JP2003156491A - Evaluation method of dioxins in combustion product - Google Patents

Evaluation method of dioxins in combustion product

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JP2003156491A
JP2003156491A JP2001354963A JP2001354963A JP2003156491A JP 2003156491 A JP2003156491 A JP 2003156491A JP 2001354963 A JP2001354963 A JP 2001354963A JP 2001354963 A JP2001354963 A JP 2001354963A JP 2003156491 A JP2003156491 A JP 2003156491A
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JP
Japan
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dioxins
receptor
toxicity
toxicity evaluation
evaluating
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JP2001354963A
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Japanese (ja)
Inventor
Yasuo Kobayashi
康男 小林
Toshio Nakanishi
俊夫 中西
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Kubota Corp
Original Assignee
Kubota Corp
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Publication date
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a technology capable of measuring, efficiently and more accurately, the toxicity of dioxins included in a combustion product such as exhaust gas, flying ashes, waste water, waste soil or the like generated especially from an incineration equipment or the like. SOLUTION: A sample containing the combustion product is extracted with an organic solvent, and a sulfuric acid treatment wherein concentrated sulfuric acid is applied until the extracted liquid-extract becomes achromatic and two- liquid separation is performed to thereby acquire an organic layer as a toxicity evaluation sample, is performed, and an antigen-antibody reaction is performed to the toxicity evaluation sample.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【0001】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、燃焼生成物中に含
まれるダイオキシン類を定量するダイオキシン類分析方
法に関する。
TECHNICAL FIELD The present invention relates to a dioxin analysis method for quantifying dioxins contained in combustion products.

【従来の技術】従来、この種の毒性評価方法としては、
毒性評価対象となる評価対象液を調製し、その評価対象
液中に含まれるダイオキシン類の化学量を求め、その毒
性を基準となるダイオキシン類の毒性に換算した上で総
和(TEQ、毒性等価量)を求め、評価対象液の毒性と
して算出し、評価することが行われている。ここで、前
記TEQを求めるには、前記ダイオキシン類を抗原とす
る抗原抗体反応を利用することが行われている。つま
り、前記ダイオキシン類を、認識して捕捉する抗体を結
合させた担体に、前記ダイオキシン類を含有する評価対
象液を晒し、前記担体に結合したダイオキシン類量を、
前記抗原に施した蛍光標識等の発光度により求めるとい
うものである。
2. Description of the Related Art Conventionally, as this kind of toxicity evaluation method,
Prepare the liquid to be evaluated for toxicity evaluation, obtain the chemical amount of dioxins contained in the liquid to be evaluated, convert the toxicity into the toxicity of the reference dioxins, and then calculate the total (TEQ, toxicity equivalent amount) ) Is calculated, and the toxicity of the liquid to be evaluated is calculated and evaluated. Here, in order to obtain the TEQ, an antigen-antibody reaction using the dioxins as an antigen is used. That is, the dioxin, the carrier to which the antibody for recognizing and capturing is bound, the evaluation target liquid containing the dioxin is exposed, and the amount of dioxin bound to the carrier is
It is obtained by the luminosity of the fluorescent label or the like applied to the antigen.

【0002】[0002]

【発明が解決しようとする課題】しかし、上述のような
技術によると、前記抗体として、抗原を認識する選択性
が高すぎて、たとえば、2,3,7,8−T4CDD
(2,3,7,8−テトラクロジベンゾジオキシン)に
は結合するが、他の類似物質にはほとんど結合しないも
のや、毒性の高いダイオキシン類によく結合する一方あ
まり毒性の高くないダイオキシン類にまでよく結合し、
人体に対する毒性とは全く無関係な選択結合性を示すも
のが用いられる場合が多く、その抗体に結合する化学物
質の毒性の程度と、ダイオキシン類の結合量との相関が
得られない場合が多かった。そのため、やはり、評価対
象液の組成まで知らねば正確な毒性を評価することが出
来ないという現状にある。
However, according to the technique described above, the antibody has too high selectivity for recognizing an antigen, and, for example, 2,3,7,8-T4CDD is used.
It binds to (2,3,7,8-tetraclodibenzodioxin) but hardly binds to other similar substances, or to dioxins that are highly toxic but are not very toxic. Coupled well,
In many cases, a substance that exhibits a selective binding property that is completely unrelated to the toxicity to the human body is used, and in many cases a correlation between the degree of toxicity of the chemical substance that binds to the antibody and the binding amount of dioxins cannot be obtained. . Therefore, the current situation is that accurate toxicity cannot be evaluated without knowing the composition of the liquid to be evaluated.

【0003】そこで、Ahレセプターを用いてダイオキ
シン類を検出し、その検出量に基づき毒性を評価しよう
という試みがなされている。
Therefore, attempts have been made to detect dioxins using the Ah receptor and to evaluate toxicity based on the detected amount.

【0004】この方法は、本来Ahレセプターが、ダイ
オキシン類と結合した後、DNAと作用して毒性を発揮
する事から、前記Ahレセプターに対するダイオキシン
類の結合量を知ることによって、正確な毒性の評価を可
能とするものとして期待されている。たとえば、このよ
うな測定を可能とする方法としては、Ahレセプターが
ダイオキシン類及びAh Receptor Nucl
ear Trancelocator(ARNT)と複
合体を形成可能な条件下で評価対象液を混合し、生成し
た複合体をその複合体のみに選択的に結合するDNAに
結合させ、その結合量を測定するものが知られている。
このように、前記Ahレセプターを用いた場合でも、特
に燃焼生成物を分析する場合に、ダイオキシン類の人に
対する毒性と、Ahレセプターに対する結合性とが一致
しない場合が多く、毒性はほとんど無いが、前記Ahレ
セプターに結合してしまうような妨害物質を、あらかじ
め毒性評価試料中から除外することが好ましいと考えら
れている。
In this method, since Ah receptor originally binds to dioxins and then exerts toxicity by acting on DNA, accurate toxicity evaluation can be performed by knowing the amount of dioxins bound to the Ah receptor. Is expected to be possible. For example, as a method that enables such measurement, Ah receptors are dioxins and Ah Receptor Nucl.
There is a method in which the liquid to be evaluated is mixed with an ear tranlocator (ARNT) under conditions capable of forming a complex, the produced complex is allowed to bind to DNA that selectively binds only to the complex, and the amount of binding is measured. Are known.
As described above, even when the Ah receptor is used, the toxicity of dioxins to humans and the binding to the Ah receptor are often inconsistent, especially when analyzing combustion products, and there is almost no toxicity. It is considered preferable to exclude from the toxicity evaluation sample beforehand an interfering substance that will bind to the Ah receptor.

【0005】しかし、除外すべき妨害物質としてどのよ
うなものが含まれるかは、サンプルの種類、生成条件に
よって大きく異なり、一般的に酸処理、アルカリ処理、
カラムクロマトグラフィー等の手法で妨害物質が十分に
除去されうるか否かは不明で、結局は、信頼性の十分で
はない毒性評価になっていたのではないかと考えられる
場合がある。しかも、サンプルをむやみに妨害物質除去
の処理に供した場合は、行程が煩雑になるほど評価すべ
きダイオキシン類の損失が大きくなるとともに、作業に
要する時間がかかり、作業効率が低下するという問題が
ある。また、このような問題は、Ahレセプターを用い
る場合に限らず、抗原抗体反応を利用した技術一般に起
こりえるものとして認識されており、対策が望まれてい
る。
However, what kind of interfering substance should be excluded depends largely on the type of sample and the production conditions. Generally, acid treatment, alkali treatment,
It is unclear whether the interfering substances can be sufficiently removed by a method such as column chromatography, and it may be considered that the toxicity evaluation was not sufficiently reliable in the end. Moreover, when the sample is unnecessarily subjected to a treatment for removing an interfering substance, there is a problem that the loss of dioxins to be evaluated increases as the process becomes more complicated, the time required for the work increases, and the work efficiency decreases. . Further, such a problem is recognized not only when the Ah receptor is used but also as a general technique that utilizes an antigen-antibody reaction, and a countermeasure is desired.

【0006】従って、本発明の目的は、上記欠点に鑑
み、特に焼却設備等から発生する排ガス、飛灰、廃水、
廃土等の燃焼生成物に含まれるダイオキシン類の毒性
を、効率よく、より正確に測定することのできる技術を
提供することにある。
Therefore, in view of the above-mentioned drawbacks, an object of the present invention is to produce exhaust gas, fly ash, waste water, especially from incinerators, etc.
It is an object of the present invention to provide a technique capable of efficiently and more accurately measuring the toxicity of dioxins contained in combustion products such as waste soil.

【0007】[0007]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、燃焼生成
物中に含まれるダイオキシン類を評価するに当たって共
存する夾雑物について調べたところ、ベンゾフルオラン
テン、ベンゾピレン、インデノピレン、ジベンゾアント
ラセン、ジベンゾピレン等のPAH(Polycycl
ic Aromatic Hydrocarbon
(Compounds))が先述の妨害物質に含まれ、
毒性は低いものの、前記Ahレセプターとの結合性が比
較的高いという知見を得た(表1参照)。
Means for Solving the Problems The inventors of the present invention investigated the coexisting contaminants in evaluating dioxins contained in combustion products. As a result, benzofluoranthene, benzopyrene, indenopyrene, dibenzoanthracene, dibenzene PAH (Polycyclyl) such as benzopyrene
ic Aromatic Hydrocarbon
(Compounds)) is included in the aforementioned interfering substances,
Although the toxicity was low, it was found that the binding to the Ah receptor was relatively high (see Table 1).

【0008】[0008]

【表1】 [Table 1]

【0009】そこで、燃焼生成物中からこれらのPAH
を選択的に除去すべく鋭意研究の結果、本発明に想到し
た。そこで、この目的を達成するための本発明の燃焼生
成物中のダイオキシン類評価方法の特徴手段は、燃焼生
成物中に含まれるダイオキシン類を評価する燃焼生成物
中のダイオキシン類評価方法であって、燃焼生成物を含
むサンプルを有機溶媒で抽出し、抽出された抽出液が無
色になるまで濃硫酸を作用させ、二液分離して有機層を
毒性評価試料として得る硫酸処理工程を行い、その毒性
評価試料に対して抗原抗体反応を行うことにあり、ま
た、燃焼生成物を含むサンプルを有機溶媒で抽出し、抽
出された抽出液を5〜15wt%の硝酸銀を含有するシ
リカゲルに接触させ、毒性評価試料の有機溶液を得る硝
酸銀処理工程を行い、その毒性評価試料に対して抗原抗
体反応を行ってもよく、前記抗原抗体反応が、前記毒性
評価試料、及び、ダイオキシン類に結合するレセプター
を含んでなるレセプター複合体構成物質を混合する混合
行程を行い、前記ダイオキシン類が前記レセプターに結
合して形成されるレセプター複合体に特異的に結合可能
な塩基配列を有するDNA断片部に対して作用させるも
のであることが好ましい。
Therefore, these PAHs are removed from the combustion products.
As a result of earnest research for selectively removing the present invention, the present invention has been accomplished. Therefore, the characteristic means of the method for evaluating dioxins in combustion products of the present invention for achieving this object is a method for evaluating dioxins in combustion products for evaluating dioxins contained in the combustion products. , A sample containing combustion products is extracted with an organic solvent, concentrated sulfuric acid is allowed to act until the extracted liquid becomes colorless, and a sulfuric acid treatment step of separating the two liquids to obtain an organic layer as a toxicity evaluation sample is performed. There is an antigen-antibody reaction on a toxicity evaluation sample, and a sample containing combustion products is extracted with an organic solvent, and the extracted extract is contacted with silica gel containing 5 to 15 wt% of silver nitrate, A silver nitrate treatment step of obtaining an organic solution of a toxicity evaluation sample may be performed, and an antigen-antibody reaction may be performed on the toxicity evaluation sample. A mixture process is performed in which a receptor complex-constituting substance containing a receptor that binds to syn is mixed, and the dioxins have a base sequence capable of specifically binding to the receptor complex formed by binding to the receptor. It is preferable to act on the DNA fragment portion.

【0010】〔作用効果〕つまり、本発明者らによる
と、燃焼生成物中に含まれるダイオキシン類中には、上
述のようにダイオキシン類と同様の骨格を有するPAH
が含まれ、これらのPAHは、Ahレセプターと結合し
やすいことが分かった。また、これらのPAHは、濃硫
酸との接触により、水溶性の物質に変換されやすく、容
易に二層分離して、水層に移動させられることが実験に
より明らかになった。そのため、燃焼生成物中に含まれ
るダイオキシン類を評価する場合に、燃焼生成物を含む
サンプルを有機溶媒で抽出し、濃硫酸を作用させると、
これらPAHは、ダイオキシン類から分離されることに
なる。
[Operation and Effect] That is, according to the present inventors, the dioxin contained in the combustion product has the same skeleton as that of the dioxin as described above.
It was found that these PAHs were likely to bind to the Ah receptor. Further, it has been clarified by experiments that these PAHs are easily converted into a water-soluble substance by contact with concentrated sulfuric acid and easily separated into two layers and moved to the water layer. Therefore, when evaluating dioxins contained in the combustion products, when a sample containing the combustion products is extracted with an organic solvent and concentrated sulfuric acid acts,
These PAHs will be separated from dioxins.

【0011】ここで、先述のようにこのような処理は、
十分行う必要がある一方、過度の処理は、作業性の低下
につながる等の問題がある。そこで、このような処理の
必要性の程度について検討したところ、抽出された抽出
液が無色になるまで濃硫酸を作用させると、公定の分析
法と相関性の高い分析結果が得られることがわかり、処
理の程度の指標として、燃焼生成物を含むサンプルから
の有機溶媒抽出液に、不可避的に溶解している着色成分
の減少度を視覚的に確認することにより、適切に妨害物
質の除去をする事ができることが分かった。そのため、
上記濃硫酸を作用させ、二液分離して有機層を毒性評価
試料として得る硫酸処理工程を行い、その毒性評価試料
に対して抗原抗体反応を行うと、抗原が特異的にダイオ
キシン類のみに作用して、定量可能な状態になるので、
より正確に、かつ的確にダイオキシン類を評価すること
ができる。
Here, as described above, such processing is
While sufficient processing is required, there is a problem that excessive processing leads to a reduction in workability. Therefore, we examined the extent of the necessity of such treatment and found that when concentrated sulfuric acid was allowed to act until the extracted liquid became colorless, analytical results highly correlated with the official analytical method were obtained. , As an indicator of the degree of treatment, it is possible to properly remove interfering substances by visually confirming the degree of decrease of the color components dissolved inevitably in the organic solvent extract from the sample containing combustion products. I found that I could do it. for that reason,
When the above sulfuric acid treatment is carried out, a sulfuric acid treatment step of separating the two liquids to obtain an organic layer as a toxicity evaluation sample is performed, and an antigen-antibody reaction is performed on the toxicity evaluation sample, the antigen specifically acts only on dioxins. Then, it becomes a quantifiable state,
Dioxins can be evaluated more accurately and accurately.

【0012】また、燃焼生成物を含むサンプルを有機溶
媒で抽出し、抽出された抽出液を5〜15wt%の硝酸
銀を含有するシリカゲルに接触させて、毒性評価試料の
有機溶液を得る硝酸銀処理工程を行い、その毒性評価試
料に対して抗原抗体反応を行うものである場合には、前
記シリカゲルをカラムに詰め、クロマトグラフィーを行
う形式で処理できるため、上述の硫酸処理を行う場合に
比べ、きわめて簡便な操作で同様の効果を得ることがで
きる。尚、この場合には、操作が簡便であることから、
連続してクロマトグラフィーを2操作分行う等、前記シ
リカゲル量を適宜設定することにより、より効果的に妨
害物質を除去することができる。
A silver nitrate treatment step in which a sample containing combustion products is extracted with an organic solvent, and the extracted extract is contacted with silica gel containing 5 to 15 wt% of silver nitrate to obtain an organic solution of a toxicity evaluation sample. When the antigen-antibody reaction is performed on the toxicity evaluation sample, the silica gel can be packed in a column and processed by chromatography. The same effect can be obtained by a simple operation. In this case, since the operation is simple,
Interfering substances can be removed more effectively by appropriately setting the amount of silica gel, such as performing chromatography for two consecutive operations.

【0013】さらに、前記抗原抗体反応を行う場合に、
前記毒性評価試料、及び、ダイオキシン類に結合するレ
セプターを含んでなるレセプター複合体構成物質(具体
的には、たとえば、ダイオキシンを含有する環境からサ
ンプリングしたダイオキシン溶液、及び、Ahレセプタ
ーとそのAhレセプターと対をなし、前記Ahレセプタ
ーが、前記ダイオキシンと結合したときに、複合体を形
成する要素となるARNTとの混合液の組み合わせ等)
を混合する混合行程を行い、前記ダイオキシン類が前記
レセプターに結合して形成されるレセプター複合体に特
異的に結合可能な塩基配列を有するDNA断片部に対し
て作用させると、その混合系内では以下の反応が起き
る。まず、ダイオキシン類が前記Ahレセプターと結合
する。すると、前記ダイオキシン類と結合したAhレセ
プターが、前記ARNTと結合し、特有のDNA断片部
と結合可能なレセプター複合体を形成する。ここで、こ
の系内には、レセプター複合体に結合可能な塩基配列を
有するDNA断片部が、前記圧電振動子に結合した状態
で設けられているから、前記レセプター複合体は、前記
DNA断片部に結合する。すると、そのDNA断片部の
質量増加分を定量する事によって、前記レセプター複合
体を定量する事ができ、ダイオキシン類の毒性が評価で
きることになる。
Furthermore, when carrying out the antigen-antibody reaction,
The toxicity evaluation sample and a receptor complex constituent substance containing a receptor that binds to dioxins (specifically, for example, a dioxin solution sampled from an environment containing dioxin, an Ah receptor and its Ah receptor) (Eg, a combination of a mixed solution with ARNT, which forms a complex when the Ah receptor binds to the dioxin, forming a pair)
When a mixing step is performed in which the dioxins are allowed to act on a DNA fragment portion having a base sequence capable of specifically binding to a receptor complex formed by binding to the receptor, in the mixing system The following reactions occur. First, dioxins bind to the Ah receptor. Then, the Ah receptor bound to the dioxins binds to the ARNT to form a receptor complex capable of binding to a specific DNA fragment part. Here, in this system, a DNA fragment portion having a base sequence capable of binding to the receptor complex is provided in a state of being bound to the piezoelectric vibrator, so that the receptor complex is the DNA fragment portion. Bind to. Then, the receptor complex can be quantified by quantifying the increase in mass of the DNA fragment portion, and the toxicity of dioxins can be evaluated.

【0014】具体的には、一対の電極を備えて振動部を
形成してある圧電振動子を設け、前記DNA断片部を前
記圧電振動子の振動部に固定して毒性評価装置を構成し
た場合には、上述の反応により、前記圧電振動子は前記
レセプター複合体の結合量だけ重量が増えることにな
る。
Specifically, in the case where a piezoelectric vibrator having a pair of electrodes and forming a vibrating portion is provided, and the DNA fragment portion is fixed to the vibrating portion of the piezoelectric vibrator to constitute a toxicity evaluation device. In addition, the above-described reaction causes the piezoelectric vibrator to increase in weight by the amount of the receptor complex bonded.

【0015】すると、前記圧電振動子を発振器により振
動させたときに基本振動数(F)と振動数変化度(Δ
F)、増加質量(Δm)の関係は、ΔF/F=Δm/K
(Kは振動子によってきまる固有の定数)として表され
るから、増加質量(Δm)は、Δm=(ΔF/F)*K
となり、振動数変化度(ΔF)に比例する事になるか
ら、前記振動数変化度を周波数測定装置等により調べれ
ば、前記増加質量を知ることが出来る。また、この増加
質量分のダイオキシン類は、毒性の高いものほど多く含
まれ、毒性の少ないものほど少ないことになるので、こ
こで得た質量は、まさに毒性の大小を現したものになっ
ているものといえる。そのため、前記評価対象液の毒性
を短時間、簡単かつ正確に評価出来ることになる。
Then, when the piezoelectric vibrator is vibrated by an oscillator, the fundamental frequency (F) and the frequency change degree (Δ
F) and increased mass (Δm) have a relationship of ΔF / F = Δm / K
Since (K is an inherent constant determined by the oscillator), the increasing mass (Δm) is Δm = (ΔF / F) * K
Since it is proportional to the frequency change (ΔF), the increased mass can be known by examining the frequency change with a frequency measuring device or the like. In addition, since the more toxic substances are more contained in the increased mass of dioxins and the less toxic substances are less, the mass obtained here is exactly the magnitude of toxicity. It can be said to be a thing. Therefore, the toxicity of the liquid to be evaluated can be evaluated easily and accurately in a short time.

【0016】また、前記レセプターが、マウスまたはモ
ルモット由来のアリールハイドロカーボン(Ah)レセ
プターであれば、他の生物由来のものに比べ、ダイオキ
シン類を高感度に検出可能である。また、前記レセプタ
ーが、ヒト由来アリールハイドロカーボン(Ah)レセ
プターであれば、種々の環境から採取した評価対象液に
基づき、特に問題視されやすい人体に対する影響を簡便
に知る事が出来るので特に有用である。
If the receptor is an aryl hydrocarbon (Ah) receptor derived from mouse or guinea pig, it is possible to detect dioxins with high sensitivity as compared with those derived from other organisms. In addition, if the receptor is a human-derived arylhydrocarbon (Ah) receptor, it is particularly useful because it is possible to easily know the effect on the human body, which is particularly problematic, based on the liquids to be evaluated collected from various environments. is there.

【0017】ダイオキシン類を含有する評価対象液を供
給してレセプターに前記ダイオキシン類を結合させると
ともに、前記ダイオキシン類と結合したレセプター重量
によって、前記評価対象液の毒性を評価すると、従来知
られている発色による吸光度による評価を行う場合に比
べ、簡単かつ正確な評価を可能とする。
It is conventionally known that a liquid to be evaluated containing dioxins is supplied to bind the dioxins to a receptor, and the toxicity of the liquid to be evaluated is evaluated by the weight of the receptor bound to the dioxins. It enables simple and accurate evaluation as compared with the case of evaluation by absorbance due to color development.

【0018】特に、先述の毒性評価装置を用いる場合、
前記毒性評価装置にダイオキシン類を含有する評価対象
液を供給する混合行程、及び、前記圧電振動子の振動周
波数により前記レセプター複合体の量を測定する測定行
程を行えば、特にダイオキシン類の種類ごとの量を定量
することなく毒性を直接的に測定出来る。
In particular, when the above-mentioned toxicity evaluation device is used,
By performing a mixing step of supplying a liquid to be evaluated containing dioxins to the toxicity evaluation device, and a measurement step of measuring the amount of the receptor complex by the vibration frequency of the piezoelectric vibrator, particularly for each type of dioxins Toxicity can be measured directly without quantifying the amount of

【0019】[0019]

【発明の実施の形態】以下に本発明の実施の形態を図面
に基づいて説明する。 〔毒性評価装置〕図1に示すように、本発明の毒性評価
方法に用いる毒性評価装置は、圧電振動子1の表面に電
極2を形成し、その電極2の表面に、毒性物質の非結合
状態の非活性化レセプターには結合せず、かつ、前記毒
性物質が前記レセプターに結合して形成されるレセプタ
ー複合体に結合可能な塩基配列を有するDNA断片部3
を結合してある振動部Aを設けて構成してある。前記電
極2には、前記圧電振動子1を所定の周波数で発振させ
るために発振器4を設け、前記レセプター複合体Rha
の定量時の発振周波数の変化は、発振周波数測定器5を
使用して測定可能に構成する。前記電極2は、金を用い
る。この電極2としては、白金、金及び銀から選択され
た少なくとも1種の金属であることが好ましい。前記圧
電振動子1には、水晶振動子を用いる。この圧電振動子
1としては、チタン酸バリウム、酒石酸カリウムナトリ
ウム、水晶から選択される振動子を用いることが好まし
い。これらの電極2、圧電振動子1の種類、大きさ、形
状の組み合わせは、使用の目的及び環境に応じて適宜選
択する。電極2は慣用の作製方法、例えばメッキ法、蒸
着法、塗布法等により作製してよい。また、前記発振器
4及び前記発振周波数測定器5は適宜公知のものを選択
してよい。
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Embodiments of the present invention will be described below with reference to the drawings. [Toxicity Evaluation Device] As shown in FIG. 1, the toxicity evaluation device used in the toxicity evaluation method of the present invention forms an electrode 2 on the surface of a piezoelectric vibrator 1 and non-bonds a toxic substance to the surface of the electrode 2. DNA fragment part 3 having a nucleotide sequence which does not bind to the inactivated receptor in a state and is capable of binding to the receptor complex formed by binding the toxic substance to the receptor
A vibration portion A, which is coupled to, is provided. An oscillator 4 is provided on the electrode 2 to oscillate the piezoelectric vibrator 1 at a predetermined frequency, and the receptor complex Rha
The change of the oscillation frequency at the time of the quantification is configured to be measurable by using the oscillation frequency measuring device 5. Gold is used for the electrode 2. The electrode 2 is preferably made of at least one metal selected from platinum, gold and silver. A crystal oscillator is used as the piezoelectric oscillator 1. As the piezoelectric vibrator 1, it is preferable to use a vibrator selected from barium titanate, potassium sodium tartrate, and quartz. The combination of the type, size, and shape of the electrode 2 and the piezoelectric vibrator 1 is appropriately selected according to the purpose of use and the environment. The electrode 2 may be manufactured by a conventional manufacturing method such as a plating method, a vapor deposition method, or a coating method. Further, the oscillator 4 and the oscillation frequency measuring device 5 may be appropriately selected from known ones.

【0020】前記DNA断片部3としては、たとえば配
列表記載の配列1、配列2の塩基配列を有するものが利
用でき、アニーリングによりAhレセプター認識サイト
を形成させられる。また、他に、USP5529899
号公報等に記載の種々の塩基配列を合成あるいは単離し
て用いることが出来る。
As the DNA fragment portion 3, for example, one having the base sequences of Sequence 1 and Sequence 2 in the Sequence Listing can be used, and an Ah receptor recognition site can be formed by annealing. In addition, USP5529899
Various base sequences described in Japanese Patent Publication No. 1994-242242 can be synthesized or isolated and used.

【0021】 〔配列1〕GATCCGGAGT TGCGTGAGAA GAGCCA 26[0021] [Sequence 1] GATCCGGAGT TGCGTGAGAA GAGCCA 26

【0022】 〔配列2〕TGGCTCTTCT CACGCAACTC CGGATC 26[0022] [Sequence 2] TGGCTCTTCT CACGCAACTC CGGATC 26

【0023】前記Ahレセプターとしては、種々の生物
由来のものが利用できるが、たとえば、ヒト由来のAh
レセプターを用いることができる。このようなヒト由来
のAhレセプターは、ヒト肝癌由来細胞を増殖させ、H
EDGバッファーを加えホモジェナイズし、遠心分離を
行い、上澄液から得られる。もしくは、遺伝子組換え大
腸菌を用いて合成も可能である。また、マウスまたはモ
ルモット由来のAhレセプターは、肝臓を取り出してミ
ンチにし、HEDGバッファーを加えホモジェナイズ
し、遠心分離を行い、上澄液から得られる。
As the Ah receptor, those derived from various organisms can be used. For example, human-derived Ah receptors can be used.
Receptors can be used. Such human-derived Ah receptor proliferates cells derived from human hepatoma and
It is obtained from the supernatant by adding EDG buffer, homogenizing and centrifuging. Alternatively, it can be synthesized using recombinant E. coli. The mouse or guinea pig-derived Ah receptor can be obtained from the supernatant by removing the liver, mincing, adding a HEDG buffer, homogenizing, and centrifuging.

【0024】前記DNA断片部を前記電極に結合させる
には、3,3’−ジチオジプロピオン酸(化1参照)、
及び、アビジン、ビオチンを用いて結合させることが出
来る。
To bind the DNA fragment portion to the electrode, 3,3'-dithiodipropionic acid (see Chemical Formula 1),
Alternatively, it can be bound using avidin or biotin.

【0025】[0025]

【化1】HOOC−CH2−CH2−S−S−CH2−C
2−COOH
## STR1 ## HOOC-CH 2 -CH 2 -S- S-CH 2 -C
H 2 -COOH

【0026】〔毒性評価方法〕本発明の毒性評価方法
は、 (1) 燃焼生成物を含むサンプル中に含まれるダイ
オキシン類を有機溶媒で抽出する。(抽出行程) (2A) 抽出された抽出液が無色になるまで分液漏斗
中で濃硫酸を作用させる。二液分離して得られる有機層
を毒性評価試料とする。(硫酸処理工程) (2B) 抽出された抽出液を5〜15wt%の硝酸銀
を含有するシリカゲルに接触させ、毒性評価試料の有機
溶液を得る。(硝酸銀処理工程) (2A)の硫酸処理工程と、(2B)の硝酸銀処理工程
とは、一方のみ行っても良いし、両方行っても良い。ま
た、硫酸処理工程は、以下のように行うこともできる。 (2C) 抽出された抽出液を20〜50wt%の濃硫
酸を含有するシリカゲルに接触させ、毒性評価試料の有
機溶液を得る。(硫酸処理工程(カラム)) (3) その毒性評価試料に対して抗原抗体反応を行
う。この際、必要が有れば、溶媒留去、DMSO等への
再溶解による溶媒交換を行い、ダイオキシン類をより選
択的に溶解させる。
[Toxicity Evaluation Method] In the toxicity evaluation method of the present invention, (1) dioxins contained in a sample containing combustion products are extracted with an organic solvent. (Extraction Process) (2A) Concentrated sulfuric acid is allowed to act in the separatory funnel until the extracted liquid becomes colorless. The organic layer obtained by separating the two liquids is used as the toxicity evaluation sample. (Sulfuric acid treatment step) (2B) The extracted extract is brought into contact with silica gel containing 5 to 15 wt% of silver nitrate to obtain an organic solution of a toxicity evaluation sample. (Silver Nitrate Treatment Step) The sulfuric acid treatment step (2A) and the silver nitrate treatment step (2B) may be performed either alone or in combination. The sulfuric acid treatment step can also be performed as follows. (2C) The extracted extract is brought into contact with silica gel containing 20 to 50 wt% concentrated sulfuric acid to obtain an organic solution of a toxicity evaluation sample. (Sulfuric acid treatment step (column)) (3) An antigen-antibody reaction is performed on the toxicity evaluation sample. At this time, if necessary, the solvent is distilled off and the solvent is exchanged by re-dissolving in DMSO or the like to more selectively dissolve the dioxins.

【0027】(3)における抗原抗体反応としては、ダ
イオキシン類を含有する毒性評価試料を供給してレセプ
ターに前記毒性物質を結合させ、前記毒性物質と結合し
たレセプター重量によって、前記評価対象液の毒性を評
価する、いわゆるAhイムノアッセイ(AhIA)を行
う。具体的には以下の通りである。 (3A) ダイオキシンを含有する環境からサンプリン
グしたダイオキシン溶液、及び、Ahレセプターとその
Ahレセプターと対をなし、前記Ahレセプターが、前
記ダイオキシンと結合したときに、複合体を形成する要
素となるARNT(前記複合体を構成させるレセプター
複合体構成物質)との混合液に上記毒性評価装置の電極
部分を浸漬する。(混合行程) (3B) 前記電極に連設された圧電振動子を発振さ
せ、その振動周波数を測定する。(周波数測定行程)
As the antigen-antibody reaction in (3), a toxicity evaluation sample containing dioxins is supplied to bind the toxic substance to a receptor, and the toxicity of the liquid to be evaluated is determined by the weight of the receptor bound to the toxic substance. The so-called Ah immunoassay (AhIA) is carried out. Specifically, it is as follows. (3A) A dioxin solution sampled from a dioxin-containing environment, and an ARNT that forms a complex when the Ah receptor and the Ah receptor are paired and the Ah receptor binds to the dioxin ( The electrode part of the above-mentioned toxicity evaluation device is immersed in a mixed solution with a receptor complex constituent substance which constitutes the complex. (Mixing Step) (3B) Piezoelectric vibrators connected to the electrodes are oscillated and the vibration frequency thereof is measured. (Frequency measurement process)

【0028】ここで測定された振動周波数(振動数変化
度(ΔF))により、前記レセプター複合体の量は、増
加質量(Δm)として次式により求められる。 Δm=(ΔF/F)*K (Kは定数) ここで、前記圧電振動子を発振器により振動させたとき
の基本振動数(F)振動数変化度(ΔF)である。
Based on the vibration frequency (frequency change (ΔF)) measured here, the amount of the receptor complex is obtained as the increasing mass (Δm) by the following equation. Δm = (ΔF / F) * K (K is a constant) Here, it is a fundamental frequency (F) frequency variation (ΔF) when the piezoelectric vibrator is vibrated by an oscillator.

【0029】従って、前記毒性評価装置により、評価対
象溶液による振動数変化度(ΔF)をもって、前記レセ
プター重量の相対値を比較できることになり、毒性を評
価できるようになった。
Therefore, the toxicity evaluation device enables the relative values of the receptor weights to be compared by the frequency change (ΔF) depending on the solution to be evaluated, and the toxicity can be evaluated.

【0030】[0030]

【実施例】以下に本発明の実施例を図面に基づいて説明
する。 〔毒性評価装置〕まず、水晶振動子(直径5mm)に蒸
着法により一対の金電極を設ける(直径3mm)。この
金電極を超音波洗浄した後 、前記3,3’−ジチオジ
プロピオン酸溶液(1mM、pH6.4)に室温で1時
間浸漬し、前記金電極にDNA断片部の結合サイトを形
成する。このとき、前記3,3’−ジチオジプロピオン
酸は、一端が金の結晶界面に取り込まれ、他端が溶液内
に露出した状態に保持され、強固に固定されることにな
る。次に前記3,3’−ジチオジプロピオン酸の他端
に、卵黄由来のアビジンの10mM溶液を室温で1時間
作用させて、前記アビジンを結合させ、前記金電極表面
にアビジンを修飾する。一方、アニーリングによりAh
レセプター認識サイトを形成させたDNA断片部(の
5’末端)にはビオチンを結合させておく。この反応
は、前記DNA断片部の10mM溶液に、ビオチン10
mM溶液を4℃で1時間で滴下して作用させる。次に、
前記アビジンを修飾した金電極に、前記ビオチンを結合
したDNA断片部溶液(1mM、pH7.5)を4℃で
24時間作用させる。すると、アビジン−ビオチンの強
い相互作用により、前記金電極の表面に、前記DNA断
片部を、3,3’−ジチオジプロピオン酸−アビジン−
ビオチンを介して、結合固定することが出来る。こうし
て形成された一対の電極に発振器及び発振周波数測定器
を接続して毒性評価装置が得られる。
Embodiments of the present invention will be described below with reference to the drawings. [Toxicity Evaluation Device] First, a pair of gold electrodes (diameter 3 mm) is provided on a crystal oscillator (diameter 5 mm) by vapor deposition. After ultrasonically cleaning the gold electrode, it is immersed in the 3,3′-dithiodipropionic acid solution (1 mM, pH 6.4) at room temperature for 1 hour to form a DNA fragment binding site on the gold electrode. At this time, one end of the 3,3′-dithiodipropionic acid is taken into the gold crystal interface, and the other end is held exposed in the solution and firmly fixed. Next, a 10 mM solution of avidin derived from egg yolk is allowed to act on the other end of the 3,3′-dithiodipropionic acid for 1 hour at room temperature to bind the avidin and modify the surface of the gold electrode with avidin. On the other hand, by annealing, Ah
Biotin is bound to (the 5'end of) the DNA fragment portion where the receptor recognition site is formed. This reaction was carried out by adding biotin 10 to a 10 mM solution of the DNA fragment part.
The mM solution is added dropwise at 4 ° C. for 1 hour to act. next,
The biotin-bonded DNA fragment solution (1 mM, pH 7.5) is allowed to act on the avidin-modified gold electrode at 4 ° C. for 24 hours. Then, due to the strong avidin-biotin interaction, the DNA fragment part was attached to the surface of the gold electrode with 3,3′-dithiodipropionic acid-avidin-.
It can be bound and immobilized via biotin. The toxicity evaluation device is obtained by connecting the oscillator and the oscillation frequency measuring device to the pair of electrodes thus formed.

【0031】〔毒性評価方法〕 (1A) 抽出行程は、日本ダイオネクス(株)社製A
SE200を用い、以下の条件で行った。 試料抽出セル :33ml容量のステンレス製円筒型密
閉セルの内部に珪藻土を5mm厚さに敷き、その上に焼
却灰試料もしくは、焼却廃土2gと、珪藻土0.4gと
の混合物を配置し、さらにセル内の空間にガラスビーズ
を充填して調製する。
[Toxicity Evaluation Method] (1A) The extraction process was performed by A manufactured by Nippon Dionex Co., Ltd.
SE200 was used under the following conditions. Sample extraction cell: A diatomaceous earth having a thickness of 5 mm was placed inside a stainless steel cylindrical closed cell having a capacity of 33 ml, and an incinerated ash sample or a mixture of 2 g of incinerated waste soil and 0.4 g of diatomaceous earth was placed on the cell. It is prepared by filling the space in the cell with glass beads.

【0032】 静置(抽出)時間 :10分 静置後の溶媒送量:60 vol% パージ(N2ガス):60秒 繰り返しの回数:2回 圧力(試料容器にかかる圧):2000psi オ−ブン温度:150℃ 溶媒:トルエン100%[0032] Stationary (extraction) time: 10 minutes Solvent delivery after standing: 60 vol% Purge (N2 gas): 60 seconds Number of repetitions: 2 times Pressure (pressure on the sample container): 2000psi Oven temperature: 150 ° C Solvent: Toluene 100%

【0033】このようにして、焼却設備から発生した試
料を抽出すると一般的には、50mlの茶褐色抽出液が
得られ、試料中に含まれるダイオキシン類は、すべて溶
解させられているものと考えられる。
When the sample generated from the incinerator is extracted in this manner, generally 50 ml of a brownish brown extract is obtained, and it is considered that all dioxins contained in the sample are dissolved. .

【0034】(1B) 試料として排ガスを適用する場
合には、フィルター部は、補集されたダスト中のアルカ
リ分の中和と灰の内部からのダイオキシン類を効率良く
抽出する目的で、ダスト1gに対して塩酸が20mmol以上に
なるように塩酸(2mol/L)を加えて塩酸による処理を行
った後に前述のASE200を用い、同条件で抽出を行った。
ろ液や液体補集部の吸収液と洗浄液は分析漏斗に入れ、
溶液1Lに対してジクロロメタン100mlで3回液-液振とう
抽出を行う。吸着補集部はトルエン300mlにより、温度1
30℃で5時間還流抽出を行う。各補集部から得られた抽
出液を合わせて硫酸ナトリウムを用いて脱水し、一定量
とし、粗抽出液とする。このようにして、排ガス試料を
抽出すると一般的には、約1Lの茶褐色抽出液が得られ、
試料中に含まれるダイオキシン類は、すべて溶解させら
れているものと考えられる。
(1B) When the exhaust gas is applied as a sample, the filter part is used to neutralize the alkali content in the collected dust and to efficiently extract dioxins from the inside of the ash by using 1 g of dust. On the other hand, hydrochloric acid (2 mol / L) was added so that the hydrochloric acid content was 20 mmol or more, and the mixture was treated with hydrochloric acid, and then extracted using the above-mentioned ASE200 under the same conditions.
Put the filtrate and the absorption liquid of the liquid collection part and the washing liquid into the analysis funnel,
Liquid-liquid shaking extraction is performed 3 times with 100 ml of dichloromethane for 1 L of the solution. The adsorption and collection part is 300 ml of toluene, and the temperature is 1
Perform reflux extraction at 30 ° C. for 5 hours. The extracts obtained from each collecting part are combined, dehydrated with sodium sulfate, and made into a fixed amount to obtain a crude extract. In this way, when the exhaust gas sample is extracted, generally, about 1 L of a brown extract is obtained,
It is considered that all dioxins contained in the sample are dissolved.

【0035】(2A) 硫酸処理工程は、まず、抽出さ
れた抽出液から溶媒を留去後、ヘキサン40ml溶液と
し、分液漏斗に移し、これに、濃硫酸10mlを加え、
1〜10min振とうして行う。さらに、硫酸層は廃棄
して再度硫酸処理を行う。硫酸処理は、前記抽出液に実
質的な着色が認められなくなるまで行い(通常2〜3回
で十分である)、有機層を水洗して回収する。
(2A) In the sulfuric acid treatment step, first, the solvent was distilled off from the extracted extract to obtain a hexane 40 ml solution, which was transferred to a separating funnel, to which 10 ml of concentrated sulfuric acid was added,
Shake for 1 to 10 minutes. Further, the sulfuric acid layer is discarded and the sulfuric acid treatment is performed again. Sulfuric acid treatment is carried out until no substantial coloration is observed in the extract (usually 2 to 3 times is sufficient), and the organic layer is washed with water and collected.

【0036】(2B) 硝酸銀処理工程は、まず、カラ
ムに、シリカゲル0.2gを充填し、次に10%硝酸銀
含有シリカゲル1gを充填したものを用意しておく。抽
出液を濃縮して約1mlとしたものをこのカラムに移し
入れ、3ml/minの滴下速度でヘキサン50mlに
よる溶出を行う。
(2B) In the silver nitrate treatment step, first, a column is packed with 0.2 g of silica gel and then with 1 g of silica gel containing 10% silver nitrate. The extract was concentrated to about 1 ml, transferred to this column, and eluted with 50 ml of hexane at a dropping rate of 3 ml / min.

【0037】(2C) 硫酸処理工程(カラム)は、ま
ず、カラムに、シリカゲル0.2gを充填し、次に44
%濃硫酸含有シリカゲル3gを充填したものを用意して
おく。抽出液を濃縮して約1mlとしたものをこのカラ
ムに移し入れ、3ml/minの滴下速度でヘキサン5
0mlによる溶出を行う。
(2C) In the sulfuric acid treatment step (column), the column was first packed with 0.2 g of silica gel, and then 44
Prepare the one filled with 3 g of silica gel containing% concentrated sulfuric acid. The extract was concentrated to about 1 ml, transferred to this column, and added with hexane 5 at a dropping rate of 3 ml / min.
Elute with 0 ml.

【0038】(2D) 硫酸処理工程(カラム)と、硝
酸銀処理工程とは、同時に行うことができ、この場合、
まず、カラムに、シリカゲル0.2g、44%濃硫酸含
有シリカゲル3g、シリカゲル0.2g、10%硝酸銀
含有シリカゲル1gを充填したものを用意しておく。抽
出液を濃縮して約1mlとしたものをこのカラムに移し
入れ、3ml/minの滴下速度でヘキサン50mlに
よる溶出を行う。
(2D) The sulfuric acid treatment step (column) and the silver nitrate treatment step can be carried out simultaneously. In this case,
First, a column packed with 0.2 g of silica gel, 3 g of silica gel containing 44% concentrated sulfuric acid, 0.2 g of silica gel and 1 g of silica gel containing 10% silver nitrate is prepared. The extract was concentrated to about 1 ml, transferred to this column, and eluted with 50 ml of hexane at a dropping rate of 3 ml / min.

【0039】(3) 溶出された溶液は、溶媒留去後D
MSO40μlに溶解させAhIAに供する。上述の毒
性評価装置を用いない場合には、DNA断片部3を固定
したウエルに上述のAhレセプターおよびARNTを供
給し、前記DNA断片部に結合した複合体を酵素による
発色反応で定量する事により同様の結果を得ることがで
きる。この際、発色度は、既知濃度の標準物質に対する
吸光度と、複合体の酵素発色に対する吸光度とを比較し
て行う。
(3) After the solvent was distilled off from the eluted solution, D
It is dissolved in 40 μl of MSO and subjected to AhIA. When the above-mentioned toxicity evaluation device is not used, the above-mentioned Ah receptor and ARNT are supplied to the wells to which the DNA fragment part 3 is immobilized, and the complex bound to the DNA fragment part is quantified by a color reaction by an enzyme. Similar results can be obtained. At this time, the degree of color development is determined by comparing the absorbance with respect to a standard substance having a known concentration with the absorbance with respect to the enzyme color development of the complex.

【0040】このようにして種々の燃焼生成物試料につ
いてAhIAを行って求めたDEQ値、質量分析により
求めたTEQ値(公定法)との相関を求めたところ、図
2〜12のようになり、各処理条件による相関の高さを
まとめると表2のようになった。
Thus, the correlation between the DEQ value obtained by performing AhIA and the TEQ value (official method) obtained by mass spectrometry on various combustion product samples is as shown in FIGS. Table 2 summarizes the high correlations under each processing condition.

【0041】[0041]

【表2】 [Table 2]

【0042】この結果、1〜8の結果から、いずれの処
理条件(2A、2B、2C、2A+2B、2A+2C、
2A+2D、2A+2D+2D)であっても無処理(な
し)の場合に比べて実際のTEQ値と高い相関性を示す
ようになり、AhIAによる毒性評価がより信頼性の高
いものとなることが分かる。尚、5〜8をみると各処理
の組み合わせによって、相関性の向上に有意な差はみら
れないが、土壌や排ガスの処理に対しては、さらに改善
の余地があることが読みとれ、10,11の差を鑑みる
と、試料中のダイオキシン類濃度によって処理の程度を
適切に設定することで効果を高めることができるもの
の、必要以上の処理は効果的ではなく、最小限の処理量
を設定することで、より信頼性を高められることが分か
る。
As a result, from the results of 1 to 8, any processing condition (2A, 2B, 2C, 2A + 2B, 2A + 2C,
Even 2A + 2D, 2A + 2D + 2D) shows a high correlation with the actual TEQ value as compared with the case of no treatment (none), and it can be seen that the toxicity evaluation by AhIA becomes more reliable. From the viewpoint of 5 to 8, there is no significant difference in the improvement of the correlation depending on the combination of each treatment, but it can be read that there is room for further improvement in the treatment of soil and exhaust gas. Considering the difference of 11, although the effect can be enhanced by appropriately setting the degree of treatment depending on the concentration of dioxins in the sample, excessive treatment is not effective and the minimum treatment amount is set. By doing so, it can be seen that the reliability can be improved.

【0043】尚、上述のダイオキシン類評価方法による
と、Ahレセプターの反応性がI−TEFと好適に対応
しており、毒性の評価が合理的なものであることが分か
る(表1参照)。尚、I−TEFとは、生体試験等によ
り人為的に取り決められている毒性等価計数であって、
所定量の2,3,7,8-tetrachrolodibe
nzodioxineの毒性を1としたときに同量の毒
性物質が示す毒性値を示すものである。
According to the above-mentioned dioxin evaluation method, the reactivity of the Ah receptor corresponds favorably to I-TEF, and it is understood that the toxicity evaluation is rational (see Table 1). In addition, I-TEF is a toxicity equivalent count artificially determined by a biological test or the like,
Predetermined amount of 2,3,7,8-tetrachlorodibe
When the toxicity of nzodioxine is set to 1, it shows the toxicity value of the same amount of toxic substance.

【0044】また、ここでは、Ahレセプターと前記A
RNT混合液としては、モルモットから肝臓を取り出し
ミンチにし、肝臓1g当り5mlのHEDGバッファー
を加えホモジェナイズし、遠心分離を行い(12500
RPM、4℃、20分間)、脂質を取り除き上澄液を取
り、さらに遠心分離(37000RPM、4℃、60分
間)を行い、脂質を除いて得られた上澄液を用いた。
Further, here, the Ah receptor and the A
As the RNT mixed solution, the liver was taken out from the guinea pig, minced, 5 ml of HEDG buffer was added per 1 g of the liver, the mixture was homogenized, and centrifuged (12500).
RPM, 4 ° C., 20 minutes), the lipid was removed, the supernatant was taken, and further centrifuged (37,000 RPM, 4 ° C., 60 minutes) to remove the lipid, and the obtained supernatant was used.

【0045】[0045]

【配列表】<110>Kubota Corporation <120>A method of evaluating dioxin in a combustion
product <130>T099111800 <160>2 <210>1 <211>26 <212>DNA <213>Artificial Sequence <220> <223>A DNA fragment having a base sequence capable
of specifically bonding with receptor complexes f
ormed by bonding of dioxins with receptors bonding
with dioxins. <400>1 gatccggagt tgcgtgagaa gagcca 26 <210>2 <211>26 <212>DNA <213>Artificial Sequence <220> <223>A DNA fragment having a base sequence capable
of specifically bonding with receptor complexes f
ormed by bonding of dioxins with receptors bonding
with dioxins. <400>2 tggctcttct cacgcaactc cggatc 26
[Sequence list] <110> Kubota Corporation <120> A method of evaluating dioxin in a combustion
product <130> T099111800 <160> 2 <210> 1 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220><223> A DNA fragment having a base sequence capable
of specifically bonding with receptor complexes f
ormed by bonding of dioxins with receptors bonding
with dioxins. <400> 1 gatccggagt tgcgtgagaa gagcca 26 <210> 2 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220><223> A DNA fragment having a base sequence capable
of specifically bonding with receptor complexes f
ormed by bonding of dioxins with receptors bonding
with dioxins. <400> 2 tggctcttct cacgcaactc cggatc 26

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図1】毒性評価装置の概略図FIG. 1 Schematic diagram of toxicity evaluation device

【図2】AhIAによる分析値と、質量分析による分析
値との相関を示すグラフ(灰、2A)
FIG. 2 is a graph showing the correlation between the analysis value by AhIA and the analysis value by mass spectrometry (gray, 2A).

【図3】AhIAによる分析値と、質量分析による分析
値との相関を示すグラフ(灰、2B)
FIG. 3 is a graph showing the correlation between the analysis value by AhIA and the analysis value by mass spectrometry (gray, 2B).

【図4】AhIAによる分析値と、質量分析による分析
値との相関を示すグラフ(灰、2C)
FIG. 4 is a graph showing the correlation between the analysis value by AhIA and the analysis value by mass spectrometry (gray, 2C).

【図5】AhIAによる分析値と、質量分析による分析
値との相関を示すグラフ(灰、2A+2B)
FIG. 5 is a graph showing the correlation between the analysis value by AhIA and the analysis value by mass spectrometry (gray, 2A + 2B).

【図6】AhIAによる分析値と、質量分析による分析
値との相関を示すグラフ(灰、2A+2C)
FIG. 6 is a graph showing the correlation between the analysis value by AhIA and the analysis value by mass spectrometry (gray, 2A + 2C).

【図7】AhIAによる分析値と、質量分析による分析
値との相関を示すグラフ(灰、2A+2D)
FIG. 7 is a graph showing the correlation between the analysis value by AhIA and the analysis value by mass spectrometry (gray, 2A + 2D).

【図8】AhIAによる分析値と、質量分析による分析
値との相関を示すグラフ(灰、2A+2D+2D)
FIG. 8 is a graph showing the correlation between the analysis value by AhIA and the analysis value by mass spectrometry (gray, 2A + 2D + 2D).

【図9】AhIAによる分析値と、質量分析による分析
値との相関を示すグラフ(土壌1、2A+2D)
FIG. 9 is a graph showing the correlation between the analysis value by AhIA and the analysis value by mass spectrometry (soil 1, 2A + 2D).

【図10】AhIAによる分析値と、質量分析による分
析値との相関を示すグラフ(土壌2、2A+2D)
FIG. 10 is a graph showing the correlation between the analysis value by AhIA and the analysis value by mass spectrometry (soil 2, 2A + 2D).

【図11】AhIAによる分析値と、質量分析による分
析値との相関を示すグラフ(土壌2、2A+2D+2
D)
FIG. 11 is a graph showing the correlation between the analysis value by AhIA and the analysis value by mass spectrometry (soil 2, 2A + 2D + 2).
D)

【図12】AhIAによる分析値と、質量分析による分
析値との相関を示すグラフ(排ガス、2A+2D)
FIG. 12 is a graph showing a correlation between an analytical value by AhIA and an analytical value by mass spectrometry (exhaust gas, 2A + 2D).

【符号の説明】[Explanation of symbols]

1 圧電振動子 2 電極 3 DNA断片部 1 Piezoelectric vibrator 2 electrodes 3 DNA fragment

フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 FI テーマコート゛(参考) G01N 5/02 G01N 33/00 D 33/00 33/566 33/566 1/28 Y Fターム(参考) 2G052 AA02 AB22 AD12 AD26 AD46 FB05 FD00 GA08 GA11 4D056 AB17 AC01 AC22 BA03 CA06Front page continuation (51) Int.Cl. 7 Identification code FI theme code (reference) G01N 5/02 G01N 33/00 D 33/00 33/566 33/566 1/28 YF term (reference) 2G052 AA02 AB22 AD12 AD26 AD46 FB05 FD00 GA08 GA11 4D056 AB17 AC01 AC22 BA03 CA06

Claims (3)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】 燃焼生成物中に含まれるダイオキシン類
を評価する燃焼生成物中のダイオキシン類評価方法であ
って、 燃焼生成物を含むサンプルを有機溶媒で抽出し、抽出さ
れた抽出液が無色になるまで濃硫酸を作用させ、二液分
離して有機層を毒性評価試料として得る硫酸処理工程を
行い、その毒性評価試料に対して抗原抗体反応を行う燃
焼生成物中のダイオキシン類評価方法。
1. A method for evaluating dioxins in a combustion product for evaluating dioxins contained in the combustion product, wherein a sample containing the combustion product is extracted with an organic solvent, and the extracted extract is colorless. A method for evaluating dioxins in combustion products, in which a sulfuric acid treatment step is performed in which concentrated sulfuric acid is allowed to act until the solution becomes two, and an organic layer is obtained as a toxicity evaluation sample, and an antigen-antibody reaction is performed on the toxicity evaluation sample.
【請求項2】 燃焼生成物中に含まれるダイオキシン類
を評価する燃焼生成物中のダイオキシン類評価方法であ
って、 燃焼生成物を含むサンプルを有機溶媒で抽出し、抽出さ
れた抽出液を5〜15wt%の硝酸銀を含有するシリカ
ゲルに接触させ、毒性評価試料の有機溶液を得る硝酸銀
処理工程を行い、その毒性評価試料に対して抗原抗体反
応を行う燃焼生成物中のダイオキシン類評価方法。
2. A method for evaluating dioxins in a combustion product for evaluating dioxins contained in the combustion product, wherein a sample containing the combustion product is extracted with an organic solvent, and the extracted liquid is extracted. A method for evaluating dioxins in combustion products, which comprises performing a silver nitrate treatment step of bringing an organic solution of a toxicity evaluation sample into contact with silica gel containing 15% by weight of silver nitrate, and performing an antigen-antibody reaction on the toxicity evaluation sample.
【請求項3】 前記抗原抗体反応が、前記毒性評価試
料、及び、ダイオキシン類に結合するレセプターを含ん
でなるレセプター複合体構成物質を混合する混合行程を
行い、前記ダイオキシン類が前記レセプターに結合して
形成されるレセプター複合体に特異的に結合可能な塩基
配列を有するDNA断片部に対して作用させるものであ
る請求項1〜2のいずれかに記載の燃焼生成物中のダイ
オキシン類評価方法。
3. The antigen-antibody reaction performs a mixing step of mixing the toxicity evaluation sample and a receptor complex constituent substance containing a receptor that binds to dioxins, and the dioxins bind to the receptor. The method for evaluating dioxins in combustion products according to any one of claims 1 to 2, wherein the method is to act on a DNA fragment having a base sequence capable of specifically binding to the receptor complex formed.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN100360936C (en) * 2004-02-12 2008-01-09 陈平 Quick test method for mineral oil in food
TWI385372B (en) * 2010-10-12 2013-02-11 China Steel Corp Method of producing dioxins sample

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