとハイブ
リダイズし及び／又はこれらの配列若しくはこれらの断片との有意の相同性を与
え及び同じ機能を有するタンパク質をコードするＤＮＡ配列である。
【００５４】
本発明の主題は又、上で規定したタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４
８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮ
Ｌ２６０、ＰＣａＤＲ３６１と同じ活性を有するタンパク質をコードする少なく
とも一つのヌクレオチドの抑制、挿入及び／又は置換により導入された改変を含
む上で規定したＤＮＡ配列でもある。
８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮ
Ｌ２６０、ＰＣａＤＲ３６１と同じ活性を有するタンパク質をコードする少なく
とも一つのヌクレオチドの抑制、挿入及び／又は置換により導入された改変を含
む上で規定したＤＮＡ配列でもある。
【００５５】
特に、本発明の主題は、上で規定したＤＮＡ配列並びに該ＤＮＡ配列と少なく
とも５０％の又は少なくとも６０％の、好ましくは少なくとも７０％のヌクレオ
チド配列相同性を有するＤＮＡ配列である。
とも５０％の又は少なくとも６０％の、好ましくは少なくとも７０％のヌクレオ
チド配列相同性を有するＤＮＡ配列である。
【００５６】
それ故、本発明の主題は又、上で規定したＤＮＡ配列並びに類似の機能のタン
パク質をコードするＤＮＡ配列でもある(それぞれのＡＡ配列は、該ＤＮＡ配列
によりコードされるＡＡ配列と少なくとも４０％の、特には４５％の、又は少な
くとも５０％の、むしろ少なくとも６０％の、好ましくは少なくとも７０％の相
同性を有する)。
パク質をコードするＤＮＡ配列でもある(それぞれのＡＡ配列は、該ＤＮＡ配列
によりコードされるＡＡ配列と少なくとも４０％の、特には４５％の、又は少な
くとも５０％の、むしろ少なくとも６０％の、好ましくは少なくとも７０％の相
同性を有する)。
【００５７】
ハイブリダイズする配列は、上記のＤＮＡ配列の一つと高、中又は低緊縮の標
準的条件下でハイブリダイズし及び同じ機能を有するポリペプチドをコードする
ＤＮＡ配列を含む。これらの緊縮条件は、当業者に公知の条件下で実施されるも
の、例えば、Sambrook等、Molecular cloning, Cold Spring Harbor Laboratory
Press, 1989に記載されたものである。かかる緊縮条件は、例えば、５×ＳＳＰ
Ｅ；１０×デンハート；１００μｇ／ｍｌｓｓＤＮＡ；１％ＳＤＳ溶液中での、
６５℃で１８時間のハイブリダイゼーションとそれに続く２×ＳＳＣによる５分
ずつ３回の洗浄とその後の１×ＳＳＣ；０．１％ＳＤＳ中での６５℃で１５分ず
つ３回の洗浄である。高緊縮条件は、例えば、５×ＳＳＰＥ；１０×デンハート
；１００μｇ／ｍｌｓｓＤＮＡ；１％ＳＤＳ溶液中での６５℃で１８時間のハイ
ブリダイゼーション及び、それに続く２×ＳＳＣ；０．０５％ＳＤＳ溶液による
６５℃で２０分ずつ２回の洗浄とその後の０．１×ＳＳＣ；０．１％ＳＤＳ溶液
中での６５℃で４５分間の最終洗浄を含む。中位の緊縮条件は、例えば、０．２
×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ溶液中での６５℃で２０分間の最終洗浄を含む。
準的条件下でハイブリダイズし及び同じ機能を有するポリペプチドをコードする
ＤＮＡ配列を含む。これらの緊縮条件は、当業者に公知の条件下で実施されるも
の、例えば、Sambrook等、Molecular cloning, Cold Spring Harbor Laboratory
Press, 1989に記載されたものである。かかる緊縮条件は、例えば、５×ＳＳＰ
Ｅ；１０×デンハート；１００μｇ／ｍｌｓｓＤＮＡ；１％ＳＤＳ溶液中での、
６５℃で１８時間のハイブリダイゼーションとそれに続く２×ＳＳＣによる５分
ずつ３回の洗浄とその後の１×ＳＳＣ；０．１％ＳＤＳ中での６５℃で１５分ず
つ３回の洗浄である。高緊縮条件は、例えば、５×ＳＳＰＥ；１０×デンハート
；１００μｇ／ｍｌｓｓＤＮＡ；１％ＳＤＳ溶液中での６５℃で１８時間のハイ
ブリダイゼーション及び、それに続く２×ＳＳＣ；０．０５％ＳＤＳ溶液による
６５℃で２０分ずつ２回の洗浄とその後の０．１×ＳＳＣ；０．１％ＳＤＳ溶液
中での６５℃で４５分間の最終洗浄を含む。中位の緊縮条件は、例えば、０．２
×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ溶液中での６５℃で２０分間の最終洗浄を含む。
【００５８】
有意の相同性を有する配列は、上記のＤＮＡ配列及び同じ機能を有するタンパ
ク質をコードするＤＮＡ配列の一つとの中位の又はかなりのヌクレオチド配列同
一性を有する配列を含む。
ク質をコードするＤＮＡ配列の一つとの中位の又はかなりのヌクレオチド配列同
一性を有する配列を含む。
【００５９】
それ故、類似のＤＮＡ配列は、カンジダ・アルビカンス以外の新菌類特にＳ．
ｃ．に属し得るＤＮＡ配列又は上で規定したカンジダ・アルビカンスの遺伝子の
ＤＮＡ配列と類似し若しくは同一のＤＮＡ配列を意味する。これらの類似のＤＮ
Ａ配列は、上で規定した遺伝子のＤＮＡ配列と必ずしも同一ではない。ヌクレオ
チドレベルでの配列相同性は、中位又はかなりのものであってよい。従って、本
発明は、特に、本発明の遺伝子の配列と少なくとも５０％の好ましくは少なくと
も６０％の尚一層好ましくは少なくとも７０％のヌクレオチド配列相同性を有す
るＤＮＡ配列に関係する。
ｃ．に属し得るＤＮＡ配列又は上で規定したカンジダ・アルビカンスの遺伝子の
ＤＮＡ配列と類似し若しくは同一のＤＮＡ配列を意味する。これらの類似のＤＮ
Ａ配列は、上で規定した遺伝子のＤＮＡ配列と必ずしも同一ではない。ヌクレオ
チドレベルでの配列相同性は、中位又はかなりのものであってよい。従って、本
発明は、特に、本発明の遺伝子の配列と少なくとも５０％の好ましくは少なくと
も６０％の尚一層好ましくは少なくとも７０％のヌクレオチド配列相同性を有す
るＤＮＡ配列に関係する。
【００６０】
その上、これらの類似ＤＮＡ配列は、アミノ酸配列レベルで、上で規定した遺
伝子によりコードされるタンパク質と同じタンパク質を必ずしもコードしない。
従って、本発明は、特に、本発明の遺伝子によりコードされるタンパク質と少な
くとも４０％の、特には４５％の、好ましくは少なくとも５０％の、一層好まし
くは少なくとも６０％の尚一層好ましくは少なくとも７０％のアミノ酸配列相同
性を有するいわゆる相同タンパク質をコードするＤＮＡ配列に関係する。
伝子によりコードされるタンパク質と同じタンパク質を必ずしもコードしない。
従って、本発明は、特に、本発明の遺伝子によりコードされるタンパク質と少な
くとも４０％の、特には４５％の、好ましくは少なくとも５０％の、一層好まし
くは少なくとも６０％の尚一層好ましくは少なくとも７０％のアミノ酸配列相同
性を有するいわゆる相同タンパク質をコードするＤＮＡ配列に関係する。
【００６１】
本発明の各遺伝子は、それぞれ以下の配列表に表示したSEQ ID NO:１、SEQ ID
NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７、SEQ ID NO:９、SEQ ID NO:１１及びSEQ
ID NO:１３に示したように一本鎖ＤＮＡ配列として表されるが、本発明がこの胃
本鎖DNA配列の相補的ＤＮＡ配列を含み且つこれらの２つの互いに相補的なＤＮ
Ａ配列により構成されるいわゆる二本鎖ＤＮＡ配列をも含むということは理解さ
れる。
NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７、SEQ ID NO:９、SEQ ID NO:１１及びSEQ
ID NO:１３に示したように一本鎖ＤＮＡ配列として表されるが、本発明がこの胃
本鎖DNA配列の相補的ＤＮＡ配列を含み且つこれらの２つの互いに相補的なＤＮ
Ａ配列により構成されるいわゆる二本鎖ＤＮＡ配列をも含むということは理解さ
れる。
【００６２】
上で規定したＤＮＡ配列は、上で規定したアミノ酸配列SEQ ID NO:２、SEQ ID
NO:４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSE
Q ID NO:１４にそれぞれ対応するアミノ酸をコードするコドンの組合せの例であ
るが、本発明が、これらの同じアミノ酸配列をコードするコドンの他の任意な自
由な組合せを含むということも理解される。
NO:４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSE
Q ID NO:１４にそれぞれ対応するアミノ酸をコードするコドンの組合せの例であ
るが、本発明が、これらの同じアミノ酸配列をコードするコドンの他の任意な自
由な組合せを含むということも理解される。
【００６３】
ポリヌクレオチド特に上で規定したＤＮＡ配列、前記の改変されたＤＮＡ配列
(又は、上で規定したような相同なＤＮＡ配列)の製造のためには、当業者に公知
の技術特にSambrook,J. Fritsh,E.F.§Maniatis,T.(1989)の「Molecular clonin
g: a laboratory manual」、Laboratory, Cold Spring Harbor NY.に記載された
ものを利用することができる。
(又は、上で規定したような相同なＤＮＡ配列)の製造のためには、当業者に公知
の技術特にSambrook,J. Fritsh,E.F.§Maniatis,T.(1989)の「Molecular clonin
g: a laboratory manual」、Laboratory, Cold Spring Harbor NY.に記載された
ものを利用することができる。
【００６４】
上で規定した相同ＤＮＡ配列は、特に、当業者に公知の方法例えば縮重ヌクレ
オチドプライマーを利用してこのＤＮＡを対応する真菌類のゲノム又はｃＤＮＡ
ライブラリーから増幅するＰＣＲ技術によって単離することができる。このｃＤ
ＮＡは又、本発明の範囲内で研究している、異なる種の真菌類例えばカンジダ・
アルビカンスから単離したｍＲＮＡから調製することもでき、以下の種からも全
く同様に調製することができる：カンジダ・ステラトイデア(Stellatoidea)、カ
ンジダ・トロピカリス、カンジダ・パラプシロシス、カンジダ・クルゼイ、カン
ジダ・シュードトロピカリス、カンジダ・キラーモンディー(quillermondii)、
カンジダ・グラブラタ、カンジダ・ルイジアニ(luisianiae)又はカンジダ・ルゴ
サ(rugosa)又はサッカロミセス・セレビシエ等の真菌類、又はアスペルギルス若
しくはクリプトコッカス等の真菌類特に例えばアスペルギルス・フミガーツス、
コクシジオイデス・イミチス、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、ヒストプ
ラスマ・キャプスラーツム、ブラストミセス・デルマティティディス、パラコク
シジオイデス・ブラジリエンス及びスポロトリクス・シェンキイ又は藻菌類若し
くは真菌類綱の真菌類特に担子菌類、子嚢菌類、半子嚢菌類(酵母)及び不整子嚢
菌目の亜綱、ギムナスカレス(gymnascales)(皮膚及び毛髪のカビ)又はヒフォミ
コーシス綱、特に、分生子菌亜綱及び葉状体胞子菌目｛その内の、次の種：ケカ
ビ、クモノスカビ、コクシジオイデス、パラコクシジオイデス(ブラストミセス
、ブラジリエンシス)、エンドミセス(ブラストミセス)、アスペルギルス、メニ
シリウム(スコプラリオプシス)、トリコフィトン(クテノミセス)、エピデルモフ
トン、ミクロスポロン、ピエドライア、ホルモデンドロン、フィアロフォラ、ス
ポロトリコン、クリプトコッカス、カンジダ、ゲオトリクム、トリコスポロン又
はトロプスロシスも｝。
オチドプライマーを利用してこのＤＮＡを対応する真菌類のゲノム又はｃＤＮＡ
ライブラリーから増幅するＰＣＲ技術によって単離することができる。このｃＤ
ＮＡは又、本発明の範囲内で研究している、異なる種の真菌類例えばカンジダ・
アルビカンスから単離したｍＲＮＡから調製することもでき、以下の種からも全
く同様に調製することができる：カンジダ・ステラトイデア(Stellatoidea)、カ
ンジダ・トロピカリス、カンジダ・パラプシロシス、カンジダ・クルゼイ、カン
ジダ・シュードトロピカリス、カンジダ・キラーモンディー(quillermondii)、
カンジダ・グラブラタ、カンジダ・ルイジアニ(luisianiae)又はカンジダ・ルゴ
サ(rugosa)又はサッカロミセス・セレビシエ等の真菌類、又はアスペルギルス若
しくはクリプトコッカス等の真菌類特に例えばアスペルギルス・フミガーツス、
コクシジオイデス・イミチス、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、ヒストプ
ラスマ・キャプスラーツム、ブラストミセス・デルマティティディス、パラコク
シジオイデス・ブラジリエンス及びスポロトリクス・シェンキイ又は藻菌類若し
くは真菌類綱の真菌類特に担子菌類、子嚢菌類、半子嚢菌類(酵母)及び不整子嚢
菌目の亜綱、ギムナスカレス(gymnascales)(皮膚及び毛髪のカビ)又はヒフォミ
コーシス綱、特に、分生子菌亜綱及び葉状体胞子菌目｛その内の、次の種：ケカ
ビ、クモノスカビ、コクシジオイデス、パラコクシジオイデス(ブラストミセス
、ブラジリエンシス)、エンドミセス(ブラストミセス)、アスペルギルス、メニ
シリウム(スコプラリオプシス)、トリコフィトン(クテノミセス)、エピデルモフ
トン、ミクロスポロン、ピエドライア、ホルモデンドロン、フィアロフォラ、ス
ポロトリコン、クリプトコッカス、カンジダ、ゲオトリクム、トリコスポロン又
はトロプスロシスも｝。
【００６５】
従って、本発明のポリヌクレオチドは、通常のクローニング及びスクリーニン
グ方法例えば細胞から抽出された染色体ＤＮＡの断片からの(又は、遺伝子バン
ク由来でもよい)クローニング及びシーケンシングの方法を利用することにより
得ることができる。例えば、本発明のポリヌクレオチドを得るために、染色体Ｄ
ＮＡ断片のバンクを利用することができる。放射性元素で標識したオリゴヌクレ
オチドに対応するプローブ(好ましくは、１７ヌクレオチドより構成され又は２
０ヌクレオチド以上より構成されたもの及び部分配列に由来するもの)を調製す
ることができる。このプローブのＤＮＡと同一のＤＮＡを含むクローンは、緊縮
条件下でこの方法において同定され得る。この方法において同定された個々のク
ローンの配列決定(元の配列に由来する配列決定用プライマーを用いる)により、
完全な遺伝子配列を決定するために、両方向への配列の拡張が可能となる。通常
の及び効率的な様式で、かかる配列決定は、プラスミドから調製した変性された
二本鎖ＤＮＡの利用により実施され得る。かかる技術は、上で示したManiatis,T
. Fritsch,E.F.及びSambrookにより記載されている(Laboratory Manual, Cold S
pring Harbor, New York(1989)(特に、ハイブリダイゼーション及び変性した二
本鎖ＤＮＡからの配列決定によるスクリーニングについての章中の１．９０及び
１３．７０)。
グ方法例えば細胞から抽出された染色体ＤＮＡの断片からの(又は、遺伝子バン
ク由来でもよい)クローニング及びシーケンシングの方法を利用することにより
得ることができる。例えば、本発明のポリヌクレオチドを得るために、染色体Ｄ
ＮＡ断片のバンクを利用することができる。放射性元素で標識したオリゴヌクレ
オチドに対応するプローブ(好ましくは、１７ヌクレオチドより構成され又は２
０ヌクレオチド以上より構成されたもの及び部分配列に由来するもの)を調製す
ることができる。このプローブのＤＮＡと同一のＤＮＡを含むクローンは、緊縮
条件下でこの方法において同定され得る。この方法において同定された個々のク
ローンの配列決定(元の配列に由来する配列決定用プライマーを用いる)により、
完全な遺伝子配列を決定するために、両方向への配列の拡張が可能となる。通常
の及び効率的な様式で、かかる配列決定は、プラスミドから調製した変性された
二本鎖ＤＮＡの利用により実施され得る。かかる技術は、上で示したManiatis,T
. Fritsch,E.F.及びSambrookにより記載されている(Laboratory Manual, Cold S
pring Harbor, New York(1989)(特に、ハイブリダイゼーション及び変性した二
本鎖ＤＮＡからの配列決定によるスクリーニングについての章中の１．９０及び
１３．７０)。
【００６６】
本発明の範囲内で、特に、以下に実験部に記載の実施例に示すように、カンジ
ダ・アルビカンスの染色体ＤＮＡ断片のバンクを利用することができる。
ダ・アルビカンスの染色体ＤＮＡ断片のバンクを利用することができる。
【００６７】
本発明を実施した操作条件の詳細な記載を以下に与える。
【００６８】
この発明の全く特別の主題は、各々、上で規定したＤＮＡ配列によりコードさ
れるSEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１
０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４から選択するアミノ酸配列を有するポリ
ペプチド及びこれらのポリペプチドの類似体である。
れるSEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１
０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４から選択するアミノ酸配列を有するポリ
ペプチド及びこれらのポリペプチドの類似体である。
【００６９】
ポリペプチド類似体とは、アミノ酸配列が少なくとも一つのアミノ酸の置換、
抑制又は付加により改変されているが同じ生物学的機能を保持しているポリペプ
チドと理解される。かかるポリペプチド類似体は、自然に生成し得るし又は転写
後改変により又は当業者に公知の技術を用いて上に示したような本発明のＤＮＡ
配列を改変することによっても生成することができ、これらの技術の内で、当業
者に公知の指定された突然変異誘発(Kramer,W.等、Nucl.Acids Res.,12,9441(19
84)；Kramer,W.及びFritz,H.J.,Methods in Enzymology,154,350(1987)；Zoller
,M.J.及びSmith,M. Methods in Enzymology,100,468(1983))を特に挙げることが
できる。
抑制又は付加により改変されているが同じ生物学的機能を保持しているポリペプ
チドと理解される。かかるポリペプチド類似体は、自然に生成し得るし又は転写
後改変により又は当業者に公知の技術を用いて上に示したような本発明のＤＮＡ
配列を改変することによっても生成することができ、これらの技術の内で、当業
者に公知の指定された突然変異誘発(Kramer,W.等、Nucl.Acids Res.,12,9441(19
84)；Kramer,W.及びFritz,H.J.,Methods in Enzymology,154,350(1987)；Zoller
,M.J.及びSmith,M. Methods in Enzymology,100,468(1983))を特に挙げることが
できる。
【００７０】
改変されたＤＮＡの合成は、上に示したように実施することができ、特に、周
知の化学合成技術例えばホスホトリエステル法[Letsinger,R.L及びOgilvie,K.K.
,K.Am.CHEM.Soc.,91,3350(1969)；Merrifield,R.B.,Sciences,150,178(1968)]又
はホスホアミダイト法[Beaucage,S.L及びCaruthers,M.H.,Tetrahedron Lett.,22
,1859(1981)；McBRIDE,L.J.及びCaruthers,M.H. Tetrahedron Lett.,24 245(198
3)]又はこれらの方法の組合せを利用することにより実施することができる。
知の化学合成技術例えばホスホトリエステル法[Letsinger,R.L及びOgilvie,K.K.
,K.Am.CHEM.Soc.,91,3350(1969)；Merrifield,R.B.,Sciences,150,178(1968)]又
はホスホアミダイト法[Beaucage,S.L及びCaruthers,M.H.,Tetrahedron Lett.,22
,1859(1981)；McBRIDE,L.J.及びCaruthers,M.H. Tetrahedron Lett.,24 245(198
3)]又はこれらの方法の組合せを利用することにより実施することができる。
【００７１】
それ故、本発明のポリペプチドは、当業者に公知の技術を用いて、特に化学合
成により又は以下に示すように原核若しくは真核宿主細胞中での発現による組換
えＤＮＡ技術によっても製造することができる。
成により又は以下に示すように原核若しくは真核宿主細胞中での発現による組換
えＤＮＡ技術によっても製造することができる。
【００７２】
本発明の特別の主題は、上で規定したアミノ酸配列SEQ ID NO:２、SEQ ID NO:
４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID
NO:１４をそれぞれ有する組換えタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８
９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ
２６０、ＰＣａＤＲ３６１の製造方法であって、該製造方法は、これらのタンパ
ク質の各々の製造のために、このタンパク質をコードする上で規定したＤＮＡ配
列の適当な宿主における発現と、その後の、該組換えタンパク質の単離精製を含
んでいる。
４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID
NO:１４をそれぞれ有する組換えタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８
９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ
２６０、ＰＣａＤＲ３６１の製造方法であって、該製造方法は、これらのタンパ
ク質の各々の製造のために、このタンパク質をコードする上で規定したＤＮＡ配
列の適当な宿主における発現と、その後の、該組換えタンパク質の単離精製を含
んでいる。
【００７３】
本発明のポリペプチドの製造のために、当業者に公知の、遺伝子工学を利用す
る組換えＤＮＡ技術及び細胞培養法を特に利用することができる。次いで、以下
の段階を実施することができる：先ず、適当な遺伝子を調製し、次いで、この遺
伝子をベクターに組み込み、この遺伝子のキャリアーベクターを適当な宿主細胞
にトランスファーし、その遺伝子の発現によりそのポリペプチドを生成し、その
ポリペプチドを単離し、こうして生成されたポリペプチドを次いで精製すること
ができる。
る組換えＤＮＡ技術及び細胞培養法を特に利用することができる。次いで、以下
の段階を実施することができる：先ず、適当な遺伝子を調製し、次いで、この遺
伝子をベクターに組み込み、この遺伝子のキャリアーベクターを適当な宿主細胞
にトランスファーし、その遺伝子の発現によりそのポリペプチドを生成し、その
ポリペプチドを単離し、こうして生成されたポリペプチドを次いで精製すること
ができる。
【００７４】
本発明のポリヌクレオチドの発現により得られる本発明のポリペプチドは、ト
ランスフォームされた細胞培養物から当業者に周知の方法例えば硫酸アンモニウ
ム又はエタノールによる沈殿、酸性条件下での抽出、アニオン若しくはカチオン
交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルア
パタイトクロマトグラフィー及び高性能液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)によ
り精製することができる。当業者に周知の技術を用いて、タンパク質が単離精製
中に変性した場合にそのタンパク質を再生することができる。
ランスフォームされた細胞培養物から当業者に周知の方法例えば硫酸アンモニウ
ム又はエタノールによる沈殿、酸性条件下での抽出、アニオン若しくはカチオン
交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルア
パタイトクロマトグラフィー及び高性能液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)によ
り精製することができる。当業者に周知の技術を用いて、タンパク質が単離精製
中に変性した場合にそのタンパク質を再生することができる。
【００７５】
本発明によるＤＮＡ配列特にSEQ ID NO:１、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:５、SE
Q ID NO:７、SEQ ID NO:９、SEQ ID NO:１１及びSEQ ID NO:１３は、当業者に公
知の方法により、特に、化学合成により又は合成オリゴヌクレオチドプローブを
用いて公知のハイブリダイゼーション技術並びに単離された断片からのＤＮＡの
増幅により又は逆転写酵素によるメッセンジャーＲＮＡ(ｍＲＮＡ)からのＤＮＡ
の増幅により遺伝子バンクをスクリーニングすることによって製造することがで
きる。
Q ID NO:７、SEQ ID NO:９、SEQ ID NO:１１及びSEQ ID NO:１３は、当業者に公
知の方法により、特に、化学合成により又は合成オリゴヌクレオチドプローブを
用いて公知のハイブリダイゼーション技術並びに単離された断片からのＤＮＡの
増幅により又は逆転写酵素によるメッセンジャーＲＮＡ(ｍＲＮＡ)からのＤＮＡ
の増幅により遺伝子バンクをスクリーニングすることによって製造することがで
きる。
【００７６】
先ず全ＲＮＡの抽出によってｍＲＮＡを単離し、次いで、これらのｍＲＮＡか
ら逆転写酵素によってｃＤＮＡを合成することを含む技術の利点は、特に、ｍＲ
ＮＡは、たとえイントロンがゲノムＤＮＡ中に存在しても、これらの非コード配
列を含まないという事実にある。
ら逆転写酵素によってｃＤＮＡを合成することを含む技術の利点は、特に、ｍＲ
ＮＡは、たとえイントロンがゲノムＤＮＡ中に存在しても、これらの非コード配
列を含まないという事実にある。
【００７７】
従って、当業者に公知の通常のクローニング技術、特に、Sambrook,J. Fritsh
,E.F.§Maniatis,T.(1989)により書物「Molecular cloning: a laboratory manu
al, Laboratory, Cold Spring Harbor NY」に記載されたものを実施することが
できる。
,E.F.§Maniatis,T.(1989)により書物「Molecular cloning: a laboratory manu
al, Laboratory, Cold Spring Harbor NY」に記載されたものを実施することが
できる。
【００７８】
これらの技術において、クローニングを、断片を、適当な市販のキットにより
提供されるプラスミドに挿入してから、そうして得られたプラスミドにより細菌
株をトランスフォームすることにより実施することができる。特に、ＸＬ１Ｂｌ
ｕｅ又はＤＨ５ａｌｐｈａ大腸菌株を用いることができる。次いで、これらの株
を、上記の当業者に公知の標準的技術(Sambrook, Friths及びManiatis)によりプ
ラスミドＤＮＡを抽出するために培養することができる。次いで、プラスミドＤ
ＮＡ中に含まれる増幅された断片のＤＮＡ配列決定を行うことができる。
提供されるプラスミドに挿入してから、そうして得られたプラスミドにより細菌
株をトランスフォームすることにより実施することができる。特に、ＸＬ１Ｂｌ
ｕｅ又はＤＨ５ａｌｐｈａ大腸菌株を用いることができる。次いで、これらの株
を、上記の当業者に公知の標準的技術(Sambrook, Friths及びManiatis)によりプ
ラスミドＤＮＡを抽出するために培養することができる。次いで、プラスミドＤ
ＮＡ中に含まれる増幅された断片のＤＮＡ配列決定を行うことができる。
【００７９】
本発明のポリペプチドは、本発明のポリヌクレオチド特に適当なプロモーター
が先行する本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を含む宿主細胞中での
発現によって得ることができる。この宿主細胞は、原核細胞例えば大腸菌又は真
核細胞例えば酵母例えばサッカロミセスが属する子嚢菌類若しくは例えばＣｏｓ
細胞等の哺乳動物細胞であってよい。
が先行する本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を含む宿主細胞中での
発現によって得ることができる。この宿主細胞は、原核細胞例えば大腸菌又は真
核細胞例えば酵母例えばサッカロミセスが属する子嚢菌類若しくは例えばＣｏｓ
細胞等の哺乳動物細胞であってよい。
【００８０】
本発明の特別の主題は、各々、上で規定した本発明のＤＮＡ配列の一つを含む
発現ベクターである。
発現ベクターである。
【００８１】
それ故、これらの発現ベクターの各々において、かかるＤＮＡ配列は、特に、
カンジダ・アルビカンスのタンパク質をコードする本発明の遺伝子の及びSEQ ID
NO:１、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７、SEQ ID NO:９、SEQ ID N
O:１１及びSEQ ID NO:１３から選択するヌクレオチド配列を含むＤＮＡ配列であ
る。
カンジダ・アルビカンスのタンパク質をコードする本発明の遺伝子の及びSEQ ID
NO:１、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７、SEQ ID NO:９、SEQ ID N
O:１１及びSEQ ID NO:１３から選択するヌクレオチド配列を含むＤＮＡ配列であ
る。
【００８２】
それ故、これらの発現ベクターの各々において、かかるＤＮＡ配列は、尚一層
特に、上で規定され及び以下で規定されるアミノ酸配列SEQ ID NO:２、SEQ ID N
O:４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ
ID NO:１４の一つをコードする上で規定した遺伝子のＤＮＡ配列である。
特に、上で規定され及び以下で規定されるアミノ酸配列SEQ ID NO:２、SEQ ID N
O:４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ
ID NO:１４の一つをコードする上で規定した遺伝子のＤＮＡ配列である。
【００８３】
それ故、本発明の発現ベクターの各々において、かかるＤＮＡ配列は、タンパ
ク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ
５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１の一つをコー
ドする上で規定したＤＮＡ配列並びにこれとハイブリダイズし及び／又はこの配
列と若しくはこれの断片と有意の相同性を有するＤＮＡ配列であり、又は同じ活
性を有するタンパク質をコードする、少なくとも１ヌクレオチドの抑制、挿入及
び／若しくは置換によって導入された改変を含むＤＮＡ配列でもある。
ク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ
５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１の一つをコー
ドする上で規定したＤＮＡ配列並びにこれとハイブリダイズし及び／又はこの配
列と若しくはこれの断片と有意の相同性を有するＤＮＡ配列であり、又は同じ活
性を有するタンパク質をコードする、少なくとも１ヌクレオチドの抑制、挿入及
び／若しくは置換によって導入された改変を含むＤＮＡ配列でもある。
【００８４】
発現ベクターの各々において、かかるＤＮＡ配列は、特に、上で規定したＤＮ
Ａ配列並びに該ＤＮＡ配列と少なくとも５０％の又は少なくとも６０％の、好ま
しくは少なくとも７０％のヌクレオチド配列相同性を有する類似のＤＮＡ配列で
あり、又はＡＡ配列が該ＤＮＡ配列によりコードされるＡＡ配列と少なくとも４
０％の、特には４５％の、又は少なくとも５０％の、むしろ少なくとも６０％の
好ましくは少なくとも７０％の相同性を有するタンパク質をコードする類似ＤＮ
Ａ配列でもある。
Ａ配列並びに該ＤＮＡ配列と少なくとも５０％の又は少なくとも６０％の、好ま
しくは少なくとも７０％のヌクレオチド配列相同性を有する類似のＤＮＡ配列で
あり、又はＡＡ配列が該ＤＮＡ配列によりコードされるＡＡ配列と少なくとも４
０％の、特には４５％の、又は少なくとも５０％の、むしろ少なくとも６０％の
好ましくは少なくとも７０％の相同性を有するタンパク質をコードする類似ＤＮ
Ａ配列でもある。
【００８５】
これらの発現ベクターは、適当なプロモーターの制御下でタンパク質の発現を
可能にするベクターである。かかるベクターは、プラスミド、コスミド又はウイ
ルスＤＮＡであってよい。原核細胞については、プロモーターは、例えば、ｌａ
ｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター、ｔａｃプロモーター、β-ラクタマーゼ
プロモーター又はＰＬプロモーターであってよい。酵母細胞については、プロモ
ーターは、例えば、ＰＧＫプロモーター又はＧＡＬプロモーターであってよい。
哺乳動物細胞については、プロモーターは、例えば、ＳＶ４０プロモーター又は
アデノウイルスプロモーターであってよい。
可能にするベクターである。かかるベクターは、プラスミド、コスミド又はウイ
ルスＤＮＡであってよい。原核細胞については、プロモーターは、例えば、ｌａ
ｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター、ｔａｃプロモーター、β-ラクタマーゼ
プロモーター又はＰＬプロモーターであってよい。酵母細胞については、プロモ
ーターは、例えば、ＰＧＫプロモーター又はＧＡＬプロモーターであってよい。
哺乳動物細胞については、プロモーターは、例えば、ＳＶ４０プロモーター又は
アデノウイルスプロモーターであってよい。
【００８６】
バキュロウイルス型ベクターも又、昆虫細胞における発現用に利用することが
できる。
できる。
【００８７】
宿主細胞は、例えば、原核細胞又は真核細胞である。原核細胞は、例えば、大
腸菌、バチルス又はストレプトミセスである。真核宿主細胞は、酵母並びに一層
高等な生物の細胞例えば哺乳動物細胞又は昆虫細胞を包含する。これらの哺乳動
物細胞は、例えば、ハムスターのＣＨＯ又はＢＨＫ細胞及びサルのＣｏｓ細胞で
ある。昆虫細胞は、例えば、ＳＦ９細胞である。
腸菌、バチルス又はストレプトミセスである。真核宿主細胞は、酵母並びに一層
高等な生物の細胞例えば哺乳動物細胞又は昆虫細胞を包含する。これらの哺乳動
物細胞は、例えば、ハムスターのＣＨＯ又はＢＨＫ細胞及びサルのＣｏｓ細胞で
ある。昆虫細胞は、例えば、ＳＦ９細胞である。
【００８８】
それ故、本発明は、タンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣ
ａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、Ｐ
ＣａＤＲ３６１の一つをコードする本発明のポリヌクレオチドの、本発明のポリ
ヌクレオチドにより特にアミノ酸配列SEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:
６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４をコー
ドするＤＮＡ配列によりトランスフォームされた宿主細胞における発現を含む方
法に関係する。かかる方法の履行において、宿主細胞は、特に、真核細胞である
。
ａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、Ｐ
ＣａＤＲ３６１の一つをコードする本発明のポリヌクレオチドの、本発明のポリ
ヌクレオチドにより特にアミノ酸配列SEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:
６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４をコー
ドするＤＮＡ配列によりトランスフォームされた宿主細胞における発現を含む方
法に関係する。かかる方法の履行において、宿主細胞は、特に、真核細胞である
。
【００８９】
本発明の履行のために、用いるベクターは、例えば、ｐＧＥＸ又はｐＢＡＤで
あってよく、宿主細胞は、大腸菌であってよいし、又は例えばベクターｐＹＸ２
２２で、宿主は、特に、サッカロミセス・セレビシエであってよい。
あってよく、宿主細胞は、大腸菌であってよいし、又は例えばベクターｐＹＸ２
２２で、宿主は、特に、サッカロミセス・セレビシエであってよい。
【００９０】
本発明の特別の主題は、上で規定したベクターであって本発明のＤＮＡ配列を
含むベクターによりトランスフォームされた宿主細胞である。
含むベクターによりトランスフォームされた宿主細胞である。
【００９１】
それ故、本発明の主題は、上で規定した本発明の組換えタンパク質の製造方法
であり、該方法において、宿主細胞は、ＤＨ５ａｌｐｈａ大腸菌又はＸＬ１−Ｂ
ｌｕｅ大腸菌であり又は特にサッカロミセス・セレビシエである。
であり、該方法において、宿主細胞は、ＤＨ５ａｌｐｈａ大腸菌又はＸＬ１−Ｂ
ｌｕｅ大腸菌であり又は特にサッカロミセス・セレビシエである。
【００９２】
上記の操作を実施することのできる条件の詳細な説明は、以下の実験部に与え
る。こうして、本発明の遺伝子が挿入されたプラスミドが得られ、次いで、宿主
細胞へ導入されるこのプラスミドが、当業者に公知の通常の技術により操作する
ことによって得られる。
る。こうして、本発明の遺伝子が挿入されたプラスミドが得られ、次いで、宿主
細胞へ導入されるこのプラスミドが、当業者に公知の通常の技術により操作する
ことによって得られる。
【００９３】
本発明の非常に正確な主題は、１９９９年５月２５日にCollection Nationale
de Cultures de Microorganismes (CNCM) INSTITUT PASTEUR 25, rue du Doc
teur Roux 75724 PARIS Cedex 15に、次の番号にて寄託した７つのプラスミド
である：Ｉ−２２１４、Ｉ−２２１５、Ｉ−２２１６、Ｉ−２２１７、Ｉ−２２
１１、Ｉ−２２１２及びＩ−２２１３。
de Cultures de Microorganismes (CNCM) INSTITUT PASTEUR 25, rue du Doc
teur Roux 75724 PARIS Cedex 15に、次の番号にて寄託した７つのプラスミド
である：Ｉ−２２１４、Ｉ−２２１５、Ｉ−２２１６、Ｉ−２２１７、Ｉ−２２
１１、Ｉ−２２１２及びＩ−２２１３。
【００９４】
Ｉ−２２１４は、本発明の実施例１に示したようにして調製した本発明のカン
ジダ・アルビカンスＣａＤＲ４７２の遺伝子を有するプラスミドを含む細菌ＸＬ
１−ｂｌｕｅ大腸菌により構成されたＣａＤＲ４７２．１０株の登録番号である
。
ジダ・アルビカンスＣａＤＲ４７２の遺伝子を有するプラスミドを含む細菌ＸＬ
１−ｂｌｕｅ大腸菌により構成されたＣａＤＲ４７２．１０株の登録番号である
。
【００９５】
それ故、この遺伝子は、SEQ ID NO:１の配列ＣａＤＲ４７２に対応している。
【００９６】
Ｉ−２２１５は、本発明の実施例２に示したようにして調製した本発明のカン
ジダ・アルビカンスＣａＤＲ４８９の遺伝子を有するプラスミドを含む細菌ＸＬ
１−ｂｌｕｅ大腸菌により構成されたＣａＤＲ４８９．３７株の登録番号である
。
ジダ・アルビカンスＣａＤＲ４８９の遺伝子を有するプラスミドを含む細菌ＸＬ
１−ｂｌｕｅ大腸菌により構成されたＣａＤＲ４８９．３７株の登録番号である
。
【００９７】
それ故、この遺伝子は、SEQ ID NO:３の配列ＣａＤＲ４８９に対応している。
【００９８】
Ｉ−２２１６は、本発明の実施例３に示したようにして調製した本発明のカン
ジダ・アルビカンスＣａＤＲ５２７の遺伝子(対立遺伝子１)を有するプラスミド
を含む細菌ＸＬ１−ｂｌｕｅ大腸菌により構成されたＣａＤＲ５２７．２株の登
録番号である。
ジダ・アルビカンスＣａＤＲ５２７の遺伝子(対立遺伝子１)を有するプラスミド
を含む細菌ＸＬ１−ｂｌｕｅ大腸菌により構成されたＣａＤＲ５２７．２株の登
録番号である。
【００９９】
それ故、この遺伝子は、SEQ ID NO:５の配列１ＣａＤＲ５２７に対応している
。
。
【０１００】
Ｉ−２２１７は、本発明の実施例３に示したようにして調製した本発明のカン
ジダ・アルビカンスＣａＤＲ５２７の遺伝子(対立遺伝子２)を有するプラスミド
を含む細菌ＸＬ１−ｂｌｕｅ大腸菌より構成されたＣａＤＲ５２７．３株の登録
番号である。
ジダ・アルビカンスＣａＤＲ５２７の遺伝子(対立遺伝子２)を有するプラスミド
を含む細菌ＸＬ１−ｂｌｕｅ大腸菌より構成されたＣａＤＲ５２７．３株の登録
番号である。
【０１０１】
それ故、この遺伝子は、SEQ ID NO:７の配列２ＣａＤＲ５２７に対応している
。
。
【０１０２】
Ｉ−２２１１は、本発明の実施例４に示したようにして調製した本発明のカン
ジダ・アルビカンスＣａＦＬ０２４の遺伝子を有するプラスミドを含む細菌ＸＬ
１−ｂｌｕｅ大腸菌により構成されたＣａＦＬ０２４．４株の登録番号である。
ジダ・アルビカンスＣａＦＬ０２４の遺伝子を有するプラスミドを含む細菌ＸＬ
１−ｂｌｕｅ大腸菌により構成されたＣａＦＬ０２４．４株の登録番号である。
【０１０３】
それ故、この遺伝子は、SEQ ID NO:９の配列ＣａＦＬ０２４に対応している。
【０１０４】
Ｉ−２２１２は、本発明の実施例５に示したようにして調製した本発明のカン
ジダ・アルビカンスＣａＮＬ２６０の遺伝子を有するプラスミドを含む細菌ＸＬ
１−ｂｌｕｅ大腸菌により構成されたＣａＮＬ２６０．４株の登録番号である。
ジダ・アルビカンスＣａＮＬ２６０の遺伝子を有するプラスミドを含む細菌ＸＬ
１−ｂｌｕｅ大腸菌により構成されたＣａＮＬ２６０．４株の登録番号である。
【０１０５】
それ故、この遺伝子は、SEQ ID NO:１１の配列ＣａＮＬ２６０に対応している
。
。
【０１０６】
Ｉ−２２１３は、本発明の実施例６に示したようにして調製した本発明のカン
ジダ・アルビカンスＣａＤＲ３６１の遺伝子を有するプラスミドを含む細菌ＸＬ
１−ｂｌｕｅ大腸菌により構成されたＣａＤＲ３６１．３株の登録番号である。
ジダ・アルビカンスＣａＤＲ３６１の遺伝子を有するプラスミドを含む細菌ＸＬ
１−ｂｌｕｅ大腸菌により構成されたＣａＤＲ３６１．３株の登録番号である。
【０１０７】
それ故、この遺伝子は、SEQ ID NO:１３の配列ＣａＤＲ３６１に対応している
。
。
【０１０８】
それ故、本発明の非常に正確な主題は、番号Ｉ−２２１４、Ｉ−２２１５、Ｉ
−２２１６、Ｉ−２２１７、Ｉ−２２１１、Ｉ−２２１２及びＩ−２２１３ に
て寄託した少なくとも一つのプラスミドである。
−２２１６、Ｉ−２２１７、Ｉ−２２１１、Ｉ−２２１２及びＩ−２２１３ に
て寄託した少なくとも一つのプラスミドである。
【０１０９】
本発明を実施した操作条件は、以下の実験部に記載する。
【０１１０】
それ故、本発明の主題は、上で規定したタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａ
ＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、Ｐ
ＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１の一つの活性を、抗カビ特性を測定すること
を希望する各産物の存在下で測定し、そしてこの活性に対する阻害効果を有する
産物を選択するステージを含むことを特徴とする抗カビ産物のスクリーニング方
法である。
ＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、Ｐ
ＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１の一つの活性を、抗カビ特性を測定すること
を希望する各産物の存在下で測定し、そしてこの活性に対する阻害効果を有する
産物を選択するステージを含むことを特徴とする抗カビ産物のスクリーニング方
法である。
【０１１１】
特に、本発明のタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤ
Ｒ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａ
ＤＲ３６１をコードする遺伝子がカンジダ・アルビカンスの細胞の生存に必須で
あれば、かかるタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ
５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤ
Ｒ３６１の阻害性物質は、抗カビ剤として(医薬として又は工業レベルで)有用で
あろう。
Ｒ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａ
ＤＲ３６１をコードする遺伝子がカンジダ・アルビカンスの細胞の生存に必須で
あれば、かかるタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ
５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤ
Ｒ３６１の阻害性物質は、抗カビ剤として(医薬として又は工業レベルで)有用で
あろう。
【０１１２】
例えば、抗カビ物質例えばカンジダ・アルビカンスに対して活性な物質をスク
リーニングするために、本発明の遺伝子によりコードされるタンパク質又はその
機能的同族体の一つの活性を測定し、そのタンパク質を、抗カビ特性を測定する
ことを希望する各産物の存在下に置き、そしてこの活性に対する阻害効果を有す
る産物を選択する。
リーニングするために、本発明の遺伝子によりコードされるタンパク質又はその
機能的同族体の一つの活性を測定し、そのタンパク質を、抗カビ特性を測定する
ことを希望する各産物の存在下に置き、そしてこの活性に対する阻害効果を有す
る産物を選択する。
【０１１３】
かかるスクリーニングは、本発明のタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ
４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａ
ＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１の一つの活性を、試験すべき潜在的アクチベータ
ー又はインヒビターの存在下で、例えば適当な反応媒質中でイン・ビトロで測定
することにより測定することにより実施することができる。
４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａ
ＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１の一つの活性を、試験すべき潜在的アクチベータ
ー又はインヒビターの存在下で、例えば適当な反応媒質中でイン・ビトロで測定
することにより測定することにより実施することができる。
【０１１４】
本発明のタンパク質の活性は又、適当な細胞試験により、イン・ビボでも測定
することができる。例えば、タンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、
１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６
０、ＰＣａＤＲ３６１の活性を、有利に、本発明の遺伝子の一つによってトラン
スフォームされて、サッカロミセス・セレビシエの相同なタンパク質ＰＹＤＲ
４７２ｗ、ＰＹＤＲ ４８９ｗ、ＰＹＤＲ ５７７ｗ、ＰＹＦＬ ０２４ｃ、ＰＹ
ＮＬ ２６０ｃ及びＰＹＤＲ ３６１ｃを発現しないサッカロミセス・セレビシエ
の変異体の細胞において測定することができる。
することができる。例えば、タンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、
１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６
０、ＰＣａＤＲ３６１の活性を、有利に、本発明の遺伝子の一つによってトラン
スフォームされて、サッカロミセス・セレビシエの相同なタンパク質ＰＹＤＲ
４７２ｗ、ＰＹＤＲ ４８９ｗ、ＰＹＤＲ ５７７ｗ、ＰＹＦＬ ０２４ｃ、ＰＹ
ＮＬ ２６０ｃ及びＰＹＤＲ ３６１ｃを発現しないサッカロミセス・セレビシエ
の変異体の細胞において測定することができる。
【０１１５】
この発明は又、上で示したように本発明のタンパク質の一つに対する阻害特性
について選択した産物の、抗カビ剤を得るための利用をも包含している。
について選択した産物の、抗カビ剤を得るための利用をも包含している。
【０１１６】
本発明は、後述の本発明の遺伝子ＣａＤＲ４７２、ＣａＤＲ４８９、１ＣａＤ
Ｒ５２７、２ＣａＤＲ５２７、ＣａＦＬ０２４、ＣａＮＬ２６０及びＣａＤＲ３
６１のクローニングを記載した実験部を利用して、一層よく理解される。
Ｒ５２７、２ＣａＤＲ５２７、ＣａＦＬ０２４、ＣａＮＬ２６０及びＣａＤＲ３
６１のクローニングを記載した実験部を利用して、一層よく理解される。
【０１１７】
それ故、本発明の主題は、抗カビ剤を得るために上で規定したような抗カビ産
物をスクリーニングする方法により選択した産物の利用である。
物をスクリーニングする方法により選択した産物の利用である。
【０１１８】
本発明の主題は、本発明のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の又は上に規定し
たこれらの遺伝子によりコードされるタンパク質の利用であって、上で規定した
抗カビ特性を有し且つこれらの遺伝子によりコードされるカンジダ・アルビカン
スのタンパク質のインヒビターとして利用される産物の選択のための利用でもあ
る。
たこれらの遺伝子によりコードされるタンパク質の利用であって、上で規定した
抗カビ特性を有し且つこれらの遺伝子によりコードされるカンジダ・アルビカン
スのタンパク質のインヒビターとして利用される産物の選択のための利用でもあ
る。
【０１１９】
本発明の主題は又、少なくとも一種の上で規定した本発明のカンジダ・アルビ
カンスのタンパク質のインヒビターを活性成分を含む医薬組成物でもある。
カンスのタンパク質のインヒビターを活性成分を含む医薬組成物でもある。
【０１２０】
かかる組成物は、特に、局所的及び全身性の真菌感染症の治療に有用であり得
る。
る。
【０１２１】
上で示した医薬組成物は、口内、直腸、非経口経路により又は局所的経路によ
り、皮膚及び粘膜への局所適用として、又は静脈若しくは筋肉経路による注射に
よって投与することができる。これらの組成物は、固体であっても液体であって
もよく、ヒトの医薬において普通に用いられるすべての医薬形態例えば無糖衣錠
剤若しくは糖衣錠、ゼラチンカプセル、顆粒、座薬、注射用剤、軟膏、クリーム
、ゲル及びエアゾール製剤において提供することができ；それらは、通常の方法
によって製造される。活性成分は、これらの医薬組成物において通常使用される
賦形剤例えばタルク、アラビアゴム、ラクトース、澱粉、マグネシウムステアレ
ート、ココアバター、水性若しくは非水性ビヒクル、動物若しくは植物起源の脂
肪物質、パラフィン誘導体、グリコール、種々の湿潤剤、分散剤若しくは乳化剤
及び防腐剤に組み込むことができる。
り、皮膚及び粘膜への局所適用として、又は静脈若しくは筋肉経路による注射に
よって投与することができる。これらの組成物は、固体であっても液体であって
もよく、ヒトの医薬において普通に用いられるすべての医薬形態例えば無糖衣錠
剤若しくは糖衣錠、ゼラチンカプセル、顆粒、座薬、注射用剤、軟膏、クリーム
、ゲル及びエアゾール製剤において提供することができ；それらは、通常の方法
によって製造される。活性成分は、これらの医薬組成物において通常使用される
賦形剤例えばタルク、アラビアゴム、ラクトース、澱粉、マグネシウムステアレ
ート、ココアバター、水性若しくは非水性ビヒクル、動物若しくは植物起源の脂
肪物質、パラフィン誘導体、グリコール、種々の湿潤剤、分散剤若しくは乳化剤
及び防腐剤に組み込むことができる。
【０１２２】
この投与量は、使用する産物、治療される患者及び問題の病気によって変化し
得る。
得る。
【０１２３】
それ故、本発明の特別の主題は、上で規定した組成物の抗カビ剤としての利用
である。
である。
【０１２４】
本発明の主題は又、哺乳動物において免疫応答を誘導する方法であって、上で
規定した本発明のポリペプチド又は同じ機能を有するその断片を、この哺乳動物
を病気から防護する抗体を生成するためにこの哺乳動物に接種することを含む当
該方法でもある。
規定した本発明のポリペプチド又は同じ機能を有するその断片を、この哺乳動物
を病気から防護する抗体を生成するためにこの哺乳動物に接種することを含む当
該方法でもある。
【０１２５】
それ故、本発明の主題は又、上で規定したポリペプチド又は同じ機能を有する
その断片の、哺乳動物において、その哺乳動物を病気から防護する抗体を生成す
る医薬の接種によって、免疫応答を誘導することを意図した医薬の製造のための
利用である。
その断片の、哺乳動物において、その哺乳動物を病気から防護する抗体を生成す
る医薬の接種によって、免疫応答を誘導することを意図した医薬の製造のための
利用である。
【０１２６】
本発明の主題は又、上で規定した本発明のポリペプチド又は同じ機能を有し且
つ本発明のポリヌクレオチドにより特に上で規定したＤＮＡ配列によってコード
されるその断片に対する抗体でもある。
つ本発明のポリヌクレオチドにより特に上で規定したＤＮＡ配列によってコード
されるその断片に対する抗体でもある。
【０１２７】
それ故、本発明のポリペプチドは、これらのポリペプチドの免疫特異的な抗体
を生成するための免疫原として利用することができる。この用いられる用語抗体
は、等しく、モノクローナルの、ポリクローナルの、キメラの、一本鎖の、非ヒ
ト抗体及びヒト抗体並びにＦab断片(Ｆab免疫グロブリンバンクの産物を含む)を
指す。本発明のポリペプチドに対して生成された抗体は、モノクローナル抗体製
造のための日常的プロトコールを利用することにより、本発明のポリペプチド又
はエピトープを有する断片、それらの類似体(又は動物細胞好ましくは非ヒト)の
投与によって得ることができる。かかる抗体は、この分野で周知の方法例えば書
物Antibodies, Laboratory manual, Harbow及びDavid Larre編、Cold Spring Ha
rbor laboratory編、1988に記載された方法によって製造することができる。
を生成するための免疫原として利用することができる。この用いられる用語抗体
は、等しく、モノクローナルの、ポリクローナルの、キメラの、一本鎖の、非ヒ
ト抗体及びヒト抗体並びにＦab断片(Ｆab免疫グロブリンバンクの産物を含む)を
指す。本発明のポリペプチドに対して生成された抗体は、モノクローナル抗体製
造のための日常的プロトコールを利用することにより、本発明のポリペプチド又
はエピトープを有する断片、それらの類似体(又は動物細胞好ましくは非ヒト)の
投与によって得ることができる。かかる抗体は、この分野で周知の方法例えば書
物Antibodies, Laboratory manual, Harbow及びDavid Larre編、Cold Spring Ha
rbor laboratory編、1988に記載された方法によって製造することができる。
【０１２８】
それ故、本発明の全く特別の主題は、本発明のタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、
ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２
４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１の何れか一つ又はこれらのタンパク質
の断片に対する抗体である。かかる断片は、特に、それが由来したタンパク質と
同じ機能を有する。
ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２
４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１の何れか一つ又はこれらのタンパク質
の断片に対する抗体である。かかる断片は、特に、それが由来したタンパク質と
同じ機能を有する。
【０１２９】
本発明の主題は又、本発明の遺伝子ＣａＤＲ４７２、ＣａＤＲ４８９、１Ｃａ
ＤＲ５２７、２ＣａＤＲ５２７、ＣａＦＬ０２４、ＣａＮＬ２６０、ＣａＤＲ３
６１又は上で規定したこれらの遺伝子にコードされるタンパク質の、病原性酵母
カンジダ・アルビカンスにより引き起こされる病気の診断又は治療に用いること
のできる組成物の製造ための利用でもある。
ＤＲ５２７、２ＣａＤＲ５２７、ＣａＦＬ０２４、ＣａＮＬ２６０、ＣａＤＲ３
６１又は上で規定したこれらの遺伝子にコードされるタンパク質の、病原性酵母
カンジダ・アルビカンスにより引き起こされる病気の診断又は治療に用いること
のできる組成物の製造ための利用でもある。
【０１３０】
本発明は又、本発明のポリヌクレオチドの、診断用試薬としての利用にも関係
する。本発明のカンジダ・アルビカンスのタンパク質の一つをコードする本発明
のポリヌクレオチド又はその類似体の真核生物特に哺乳動物(一層特にヒト)にお
ける検出は、病気の診断手段を構成することができ：従って、本発明のかかるポ
リヌクレオチド特にＤＮＡ配列を、広範囲の技術によって、本発明のポリヌクレ
オチドの少なくとも一つを含む微生物に感染した真核生物特に哺乳動物(一層特
にヒト)において検出することができる。かかる診断の道具としての利用のため
の核酸を、感染した細胞又は組織例えば骨、血液、筋肉、軟骨又は皮膚において
検出することができる。この検出のために、ゲノムＤＮＡを直接利用することも
できるし、ＰＣＲその他の増幅技術によって増幅することもできる。ＲＮＡ又は
ＤＮＡ及びｃＤＮＡも又、同じ目的で利用することができる。増幅技術により、
真核生物特に哺乳動物(一層特にヒト)に存在する真菌類の株を、遺伝子型の分析
によって特性決定することができる。欠失又は挿入は、増幅生成物のサイズの変
化により、参照配列の遺伝子型との比較よって検出することができる。変異点は
、増幅されたＤＮＡを、放射性元素で標識した本発明のポリヌクレオチド配列と
ハイブリダイゼーションさせることによって同定することができる。それ故、完
全に、相補的配列を、ヌクレアーゼによる消化に対して抵抗性の弱い二本鎖から
区別することができる。これらのＤＮＡ配列の差異も又、変性剤を伴う又は伴わ
ないゲル中でのＤＮＡ断片の電気泳動移動度の変化により、又は直接ＤＮＡ配列
決定法(参考文献：Myers等、Science, 230:1242(1985))よって検出することがで
きる。
する。本発明のカンジダ・アルビカンスのタンパク質の一つをコードする本発明
のポリヌクレオチド又はその類似体の真核生物特に哺乳動物(一層特にヒト)にお
ける検出は、病気の診断手段を構成することができ：従って、本発明のかかるポ
リヌクレオチド特にＤＮＡ配列を、広範囲の技術によって、本発明のポリヌクレ
オチドの少なくとも一つを含む微生物に感染した真核生物特に哺乳動物(一層特
にヒト)において検出することができる。かかる診断の道具としての利用のため
の核酸を、感染した細胞又は組織例えば骨、血液、筋肉、軟骨又は皮膚において
検出することができる。この検出のために、ゲノムＤＮＡを直接利用することも
できるし、ＰＣＲその他の増幅技術によって増幅することもできる。ＲＮＡ又は
ＤＮＡ及びｃＤＮＡも又、同じ目的で利用することができる。増幅技術により、
真核生物特に哺乳動物(一層特にヒト)に存在する真菌類の株を、遺伝子型の分析
によって特性決定することができる。欠失又は挿入は、増幅生成物のサイズの変
化により、参照配列の遺伝子型との比較よって検出することができる。変異点は
、増幅されたＤＮＡを、放射性元素で標識した本発明のポリヌクレオチド配列と
ハイブリダイゼーションさせることによって同定することができる。それ故、完
全に、相補的配列を、ヌクレアーゼによる消化に対して抵抗性の弱い二本鎖から
区別することができる。これらのＤＮＡ配列の差異も又、変性剤を伴う又は伴わ
ないゲル中でのＤＮＡ断片の電気泳動移動度の変化により、又は直接ＤＮＡ配列
決定法(参考文献：Myers等、Science, 230:1242(1985))よって検出することがで
きる。
【０１３１】
特異的位置における配列の変化も又、ＲＮアーゼ及びＳ１等のヌクレアーゼに
対する防護実験により又は化学的開裂法(参考文献：Cotton等、Proc Natl Acad
Sci,USA, 85:4397-4401(1985))によって明らかにすることができる。
対する防護実験により又は化学的開裂法(参考文献：Cotton等、Proc Natl Acad
Sci,USA, 85:4397-4401(1985))によって明らかにすることができる。
【０１３２】
突然変異又は多型を有する本発明のポリヌクレオチドの一つを含む細胞も又、
特に血清型を決定することを可能にする多くの技術によって検出することができ
る。例えば、ＲＴ−ＰＣＲ技術を用いて、突然変異を検出することができる。Ｒ
Ｔ−ＰＣＲ技術を自動検出システム(例えば、ＧｅｎｅＳｃａｎ技術)と共に利用
することは、特に好ましい。ＲＮＡ及びｃＤＮＡを、ＰＣＲ又はＲＴ−ＰＣＲ技
術において利用することができる。例えば、本発明のポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチドの相補的プライマーを利用して、突然変異を同定し、分析する
ことができる。
特に血清型を決定することを可能にする多くの技術によって検出することができ
る。例えば、ＲＴ−ＰＣＲ技術を用いて、突然変異を検出することができる。Ｒ
Ｔ−ＰＣＲ技術を自動検出システム(例えば、ＧｅｎｅＳｃａｎ技術)と共に利用
することは、特に好ましい。ＲＮＡ及びｃＤＮＡを、ＰＣＲ又はＲＴ−ＰＣＲ技
術において利用することができる。例えば、本発明のポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチドの相補的プライマーを利用して、突然変異を同定し、分析する
ことができる。
【０１３３】
それ故、プライマーを用いて、感染を受けた個体から単離されたＤＮＡを増幅
することができる。この方法において、ＤＮＡ配列中の突然変異を検出すること
ができ、感染を診断し、感染性因子の血清型を決定し又は分類をするために利用
することができる。かかる技術は、当業者には標準的なものであり、特に、マニ
ュアル「Current Protocols in Molecular Biology」、Ausubel等編、John Wile
y § Sons, Inc.,1995に記載されている。
することができる。この方法において、ＤＮＡ配列中の突然変異を検出すること
ができ、感染を診断し、感染性因子の血清型を決定し又は分類をするために利用
することができる。かかる技術は、当業者には標準的なものであり、特に、マニ
ュアル「Current Protocols in Molecular Biology」、Ausubel等編、John Wile
y § Sons, Inc.,1995に記載されている。
【０１３４】
それ故、本発明は、病気の診断方法に、好ましくはカンジダ・アルビカンスに
より引き起こされる真菌感染症(上記の真菌症等)の診断方法に関係し、この方法
は、感染を受けた個体から採った試料での本発明のポリヌクレオチドの一つの量
の増加の測定を含む。かかるポリヌクレオチドは、特に、上記の本発明のＤＮＡ
配列を有していてよい。
より引き起こされる真菌感染症(上記の真菌症等)の診断方法に関係し、この方法
は、感染を受けた個体から採った試料での本発明のポリヌクレオチドの一つの量
の増加の測定を含む。かかるポリヌクレオチドは、特に、上記の本発明のＤＮＡ
配列を有していてよい。
【０１３５】
ポリヌクレオチドの量の増加又は減少を当業者に周知の技術(特に、増幅、ＰＣ
Ｒ、ＲＴ ＰＣＲ、ノーザンブロッティング又は他のハイブリダイゼーション技
術)によって測定することができる。
Ｒ、ＲＴ ＰＣＲ、ノーザンブロッティング又は他のハイブリダイゼーション技
術)によって測定することができる。
【０１３６】
加えて、本発明による診断方法は、本発明のポリペプチドの、感染の存在の検
出に用いられる正常の非感染組織より構成される対照用試料と比較して大きすぎ
る発現の検出よりなる。
出に用いられる正常の非感染組織より構成される対照用試料と比較して大きすぎ
る発現の検出よりなる。
【０１３７】
それ故、宿主細胞試料中で発現されるタンパク質の量を検出するために利用す
ることのできる技術は、当業者に周知である。それ故、例えば、放射免疫アッセ
イ又は競争的結合アッセイ、ウエスタンブロット分析及びＥＬＩＳＡ試験(上記
のAusubel参照)を挙げることができる。
ることのできる技術は、当業者に周知である。それ故、例えば、放射免疫アッセ
イ又は競争的結合アッセイ、ウエスタンブロット分析及びＥＬＩＳＡ試験(上記
のAusubel参照)を挙げることができる。
【０１３８】
本発明の主題は又、真菌感染症の診断のためのキットであって、上で規定した
本発明のＤＮＡ配列若しくは類似の配列若しくはこの配列の機能的断片、この配
列によりコードされるポリペプチド若しくは同じ機能を有するポリペプチド断片
又はこのＤＮＡ配列によりコードされるかかるポリペプチド若しくはこのポリペ
プチドの断片に対する抗体を含む当該キットでもある。
本発明のＤＮＡ配列若しくは類似の配列若しくはこの配列の機能的断片、この配
列によりコードされるポリペプチド若しくは同じ機能を有するポリペプチド断片
又はこのＤＮＡ配列によりコードされるかかるポリペプチド若しくはこのポリペ
プチドの断片に対する抗体を含む当該キットでもある。
【０１３９】
それ故、このキットは、上で規定したような本発明のＤＮＡ配列例えばＤＮＡ
配列SEQ ID NO:１、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７、SEQ ID NO:９
、SEQ ID NO:１１若しくはSEQ ID NO:１３又はこの配列の断片を含むことができ
る。
配列SEQ ID NO:１、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７、SEQ ID NO:９
、SEQ ID NO:１１若しくはSEQ ID NO:１３又はこの配列の断片を含むことができ
る。
【０１４０】
かかるキットは、同様に、本発明のポリペプチド又はこのポリペプチドの断片
を、特に、ＡＡ配列SEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８
、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４を有する本発明のタンパ
ク質の一つ又は上で規定した抗体を含むことができる。
を、特に、ＡＡ配列SEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８
、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４を有する本発明のタンパ
ク質の一つ又は上で規定した抗体を含むことができる。
【０１４１】
かかるキットは、当業者に周知の方法によって製造することができる。
【０１４２】
配列表のSEQ ID NO:１〜３２及び図１〜６は、以後、本発明の一層良好な説明
を可能にする下記の例証を示す。
を可能にする下記の例証を示す。
【０１４３】
配列SEQ ID NO:１〜３２は、本発明中において示されたヌクレオチド又はペプ
チド配列を表す。
チド配列を表す。
【０１４４】
配列SEQ ID NO:１〜１４は、本発明のカンジダ・アルビカンスの遺伝子のヌク
レオチド配列及びこれらの遺伝子に由来するペプチド配列を記載している。
レオチド配列及びこれらの遺伝子に由来するペプチド配列を記載している。
【０１４５】
従って、配列SEQ ID NO:１、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７、SE
Q ID NO:９、SEQ ID NO:１１又はSEQ ID NO:１３は、それぞれ、本発明のカンジ
ダ・アルビカンスの遺伝子のヌクレオチド配列：ＣａＤＲ４２７、ＣａＤＲ４８
９、１ＣａＤＲ５２７、２ＣａＤＲ５２７、ＣａＦＬ０２４、ＣａＮＬ２６０及
びＣａＤＲ３６１を記載している。
Q ID NO:９、SEQ ID NO:１１又はSEQ ID NO:１３は、それぞれ、本発明のカンジ
ダ・アルビカンスの遺伝子のヌクレオチド配列：ＣａＤＲ４２７、ＣａＤＲ４８
９、１ＣａＤＲ５２７、２ＣａＤＲ５２７、ＣａＦＬ０２４、ＣａＮＬ２６０及
びＣａＤＲ３６１を記載している。
【０１４６】
配列SEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:
１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４は、それぞれ、本発明の遺伝子に由来
するタンパク質のペプチド配列を記載している。
１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４は、それぞれ、本発明の遺伝子に由来
するタンパク質のペプチド配列を記載している。
【０１４７】
従って、例えば、配列SEQ ID NO:１及びSEQ ID NO:２は、それぞれ、遺伝子Ｃ
ａＤＲ４７２のヌクレオチド配列及びこの遺伝子に由来するタンパク質のペプチ
ド配列即ちＰＣａＤＲ４７２を表している。
ａＤＲ４７２のヌクレオチド配列及びこの遺伝子に由来するタンパク質のペプチ
ド配列即ちＰＣａＤＲ４７２を表している。
【０１４８】
配列SEQ ID NO:１５〜２０は、それぞれ、以下の実験部で示すように、本発明
のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の調製に用いられる６つのプローブの配列を
表している。
のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の調製に用いられる６つのプローブの配列を
表している。
【０１４９】
配列SEQ ID NO:２１〜３２は、それぞれ、以下の実験部で示すように、本発明
のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の調製のためのプローブの増幅に用いられる
２×６オリゴヌクレオチドの配列を表している。
のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の調製のためのプローブの増幅に用いられる
２×６オリゴヌクレオチドの配列を表している。
【０１５０】
図１〜６は、以後、それぞれ、本発明のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の６
つの調製物、即ち：ＣａＤＲ４７２、ＣａＤＲ４８９、１ＣａＤＲ５２７／２Ｃ
ａＤＲ５２７、ＣａＦＬ０２４、ＣａＮＬ２６０及びＣａＤＲ３６１の一つを示
しており、これらの製法は、以下の実験部中に実施例１〜６に記載してある。
つの調製物、即ち：ＣａＤＲ４７２、ＣａＤＲ４８９、１ＣａＤＲ５２７／２Ｃ
ａＤＲ５２７、ＣａＦＬ０２４、ＣａＮＬ２６０及びＣａＤＲ３６１の一つを示
しており、これらの製法は、以下の実験部中に実施例１〜６に記載してある。
【０１５１】
図１〜６の各々は、本発明のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の一つの調製の
ために用いたプローブ(配列SEQ ID NO:１５〜２０を有する使用した６つのプロ
ーブ)に由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の
出発点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子の配列との比較を記載している。
ために用いたプローブ(配列SEQ ID NO:１５〜２０を有する使用した６つのプロ
ーブ)に由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の
出発点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子の配列との比較を記載している。
【０１５２】
従って、本発明の遺伝子ＣａＤＲ４７２の調製の実施例１を参照して、図３３
は、ＣａＤＲ４７２のプローブ(SEQ ID NO:１５)に由来するタンパク質の、Ｓ．
セレビシエの遺伝子ＹＤＲ４７２ｗに由来するタンパク質との比較を表している
。
は、ＣａＤＲ４７２のプローブ(SEQ ID NO:１５)に由来するタンパク質の、Ｓ．
セレビシエの遺伝子ＹＤＲ４７２ｗに由来するタンパク質との比較を表している
。
【０１５３】
以下の実験部は、本発明を説明するが、それを限定するものではない。
【０１５４】実施例１
：遺伝子ＣａＤＲ４７２のクローニング及び配列決定
(方法Ａ)
スタンフォードのインターネットサイト
(http://candida.standford.edu/)は、カンジダ・アルビカンスのゲノムの予備
配列への直接的アクセスを与える。これらの配列の一つは、Ｓ．セレビシエの遺
伝子ＹＤＲ４７２ｗとの相同性を有している。この配列中で次の２つのオリゴヌ
クレオチドを選択した:
配列への直接的アクセスを与える。これらの配列の一つは、Ｓ．セレビシエの遺
伝子ＹＤＲ４７２ｗとの相同性を有している。この配列中で次の２つのオリゴヌ
クレオチドを選択した:
【化１】
5' CAATTTATTC ATGTTCGNAT CTGGAAATTG ATTTT 3' (SEQ ID NO:２１)及び
5' CCAAATCTCA AACTCTCTCT AATTAAAAC 3' (SEQ ID NO:２２)。
【０１５５】
これら２つのオリゴヌクレオチドを用いて、Ｃ．アルビカンスの断片を増幅す
る。クローニングの後に、予想された配列に近い３２０塩基対のＣａＤＲ４７２
のいわゆるプローブ配列が得られたが：ＣａＤＲ４７２のプローブを、SEQ ID N
O:１５と呼ぶ。ＣａＤＲ４７２のプローブ(SEQ ID NO:１５)に由来するタンパク
質をＹＤＲ４７２ｗのそれと比較したが、これは、これらの２つのＡＡ配列間の
４８％の同一性を示す(この比較は、図１に示してある)。
る。クローニングの後に、予想された配列に近い３２０塩基対のＣａＤＲ４７２
のいわゆるプローブ配列が得られたが：ＣａＤＲ４７２のプローブを、SEQ ID N
O:１５と呼ぶ。ＣａＤＲ４７２のプローブ(SEQ ID NO:１５)に由来するタンパク
質をＹＤＲ４７２ｗのそれと比較したが、これは、これらの２つのＡＡ配列間の
４８％の同一性を示す(この比較は、図１に示してある)。
【０１５６】
Ｃ．アルビカンスの３２０塩基対の断片を、Ｃ．アルビカンスの遺伝子バンク
をスクリーニングするためのプローブとして利用したが、このＣ．ａ．のバンク
は、Ｃ．アルビカンスのゲノムＤＮＡのＳａｕ３ＡＩによる部分消化とベクター
ＹＥＰ２４のＢａｍＨＩ制限部位でのクローニングにより調製されたものである
。これらの遺伝子バンクのクローンを、次いで、ディッシュ当たり２０００クロ
ーンの密度でプレートし：次いで、各ディッシュをニトロセルロースフィルター
で覆い、それを０．５Ｍ ＮａＯＨで５分間；１Ｍ トリス(ｐＨ７．７)で５分間
；０．５Ｍ トリス(ｐＨ７．７)、１．２５Ｍ ＮａＣｌで５分間、連続的に処理
する。乾燥後に、これらのフィルターを、２時間、８０℃に保持する。予備ハイ
ブリダイゼーションとハイブリダイゼーションを、４０％ホルムアミド、５×Ｓ
ＳＣ、２０ｍＭ トリス(ｐＨ７．７)、１×デンハート、０．１％ＳＤＳの緩衝
液中で行う。次いで、プローブを、Ｒｅｄｉｐｒｉｍｅ及びｄＣＴＰ３２ｐキッ
ト(Amersham, 英国)を用いてＰ３２で標識する。ハイブリダイゼーションを、４
２℃で１７時間行う。その後、これらのフィルターを、１×ＳＳＣ、０．１％Ｓ
ＤＳで洗い(周囲温度で、各５分ずつ３回)、次いで、６０℃で、各３０分ずつ２
回洗い、次いで、一晩、オートラジオグラフィーにかける。得られたスポットに
対応するコロニーを、低密度での新たなプレーティングとその後のハイブリダイ
ゼーションにより単離し：こうして、８の陽性のクローンが得られ(６００００
から)、その後、それらをＡＢＩ３７７デバイスを用いて配列決定する。配列を
、ＡＢＩソフトウェアを用いて編集してから、ＧＣＧソフトウェアパッケージを
用いて分析する。８クローンの一つは、用いたプローブに対応する完全なコード
配列を含むことが示され：この遺伝子は、ＣａＤＲ４７２といい、この配列は、
SEQ ID NO:１という。
をスクリーニングするためのプローブとして利用したが、このＣ．ａ．のバンク
は、Ｃ．アルビカンスのゲノムＤＮＡのＳａｕ３ＡＩによる部分消化とベクター
ＹＥＰ２４のＢａｍＨＩ制限部位でのクローニングにより調製されたものである
。これらの遺伝子バンクのクローンを、次いで、ディッシュ当たり２０００クロ
ーンの密度でプレートし：次いで、各ディッシュをニトロセルロースフィルター
で覆い、それを０．５Ｍ ＮａＯＨで５分間；１Ｍ トリス(ｐＨ７．７)で５分間
；０．５Ｍ トリス(ｐＨ７．７)、１．２５Ｍ ＮａＣｌで５分間、連続的に処理
する。乾燥後に、これらのフィルターを、２時間、８０℃に保持する。予備ハイ
ブリダイゼーションとハイブリダイゼーションを、４０％ホルムアミド、５×Ｓ
ＳＣ、２０ｍＭ トリス(ｐＨ７．７)、１×デンハート、０．１％ＳＤＳの緩衝
液中で行う。次いで、プローブを、Ｒｅｄｉｐｒｉｍｅ及びｄＣＴＰ３２ｐキッ
ト(Amersham, 英国)を用いてＰ３２で標識する。ハイブリダイゼーションを、４
２℃で１７時間行う。その後、これらのフィルターを、１×ＳＳＣ、０．１％Ｓ
ＤＳで洗い(周囲温度で、各５分ずつ３回)、次いで、６０℃で、各３０分ずつ２
回洗い、次いで、一晩、オートラジオグラフィーにかける。得られたスポットに
対応するコロニーを、低密度での新たなプレーティングとその後のハイブリダイ
ゼーションにより単離し：こうして、８の陽性のクローンが得られ(６００００
から)、その後、それらをＡＢＩ３７７デバイスを用いて配列決定する。配列を
、ＡＢＩソフトウェアを用いて編集してから、ＧＣＧソフトウェアパッケージを
用いて分析する。８クローンの一つは、用いたプローブに対応する完全なコード
配列を含むことが示され：この遺伝子は、ＣａＤＲ４７２といい、この配列は、
SEQ ID NO:１という。
【０１５７】
ＣａＤＲ４７２は、Ｓ．セレビシエのＹＤＲ４７２ｗに対して４７．５％のヌ
クレオチド同一性を有する。
クレオチド同一性を有する。
【０１５８】
アミノ酸への翻訳に関しては、Ｃ．アルビカンスにおいては、ＣＴＧコドンが
セリンに翻訳される(ＣａＤＲ４７２中には、１つのＣＴＧコドンがある)という
事実を考慮した。遺伝子ＣａＤＲ４７２(SEQ ID NO:１)に由来するタンパク質即
ちSEQ ID NO:２(ＰＣａＤＲ４７２)は、ＹＤＲ４７２ｗ由来のタンパク質と５２
．４％のアミノ酸の類似性と４４％のアミノ酸の同一性を有する。
セリンに翻訳される(ＣａＤＲ４７２中には、１つのＣＴＧコドンがある)という
事実を考慮した。遺伝子ＣａＤＲ４７２(SEQ ID NO:１)に由来するタンパク質即
ちSEQ ID NO:２(ＰＣａＤＲ４７２)は、ＹＤＲ４７２ｗ由来のタンパク質と５２
．４％のアミノ酸の類似性と４４％のアミノ酸の同一性を有する。
【０１５９】
遺伝子ＣａＤＲ４７２の完全な配列は、ＣＴＧコドンを含む。
【０１６０】実施例２
：遺伝子ＣａＤＲ４８９のクローニング及び配列決定
操作を、スタンフォードのインターネットサイト
(http://candida.standford.edu/)由来のカンジダ・アルビカンスのゲノムの予
備配列から出発して実施例１におけるように行う。これらの配列の一つは、Ｓ．
セレビシエの遺伝子ＹＤＲ４８９ｗと相同性を有する。この配列において、２つ
のオリゴヌクレオチド即ち：
備配列から出発して実施例１におけるように行う。これらの配列の一つは、Ｓ．
セレビシエの遺伝子ＹＤＲ４８９ｗと相同性を有する。この配列において、２つ
のオリゴヌクレオチド即ち：
【化２】
5' GTTCATGTTT GGTGACTCAG AGCGTCTCAA CTATATTG 3' (SEQ ID NO:２３)
及び
5' TTTGATAAAC ACAGGCTGGT CTAAATCTGG CTC 3' (SEQ ID NO:２４)
を選択した。
【０１６１】
これら２つのオリゴヌクレオチドを用いて、Ｃ．アルビカンスの断片を増幅す
る。クローニング後に、予想される配列に近い２９５塩基対のＣａＤＲ４８９の
いわゆるプローブ配列が得られ:このＣａＤＲ４８９のプローブを、SEQ ID NO:
１６と呼ぶ。ＣａＤＲ４８９のプローブ(SEQ ID NO:１６)に由来するタンパク質
をＹＤＲ４８９ｗのそれと比較したが、これは、これら２つのＡＡ配列間の４１
％の同一性を示す(この比較を、図２に示す)。
る。クローニング後に、予想される配列に近い２９５塩基対のＣａＤＲ４８９の
いわゆるプローブ配列が得られ:このＣａＤＲ４８９のプローブを、SEQ ID NO:
１６と呼ぶ。ＣａＤＲ４８９のプローブ(SEQ ID NO:１６)に由来するタンパク質
をＹＤＲ４８９ｗのそれと比較したが、これは、これら２つのＡＡ配列間の４１
％の同一性を示す(この比較を、図２に示す)。
【０１６２】
Ｃ．アルビカンスの２９５塩基対の断片を、実施例１のように行うＣ．アルビ
カンスのゲノムＤＮＡの部分消化により調製したＣ．アルビカンスの遺伝子バン
クをスクリーニングするためのプローブとして用いた。
カンスのゲノムＤＮＡの部分消化により調製したＣ．アルビカンスの遺伝子バン
クをスクリーニングするためのプローブとして用いた。
【０１６３】
クローニングを実施例１に示したように行い、予備ハイブリダイゼーションと
ハイブリダイゼーションを実施例１に示したように行った後に、４つの陽性クロ
ーンが得られる(４００００から)。得られた配列の配列決定と分析を実施例１に
示したように行い、そうして、用いたプローブに対応する完全なコード配列を含
むことの示されるクローンが得られる(この遺伝子をＣａＤＲ４８９と呼び、こ
の配列をSEQ ID NO:４と呼ぶ)。 ＣａＤＲ４８９は、Ｓ．セレビシエのＹＤＲ４８９ｗと同一の４８．１％のヌク
レオチドを有する。
ハイブリダイゼーションを実施例１に示したように行った後に、４つの陽性クロ
ーンが得られる(４００００から)。得られた配列の配列決定と分析を実施例１に
示したように行い、そうして、用いたプローブに対応する完全なコード配列を含
むことの示されるクローンが得られる(この遺伝子をＣａＤＲ４８９と呼び、こ
の配列をSEQ ID NO:４と呼ぶ)。 ＣａＤＲ４８９は、Ｓ．セレビシエのＹＤＲ４８９ｗと同一の４８．１％のヌク
レオチドを有する。
【０１６４】
遺伝子ＣａＤＲ４８９(SEQ ID NO:３)に由来するタンパク質即ちSEQ ID NO:４
即ちＰｃａＤＲ４８９は、ＹＤＲ４８９由来のタンパク質と５０％のアミノ酸類
似性を有し、３７％のアミノ酸同一性を有する。
即ちＰｃａＤＲ４８９は、ＹＤＲ４８９由来のタンパク質と５０％のアミノ酸類
似性を有し、３７％のアミノ酸同一性を有する。
【０１６５】
遺伝子ＣａＤＲ４８９の完全な配列は、ＣＴＧコドンを含む。
【０１６６】実施例３
：遺伝子ＣａＤＲ５２７のクローニング及び配列決定
操作を、スタンフォードのインターネットサイト
(http://candida.standford.edu/)由来のカンジダ・アルビカンスのゲノムの予
備配列から出発して、実施例１におけるように行う。これらの配列の一つは、Ｓ
．セレビシエの遺伝子ＹＤＲ５２７ｗと相同性を有する。この配列において、２
つのオリゴヌクレオチド即ち：
備配列から出発して、実施例１におけるように行う。これらの配列の一つは、Ｓ
．セレビシエの遺伝子ＹＤＲ５２７ｗと相同性を有する。この配列において、２
つのオリゴヌクレオチド即ち：
【化３】
5' ATCTCTGATA TGAGATTTGG CTTTAAAGGC GA 3' (SEQ ID NO:２５)
及び
5' GGTCTTTTTT CCATCAGCTG CCTCTGTTAT TG 3' (SEQ ID NO:２６)
を選択した。
【０１６７】
これら２つのオリゴヌクレオチドを用いて、Ｃ．アルビカンスの断片を増幅す
る。クローニング後に、予想される配列に近い３９２塩基対のＣａＤＲ５２７の
いわゆるプローブ配列が得られた(このＣａＤＲ５２７のプローブは、SEQ ID NO
:１７と呼ばれる)。このＣａＤＲ５２７のプローブ(SEQ ID NO:１７)に由来する
タンパク質を、ＹＤＲ５２７ｗのそれと比較したが、これは、これら２つのＡＡ
配列間の４１％の同一性を示した(この比較を、図３に示す)。
る。クローニング後に、予想される配列に近い３９２塩基対のＣａＤＲ５２７の
いわゆるプローブ配列が得られた(このＣａＤＲ５２７のプローブは、SEQ ID NO
:１７と呼ばれる)。このＣａＤＲ５２７のプローブ(SEQ ID NO:１７)に由来する
タンパク質を、ＹＤＲ５２７ｗのそれと比較したが、これは、これら２つのＡＡ
配列間の４１％の同一性を示した(この比較を、図３に示す)。
【０１６８】
Ｃ．アルビカンスの３９２塩基対の断片を、実施例１におけるように行うＣ．
アルビカンスのゲノムＤＮＡの部分消化により調製したＣ．アルビカンスの遺伝
子バンクのスクリーニングのためのプローブとして利用した。
アルビカンスのゲノムＤＮＡの部分消化により調製したＣ．アルビカンスの遺伝
子バンクのスクリーニングのためのプローブとして利用した。
【０１６９】
クローニングを実施例１に示したように行い、予備ハイブリダイゼーションと
ハイブリダイゼーションを実施例１に示したように行った後で、７つの陽性クロ
ーンが得られた(４００００から)。これらの得られた配列の配列決定及び分析を
、実施例１に示したように行う。
ハイブリダイゼーションを実施例１に示したように行った後で、７つの陽性クロ
ーンが得られた(４００００から)。これらの得られた配列の配列決定及び分析を
、実施例１に示したように行う。
【０１７０】
こうして、得られた２つのクローンは、各々、用いたプローブの対立遺伝子に
それぞれ対応する完全なコード配列を含むことが示され：この遺伝子はＣａＤＲ
５２７と呼ばれ、２つの対立遺伝子は、従って、１ＣａＤＲ５２７及び２ＣａＤ
Ｒ５２７と呼ばれ、それらの各配列は、それぞれ、SEQ ID NO:５及びSEQ ID NO:
７と呼ばれる。
それぞれ対応する完全なコード配列を含むことが示され：この遺伝子はＣａＤＲ
５２７と呼ばれ、２つの対立遺伝子は、従って、１ＣａＤＲ５２７及び２ＣａＤ
Ｒ５２７と呼ばれ、それらの各配列は、それぞれ、SEQ ID NO:５及びSEQ ID NO:
７と呼ばれる。
【０１７１】
これらの対立遺伝子１ＣａＤＲ５２７と２ＣａＤＲ５２７(SEQ ID NO:５及びS
EQ ID NO:７)の遺伝子が、１３ヌクレオチドだけ異なるということは注意される
。
EQ ID NO:７)の遺伝子が、１３ヌクレオチドだけ異なるということは注意される
。
【０１７２】
遺伝子ＣａＤＲ５２７(第一の対立遺伝子)は、Ｓ．セレビシエのＹＤＲ５２７
ｗに対して５３．８％のヌクレオチド同一性を有する。
ｗに対して５３．８％のヌクレオチド同一性を有する。
【０１７３】
これらの対立遺伝子に由来するタンパク質即ち、第一の対立遺伝子１ＣａＤＲ
５２７に由来するSEQ ID NO:６(ＰＣａＤＲ５２７)及び第二の対立遺伝子１Ｃａ
ＤＲ５２７に由来するSEQ ID NO:８は、それらの間で５アミノ酸だけ異なる。
５２７に由来するSEQ ID NO:６(ＰＣａＤＲ５２７)及び第二の対立遺伝子１Ｃａ
ＤＲ５２７に由来するSEQ ID NO:８は、それらの間で５アミノ酸だけ異なる。
【０１７４】
遺伝子ＣａＤＲ５２７に由来するタンパク質(SEQ ID NO:６)は、ＹＤＲ５２７
に由来するタンパク質と５８．９％のアミノ酸類似性及び４７．９％のアミノ酸
同一性を有する。
に由来するタンパク質と５８．９％のアミノ酸類似性及び４７．９％のアミノ酸
同一性を有する。
【０１７５】
遺伝子ＣａＤＲ５２７の完全な配列は、ＣＴＧコドンを含まない。
【０１７６】実施例４
：遺伝子ＣａＦＬ０２４のクローニング及び配列決定
(方法Ｂ)
スタンフォードのインターネットサイト(http://candida.standford.edu/)は、
カンジダ・アルビカンスのゲノムの予備配列への直接的アクセスを可能にする。
これらの配列の一つは、Ｓ．セレビシエの遺伝子ＹＦＬ０２４ｃとの相同性を有
する。この配列において、２つのオリゴヌクレオチド即ち：
カンジダ・アルビカンスのゲノムの予備配列への直接的アクセスを可能にする。
これらの配列の一つは、Ｓ．セレビシエの遺伝子ＹＦＬ０２４ｃとの相同性を有
する。この配列において、２つのオリゴヌクレオチド即ち：
【化４】
5' ATTCCCACAC CGGACGCTTC 3' (SEQ ID NO:２７)
及び 5' GACAACTCCT CGTACGATAG 3' (SEQ ID NO:２８)
を選択した。
【０１７７】
これら２つのオリゴヌクレオチドを用いて、Ｃ．アルビカンスの断片を増幅す
る。クローニング後に、予想された配列に近い３３５塩基対のＣａＦＬ０２４の
いわゆるプローブ配列が得られ:このＣａＦＬ０２４のプローブは、SEQ ID NO:
１８と呼ばれる。このＣａＦＬ０２４のプローブ(SEQ ID NO:１８)に由来するタ
ンパク質をＹＦＬ０２４ｃのそれと比較したが、これは、これら２つのＡＡ配列
間での６２％の類似性と５８％の同一性を示した(この比較を図４に示す)。
る。クローニング後に、予想された配列に近い３３５塩基対のＣａＦＬ０２４の
いわゆるプローブ配列が得られ:このＣａＦＬ０２４のプローブは、SEQ ID NO:
１８と呼ばれる。このＣａＦＬ０２４のプローブ(SEQ ID NO:１８)に由来するタ
ンパク質をＹＦＬ０２４ｃのそれと比較したが、これは、これら２つのＡＡ配列
間での６２％の類似性と５８％の同一性を示した(この比較を図４に示す)。
【０１７８】
Ｃ．アルビカンスの３３５塩基対の断片を、Ｃ．アルビカンスの遺伝子バンク
のスクリーニングのためのプローブとして利用した(このＣ．ａ．の遺伝子バン
クは、Ｃ．アルビカンスのゲノムＤＮＡのＳａｕＩＩＩＡによる部分消化とベク
ターＹＥＰ−２４中のＢａｍＨＩ制限部位へのクローニングにより調製した)。
これらの遺伝子バンクのクローンを、次いで、ディッシュ当たり２０００クロー
ンの密度でプレートし：次いで、各ディッシュをニトロセルロースフィルターで
覆い、これを１．５Ｍ ＮａＣｌ／０．５Ｍ ＮａＯＨで５分間；１．５Ｍ Ｎａ
Ｃｌ／０．５Ｍ トリス−ＨＣｌ(ｐＨ７．２)／１ｍＭ ＥＤＴＡで３分間(２回)
連続的に処理する。
のスクリーニングのためのプローブとして利用した(このＣ．ａ．の遺伝子バン
クは、Ｃ．アルビカンスのゲノムＤＮＡのＳａｕＩＩＩＡによる部分消化とベク
ターＹＥＰ−２４中のＢａｍＨＩ制限部位へのクローニングにより調製した)。
これらの遺伝子バンクのクローンを、次いで、ディッシュ当たり２０００クロー
ンの密度でプレートし：次いで、各ディッシュをニトロセルロースフィルターで
覆い、これを１．５Ｍ ＮａＣｌ／０．５Ｍ ＮａＯＨで５分間；１．５Ｍ Ｎａ
Ｃｌ／０．５Ｍ トリス−ＨＣｌ(ｐＨ７．２)／１ｍＭ ＥＤＴＡで３分間(２回)
連続的に処理する。
【０１７９】
このＤＮＡを、次いで、フィルター(紫外線架橋剤、Amersham Life Science)
に「架橋」する。
に「架橋」する。
【０１８０】
このプローブ(１００ｎｇ)を、次いで、Ｒｅｄｉｐｒｉｍｅ及びｄＣＴＰキッ
ト(Amersham Life Science)を用いて、ｐ３２で標識する。
ト(Amersham Life Science)を用いて、ｐ３２で標識する。
【０１８１】
これらのフィルターの予備ハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーショ
ンを、３０％のホルムアミド、５×ＳＳＣ、５％のデンハート溶液、１％ ＳＤ
Ｓ、１００μｇ／ｍｌのサケ精子ＤＮＡ及び１０(６)ｃｐｍ／ｍｌのプローブ濃
度の緩衝液中で行い：このハイブリダイゼーションを、４２℃で１６時間にわた
って行う。
ンを、３０％のホルムアミド、５×ＳＳＣ、５％のデンハート溶液、１％ ＳＤ
Ｓ、１００μｇ／ｍｌのサケ精子ＤＮＡ及び１０(６)ｃｐｍ／ｍｌのプローブ濃
度の緩衝液中で行い：このハイブリダイゼーションを、４２℃で１６時間にわた
って行う。
【０１８２】
次いで、これらのフィルターを、各５分ずつ周囲温度で、２×ＳＳＣ／０．１
％ＳＤＳで３回洗い、次いで、各２０分ずつ６０℃で、１×ＳＳＣ／０．１％Ｓ
ＤＳで３回洗う。これらのフィルターを、一晩、オートラジオグラフィーにかけ
る。陽性クローンに対応するコロニー(得られたスポット)を単離して、新たに低
密度でプレートしてからハイブリダイゼーションを行うことによる第二のスクリ
ーニングにかけ：こうして、６つのクローンが得られ(１４４０００から)、それ
らを、次いで、ＡＢＩ３７７デバイスを用いて配列決定する。配列をＡＢＩソフ
トウェアを用いて編集してから、ＧＣＧソフトウェアパッケージを用いて分析す
る。６つのクローンの内の一つが、用いたプローブに対応する完全なコード配列
を含むことが示され：この遺伝子はＣａＦＬ０２４と呼ばれ、この配列はSEQ ID
NO:９と呼ばれる。
％ＳＤＳで３回洗い、次いで、各２０分ずつ６０℃で、１×ＳＳＣ／０．１％Ｓ
ＤＳで３回洗う。これらのフィルターを、一晩、オートラジオグラフィーにかけ
る。陽性クローンに対応するコロニー(得られたスポット)を単離して、新たに低
密度でプレートしてからハイブリダイゼーションを行うことによる第二のスクリ
ーニングにかけ：こうして、６つのクローンが得られ(１４４０００から)、それ
らを、次いで、ＡＢＩ３７７デバイスを用いて配列決定する。配列をＡＢＩソフ
トウェアを用いて編集してから、ＧＣＧソフトウェアパッケージを用いて分析す
る。６つのクローンの内の一つが、用いたプローブに対応する完全なコード配列
を含むことが示され：この遺伝子はＣａＦＬ０２４と呼ばれ、この配列はSEQ ID
NO:９と呼ばれる。
【０１８３】
ＣａＦＬ０２４は、Ｃ．セレビシエのＹＦＬ０２４ｃに対して４９．１％同一
のヌクレオチドを有する。
のヌクレオチドを有する。
【０１８４】
ＣａＦＬ０２４中には、２つのＣＴＧコドンがある。遺伝子ＣａＦＬ０２４(S
EQ ID NO:９)に由来するタンパク質即ちSEQ ID NO:１０(ＰＣａＦＬ０２４)は、
ＹＦＬ０２４ｃに由来するタンパク質と５１．８％のアミノ酸類似性と４４．０
％のアミノ酸同一性を有する。
EQ ID NO:９)に由来するタンパク質即ちSEQ ID NO:１０(ＰＣａＦＬ０２４)は、
ＹＦＬ０２４ｃに由来するタンパク質と５１．８％のアミノ酸類似性と４４．０
％のアミノ酸同一性を有する。
【０１８５】実施例５
：遺伝子ＣａＮＬ２６０のクローニング及び配列決定
操作を、スタンフォードのインターネットサイト
(http://candida.standford.edu/)におけるカンジダ・アルビカンスのゲノムの
予備配列から出発して、実施例４におけるように行う。これらの配列の一つは、
Ｓ．セレビシエの遺伝子ＹＮ１２６０ｃとの相同性を有する。この配列において
、２つのオリゴヌクレオチド即ち：
予備配列から出発して、実施例４におけるように行う。これらの配列の一つは、
Ｓ．セレビシエの遺伝子ＹＮ１２６０ｃとの相同性を有する。この配列において
、２つのオリゴヌクレオチド即ち：
【化５】
5' AGATAATGTATTAAATTTAG 3' (SEQ ID NO:２９)
及び 5' CTCTTAATTTATTTCTTGCC 3' (SEQ ID NO:３０)
を選択した。
【０１８６】
これら２つのオリゴヌクレオチドを用いて、Ｃ．アルビカンスの断片を増幅す
る。クローニング後に、予想される配列に近い３２６塩基対のＣａＮＬ２６０の
いわゆるプローブ配列が得られ：このＣａＮＬ２６０のプローブは、SEQ ID NO:
１９と呼ばれる。ＣａＮＬ２６０のプローブ(SEQ ID NO:１９)に由来するタンパ
ク質をＹＮＬ２６０ｃのそれと比較したが、これは、これら２つのＡＡ配列間の
５６．７％の類似性と４０．３％の同一性を示す(この比較を図５に示す)。
る。クローニング後に、予想される配列に近い３２６塩基対のＣａＮＬ２６０の
いわゆるプローブ配列が得られ：このＣａＮＬ２６０のプローブは、SEQ ID NO:
１９と呼ばれる。ＣａＮＬ２６０のプローブ(SEQ ID NO:１９)に由来するタンパ
ク質をＹＮＬ２６０ｃのそれと比較したが、これは、これら２つのＡＡ配列間の
５６．７％の類似性と４０．３％の同一性を示す(この比較を図５に示す)。
【０１８７】
このＣ．アルビカンスの３２６塩基対の断片を、実施例４におけるように、Ｃ
．アルビカンスのゲノムＤＮＡの部分消化により調製したＣ．アルビカンスの遺
伝子バンクのスクリーニングのためのプローブとして用いた。
．アルビカンスのゲノムＤＮＡの部分消化により調製したＣ．アルビカンスの遺
伝子バンクのスクリーニングのためのプローブとして用いた。
【０１８８】
予備ハイブリダイゼーションとハイブリダイゼーションを実施例４に示したよ
うに行い、２つの陽性クローンが得られた(４００００から)。得られた配列の配
列決定と分析を、実施例４に示したように行い、こうして得られたクローンは、
用いたプローブに対応する完全なコード配列を含むことが示された(この遺伝子
はＣａＮＬ２６０と呼ばれ、この配列はSEQ ID NO:１１と呼ばれる)。
うに行い、２つの陽性クローンが得られた(４００００から)。得られた配列の配
列決定と分析を、実施例４に示したように行い、こうして得られたクローンは、
用いたプローブに対応する完全なコード配列を含むことが示された(この遺伝子
はＣａＮＬ２６０と呼ばれ、この配列はSEQ ID NO:１１と呼ばれる)。
【０１８９】
ＣａＮＬ２６０は、Ｓ．セレビシエのＹＮＬ２６０ｃに対して同一のヌクレオ
チド４７．６％を有する。
チド４７．６％を有する。
【０１９０】
遺伝子ＣａＮＬ２６０(SEQ ID NO:１１)由来のタンパク質即ちSEQ ID NO:１２
(ＰＣａＮＬ２６０)は、ＹＮＬ２６０ｃ由来のタンパク質と５０．７％のアミノ
酸類似性と３２．６％のアミノ酸同一性を有する。
(ＰＣａＮＬ２６０)は、ＹＮＬ２６０ｃ由来のタンパク質と５０．７％のアミノ
酸類似性と３２．６％のアミノ酸同一性を有する。
【０１９１】
ＣａＮＬ２６０中には、ＣＴＧコドンはない。
【０１９２】実施例６
：遺伝子ＣａＤＲ３６１のクローニング及び配列決定
操作を、カンジダ・アルビカンスのゲノムの予備配列から出発して実施例４に
おけるように行い：スタンフォードのインターネットサイト(http://candida.st
andford.edu/)は、カンジダ・アルビカンスのゲノムの予備配列への直接的アク
セスを可能にする。
おけるように行い：スタンフォードのインターネットサイト(http://candida.st
andford.edu/)は、カンジダ・アルビカンスのゲノムの予備配列への直接的アク
セスを可能にする。
【０１９３】
これらの配列の一つは、Ｓ．セレビシエの遺伝子ＹＤＲ３６１ｃとの相同性を
有する。この配列において、２つのオリゴヌクレオチド即ち：
有する。この配列において、２つのオリゴヌクレオチド即ち：
【化６】
5' CCTCAAATTGATTTCCATGC 3' (SEQ ID NO:３１)
及び 5' GTGGAATCACTTCAACTGGC 3' (SEQ ID NO:３２)
を選択した。
【０１９４】
これら２つのオリゴヌクレオチドを用いて、Ｃ．アルビカンスの断片を増幅す
る。クローニング後に、予想される配列に近い３７４塩基対のＣａＤＲ３６１の
いわゆるプローブ配列が得られ：このＣａＤＲ３６１のプローブは、SEQ ID NO:
２０と呼ばれる。ＣａＤＲ３６１のプローブ(SEQ ID NO:２０)に由来するタンパ
ク質をＹＤＲ３６１ｃのそれと比較したが、これは、これら２つのＡＡ配列間の
５２．４％の類似性と４０．０％の同一性を示す(この比較を図６に示す)。
る。クローニング後に、予想される配列に近い３７４塩基対のＣａＤＲ３６１の
いわゆるプローブ配列が得られ：このＣａＤＲ３６１のプローブは、SEQ ID NO:
２０と呼ばれる。ＣａＤＲ３６１のプローブ(SEQ ID NO:２０)に由来するタンパ
ク質をＹＤＲ３６１ｃのそれと比較したが、これは、これら２つのＡＡ配列間の
５２．４％の類似性と４０．０％の同一性を示す(この比較を図６に示す)。
【０１９５】
このＣ．アルビカンスの３７４塩基対の断片を、Ｃ．アルビカンスのゲノムＤ
ＮＡをＳａｕ１１／Ａで部分消化してベクターＹＥＰ２４(選択マーカーＴｒｐ)
のＢａｍＨＩ制限部位にクローン化することにより調製したＣ．アルビカンスの
遺伝子バンクをスクリーニングするためのプローブとして利用した。
ＮＡをＳａｕ１１／Ａで部分消化してベクターＹＥＰ２４(選択マーカーＴｒｐ)
のＢａｍＨＩ制限部位にクローン化することにより調製したＣ．アルビカンスの
遺伝子バンクをスクリーニングするためのプローブとして利用した。
【０１９６】
予備ハイブリダイゼーションとハイブリダイゼーションを実施例４に示したよ
うに行い、４つの陽性クローンを得る(４００００から)。得られた配列の配列決
定と分析を実施例４に示したように行い、そうして、用いたプローブに対応する
完全なコード配列を含むことが示されたクローンが得られる(この遺伝子はＣａ
ＤＲ３６１と呼ばれ、この配列はSEQ ID NO:１３と呼ばれる)。
うに行い、４つの陽性クローンを得る(４００００から)。得られた配列の配列決
定と分析を実施例４に示したように行い、そうして、用いたプローブに対応する
完全なコード配列を含むことが示されたクローンが得られる(この遺伝子はＣａ
ＤＲ３６１と呼ばれ、この配列はSEQ ID NO:１３と呼ばれる)。
【０１９７】
ＣａＤＲ３６１は、Ｓ．セレビシエのＹＤＲ３６１ｃと同一の５３．９％のヌ
クレオチドを有する。
クレオチドを有する。
【０１９８】
ＣａＤＲ３６１中には、ＣＴＧコドンはない。
【配列表】
【図１】
本発明のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の一つの調製のために用いたプロー
ブに由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の出発
点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子由来のタンパク質の配列との比較を記載した図
である。
ブに由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の出発
点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子由来のタンパク質の配列との比較を記載した図
である。
【図２】
本発明のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の一つの調製のために用いたプロー
ブに由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の出発
点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子由来のタンパク質の配列との比較を記載した図
である。
ブに由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の出発
点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子由来のタンパク質の配列との比較を記載した図
である。
【図３】
本発明のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の一つの調製のために用いたプロー
ブに由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の出発
点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子由来のタンパク質の配列との比較を記載した図
である。
ブに由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の出発
点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子由来のタンパク質の配列との比較を記載した図
である。
【図４】
本発明のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の一つの調製のために用いたプロー
ブに由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の出発
点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子由来のタンパク質の配列との比較を記載した図
である。
ブに由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の出発
点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子由来のタンパク質の配列との比較を記載した図
である。
【図５】
本発明のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の一つの調製のために用いたプロー
ブに由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の出発
点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子由来のタンパク質の配列との比較を記載した図
である。
ブに由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の出発
点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子由来のタンパク質の配列との比較を記載した図
である。
【図６】
本発明のカンジダ・アルビカンスの遺伝子の一つの調製のために用いたプロー
ブに由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の出発
点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子由来のタンパク質の配列との比較を記載した図
である。
ブに由来するタンパク質の、カンジダ・アルビカンスのこの遺伝子の調製の出発
点として採ったＳ．ｃ．の遺伝子由来のタンパク質の配列との比較を記載した図
である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｃ０７Ｋ 14/40 Ｃ０７Ｋ 16/14 ４Ｃ０８５
16/14 Ｃ１２Ｎ 1/19 ４Ｈ０４５
Ｃ１２Ｎ 1/19 1/21
1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ
Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ
Ｇ０１Ｎ 33/15 33/50 Ｚ
33/50 33/53 Ｄ
33/53 33/569 Ａ
33/569 Ｃ１２Ｒ 1:865
//(Ｃ１２Ｎ 1/19 1:19
Ｃ１２Ｒ 1:865） Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
(Ｃ１２Ｎ 1/21
Ｃ１２Ｒ 1:19）
(Ｃ１２Ｐ 21/02
Ｃ１２Ｒ 1:19）
(Ｃ１２Ｐ 21/02
Ｃ１２Ｒ 1:865）
Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 CB21 DA13 DA36
FB02 FB03
4B024 AA01 AA13 BA80 CA04 DA06
DA12 EA04 GA11 HA12
4B064 AG01 AG27 AG31 CA02 CA06
CA19 CC24 DA01 DA15
4B065 AA26X AA73Y AA80X AB01
AC14 BA02 CA24 CA44 CA46
4C084 AA17 MA01 NA14 ZB352
4C085 AA13 AA14 CC32 DD62 EE01
GG01
4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10
CA15 DA76 DA86 EA29 EA52
FA74
Claims (27)
- 【請求項１】 下記の群から選択するヌクレオチド配列をそれぞれ含む単離
したポリヌクレオチド： ａ）SEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:
１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４から選択する配列と同じ機能を有し且
つ相同なアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少
なくとも５０％の又は少なくとも６０％の、好ましくは少なくとも７０％の同一
性を有するポリヌクレオチド ｂ）ポリヌクレオチドａ）の相補的ポリヌクレオチド ｃ）ａ）及びｂ）で規定したポリヌクレオチドの少なくとも１５の連続する塩
基を含むポリヌクレオチド。 - 【請求項２】 ポリヌクレオチドが、ＤＮＡである、請求項１で規定したポ
リヌクレオチド。 - 【請求項３】 ポリヌクレオチドが、ＲＮＡである、請求項１で規定したポ
リヌクレオチド。 - 【請求項４】 SEQ ID NO:１、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７
、SEQ ID NO:９、SEQ ID NO:１１及びSEQ ID NO:１３から選択するヌクレオチド
配列をそれぞれ含む、請求項２で規定したポリヌクレオチド。 - 【請求項５】 ＤＮＡ配列が、それぞれカンジダ・アルビカンスのタンパク
質(タンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２
ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１と
同じ機能を有するもの)をコードする遺伝子のものであり、各々がSEQ ID NO:１
、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:５、SEQ ID NO:７、SEQ ID NO:９、SEQ ID NO:１１
及びSEQ ID NO:１４から選択するヌクレオチド配列を含むことを特徴とする、請
求項１、２及び４で規定したポリヌクレオチド。 - 【請求項６】 SEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８
、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４から選択するアミノ酸配
列をそれぞれコードする、請求項５に記載の遺伝子のＤＮＡ配列。 - 【請求項７】 請求項５及び６に記載のタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣ
ａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、
ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６１をコードするＤＮＡ配列並びにこれらとハ
イブリダイズし及び／又はこれらの配列若しくはその断片と有意の相同性を有し
及び同じ機能を有するタンパク質をコードするＤＮＡ配列。 - 【請求項８】 タンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａ
ＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣ
ａＤＲ３６１と同じ活性を有するタンパク質をコードする少なくとも一つのヌク
レオチドの抑制、挿入及び／又は置換により導入された改変を含む、請求項５〜
７に記載のＤＮＡ配列。 - 【請求項９】 請求項５〜８の一つに記載のＤＮＡ配列並びに該ＤＮＡ配列
と少なくとも５０％の又は少なくとも６０％の好ましくは少なくとも７０％のヌ
クレオチド配列相同性を有するＤＮＡ配列。 - 【請求項１０】 請求項５〜９の一つに記載のＤＮＡ配列並びに類似の機能
を有するタンパク質をコードするＤＮＡ配列であって、該タンパク質の各ＡＡ配
列が該ＤＮＡ配列によりコードされるＡＡ配列と少なくとも４０％の、特には４
５％の又は少なくとも５０％の、むしろ少なくとも６０％の、好ましくは少なく
とも７０％の相同性を有する、上記のＤＮＡ配列。 - 【請求項１１】 請求項５〜１０の一つに記載のＤＮＡ配列によりコードさ
れるSEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:６、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１
０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４から選択するアミノ酸配列をそれぞれ有
するポリペプチド及びこれらのポリペプチドの類似体。 - 【請求項１２】 アミノ酸配列SEQ ID NO:２、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:６
、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:１０、SEQ ID NO:１２及びSEQ ID NO:１４をそれぞ
れ有する組換えタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ
５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤ
Ｒ３６１の製造方法であって、これらのタンパク質の各々を製造するために、請
求項５〜１０の一つに記載のこのタンパク質をコードするＤＮＡ配列の適当な宿
主での発現とその後の該組換えタンパク質の単離精製を含む当該製造方法。 - 【請求項１３】 請求項５〜１０の一つに記載のＤＮＡ配列の一つをそれぞ
れ含む発現ベクター。 - 【請求項１４】 請求項１３に記載のベクターでトランスフォームした宿主
細胞。 - 【請求項１５】 宿主細胞が、ＤＨ５ａｌｐｈａ大腸菌又はＸＬ１−Ｂｌｕ
ｅ大腸菌である、請求項１２で規定した方法。 - 【請求項１６】 宿主細胞が、サッカロミセス・セレビシエである、請求項
１３で規定した方法。 - 【請求項１７】 ＣＮＣＭに、番号Ｉ−２２１４、Ｉ−２２１５、Ｉ−２２
１６、Ｉ−２２１７、Ｉ−２２１１、Ｉ−２２１２及びＩ−２２１３にて寄託さ
れた少なくとも一つのプラスミド。 - 【請求項１８】 抗カビ産物のスクリーニング方法であって、請求項１１で
規定したタンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣａＤＲ５２７
、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、ＰＣａＤＲ３６
１の一つの活性を、抗カビ特性を測定することを希望する各産物の存在下で測定
し、この活性に対する阻害効果を有する産物を選択する段階を含むことを特徴と
する、当該スクリーニング方法。 - 【請求項１９】 請求項１８に記載の方法により選択した産物の抗カビ剤を
得るための利用。 - 【請求項２０】 カンジダ・アルビカンスの遺伝子の又は請求項５〜１１の
一つに記載の遺伝子によりコードされるタンパク質の、これらの遺伝子によりコ
ードされるカンジダ・アルビカンスのタンパク質のインヒビターとしての請求項
１９に記載の抗カビ特性を有する産物の選択ための利用。 - 【請求項２１】 少なくとも一種の請求項２０で規定したカンジダ・アルビ
カンスのタンパク質のインヒビターを活性成分として含む医薬組成物。 - 【請求項２２】 請求項２１で規定した組成物の抗カビ剤としての利用。
- 【請求項２３】 請求項１１で規定したポリペプチド又はこのポリペプチド
の同じ機能を有する断片の、哺乳動物を病気から防護することを可能にする抗体
を生成させる医薬の接種により哺乳動物における免疫応答を誘導することを意図
した該医薬の製造のための利用。 - 【請求項２４】 請求項１１で規定したポリペプチド又は同じ機能を有する
このポリペプチドの断片に対する抗体。 - 【請求項２５】 タンパク質ＰＣａＤＲ４７２、ＰＣａＤＲ４８９、１ＰＣ
ａＤＲ５２７、２ＰＣａＤＲ５２７、ＰＣａＦＬ０２４、ＰＣａＮＬ２６０、Ｐ
ＣａＤＲ３６１又はこれらのタンパク質の断片の何れか一つに対する、請求項２
４で規定した抗体。 - 【請求項２６】 遺伝子ＣａＤＲ４７２、ＣａＤＲ４８９、１ＣａＤＲ５２
７、２ＣａＤＲ５２７、ＣａＦＬ０２４、ＣａＮＬ２６０及びＣａＤＲ３６１の
何れか一つの又は請求項５〜１１の一つに記載の遺伝子によりコードされるタン
パク質の一つの、病原性酵母カンジダ・アルビカンスにより引き起こされる病気
の診断又は治療に利用することのできる組成物の製造のための利用。 - 【請求項２７】 カビの感染の診断のためのキットであって、請求項５〜１
０の一つで規定したＤＮＡ配列又は類似の機能を有する配列又はこの配列の機能
的断片、この配列によりコードされるポリペプチド又は同じ機能を有するポリペ
プチド断片又はこのＤＮＡ配列によりコードされるかかるポリペプチド若しくは
このポリペプチドの断片に対する抗体を含む当該キット。
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