JP2003339374A - Nucleic acid separation column, device and nucleic acid extraction method - Google Patents
Nucleic acid separation column, device and nucleic acid extraction methodInfo
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Abstract
Description
【0001】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は生体試料などから核
酸(DNAやRNA)を抽出する核酸抽出カラム、装置及び核
酸抽出方法に係り、特にPCR法などで核酸を増幅し高
感度に検出する目的に対して、十分な純度を有する核酸
を抽出するカラム、装置、方法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a nucleic acid extraction column, an apparatus and a nucleic acid extraction method for extracting nucleic acid (DNA or RNA) from a biological sample or the like, and in particular to the purpose of amplifying nucleic acid by PCR etc. and detecting it with high sensitivity. On the other hand, the present invention relates to a column, a device, and a method for extracting a nucleic acid having sufficient purity.
【0002】[0002]
【従来の技術】固相抽出カラムを用いる装置として、W
O98/53912に示される公知例がある。この公知
例では複数の試料を同時に処理するため、多数のカラム
を2次元に配列した一体化カラムを用いる。これを図1
6にしめす。この一体化カラムは、複数のカラム(コン
パートメント228)を搭載したキャリアーボディ226とし
て形成される。個々のコンパートメント228内部には核
酸を吸着する担体234、コンパートメント228の下端には
吐出孔232が設けられている。この一体化カラムを真
空チャンバーの上部開口部に気密に設置することにより
真空チャンバーを形成する。真空チャンバー内を減圧す
る事により、カラム内の溶液を吸着担体を通してろ過す
る操作を繰り返し、いわゆる吸引法による固相抽出を行
う。核酸を抽出する場合は、核酸の担体への吸着、担体
の洗浄、核酸の担体からの脱着・回収という一連の工程
を行う。回収率を増やすため、個々のカラムの形状は吸
着担体が充填されている部分までが太く、その下部の溶
液の吐出孔部分が狭い円筒状であり、回収液を回収容器
の中心部分に吐出する。この公知例のカラムの吐出孔23
2の先端は露出している。2. Description of the Related Art As an apparatus using a solid phase extraction column, W
There is a known example shown in O98 / 53912. In this known example, since a plurality of samples are processed at the same time, an integrated column in which a large number of columns are arranged two-dimensionally is used. Figure 1
Shown at 6. This integrated column is formed as a carrier body 226 carrying a plurality of columns (compartments 228). A carrier 234 for adsorbing nucleic acid is provided inside each compartment 228, and a discharge hole 232 is provided at the lower end of the compartment 228. A vacuum chamber is formed by hermetically installing this integrated column in the upper opening of the vacuum chamber. By depressurizing the inside of the vacuum chamber, the operation of filtering the solution in the column through the adsorption carrier is repeated, and the solid phase extraction by the so-called suction method is performed. When extracting a nucleic acid, a series of steps including adsorption of the nucleic acid to the carrier, washing of the carrier, desorption and recovery of the nucleic acid from the carrier are performed. In order to increase the recovery rate, the shape of each column is thick up to the part filled with the adsorption carrier, and the discharge hole part of the solution below is a cylindrical shape, and the recovery liquid is discharged to the central part of the recovery container. . The discharge hole 23 of the column of this known example
The tip of 2 is exposed.
【0003】また、QIAGEN社プロダクトガイド2001 p.3
13に示される第2の公知例を図17に示す。この第2の
公知例も個々のカラム(コンパートメント228)内部に
は核酸を吸着する担体234、その下端には吐出孔232
が設けられている。コンパートメント228を複数搭載し
たキャリアーボディ226として、一体化カラムが形成さ
れる。この第2の公知例では、吐出孔の付け根周囲に隔
壁205が設けられているが、吐出孔232の先端は隔壁205
の外部に露出している。QIAGEN Product Guide 2001 p.3
A second known example shown in 13 is shown in FIG. Also in this second known example, a carrier 234 for adsorbing nucleic acid is provided inside each column (compartment 228), and a discharge hole 232 is provided at the lower end thereof.
Is provided. An integrated column is formed as a carrier body 226 having a plurality of compartments 228 mounted therein. In this second known example, the partition wall 205 is provided around the root of the discharge hole, but the tip of the discharge hole 232 is at the partition wall 205.
Exposed to the outside.
【0004】[0004]
【発明が解決しようとする課題】上記従来技術によるカ
ラムを複数使用して複数の異なる生体試料からそれぞれ
核酸を抽出する場合、第1のカラムから吐出された第1の
試料由来の核酸を含む溶液が飛沫となって飛散し、その
飛沫が第2のカラムの吐出孔付近に付着し、最終的に第2
のカラムの回収液に混入する、あるいは直接第2のカラ
ムの回収液に混入するという試料相互間の混入(クロス
コンタミネーション)の現象が新たに見いだされた。飛
沫の量は微小であるが、従来技術によって得られた核酸
をPCR反応など増幅率の大きい方法に使用する場合
は、微量のクロスコンタミネーションが大きく増幅され
る。その結果、第1の生体試料由来の核酸があたかも第2
の生体試料中に存在したかのごとき誤った結果をもたら
し、大きな誤差要因となる。特に、ウイルスによる感染
症等の診断用途では、例えば第1の生体試料を提供した
被験者が陽性の場合、第2の生体試料を提供した被験者
が本来陰性であっても、上記のごときクロスコンタミネ
ーションが起きると、第2の被験者の診断結果として偽
陽性の結果をもたらすことになり大きな問題となる。When nucleic acids are respectively extracted from a plurality of different biological samples using a plurality of columns according to the above-mentioned conventional technique, a solution containing the nucleic acids derived from the first sample discharged from the first column. Becomes droplets and scatters, and the droplets adhere to the vicinity of the discharge hole of the second column and finally become the second droplet.
The phenomenon of contamination between samples (cross contamination), that is, it is mixed in the recovered liquid of the column of 1 or directly into the recovered liquid of the second column, was newly found. The amount of droplets is very small, but when the nucleic acid obtained by the conventional technique is used in a method having a large amplification rate such as a PCR reaction, a small amount of cross contamination is greatly amplified. As a result, the nucleic acid derived from the first biological sample is as if it were the second nucleic acid.
The result is erroneous, as if it were present in the biological sample, and is a major error factor. In particular, in the case of use in diagnosing infectious diseases caused by viruses, for example, when the subject who provided the first biological sample is positive, even when the subject who provided the second biological sample is originally negative, cross-contamination as described above When this occurs, it causes a false positive result as the diagnosis result of the second subject, which is a big problem.
【0005】本発明は上記の問題に鑑みてなされたもの
で、複数の試料から、複数の固相抽出カラムを用い、自
動的にかつ迅速に核酸を抽出する装置において、試料相
互間のクロスコンタミネーションを防止し、臨床診断を
高精度に実施するために十分な高純度の核酸を抽出する
装置を提供することを目的とする。The present invention has been made in view of the above problems, and in an apparatus for automatically and rapidly extracting nucleic acids from a plurality of samples using a plurality of solid-phase extraction columns, cross contamination between the samples is performed. It is an object of the present invention to provide a device for preventing nucleic acid and for extracting a nucleic acid of high purity sufficient for highly accurate clinical diagnosis.
【0006】[0006]
【課題を解決するための手段】本発明は複数の固相抽出
カラムの間にミストを隔離する隔離部材を設け、第1の
カラムの吐出孔から発生しうるミスト等を第2のカラム
の吐出孔から隔離することにより、クロスコンタミネー
ションを防止する。隔離部材としては、隔壁、フィル
タ、延長筒、保持チャンバーなどが有効である。隔壁や
フィルタは好ましくはカラムと一体に形成され、延長筒
は好ましくはカラムと着脱可能に設けられ、保持チャン
バは好ましくはカラムと別体に設けられる。According to the present invention, a separating member for separating mist is provided between a plurality of solid phase extraction columns, and mist or the like that may be generated from the discharge holes of the first column is discharged to the second column. Isolation from the holes prevents cross contamination. A partition wall, a filter, an extension cylinder, a holding chamber and the like are effective as the separating member. The partition wall and the filter are preferably formed integrally with the column, the extension cylinder is preferably provided detachably from the column, and the holding chamber is preferably provided separately from the column.
【0007】隔壁はカラムの吐出孔をその内部に収納し
て外部から遮蔽することにより、複数のカラムの吐出孔
同士を互いに隔離する。フィルタは回収容器と接触して
回収容器内部の空間と外部の空間との間を2重に隔離す
ることにより、各回収容器内部に配置される各カラムの
吐出孔同士を4重に隔離する。延長筒はカラムの吐出孔
の外面に隙間無く着脱可能に設けられ、吐出孔を遮蔽す
ることにより、複数のカラムの吐出孔同士を互いに隔離
する。保持チャンバは、カラムの下部を収納するカラム
収納空間をカラム毎に独立に有することにより、各カラ
ムの吐出孔同士を互いに隔離する。The partition wall separates the discharge holes of a plurality of columns from each other by accommodating the discharge holes of the columns and shielding them from the outside. The filter is in contact with the collection container to doubly separate the space inside the collection container from the space outside, so that the ejection holes of each column arranged inside each collection container are quadrupled. The extension cylinder is detachably provided on the outer surface of the discharge hole of the column without a gap, and shields the discharge hole to isolate the discharge holes of the plurality of columns from each other. The holding chamber has a column housing space for housing the lower part of the column independently for each column, thereby separating the ejection holes of each column from each other.
【0008】なお、上記の第1、第2の公知例とも、カ
ラムの吐出孔を覆った隔壁は設けられていない。It should be noted that neither the above-mentioned first nor second known example has a partition wall covering the ejection holes of the column.
【0009】何れの隔離部材を用いる場合もカラムの吐
出孔同士を互いに隔離するため、第1のカラムの吐出孔
から吐出した液滴やミストが、第2のカラムの吐出孔へ
付着することが防止され、それが第2のカラムの回収液
に混入するコンタミネーションも防止され、結果として
第2の試料の診断結果が偽陽性となるなどの信頼性低下
を防止できる。本発明の好ましい実施例によれば、隔離
部材を用いない従来例と比較して、隔壁の設置によりミ
ストの混入が概ね3桁以上、フィルタの設置により約5
桁抑制され、延長筒や保持チャンバの設置により、ミス
トの混入を実質的に皆無とすることができた。Since any of the isolation members is used to isolate the ejection holes of the column from each other, droplets or mist ejected from the ejection holes of the first column may adhere to the ejection holes of the second column. It is also possible to prevent the contamination of the recovered liquid of the second column from being mixed, and as a result, it is possible to prevent a decrease in reliability such as a false positive diagnostic result of the second sample. According to the preferred embodiment of the present invention, as compared with the conventional example which does not use the separating member, the installation of the partition wall causes the mixing of mist by about 3 digits or more, and the installation of the filter provides about 5 digits.
By suppressing the digits, and by installing the extension cylinder and the holding chamber, it was possible to substantially eliminate mixing of mist.
【0010】[0010]
【発明の実施の形態】〔実施の形態1〕本発明の第1の
実施例の構成を図1から図4を用いて以下に説明する。DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS [Embodiment 1] The configuration of a first embodiment of the present invention will be described below with reference to FIGS. 1 to 4.
【0011】図1は本発明の第1の実施例による固相抽
出カラム1の構成図である。2は担体、3は注入孔、4
は吐出孔、5は隔壁、6は上部中空筒、100は下部中空
筒、101は中空円錐である。カラム1の基本骨格は、上
部中空筒6,中空円錐101、下部中空筒100の3つ中空体
が接合したものであり、さらに中空円錐101の斜面にお
いて中空円筒状の隔壁5が接合する。上部中空筒6は上
端に注入孔3を有し、内部下方に担体2を保持する。下
部中空筒100は下端に吐出孔4を有する。FIG. 1 is a block diagram of a solid phase extraction column 1 according to the first embodiment of the present invention. 2 is a carrier, 3 is an injection hole, 4
Is a discharge hole, 5 is a partition wall, 6 is an upper hollow cylinder, 100 is a lower hollow cylinder, and 101 is a hollow cone. The basic skeleton of the column 1 is formed by joining three hollow bodies of an upper hollow cylinder 6, a hollow cone 101, and a lower hollow cylinder 100, and a hollow cylindrical partition wall 5 is joined on the slope of the hollow cone 101. The upper hollow cylinder 6 has an injection hole 3 at the upper end and holds the carrier 2 below the inside. The lower hollow cylinder 100 has a discharge hole 4 at the lower end.
【0012】本実施例においては隔壁5の内部に吐出孔
4が配置される。つまり吐出孔4の下端よりも隔壁5の
下端の方が下に位置する。即ち、下部中空筒100の長さ
は、隔壁5の長さよりも長く形成されている。より具体
的には、吐出孔4の下端からの隔壁5の下端までの上下
(中心軸)方向の距離をL(下方向を正とする)、吐出
孔4の中心から隔壁5までの左右(半径)方向の距離を
Mとしたとき、L=+16mm、M=7mmとした。従
って、隔壁下端の開口面が吐出孔4において張る立体角
ωは2π(1−cosθ)=0.53[sr]である。ミスト発生
防止の観点からはωを抑制する、換言するとLを大きく
Mを小さくするのが好ましいが、Mの下限は回収容器の
口径で決まり、ωのL依存性はシグモイド型でありL>
15の場合はLの増大によるωの低減効果は飽和する傾
向となり、またカラムの取扱簡便性を考慮する必要もあ
るため、上記寸法を採用した。In this embodiment, the discharge hole 4 is arranged inside the partition wall 5. That is, the lower end of the partition wall 5 is located below the lower end of the discharge hole 4. That is, the length of the lower hollow cylinder 100 is formed longer than the length of the partition wall 5. More specifically, the distance in the up-down (center axis) direction from the lower end of the discharge hole 4 to the lower end of the partition wall 5 is L (the downward direction is positive), and the distance from the center of the discharge hole 4 to the partition wall 5 ( When the distance in the (radius) direction is M, L = + 16 mm and M = 7 mm. Therefore, the solid angle ω formed by the opening surface at the lower end of the partition wall at the discharge hole 4 is 2π (1-cos θ) = 0.53 [sr]. From the viewpoint of preventing mist generation, it is preferable to suppress ω, in other words, to make L large and small M, but the lower limit of M is determined by the diameter of the recovery container, and the L dependence of ω is a sigmoid type and L>
In the case of 15, the effect of reducing ω by increasing L tends to be saturated, and it is necessary to consider the handleability of the column.
【0013】本実施例においては、核酸を吸着するため
の担体2の材料としてWhatman(R)社製ガラス繊維ろ紙GF
/F型を使用したが、各種石英繊維ろ紙、ガラスウールや
石英ウール、シリカを表面に有する粒子やメッシュ、不
織布などを用いてもよい。In this embodiment, the material of the carrier 2 for adsorbing nucleic acid is a glass fiber filter paper GF manufactured by Whatman (R).
Although the / F type is used, various types of quartz fiber filter paper, glass wool or quartz wool, particles or mesh having silica on the surface, non-woven fabric, etc. may be used.
【0014】図2は本発明第1の実施例による自動抽出
装置20の構成図である。7はカラムホルダ、8は廃液
槽、9は回収槽、10は吸気孔、11はカバー、12は
廃液孔、13は廃液チューブ、14はトラップ、15、
15’は排気チューブ、16、16’はフィルタ、1
7、17’は電磁弁、18は真空ポンプ、19は回収容
器、25は集塵機構、26は吸気機構、27は排気機構
である。カラムホルダ7は、廃液槽8の上部、回収槽9
の上部のいずれにも設置可能であり、図2には廃液槽8
の上部に設置した状態を示した。回収槽9には回収容器
19が保持される。以上の装置主要部はカバー11によ
り、カバー閉時、気密に覆われる。廃液槽8の廃液孔1
2は廃液チューブ13を介して、トラップ14に接続さ
れる。トラップ14と、回収槽9の吸気口10は、それ
ぞれ排気チューブ15,15’、フィルタ16,1
6’、電磁弁17,17’を介して、真空ポンプ18に
接続される。集塵機構25、吸気機構26により、カバ
ー閉時、装置内部の空気が清浄に維持され、排気機構2
7により、内部の気圧が大気圧に維持される。自動抽出
装置20は以上の構成要素を含み、図示は省略したがさ
らにそれらの制御機構の他、カラムホルダの移動機構、
試薬類、自動分注機構などを備える。FIG. 2 is a block diagram of an automatic extraction device 20 according to the first embodiment of the present invention. 7 is a column holder, 8 is a waste liquid tank, 9 is a recovery tank, 10 is an intake hole, 11 is a cover, 12 is a waste liquid hole, 13 is a waste liquid tube, 14 is a trap, 15,
15 'is an exhaust tube, 16 and 16' are filters, 1
Reference numerals 7 and 17 'are electromagnetic valves, 18 is a vacuum pump, 19 is a recovery container, 25 is a dust collecting mechanism, 26 is an intake mechanism, and 27 is an exhaust mechanism. The column holder 7 includes an upper part of the waste liquid tank 8 and a recovery tank 9
It can be installed on any of the upper parts of the
It is shown installed on top of. A collection container 19 is held in the collection tank 9. The above-mentioned main part of the apparatus is covered with the cover 11 airtightly when the cover is closed. Waste liquid hole 1 of the waste liquid tank 8
2 is connected to a trap 14 via a waste liquid tube 13. The trap 14 and the intake port 10 of the recovery tank 9 are provided with exhaust tubes 15 and 15 ′, filters 16 and 1, respectively.
6'and solenoid valves 17, 17 'are connected to the vacuum pump 18. When the cover is closed, the air inside the apparatus is kept clean by the dust collecting mechanism 25 and the intake mechanism 26, and the exhaust mechanism 2
By 7, the internal atmospheric pressure is maintained at atmospheric pressure. The automatic extractor 20 includes the above-mentioned components, and although not shown, a control mechanism for them and a column holder moving mechanism,
Equipped with reagents and automatic dispensing mechanism.
【0015】図3は、本発明第1の実施例による自動抽
出装置の廃液チャンバー21とカラム1の断面概略図であ
る。廃液チャンバー21は、カラムホルダ7と廃液槽8と
から構成される。図3の断面にはカラム1を4本例示し
たが、カラムの本数はさらに多くすることも少なくする
こともできる。カラムホルダ7は、底面が解放された中
空体であり、上面にはカラム1を気密に保持する開口部
を有する。廃液槽8は上面が解放された中空体であり、
廃液孔12を有する。カラム1、カラムホルダ7、廃液
槽8同士の接合部分は脱着可能で、o-リング等(図示省
略)により接合部分の気密が保たれる。図4は、本発明
第1の実施例による自動抽出装置の回収チャンバー22、
カラム1、回収容器19の断面概略図である。回収チャン
バー22は、カラムホルダ7と回収槽9とから構成され
る。回収槽9は上面が解放された中空体であり、吸気口
10を有する。カラム1、カラムホルダ7、回収槽9同
士の接合部分は脱着可能で、o-リング等(図示省略)に
より気密が保たれる。また、図4では、回収容器19の
上端を、吐出孔4よりも上側に設けている。FIG. 3 is a schematic sectional view of the waste liquid chamber 21 and the column 1 of the automatic extraction apparatus according to the first embodiment of the present invention. The waste liquid chamber 21 includes a column holder 7 and a waste liquid tank 8. Although four columns 1 are illustrated in the cross section of FIG. 3, the number of columns can be further increased or decreased. The column holder 7 is a hollow body whose bottom surface is open, and has an opening on the top surface that holds the column 1 in an airtight manner. The waste liquid tank 8 is a hollow body whose upper surface is open,
It has a waste liquid hole 12. The joint between the column 1, the column holder 7, and the waste liquid tank 8 can be detached, and the joint is kept airtight by an o-ring or the like (not shown). FIG. 4 shows the recovery chamber 22 of the automatic extraction device according to the first embodiment of the present invention.
3 is a schematic cross-sectional view of a column 1 and a recovery container 19. FIG. The recovery chamber 22 includes a column holder 7 and a recovery tank 9. The recovery tank 9 is a hollow body having an open upper surface, and has an intake port 10. The joint portion between the column 1, the column holder 7, and the recovery tank 9 can be detached and kept airtight by an o-ring or the like (not shown). Further, in FIG. 4, the upper end of the recovery container 19 is provided above the discharge hole 4.
【0016】次に、本発明第1の実施例の動作を、図1
から図5までを用いて説明する。図5は本発明第1の実
施例による全血試料からの核酸抽出工程を示すフロー図
である。31は分解工程、32は添加液混合工程、33
は吸着工程、34は洗浄工程、35は回収工程であり、
各工程をこの順番に遂行する。各工程の内容を、図の右
側に模式的に示した。Next, the operation of the first embodiment of the present invention will be described with reference to FIG.
To FIG. 5 will be described. FIG. 5 is a flow chart showing a nucleic acid extraction process from a whole blood sample according to the first embodiment of the present invention. 31 is a decomposition process, 32 is an additive liquid mixing process, 33
Is an adsorption step, 34 is a cleaning step, and 35 is a recovery step,
Each process is performed in this order. The contents of each step are schematically shown on the right side of the figure.
【0017】40は試料(全血)、41は酵素溶液、4
2は分解溶液、43は添加溶液、44は洗浄液、45は
溶出液、46は分解液、47は吸着溶液、48は吸着廃
液、49は洗浄廃液、50は回収液である。酵素溶液4
1、分解溶液42、添加溶液43、洗浄液44、溶出液45とし
て、特記無き場合、特表平8-501321に記載された組成の
試薬を使用した。40 is a sample (whole blood), 41 is an enzyme solution, 4
2 is a decomposition solution, 43 is an addition solution, 44 is a cleaning liquid, 45 is an eluate, 46 is a decomposition liquid, 47 is an adsorption solution, 48 is an adsorption waste liquid, 49 is a cleaning waste liquid, and 50 is a recovery liquid. Enzyme solution 4
1. As the decomposition solution 42, the addition solution 43, the washing solution 44, and the eluate 45, unless otherwise specified, the reagents having the compositions described in JP-A 8-501321 were used.
【0018】以下、本発明の第1の実施例の各工程を説
明する。本発明の吸引方式ではカラムホルダ上面のカラ
ム用開口部の数を上限とするカラムを用いて複数の試料
からそれぞれに含まれる核酸を同時に並行して抽出する
ことが可能であるが、ここでは簡単のため、カラムを1
つ用い、1つの試料から核酸を抽出する場合について以
下説明する。Each step of the first embodiment of the present invention will be described below. In the suction method of the present invention, it is possible to simultaneously extract the nucleic acids contained in each of a plurality of samples in parallel by using a column whose upper limit is the number of column openings on the upper surface of the column holder. For one column
A case where nucleic acid is extracted from one sample using one sample will be described below.
【0019】分解工程31は、試料40と、酵素溶液4
1,分解溶液42とを混合撹拌し、加熱することにより
細胞膜や核膜、核蛋白を分解し、白血球の核に含まれる
核酸を分解液46中に放出させる工程である。試料40
として全血を1mL、酵素溶液41を0.1mL、分解
溶液42を1.2mLを使用し、加熱は70℃10分間
行った。The decomposition step 31 includes the sample 40 and the enzyme solution 4
1. This is a step of mixing and stirring the decomposing solution 42 and heating to decompose the cell membrane, nuclear membrane, and nuclear protein, and release the nucleic acid contained in the nucleus of white blood cells into the decomposing solution 46. Sample 40
1 mL of whole blood, 0.1 mL of enzyme solution 41, and 1.2 mL of decomposition solution 42 were used, and heating was performed at 70 ° C. for 10 minutes.
【0020】添加液混合工程32は、分解液46に添加
溶液43を添加することにより脂質などを可溶化すると
ともに、核酸の溶解度を低下させ、核酸の固相吸着と洗
浄の効率を高める工程である。冷却した分解液46に添
加溶液43を1mL添加し、混合撹拌して吸着溶液47
を得た。The addition solution mixing step 32 is a step of adding the addition solution 43 to the decomposition solution 46 to solubilize lipids and the like, reduce the solubility of nucleic acids, and enhance the efficiency of solid phase adsorption and washing of nucleic acids. is there. 1 mL of the additive solution 43 was added to the cooled decomposition solution 46, and the mixture was stirred to adsorb the adsorption solution 47.
Got
【0021】吸着工程33は、吸着溶液47をカラム1
の担体に通過させ、吸着溶液47中の核酸を担体2の表
面に吸着させる工程である。図3に示す通り新品のカラ
ム1を設置したカラムホルダ7を廃液槽8の上に設置
し、廃液チャンバー21を形成する。吸着溶液47を注入
孔3からカラム1に注入し、吸引ろ過した。吸引の動作
は図2を用いて説明する。真空ポンプ18を動作させ、
電磁弁17を開け、フィルタ16、排気チューブ15を
介してトラップ14内部を減圧にした。廃液チューブ1
3を介して廃液チャンバー21内部も減圧される。従っ
て、大気圧であるカラム1の注入孔3との圧力差によ
り、カラム1内部の吸着溶液47は担体2を通して吐出
孔4へ移動した。この過程において、吸着溶液47中の
核酸は担体2に吸着され、核酸以外の成分は吸着廃液4
8として吐出孔4から漏出した。吸着廃液48は廃液槽
8に落下した後、廃液チューブ13を介してトラップ1
4に移動し、貯蔵される。吸着溶液47がカラムを通過
し吸着廃液48が廃液槽8に落下した後、電磁弁17を
閉じ、真空ポンプ18への気体の流れを遮断した。カラ
ム1の注入孔3から流入する大気により、廃液チャンバ
ーから電磁弁17までの区間が大気圧に戻った。装置の
設置環境が核酸含有ミスト等で汚染されている場合で
も、カバー11や集塵機構25の作用により装置外部の
汚染ミストは内部に混入しないため、外来性ミストの大
気経由の混入は防止される。In the adsorption step 33, the adsorption solution 47 is applied to the column 1.
In this step, the nucleic acid in the adsorption solution 47 is adsorbed on the surface of the carrier 2 by passing through the carrier. As shown in FIG. 3, the column holder 7 in which the new column 1 is installed is placed on the waste liquid tank 8 to form the waste liquid chamber 21. The adsorption solution 47 was injected into the column 1 through the injection hole 3 and suction filtered. The suction operation will be described with reference to FIG. Operate the vacuum pump 18,
The electromagnetic valve 17 was opened, and the pressure inside the trap 14 was reduced via the filter 16 and the exhaust tube 15. Waste liquid tube 1
The inside of the waste liquid chamber 21 is also depressurized via 3. Therefore, due to the pressure difference between the injection hole 3 of the column 1 and the atmospheric pressure, the adsorption solution 47 inside the column 1 moved to the discharge hole 4 through the carrier 2. In this process, the nucleic acid in the adsorption solution 47 is adsorbed by the carrier 2, and the components other than the nucleic acid are absorbed in the adsorption waste liquid 4.
8 leaked from the discharge hole 4. The adsorption waste liquid 48 drops into the waste liquid tank 8 and then passes through the waste liquid tube 13 to the trap 1
Move to 4 and store. After the adsorption solution 47 passed through the column and the adsorption waste liquid 48 dropped into the waste liquid tank 8, the electromagnetic valve 17 was closed and the flow of gas to the vacuum pump 18 was shut off. The atmosphere flowing from the injection hole 3 of the column 1 returned the atmospheric pressure to the section from the waste liquid chamber to the solenoid valve 17. Even if the installation environment of the device is contaminated with nucleic acid-containing mist or the like, the contamination mist outside the device is not mixed into the inside by the action of the cover 11 and the dust collecting mechanism 25, so that mixing of exogenous mist through the atmosphere is prevented. .
【0022】洗浄工程34は、洗浄液44をカラム1に
注入した後、吸引するという単位洗浄操作を複数回実施
し、核酸以外の共存成分を担体から洗脱して、担体表面
に精製された核酸を残す工程である。洗浄液44として
は、特表平8-501321に記載の組成のもの(洗浄液A)
と、それに準拠しつつさらに界面活性剤としてTween(R)
20を5wt%添加したもの(洗浄液B)の2種類を使用した。
まず3mLの洗浄液Bを用いた単位洗浄操作を2回行った
後、さらに3mLの洗浄液Aを用いた単位洗浄操作を2回行
った。核酸以外の共存成分を含む洗浄廃液49は吐出孔4
から漏出し、廃液槽8に落下した後、廃液チューブ13
を介してトラップ14に移動した。回収工程35は、溶
出液45をカラム1に注入、インキュベーションした後
吸引することにより、精製された核酸を含む回収液50と
して回収容器19に回収する工程である。自動抽出装置
に備えたカラムホルダ移動機構を用い、カラムホルダ7
を回収槽9の上に移動することにより、図4に示す回収
チャンバー22を形成した。回収槽9には回収容器19が
設置されており、回収容器19の上端部はカラム1の下
部中空筒100と、隔壁5との間の空間に嵌合した。換言
すると、回収容器19の上端はカラム1の隔壁5の内部
に配置され、カラムの吐出孔4は回収容器19の内部に
配置された。次に、溶出液45を注入孔3からカラム1
に注入して5分間のインキュベーションを行い、担体に
吸着した核酸を溶解後、吸引した。回収工程35におけ
る吸引の動作は、前述の吸着工程33における吸引の動
作と同様であるが、使用する真空チャンバーが回収チャ
ンバー22であり、排気系が吸気孔10’、排気チューブ
15’、フィルタ16’、電磁弁17’である点が異な
る。核酸を含む溶出液はカラムの吐出孔から回収容器1
9に落下し、回収液50として回収された。1回当たり1
mLの溶出液45を使用し、上記の単位操作を2回繰り
返して、2mLの回収液50を回収容器19中に得た。以
上1つの試料から1つのカラムを用いて核酸を抽出する場
合を例にとって説明したが、複数のカラムを用い、複数
の試料からそれぞれに含まれる核酸を同時に並行して抽
出することも可能である。例えば、再現性を評価するた
めに、試料40として同一の全血を1mLずつ用い、同時
処理数24の場合の核酸回収量は平均で約25μg、また260
nmと280nmにおける吸光度の比は約1.9であった。従っ
て、高純度の核酸が高い回収率で得られた。また一般に
は個々の試料は例えば異なる被験者から採取された異な
る全血試料であり、異なるカラムを用いて各々独立に並
行して抽出操作を行い、それぞれに対応する核酸を精製
して別個の回収容器に得る。課題の項で説明した通り核
酸を増幅して診断などの用途に用いる場合は、上記核酸
抽出過程において極微量といえども複数の試料間のクロ
スコンタミネーションが無いことが、極めて重要であ
る。In the washing step 34, a unit washing operation of injecting the washing liquid 44 into the column 1 and then aspirating is carried out a plurality of times to wash away coexisting components other than nucleic acid from the carrier, and purify nucleic acid on the carrier surface. Is the process of leaving. The cleaning liquid 44 has the composition described in Tokuhyo 8-501321 (cleaning liquid A).
And Tween (R) as a surfactant while complying with it
Two types were used, one containing 20 wt% of 5 wt% (cleaning liquid B).
First, the unit washing operation using 3 mL of the washing liquid B was performed twice, and then the unit washing operation using 3 mL of the washing liquid A was performed twice. The cleaning waste liquid 49 containing coexisting components other than nucleic acid is the discharge hole 4
After leaking from the tank and dropping into the waste liquid tank 8, the waste liquid tube 13
To the trap 14 via. The recovery step 35 is a step of injecting the eluate 45 into the column 1, incubating after incubating, and aspirating the eluate 45 to recover it in the recovery container 19 as the recovery solution 50 containing the purified nucleic acid. Using the column holder moving mechanism provided in the automatic extraction device, the column holder 7
Was moved above the recovery tank 9 to form the recovery chamber 22 shown in FIG. A recovery container 19 is installed in the recovery tank 9, and the upper end of the recovery container 19 is fitted into the space between the lower hollow cylinder 100 of the column 1 and the partition wall 5. In other words, the upper end of the collection container 19 is arranged inside the partition wall 5 of the column 1, and the discharge hole 4 of the column is arranged inside the collection container 19. Next, the eluate 45 is injected from the injection hole 3 into the column 1
Incubated for 5 minutes, the nucleic acid adsorbed on the carrier was dissolved and then aspirated. The suction operation in the recovery step 35 is the same as the suction operation in the adsorption step 33 described above, but the vacuum chamber used is the recovery chamber 22, and the exhaust system is the intake hole 10 ′, the exhaust tube 15 ′, the filter 16 The difference is that it is a ", solenoid valve 17". The eluate containing the nucleic acid is collected from the ejection hole of the column in the collection container
It dropped to 9 and was recovered as a recovery liquid 50. 1 per time
Using the mL of the eluent 45, the above unit operation was repeated twice to obtain 2 mL of the recovered solution 50 in the recovery container 19. Although the case where the nucleic acid is extracted from one sample using one column has been described above as an example, it is also possible to simultaneously extract the nucleic acids contained in each of the samples from a plurality of samples in parallel at the same time. . For example, in order to evaluate the reproducibility, 1 mL of the same whole blood is used as the sample 40, and when the number of simultaneous treatments is 24, the nucleic acid recovery amount is about 25 μg on average, or 260
The ratio of absorbance at nm and 280 nm was about 1.9. Therefore, highly pure nucleic acid was obtained with a high recovery rate. In general, individual samples are, for example, different whole blood samples collected from different subjects, and extraction operations are carried out independently and in parallel using different columns to purify the corresponding nucleic acids and separate collection containers. Get to. When nucleic acids are amplified and used for applications such as diagnosis as described in the section of the problem, it is extremely important that there is no cross-contamination between a plurality of samples even though the amount is extremely small.
【0023】発明の効果の項で後述する通り、本実施例
においてはカラムの隔壁5の内部に吐出孔4を配置して
遮蔽する、という新規な構成により、従来型カラムの課
題であったクロスコンタミネーションを回避した。この
隔壁は、第1のカラムの吐出孔から吐出される吸着廃液
48、洗浄廃液49、回収液50などの溶液が液滴やミ
スト、泡沫など(以下ミストと総称)を形成しても、そ
れらをカラム内部に保持し、第2のカラム(このカラム
の吐出孔も隔壁内部に遮蔽されている)や回収容器への
飛散、付着を防止する作用がある。従って本実施例は、
第1の試料由来のミストが直接飛散して第2のカラム等に
付着する第1のコンタミネーション経路による混入の危
険性を完全に排除できる。第1の試料由来の一部のミス
トは真空チャンバー内部に拡散し、チャンバー内で浮遊
の後、間接的に第2のカラムに混入する第2のコンタミ
ネーション経路も考えられる。第2の経路に基づくミス
トによるチャンバーの汚染の確率はカラム開口面の立体
角に依存すると考えられる。本実施例の隔壁下端部のカ
ラム開口面が吐出孔に張る立体角は約0.5[sr]であ
る。一方従来技術によるカラムは隔壁を有さないか、有
してもその下端が吐出孔より上に位置するため、カラム
開口面が吐出孔に張る立体角ωは少なくとも2π=6.28
[sr]、一般的には例えばL=−18mm、M=6.5m
mなどの構成を取り、この場合の立体角ωは12.2[sr]に
達する。従って、本実施例における第2の経路によるミ
ストによるチャンバーの汚染確率は、従来のカラムと比
較して約12分の1ないし24分の1と低い。また第2のカ
ラムの吐出孔も隔壁内部に遮蔽されているため、隔壁に
よるミスト抑制効果は2重に作用し、第2の経路による
ミスト混入確率は従来例の140〜530分の一となる。さら
に、本実施例においてはカラムの吐出孔から唯一の出口
である真空チャンバー方向への液体、気体の流れがあ
り、ミストがカラム吐出孔に接近しにくいという好まし
い特長も備える。以上の効果の総合により、本実施例に
おいては第1、第2の経路による混入の危険性は従来例
と比較して極めて低い。吸着工程における隔壁の汚染
は、洗浄工程において洗浄廃液が吸着廃液を洗い流すた
め、完全に除去される。回収工程においては、回収容器
19の上端はカラム1の隔壁5の内部に配置され、吐出
孔4は回収容器19の内部に配置されるため、他のカラ
ムの核酸を含む溶出液に起因するミストが本回収容器1
9の内部に侵入したり、本回収液50に混入したりする可
能性は極めて低い。また上記配置により、当カラムから
吐出される回収液が飛散しても、そのほとんど全ては対
応する回収容器内壁に衝突して回収容器内部に落下する
ため回収効率が高く、ミストがカラムの外部に漏洩しに
くい、という効果がある。As will be described later in the section of "Effects of the invention", in this embodiment, due to the novel construction in which the discharge holes 4 are arranged and shielded inside the partition walls 5 of the column, the cloth which has been a problem of the conventional column is crossed. Avoided contamination. Even if a solution such as the adsorption waste liquid 48, the cleaning waste liquid 49, and the recovery liquid 50 discharged from the discharge hole of the first column forms droplets, mist, foam, etc. (hereinafter collectively referred to as mist), these partition walls Is held inside the column to prevent scattering and adhesion to the second column (the discharge hole of this column is also shielded inside the partition) and the collection container. Therefore, in this embodiment,
It is possible to completely eliminate the risk of contamination due to the first contamination route in which the mist derived from the first sample is directly scattered and adheres to the second column or the like. A second contamination path in which a part of the mist derived from the first sample diffuses inside the vacuum chamber, floats in the chamber, and then indirectly mixes into the second column is also conceivable. It is considered that the probability of contamination of the chamber by the mist based on the second path depends on the solid angle of the column opening surface. The solid angle formed by the column opening surface at the lower end of the partition wall of the present embodiment over the discharge hole is about 0.5 [sr]. On the other hand, the column according to the prior art has no partition, or even if it has the partition, the lower end of the column is located above the discharge hole, so that the solid angle ω formed by the column opening surface to the discharge hole is at least 2π = 6.28.
[sr], generally L = -18 mm, M = 6.5 m
The solid angle ω in this case reaches 12.2 [sr]. Therefore, the probability of contamination of the chamber by the mist by the second route in this example is as low as about 1/12 to 1/24 compared with the conventional column. Further, since the discharge hole of the second column is also shielded inside the partition wall, the mist suppression effect by the partition wall doubles, and the mist mixing probability by the second path is 140 to 530 of the conventional example. . Further, in the present embodiment, there is a preferable feature that there is a flow of liquid or gas from the discharge hole of the column toward the vacuum chamber, which is the only outlet, and the mist does not easily approach the discharge hole of the column. As a result of the above effects, the risk of mixing in the first and second routes is extremely low in this embodiment as compared with the conventional example. Contamination of the partition walls in the adsorption process is completely removed because the cleaning waste liquid rinses away the adsorption waste liquid in the cleaning process. In the recovery step, since the upper end of the recovery container 19 is arranged inside the partition wall 5 of the column 1 and the discharge hole 4 is arranged inside the recovery container 19, the mist caused by the eluate containing the nucleic acid of another column is generated. Is a collection container 1
It is extremely unlikely that it will enter the inside of 9 and be mixed into the main recovery liquid 50. Further, with the above arrangement, even if the recovery liquid discharged from this column is scattered, almost all of it collides with the corresponding inner wall of the recovery container and falls inside the recovery container, so the recovery efficiency is high and the mist is not outside the column. There is an effect that it is difficult to leak.
【0024】本実施例特有の効果は、簡単な構成によ
り、他試料由来の飛沫やミストを隔離し、クロスコンタ
ミネーションを防止できることである。このため、取り
扱いが容易で迅速簡便かつ高精度な核酸抽出装置を提供
でき、スループットの向上やコスト低減と高信頼性を両
立できる、という効果がある。
〔実施の形態2〕図6は本発明の第2の実施例による固
相抽出カラム1’の構成概略図である。カラム1’の構
成は基本的に第1の実施例におけるカラム1と同様であ
るが、吐出孔4を有する下部中空円筒100と、隔壁5と
の間にフィルタ23が設けられている点が異なる。The effect peculiar to the present embodiment is that, with a simple structure, it is possible to separate the splashes and mists from other samples and prevent cross contamination. Therefore, there is an effect that it is possible to provide a nucleic acid extraction device that is easy to handle, quick, simple, and highly accurate, and can improve throughput, reduce cost, and achieve high reliability. [Embodiment 2] FIG. 6 is a schematic view of the configuration of a solid phase extraction column 1'according to a second embodiment of the present invention. The configuration of the column 1'is basically the same as that of the column 1 in the first embodiment, except that a filter 23 is provided between the lower hollow cylinder 100 having the discharge hole 4 and the partition wall 5. .
【0025】図7は、本発明の第2の実施例による回収
チャンバーにおけるカラム1’と回収容器19の相互関
係を示す断面図である。カラム1’のフィルタ23は回収
容器19に圧接されている、換言すると回収チャンバー
内部の空間と、回収容器内部の空間とは、フィルタ23に
より2重に隔離される。FIG. 7 is a sectional view showing the mutual relationship between the column 1'and the recovery container 19 in the recovery chamber according to the second embodiment of the present invention. The filter 23 of the column 1 ′ is pressed against the collection container 19, in other words, the space inside the collection chamber and the space inside the collection container are doubly separated by the filter 23.
【0026】フィルタ23は、担体2と同じWhatman( R)
社製ガラス繊維ろ紙GF/F型をドーナツ型に打ち抜いて使
用した。同社カタログによると、このGF/F型の粒子保持
能は0.7μm、即ち0.7μmより大きい粒子の透過率は2%
以下である。つまりこのフィルタは気体を通過させるこ
とができるが液滴やミストなどの粒子のうちμmオーダ
ーのものの98%以上を捕捉する作用を有する。さら
に、このろ紙は核酸吸着能を有するため、捕捉された粒
子中に核酸が含まれていても、それを吸着除去する作用
を有する。The filter 23 is the same as the carrier 2 Whatman®.
A GF / F type glass fiber filter paper manufactured by the same company was punched into a donut type for use. According to the company's catalog, this GF / F type has a particle retention capacity of 0.7 μm, that is, the transmittance of particles larger than 0.7 μm is 2%.
It is the following. That is, this filter allows gas to pass therethrough, but has a function of trapping 98% or more of particles of the μm order among particles such as droplets and mist. Furthermore, since this filter paper has the ability to adsorb nucleic acids, even if the captured particles contain nucleic acids, they have the function of adsorbing and removing the nucleic acids.
【0027】回収工程において、回収容器内部の空間と
回収チャンバー内部の空間とはフィルタ23により2重に
隔離される。従って、回収容器内部から回収チャンバー
へのミストの漏洩を2重に防止できる。同様に回収チャ
ンバーから回収容器内部へのミスト混入を2重に防止で
きる。即ち2つの回収容器内部の空間はフィルタによっ
て4重に隔離される。従って、0.7μmの粒子の透過率は
0.024即ち8ppm以下となり、PCR増幅を行っ
ても実質的に問題が生じない水準に抑制される。つまり
例え複数の試料に含まれる核酸をそれぞれ独立の複数の
カラムを用いて抽出する場合であっても、極微量のクロ
スコンタミネーションも防止し、高純度の核酸精製を行
うことができる。In the recovery step, the space inside the recovery container and the space inside the recovery chamber are doubly separated by the filter 23. Therefore, it is possible to prevent double leakage of the mist from the inside of the collection container to the collection chamber. Similarly, it is possible to prevent double mixing of mist from the recovery chamber into the recovery container. That is, the space inside the two recovery containers is quadruple isolated by the filter. Therefore, the transmittance of 0.7μm particles becomes 0.02 4 That 8ppm below, substantial problems are suppressed to a level that does not cause even if the PCR amplification. That is, even when the nucleic acids contained in a plurality of samples are extracted using a plurality of independent columns, a very small amount of cross-contamination can be prevented and highly purified nucleic acid can be purified.
【0028】なお、図示は省略したが、本実施例におい
ては図7と類似の構成を回収工程だけではなく、吸着工
程や洗浄工程にも適用した。この際、回収容器19と同
様の回収容器19’を、廃液チャンバー21内部に設置し
て使用した。図7と同様にフィルタ23が回収容器19’
に圧接される様に支持した状態で、回収容器19’とカ
ラム1’の対を廃液チャンバー21に設置して、吸着工程
や洗浄工程を行った。この場合の動作は基本的に上記の
回収工程におけるそれと同様であるが、吸着工程や洗浄
工程において、吸着廃液や洗浄廃液が吐出孔4を通して
回収容器19’へ移動した点が異なる。この際、フィル
タ23 の作用によりカラム相互間のクロスコンタミネー
ションが上記同様防止される。また、廃液は回収容器1
9’に溜まるため、容易に汚染除去が可能である。変形
例として、各々の回収容器19’の下部を共通の廃液溜
に接続し、その接続流路に逆流防止機構を設け、廃液を
収納する容器を一体化することも可能である。Although not shown, in this embodiment, a structure similar to that of FIG. 7 was applied not only to the recovery process but also to the adsorption process and the cleaning process. At this time, a recovery container 19 ′ similar to the recovery container 19 was installed inside the waste liquid chamber 21 and used. Similar to FIG. 7, the filter 23 has a collection container 19 '.
The pair of the recovery container 19 'and the column 1'was installed in the waste liquid chamber 21 while being supported so as to be pressed against the column, and the adsorption step and the washing step were performed. The operation in this case is basically the same as that in the recovery process described above, except that in the adsorption process and the cleaning process, the adsorption waste liquid and the cleaning waste liquid move to the recovery container 19 ′ through the discharge hole 4. At this time, cross-contamination between the columns is prevented by the action of the filter 23 as in the above. In addition, the waste liquid is in the collection container 1
Since it collects in 9 ′, it is possible to easily remove the contamination. As a modified example, it is also possible to connect the lower part of each recovery container 19 ′ to a common waste liquid reservoir, provide a backflow prevention mechanism in the connection flow path, and integrate the waste liquid container.
【0029】本実施例の効果は、簡単な構成で、他試料
由来の飛沫やミストを捕捉、吸着除去することにより、
極微量のクロスコンタミネーションの危険性をも防止で
きることである。このため、取り扱いが容易で迅速簡便
かつ高精度な核酸抽出装置を提供でき、スループットの
向上やコスト低減と高信頼性を両立できる、という効果
がある。
〔実施の形態3〕本発明の第3の実施例を以下に説明す
る。図8は本発明の第3の実施例によるカラム1”の構
成概略図である。カラム1”の構成は基本的に第2の実
施例におけるカラム1’と同様であるが、吐出孔外面に
延長筒24が隙間無く着脱可能に設けられている点が異な
る。延長筒24は基本的に中空の円筒であり、カラム1”
の下部中空筒100先端の吐出孔外面と、延長筒24上部の
中空部内面は、隙間無く嵌合する。従って、カラムの吐
出孔外面は延長筒により外部から遮蔽され、隔離され
る。カラム1”と延長筒24との組み合わせにより、カラ
ムの吐出孔は、実質的に延長筒の先端まで延長され、途
中に開口部は無い。延長筒24の下端は隔壁5の下端より
も下に突出する。延長筒24は好ましくはカラム1”と一
体化した状態で提供される。The effect of this embodiment is that, with a simple structure, by collecting and adsorbing and removing the droplets and mist derived from other samples,
It is also possible to prevent the risk of extremely small amounts of cross contamination. Therefore, there is an effect that it is possible to provide a nucleic acid extraction device that is easy to handle, quick, simple, and highly accurate, and can improve throughput, reduce cost, and achieve high reliability. [Third Embodiment] A third embodiment of the present invention will be described below. FIG. 8 is a schematic view of the configuration of a column 1 ″ according to the third embodiment of the present invention. The configuration of the column 1 ″ is basically the same as that of the column 1 ′ in the second embodiment, but the outer surface of the discharge hole is The difference is that the extension tube 24 is detachably provided without a gap. Extension tube 24 is basically a hollow cylinder, column 1 "
The outer surface of the discharge hole at the tip of the lower hollow cylinder 100 and the inner surface of the hollow portion at the upper part of the extension cylinder 24 are fitted together without a gap. Therefore, the outer surface of the discharge hole of the column is shielded from the outside by the extension cylinder and isolated. By the combination of the column 1 ″ and the extension cylinder 24, the discharge hole of the column is substantially extended to the tip of the extension cylinder, and there is no opening in the middle. The lower end of the extension cylinder 24 is below the lower end of the partition wall 5. The extension tube 24 is preferably provided integrally with the column 1 ".
【0030】図9は、本実施例の変形例における廃液チ
ャンバー21の断面模式図である。本変形例では、延長筒
24の下端付近にツメ67を有し、廃液槽8内部にストッパ
68を有する点が、第3の実施例と異なる。ツメ67は弾性
を有し、ツメ下端部は延長筒24の下端付近に固定され、
自然な状態では図9に示したように上端が開いている。
ツメ67の弾性により、上端は延長筒24の表面近くまで圧
縮可能である。ストッパ68はツメ67を圧縮した状態の延
長筒24を自由に通過させる開口部をもつが、ツメ67が開
いた状態の延長筒24は下向きにしか通過させない。換言
すると、ストッパ68はツメ67との組合せによりラッチ機
構を形成する。ストッパ68は、廃液槽8から着脱可能で
ある。FIG. 9 is a schematic sectional view of the waste liquid chamber 21 in the modification of this embodiment. In this modification, an extension cylinder
There is a claw 67 near the lower end of 24, and it is a stopper inside the waste liquid tank 8.
It differs from the third embodiment in that it has 68. The claw 67 has elasticity, the lower end of the claw is fixed near the lower end of the extension tube 24,
In the natural state, the upper end is open as shown in FIG.
Due to the elasticity of the claw 67, the upper end can be compressed close to the surface of the extension tube 24. The stopper 68 has an opening through which the extension tube 24 with the tab 67 compressed can freely pass, but the extension tube 24 with the tab 67 open can only pass downward. In other words, the stopper 68 forms a latch mechanism in combination with the pawl 67. The stopper 68 is removable from the waste liquid tank 8.
【0031】この変形例の吸着、洗浄工程の動作は基本
的に第1の実施例と同様であるが、以下の点が異なる。
吸着工程開始前に、延長筒24を備えた状態でカラム1”
を廃液チャンバー21の内部に設置する。即ちカラム1”
を上方から押し込むことにより、延長筒24のツメは圧縮
され、ストッパを通過する。カラム1”は図9に示した
状態でカラムホルダ7に気密に固定される。以降の動作
は途中まで第2の実施例と同様であるが、主に吸着、洗
浄工程における吸引動作の結果が異なる。即ち、吸着溶
液47や洗浄液44を吸引すると、吸着廃液48や洗浄廃液49
は実質的な吐出孔である延長筒24の下端から漏洩する。
延長筒24の下端はカラムの隔壁5の下端よりも下に突出
しており、またストッパ68によって遮られるため、吸着
廃液48や洗浄廃液49は、延長筒24下端付近やストッパ68
下面に一部付着するが、ストッパ68より上のカラム本体
には付着しない。また、カラムの吐出孔4の外面はフィ
ルタ23や延長筒24により被覆されている。換言すると、
第1のカラムの吐出孔は第2のカラムの吐出孔から隔離
され、第2のカラムからの吸着廃液48や洗浄廃液49由来
のミストが、第1のカラムの吐出孔付近に付着する危険
性が全く無い。従って、例え複数の試料に含まれる核酸
をそれぞれ独立の複数のカラムを用いて抽出する場合で
あっても、クロスコンタミネーションを防止できる、と
いう効果がある。The operation of the adsorption and cleaning process of this modification is basically the same as that of the first embodiment, but the following points are different.
Column 1 "with extension tube 24 before the adsorption process starts
Is installed inside the waste liquid chamber 21. Ie column 1 ”
By pushing in from above, the tab of the extension tube 24 is compressed and passes through the stopper. The column 1 "is airtightly fixed to the column holder 7 in the state shown in Fig. 9. The subsequent operation is the same as that of the second embodiment up to the middle, but the result of the suction operation mainly in the adsorption and cleaning steps is Different: That is, when the adsorption solution 47 or the cleaning liquid 44 is sucked, the adsorption waste liquid 48 or the cleaning waste liquid 49
Leaks from the lower end of the extension cylinder 24, which is a substantial discharge hole.
The lower end of the extension cylinder 24 projects below the lower end of the partition wall 5 of the column, and is blocked by the stopper 68. Therefore, the adsorption waste liquid 48 and the cleaning waste liquid 49 are near the lower end of the extension cylinder 24 and the stopper 68.
Although it partially adheres to the lower surface, it does not adhere to the column body above the stopper 68. The outer surface of the discharge hole 4 of the column is covered with a filter 23 and an extension cylinder 24. In other words,
The discharge hole of the first column is isolated from the discharge hole of the second column, and there is a risk that mist derived from the adsorption waste liquid 48 and the cleaning waste liquid 49 from the second column will adhere to the vicinity of the discharge hole of the first column. There is no Therefore, even if the nucleic acids contained in a plurality of samples are extracted using a plurality of independent columns, cross contamination can be prevented.
【0032】洗浄工程終了後、回収工程に移る前に、カ
ラムホルダー7といっしょにカラム1”を廃液チャンバ
ーから回収チャンバーに移動する。この際、延長筒24の
ツメ67がストッパ68に引っかかり、延長筒24はカラム
1”から脱着され、廃液槽内に留まる。従って、回収チ
ャンバーには廃液で汚染された延長筒24が持ちこまれな
い。また、上述の通り廃液や廃液由来のミストなどはカ
ラムに付着しない。従って、廃液類は回収チャンバーへ
持ち込まれず、セルフコンタミネーション(第1の廃液
が第1の回収液に混入して純度が低下すること)やクロ
スコンタミネーションの危険性が大幅に低減される。After completion of the washing process and before proceeding to the recovery process, the column 1 "is moved from the waste liquid chamber to the recovery chamber together with the column holder 7. At this time, the claw 67 of the extension cylinder 24 is caught by the stopper 68 and extended. The cylinder 24 is detached from the column 1 ″ and remains in the waste liquid tank. Therefore, the extension cylinder 24 contaminated with the waste liquid is not brought into the recovery chamber. Further, as described above, the waste liquid or the mist derived from the waste liquid does not adhere to the column. Therefore, the waste liquids are not brought into the recovery chamber, and the risk of self-contamination (the first waste liquid is mixed with the first recovery liquid to reduce the purity) and cross-contamination is significantly reduced.
【0033】上記変形例では延長筒24が個別に形成され
カラム1”と一体化した状態で提供される例を説明した
が、延長筒はカラム1”とは別に提供されてもよい。こ
の場合、延長筒同士が互いに連結され、ストッパ68とも
一体に形成されていると操作性が良い。廃液チャンバー
21の内部に予めこの一体化延長筒を設置してからカラム
を設置し、延長筒とカラムを連結後に使用する。In the above modification, the extension cylinder 24 is individually formed and provided in the state of being integrated with the column 1 ", but the extension cylinder may be provided separately from the column 1". In this case, the operability is good if the extension cylinders are connected to each other and are integrally formed with the stopper 68. Waste chamber
The integrated extension tube is installed in advance inside 21 and then the column is installed, and the extension tube and the column are connected and used.
【0034】本実施例並びに変形例特有の効果は、吸
着、洗浄工程におけるコンタミネーション防止を極めて
高水準に達成でき、分析結果を高信頼性化できることで
ある。The effect peculiar to this embodiment and the modification is that contamination prevention in the adsorption and cleaning steps can be achieved at an extremely high level and the analysis result can be highly reliable.
【0035】〔実施の形態4〕本発明の第4の実施例を
以下に説明する。図10は本発明第4の実施例による自動
抽出装置の構成図である。本実施例の基本構成は第1の
実施例と類似であるが、吸引機構の代わりに加圧機構2
8を有する点が異なる。加圧機構28をカラムホルダ7
の上部に設置することにより、カラムホルダ7、カラム
1とともに気密な閉空間である加圧チャンバー29を形
成する。[Embodiment 4] A fourth embodiment of the present invention will be described below. FIG. 10 is a block diagram of an automatic extraction device according to a fourth embodiment of the present invention. The basic configuration of this embodiment is similar to that of the first embodiment, but the pressurization mechanism 2 is used instead of the suction mechanism.
8 is different. The pressurizing mechanism 28 is attached to the column holder 7
The pressure chamber 29, which is an airtight closed space, is formed together with the column holder 7 and the column 1 by installing the pressure chamber 29 in the upper part.
【0036】本実施例の動作も第1の実施例同様である
が、試薬類をカラムを通す際に、減圧吸引ではなく、加
圧により送液する点が異なる。The operation of this embodiment is the same as that of the first embodiment, except that when the reagents are passed through the column, the liquid is fed not by vacuum suction but by pressurization.
【0037】本実施例特有の効果は、適切な加圧機構2
8を採用することにより、カラムの注入孔3と吐出孔4
との間に1気圧以上の圧力差を与えることができるた
め、溶液のカラム通過時間が短縮し、工程の迅速化が可
能なことである。また、高粘性の吸着溶液にも対応可能
である。さらに、加圧機構28の構造として、カラムホ
ルダのカラム用開口部ごとにそれぞれ気密を確保して加
圧チャンバーを形成し、各加圧チャンバー毎に独立に圧
力を印加する機構と、センサにより加圧チャンバー内の
圧力を観測し、圧力を制御する機構を備えることによ
り、カラム毎の個別制御が可能となる、という特長もあ
る。この場合は使用しないカラムに対応する加圧チャン
バーは単に気密を維持するだけでよく、準備が簡単にな
る、という特長がある。The effect peculiar to this embodiment is that the appropriate pressure mechanism 2 is used.
By adopting 8, the injection hole 3 and the discharge hole 4 of the column
Since a pressure difference of 1 atm or more can be applied between and, the passage time of the solution through the column can be shortened and the process can be speeded up. It is also possible to use a highly viscous adsorption solution. Further, as a structure of the pressurizing mechanism 28, a pressure chamber is formed by ensuring airtightness for each column opening of the column holder, and a mechanism for applying pressure independently to each pressurizing chamber and a sensor for applying pressure. Another feature is that each column can be individually controlled by providing a mechanism for observing the pressure in the pressure chamber and controlling the pressure. In this case, the pressurizing chamber corresponding to the unused column is simply kept airtight and the preparation is easy.
【0038】なお、本実施例の変形例として、加圧機構
28の代わりに、加圧だけでなく減圧も可能な加減圧機構
を用いることも可能である。この場合はカラム内の担体
を通した各種溶液の2方向の移動が可能となる。加減圧
機構の具体例としては、自動ピペッターが挙げられ、そ
のピペットチップの代わりに内径を適合させたカラムを
使用することができる。関連する方法が、特開平11−
127854に開示されている。カラム下部の吐出孔を
隔壁より下に突出させ、又は延長筒を隔壁より下に突出
させると、各種溶液はカラム下部からカラム内部に吸入
することができ、試料や試薬注入用のピペットチップを
省略できる。洗浄溶液については、自動ピペッタ内部に
液注入用の分岐流路を設ける等によりカラム上部から注
入し、カラム内部の洗浄を効率化できる。本変形例特有
の効果は、核酸の吸着や脱着、洗浄などの操作を、2方
向の通液により必要な回数だけ行うことができ、また送
液条件を精密に制御できることである。
〔実施の形態5〕本発明の第5の実施例を以下に説明す
る。図11は本発明の第5の実施例による自動抽出装置の
主要部の構成概略図である。本自動抽出装置の基本構成
は第1の実施例と類似であるが、主にカラム、廃液チャ
ンバー21と回収チャンバー22の構成が異なる。即
ち、本実施例においては複数のカラムが一体に形成され
た一体化カラム66と、それを気密に保持するカラムホル
ダ7’を使用した。一体化カラムは、例えばマルチタイ
タープレートと互換性のある形状とし、カラムを二次元
状に配置する事が出来る。廃液チャンバー21と回収チ
ャンバー22には、それぞれ一体化保持チャンバー60と
一体化保持チャンバー60'を設けて使用した。一体化保
持チャンバー60には、一体化カラムの下部をそれぞれ収
納するカラム収納空間がカラム毎に独立して設けられ、
それぞれのカラム収納空間は一体化保持チャンバーによ
り互いに隔離されている。各カラム収納空間の底部と、
一体化保持チャンバー60の底面に設けられた開口部との
間は、流通路61によって連結されている。一体化保持チ
ャンバー60の底面開口部は、廃液槽8の底面開口部と対
向し、廃液孔12に連通している。一体化保持チャンバー
60'には、一体化カラムの下部と回収容器19の対を収納
する収納空間が各々独立して設けられ、各収納空間の底
部と、一体化保持チャンバー60'の底面に設けられた開
口部との間は、流通路61'によって連結されている。一
体化保持チャンバー60'の底面開口部は、回収槽9の底
面開口部と対向し、吸気孔10に連通している。一体化保
持チャンバー60、60'の上部は、それぞれカラムホルダ
7’と気密に接触するため、カラム収納空間同士は直接
連通せず,流通路61、61'のみを介して連通する。As a modification of this embodiment, a pressure mechanism
Instead of 28, it is also possible to use a pressurizing / depressurizing mechanism capable of depressurizing as well as pressurizing. In this case, various solutions can be moved in two directions through the carrier in the column. A specific example of the pressurizing / depressurizing mechanism is an automatic pipettor, and a column having an adjusted inner diameter can be used instead of the pipette tip. A related method is disclosed in JP-A-11-
No. 127854. When the ejection hole at the bottom of the column is projected below the partition or the extension tube is projected below the partition, various solutions can be sucked into the column from the bottom of the column, eliminating the pipette tip for sample and reagent injection. it can. The cleaning solution can be injected from the upper part of the column by providing a branch channel for liquid injection inside the automatic pipettor, so that the inside of the column can be cleaned efficiently. The effect peculiar to this modification is that operations such as adsorption, desorption, and washing of nucleic acids can be performed a required number of times by passing the liquid in two directions, and the liquid sending conditions can be precisely controlled. [Fifth Embodiment] A fifth embodiment of the present invention will be described below. FIG. 11 is a schematic diagram of the main part of an automatic extracting apparatus according to the fifth embodiment of the present invention. The basic configuration of this automatic extraction device is similar to that of the first embodiment, but the configurations of the column, the waste liquid chamber 21 and the recovery chamber 22 are mainly different. That is, in the present embodiment, the integrated column 66 in which a plurality of columns are integrally formed and the column holder 7'which holds the column in an airtight manner are used. The integrated column has a shape compatible with, for example, a multititer plate, and the columns can be arranged two-dimensionally. An integrated holding chamber 60 and an integrated holding chamber 60 ′ were provided and used for the waste liquid chamber 21 and the recovery chamber 22, respectively. In the integrated holding chamber 60, a column storage space for storing the lower part of the integrated column is provided independently for each column,
The respective column storage spaces are separated from each other by an integrated holding chamber. The bottom of each column storage space,
A flow passage 61 connects the opening to the bottom of the integrated holding chamber 60. The bottom opening of the integrated holding chamber 60 faces the bottom opening of the waste liquid tank 8 and communicates with the waste liquid hole 12. Integrated holding chamber
In 60 ', a storage space for storing a pair of the lower part of the integrated column and the recovery container 19 is independently provided, and the bottom of each storage space and the opening provided in the bottom of the integrated holding chamber 60'. The flow path 61 'is connected between the and. The bottom opening of the integrated holding chamber 60 ′ faces the bottom opening of the recovery tank 9 and communicates with the intake hole 10. Since the upper portions of the integrated holding chambers 60 and 60 ′ are in airtight contact with the column holder 7 ′, the column storage spaces do not directly communicate with each other, but communicate with each other only through the flow passages 61 and 61 ′.
【0039】本実施例の動作は第1の実施例と同様であ
るが、第1に、一体化カラム66が使用される点が異な
る。ただし、一体化カラムを構成する個々のカラムは、
第1の実施例と同様の構成と機能を有するため、複数同
時並行処理が可能な点以外は、動作も同様である。The operation of this embodiment is similar to that of the first embodiment, but firstly the difference is that the integrated column 66 is used. However, the individual columns that make up the integrated column are
Since it has the same configuration and function as the first embodiment, the operation is also the same except that a plurality of simultaneous parallel processings are possible.
【0040】第2に、カラム落下した廃液や回収液、排
気の辿る経路が異なる。例えば廃液チャンバー21にお
いては、落下した吸着廃液や洗浄廃液は、まず一体化保
持チャンバー60の各カラム収納空間に落下する。続いて
各カラム収納空間の底部から、流通路61を通り、一体化
保持チャンバー60底面開口部、廃液槽8の底面開口部を
経て、廃液孔12に到達する。以降は第1の実施例と同様
である。Secondly, the paths of the waste liquid, the collected liquid, and the exhaust that have fallen in the column are different. For example, in the waste liquid chamber 21, the dropped adsorption waste liquid or cleaning waste liquid first drops into each column storage space of the integrated holding chamber 60. Then, from the bottom of each column storage space, through the flow passage 61, the bottom opening of the integrated holding chamber 60, the bottom opening of the waste liquid tank 8 and the waste liquid hole 12. The subsequent steps are the same as those in the first embodiment.
【0041】吸着工程や洗浄工程において、カラム収納
空間がカラム毎に独立し、互いに隔離されているため、
個々のカラムの吐出孔同士も互いに隔離されている。従
って、個々のカラムからの吸着廃液や洗浄廃液は各々の
カラムに対応するカラム収納空間の内部のみに落下し、
別のカラムに対応するカラム収納空間に混入しない。カ
ラム収納空間の底部に集まった吸着廃液や洗浄廃液は流
通路61を経て、最終的に廃液孔12に流出する。減圧
のブレークをポンプ側から行わず、カラムからのリーク
により行うため、廃液孔12から一体化カラム66の方向
への液体や気体の逆流は防止される。また流通路61の
長さは内径より十分長いため、それ自体が逆流防止の作
用を有する。さらに流通路61の途中にトラップや逆止
弁などの逆流防止機構を付加することもできる。回収槽
9における回収工程も同様である。なお本実施例では複
数の保持チャンバが一体化された一体化保持チャンバを
採用したが、もちろん個々のカラムに対応する保持チャ
ンバを独立に形成しても良い。In the adsorption step and the washing step, the column storage space is independent for each column and is isolated from each other.
The discharge holes of the individual columns are also isolated from each other. Therefore, the adsorption waste liquid and the cleaning waste liquid from the individual columns fall only inside the column storage space corresponding to each column,
Do not mix in the column storage space corresponding to another column. The adsorption waste liquid and the cleaning waste liquid collected at the bottom of the column storage space finally flow out to the waste liquid hole 12 through the flow passage 61. Since the break of depressurization is not performed from the pump side but is performed by leaking from the column, backflow of liquid or gas from the waste liquid hole 12 toward the integrated column 66 is prevented. Further, since the length of the flow passage 61 is sufficiently longer than the inner diameter, the flow passage 61 itself has a function of preventing backflow. Further, a backflow prevention mechanism such as a trap or a check valve can be added in the middle of the flow passage 61. The recovery process in the recovery tank 9 is also the same. In this embodiment, the integrated holding chamber in which a plurality of holding chambers are integrated is adopted, but it goes without saying that the holding chambers corresponding to the individual columns may be independently formed.
【0042】本実施例特有の効果は、第1に、カラムが
一体化されているため取り扱いが容易であり、自動化に
適することである。第2に、廃液や回収チャンバーにお
けるカラム収納空間がカラム毎に独立しているため、カ
ラム間、試料間のクロスコンタミネーションの危険性が
極めて低いことである。第3に、試料が主に接触するカ
ラム収納空間を形成する部材が一体化保持チャンバー6
0、60'として廃液槽8や回収槽9から独立しており、カ
ラムだけでなく一体化保持チャンバー60、60'も使い捨
てとすることにより、以前の試料からのクロスコンタミ
ネーションの危険性が極めて低い、という効果がある。The effect peculiar to this embodiment is, firstly, that the column is integrated so that it is easy to handle and is suitable for automation. Secondly, since the column storage space in the waste liquid or recovery chamber is independent for each column, the risk of cross contamination between columns and between samples is extremely low. Thirdly, the member that forms the column storage space with which the sample mainly contacts is the integrated holding chamber 6
0 and 60 'are independent of the waste liquid tank 8 and the recovery tank 9, and not only the column but also the integrated holding chambers 60 and 60' are disposable, so that the risk of cross contamination from the previous sample is extremely high. It has the effect of being low.
【0043】次に、本発明の効果について説明する。Next, the effect of the present invention will be described.
【0044】ここで、本発明との対比のために従来例を
示す。この従来例は、WO9853912に示される公
知例に基づき、その技術的特徴を維持したまま、本発明
との比較のために他の条件を本発明に適合した方法であ
る。本発明においては吸引の際に発生する可能性のある
ミストが別のカラムや回収容器へ混入することを防止す
る手段を有するが、従来例ではこの混入防止手段を有さ
ないか、その作用が不充分である。例えば、本発明第1
の実施例のカラム1は隔壁5を有し、吐出孔4が隔壁5
の内部に配置されるが、従来例のカラムは隔壁5を有さ
ず、吐出孔4が廃液槽に直接露出する。Here, a conventional example will be shown for comparison with the present invention. This conventional example is a method based on the publicly known example shown in WO9853912, while maintaining the technical characteristics thereof, and applying other conditions to the present invention for comparison with the present invention. In the present invention, there is a means for preventing mist that may occur during suction from mixing into another column or a collection container, but in the conventional example, there is no such mixing prevention means, or its action is Not enough. For example, the first aspect of the present invention
The column 1 of this embodiment has the partition wall 5, and the discharge hole 4 has the partition wall 5.
However, the conventional column does not have the partition wall 5 and the discharge hole 4 is directly exposed to the waste liquid tank.
【0045】まず、本発明第1の実施例に記載のカラム
1を自動抽出装置20に搭載し、全血からの核酸抽出を
行い、その過程における飛沫やミストによる他のカラム
や回収容器への混入の状況を調査した。また従来例とし
て吐出孔4が隔壁5の外に露出した、隔壁5を有さない
カラムについても同一の操作を行い、本発明第1の実施
例のカラムの結果と比較した。First, the column 1 described in the first embodiment of the present invention is mounted on the automatic extraction apparatus 20 to extract nucleic acid from whole blood, and in the process, it is transferred to other columns or recovery containers by droplets or mist. The situation of contamination was investigated. Further, as a conventional example, the same operation was performed for a column in which the discharge holes 4 were exposed to the outside of the partition wall 5 and which did not have the partition wall 5, and the results were compared with the results of the column of the first embodiment of the present invention.
【0046】図12に、本発明第1の実施例に基づくカラ
ムの、吸着工程33終了時点の状態を撮影した写真のト
レースを示した。核酸抽出に使用したカラムは左から3
番目のカラム1つであるが、他のカラムへの影響を調べ
るために、核酸抽出を行わないカラムをカラムホルダに
並べて設置した。従来例に基づくカラムを用いて同様の
実験を行った結果を、図13に示した。FIG. 12 shows a trace of a photograph of the state of the column according to the first embodiment of the present invention at the end of the adsorption step 33. Columns used for nucleic acid extraction are 3 from the left
In order to investigate the influence on the other columns, one column was used, but columns for which nucleic acid extraction was not performed were placed side by side in the column holder. FIG. 13 shows the result of performing the same experiment using the column based on the conventional example.
【0047】本実施例においては図12に示した通り、カ
ラムの内部、吐出孔4付近、ならびに隔壁5の内側と先
端には、吸着廃液やそれに基づくミストに由来する着色
70がある。しかし、隔壁5の先端以外の外側表面、なら
びに隣接するカラムやダミーには着色が見られなかっ
た。従って、本実施例では吸着廃液やそれに基づくミス
トは使用したカラム内部に限定され、他のカラムなどへ
の付着、混入は効果的に防止された。一方、従来例にお
いては図13に示した通り、カラム71の内部、吐出孔4付
近のみならず、カラムの外側表面全般に着色70'が見ら
れた。さらに隣接するカラムはもちろん、2つ右隣のカ
ラムの下部中空筒など、広範囲に着色が見られた。従っ
て、従来例では吸着廃液やそれに基づくミストは使用し
たカラムのみならず、他のカラムへ付着し、クロスコン
タミネーションを起こす危険性があることが理解され
る。以上の実験の観察結果から、本発明は従来例と比較
して他のカラムへのミストの飛散、付着の程度が概ね3
桁以上抑制されたと考えられる。In the present embodiment, as shown in FIG. 12, the coloring derived from the adsorption waste liquid and the mist based on the adsorption waste liquid is provided inside the column, in the vicinity of the discharge hole 4, and inside and the tip of the partition wall 5.
There are 70. However, no coloring was observed on the outer surface other than the tip of the partition wall 5, and the adjacent column and dummy. Therefore, in this example, the adsorption waste liquid and the mist based on the adsorption waste liquid were limited to the inside of the used column, and the adhesion and the mixture to other columns were effectively prevented. On the other hand, in the conventional example, as shown in FIG. 13, coloring 70 'was observed not only in the inside of the column 71 and the vicinity of the discharge hole 4, but also on the entire outer surface of the column. Further, not only the adjacent columns but also the lower hollow cylinders of the columns on the right of the two columns were colored in a wide range. Therefore, in the conventional example, it is understood that the adsorption waste liquid and the mist based on the adsorption waste may adhere not only to the used column but also to other columns to cause cross contamination. From the observation results of the above experiment, in the present invention, the degree of scattering and adhesion of mist to other columns is about 3 as compared with the conventional example.
It is thought that it was suppressed more than an order of magnitude.
【0048】本実施例においては吸着工程においてカラ
ムに生じた汚染のほとんどは、洗浄工程34によって除
去された。従って、洗浄工程後はカラムの外観は着色の
無い状態に復帰した。従って、他のカラムへのクロスコ
ンタミネーションはもちろん、当該カラムに対応する回
収液への吸着廃液の混入(セルフコンタミネーション)
も効果的に防止された。一方、従来例においては洗浄工
程においてカラム内部と吐出孔先端付近は洗浄されたも
のの、カラム外部表面や、他のカラムの汚染は完全には
除去されなかった。図13の例では、使用した左から3個
目のカラム下部中空筒と中空円錐の接続部分に、吸着廃
液と洗浄廃液の混合液が残留した。また、2つ右隣のカ
ラムの下部中空筒に付着した約1μLの吸着廃液はその
まま残留した。In the present example, most of the contamination generated on the column during the adsorption step was removed by the washing step 34. Therefore, after the washing step, the appearance of the column returned to the state without coloring. Therefore, not only cross-contamination to other columns but also mixing of adsorption waste liquid to the recovery liquid corresponding to the column (self-contamination)
Was also effectively prevented. On the other hand, in the conventional example, although the inside of the column and the vicinity of the tip of the discharge hole were washed in the washing step, the contamination on the outer surface of the column and other columns was not completely removed. In the example of FIG. 13, the mixed liquid of the adsorption waste liquid and the cleaning waste liquid remained in the connection portion between the third lower column hollow cylinder and the hollow cone used from the left. Further, about 1 μL of the adsorption waste liquid adhering to the lower hollow cylinder of the column on the right next to the second column remained as it was.
【0049】回収工程においても吸着工程と同様に、当
該カラム先端から回収溶液に基づく飛沫やミストが発生
した。このミストが当該カラムの吐出孔外側上方に付着
し、残留した吸着廃液と合流すると、吸着廃液とともに
カラム表面を伝わって回収液に合流、混入するセルフコ
ンタミネーションの危険性がある。また、同様に他のカ
ラム(この例では2つ右隣のカラム)の吐出孔外側上方
に付着した汚染物がそのカラムに対応する回収液に混入
し、クロスコンタミネーションを起こす危険性もある。In the recovery step as well, as in the adsorption step, droplets and mist due to the recovered solution were generated from the tip of the column. If this mist adheres to the upper side of the outer side of the discharge hole of the column and merges with the remaining adsorption waste liquid, there is a risk of self-contamination in which the mist flows along the adsorption waste liquid along the column surface and merges with the collected liquid. Further, similarly, there is a risk that contaminants adhering to the upper outside of the ejection holes of the other columns (in this example, the column on the right of the two columns in the present example) may mix with the recovery liquid corresponding to the column and cause cross contamination.
【0050】上記吸着廃液による汚染以外に、回収工程
における回収液によるコンタミネーションの課題も検討
した。従来例に基づくカラムを用いて引き続き回収工程
を行い、1回目の吸引後における回収容器19ならびに
回収槽9の写真トレースを図14に示した。この例でも左
から3個目のカラムを使用し、他のカラムは使用しなか
った。左から3個目の使用したカラムに対応する回収容
器19”に回収液が回収された。また、左隣の回収容器1
9'''上端に、液滴72が約2μL付着した。この液滴は3個
目の使用カラムの回収液が飛沫となって飛び散り、隣の
回収チューブに付着したと考えられる。即ち、従来例に
おいては回収液もミスト等となって回収槽内に飛散し、
周囲のカラムや回収容器に付着し、クロスコンタミネー
ションの原因となる危険性がある。In addition to the above contamination by the adsorption waste liquid, the problem of contamination by the recovery liquid in the recovery process was also examined. FIG. 14 shows a photographic trace of the recovery container 19 and the recovery tank 9 after the first suction, using the column based on the conventional example. Also in this example, the third column from the left was used and the other columns were not used. The collected solution was collected in the collection container 19 "corresponding to the third column used from the left.
About 2 μL of the droplet 72 was attached to the upper end of 9 ′ ″. It is considered that the liquid droplets collected from the third column used were scattered and scattered, and adhered to the adjacent collection tube. That is, in the conventional example, the recovered liquid also becomes a mist and scatters in the recovery tank,
There is a risk that it will adhere to the surrounding columns and collection containers and cause cross contamination.
【0051】一方、本実施例に基づくカラムを用いて回
収工程を行った場合、このような回収液の飛沫やミスト
の周囲への飛散は全く確認されなかった。即ち、本発明
においては回収工程においても回収液がミスト等となっ
て回収槽内に飛散することはなく、周囲のカラムや回収
容器に付着したり、クロスコンタミネーションの原因と
なる危険性は極めて低いことが確認された。On the other hand, when the recovery step was carried out using the column according to this example, no splash of the recovered liquid or scattering of mist around was confirmed. That is, in the present invention, the recovery liquid does not become mist or the like and scatters in the recovery tank even in the recovery step, and the risk of adhering to the surrounding column or recovery container or causing cross contamination is extremely high. It was confirmed to be low.
【0052】次に、従来例における上記のごとき微量の
回収液や吸着廃液の混入が、PCRによる増幅を経て最終
結果に及ぼす影響について検討した。まず、本発明第1
の実施例によりヒト血液から抽出したゲノムDNAをテン
プレートとした場合の、PCRによる検出下限について検
討した。使用したPCR条件は特開平11−341999
に準拠し、マーカはALDOB、PCRは60サイクルとした。PC
R産物の生成の有無をアガロースゲル電気泳動法により
確認した結果を図15に示した。図15中、Mと記した3レ
ーンはサイズマーカ、A〜GはそれぞれゲノムDNAテンプ
レート量を100ngから0.1pgまで1/10ずつ変化した系列7
種のPCR産物、Hはテンプレート無しのPCRの産物の電気
泳動結果で、縦軸はDNAの断片長を示す。図から明らか
なとおり、テンプレート量が100ng〜10pgにおいては文
献値122bpと同等のPCR産物が確認されたが、1pg以下で
はPCR産物が検出されなかった。つまり本PCR条件では最
小10pgのテンプレートが存在するとPCR増幅が確認さ
れ、テンプレートの検出下限は10pgであった。なお、PC
Rのサイクル数を50サイクルとした場合、テンプレート
の検出下限は87pgであった。Next, the influence of the inclusion of a trace amount of the recovered liquid or the adsorption waste liquid in the conventional example on the final result after amplification by PCR was examined. First, the present invention No. 1
The lower limit of detection by PCR was examined when the genomic DNA extracted from human blood was used as a template in the above Example. The PCR conditions used are described in JP-A-11-341999.
The marker was ALDOB and PCR was 60 cycles. PC
The result of confirming the presence or absence of the R product by agarose gel electrophoresis is shown in FIG. In Fig. 15, 3 lanes marked with M are size markers, and A to G are series 7 in which the amount of genomic DNA template was changed by 1/10 from 100 ng to 0.1 pg, respectively.
Seed PCR product, H is the result of electrophoresis of the PCR product without template, and the vertical axis shows the DNA fragment length. As is clear from the figure, a PCR product equivalent to the literature value of 122 bp was confirmed when the template amount was 100 ng to 10 pg, but no PCR product was detected at 1 pg or less. In other words, PCR amplification was confirmed when a minimum of 10 pg of template was present under this PCR condition, and the lower limit of template detection was 10 pg. PC
When the number of R cycles was 50, the detection limit of the template was 87 pg.
【0053】上記におけるテンプレートの使用量は通常
約100ngであるため、検出下限10pgまたは87pgは、この
通常の使用量の一万分の一又は約千分の一に相当する。
つまり、テンプレートが一万分の一または千分の一以上
混入すると、ネガティブコントロールは偽陽性となり、
また本来ネガティブな試料の結果も偽陽性を示す。10p
g、87pgのヒトゲノムDNAはそれぞれ約3、25コピーの分
子に相当する。つまり、本検出法は数〜数十分子程度の
極微量のゲノムDNAが検出可能な極めて高感度な検出法
であり、微量のコンタミネーションも回避しなければな
らない。Since the amount of the template used in the above is usually about 100 ng, the lower limit of detection of 10 pg or 87 pg corresponds to this ordinary amount of use of 1/10000 or 1/1000.
In other words, if the template is mixed in at least 10,000 or 1,000 times, the negative control will become a false positive,
In addition, the result of an originally negative sample also shows a false positive. 10p
Human genomic DNAs of g and 87 pg correspond to about 3 and 25 copies of the molecule, respectively. In other words, this detection method is an extremely high-sensitivity detection method capable of detecting a very small amount of genomic DNA of the order of several to several tens of tens, and it is necessary to avoid a small amount of contamination.
【0054】前述の通り、従来例において使用したカラ
ムの回収液のうち約2μLが隣のカラムに対応する回収
容器の上端に液滴として付着したのが観察された。この
液滴が回収容器の中に落下し、回収液に混入する危険性
がある。約2μLの混入量は、回収液2mLの約千分の一
であるため、本条件のPCRを行うと、偽陽性や目的外のP
CR産物などの誤った結果をもたらす。一方、本実施例に
おいては前述の通り回収液の飛散、混入が確認されなか
った。液滴の飛散状況の比較結果から、本発明における
回収液混入による偽陽性の危険率は従来例より少なくと
も3桁以上低いと考えられる。As described above, it was observed that about 2 μL of the collected liquid of the column used in the conventional example was deposited as a droplet on the upper end of the collecting container corresponding to the adjacent column. There is a risk that these droplets will drop into the recovery container and mix with the recovery liquid. The mixed amount of about 2 μL is about one-thousandth of the collected solution (2 mL). Therefore, when PCR is performed under these conditions, false positives and undesired P
It gives erroneous results such as CR products. On the other hand, in the present example, as described above, no scattering or mixing of the recovered liquid was confirmed. From the comparison result of the scattering state of droplets, it is considered that the risk rate of false positives due to the mixing of the collected liquid in the present invention is lower by at least 3 digits or more than the conventional example.
【0055】次に、吸着廃液の混入の影響について同様
の検討を行った。その結果、千分の一に希釈した吸着廃
液のみ、PCR産物が得られた。即ち、吸着廃液が約千分
の一混入すると、ネガティブコントロールは偽陽性とな
り、また本来ネガティブな試料の結果も偽陽性を示すこ
とを意味する。Next, a similar study was conducted on the influence of the admixture of the adsorption waste liquid. As a result, PCR products were obtained only from the adsorption waste liquid diluted to one thousandth. That is, it means that when the adsorption waste liquid is mixed in about 1 / 1,000, the negative control becomes a false positive, and the result of the originally negative sample also shows a false positive.
【0056】前述の通り、従来例においては使用したカ
ラムの吸着廃液が付近のカラムに飛散、付着し、洗浄工
程後も2つ隣のカラムの下部中空筒に約1μLが残留し
た。回収工程において、この液滴が振動などにより、ま
たは回収液の飛沫に伴って回収容器の中に落下し、回収
液に混入すると、PCRを経て、偽陽性や目的外のPCR産物
などの誤った結果をもたらす。つまり、従来例のカラム
では吸着廃液によるクロスコンタミネーションに基づい
て誤った結果がもたらされる危険性がある。一方、本実
施例においては前述の通りこのような回収液の飛散、混
入が防止されたため、この危険性は無い。As described above, in the conventional example, the adsorption waste liquid of the used column was scattered and adhered to the neighboring columns, and about 1 μL remained in the lower hollow cylinders of the two adjacent columns even after the washing step. In the recovery process, when the liquid drops fall into the recovery container due to vibration or due to the splash of the recovery liquid and mix in the recovery liquid, false positives such as false positives and unintended PCR products are passed through PCR. Bring results. That is, the conventional column has a risk of giving an erroneous result due to cross-contamination due to the adsorption waste liquid. On the other hand, in this embodiment, as described above, since the scattering and mixing of the recovery liquid was prevented, this danger does not occur.
【0057】本発明による他の実施例は、実施例1と同
等以上のミスト混入防止作用をもつ。例えば実施例2に
おいては実施例1のミスト混入防止作用に加えて、フィ
ルタ単独の効果により粒子透過率が8ppm以下に抑制
される。後者の水準は、同濃度のテンプレート混入によ
る偽陽性化の水準(1/10000)を約一桁下回るため、フ
ィルタ単独でも偽陽性の危険率を実質的に皆無にでき
る。実施例3,5においてはミスト混入の危険率は実質
的に皆無、実施例4は実施例1と同等である。従って、
本発明の各実施例は実施例1と同等ないしそれ以上のミ
スト混入防止効果がある。もちろん本発明はここに示し
た実施例の範囲に限定されるものではなく、カラムの吐
出孔から発生しうるミスト等を別のカラムの吐出孔から
隔離するという各実施例共通の技術的要素を具現するそ
の他の変形例や改良例、それらの組合せにも適用可能で
あり、同様の効果を発揮する。Another embodiment according to the present invention has a mist mixing prevention effect equivalent to or more than that of the first embodiment. For example, in Example 2, in addition to the effect of preventing mist mixing in Example 1, the particle transmittance is suppressed to 8 ppm or less by the effect of the filter alone. The latter level is about an order of magnitude lower than the level of false positives (1/10000) due to the same concentration of template, so that the risk of false positives can be virtually eliminated with the filter alone. In Examples 3 and 5, there is virtually no risk of mixing mist, and Example 4 is equivalent to Example 1. Therefore,
Each embodiment of the present invention has a mist mixing prevention effect equivalent to or greater than that of the first embodiment. Of course, the present invention is not limited to the scope of the embodiments shown here, and a technical element common to each embodiment is to separate mist or the like that may be generated from the discharge hole of a column from the discharge hole of another column. The present invention can be applied to other embodied modifications, improvements, and combinations thereof, and exhibits similar effects.
【0058】[0058]
【発明の効果】この様に本発明によれば、固相抽出カラ
ムの吐出孔から発生しうるミスト等を別のカラムの吐出
孔から隔離する手段を設けることにより、コンタミネー
ションを防止し、臨床診断を高精度に実施するために十
分な高純度の核酸を抽出する装置を提供できる、という
効果がある。As described above, according to the present invention, by providing means for isolating mist or the like that may be generated from the discharge hole of a solid phase extraction column from the discharge hole of another column, contamination can be prevented and clinical There is an effect that it is possible to provide an apparatus for extracting nucleic acids of high purity that is sufficient for highly accurate diagnosis.
【図1】本発明第1の実施例に基づく固相抽出カラムの
構成概略図。FIG. 1 is a schematic configuration diagram of a solid phase extraction column according to a first embodiment of the present invention.
【図2】本発明第1の実施例に基づく自動抽出装置の構
成概略図。FIG. 2 is a schematic configuration diagram of an automatic extraction device based on the first embodiment of the present invention.
【図3】本発明第1の実施例に基づく、廃液チャンバー
21とカラム1の断面概略図。FIG. 3 is a waste liquid chamber according to the first embodiment of the present invention.
21 and column 1 cross-section schematic.
【図4】本発明第1の実施例に基づく、回収チャンバー
22、カラム1、回収容器19の断面概略図。FIG. 4 is a recovery chamber according to the first embodiment of the present invention.
22, a schematic cross-sectional view of the column 1 and the recovery container 19.
【図5】本発明第1の実施例に基づく、固相抽出の手順
の概略を示すフロー図。FIG. 5 is a flowchart showing an outline of a solid phase extraction procedure according to the first embodiment of the present invention.
【図6】本発明第2の実施例に基づく固相抽出カラム
1’の構成概略図。FIG. 6 is a schematic configuration diagram of a solid-phase extraction column 1 ′ according to the second embodiment of the present invention.
【図7】本発明第2の実施例に基づく回収チャンバーに
おけるカラム1‘と回収容器19の相互関係を示す模式
図。FIG. 7 is a schematic diagram showing a mutual relationship between a column 1 ′ and a recovery container 19 in the recovery chamber according to the second embodiment of the present invention.
【図8】本発明第3の実施例に基づくカラム1”の構成
概略図。FIG. 8 is a schematic configuration diagram of a column 1 ″ according to a third embodiment of the present invention.
【図9】本発明第3の実施例に基づく廃液チャンバーの
断面の模式図。FIG. 9 is a schematic view of a cross section of a waste liquid chamber according to a third embodiment of the present invention.
【図10】本発明第4の実施例による自動抽出装置の構成
概略図。FIG. 10 is a schematic configuration diagram of an automatic extraction device according to a fourth embodiment of the present invention.
【図11】本発明第5の実施例による自動抽出装置の主要
部の構成概略図。FIG. 11 is a schematic configuration diagram of a main part of an automatic extraction device according to a fifth embodiment of the present invention.
【図12】本発明第1の実施例に基づくカラムを用いて全
血からの核酸抽出を行った際の、吸着工程終了時点の状
態を撮影した写真のトレース。FIG. 12 is a trace of a photograph taken at the end of the adsorption step when nucleic acid was extracted from whole blood using the column according to the first embodiment of the present invention.
【図13】従来例に基づくカラムを用いて全血からの核酸
抽出を行った際の、吸着工程終了時点の状態を撮影した
写真のトレース。FIG. 13 is a trace of a photograph taken at the end of the adsorption step when nucleic acid was extracted from whole blood using a column based on the conventional example.
【図14】従来例に基づくカラムを用いて全血からの核酸
抽出を行った際の、回収工程1回目の吸引後における回
収容器ならびに回収槽の状態を撮影した写真のトレー
ス。FIG. 14 is a trace of a photograph of the state of the collection container and the collection tank after the first suction in the collection process when nucleic acid extraction from whole blood is performed using a column based on the conventional example.
【図15】テンプレートとして回収液を用い、その量を変
えた場合の、PCR産物のアガロースゲル電気泳動結果。FIG. 15 shows the results of agarose gel electrophoresis of PCR products when the amount of recovery solution was used as a template and the amount thereof was changed.
【図16】従来の一体化カラムを示す図。FIG. 16 is a view showing a conventional integrated column.
【図17】従来のカラムを示す図。FIG. 17 is a view showing a conventional column.
1、 1’、1”…カラム、2…担体、3…注入孔、4
…吐出孔、5…隔壁、6…上部筐体、7…カラムホル
ダ、8…廃液槽、9…回収槽、10…吸気孔、11…カ
バー、12…廃液孔、13…廃液チューブ、14…トラ
ップ、15、15’…排気チューブ、16、16’…フ
ィルタ、17、17’…電磁弁、18…真空ポンプ、1
9、19’、19”、19'''...回収容器、20…自動抽出
装置、21…廃液チャンバー、22…回収チャンバー、
23…フィルタ、24…延長筒、25…集塵機構、26
…吸気機構、27…排気機構、28…加圧機構、29…
加圧チャンバー、31…分解工程、32…添加液混合工
程、33…吸着工程、34…洗浄工程、35…回収工
程、40…試料、41…酵素溶液、42…分解溶液、4
3…添加溶液、44…洗浄液、45…溶出液、46…分
解液、47…吸着溶液、48…吸着廃液、49…洗浄廃
液、50…回収液、60、60’…一体化保持チャンバ
ー、61、61’…流通路、62…帯電機構、63…電
極、64…電磁石、65…磁性粒子、66…一体化カラ
ム、67…ツメ、68…ストッパ、70、70’...着
色、71...従来例のカラム、72...液滴、下部中空筒…10
0、中空円錐…101、隔壁…205、キャリアーボディ…22
6、コンパートメント…228、吐出孔…232、担体…23
4。1, 1 ', 1 "... column, 2 ... carrier, 3 ... injection hole, 4
... discharge hole, 5 ... partition wall, 6 ... upper housing, 7 ... column holder, 8 ... waste liquid tank, 9 ... recovery tank, 10 ... suction hole, 11 ... cover, 12 ... waste liquid hole, 13 ... waste liquid tube, 14 ... Trap, 15, 15 '... Exhaust tube, 16, 16' ... Filter, 17, 17 '... Solenoid valve, 18 ... Vacuum pump, 1
9, 19 ', 19 ", 19'" ... recovery container, 20 ... automatic extraction device, 21 ... waste liquid chamber, 22 ... recovery chamber,
23 ... Filter, 24 ... Extension tube, 25 ... Dust collection mechanism, 26
... intake mechanism, 27 ... exhaust mechanism, 28 ... pressurization mechanism, 29 ...
Pressure chamber, 31 ... Decomposition step, 32 ... Additive solution mixing step, 33 ... Adsorption step, 34 ... Washing step, 35 ... Recovery step, 40 ... Sample, 41 ... Enzyme solution, 42 ... Decomposition solution, 4
3 ... Additive solution, 44 ... Washing liquid, 45 ... Eluent, 46 ... Decomposition liquid, 47 ... Adsorption solution, 48 ... Adsorption waste liquid, 49 ... Washing waste liquid, 50 ... Recovery liquid, 60, 60 '... Integrated holding chamber, 61 , 61 '... Flow path, 62 ... Charging mechanism, 63 ... Electrode, 64 ... Electromagnet, 65 ... Magnetic particle, 66 ... Integrated column, 67 ... Claw, 68 ... Stopper, 70, 70' ... Coloring, 71. .. Conventional column, 72 ... droplet, lower hollow cylinder… 10
0, hollow cone… 101, partition wall… 205, carrier body… 22
6, Compartment ... 228, Discharge hole ... 232, Carrier ... 23
Four.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 曽根原 剛志 東京都国分寺市東恋ケ窪一丁目280番地 株式会社日立製作所中央研究所内 (72)発明者 入江 隆史 東京都国分寺市東恋ケ窪一丁目280番地 株式会社日立製作所中央研究所内 Fターム(参考) 4B024 AA11 AA19 CA01 CA11 HA11 4B029 AA23 BB20 CC01 4B063 QA01 QQ41 QS12 QS14 QS39 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continued front page (72) Inventor Takeshi Sonehara 1-280, Higashi Koikekubo, Kokubunji, Tokyo Central Research Laboratory, Hitachi, Ltd. (72) Inventor Takashi Irie 1-280, Higashi Koikekubo, Kokubunji, Tokyo Central Research Laboratory, Hitachi, Ltd. F term (reference) 4B024 AA11 AA19 CA01 CA11 HA11 4B029 AA23 BB20 CC01 4B063 QA01 QQ41 QS12 QS14 QS39
Claims (15)
と、 前記筒体に設けられ、筒体内の液体を吐出させる吐出孔
と、 前記吐出孔の外周に、前記吐出孔を覆うように設けられ
た隔壁部とを有することを特徴とする核酸分離カラム。1. A tubular body, an injection hole provided in the tubular body for injecting a sample solution, an adsorption carrier provided in the tubular body for adsorbing nucleic acid, and provided in the tubular body. A nucleic acid separation column comprising: a discharge hole for discharging a liquid in a body; and a partition wall provided on the outer periphery of the discharge hole so as to cover the discharge hole.
の間の空間をふさぐように設けられたフィルタを有する
ことを特徴とする請求項1記載の核酸分離カラム。2. The nucleic acid separation column according to claim 1, further comprising a filter provided so as to close the space between the outer circumference of the cylindrical body and the inner circumference of the partition wall.
されたことを特徴とする請求項1記載の核酸分離カラ
ム。3. The nucleic acid separation column according to claim 1, wherein the cylindrical body and the partition wall portion are integrally formed.
長筒が設けられ、前記延長筒は、前記隔壁の下端よりも
下に突出して設けられていることを特徴とする請求項1
記載の核酸分離カラム。4. An extension cylinder is further provided between the discharge hole and the partition wall, and the extension cylinder is provided so as to project below a lower end of the partition wall. 1
The nucleic acid separation column described.
り付けられていることを特徴とする請求項4記載の核酸
分離カラム。5. The nucleic acid separation column according to claim 4, wherein the extension cylinder is detachably attached to the cylinder.
られ、前記ストッパーにより、前記筒体とは着脱自在に
取り付けられていることを特徴とする請求項5記載の核
酸分離カラム。6. The nucleic acid separation column according to claim 5, wherein a stopper is provided around the extension cylinder, and the stopper is detachably attached to the cylinder by the stopper.
注入する注入孔と、前記筒体の中に設けられ、核酸を吸
着させる吸着担体と、前記筒体に設けられた筒体内の液
体を吐出させる吐出孔と、隔壁を有し、前記吐出孔は前
記隔壁の内部にあるように設置された核酸分離カラム
と、 前記吐出孔から吐出される前記液体を収容する収容容器
と、 前記核酸分離カラムは、複数設けられ、 前記収容容器は、前記複数の核酸分離カラム毎にそれぞ
れに設けられていることを特徴とする核酸分離装置。7. A cylinder, an injection hole provided in the cylinder for injecting a sample solution, an adsorption carrier provided in the cylinder for adsorbing nucleic acid, and a cylinder provided in the cylinder. A nucleic acid separation column having a discharge hole for discharging the liquid in the body and a partition, the discharge hole being installed inside the partition, and a container for containing the liquid discharged from the discharge hole. A plurality of the nucleic acid separation columns are provided, and the storage container is provided for each of the plurality of nucleic acid separation columns.
上側に設けられていることを特徴とする請求項7記載の
核酸分離装置。8. The nucleic acid separating apparatus according to claim 7, wherein the upper end of the container is provided above the discharge hole.
するチャンバーを有し、 前記通気口を通じて、前記チャンバー内の圧力を陰圧に
する減圧装置とを具備することを特徴とする請求項7記
載の核酸分離装置。9. A decompression device for accommodating the plurality of accommodating containers and having a chamber having a vent, and comprising a decompressor for reducing the pressure in the chamber to a negative pressure through the vent. Item 7. The nucleic acid separation device according to item 7.
ンバーを有し、 前記チャンバー内の圧力を陽圧にする加圧装置とを具備
することを特徴とする請求項7記載の核酸分離装置。10. The nucleic acid separation according to claim 7, further comprising: a pressurizing device that has a chamber for accommodating the injection holes of the plurality of cylindrical bodies and that makes the pressure in the chamber a positive pressure. apparatus.
は、逆流防止弁が設けられていることを特徴とする請求
項9記載の核酸分離装置。11. The nucleic acid separating apparatus according to claim 9, wherein a check valve is provided between the chamber and the pressure reducing device.
を回収するための容器であることを特徴とする請求項7
記載の核酸分離装置。12. The storage container is a container for collecting nucleic acid in the sample solution.
The nucleic acid separating apparatus as described.
吸着担体に核酸が吸着した後の残りの廃液を回収するた
めの容器であることを特徴とする請求項7記載の核酸分
離装置。13. The nucleic acid separation apparatus according to claim 7, wherein the storage container is a container for collecting the waste liquid remaining after the nucleic acid is adsorbed on the adsorption carrier from the sample solution.
工程と、 前記筒体に形成された吐出孔の外周に、前記吐出孔を覆
うように設けられた隔壁を有する核酸分離カラムを用
い、吸着担体に吸着した核酸を、前記吐出孔から吐出さ
せて回収する工程とを有することを特徴とする核酸抽出
方法。14. A step of preparing a solution containing a nucleic acid, adsorbing the nucleic acid onto an adsorption carrier provided in a cylinder, and covering the discharge hole on the outer periphery of the discharge hole formed in the cylinder. And a step of ejecting the nucleic acid adsorbed on the adsorption carrier from the ejection hole and collecting the nucleic acid using a nucleic acid separation column having a partition wall provided in.
酸分離カラム毎に異なる種類の前記核酸を回収すること
を特徴とする請求項14記載の核酸抽出方法。15. The nucleic acid extraction method according to claim 14, wherein there are a plurality of the nucleic acid separation columns, and different kinds of the nucleic acids are recovered for each of the nucleic acid separation columns.
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