JP2003149236A - 緑内障治療薬のスクリーニング方法 - Google Patents
緑内障治療薬のスクリーニング方法Info
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- JP2003149236A JP2003149236A JP2002252303A JP2002252303A JP2003149236A JP 2003149236 A JP2003149236 A JP 2003149236A JP 2002252303 A JP2002252303 A JP 2002252303A JP 2002252303 A JP2002252303 A JP 2002252303A JP 2003149236 A JP2003149236 A JP 2003149236A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 架橋ポリマー含有液を前房内に注入する
ことによって高眼圧および視神経損傷を誘発させた実験
動物を用いる、緑内障治療薬の薬理学的スクリーニング
方法である。架橋ポリマーは好ましくは架橋カルボキシ
ビニルポリマーまたは架橋ポリビニルアルコールであ
る。 【効果】 本発明によれば、房水を置換することなく、
房水量の１０％程度の架橋ポリマー含有液を実験動物の
前房内に注入すると高眼圧を誘発することができる。従
って、実験動物作製の手技が簡便になり且つ動物への刺
激を低減することができ、このモデル動物を用いた緑内
障治療薬のスクリーニング法は、緑内障治療薬の開発に
おける有用な手段となる。
ことによって高眼圧および視神経損傷を誘発させた実験
動物を用いる、緑内障治療薬の薬理学的スクリーニング
方法である。架橋ポリマーは好ましくは架橋カルボキシ
ビニルポリマーまたは架橋ポリビニルアルコールであ
る。 【効果】 本発明によれば、房水を置換することなく、
房水量の１０％程度の架橋ポリマー含有液を実験動物の
前房内に注入すると高眼圧を誘発することができる。従
って、実験動物作製の手技が簡便になり且つ動物への刺
激を低減することができ、このモデル動物を用いた緑内
障治療薬のスクリーニング法は、緑内障治療薬の開発に
おける有用な手段となる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、高眼圧および視神
経障害を誘発させた動物を用いる緑内障治療薬のスクリ
ーニング法ならびにその実験動物の作製方法に関する。
経障害を誘発させた動物を用いる緑内障治療薬のスクリ
ーニング法ならびにその実験動物の作製方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】緑内障は、健常眼圧を越えた高眼圧によ
り視神経が障害を受け、視野欠損や視力低下などの視機
能障害を起こし、失明に至る危険性のある難治性の眼疾
患である。
り視神経が障害を受け、視野欠損や視力低下などの視機
能障害を起こし、失明に至る危険性のある難治性の眼疾
患である。
【０００３】緑内障患者には慢性的な高眼圧症状がみら
れ、その慢性的な高眼圧が神経節細胞死の原因の一つで
あると考えられている。そこで、慢性化した高眼圧モデ
ル動物を用いて薬物のスクリーニングを行うことは緑内
障治療薬の研究開発を行う上で極めて重要である。
れ、その慢性的な高眼圧が神経節細胞死の原因の一つで
あると考えられている。そこで、慢性化した高眼圧モデ
ル動物を用いて薬物のスクリーニングを行うことは緑内
障治療薬の研究開発を行う上で極めて重要である。
【０００４】眼の前房は房水で満たされており、房水産
生量および房水流出抵抗が眼圧を決定する一因となる。
毛様突起で産生された房水は虹彩・水晶体間を通り、瞳
孔を経由して前房に至る。前房内の房水の大部分は線維
柱帯から上強膜静脈へと流出していく。
生量および房水流出抵抗が眼圧を決定する一因となる。
毛様突起で産生された房水は虹彩・水晶体間を通り、瞳
孔を経由して前房に至る。前房内の房水の大部分は線維
柱帯から上強膜静脈へと流出していく。
【０００５】高眼圧を誘発する動物モデルとして、前房
内にポリマー溶液を注入したモデルが知られている。Au
st.New Zealand J.Ophthalmol.,20,225-234(1992)に
は、コンドロイチン硫酸、ヒドロキシプロピルメチルセ
ルロース、カルボキシメチルセルロースまたはメチルセ
ルロースをウサギの前房内に注入したモデルが報告され
ている。このモデルは房水の流出路である線維柱帯の網
の目をポリマーで目詰まりさせることによって房水の流
出量を減少させ、眼圧を上昇させるものである。これら
のポリマーは直鎖状であるため維柱帯の網の目を抜けて
いってしまう。従って直鎖ポリマーで高眼圧を持続させ
るには多量のポリマー溶液を注入する必要がある。その
ため、房水を全部抜いてからポリマー溶液を注入しなけ
ればならなかった。
内にポリマー溶液を注入したモデルが知られている。Au
st.New Zealand J.Ophthalmol.,20,225-234(1992)に
は、コンドロイチン硫酸、ヒドロキシプロピルメチルセ
ルロース、カルボキシメチルセルロースまたはメチルセ
ルロースをウサギの前房内に注入したモデルが報告され
ている。このモデルは房水の流出路である線維柱帯の網
の目をポリマーで目詰まりさせることによって房水の流
出量を減少させ、眼圧を上昇させるものである。これら
のポリマーは直鎖状であるため維柱帯の網の目を抜けて
いってしまう。従って直鎖ポリマーで高眼圧を持続させ
るには多量のポリマー溶液を注入する必要がある。その
ため、房水を全部抜いてからポリマー溶液を注入しなけ
ればならなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】このような房水をポリ
マー溶液に置換する方法では、房水を全部抜いてしまう
ため新たに房水が産生され、その際同時に産生されるプ
ロスタグランジン類によって炎症が起こるという問題が
ある。さらに、全置換法では房水を抜きその後ポリマー
を注入するという２段階の操作を行わなければならない
ので、作業が煩雑である。また、注入するポリマーに刺
激性がある場合は、なるべくポリマーの注入量を少なく
することが望ましい。
マー溶液に置換する方法では、房水を全部抜いてしまう
ため新たに房水が産生され、その際同時に産生されるプ
ロスタグランジン類によって炎症が起こるという問題が
ある。さらに、全置換法では房水を抜きその後ポリマー
を注入するという２段階の操作を行わなければならない
ので、作業が煩雑である。また、注入するポリマーに刺
激性がある場合は、なるべくポリマーの注入量を少なく
することが望ましい。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決できる高分子を鋭意研究した結果、架橋ポリマー
含有液（たとえば架橋ポリマー溶液、架橋ポリマー分散
液）を動物の前房内に注入すると、房水の全置換を必要
とせず、少量の架橋ポリマー含有液で高眼圧を誘発でき
ることを見出した。
を解決できる高分子を鋭意研究した結果、架橋ポリマー
含有液（たとえば架橋ポリマー溶液、架橋ポリマー分散
液）を動物の前房内に注入すると、房水の全置換を必要
とせず、少量の架橋ポリマー含有液で高眼圧を誘発でき
ることを見出した。
【０００８】本発明は架橋ポリマー含有液を前房内に注
入することによって高眼圧および視神経損傷を誘発させ
た実験動物を用いる、緑内障治療薬の薬理学的スクリー
ニング方法に関する。
入することによって高眼圧および視神経損傷を誘発させ
た実験動物を用いる、緑内障治療薬の薬理学的スクリー
ニング方法に関する。
【０００９】本発明はまた、架橋ポリマー含有液を前房
内に注入することによって高眼圧および視神経損傷を誘
発させた実験動物の作製方法に関する。
内に注入することによって高眼圧および視神経損傷を誘
発させた実験動物の作製方法に関する。
【００１０】上記スクリーニング方法および実験動物作
製方法において、架橋ポリマーは好ましくは架橋カルボ
キシビニルポリマーまたは架橋ポリビニルアルコールで
ある。
製方法において、架橋ポリマーは好ましくは架橋カルボ
キシビニルポリマーまたは架橋ポリビニルアルコールで
ある。
【００１１】本発明の架橋ポリマーを用いると、ポリマ
ーが架橋されて３次元構造をとっているため、直鎖ポリ
マーよりも線維柱帯の網の目を抜けにくくなり、目詰ま
りを起こす効果が高くなる。従って、ポリマーの注入量
が少量で済み、ポリマー溶液の注入に先立って房水を抜
く操作を必要としない。
ーが架橋されて３次元構造をとっているため、直鎖ポリ
マーよりも線維柱帯の網の目を抜けにくくなり、目詰ま
りを起こす効果が高くなる。従って、ポリマーの注入量
が少量で済み、ポリマー溶液の注入に先立って房水を抜
く操作を必要としない。
【００１２】
【発明の実施の形態】本発明で使用する動物としては、
通常実験動物として用いられているものであれば特に制
限は無く、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イ
ヌ、ネコ、サル、ブタ等が挙げられるが、取り扱い等の
面からウサギおよびサルが好ましい。
通常実験動物として用いられているものであれば特に制
限は無く、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イ
ヌ、ネコ、サル、ブタ等が挙げられるが、取り扱い等の
面からウサギおよびサルが好ましい。
【００１３】本発明で使用する架橋ポリマーとは、直鎖
のポリマーを架橋剤や放射線照射等によって架橋させた
ポリマーのことを指す。これらの架橋ポリマーは公知の
方法で作製することができる。直鎖のポリマーの例とし
てはカルボキシビニルポリマー（以下ＣＶＰと略記す
る）、ポリメタクリル酸、ポリグルタミン酸、ポリビニ
ルアルコール（以下ＰＶＡと略記する）、ヒアルロン
酸、ポリアリルアミン、ポリエチレンイミン、コラーゲ
ンおよびポリビニルピリジン等のポリマーが挙げられ
る。これらの直鎖ポリマーを架橋させる方法としては、
架橋剤を用いる方法、光を照射する方法、放射線を照射
する方法等があり、それぞれポリマーに適した方法を選
べばよい。架橋剤の例としてはエチレングリコール、グ
リセリン、エチレンジアミン、ポリアリルペンタエリス
リトール、ジビニルグリコール、グルタルアルデヒド、
グルタル酸およびジブロモヘキサン等が挙げられ、ポリ
マーの有する官能基によって架橋剤を選べばよい。
のポリマーを架橋剤や放射線照射等によって架橋させた
ポリマーのことを指す。これらの架橋ポリマーは公知の
方法で作製することができる。直鎖のポリマーの例とし
てはカルボキシビニルポリマー（以下ＣＶＰと略記す
る）、ポリメタクリル酸、ポリグルタミン酸、ポリビニ
ルアルコール（以下ＰＶＡと略記する）、ヒアルロン
酸、ポリアリルアミン、ポリエチレンイミン、コラーゲ
ンおよびポリビニルピリジン等のポリマーが挙げられ
る。これらの直鎖ポリマーを架橋させる方法としては、
架橋剤を用いる方法、光を照射する方法、放射線を照射
する方法等があり、それぞれポリマーに適した方法を選
べばよい。架橋剤の例としてはエチレングリコール、グ
リセリン、エチレンジアミン、ポリアリルペンタエリス
リトール、ジビニルグリコール、グルタルアルデヒド、
グルタル酸およびジブロモヘキサン等が挙げられ、ポリ
マーの有する官能基によって架橋剤を選べばよい。
【００１４】一部の架橋ポリマーは市販されており、グ
ッドリッチケミカル社よりカルボポールの商品名で販売
されている、ポリアリルペンタエリスリトールで架橋さ
れたＣＶＰ、和光純薬工業（株）よりハイビスワコーの
商品名で販売されている、ジビニルグリコールで架橋さ
れたＣＶＰ等が入手可能である。
ッドリッチケミカル社よりカルボポールの商品名で販売
されている、ポリアリルペンタエリスリトールで架橋さ
れたＣＶＰ、和光純薬工業（株）よりハイビスワコーの
商品名で販売されている、ジビニルグリコールで架橋さ
れたＣＶＰ等が入手可能である。
【００１５】架橋ポリマーとしては架橋ＣＶＰおよび架
橋ＰＶＡが好ましい。架橋ＣＶＰは上述のように市販品
を入手することが可能である。架橋ＰＶＡは、実施例の
項に詳しく記載するが、市販のＰＶＡを放射線照射によ
って架橋させて得ることができる。
橋ＰＶＡが好ましい。架橋ＣＶＰは上述のように市販品
を入手することが可能である。架橋ＰＶＡは、実施例の
項に詳しく記載するが、市販のＰＶＡを放射線照射によ
って架橋させて得ることができる。
【００１６】本発明で使用する架橋ポリマー含有液中の
架橋ポリマーの濃度は適宜増減できるが、０．０１〜５
％が好ましい。
架橋ポリマーの濃度は適宜増減できるが、０．０１〜５
％が好ましい。
【００１７】架橋ポリマーは、これを生体に投与可能な
基剤に溶解ないしは分散し、架橋ポリマー含有液の形で
注入することができる。基剤としては精製水が好まし
い。この架橋ポリマー含有液には、架橋ポリマー含有液
の注入に付随する炎症の発生や感染を防ぐため抗炎症剤
や抗菌剤を加えておくこともできる。また、注入後の前
房内の環境を整えるため、リン酸水素二ナトリウム等の
緩衝剤、塩化ナトリウム、グリセリン等の等張化剤、塩
酸、水酸化ナトリウム等のｐＨ調製剤等を加えることが
できる。
基剤に溶解ないしは分散し、架橋ポリマー含有液の形で
注入することができる。基剤としては精製水が好まし
い。この架橋ポリマー含有液には、架橋ポリマー含有液
の注入に付随する炎症の発生や感染を防ぐため抗炎症剤
や抗菌剤を加えておくこともできる。また、注入後の前
房内の環境を整えるため、リン酸水素二ナトリウム等の
緩衝剤、塩化ナトリウム、グリセリン等の等張化剤、塩
酸、水酸化ナトリウム等のｐＨ調製剤等を加えることが
できる。
【００１８】架橋ポリマー含有液は、房水を抜かずに前
房内に注入することができることを特徴とする。架橋ポ
リマー含有液の注入方法は、前房内に注入する公知の方
法を用いればよく、例えば注射針を用いて角膜輪部より
前房内に注入すればよい。架橋ポリマー含有液の注入回
数は、特に制限されないが、眼圧や眼部の炎症の状態な
どを考慮して、１〜数回注入することができる。
房内に注入することができることを特徴とする。架橋ポ
リマー含有液の注入方法は、前房内に注入する公知の方
法を用いればよく、例えば注射針を用いて角膜輪部より
前房内に注入すればよい。架橋ポリマー含有液の注入回
数は、特に制限されないが、眼圧や眼部の炎症の状態な
どを考慮して、１〜数回注入することができる。
【００１９】架橋ポリマー含有液の注入量は、注入する
動物の房水量の５〜１５％が好ましく、特に１０％が好
ましい。注入量は注入する動物により異なり、例えばウ
サギの場合は房水量が２００μＬであるので１０〜３０
μＬが好ましく、特に約２０μＬが好ましい。またサル
の場合は房水量が１００μＬであるので５〜１５μＬが
好ましく、特に１０μＬが好ましい。
動物の房水量の５〜１５％が好ましく、特に１０％が好
ましい。注入量は注入する動物により異なり、例えばウ
サギの場合は房水量が２００μＬであるので１０〜３０
μＬが好ましく、特に約２０μＬが好ましい。またサル
の場合は房水量が１００μＬであるので５〜１５μＬが
好ましく、特に１０μＬが好ましい。
【００２０】本発明に使用するモデル動物は、架橋ポリ
マー含有液の注入前の飼育条件と同じ通常の飼育条件で
飼育することができる。
マー含有液の注入前の飼育条件と同じ通常の飼育条件で
飼育することができる。
【００２１】本発明のモデル動物を用いた緑内障治療剤
のスクリーニングは、モデル動物に試験薬剤を投与し、
眼圧の下降が見られるか、または網膜神経節細胞の減少
が抑制されるか否かを指標に行う。
のスクリーニングは、モデル動物に試験薬剤を投与し、
眼圧の下降が見られるか、または網膜神経節細胞の減少
が抑制されるか否かを指標に行う。
【００２２】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２３】１．架橋ＣＶＰ注入ウサギ高眼圧モデル作
製および効果確認試験 架橋ＣＶＰ含有液を前房内に注入したウサギ高眼圧モデ
ルを作製し、高眼圧の維持および視神経の障害を観察す
るため眼圧測定および網膜神経節細胞数の測定を行っ
た。
製および効果確認試験 架橋ＣＶＰ含有液を前房内に注入したウサギ高眼圧モデ
ルを作製し、高眼圧の維持および視神経の障害を観察す
るため眼圧測定および網膜神経節細胞数の測定を行っ
た。
【００２４】（実験法）
１−Ａ．架橋ＣＶＰ注入ウサギ高眼圧モデルの作製
１）精製水１０ｍＬに架橋ＣＶＰ（ハイビスワコー１０
５、和光純薬工業製）を０．０４ｇ加え、ミキサーで１
５分攪拌し分散させた（分散液１）。精製水１０ｍＬに
ジクロフェナク０．０２ｇ、塩化ナトリウム０．１８
ｇ、１０％水酸化ナトリウム溶液を０．２４ｍＬ加え攪
拌した（溶液２）。分散液１と溶液２を混合し、ミキサ
ーで１０分攪拌した後、１Ｎ塩酸でｐＨを７．３に調整
して注入液とした。
５、和光純薬工業製）を０．０４ｇ加え、ミキサーで１
５分攪拌し分散させた（分散液１）。精製水１０ｍＬに
ジクロフェナク０．０２ｇ、塩化ナトリウム０．１８
ｇ、１０％水酸化ナトリウム溶液を０．２４ｍＬ加え攪
拌した（溶液２）。分散液１と溶液２を混合し、ミキサ
ーで１０分攪拌した後、１Ｎ塩酸でｐＨを７．３に調整
して注入液とした。
【００２５】２）覚醒下のウサギ片眼に ０．４％塩酸
オキシブプロカイン点眼液を点眼した。 ０．４％塩酸
オキシブプロカイン点眼液を投与した眼の前房内に、３
０Ｇ注射針を接続したマイクロシリンジを用いて注入液
を２０μＬ注入した。
オキシブプロカイン点眼液を点眼した。 ０．４％塩酸
オキシブプロカイン点眼液を投与した眼の前房内に、３
０Ｇ注射針を接続したマイクロシリンジを用いて注入液
を２０μＬ注入した。
【００２６】３）架橋ＣＶＰ注入後に０．１％ジクロフ
ェナク点眼液を点眼した。さらに架橋ＣＶＰ注入の翌日
より眼球摘出まで１日２回０．１％ジクロフェナク点眼
液を点眼した。
ェナク点眼液を点眼した。さらに架橋ＣＶＰ注入の翌日
より眼球摘出まで１日２回０．１％ジクロフェナク点眼
液を点眼した。
【００２７】１−Ｂ．架橋ＣＶＰ注入ウサギ高眼圧モデ
ルにおける眼圧測定 上記のように作製したウサギ高眼圧モデルを用いて、架
橋ＣＶＰ注入１日前、架橋ＣＶＰ注入後６時間、１、
２、３、４、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、
２２、２５および２８日後に眼圧測定を行った。架橋Ｃ
ＶＰを注入していない方の眼（対側眼）についても測定
を行った。
ルにおける眼圧測定 上記のように作製したウサギ高眼圧モデルを用いて、架
橋ＣＶＰ注入１日前、架橋ＣＶＰ注入後６時間、１、
２、３、４、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、
２２、２５および２８日後に眼圧測定を行った。架橋Ｃ
ＶＰを注入していない方の眼（対側眼）についても測定
を行った。
【００２８】１−Ｃ．架橋ＣＶＰ注入ウサギ高眼圧モデ
ルにおける網膜神経節細胞数の測定 １）上記のように作製したウサギ高眼圧モデルを用い
て、架橋ＣＶＰ注入２８日後に眼球を摘出し、２％パラ
ホルムアルデヒド−２．５％グルタールアルデヒド含有
ＰＢＳに浸し低温室内で１晩固定した。
ルにおける網膜神経節細胞数の測定 １）上記のように作製したウサギ高眼圧モデルを用い
て、架橋ＣＶＰ注入２８日後に眼球を摘出し、２％パラ
ホルムアルデヒド−２．５％グルタールアルデヒド含有
ＰＢＳに浸し低温室内で１晩固定した。
【００２９】２）固定した眼球より角膜、水晶体を切除
し眼球をＰＢＳ中で洗浄した後、７０％および９０％エ
タノール中でそれぞれ１時間ずつ脱水した。
し眼球をＰＢＳ中で洗浄した後、７０％および９０％エ
タノール中でそれぞれ１時間ずつ脱水した。
【００３０】３）自動パラフィン置換機を用いて、パラ
フィン置換を行った。
フィン置換を行った。
【００３１】４）包埋装置を用いて眼球をパラフィン包
埋し、ミクロトームを用いて視神経乳頭を通る垂直線で
３μｍ厚の切片を４枚作製し、スライドガラスに貼付け
た。
埋し、ミクロトームを用いて視神経乳頭を通る垂直線で
３μｍ厚の切片を４枚作製し、スライドガラスに貼付け
た。
【００３２】５）スライドガラスを乾燥させた後、ヘマ
トキシリン−エオジン染色を行った。
トキシリン−エオジン染色を行った。
【００３３】６）１つの眼球（４切片）より３切片を任
意に選択し、視神経乳頭より眼球の下方向に６視野分ま
で（０〜３ｍｍ）の網膜顕微鏡写真（対物レンズ２０
倍、カメラレンズ３．３倍）を撮影した。
意に選択し、視神経乳頭より眼球の下方向に６視野分ま
で（０〜３ｍｍ）の網膜顕微鏡写真（対物レンズ２０
倍、カメラレンズ３．３倍）を撮影した。
【００３４】７）写真上の網膜神経節細胞層中の細胞数
を計数し、網膜１ｍｍあたりの細胞数を算出した。対照
として、別に用意した無処置のウサギ眼球（正常眼）を
用いて同様に処理を行い、網膜１ｍｍあたりの細胞数を
算出した。また、眼圧測定データより曲線下面積（以下
ＡＵＣと略記する）および最高眼圧を算出し、神経節細
胞層中の細胞数とＡＵＣとの相関を検討した。
を計数し、網膜１ｍｍあたりの細胞数を算出した。対照
として、別に用意した無処置のウサギ眼球（正常眼）を
用いて同様に処理を行い、網膜１ｍｍあたりの細胞数を
算出した。また、眼圧測定データより曲線下面積（以下
ＡＵＣと略記する）および最高眼圧を算出し、神経節細
胞層中の細胞数とＡＵＣとの相関を検討した。
【００３５】（結果）
１−Ｂ．架橋ＣＶＰ注入ウサギ高眼圧モデルにおける眼
圧測定結果 各測定時点における眼圧を表１に示す。架橋ＣＶＰ注入
により眼圧が上昇し、その上昇は対側眼と比較して注入
後２８日間持続した。注入後２８日までの平均眼圧は３
５．２ｍｍＨｇ、最高眼圧（各個体の最高眼圧の平均
値）は６５．０ｍｍＨｇであった。
圧測定結果 各測定時点における眼圧を表１に示す。架橋ＣＶＰ注入
により眼圧が上昇し、その上昇は対側眼と比較して注入
後２８日間持続した。注入後２８日までの平均眼圧は３
５．２ｍｍＨｇ、最高眼圧（各個体の最高眼圧の平均
値）は６５．０ｍｍＨｇであった。
【００３６】１−Ｃ．架橋ＣＶＰ注入ウサギ高眼圧モデ
ルにおける網膜神経節細胞数の測定結果 網膜神経節細胞数を表２に示す。 神経節細胞層中の細
胞数は正常眼の４１．９個／ｍｍに対し、架橋 ＣＶＰ
注入眼においては２３．４個/ｍｍに減少した。神経節
細胞層中の細胞数（以下ＲＧＣと略記する）とＡＵＣと
の相関を図１に示す。神経節細胞の減少とＡＵＣは良い
相関関係を示し、 神経節細胞死は持続的な眼圧上昇に
依存的であることが示された。
ルにおける網膜神経節細胞数の測定結果 網膜神経節細胞数を表２に示す。 神経節細胞層中の細
胞数は正常眼の４１．９個／ｍｍに対し、架橋 ＣＶＰ
注入眼においては２３．４個/ｍｍに減少した。神経節
細胞層中の細胞数（以下ＲＧＣと略記する）とＡＵＣと
の相関を図１に示す。神経節細胞の減少とＡＵＣは良い
相関関係を示し、 神経節細胞死は持続的な眼圧上昇に
依存的であることが示された。
【００３７】
【表１】
【００３８】
【表２】
【００３９】２．架橋ＰＶＡ注入ウサギ高眼圧モデル作
製および効果確認試験 架橋ＰＶＡ含有液を前房内に注入したウサギ高眼圧モデ
ルを作製し、高眼圧の維持を確認するため眼圧測定を行
った。さらに、高眼圧モデルとしての有用性を評価する
ため、眼圧下降作用を有する化合物を投与し、眼圧下降
作用が認められるかどうか実験した。
製および効果確認試験 架橋ＰＶＡ含有液を前房内に注入したウサギ高眼圧モデ
ルを作製し、高眼圧の維持を確認するため眼圧測定を行
った。さらに、高眼圧モデルとしての有用性を評価する
ため、眼圧下降作用を有する化合物を投与し、眼圧下降
作用が認められるかどうか実験した。
【００４０】（実験法）
２−Ａ．架橋ＰＶＡ注入ウサギ高眼圧モデルの作製
１）精製水１．５Ｌにポリビニルアルコール１０００
（和光純薬工業製）を１０５ｇ加え、オートクレーブ
(１２１℃・１５分間)にかけて溶かした後、得られた溶
液を溶液の温度が下がるまでミキサーで攪拌した。これ
を４５０ｍＬバイアル瓶に分注し、１８ｋＧｙコバルト
−６０ガンマ線を照射してポリビニルアルコールを架橋
させ、注入液とした。
（和光純薬工業製）を１０５ｇ加え、オートクレーブ
(１２１℃・１５分間)にかけて溶かした後、得られた溶
液を溶液の温度が下がるまでミキサーで攪拌した。これ
を４５０ｍＬバイアル瓶に分注し、１８ｋＧｙコバルト
−６０ガンマ線を照射してポリビニルアルコールを架橋
させ、注入液とした。
【００４１】２）覚醒下のウサギ片眼に ０．４％塩酸
オキシブプロカイン点眼液を点眼した。 ０．４％塩酸
オキシブプロカイン点眼液を投与した眼の前房内に、３
０Ｇ注射針を接続したマイクロシリンジを用いて注入液
を２０μＬ注入した。
オキシブプロカイン点眼液を点眼した。 ０．４％塩酸
オキシブプロカイン点眼液を投与した眼の前房内に、３
０Ｇ注射針を接続したマイクロシリンジを用いて注入液
を２０μＬ注入した。
【００４２】２−Ｂ．架橋ＰＶＡ注入ウサギ高眼圧モデ
ルにおける眼圧測定 上記のように作製したウサギ高眼圧モデルを用いて、架
橋ＰＶＡ注入直前、架橋ＰＶＡ注入後２、４、６時間、
（ＰＶＡ注入日を１日目として）３、５、８、および１
１日目の１０：３０に眼圧測定を行った。架橋ＰＶＡを
注入していない方の眼（対側眼）についても測定を行っ
た。
ルにおける眼圧測定 上記のように作製したウサギ高眼圧モデルを用いて、架
橋ＰＶＡ注入直前、架橋ＰＶＡ注入後２、４、６時間、
（ＰＶＡ注入日を１日目として）３、５、８、および１
１日目の１０：３０に眼圧測定を行った。架橋ＰＶＡを
注入していない方の眼（対側眼）についても測定を行っ
た。
【００４３】２−Ｃ．架橋ＰＶＡ注入ウサギ高眼圧モデ
ルにおける０．０１ ％ プロスタグランジンＦ２α イ
ソプロピルエステル（ＰＧＦ２α−ＩＥ）の及ぼす影響 新たに上記のように作製したウサギ高眼圧モデルを用い
て、架橋ＰＶＡ注入後７日目に０．０１ ％ ＰＧＦ２α
−ＩＥおよび生理食塩液５０μＬを点眼して、点眼直
前、点眼後１，２，４，６，および８時間後に眼圧測定
を行った。
ルにおける０．０１ ％ プロスタグランジンＦ２α イ
ソプロピルエステル（ＰＧＦ２α−ＩＥ）の及ぼす影響 新たに上記のように作製したウサギ高眼圧モデルを用い
て、架橋ＰＶＡ注入後７日目に０．０１ ％ ＰＧＦ２α
−ＩＥおよび生理食塩液５０μＬを点眼して、点眼直
前、点眼後１，２，４，６，および８時間後に眼圧測定
を行った。
【００４４】（結果）
２−Ｂ．架橋ＰＶＡ注入ウサギ高眼圧モデルにおける眼
圧測定結果 各測定時点における眼圧を表３に示す。架橋ＰＶＡ注入
により眼圧が上昇し、その上昇は対側眼と比較して注入
後１１日間持続した。注入後１１日までの平均眼圧は４
０．９ｍｍＨｇ、最高眼圧（各個体の最高眼圧の平均
値）は５５．０ｍｍＨｇであった。
圧測定結果 各測定時点における眼圧を表３に示す。架橋ＰＶＡ注入
により眼圧が上昇し、その上昇は対側眼と比較して注入
後１１日間持続した。注入後１１日までの平均眼圧は４
０．９ｍｍＨｇ、最高眼圧（各個体の最高眼圧の平均
値）は５５．０ｍｍＨｇであった。
【００４５】２−Ｃ．架橋ＰＶＡ注入ウサギ高眼圧モデ
ルにおける０．０１ ％ プロスタグランジンＦ２α イ
ソプロピルエステル（ＰＧＦ２α−ＩＥ）の及ぼす影響 各測定時点における眼圧を表４に示す。架橋ＰＶＡ注入
により上昇した眼圧は、眼圧下降作用を持つＰＧＦ２α
−ＩＥを投与することによって下降した。
ルにおける０．０１ ％ プロスタグランジンＦ２α イ
ソプロピルエステル（ＰＧＦ２α−ＩＥ）の及ぼす影響 各測定時点における眼圧を表４に示す。架橋ＰＶＡ注入
により上昇した眼圧は、眼圧下降作用を持つＰＧＦ２α
−ＩＥを投与することによって下降した。
【００４６】
【表３】
【００４７】
【表４】
【００４８】
【発明の効果】本発明によれば、房水を置換することな
く、房水量の１０％程度の架橋ポリマー含有液を実験動
物の前房内に注入すると高眼圧を誘発することができ
る。従って、実験動物作製の手技が簡便になり且つ動物
への刺激を低減することができ、このモデル動物を用い
た緑内障治療薬のスクリーニング法は、緑内障治療薬の
開発における有用な手段となる。
く、房水量の１０％程度の架橋ポリマー含有液を実験動
物の前房内に注入すると高眼圧を誘発することができ
る。従って、実験動物作製の手技が簡便になり且つ動物
への刺激を低減することができ、このモデル動物を用い
た緑内障治療薬のスクリーニング法は、緑内障治療薬の
開発における有用な手段となる。
【図１】図１は、架橋ＣＶＰ注入ウサギ高眼圧モデルに
おけるＲＧＣとＡＵＣの関係を示すグラフである。
おけるＲＧＣとＡＵＣの関係を示すグラフである。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 中澤 文雄
奈良県生駒市高山町8916−16 参天製薬株
式会社研究所内
(72)発明者 桑野 光明
奈良県生駒市高山町8916−16 参天製薬株
式会社研究所内
(72)発明者 原 英彰
奈良県生駒市高山町8916−16 参天製薬株
式会社研究所内
Ｆターム(参考） 2G045 AA40
Claims (4)
- 【請求項１】 架橋ポリマー含有液を前房内に注入する
ことによって高眼圧および視神経損傷を誘発させた実験
動物を用いる、緑内障治療薬の薬理学的スクリーニング
方法。 - 【請求項２】架橋ポリマーが架橋カルボキシビニルポリ
マーまたは架橋ポリビニルアルコールである請求項１記
載のスクリーニング方法。 - 【請求項３】架橋ポリマー含有液を前房内に注入するこ
とによって高眼圧および視神経損傷を誘発させた実験動
物の作製方法。 - 【請求項４】架橋ポリマーが架橋カルボキシビニルポリ
マーまたは架橋ポリビニルアルコールである請求項３記
載の実験動物の作製方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002252303A JP2003149236A (ja) | 2001-08-30 | 2002-08-30 | 緑内障治療薬のスクリーニング方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001-260809 | 2001-08-30 | ||
| JP2001260809 | 2001-08-30 | ||
| JP2002252303A JP2003149236A (ja) | 2001-08-30 | 2002-08-30 | 緑内障治療薬のスクリーニング方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003149236A true JP2003149236A (ja) | 2003-05-21 |
Family
ID=26621266
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002252303A Withdrawn JP2003149236A (ja) | 2001-08-30 | 2002-08-30 | 緑内障治療薬のスクリーニング方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003149236A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2018527147A (ja) * | 2016-04-21 | 2018-09-20 | ウェンジョウ オプトメトリー アンド オフタルモロジー ディヴェロップメント カンパニー リミテッド | 慢性高眼圧動物モデルの作製方法 |
| JP2018531747A (ja) * | 2015-10-30 | 2018-11-01 | ドヘニー アイ インスティテュート | 治療用核酸のデリバリによる眼障害の治療のためのデバイスおよび方法 |
-
2002
- 2002-08-30 JP JP2002252303A patent/JP2003149236A/ja not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2018531747A (ja) * | 2015-10-30 | 2018-11-01 | ドヘニー アイ インスティテュート | 治療用核酸のデリバリによる眼障害の治療のためのデバイスおよび方法 |
| JP2018527147A (ja) * | 2016-04-21 | 2018-09-20 | ウェンジョウ オプトメトリー アンド オフタルモロジー ディヴェロップメント カンパニー リミテッド | 慢性高眼圧動物モデルの作製方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Application deemed to be withdrawn because no request for examination was validly filed |
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