JP2003125769A - 骨代謝異常疾患マーカー並びにその利用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代
謝異常疾患を反映する疾患マーカー、該疾患マーカーを
利用した骨代謝異常疾患の検出方法、該疾患の改善に有
用な薬物のスクリーニング方法を提供する。 【解決手段】ヒト由来の特定の塩基配列において、連続
する少なくとも15塩基を有するポリヌクレオチド及び／
またはそれに相補的なポリヌクレオチドを、破骨細胞の
分化・活性化の亢進に関連した骨代謝異常疾患の疾患マ
ーカーとして利用する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は破骨細胞の分化・活
性化の亢進に関連して生じる骨代謝異常疾患の診断に有
用な疾患マーカーに関する。より詳細には、本発明は破
骨細胞の分化・活性化の亢進に関連して生じる骨代謝異
常疾患、例えば関節炎や骨粗鬆症等の疾患の遺伝子診断
において、プライマーまたは検出プローブとして有効に
利用できる疾患マーカーに関する。また本発明は、かか
る疾患マーカーを利用した破骨細胞の分化・活性化の亢
進に関連する骨代謝異常疾患の検出方法（診断方法）に
関する。

【０００２】さらに本発明は、上記疾患マーカーを利用
して、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連して生じる
骨代謝異常疾患の改善薬または治療薬として有効な物質
をスクリーニングする方法、並びに該方法で調製される
上記物質を有効成分とする骨代謝異常疾患の改善薬また
は治療薬に関する。

【０００３】

【従来の技術】骨は、骨芽細胞による骨形成と破骨細胞
による骨吸収とが絶えず繰り返されている動的組織であ
る。骨芽細胞と破骨細胞の機能バランスに異常が生じる
と、この動的平衡状態が破綻し様々な骨代謝異常疾患が
引き起こされることが知られている。またステロイド治
療等による治療の副作用によっても骨代謝異常が生じる
場合がある。また骨代謝異常疾患はその進行に従って身
体活動能力の低下が生じ、ひいては腰痛・関節痛等の痛
みを伴うため、日常生活動作に支障をきたすことも多
い。

【０００４】近年、骨密度の測定手法（DXA法；Dual en
ergy X-ray absorptiometry法）が改良されたことから
骨密度の健診が安価で容易に受けられるようになり、こ
れによって骨代謝異常の診断の機会も増している。

【０００５】一方で、最近の医療現場では、骨代謝異常
疾患に限らず、個々の患者の症状に合わせて治療法を的
確に選択することが望まれるようになってきている。高
齢化社会でのQOL（Quality of life）向上の必要性が認
識されてきた近年では、特に、万人に共通した治療では
なく、個々の患者の症状に合わせて適切な治療が施され
ることが強く求められている。このような所謂テイラー
メイド治療を行うためには、個々の疾患について患者の
症状やその原因（遺伝的背景）を的確に反映する疾患マ
ーカーが有用であり、その探索並びに開発を目指した研
究が精力的に行われているのが現状である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、骨代謝異常
疾患の診断及び治療に有用な疾患マーカーを提供するこ
とを目的とする。より詳細には、本発明は破骨細胞の分
化・活性化の亢進に関連して生じる骨代謝異常疾患を特
異的に反映した疾患マーカーを提供することを目的とす
る。さらに本発明は該疾患マーカーを利用した骨代謝異
常疾患の検出方法（遺伝子診断方法）、該疾患の改善ま
たは治療に有用な薬物をスクリーニングする方法、並び
に該疾患の改善または治療に有用な薬物を提供すること
を目的とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究を行っていたところ、後述す
る配列表において配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、
9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、2
1、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、3
3、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、4
5、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、5
7、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、6
9、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、8
1、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、9
3、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、10
4、105、106、107、108、109、110、111、112、113、11
4、115、116、117、118、119、120、121、122、123、12
4、125、126、127、128、129、130、131、132、133、13
4、135、136、137、138、139、140、141、142、143、14
4、145、146、147、148、149、198、199、200、201、20
2、203、204、205、206、207、208、209、210、211、21
2、213、214、215、216、217、218、219、220、221、22
2、223、224、225、226、227、228、229、230、231、23
2、233、234、235、236、237、238、239、240、241、24
2、243、244、245、246、247、248、249、250、251、25
2、253、254、255、256、257、258、259、260、261、26
2、263、264、265、266、267、268、269、270、271、27
2、273、274、275、276、277、278、279、280、281、28
2、283、284、285、286、287、288、289、290、291、29
2、293、294、295、296、297、298、299、300、または3
01で示される塩基配列（以下、本明細書において「配列
番号:1-149,198-301」ともいう。）を有する遺伝子が骨
粗鬆症患者の骨組織に特異的に検出されること、また配
列番号：150、151、152、153、154、155、156、157、15
8、159、160、161、162、163、164、165、166、167、16
8、169、170、171、172、173、174、175、176、177、17
8、179、180、181、182、183、184、185、186、187、18
8、189、190、191、192、193、194、195、196、197、30
2、303、304、305、306、307、308、309、310、311、31
2、313、314、315、316、317、318、319、320、321、又
は322で示される塩基配列（以下、本明細書において
「配列番号:150-197,302-322」ともいう。）を有する遺
伝子は、正常の骨組織における発現に比して骨粗鬆症患
者の骨組織における発現が有意に抑制されていることを
見出した。これらのことから、本発明者らは、かかる遺
伝子が破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連して生じる
骨代謝異常疾患の疾患マーカーとなり得るとの確信を得
た。本発明はかかる知見に基づいて開発されたものであ
る。

【０００８】すなわち、本発明は、下記項１〜項１８に
掲げるものである： 項１． 配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、1
1、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、2
3、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、3
5、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、4
7、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、5
9、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、7
1、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、8
3、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、9
5、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、1
06、107、108、109、110、111、112、113、114、115、1
16、117、118、119、120、121、122、123、124、125、1
26、127、128、129、130、131、132、133、134、135、1
36、137、138、139、140、141、142、143、144、145、1
46、147、148、149、150、151、152、153、154、155、1
56、157、158、159、160、161、162、163、164、165、1
66、167、168、169、170、171、172、173、174、175、1
76、177、178、179、180、181、182、183、184、185、1
86、187、188、189、190、191、192、193、194、195、1
96、197、198、199、200、201、202、203、204、205、2
06、207、208、209、210、211、212、213、214、215、2
16、217、218、219、220、221、222、223、224、225、2
26、227、228、229、230、231、232、233、234、235、2
36、237、238、239、240、241、242、243、244、245、2
46、247、248、249、250、251、252、253、254、255、2
56、257、258、259、260、261、262、263、264、265、2
66、267、268、269、270、271、272、273、274、275、2
76、277、278、279、280、281、282、283、284、285、2
86、287、288、289、290、291、292、293、294、295、2
96、297、298、299、300、301、302、303、304、305、3
06、307、308、309、310、311、312、313、314、315、3
16、317、318、319、320、321、又は322（以下、本明細
書において「配列番号:1〜322」ともいう。）のいずれ
かに記載の塩基配列において、連続する少なくとも15塩
基を有するポリヌクレオチド及び／またはそれに相補的
なポリヌクレオチドからなる、破骨細胞の分化・活性化
の亢進に関連した骨代謝異常疾患の疾患マーカー。

【０００９】項２． 破骨細胞の分化・活性化の亢進に
関連した骨代謝異常疾患の検出においてプローブまたは
プライマーとして使用される項１記載の疾患マーカー。

【００１０】項３． 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び
（ｃ）を含む、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連し
た骨代謝異常疾患の検出方法： （ａ）被験者の生体試料から調製されたRNAまたはそれ
から転写された相補的なポリヌクレオチドと項１または
２に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、（ｂ）該
疾患マーカーに特異的に結合した生体試料由来のRNAま
たはそれから転写された相補的なポリヌクレオチドを、
上記疾患マーカーを指標として測定する工程、（ｃ）
（ｂ）の測定結果に基づいて、破骨細胞の分化・活性化
の亢進に関連した骨代謝異常疾患の罹患を判断する工
程。

【００１１】項４． 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び
（ｃ）を含む、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連し
た骨代謝異常疾患の検出方法： （ａ）被験者の生体試料から調製されたRNAまたはそれ
から転写された相補的なポリヌクレオチドと、項１また
は２に記載の疾患マーカーのうち、配列番号:1-149,198
-301に記載の塩基配列に基づく疾患マーカーとを結合さ
せる工程、（ｂ）上記疾患マーカーに特異的に結合した
生体試料由来のRNAまたはそれから転写された相補的な
ポリヌクレオチドを、上記疾患マーカーを指標として測
定する工程、（ｃ）（ｂ）で得られる被験者の測定結果
が、正常な生体試料について得られる結果に比して疾患
マーカーへの結合量が増大していることを指標として、
破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝異常疾
患の罹患を判断する工程。

【００１２】項５． 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び
（ｃ）を含む、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連し
た骨代謝異常疾患の検出方法： （ａ）被験者の生体試料から調製されたRNAまたはそれ
から転写された相補的なポリヌクレオチドと、項１また
は２に記載の疾患マーカーのうち、配列番号:150-197,3
02-322に記載の塩基配列に基づく疾患マーカーとを結合
させる工程、（ｂ）上記疾患マーカーに特異的に結合し
た生体試料由来のRNAまたはそれから転写された相補的
なポリヌクレオチドを、上記疾患マーカーを指標として
測定する工程、（ｃ）（ｂ）で得られる被験者の測定結
果が、正常な生体試料について得られる結果に比して疾
患マーカーへの結合量が減少していることを指標とし
て、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝異
常疾患の罹患を判断する工程。

【００１３】項６． 配列番号：323、324、325、326、
327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、
337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、
347、348、349、350、351、352、353、354、または355
（以下、本明細書において「配列番号:323-355」ともい
う。）に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質を認識
する抗体を有する破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連
した骨代謝異常疾患の疾患マーカー。

【００１４】項７． 破骨細胞の分化・活性化の亢進に
関連した骨代謝異常疾患の検出においてプローブとして
使用される項６記載の疾患マーカー。

【００１５】項８． 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び
（ｃ）を含む、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連し
た骨代謝異常疾患の検出方法： （ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と項
６または７に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のタンパ
ク質またはその部分ペプチドを、上記疾患マーカーを指
標として測定する工程、（ｃ）（ｂ）の測定結果に基づ
いて、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝
異常疾患の罹患を判断する工程。

【００１６】項９． 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び
（ｃ）を含む、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連し
た骨代謝異常疾患の検出方法： （ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と、
項６または７に記載の疾患マーカーのうち配列番号：32
3、324、325、326、327、328、329、330、331、332、33
3、334、335、336、337、338、339、340、または341に
記載のアミノ酸配列を有するタンパク質を認識する抗体
を有する疾患マーカーとを結合させる工程（ｂ）該疾患
マーカーに結合した生体試料由来のタンパク質またはそ
の部分ペプチドを、上記疾患マーカーを指標として測定
する工程、（ｃ）（ｂ）で得られる被験者の測定結果
が、正常な生体試料について得られる結果に比して疾患
マーカーへの結合量が増大していることを指標として、
破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝異常疾
患の罹患を判断する工程。

【００１７】項１０． 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び
（ｃ）を含む、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連し
た骨代謝異常疾患の検出方法： （ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と、
項６または７に記載の疾患マーカーのうち配列番号：34
2、343、344、345、346、347、348、349、350、351、35
2、353、354、または355に記載のアミノ酸配列を有する
タンパク質を認識する抗体を有する疾患マーカーとを結
合させる工程、（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試
料由来のタンパク質またはその部分ペプチドを、上記疾
患マーカーを指標として測定する工程、（ｃ）（ｂ）で
得られる被験者の測定結果が、正常な生体試料について
得られる結果に比して疾患マーカーへの結合量が減少し
ていることを指標として、破骨細胞の分化・活性化の亢
進に関連した骨代謝異常疾患の罹患を判断する工程。

【００１８】項１１． 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び
（ｃ）を含む、配列番号：1〜322のいずれかに記載の塩
基配列を有する遺伝子の発現を制御する物質のスクリー
ニング方法： (ａ) 被験物質と配列番号：1〜322のいずれかに記載の
塩基配列を有する遺伝子を発現可能な細胞とを接触させ
る工程、(ｂ) 被験物質を接触させた細胞の、配列番
号：1〜322のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子
の発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない
対照細胞の上記対応する遺伝子の発現量と比較する工
程、(ｃ) （ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：1〜
322のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現
量を変動させる被験物質を選択する工程。

【００１９】項１２． 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び
（ｃ）を含む、配列番号：1-149,198-301のいずれかに
記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を抑制する物質の
スクリーニング方法： (ａ) 被験物質と配列番号：1-149,198-301のいずれかに
記載の塩基配列を有する遺伝子を発現可能な細胞とを接
触させる工程、(ｂ) 被験物質を接触させた細胞の、配
列番号：1-149,198-301のいずれかに記載の塩基配列を
有する遺伝子の発現量を測定し、該発現量を被験物質を
接触させない対照細胞の上記対応する遺伝子の発現量と
比較する工程、(ｃ) （ｂ）の比較結果に基づいて、配
列番号：1-149,198-301のいずれかに記載の塩基配列を
有する遺伝子の発現量を減少させる被験物質を選択する
工程。

【００２０】項１３． 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び
（ｃ）を含む、配列番号：150-197,302-322のいずれか
に記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を増加させる物
質のスクリーニング方法： (ａ) 被験物質と配列番号：150-197,302-322のいずれか
に記載の塩基配列を有する遺伝子を発現可能な細胞とを
接触させる工程、(ｂ) 被験物質を接触させた細胞の、
配列番号：150-197,302-322のいずれかに記載の塩基配
列を有する遺伝子の発現量を測定し、該発現量を被験物
質を接触させない対照細胞の上記対応する遺伝子の発現
量と比較する工程、(ｃ) （ｂ）の比較結果に基づい
て、配列番号：150-197,302-322のいずれかに記載の塩
基配列を有する遺伝子の発現量を増加させる被験物質を
選択する工程。

【００２１】項１４． 破骨細胞の分化・活性化の亢進
に関連した骨代謝異常疾患の改善または治療剤の有効成
分を探索するための方法である、項１１乃至１３のいず
れかに記載のスクリーニング方法。

【００２２】項１５． 配列番号：1-149,198-301のい
ずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を抑制す
る物質を有効成分とする破骨細胞の分化・活性化の亢進
に関連した骨代謝異常疾患の改善または治療剤。 項１６． 配列番号：1-149,198-301のいずれかに記載
の塩基配列を有する遺伝子の発現を抑制する物質が項１
２に記載のスクリーニング法により得られるものであ
る、項１５記載の骨代謝異常疾患の改善または治療剤。

【００２３】項１７． 配列番号：150-197,302-322の
いずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を増加
させる物質を有効成分とする破骨細胞の分化・活性化の
亢進に関連した骨代謝異常疾患の改善または治療剤。 項１８． 配列番号：150-197,302-322のいずれかに記
載の塩基配列を有する遺伝子の発現を増加させる物質が
項１３に記載のスクリーニング法により得られるもので
ある、項１７記載の骨代謝異常疾患の改善または治療
剤。

【００２４】

【発明の実施の形態】以下、本明細書において、アミノ
酸、（ポリ）ペプチド、（ポリ）ヌクレオチドなどの略
号による表示は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの規定〔IUPAC-IU
B Communication on Biological Nomenclature, Eur.
J. Biochem., 138: 9 (1984)〕、「塩基配列又はアミノ
酸配列を含む明細書等の作成のためのガイドライン」
（日本国特許庁編）、および当該分野における慣用記号
に従う。

【００２５】本明細書において「遺伝子」または「DN
A」とは、２本鎖ＤＮＡのみならず、それを構成するセ
ンス鎖およびアンチセンス鎖といった各１本鎖ＤＮＡを
包含する趣旨で用いられる。またその長さによって特に
制限されるものではない。従って、本明細書において遺
伝子(DNA）とは、特に言及しない限り、ヒトゲノムＤＮ
Ａを含む２本鎖ＤＮＡおよびｃＤＮＡを含む１本鎖ＤＮ
Ａ（正鎖）並びに該正鎖と相補的な配列を有する１本鎖
ＤＮＡ（相補鎖）、およびこれらの断片のいずれもが含
まれる。なお、遺伝子またはDNAは、機能領域の別を問
うものではなく、例えば発現制御領域、コード領域、エ
キソン、またはイントロンを含むことができる。

【００２６】本明細書において「ポリヌクレオチド」と
は、ＲＮＡおよびＤＮＡのいずれをも包含する趣旨で用
いられる。なお、上記ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤ
ＮＡ、及び合成ＤＮＡのいずれもが含まれる。また上記
ＲＮＡには、total RNA、mRNA、rRNA、及び合成のRNAの
いずれもが含まれる。

【００２７】本明細書において「タンパク質」または
「（ポリ）ペプチド」には、特定の配列で示される「タ
ンパク質」または「（ポリ）ペプチド」だけでなく、こ
れらと生物学的機能が同等であることを限度として、そ
の断片、同族体（ホモログ）、誘導体、および変異体が
包含される。なお、上記変異体には、天然に存在するア
レル変異体、天然に存在しない変異体、及び人為的に欠
失、置換、付加および挿入されることによって改変され
たアミノ酸配列を有する変異体が包含される。なお、上
記変異体としては、変異のないタンパク質または（ポ
リ）ペプチドと、少なくとも70％、好ましくは80％、よ
り好ましくは95％、さらにより好ましくは97％相同なも
のを挙げることができる。

【００２８】本明細書でいう「抗体」には、ポリクロー
ナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗
体、またはFabフラグメントやFab発現ライブラリーによ
って生成されるフラグメントなどのように抗原結合性を
有する上記抗体の一部が包含される。

【００２９】さらに本明細書において「疾患マーカー」
とは、骨代謝異常疾患、特に破骨細胞の分化・活性化の
亢進に関連して生じる骨代謝異常疾患の罹患の有無若し
くは罹患の程度を診断するために、直接または間接的に
利用されるものであり、例えば、破骨細胞の分化・活性
化の亢進に関連して生体内での発現が変動する遺伝子ま
たはタンパク質を特異的に認識し、また結合することの
できる（ポリ）（オリゴ）ヌクレオチドまたは抗体が包
含される。これらの（ポリ）（オリゴ）ヌクレオチドお
よび抗体は、上記性質に基づいて、生体内で発現した上
記遺伝子及びタンパク質を検出するためのプローブとし
て、また（オリゴ）ヌクレオチドは生体内で発現した上
記遺伝子を増幅するためのプライマーとして有効に利用
することができる。

【００３０】本発明は、前述するように、配列番号：
1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、1
5、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、2
7、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、3
9、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、5
1、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、6
3、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、7
5、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、8
7、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、9
9、100、101、102、103、104、105、106、107、108、10
9、110、111、112、113、114、115、116、117、118、11
9、120、121、122、123、124、125、126、127、128、12
9、130、131、132、133、134、135、136、137、138、13
9、140、141、142、143、144、145、146、147、148、14
9、198、199、200、201、202、203、204、205、206、20
7、208、209、210、211、212、213、214、215、216、21
7、218、219、220、221、222、223、224、225、226、22
7、228、229、230、231、232、233、234、235、236、23
7、238、239、240、241、242、243、244、245、246、24
7、248、249、250、251、252、253、254、255、256、25
7、258、259、260、261、262、263、264、265、266、26
7、268、269、270、271、272、273、274、275、276、27
7、278、279、280、281、282、283、284、285、286、28
7、288、289、290、291、292、293、294、295、296、29
7、298、299、300、または301（配列番号:1-149,198-30
1）のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子（以
下、これらの遺伝子を総称して遺伝子Ｉともいう。）
が、骨代謝異常疾患患者の骨組織、特に破骨細胞の分化
や活性化の亢進に関連した骨代謝異常疾患の患者の骨組
織で特異的に発現していること、並びに配列番号：15
0、151、152、153、154、155、156、157、158、159、16
0、161、162、163、164、165、166、167、168、169、17
0、171、172、173、174、175、176、177、178、179、18
0、181、182、183、184、185、186、187、188、189、19
0、191、192、193、194、195、196、197、302、303、30
4、305、306、307、308、309、310、311、312、313、31
4、315、316、317、318、319、320、321、または322
（配列番号:150-197,302-322）のいずれかに記載の塩基
配列を有する遺伝子（以下、これらの遺伝子を総称して
遺伝子IIともいう。）が、骨代謝異常疾患患者の骨組
織、特に破骨細胞の分化や活性化の亢進に関連した骨代
謝異常疾患の患者の骨組織で特異的に発現が抑制されて
いることを見出したことに基づくものである。従って、
これらの遺伝子及びその発現産物〔タンパク質、（ポ
リ）（オリゴ）ペプチド〕は、骨代謝異常疾患、特に破
骨細胞の分化や活性化の亢進に関連して生じる骨代謝異
常疾患の解明、診断、予防及び治療に有効に利用するこ
とができ、かかる利用によって医学並びに臨床学上、有
用な情報や手段を得ることができる。また、これらの遺
伝子及びその発現産物並びにそれらからの派生物（例え
ば、抗体など）は、上記骨代謝異常疾患の治療、並びに
該治療に有効に用いられる薬剤の開発に好適に利用する
ことができる。さらに、個体または骨組織における、上
記遺伝子の発現またはその発現産物の検出、または該遺
伝子の変異またはその発現不全の検出は、骨代謝異常疾
患の解明や診断に有効に利用することができる。

【００３１】以下、これらのポリヌクレオチド、並びに
これらの発現産物やそれらの派生物について、具体的な
用途を説明する。

【００３２】（１）骨代謝異常疾患の疾患マーカー及び
その応用 (1-1) ポリヌクレオチド 本発明は、前述するように、破骨細胞の分化や活性化の
亢進に関連して生じる骨代謝異常疾患に罹患した患者の
骨組織に、配列番号:1-149,198-301のいずれかの塩基配
列を有する遺伝子が特異的に発現しているか、発現が特
異的に増大しているという知見、並びに該患者の骨組織
において配列番号：150-197,302-322のいずれかの塩基
配列を有する遺伝子の発現が特異的に減少しているとい
う知見を発端に、これらの遺伝子発現の有無や発現の程
度を検出することによって上記骨代謝異常疾患の罹患の
有無や罹患の程度が特異的に検出でき、該疾患の診断を
正確に行うことができるという発想に基づくものであ
る。すなわち、本発明は、被験者における上記遺伝子の
発現の有無またはその程度を検出することによって、被
験者について破骨細胞の分化や活性化の亢進に関連して
生じる骨代謝異常疾患の罹患の有無またはその程度を診
断することのできるツールとして有用な疾患マーカーを
提供するものである。

【００３３】かかる本発明の疾患マーカーは、配列番
号：1〜322のいずれかに記載の塩基配列において、連続
する少なくとも15塩基を有するポリヌクレオチド及び／
またはそれに相補的なポリヌクレオチドからなることを
特徴とするものである。

【００３４】ここで相補的なポリヌクレオチド（相補
鎖、逆鎖）とは、上記各配列番号に示される塩基配列か
らなるポリヌクレオチドの全長配列、または上記各塩基
配列において少なくとも連続した１５塩基長の塩基配列
を有するその部分配列（ここでは便宜上、これらを「正
鎖」ともいう）に対して、A:TおよびG:Cといった塩基対
関係に基づいて、塩基的に相補的な関係にあるポリヌク
レオチドを意味するものである。ただし、かかる相補鎖
は、対象とする正鎖の塩基配列と完全に相補配列を形成
する場合に限らず、対象とする正鎖とストリンジェント
な条件でハイブリダイスすることができる程度の相補関
係を有するものであってもよい。なお、ここでストリン
ジェントな条件は、Berger and Kimmel (1987, Guide t
o Molecular Cloning Techniques Methods in Enzymolo
gy, Vol. 152, Academic Press, San Diego CA) に教示
されるように、複合体或いはプローブを結合する核酸の
融解温度(Tm)に基づいて決定することができる。例えば
ハイブリダイズ後の洗浄条件として、通常「１×SSC、
0.1%SDS、37℃」程度の条件を挙げることができる。相
補鎖はかかる条件で洗浄しても対象とする正鎖とハイブ
リダイズ状態を維持するものであることが好ましい。特
に制限されないが、より厳しいハイブリダイズ条件とし
て「0.5×SSC、0.1%SDS、42℃」程度、さらに厳しいハ
イブリダイズ条件として「0.1×SSC、0.1%SDS、65℃」
程度の洗浄条件を挙げることができる。具体的には、こ
のような相補鎖として、対象の正鎖の塩基配列と完全に
相補的な関係にある塩基配列からなる鎖、並びに該鎖と
少なくとも90％、好ましくは95％の相同性を有する塩基
配列からなる鎖を例示することができる。

【００３５】また、正鎖側のポリヌクレオチドには、配
列番号：1〜322のいずれかに記載の塩基配列またはその
部分配列を有するものだけでなく、上記相補鎖の塩基配
列に対してさらに相補的な関係にある塩基配列からなる
鎖を含めることができる。

【００３６】さらに上記正鎖のポリヌクレオチド及び相
補鎖（逆鎖）のポリヌクレオチドは、各々一本鎖の形態
で疾患マーカーとして使用されても、また二本鎖の形態
で疾患マーカーとして使用されてもよい。

【００３７】本発明の骨代謝異常疾患の疾患マーカー
は、具体的には配列番号：1〜322のいずれかに記載され
る塩基配列（全長配列）からなるポリヌクレオチドであ
ってもよいし、その相補配列からなるポリヌクレオチド
であってもよい。また、配列番号：1〜322のいずれかで
示される遺伝子もしくは該遺伝子に由来するポリヌクレ
オチドを選択的に（特異的に）認識するものであれば、
上記全長配列若しくはその相補配列の部分配列からなる
ポリヌクレオチドであってもよい。この場合、部分配列
としては、上記全長配列若しくはその相補配列の塩基配
列から任意に選択される少なくとも15個の連続した塩基
長を有するポリヌクレオチドを挙げることができる。

【００３８】なお、ここで「選択的に（特異的に）認識
する」とは、例えばノーザンブロット法においては、配
列番号：1〜322のいずれかに記載の塩基配列を有する遺
伝子またはこれらの遺伝子に由来するポリヌクレオチド
が特異的に検出できること、またRT-PCR法においては配
列番号：1〜322のいずれかに記載の塩基配列を有する遺
伝子またはこれらの遺伝子に由来するポリヌクレオチド
が特異的に生成されることを意味するが、それに限定さ
れることなく、当業者が上記検出物または生成物がこれ
らの遺伝子に由来するものであると判断できるものであ
ればよい。

【００３９】そのような本発明の疾患マーカーは、検出
（認識）する対象の遺伝子（配列番号：1〜322）に応じ
て、配列番号：1〜322のいずれかに示される塩基配列を
もとにして、例えばprimer 3（http://www.genome.wi.m
it.edu/cgi-bin/primer/primer3.cgi）あるいはベクタ
ーNTI（Infomax社製）を利用して設計することができ
る。具体的には配列番号：1〜322のいずれかに示される
塩基配列をprimer 3またはベクターNTIのソフトウエア
にかけて得られる、プライマーまたはプローブの候補配
列、若しくは少なくとも該配列を一部に含む配列をプラ
イマーまたはプローブとして使用することができる。

【００４０】本発明で用いる疾患マーカーは、上述する
ように連続する少なくとも15塩基の長さを有するもので
あればよいが、具体的にはマーカーの用途に応じて、長
さを適宜選択し設定することができる。

【００４１】本発明の疾患マーカーは、上記各遺伝子の
発現によって生じたＲＮＡまたはそれに由来するポリヌ
クレオチドを特異的に認識し増幅するためのプライマー
として、または該ＲＮＡまたはそれに由来するポリヌク
レオチドを特異的に検出するためのプローブとして利用
することができる。

【００４２】上記疾患マーカーを骨代謝異常疾患の検出
（遺伝子診断）においてプライマーとして用いる場合に
は、通常15bp〜100bp、好ましくは15bp〜50bp、より好
ましくは15bp〜35bpの塩基長を有するものが例示でき
る。また検出プローブとして用いる場合には、通常15bp
〜全配列の塩基数、好ましくは15bp〜1kb、より好まし
くは100bp〜1kbの塩基長を有するものが例示できる。

【００４３】本発明の疾患マーカーは、ノーザンブロッ
ト法、RT-PCR法、in situハイブリダーゼーション法な
どといった、特定遺伝子を特異的に検出する公知の方法
において、常法に従ってプライマーまたはプローブとし
て利用することができ、これによって破骨細胞の分化・
活性化の亢進に関わる骨代謝異常疾患に関連する配列番
号：1〜322のいずれかの塩基配列を有する遺伝子の発現
の有無または発現レベル（発現量）を評価することがで
きる。なお、測定対象試料としては、使用する検出方法
の種類に応じて、被験者の骨組織の一部をバイオプシ等
で採取し、そこから常法に従って調製したtotal RNAを
用いてもよいし、さらに該RNAをもとにして調製される
各種のポリヌクレオチドを用いてもよい。

【００４４】また、配列番号：1〜322のいずれかの塩基
配列を有する遺伝子の生体組織における発現レベルは、
DNAチップを利用して検出あるいは定量することができ
る。この場合、本発明の疾患マーカーは当該DNAチップ
のプローブとして使用することができる。本発明の疾患
マーカーをプローブとするDNAチップは、生体組織から
採取したRNAをもとに調製される標識DNAまたはRNAとハ
イブリダイズさせることにより、本発明の疾患マーカー
（プローブ）と標識DNAまたはRNAとの複合体が形成され
るので、該複合体を該標識DNAまたはRNAの標識を指標と
して検出することにより、配列番号：1〜322のいずれか
の塩基配列からなる遺伝子の生体組織中での発現の有無
または発現レベル（発現量）が評価できる。

【００４５】本発明の疾患マーカーは、骨代謝異常疾患
の診断、特に破骨細胞の分化・活性化が亢進することに
よって生じた骨代謝異常疾患の検出（罹患の有無や罹患
の程度の診断）に有用である。具体的には、該疾患マー
カーを利用した骨代謝異常疾患の診断は、被験者の骨組
織と正常者の骨組織における配列番号：1〜322のいずれ
かの塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベルの違い
を判定することによって行うことができる。

【００４６】この場合、遺伝子発現レベルの違いには、
発現のある／なしの違いだけでなく、被験者の骨組織と
正常者の骨組織の両者ともに発現がある場合でも、両者
間の発現量の格差が２倍以上、好ましくは３倍以上ある
場合も含まれる。

【００４７】より具体的には、配列番号：1、2、3、4、
5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、1
8、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、3
0、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、4
2、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、5
4、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、6
6、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、7
8、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、9
0、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、1
02、103、104、105、106、107、108、109、110、111、1
12、113、114、115、116、117、118、119、120、121、1
22、123、124、125、126、127、128、129、130、131、1
32、133、134、135、136、137、138、139、140、141、1
42、143、144、145、146、147、148、149、198、199、2
00、201、202、203、204、205、206、207、208、209、2
10、211、212、213、214、215、216、217、218、219、2
20、221、222、223、224、225、226、227、228、229、2
30、231、232、233、234、235、236、237、238、239、2
40、241、242、243、244、245、246、247、248、249、2
50、251、252、253、254、255、256、257、258、259、2
60、261、262、263、264、265、266、267、268、269、2
70、271、272、273、274、275、276、277、278、279、2
80、281、282、283、284、285、286、287、288、289、2
90、291、292、293、294、295、296、297、298、299、3
00、または301のいずれかの塩基配列（配列番号:1-149,
198-301）を有する遺伝子は、破骨細胞の分化・活性化
の亢進が関連した骨代謝異常疾患患者の骨組織で特異的
に発現誘導（発現増大）を示していたので、被験者の骨
組織で特異的に発現しているか、或いは、該発現量が正
常な骨組織の発現量と比べて好ましくは２倍以上、より
好ましくは３倍以上増大していれば、被験者について破
骨細胞の分化・活性化の亢進が関連した骨代謝異常疾患
の罹患が疑われる。この場合の骨代謝異常疾患の検出
（診断）には、上記遺伝子に対応するいずれかの塩基配
列（配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、1
2、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、2
4、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、3
6、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、4
8、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、6
0、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、7
2、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、8
4、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、9
6、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、
107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、
117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、
127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、
137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、
147、148、149、198、199、200、201、202、203、204、
205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、
215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、
225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、
235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、
245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、
255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、
265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、
275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、
285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、
295、296、297、298、299、300、または301のいずれか
の塩基配列（配列番号:1-149,198-301））において、連
続する少なくとも15塩基長を有するポリヌクレオチド／
またはそれに相補的なポリヌクレオチドからなる本発明
の疾患マーカーが有用である。

【００４８】中でも、配列番号1、2、3、4、5、6、7、1
98、199、200、201、または202のいずれかの塩基配列を
有する遺伝子は正常な骨組織に比べて破骨細胞の分化・
活性化の亢進が関連した骨代謝異常疾患患者の骨組織で
10倍以上の発現増大を示していた。従って、上記遺伝子
に対応するいずれかの塩基配列（配列番号：1、2、3、
4、5、6、7、198、199、200、201、または202のいずれ
かの塩基配列）において、連続する少なくとも15塩基長
を有するポリヌクレオチド／またはそれに相補的なポリ
ヌクレオチドからなる本発明の疾患マーカーが特に有用
である。

【００４９】一方、配列番号：150、151、152、153、15
4、155、156、157、158、159、160、161、162、163、16
4、165、166、167、168、169、170、171、172、173、17
4、175、176、177、178、179、180、181、182、183、18
4、185、186、187、188、189、190、191、192、193、19
4、195、196、197、302、303、304、305、306、307、30
8、309、310、311、312、313、314、315、316、317、31
8、319、320、321、または322のいずれかの塩基配列
（配列番号:150-197,302-322）を有する遺伝子は、正常
な骨組織に比して、破骨細胞の分化・活性化の亢進が関
連した骨代謝異常疾患患者の骨組織で特異的に発現減少
を示していたので、被験者の骨組織で発現していない
か、或いは、該発現量が正常な骨組織の発現量と比べて
好ましくは２倍以上、より好ましくは３倍以上減少して
いれば、被験者について破骨細胞の分化・活性化の亢進
が関連した骨代謝異常疾患の罹患が疑われる。この場合
の骨代謝異常疾患の検出（診断）には、上記遺伝子に対
応するいずれかの塩基配列（配列番号：150、151、15
2、153、154、155、156、157、158、159、160、161、16
2、163、164、165、166、167、168、169、170、171、17
2、173、174、175、176、177、178、179、180、181、18
2、183、184、185、186、187、188、189、190、191、19
2、193、194、195、196、197、302、303、304、305、30
6、307、308、309、310、311、312、313、314、315、31
6、317、318、319、320、321、または322のいずれかの
塩基配列（配列番号:150-197,302-322））において、連
続する少なくとも15塩基長を有するポリヌクレオチド／
またはそれに相補的なポリヌクレオチドからなる疾患マ
ーカーが有用である。

【００５０】中でも、配列番号：150、151、152、153、
154、155、156、157、158、159、160、302、303、また
は304の塩基配列を有する遺伝子は、正常な骨組織に比
べて破骨細胞の分化・活性化の亢進が関連した骨代謝異
常疾患患者の骨組織で10倍以上の発現減少を示してい
た。従って、これらの遺伝子に対応するいずれかの塩基
配列（配列番号：150、151、152、153、154、155、15
6、157、158、159、160、302、303、または304のいずれ
かの塩基配列）において連続する少なくとも15塩基を有
するポリヌクレオチド／またはそれに相補的なポリヌク
レオチドからなる疾患マーカーが特に有用である。

【００５１】本発明において骨代謝異常疾患の検出（診
断）は、被験者の生体組織、特に骨組織における配列番
号：1〜322のいずれかの塩基配列を有する遺伝子の少な
くとも１つの発現の有無または発現レベル（発現量）を
評価することによって行われる。検出（診断）の精度や
正確性を高めるためには、上記遺伝子のうち２以上、好
ましくは複数個の遺伝子、より好ましくは上記遺伝子群
の４分の１以上、さらに好ましくは上記遺伝子群の半数
以上の遺伝子について、その発現の有無または発現レベ
ル（発現量）を評価することが望ましい。

【００５２】（1-2）抗体 また本発明は、破骨細胞の分化・活性化の亢進が関連す
る骨代謝異常疾患の疾患マーカーとして配列番号：1、
2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、1
6、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、2
8、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、4
0、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、5
2、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、6
4、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、7
6、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、8
8、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、10
0、101、102、103、104、105、106、107、108、109、11
0、111、112、113、114、115、116、117、118、119、12
0、121、122、123、124、125、126、127、128、129、13
0、131、132、133、134、135、136、137、138、139、14
0、141、142、143、144、145、146、147、148、149、15
0、151、152、153、154、155、156、157、158、159、16
0、161、162、163、164、165、166、167、168、169、17
0、171、172、173、174、175、176、177、178、179、18
0、181、182、183、184、185、186、187、188、189、19
0、191、192、193、194、195、196、197、198、199、20
0、201、202、203、204、205、206、207、208、209、21
0、211、212、213、214、215、216、217、218、219、22
0、221、222、223、224、225、226、227、228、229、23
0、231、232、233、234、235、236、237、238、239、24
0、241、242、243、244、245、246、247、248、249、25
0、251、252、253、254、255、256、257、258、259、26
0、261、262、263、264、265、266、267、268、269、27
0、271、272、273、274、275、276、277、278、279、28
0、281、282、283、284、285、286、287、288、289、29
0、291、292、293、294、295、296、297、298、299、30
0、301、302、303、304、305、306、307、308、309、31
0、311、312、313、314、315、316、317、318、319、32
0、321、又は322のいずれかに記載の塩基配列を有する
遺伝子の発現産物（タンパク質）を特異的に認識するこ
とのできる抗体を提供する。

【００５３】これらのタンパク質としては、具体的には
上記配列番号：1〜322に示されるいずれかの塩基配列を
有する遺伝子によってコードされるタンパク質、または
これらの遺伝子のうち、配列番号：1、10、17、25、2
6、29、43、48、54、55、65、67、80、100、101、104、
105、114、136、150、151、153、154、156、158、162、
163、167、176、181、186、195、または197のいずれか
に記載の塩基配列を有する遺伝子によってコードされる
タンパク質を挙げることができる。なお、後者のタンパ
ク質の具体的な態様としては、配列番号：323、324、32
5、326、327、328、329、330、331、332、333、334、33
5、336、337、338、339、340、341、342、343、344、34
5、346、347、348、349、350、351、352、353、354、ま
たは355で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質が
例示できる。

【００５４】本発明の抗体は、その形態に特に制限はな
く、上記タンパク質を免疫抗原とするポリクローナル抗
体であっても、またそのモノクローナル抗体であっても
よく、さらには当該タンパク質を構成するアミノ酸配列
のうち少なくとも連続する、通常８アミノ酸、好ましく
は１５アミノ酸、より好ましくは２０アミノ酸からなる
ポリペプチドに対して抗原結合性を有する抗体も、本発
明の抗体に含まれる。

【００５５】これらの抗体の製造方法は、すでに周知で
あり、本発明の抗体もこれらの常法に従って製造するこ
とができる（Current protocols in Molecular Biolog
y edit. Ausubel et al. (1987) Publish. John Wiley
and Sons. Section 11.12〜11.13）。具体的には、本発
明の抗体がポリクローナル抗体の場合には、常法に従っ
て大腸菌等で発現し精製した上記タンパク質を用いて、
あるいは常法に従って当該タンパク質の部分アミノ酸配
列を有するオリゴペプチドを合成して、家兎等の非ヒト
動物に免疫し、該免疫動物の血清から常法に従って得る
ことが可能である。一方、モノクローナル抗体の場合に
は、常法に従って大腸菌等で発現し精製した上記タンパ
ク質、あるいはこれらタンパク質の部分アミノ酸配列を
有するオリゴペプチドをマウス等の非ヒト動物に免疫
し、得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞とを細胞融合させて
調製したハイブリドーマ細胞の中から得ることができる
（Current protocols in Molecular Biology edit. Au
subel et al. (1987) Publish. John Wiley and Sons.
Section 11.4〜11.11）。

【００５６】また、抗体の作製に使用されるタンパク質
は、本発明により提供される遺伝子の配列情報（配列番
号：1〜322）に基づいて、ＤＮＡクローニング、各プラ
スミドの構築、宿主へのトランスフェクション、形質転
換体の培養および培養物からのタンパク質の回収の操作
により得ることができる。これらの操作は、当業者に既
知の方法、あるいは文献記載の方法（Molecular Clonin
g, T.Maniatis et al., CSH Laboratory (1983), DNA C
loning, DM. Glover, IRL PRESS (1985)）などに準じて
行うことができる。具体的には、配列番号：1〜322のい
ずれかの塩基配列を有する遺伝子、より具体的には、例
えば配列番号：1、10、17、25、26、29、43、48、54、5
5、65、67、80、100、101、104、105、114、136、150、
151、153、154、156、158、162、163、167、176、181、
186、195、または197のいずれかの塩基配列を有する遺
伝子（配列番号：323、324、325、326、327、328、32
9、330、331、332、333、334、335、336、337、338、33
9、340、341、342、343、344、345、346、347、348、34
9、350、351、352、353、354、または355のいずれかの
アミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子）
が所望の宿主細胞中で発現できる組み換えDNA（発現ベ
クター）を作製し、これを宿主細胞に導入して形質転換
し、該形質転換体を培養して、得られる培養物から、目
的タンパク質を回収することによって実施することがで
きる。また、これらのタンパク質は、本発明により提供
される遺伝子情報（配列番号：1〜322）から常法によっ
て得られるアミノ酸配列や本発明により提供されるアミ
ノ酸配列情報（例えば配列番号323、324、325、326、32
7、328、329、330、331、332、333、334、335、336、33
7、338、339、340、341、342、343、344、345、346、34
7、348、349、350、351、352、353、354、または355）
に従って、一般的な化学合成法（ペプチド合成）によっ
て製造することもできる。

【００５７】なお、本発明のタンパク質には、配列番
号：1〜322のいずれかの塩基配列を有する遺伝子により
コードされるタンパク質、または配列番号：1、10、1
7、25、26、29、43、48、54、55、65、67、80、100、10
1、104、105、114、136、150、151、153、154、156、15
8、162、163、167、176、181、186、195、若しくは197
に具体的に例示されるいずれかの塩基配列を有する遺伝
子によりコードされるタンパク質（配列番号：323、32
4、325、326、327、328、329、330、331、332、333、33
4、335、336、337、338、339、340、341、342、343、34
4、345、346、347、348、349、350、351、352、353、35
4、または355のいずれかのアミノ酸配列を有するタンパ
ク質）のみならず、これらの相同物も包含される。該相
同物としては、上記遺伝子によってコードされるタンパ
ク質のアミノ酸配列、例えば具体的には上記配列番号：
323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、
333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、
343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、
353、354、または355で示されるアミノ酸配列におい
て、１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換または付加
されたアミノ酸配列からなり、且つ、それぞれのタンパ
ク質の公知の機能と同等の生物学的機能を有するか、及
び／または免疫学的活性において同等の活性を有するタ
ンパク質を挙げることができる。

【００５８】なお、ここで配列番号：1〜322のいずれか
の塩基配列を有する遺伝子によりコードされるタンパク
質、または配列番号：1、10、17、25、26、29、43、4
8、54、55、65、67、80、100、101、104、105、114、13
6、150、151、153、154、156、158、162、163、167、17
6、181、186、195、若しくは197に具体的に例示される
いずれかの塩基配列を有する遺伝子によりコードされる
タンパク質（配列番号：323、324、325、326、327、32
8、329、330、331、332、333、334、335、336、337、33
8、339、340、341、342、343、344、345、346、347、34
8、349、350、351、352、353、354、または355のいずれ
かのアミノ酸配列を有するタンパク質）の公知の機能と
同等の生物学的機能を有するタンパク質としては、各々
対応するタンパク質と生化学的または薬理学的機能にお
いて同等の機能を有するタンパク質を挙げることができ
る。また配列番号：1〜322のいずれかの塩基配列を有す
る遺伝子によりコードされるタンパク質、または配列番
号：1、10、17、25、26、29、43、48、54、55、65、6
7、80、100、101、104、105、114、136、150、151、15
3、154、156、158、162、163、167、176、181、186、19
5、若しくは197に具体的に例示されるいずれかの塩基配
列を有する遺伝子によりコードされるタンパク質（配列
番号：323、324、325、326、327、328、329、330、33
1、332、333、334、335、336、337、338、339、340、34
1、342、343、344、345、346、347、348、349、350、35
1、352、353、354、または355のいずれかのアミノ酸配
列を有するタンパク質）と免疫学的活性において同等の
活性を有するタンパク質としては、適当な動物あるいは
その細胞において特定の免疫反応を誘発し、かつ各対応
するタンパク質に対する抗体と特異的に結合する能力を
有するタンパク質を挙げることができる。

【００５９】なお、タンパク質におけるアミノ酸の変異
数や変異部位は、その生物学的機能及び／または免疫学
的活性が保持される限り制限はない。生物学的機能や免
疫学的活性を喪失することなくアミノ酸残基が、どのよ
うに、何個置換、挿入あるいは欠失されればよいかを決
定する指標は、当業者に周知のコンピュータプログラ
ム、例えばDNA Star softwareを用いて見出すことがで
きる。例えば変異数は、典型的には、全アミノ酸の１０
％以内であり、好ましくは全アミノ酸の５％以内であ
り、さらに好ましくは全アミノ酸の１％以内である。ま
た置換されるアミノ酸は、置換後に得られるタンパク質
が、置換前のタンパク質（配列番号：1〜322のいずれか
の塩基配列を有する遺伝子によりコードされるタンパク
質、または配列番号：1、10、17、25、26、29、43、4
8、54、55、65、67、80、100、101、104、105、114、13
6、150、151、153、154、156、158、162、163、167、17
6、181、186、195、若しくは197に具体的に例示される
いずれかの塩基配列を有する遺伝子によりコードされる
タンパク質（配列番号：323、324、325、326、327、32
8、329、330、331、332、333、334、335、336、337、33
8、339、340、341、342、343、344、345、346、347、34
8、349、350、351、352、353、354、または355のいずれ
かのアミノ酸配列を有するタンパク質）の生物学的機能
及び／または免疫学的活性を保持している限り、特に制
限されないが、タンパク質の構造保持の観点から、残基
の極性、電荷、可溶性、疎水性、親水性並びに両親媒性
など、置換前のアミノ酸と似た性質を有するアミノ酸で
あることが好ましい。例えば、Ala、Val、Leu、Ile、Pr
o、Met、Phe及びTrpは互いに非極性アミノ酸に分類され
るアミノ酸であり、Gly、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn及び
Glnは互いに非荷電性アミノ酸に分類されるアミノ酸で
あり、Asp及びGluは互いに酸性アミノ酸に分類されるア
ミノ酸であり、またLys、Arg及びHisは互いに塩基性ア
ミノ酸に分類されるアミノ酸である。ゆえに、これらを
指標として同群に属するアミノ酸を適宜選択することが
できる。

【００６０】また本発明の抗体は、配列番号：1〜322の
いずれかの塩基配列を有する遺伝子によりコードされる
タンパク質、具体的には例えば配列番号：1、10、17、2
5、26、29、43、48、54、55、65、67、80、100、101、1
04、105、114、136、150、151、153、154、156、158、1
62、163、167、176、181、186、195、または197のいず
れかの塩基配列を有する遺伝子によりコードされるタン
パク質（配列番号：323、324、325、326、327、328、32
9、330、331、332、333、334、335、336、337、338、33
9、340、341、342、343、344、345、346、347、348、34
9、350、351、352、353、354、または355のいずれかの
アミノ酸配列を有するタンパク質）の部分アミノ酸配列
を有するオリゴペプチドを用いて調製されるものであっ
てよい。かかる抗体誘導のために用いられるオリゴペプ
チドは、機能的な生物活性を有することは要しないが、
各々対応する上記のタンパク質と同様な免疫原特性を有
するものであることが望ましい。好ましくはかかる特性
を有し、配列番号：1〜322のいずれかの塩基配列を有す
る遺伝子によりコードされるタンパク質のアミノ酸配
列、具体的には例えば配列番号：1、10、17、25、26、2
9、43、48、54、55、65、67、80、100、101、104、10
5、114、136、150、151、153、154、156、158、162、16
3、167、176、181、186、195、または197のいずれかの
塩基配列を有する遺伝子によりコードされるタンパク質
のアミノ酸配列（配列番号：323、324、325、326、32
7、328、329、330、331、332、333、334、335、336、33
7、338、339、340、341、342、343、344、345、346、34
7、348、349、350、351、352、353、354、または355の
いずれに示されるアミノ酸配列）において少なくとも連
続する、通常８アミノ酸、好ましくは１５アミノ酸、よ
り好ましくは２０アミノ酸からなるポリペプチドを例示
することができる。

【００６１】かかるポリペプチドに対する抗体の生成
は、宿主に応じて種々のアジュバントを用いて免疫学的
反応を高めることによって行うこともできる。限定はさ
れないが、そのようなアジュバントには、フロイントア
ジュバント、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲ
ル、並びにリゾレシチン、プルロニックポリオル、ポリ
アニオン、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘ
モシアニン及びジニトロフェノールのような表面活性物
質、ＢＣＧ（カルメット−ゲラン桿菌）やコリネバクテ
リウム-パルヴムなどのヒトアジュバントなどがある。

【００６２】本発明の抗体は、配列番号：1〜322のいず
れかの塩基配列を有する遺伝子によりコードされるタン
パク質、または配列番号：1、10、17、25、26、29、4
3、48、54、55、65、67、80、100、101、104、105、11
4、136、150、151、153、154、156、158、162、163、16
7、176、181、186、195、若しくは197に具体的に例示さ
れるいずれかの塩基配列を有する遺伝子によりコードさ
れるタンパク質（配列番号：323、324、325、326、32
7、328、329、330、331、332、333、334、335、336、33
7、338、339、340、341、342、343、344、345、346、34
7、348、349、350、351、352、353、354、または355の
いずれかのアミノ酸配列を有するタンパク質）に特異的
に結合する性質を有することから、該抗体を利用するこ
とによって、被験者の組織内に発現した上記タンパク質
を特異的に検出することができる。すなわち、当該抗体
は被験者の組織内における上記タンパク発現の有無を検
出するためのプローブとして有用である。

【００６３】具体的には、患者の骨組織の一部をバイオ
プシ等で採取し、そこから常法に従ってタンパク質を調
製して、例えばウェスタンブロット法、ELISA法など公
知の検出方法において、上記抗体を常法に従ってプロー
ブとして使用することによって上記タンパク質を検出す
ることができる。

【００６４】破骨細胞の分化・活性化の亢進が関連した
骨代謝異常疾患の診断に際しては、被験者の骨組織にお
ける、配列番号：1〜322のいずれかの塩基配列を有する
遺伝子によりコードされるタンパク質、または配列番
号：1、10、17、25、26、29、43、48、54、55、65、6
7、80、100、101、104、105、114、136、150、151、15
3、154、156、158、162、163、167、176、181、186、19
5、若しくは197に具体的に例示されるいずれかの塩基配
列を有する遺伝子よりコードされるタンパク質（配列番
号：323、324、325、326、327、328、329、330、331、3
32、333、334、335、336、337、338、339、340、341、3
42、343、344、345、346、347、348、349、350、351、3
52、353、354、または355のいずれかのアミノ酸配列を
有するタンパク質）のいずれか少なくとも１つと正常な
骨組織における対応のタンパク質との量の違いを判定す
ればよい。この場合、タンパク質量の違いには、タンパ
ク質のある／なし、あるいはタンパク量の違いが２倍以
上、好ましくは３倍以上ある場合が含まれる。

【００６５】例えば配列番号：1-149,198-301に示され
る塩基配列を有する遺伝子、より具体的には配列番号：
1、10、17、25、26、29、43、48、54、55、65、67、8
0、100、101、104、105、114、または136に例示される
塩基配列を有する遺伝子は破骨細胞の分化・活性化の亢
進が関連した骨代謝異常疾患患者の骨組織で特異的に発
現誘導（増大）を示していたので、被験者の骨組織にお
ける上記遺伝子の発現産物（上記遺伝子によってコード
されるタンパク質、具体的には配列番号：323、324、32
5、326、327、328、329、330、331、332、333、334、33
5、336、337、338、339、340、または341で示されるア
ミノ酸配列を有するタンパク質）の量が正常な骨組織の
発現産物量と比べて２倍以上、好ましくは３倍以上多い
ことが判定されれば、破骨細胞の分化・活性化の亢進が
関連した骨代謝異常疾患の罹患が疑われる。この場合の
骨代謝異常疾患の検出（診断）には、各々に対応する配
列番号：1-149,198-301に示される塩基配列を有する遺
伝子がコードするタンパク質、より具体的には配列番
号：1、10、17、25、26、29、43、48、 54、55、65、6
7、80、100、101、104、105、114または136に例示され
る塩基配列を有する遺伝子がコードするタンパク質（配
列番号：323、324、325、326、327、328、329、330、33
1、332、333、334、335、336、337、338、339、340、ま
たは341で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質）
を特異的に認識する抗体を有する疾患マーカーが有用で
ある。中でも配列番号：1、2、3、4、5、6、7、または
配列番号：198、199、200、201、202に示される塩基配
列を有する遺伝子は破骨細胞の分化・活性化の亢進が関
連した骨代謝異常疾患患者の骨組織で10倍以上の発現誘
導（増大）を示していた。このため、配列番号：1、2、
3、4、5、6、7、または配列番号：198、199、200、20
1、202に示されるいずれかの塩基配列を有する遺伝子に
よってコードされるタンパク質、具体的には例えば配列
番号：323で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質
を特異的に認識する抗体を有する疾患マーカーが骨代謝
異常疾患の検出（診断）に有用と思われる。

【００６６】一方、：配列番号：150-197,302-322に示
される塩基配列を有する遺伝子は破骨細胞の分化・活性
化の亢進が関連した骨代謝異常疾患患者の骨組織で特異
的に発現抑制（減少）を示していたので、被験者の骨組
織における該遺伝子の発現産物（上記遺伝子によってコ
ードされるタンパク質、具体的には配列番号：342、34
3、344、345、346、347、348、349、350、351、352、35
3、354、または355によって例示されるアミノ酸配列を
有するタンパク質）の量が正常な骨組織の発現産物量と
比べて２倍以上、好ましくは３倍以上少ないことが判定
されれば、破骨細胞の分化・活性化の亢進が関連した骨
代謝異常疾患の罹患が疑われる。この場合の骨代謝異常
疾患の検出（診断）には、各々対応する配列番号：150-
197,302-322に示される塩基配列を有する遺伝子がコー
ドするタンパク質、具体的には配列番号：150、151、15
3、154、156、158、162、163、167、176、181、186、19
5、または197に例示される塩基配列を有する遺伝子がコ
ードするタンパク質（配列番号：342、343、344、345、
346、347、348、349、350、351、352、353、354、また
は355で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質）を
特異的に認識する抗体を有する本発明の疾患マーカーが
有用である。中でも配列番号：150、151、152、153、15
4、155、156、157、158、159、160、または配列番号：3
02、303、304に示される塩基配列を有する遺伝子は破骨
細胞の分化・活性化の亢進が関連した骨代謝異常疾患患
者の骨組織で10倍以上の発現抑制（減少）を示してい
た。このため、特に上記遺伝子によってコードされるア
ミノ酸配列を有するタンパク質、具体的には配列番号：
342、343、344、345、346、または347によって例示され
るアミノ酸配列を有するタンパク質を特異的に認識する
抗体を有する疾患マーカーが骨代謝異常疾患の検出（診
断）に有用と思われる。

【００６７】（２）骨代謝異常疾患の検出方法（診断方
法） 本発明は、前述する本発明の骨代謝異常疾患の疾患マー
カーを利用した骨代謝異常疾患の診断、特に破骨細胞の
分化・活性化の亢進に関与した骨代謝異常疾患の検出方
法（診断方法）を提供するものである。

【００６８】具体的には、本発明の検出方法は、被験者
の骨組織の一部をバイオプシなどで採取し、そこに含ま
れる骨代謝異常疾患に関連する配列番号：１〜322のい
ずれかの塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベル、
またはこれらの遺伝子に由来するタンパク質を検出し、
その発現量またはそのタンパク質量を測定することによ
り、骨代謝異常疾患の罹患の有無またはその程度を検出
（診断）するものである。

【００６９】本発明の診断方法は次の(a)、(b)及び(c)
の工程を含むものである： (a) 被験者の生体試料と本発明の疾患マーカーを接触
させる工程、(b) 生体試料中の配列番号：１〜322の
いずれかの塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベ
ル、またはこれらいずれかの遺伝子によってコードされ
るタンパク質の量、具体的には配列番号323、324、32
5、326、327、328、329、330、331、332、333、334、33
5、336、337、338、339、340、341、342、343、344、34
5、346、347、348、349、350、351、352、353、354、ま
たは355で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質の
量を、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
(c) (b)の結果をもとに、破骨細胞の分化・活性化の
亢進に関連した骨代謝異常疾患の罹患を判断する工程。

【００７０】ここで用いられる生体試料は、被験者の骨
組織、該組織から調製されるRNA若しくはそれからさら
に調製されるポリヌクレオチド、または上記組織から調
製されるタンパク質である。かかるRNA、ポリヌクレオ
チドまたはタンパク質は、被験者の骨組織の一部をバイ
オプシ等で採取し、そこから常法に従って調製すること
ができる。

【００７１】本発明の診断方法は、測定対象として用い
る生体試料の種類に応じて、具体的には下記のようにし
て実施される。

【００７２】(2-1) 測定対象の生体試料としてRNAを利
用する場合 診断に用いる生体試料としてRNAを利用する場合は、本
発明の検出方法（診断方法）は該RNA中の配列番号：1〜
322のいずれかの塩基配列を有する遺伝子の発現レベル
を検出し、測定することによって実施される。

【００７３】この場合、本発明の検出方法は次の(a)、
(b)及び(c)の工程を含む： (a) 被験者の生体試料と本発明の疾患マーカーとを接
触させる工程、(b) 上記工程によって本発明の疾患マ
ーカーに特異的に結合した生体試料由来のRNAまたはそ
れから転写された相補的なポリヌクレオチドを上記疾患
マーカーを指標として測定する工程、及び(c) (b)の結
果をもとに、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した
骨代謝異常疾患の罹患を判断する工程。

【００７４】本発明の骨代謝異常疾患の検出方法（診断
方法）は、特に測定対象の生体試料としてRNAを利用し
て、該RNA中の配列番号：1〜322のいずれかに記載の塩
基配列を有する遺伝子の発現レベルを検出し、測定する
ことによって実施される。具体的には、上記検出する遺
伝子の塩基配列に応じて、前述する本発明の疾患マーカ
ー（配列番号：1〜322のいずれかの塩基配列において連
続する少なくとも15塩基を有するポリヌクレオチド及び
／又はその相補的なポリヌクレオチド）をプライマーま
たはプローブとして用いて、ノーザンブロット法、ＲＴ
-ＰＣＲ法、ＤＮＡチップ解析法、in situハイブリダイ
ゼーション解析法などの公知の方法を行うことにより実
施できる。

【００７５】ノーザンブロット法を利用する場合は、本
発明の上記疾患マーカーをプローブとして用いることに
よって、RNA中の配列番号：1〜322のいずれかの塩基配
列を有する遺伝子の発現の有無やその発現レベルを検
出、測定することができる。具体的には、本発明の疾患
マーカー（相補鎖）を放射性同位元素（32P、33Pなど：
RI）や蛍光物質などで標識し、それを、常法に従ってナ
イロンメンブレン等にトランスファーした被験者の生体
組織由来のRNAとハイブリダイズさせた後、形成された
疾患マーカー（DNA）とRNAとの二重鎖を、疾患マーカー
の標識物（RI若しくは蛍光物質）に由来するシグナルを
放射線検出器（BAS-1800II、富士フィルム社製）または
蛍光検出器で検出、測定する方法を例示することができ
る。また、AlkPhos Direct Labelling and Detection S
ystem (Amersham PharamciaBiotech社製)を用いて、該
プロトコールに従って疾患マーカー（プローブDNA）を
標識し、被験者の生体組織由来のRNAとハイブリダイズ
させた後、疾患マーカーの標識物に由来するシグナルを
マルチバイオイメージャーSTORM860（Amersham Pharmac
ia Biotech社製）で検出、測定する方法を使用すること
もできる。

【００７６】RT-PCR法を利用する場合は、本発明の上記
疾患マーカーをプライマーとして用いることによって、
RNA中の配列番号：1〜322のいずれかの塩基配列を有す
る遺伝子の発現の有無や発現レベルを検出、測定するこ
とができる。具体的には、被験者の生体組織由来のRNA
から常法に従ってcDNAを調製して、これを鋳型として標
的の遺伝子の領域が増幅できるように、本発明の疾患マ
ーカーから調製した一対のプライマー（上記ｃＤＮＡ
（−鎖）に結合する正鎖、＋鎖に結合する逆鎖）をこれ
とハイブリダイズさせて、常法に従ってＰＣＲ法を行
い、得られた増幅二本鎖ＤＮＡを検出する方法を例示す
ることができる。なお、増幅された二本鎖ＤＮＡの検出
は、上記ＰＣＲを予めRIや蛍光物質で標識しておいたプ
ライマーを用いて行うことによって産生される標識二本
鎖ＤＮＡを検出する方法、産生された二本鎖ＤＮＡを常
法に従ってナイロンメンブレン等にトランスファーさせ
て、標識した疾患マーカーをプローブとして使用してこ
れとハイブリダイズさせて検出する方法などを用いるこ
とができる。なお、生成された標識二本鎖ＤＮＡ産物は
アジレント2100バイオアナライザ（横河アナリティカル
システムズ社製）などで測定することができる。また、
SYBR Green RT-PCR Reagents (Applied Biosystems 社
製)で該プロトコールに従ってRT-PCR反応液を調製し、A
BI PRIME 7700 Sequence Detection System (Applied B
iosystems 社製)で反応させて、該反応物を検出するこ
ともできる。

【００７７】また、ＤＮＡチップ解析を利用する場合
は、本発明の上記疾患マーカーをＤＮＡプローブ（１本
鎖または２本鎖）として貼り付けたＤＮＡチップを用意
し、これに被験者の生体組織由来のRNAから常法によっ
て調製されたcRNAとハイブリダイズさせて、形成された
DNAとcRNAとの二本鎖を、本発明の疾患マーカーから調
製される標識プローブと結合させて検出する方法を挙げ
ることができる。また、上記ＤＮＡチップとして、配列
番号：1〜322の塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レ
ベルの検出、測定が可能なＤＮＡチップを用いることも
できる。かかる遺伝子の発現レベルを検出、測定するこ
とができるＤＮＡチップとしては、Affymetrix社のGene
Chip Human Genome U95 A, B,C, D, Eを挙げることが
できる。かかるＤＮＡチップを用いた、被験者RNA中の
配列番号：1〜322のいずれかの塩基配列を有する遺伝子
の遺伝子発現レベルの検出、測定については、実施例に
おいて詳細に説明する。

【００７８】(2-2) 測定対象物としてタンパク質を用い
る場合 測定対象物としてタンパク質を用いる場合は、本発明の
検出方法（診断方法）は生体試料中に存在する、配列番
号：1〜322のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子
によってコードされるタンパク質、または配列番号：
1、10、17、25、26、29、43、48、54、55、65、67、8
0、100、101、104、105、114、136、150、151、153、15
4、156、158、162、163、167、176、181、186、195、ま
たは197に具体的に例示されるいずれかに記載の塩基配
列を有する遺伝子によってコードされるタンパク質（配
列番号323、324、325、326、327、328、329、330、33
1、332、333、334、335、336、337、338、339、340、34
1、342、343、344、345、346、347、348、349、350、35
1、352、353、354、または355で示されるアミノ酸配列
を有するタンパク質）を検出し、その量を測定すること
によって実施される。具体的には、配列番号：1〜322の
いずれかの塩基配列を有する遺伝子よってコードされる
タンパク質、または配列番号：1、10、17、25、26、2
9、43、48、54、55、65、67、80、100、101、104、10
5、114、136、150、151、153、154、156、158、162、16
3、167、176、181、186、195、または197に具体的に例
示されるいずれかの塩基配列を有する遺伝子によってコ
ードされるタンパク質（配列番号323、324、325、326、
327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、
337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、
347、348、349、350、351、352、353、354、または355
で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質）を認識す
る抗体を疾患マーカーとして用いてウエスタンブロット
法などの公知方法で、上記タンパク質を検出、定量する
方法を挙げることができる。ウエスタンブロット法は、
一次抗体として上記の疾患マーカーを用いた後、二次抗
体として125Ｉなどの放射性同位元素や蛍光物質で標識
した一次抗体に結合する抗体を用いて、標識し、該放射
性同位元素若しくは蛍光物質由来のシグナルを放射線測
定器（BAS-1800II：富士フィルム社製など）若しくは蛍
光検出器で検出し、測定することによって実施できる。
また、一次抗体として上記疾患マーカーを用いた後、EC
L Plus Western Blotting Detction System (Amersham
Pharmacia Biotech 社製)を用いて、該プロトコールに
従って検出し、マルチバイオイメージャーSTORM860(Ame
rsham Pharmacia Biotech 社製)で測定することもでき
る。

【００７９】骨代謝異常疾患の診断は、具体的には、被
験者の骨組織における配列番号：１〜322のいずれかに
記載の塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベル、ま
たは上記配列番号に示される塩基配列を有する遺伝子の
発現産物であるタンパク質、具体的には配列番号：32
3、324、325、326、327、328、329、330、331、332、33
3、334、335、336、337、338、339、340、341、342、34
3、344、345、346、347、348、349、350、351、352、35
3、354、または355で示されるアミノ酸配列を有するタ
ンパク質の量を正常な骨組織の当該遺伝子発現レベルま
たは当該タンパク質の量と比較し、両者の違いを判定す
ることによって行うことができる。

【００８０】この場合、正常な骨組織から採取調製した
生体試料（RNAまたはタンパク質）が必要であるが、こ
れらは骨代謝異常疾患に罹患していない人の骨組織をバ
イオプシ等で採取することによって取得することができ
る。なお、ここでいう「骨代謝異常疾患に罹患していな
い人」とは、少なくとも骨代謝異常疾患の自覚症状がな
く、好ましくは他の検査方法、例えばDXA法：Dual ener
gy X-ray absorptiometry 法により検査の結果、骨代謝
異常疾患でないと診断された人をいう。なお、当該「骨
代謝異常疾患に罹患していない人」を以下、本明細書で
は単に正常者という場合もある。

【００８１】被験者の骨組織と正常な骨組織（骨代謝異
常疾患に罹患していない人の骨組織）との遺伝子発現レ
ベルまたはタンパク質の量の比較は、被験者の生体試料
と正常者の生体試料を対象とした測定を並行して行うこ
とで実施できる。並行して行なわない場合は、複数（少
なくとも２つ、好ましくは３以上、より好ましくは５以
上）の正常な骨組織を用いて均一な測定条件で測定して
得られた上記遺伝子の遺伝子発現レベル、若しくはこれ
らの遺伝子の発現産物であるタンパク質の量の平均値ま
たは統計的中間値を、正常者の遺伝子発現レベル若しく
はタンパク質の量として、比較に用いることができる。

【００８２】被験者が、破骨細胞の分化・活性化の亢進
に関連した骨代謝異常疾患であるかどうかの判断は、該
被験者の骨組織における配列番号：1〜322のいずれかに
記載の塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベル、ま
たは上記配列番号に示される塩基配列を有する遺伝子の
発現産物であるタンパク質、例えば具体的には配列番
号：323、324、325、326、327、328、329、330、331、3
32、333、334、335、336、337、338、339、340、341、3
42、343、344、345、346、347、348、349、350、351、3
52、353、354、または355で示されるアミノ酸配列を有
するタンパク質の量が、正常者のそれらと比較して２倍
以上、好ましくは３倍以上の変動があるか（多いかまた
は少ないか）否かを指標として行うことができる。具体
的には、被験者において、上記遺伝子のうち配列番号：
1-149,198-301のいずれかの塩基配列を有する遺伝子の
遺伝子発現レベル、または上記配列番号に示される塩基
配列を有する遺伝子の発現産物、例えば配列番号323、3
24、325、326、327、328、329、330、331、332、333、3
34、335、336、337、338、339、340、または341で示さ
れるアミノ酸配列を有するタンパク質の量が、正常者の
上記に対応する遺伝子の遺伝子発現レベルまたはその発
現産物の量に比べて多い場合、または被験者において、
前記遺伝子のうち配列番号：150-197,302-322のいずれ
かの塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベル、また
は上記配列番号に示される塩基配列を有する遺伝子の発
現産物、例えば具体的には配列番号：342、343、344、3
45、346、347、348、349、350、351、352、353、354、
または355で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質
の量が、正常者のそれらに対応する遺伝子の遺伝子発現
レベルまたはその発現産物の量に比べて少ない場合に
は、該被験者について破骨細胞の分化・活性化の亢進に
関連した骨代謝異常疾患が疑われる。

【００８３】なお、上記方法のうち、(2-1)測定対象の
生体試料としてRNAを利用して骨代謝異常疾患を検出
（診断）する場合、すなわち遺伝子の発現の有無または
遺伝子発現レベル（発現量）から骨代謝異常疾患を検出
（診断）する場合は、検出（診断）の精度や正確性を高
めるために、配列番号：1〜322に示される遺伝子のうち
２以上、好ましくは複数個の遺伝子、より好ましくは上
記遺伝子群の４分の１以上、さらに好ましくは半数以上
の遺伝子について、発現の有無または発現のレベル（発
現量）を評価し、その結果から破骨細胞の分化・活性化
の亢進に関連する骨代謝異常疾患を検出（診断）するこ
とが望ましい。複数個の遺伝子について評価する場合に
は、個々の遺伝子での評価をスコア化し、総合的に骨代
謝異常疾患を診断することが可能である。例えば、上記
の遺伝子の中から任意の10個の遺伝子について評価を行
い、うち９個以上の遺伝子について上記基準に基づいて
破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連する骨代謝異常疾
患の病態が疑われると評価される場合は、該疾患である
可能性が高いと診断できる。なお、この場合、評価する
遺伝子数、スコアあるいは診断基準は限定されない。

【００８４】（３）候補薬のスクリーニング方法 本発明は、配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、9、1
0、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、2
2、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、3
4、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、4
6、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、5
8、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、7
0、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、8
2、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、9
4、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、10
5、106、107、108、109、110、111、112、113、114、11
5、116、117、118、119、120、121、122、123、124、12
5、126、127、128、129、130、131、132、133、134、13
5、136、137、138、139、140、141、142、143、144、14
5、146、147、148、149、150、151、152、153、154、15
5、156、157、158、159、160、161、162、163、164、16
5、166、167、168、169、170、171、172、173、174、17
5、176、177、178、179、180、181、182、183、184、18
5、186、187、188、189、190、191、192、193、194、19
5、196、197、198、199、200、201、202、203、204、20
5、206、207、208、209、210、211、212、213、214、21
5、216、217、218、219、220、221、222、223、224、22
5、226、227、228、229、230、231、232、233、234、23
5、236、237、238、239、240、241、242、243、244、24
5、246、247、248、249、250、251、252、253、254、25
5、256、257、258、259、260、261、262、263、264、26
5、266、267、268、269、270、271、272、273、274、27
5、276、277、278、279、280、281、282、283、284、28
5、286、287、288、289、290、291、292、293、294、29
5、296、297、298、299、300、301、302、303、304、30
5、306、307、308、309、310、311、312、313、314、31
5、316、317、318、319、320、321、又は322のいずれか
に記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を制御する物質
をスクリーニングする方法を提供する。

【００８５】本発明のスクリーニング方法は次の工程
(a)、(b)及び(c)を含む： (a) 被験物質と、配列番号：1〜322のいずれかの塩基
配列を有する遺伝子を発現可能な細胞とを接触させる工
程、(b) 被験物質を接触させた細胞について配列番号：
1〜322のいずれかの塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発
現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照
細胞の上記対応する遺伝子の発現量と比較する工程、
(c) 上記の比較結果に基づいて、配列番号：1〜322のい
ずれかの塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現量を変動
させる被験物質を選択する工程。

【００８６】かかるスクリーニングに用いられる細胞と
しては配列番号：1〜322のいずれかの塩基配列を有する
遺伝子を発現する細胞であって、かつ破骨細胞への分化
が可能である、破骨細胞前駆細胞を挙げることができ
る。破骨細胞への分化が可能な破骨細胞前駆細胞として
は、具体的には、脾臓や骨髄から取得される細胞や、マ
ウスRAW264細胞（RIKEN Cell Bank; http://www.rtc.ri
ken.go.jp/CELL/HTML/RIKEN Cell Bank. Htmlから入手
可能）などを挙げることができる。なお、マウスRAW264
細胞は、分化誘導物質であるODF（osteoclast differen
tiation factor）の添加で破骨細胞に分化することが知
られている細胞である（Biochem.Biophys.Res. Commun.
282, 278-283 (2001)）。好ましくはRAW264細胞であ
る。さらに本発明のスクリーニングに用いられる細胞の
範疇には、細胞の集合体である組織も含まれる。

【００８７】候補物質となりえるものとしては、制限さ
れないが、核酸、ペプチド、タンパク質、有機化合物、
無機化合物などであり、スクリーニングは、具体的には
これらの候補物質となり得る被験物質を含む試料（被験
試料）を上記組織／または細胞と接触させて行うことが
できる。かかる被験試料としては細胞抽出液、遺伝子ラ
イブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチ
ド、天然化合物などが挙げられるが、これに制限されな
い。

【００８８】また、スクリーニングに際して、被験物質
と細胞とを接触させる条件は、特に制限されないが、該
細胞が死なないように、その培養条件（温度、ｐＨ、培
地組成など）を大きく変化させない条件を採用すること
が好ましい。

【００８９】実施例に示すように、骨粗鬆症といった骨
代謝異常疾患に罹患した患者の骨組織には、特異的に破
骨細胞の分化・活性化の亢進が見られるとともに、配列
番号：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、1
4、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、2
6、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、3
8、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、5
0、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、6
2、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、7
4、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、8
6、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、9
8、99、100、101、102、103、104、105、106、107、10
8、109、110、111、112、113、114、115、116、117、11
8、119、120、121、122、123、124、125、126、127、12
8、129、130、131、132、133、134、135、136、137、13
8、139、140、141、142、143、144、145、146、147、14
8、149、198、199、200、201、202、203、204、205、20
6、207、208、209、210、211、212、213、214、215、21
6、217、218、219、220、221、222、223、224、225、22
6、227、228、229、230、231、232、233、234、235、23
6、237、238、239、240、241、242、243、244、245、24
6、247、248、249、250、251、252、253、254、255、25
6、257、258、259、260、261、262、263、264、265、26
6、267、268、269、270、271、272、273、274、275、27
6、277、278、279、280、281、282、283、284、285、28
6、287、288、289、290、291、292、293、294、295、29
6、297、298、299、300、または301のいずれの塩基配列
を有する遺伝子の発現が誘導（増大）している。この知
見から、配列番号：1-149,198-301のいずれかの塩基配
列を有する遺伝子の発現（誘導、増大）は、破骨細胞の
分化・活性化の亢進に関連する骨代謝異常疾患と関連し
ていると考えられる。このため、本発明には、配列番
号：1-149,198-301のいずれかの塩基配列を有する遺伝
子の発現を抑制する物質のスクリーニング方法が包含さ
れる。なお、当該方法は： (a) 被験物質と、配列番号：1-149,198-301のいずれか
の塩基配列を有する遺伝子を発現可能な細胞とを接触さ
せる工程、(b) 被験物質を接触させた細胞について、配
列番号：1-149,198-301のいずれかの塩基配列を有する
遺伝子の遺伝子発現量を測定し、該発現量を被験物質を
接触させない対照細胞の上記対応する遺伝子の発現量と
比較する工程、及び(c) 上記の比較結果に基づいて、配
列番号：1-149,198-301のいずれかの塩基配列を有する
遺伝子の遺伝子発現を抑制する被験物質を選択する工
程、が含まれる。

【００９０】また、実施例に示すように、骨粗鬆症とい
った骨代謝異常疾患に罹患した患者の骨組織には、特異
的に破骨細胞の分化・活性化の亢進が見られるととも
に、配列番号：150、151、152、153、154、155、156、1
57、158、159、160、161、162、163、164、165、166、1
67、168、169、170、171、172、173、174、175、176、1
77、178、179、180、181、182、183、184、185、186、1
87、188、189、190、191、192、193、194、195、196、1
97、302、303、304、305、306、307、308、309、310、3
11、312、313、314、315、316、317、318、319、320、3
21、または322のいずれかの塩基配列を有する遺伝子の
発現の抑制・減少が認められる。この知見から、配列番
号：150-197,302-322のいずれかの塩基配列を有する遺
伝子の発現の抑制ないしは減少は、破骨細胞の分化・活
性化の亢進に関連する骨代謝異常疾患と関連していると
考えられる。このため、本発明には、配列番号：150-19
7,302-322のいずれかの塩基配列を有する遺伝子の発現
を誘導もしくは増大させる物質のスクリーニング方法が
包含される。なお、当該方法は： (a) 被験物質と、配列番号：150-197,302-322のいずれ
かの塩基配列を有する遺伝子を発現可能な細胞とを接触
させる工程、(b) 被験物質を接触させた細胞について、
配列番号：150-197,302-322のいずれかの塩基配列を有
する遺伝子の遺伝子発現量を測定し、該発現量を被験物
質を接触させない対照細胞の上記対応する遺伝子の発現
量と比較する工程、及び(c) 上記の比較結果に基づい
て、配列番号：150-197,302-322のいずれかの塩基配列
を有する遺伝子の遺伝子発現を誘導（増大）させる被験
物質を選択する工程、が含まれる。

【００９１】すなわち、本発明のスクリーニング方法
は、配列番号：1-149,198-301のいずれかの塩基配列を
有する遺伝子（遺伝子Ｉ）の発現誘導・増大、及び／又
は、配列番号：150-197,302-322のいずれかの塩基配列
を有する遺伝子（遺伝子II）の発現抑制・減少が、破骨
細胞の分化・活性化の亢進によって生じる骨代謝異常疾
患と関連していることを利用したものである。よって、
該骨代謝異常疾患の緩和／抑制作用を有する（骨代謝異
常疾患に対して改善／治療効果を発揮する）物質の探索
には、上記配列番号：1-149,198-301のいずれかの塩基
配列を有する遺伝子（遺伝子Ｉ）の発現レベルの減少若
しくは発現抑制が、あるいは上記配列番号：150-197,30
2-322のいずれかの塩基配列を有する遺伝子（遺伝子I
I）の発現レベルの増大若しくは発現誘導が指標とされ
る。

【００９２】すなわち、本発明のスクリーニング方法
は、配列番号：1-149,198-301のいずれかの塩基配列を
有する遺伝子（遺伝子Ｉ）の発現を抑制・減少させる物
質を探索するか、及び／又は、配列番号：150-197,302-
322のいずれかの塩基配列を有する遺伝子（遺伝子II）
の発現を誘導・増大させる物質を探索することによって
得られる、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連する骨
代謝異常疾患の改善薬または治療薬の有効成分となる候
補物質を提供するものである。

【００９３】候補物質の選別は、具体的には配列番号：
1-149,198-301のいずれかの塩基配列を有する遺伝子
（遺伝子Ｉ）が発現している細胞を用いる場合は、被験
物質（候補物質）を添加した細胞における上記各遺伝子
の発現レベルが被験物質（候補物質）を添加しない細胞
のそのレベルに比して低くなること、該遺伝子Ｉの発現
に発現誘導物質を必要とする細胞を用いる場合は、発現
誘導物質（例えば、RAW264細胞の場合はODF）によって
誘導される発現が候補物質の存在によって抑制されるこ
と、すなわち発現誘導物質存在下で候補物質を接触させ
た細胞の遺伝子発現が、発現誘導物質存在下で候補物質
を接触させない対照細胞（正のコントロール）に比して
低くなることをもって、行うことができる。また、配列
番号：150-197,302-322のいずれかの塩基配列を有する
遺伝子（遺伝子II）が発現している細胞を用いる場合
は、被験物質（候補物質）を添加した細胞における上記
各遺伝子の発現レベルが被験物質（候補物質）を添加し
ない細胞のそのレベルに比して高くなること、該遺伝子
IIの発現がある物質により抑制されている場合は、当該
物質によって抑制される発現が候補物質の存在によって
誘導されること、すなわち発現抑制物質の存在下で候補
物質を接触させた細胞の遺伝子発現が、該発現抑制物質
の存在下で候補物質を接触させない対照細胞（正のコン
トロール）に比して高くなることをもって、行うことが
できる。

【００９４】より具体的には、例えばRAW264細胞を用い
て破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連する骨代謝異常
疾患の改善薬または治療薬の有効成分となる候補物質を
スクリーニングするには、ODFを添加したRAW264細胞
（対照細胞）と、ODFと被験物質とを同時に加えたRAW26
4細胞とで遺伝子Ｉ又は遺伝子IIの発現レベルを比較
し、それぞれ、その発現レベルの減少又は増大を指標と
して候補物質を選別することができる。また、ODFを添
加して、既に遺伝子Ｉ又は遺伝子IIが発現誘導あるいは
抑制された状態のRAW264細胞に被験物質を添加し、被験
物質を添加しない対照のRAW264細胞と遺伝子Ｉ又は遺伝
子IIと発現レベルを比較して、その発現レベルの、それ
ぞれ低下又は増大を指標として候補物質を選別すること
もできる。

【００９５】このような遺伝子の発現レベルの検出及び
定量は、ノーザンブロット法、RT-PCR法など公知の方法
の他、DNAチップなどを利用して実施できる。指標とす
る遺伝子発現の抑制・減少又は誘導・増大の程度は、被
験物質（候補物質）を添加した細胞における遺伝子Ｉ又
は遺伝子IIの発現が被験物質（候補物質）を添加しない
対照細胞での発現量と比較して10%、好ましくは30%、特
に好ましくは50%以上の減少又は増大を例示することが
できる。

【００９６】また遺伝子Ｉ又は遺伝子IIの発現レベルの
検出及び定量は、それぞれ遺伝子Ｉ又は遺伝子IIの発現
を制御する遺伝子領域（発現制御領域）に、例えばルシ
フェラーゼ遺伝子などのマーカー遺伝子をつないだ融合
遺伝子を導入した細胞株を用いて、マーカー遺伝子由来
のタンパク質の活性を測定することで実施することもで
きる。本発明の遺伝子Ｉ又は遺伝子IIの発現制御物質の
スクリーニング方法には、かかるマーカー遺伝子の発現
量を指標として標的物質を探索する方法も包含されるも
のである。この意味において、本発明でいう配列番号：
１〜322の塩基配列を有する遺伝子の概念には、該遺伝
子の発現制御領域とマーカー遺伝子との融合遺伝子が含
まれる。

【００９７】なお、上記マーカー遺伝子としては、発光
反応や抵触反応を触媒する酵素の構造遺伝子が好まし
く、具体的には上記のルシフェラーゼ遺伝子のほか、ク
ロラムフェニコール・アセチルトランスフェラーゼ遺伝
子、βグルクロニダーゼ遺伝子、βガラクトシダーゼ遺
伝子、及びエクオリン遺伝子などのレポーター遺伝子も
また使用することができる。ここで遺伝子の発現制御領
域としては、例えば該遺伝子の転写開始部位上流約１k
b、好ましくは約2kbを用いることができる。融合遺伝子
の作成、およびマーカー遺伝子由来の活性測定は公知の
方法で行うことができる。

【００９８】本発明のスクリーニング方法は、配列番
号：1-149,198-301のいずれかの塩基配列を有する遺伝
子（遺伝子Ｉ）の発現を抑制・減少させる物質を探索す
るか、及び／又は、配列番号：150-197,302-322のいず
れかの塩基配列を有する遺伝子（遺伝子II）の発現を誘
導・増大させる物質を探索することによって破骨細胞の
分化・活性化の亢進に関連する骨代謝異常疾患の改善薬
または治療薬の有効成分となる候補化合物を提供するも
のである。スクリーニングの精度や正確性を高めるため
には、被験物質による遺伝子発現レベルを上記遺伝子の
２以上、好ましくは複数個の遺伝子、より好ましくは上
記遺伝子群の４分の１以上、さらに好ましくは半数以上
の遺伝子について評価し、候補物質を選別することが望
ましい。複数個の遺伝子について評価する場合には、個
々の遺伝子での評価をスコア化し、総合的に骨代謝異常
疾患を診断することが可能である。例えば、一つの被験
物質を用いて、上記の遺伝子の中から任意の10個の遺伝
子について評価を行い、該被験物質がそのうちの９個以
上の遺伝子に関して破骨細胞の分化・活性化の亢進に関
連する骨代謝異常疾患の改善薬または治療薬の有効成分
となる候補化合物であると評価される場合、該被験物質
は候補化合物である可能性が高いと判断できる。この場
合、評価する遺伝子数、スコアあるいは判断基準は限定
されない。

【００９９】以上のスクリーニング方法により、被験物
質から選別される物質は、配列番号：1-149,198-301の
いずれかの塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現抑制
剤、または配列番号：150-197,302-322のいずれかの塩
基配列を有する遺伝子の遺伝子発現増強剤（誘導剤）と
して位置づけることができる。これらの物質は、配列番
号：1-149,198-301のいずれかの塩基配列を有する遺伝
子の発現を抑制・減少するか、または配列番号：150-19
7,302-322のいずれかの塩基配列を有する遺伝子の発現
を誘導・増大することによって、破骨細胞の分化・活性
化の亢進を抑制し得ると考えられる。よって、これらの
物質は、破骨細胞の分化・活性化の亢進によって生じる
骨代謝異常疾患を緩和、抑制（改善、治療）する薬物の
有力な候補物質となる。

【０１００】上記に記載する本発明のスクリーニング方
法によって選別された候補物質は、さらに骨代謝異常疾
患モデル動物を用いた薬効試験、安全性試験、さらに骨
代謝異常疾患患者への臨床試験に供してもよく、これら
の試験を実施することによって、より実用的な骨代謝異
常疾患改善または治療薬を取得することができる。この
ようにして選別された物質は、さらにその構造解析結果
に基づいて、化学的合成、生物学的合成（発酵）または
遺伝子学的操作によって、工業的に製造することができ
る。

【０１０１】（４）骨代謝異常疾患の改善・治療剤 本発明は、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連して生
じる骨代謝異常疾患の改善・治療剤を提供するものであ
る。すなわち、本発明は関節炎、骨粗鬆症、変形性関節
炎、変形性腰椎症、全身性エリテマトーデス、糖尿病に
おける骨減少症、慢性腎不全における骨密度低下といっ
た、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連して生じる骨
代謝異常疾患の改善・治療剤を提供するものである。

【０１０２】本発明は配列番号：1〜322のいずれかの塩
基配列を有する遺伝子の発現が破骨細胞の分化・活性化
の亢進に関連する骨代謝異常疾患と関連しているという
新たな知見から、配列番号：1-149,198-301のいずれか
の塩基配列を有する遺伝子の発現を抑制若しくは減少さ
せる物質、あるいは配列番号：150-197,302-322のいず
れかの塩基配列を有する遺伝子の発現を誘導若しくは増
大させる物質が、上記疾患の改善または治療に有効であ
るという考えに基づくものである。すなわち、本発明の
骨代謝異常疾患の改善・治療剤は、配列番号：1-149,19
8-301のいずれかの塩基配列を有する遺伝子の発現を抑
制若しくは減少させる物質、及び／または配列番号：15
0-197,302-322のいずれかの塩基配列を有する遺伝子の
発現を誘導若しくは増大させる物質を有効成分とするも
のである。

【０１０３】当該有効成分となる配列番号：1-149,198-
301のいずれかの塩基配列を有する遺伝子の発現抑制
（減少）物質、あるいは配列番号：150-197,302-322の
いずれかの塩基配列を有する遺伝子の発現誘導（増大）
物質は、上記のスクリーニング方法を利用して選別され
たもののみならず、選別された物質に関する情報に基づ
いて常法に従って化学・生化学的手法により、若しくは
工業的に製造されたものであってもよい。

【０１０４】かかる発現抑制（減少）物質、あるいは発
現誘導（増大）物質は、そのままもしくは自体公知の薬
学的に許容される担体（賦形剤、増量剤、結合剤、滑沢
剤などが含まれる）や慣用の添加剤などと混合して医薬
組成物として調製することができる。当該医薬組成物
は、調製する形態（錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆
粒剤、シロップ剤などの経口投与剤；注射剤、点滴剤、
外用剤、坐剤などの非経口投与剤）等に応じて経口投与
または非経口投与することができる。また投与量は、有
効成分の種類、投与経路、投与対象または患者の年齢、
体重、症状などによって異なり一概に規定できないが、
１日投与用量として、数百ｍｇ〜２ｇ、好ましくは数十
ｍｇ程度を、１日１〜数回にわけて投与することができ
る。

【０１０５】また、上記の物質がDNAによりコードされ
るものであれば、該DNAを遺伝子治療用ベクターに組み
込み、遺伝子治療を行うことも考えられる。この場合
も、投与量、投与方法は患者の体重や年齢、症状などに
より変動するが、当業者であれば適宜選択することが可
能である。

【０１０６】

【実施例】次に、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明する。しかし、本発明はこれらの実施例になんら限
定されるものではない。 実施例１ DNAチップ解析 ヒト骨粗鬆症患者の骨組織１サンプルとヒトの正常な骨
組織３サンプルからそれぞれ調製したtotal RNAを用い
て、DNAチップ解析を行った。DNAチップ解析はAffymetr
ix社Gene Chip Human Genome U95A,B,C,D,Eを用いて行
った。具体的には、解析は、(1) total RNAからのcDNA
の調製、(2) 該cDNAからラベル化cRNAの調製、(3) ラベ
ル化cRNAのフラグメント化、(4)フラグメント化cRNAと
プローブアレイとのハイブリダイズ、(5) プローブアレ
イの染色、(6) プローブアレイのスキャン、及び(7) 遺
伝子発現解析、の手順で行った。 (1) total RNAからのcDNAの調製 骨粗鬆症患者の骨組織１サンプルと正常な骨組織３サン
プルから常法に従って調製した各total RNA 10μg、T7-
(dT)24プライマー (Amersham社製) 100pmolを含む11μL
の混合液を、70℃、10分間加熱後、氷上で冷却した。冷
却後、SuperScript Choice System for cDNA Synthesis
(Gibco-BRL社製)に含まれる5×FirstStrand cDNA Buff
er 4μL、該キットに含まれる0.1M DTT 2μL、該キット
に含まれる10mM dNTP Mix 1μLを添加し、42℃で2分間
加熱した。更に、該キットに含まれるSuper ScriptII R
T 2μL(400U)を添加し、42℃で1時間加熱した後、氷上
で冷却した。冷却後、DEPC処理水（ナカライテスク社
製）91μL、該キットに含まれる5×Second Strand Reac
tion Buffer 30μL、10mM dNTP Mix 3μL、該キットに
含まれるE. coli DNA Ligase 1μL(10U)、該キットに含
まれるE. coli DNAPolymerase Ｉ 4μL(40U)、該キット
に含まれるE. coli RNaseH 1μL(2U)を添加し、16℃で2
時間反応させた。次いで、該キットに含まれるT4 DNA P
olymerase 2μL(10U)を加え、16℃で5分間反応させた
後、0.5M EDTA 10μLを添加した。次いで、フェノール/
クロロホルム/イソアミルアルコール溶液（ニッポンジ
ーン社製）162μLを添加し、混合した。該混合液を、予
め室温、14,000rpm、30秒間遠心分離しておいたPhase L
ock Gel Light (エッペンドルフ社製) に移し、室温、1
4,000rpm、2分間遠心分離した後、145μLの水層をエッ
ペンドルフチューブに移した。得られた溶液に、7.5M酢
酸アンモニウム溶液 72.5μL、エタノール362.5μLを加
え混合した後、4℃で14,000rpm、20分間遠心分離した。
遠心分離後、上清を捨て、作製したｃDNAを含むDNAペレ
ットを得た。その後、該ペレットに80%エタノール0.5mL
を添加し、4℃で14,000rpm、5分間遠心分離した後、上
清を捨てた。再度同様の操作を行った後、該ペレットを
乾燥させ、DEPC処理水12μLに溶解した。以上の操作に
よって、ヒト骨粗鬆症患者の骨組織１サンプルとヒトの
正常な骨組織３サンプルからそれぞれ調製したtotal RN
AからcDNAを取得した。 (2) cDNAからラベル化cRNAの調製 各cDNA溶液5μLに、DEPC処理水17μL、BioArray High Y
ield RNA TranscriptLabeling Kit (ENZO社製) に含ま
れる10×HY Reaction Buffer 4μL、該キットに含まれ
る10×Biotin Labeled Ribonucleotides 4μL、該キッ
トに含まれる10×DTT 4μL、該キットに含まれる10×RN
ase Inhibitor Mix 4μL、該キットに含まれる20×T7 R
NA Polymerase 2μLを混合し、37℃で5時間反応させ
た。反応後、該反応液にDEPC処理水60μLを加えたの
ち、RNeasy Mini Kitを用いて添付プロトコールに従
い、調製したラベル化cRNAを精製した。 (3) ラベル化cRNAのフラグメント化 各ラベル化cRNA 20μgを含む溶液に、5×Fragmentation
Buffer（200mMトリス−酢酸 pH8.1 (Sigma社製)、 50
0mM酢酸カリウム (Sigma社製)、150mM酢酸マグネシウム
(Sigma社製)）8μLを加えた反応液40μLを、94℃で35
分間加熱した後、氷中に置いた。これによって、ラベル
化RNAをフラグメント化した。 (4) フラグメント化cRNAとプローブアレイとのハイブ
リダイズ 各フラグメント化cRNA 40μLに、5nM Control Oligo B2
（Amersham社製）4μL、100×Control cRNA Cocktail 4
μL、Herring sperm DNA（Promega社製）40μg、Acetyl
ated BSA（Gibco-BRL社製）200μg、2×MES Hybridizat
ion Buffer(200mM MES、2M [Na+], 40mM EDTA、0.02% T
ween20 (Pierce社製)、pH6.5〜6.7) 200μL、DEPC処理
水144μLを混合し、400μLのハイブリカクテルを得た。
得られた各ハイブリカクテルを99℃で5分間加熱し、更
に45℃で5分間加熱した。加熱後、室温で14,000rpm、5
分間遠心分離し、ハイブリカクテル上清を得た。

【０１０７】一方、1×MESハイブリダイゼーションバッ
ファーで満たしたHuman genome U95プローブアレイ（Af
fymetrix社製）を、ハイブリオーブン内で、45℃、60rp
mで10分間回転させた後、1×MESハイブリダイゼーショ
ンバッファーを除去してプローブアレイを調製した。上
記で得られたハイブリカクテル上清200 μLを該プロー
ブアレイにそれぞれ添加し、ハイブリオーブン内で45
℃、60rpmで16時間回転させ、フラグメント化ｃRNAとハ
イブリダイズしたプローブアレイを得た。

【０１０８】(5) プローブアレイの染色 上記で得られたハイブリダイズ済みプローブアレイそれ
ぞれからハイブリカクテルを回収除去した後、、Non-St
ringent Wash Buffer (6×SSPE (20×SSPE (ナカライテ
スク社製)を希釈)、0.01%Tween20、0.005%Antifoam0-30
(Sigma社製))で満たした。次にNon-Stringent Wash Bu
fferおよびStringent Wash Buffer (100mM MES、0.1M N
aCl、0.01%Tween20)をセットしたGeneChip Fluidics St
ation 400 (Affymetrix社製) の所定の位置にフラグメ
ント化ｃRNAとハイブリダイズしたプローブアレイを装
着した。その後、染色プロトコールEuKGE-WS2に従っ
て、１次染色液 (10μg/mL Streptavidin Phycoerythri
n (SAPE) (MolecμLar Probe社製)、2mg/mL Acetylated
BSA、100mM MES、1M NaCl (Ambion社製)、0.05%Tween2
0、0.005%Antifoam0-30)、 2次染色液（100μg/mL Goat
IgG (Sigma社製)、3μg/mL Biotinylated Anti-Strept
avidin antibody (Vector Laboratories社製)、2mg/mL
Acetylated BSA、100mM MES、1M NaCl、0.05%Tween20、
0.005%Antifoam0-30）により染色した。

【０１０９】(6) プローブアレイのスキャン、及び (7)
遺伝子発現解析 染色した各プローブアレイをHP GeneArray Scanner (Af
fymetrix社製)に供し、染色パターンを読み取った。染
色パターンをもとにGeneChip Workstation System (Aff
ymetrix社製)によってプローブアレイ上の遺伝子の発現
を解析した。次に、解析プロトコールに従ってNormaliz
ation、遺伝子発現の比較解析を行った。

【０１１０】実施例２ ヒト骨粗鬆症患者の骨とヒト正
常骨での遺伝子発現の変動解析 実施例１で行ったDNAチップ解析による遺伝子発現の比
較解析結果から、正常骨組織に比べて骨粗鬆症患者の骨
組織で3倍以上の発現増を示したプローブ、並びに正常
骨組織に比べて骨粗鬆症患者の骨組織で３倍以上の発現
減少を示したプローブを選抜した。このうち、正常骨組
織に比べて骨粗鬆症患者の骨組織で3倍以上の発現増を
示したプローブの中には、表１に示すようにTRAP5、Cat
hepsin Kなど破骨細胞特異的な発現遺伝子が含まれてお
り、上記の選抜方法で確かに破骨細胞特異的な発現遺伝
子が得られていることが確認された。なお、表１中、発
現増倍率とは、正常骨組織における遺伝子発現量を１と
した場合の骨粗鬆症患者の骨組織での遺伝子発現量を示
すものである。

【０１１１】

【表１】

【０１１２】選抜した該プローブの中から、さらに骨粗
鬆症患者の骨組織でのみ若しくは正常骨組織でのみ発現
しているプローブを選抜した。具体的には、DNAチップ
解析結果から得られるAbs Callを指標にして、骨粗鬆症
患者の骨組織でのAbs CallがPresentのプローブで、か
つ、正常骨組織でのAbs CallがすべてAbsentのプローブ
を選抜した。各選抜したプローブについて発現変動の増
減及び発現変動倍率を表２〜表６に示す。なお、表中、
発現変動倍率は、Human Genome U95 Chipで解析した正
常骨組織の遺伝子発現量を１とした場合における骨粗鬆
症患者の骨組織での該遺伝子の発現量の増減を比で示す
もので、減少の場合はマイナス（−）をつけて示す。

【０１１３】

【表２】

【０１１４】

【表３】

【０１１５】

【表４】

【０１１６】

【表５】

【０１１７】

【表６】

【０１１８】表２〜表６には各選抜されたプローブに対
応する遺伝子の塩基配列を示す後記配列表の配列番号を
合わせて示す。また、遺伝子のうち、対応するタンパク
質があるものについては、そのアミノ酸配列を示す後記
配列表の配列番号も合わせて示す。

【０１１９】表２〜表６の結果からわかるように、配列
番号8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、
20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、3
2、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、4
4、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、5
6、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、6
8、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、8
0、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、9
2、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、10
3、104、105、106、107、108、109、110、111、112、11
3、114、115、116、117、118、119、120、121、122、12
3、124、125、126、127、128、129、130、131、132、13
3、134、135、136、137、138、139、140、141、142、14
3、144、145、146、147、148、149、203、204、205、20
6、207、208、209、210、211、212、213、214、215、21
6、217、218、219、220、221、222、223、224、225、22
6、227、228、229、230、231、232、233、234、235、23
6、237、238、239、240、241、242、243、244、245、24
6、247、248、249、250、251、252、253、254、255、25
6、257、258、259、260、261、262、263、264、265、26
6、267、268、269、270、271、272、273、274、275、27
6、277、278、279、280、281、282、283、284、285、28
6、287、288、289、290、291、292、293、294、295、29
6、297、298、299、300、または301の塩基配列を有する
遺伝子は正常な骨組織に比べて骨粗鬆症の患者骨組織で
４倍以上１０倍未満の発現増大を示した。また、配列番
号: 1、2、3、4、5、6、7、198、199、200、201、また
は202の塩基配列を有する遺伝子は正常な骨組織に比べ
て骨粗鬆症の患者骨組織で10倍以上の発現増大を示し
た。

【０１２０】一方、配列番号150、151、152、153、15
4、155、156、157、158、159、160、161、162、163、16
4、165、166、167、168、169、170、171、172、173、17
4、175、176、177、178、179、180、181、182、183、18
4、185、186、187、188、189、190、191、192、193、19
4、195、196、197、302、303、304、305、306、307、30
8、309、310、311、312、313、314、315、316、317、31
8、319、320、321、又は322の塩基配列を有する遺伝子
は、骨粗鬆症の患者骨組織で正常な骨組織よりも発現が
減少していた。特に配列番号：161、162、163、164、16
5、166、167、168、169、170、171、172、173、174、17
5、176、177、178、179、180、181、182、183、184、18
5、186、187、188、189、190、191、192、193、194、19
5、196、197、305、306、307、308、309、310、311、31
2、313、314、315、316、317、318、319、320、321、又
は322の塩基配列を有する遺伝子は、正常な骨組織に比
べて骨粗鬆症の患者骨組織で４倍以上10倍未満の発現減
少を、また、配列番号150、151、152、153、154、155、
156、157、158、159、160、302、303、または304の塩基
配列を有する遺伝子は、同様に骨粗鬆症の患者骨組織で
10倍以上の発現減少を示した。

【０１２１】以上に示すように、配列番号：1-149,198-
301で示される塩基配列を有する遺伝子は、正常な骨組
織に比して、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連のあ
る骨代謝異常疾患患者の骨組織で特異的に発現が増大
し、また配列番号：150-197,302-322で示される塩基配
列を有する遺伝子は、正常な骨組織に比して、破骨細胞
の分化・活性化の亢進に関連のある骨代謝異常疾患患者
の骨組織で発現が特異的に減少していることから、これ
らは該骨代謝異常疾患に関するマーカー遺伝子として応
用可能な遺伝子であると考えられた。また、これらの遺
伝子を用いることによって破骨細胞の分化・活性化の亢
進に関連のある骨代謝異常疾患を緩和、抑制する治療薬
の候補薬をスクリーニングすることが可能である。

【０１２２】実施例３ 配列番号：1-149,198-301の塩
基配列を有する遺伝子の発現を抑制する剤のスクリーニ
ング 前記のマウスRAW264細胞（Leukemic monocyte 由来のマ
クロファージ様細胞）をE-MEM培地（ウシ胎児血清10
％、ペニシリン50Ｕ/mLを含む）で、37℃、CO２濃度５
％の条件で培養する。計数したRAW264細胞を5x103/cm2
でプレートに播種し、37℃、CO2濃度5%で一夜培養す
る。翌日、組換えODFタンパク質（Biochem.Biophys.Re
s.Commun.282，278-283（2001））を終濃度100ng/ml含
む培地と交換し、それぞれ100μM、10μM、および1μM
の濃度になるように被験物質を添加し、37℃、CO2濃度5
%で2日間培養する。ここで、対照実験として、被験物質
無添加の細胞についても同様に培養する（コントロー
ル）。これらの各培養細胞より抽出したRNAを用いて実
施例１に記載された方法で、配列番号：1-149,198-301
の塩基配列を有する遺伝子の発現量を調べる。コントロ
ールと比べて、配列番号：1-149,198-301の塩基配列を
有する遺伝子の発現量が10%、好ましくは30%、特に好ま
しくは50%以上減少している系について、添加した被験
物質を骨代謝異常疾患の緩和、抑制（改善、治療）する
候補化合物として選択する。

【０１２３】実施例４ 配列番号：150-197,302-322の
塩基配列を有する遺伝子の発現を誘導（増大）する剤の
スクリーニング 前記のマウスRAW264細胞をE-MEM培地（ウシ胎児血清10
％、ペニシリン50Ｕ/mLを含む）で、37℃、CO２濃度５
％の条件で培養する。計数したRAW264細胞を5x103/cm2
でプレートに播種し、37℃、CO2濃度5%で一夜培養す
る。翌日、組換えODFタンパク質（Biochem.Biophys.Re
s.Commun.282，278-283（2001））を終濃度100ng/ml含
む培地と交換し、それぞれ100μM、10μM、および1μM
の濃度になるように調製した被験物質含有溶液を添加
し、37℃、CO2濃度5%で2日間培養する。ここで、対照実
験として、被験物質無添加の細胞についても同様に培養
する（コントロール）。これらの各培養細胞より抽出し
たRNAを用いて実施例１に記載された方法で、配列番
号：150-197,302-322の塩基配列を有する遺伝子の発現
量を調べる。コントロールと比べて、配列番号：150-19
7,302-322の塩基配列を有する遺伝子の発現量が10%、好
ましくは30%、特に好ましくは50%以上増大している系に
ついて、添加した被験物質を骨代謝異常疾患の緩和、抑
制（改善、治療）する候補化合物として選択する。

【０１２４】

【発明の効果】本発明によって、破骨細胞の分化・活性
化の亢進が関連した骨代謝異常疾患、例えば関節炎や骨
粗鬆症、変形性関節炎、変形性腰椎症、全身性エリテマ
トーデス、糖尿病における骨減少症、慢性腎不全におけ
る骨密度低下などの疾患で、発現が特異的に増大してい
る遺伝子（配列番号：1-149,198-301の塩基配列を有す
る遺伝子）と発現が特異的に減少している遺伝子（配列
番号：150-197,302-322の塩基配列を有する遺伝子）が
明らかになった。これらの遺伝子は破骨細胞の分化・活
性化の亢進に関連した骨代謝異常疾患の遺伝子診断に用
いられるマーカー遺伝子（プローブ、プライマー）とし
て有用である。これらのマーカー遺伝子によれば骨代謝
異常疾患が破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した疾
患であるかどうか、その原因を明らかにすることができ
（診断精度の向上）、これによってより適切な治療を施
すことが可能となる。すなわち、本発明のマーカー遺伝
子は骨代謝異常疾患の適切な治療のためのツールとして
利用することができる。

【０１２５】また、上記遺伝子（配列番号：1-149,198-
301）の発現誘導・増大又は上記遺伝子（配列番号：150
-197,302-322）の発現抑制・減少と破骨細胞の分化・活
性化の亢進並びにそれによる骨代謝異常疾患との関連性
から、該遺伝子Ｉ（配列番号：1-149,198-301）の発現
を抑制若しくは減少させる化合物または該遺伝子II（配
列番号：150-197,302-322）の発現を誘導若しくは増大
させる化合物は、上記骨代謝異常疾患の治療薬として有
用であると思われる。従って、本発明の遺伝子Ｉ（配列
番号：1-149,198-301）によれば、その発現の抑制若し
くは減少を指標にすることによって、また遺伝子II（配
列番号：150-197,302-322）によれば、その発現の誘導
若しくは増大を指標にすることによって、破骨細胞の分
化・活性化の亢進に関連して生じる骨代謝異常疾患の治
療薬となり得る候補薬をスクリーニングし選別すること
が可能である。すなわち、本発明のスクリーニング方法
は、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝異
常疾患の治療薬の開発に有用である。

【０１２６】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Sumitomo Pharmaceuticals <120> A marker of bone disease and its use <130> <140> 3D301JP <160> 355 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 1923 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 gaattcagtg gcctaccaag tggcatagct gaggtcagtg gagaatcctc cagagctgag 60 attgggagca gcctgccctc gggagcatat tatggcagtg gaactccatc tagtttcccc 120 acggtctctc ttgtagacag aactttggtg gaatctgtaa cccaggctcc aacagcccaa 180 gaggcaggag aagggccttc tggcatttta gaactcagtg gtgctcattc tggagcacca 240 gacatgtctg gggagcattc tggatttctg gacctaagtg ggctgcagtc cgggctgata 300 gagcccagcg gagagccacc aggtactcca tattttagtg gggattttgc cagcaccacc 360 aatgtaagtg gagaatcctc tgtagccatg ggcaccagtg gagaggcctc aggacttcca 420 gaagttactt taatcacttc tgagttcgtg gcgggtgtta ctgaaccaac tatttctcag 480 gaactaggcc aaaggccccc tgtgacacac acaccccagc tttttgagtc cagtggaaaa 540 gtctccacag ctggggacgt tagtggagct accccagtgc tccctgggtc tggagtagaa 600 gtatcatcag tcccagaatc tagcagtgag acgtccgcct atcctgaagc tgggttcggg 660 gcatctgccg cccctgaggc cagcagagaa gattctgggt cccctgatct gagtgaaacc 720 acctctgcat tccacgaagc taacctcgag agatcctctg gcctaggagt gagcggcagc 780 actttgacat ttcaagaagg cgaggcgtcc gctgccccag aagtgagtgg agaatccacc 840 accaccagtg atgtggggac agaggcacca ggcttgcctt cagccactcc cacggcttct 900 ggagacagga ctgaaatcag cggagacctg tctggtcaca cctcgcagct gggcgttgtc 960 atcagcacca gcatcccaga gtctgagtgg acccagcaga cccagcgccc tgcagagacg 1020 catctagaaa ttgagtcctc aagcctcctg tactcaggag aagagactca cacagtcgaa 1080 acagccacct ccccaacaga tgcgtccatc ccagcttctc cggaatggaa acgtgaatca 1140 gaatcaactg ctgcagacca ggaggtatgt gaggagggct ggaacaagta ccagggccac 1200 tgttaccgcc acttcccgga ccgcgagacc tgggtggatg ctgagcgccg gtgtcgggag 1260 cagcagtcac acctgagcag catcgtcacc cccgaggagc aggagtttgt caacaacaat 1320 gcccaagact accagtggat cggcctgaac gacaggacca tcgaagggga cttccgctgg 1380 tcagatggac accccatgca atttgagaac tggcgcccca accagcctga caactttttt 1440 gccgctggag aggactgtgt ggtgatgatc tggcacgaga agggcgagtg gaatgatgtt 1500 ccctgcaatt accacctccc cttcacgtgt aaaaagggca cagtggcctg cggagagccc 1560 cctgtggtgg agcatgccag gaccttcggg cagaagaagg accggtatga gatcaattcc 1620 ctggtgcggt accagtgcac agaggggttt gtccagcgcc acatgcccac catccggtgc 1680 cagcccagcg ggcactggga ggagcctcgg atcacctgca cagaccccac cacctacaaa 1740 cgcagactac agaagcggag ctcacggcac cctcggagga gccgccccag cacagcccac 1800 tgagaagagc ttccaggacc acccaggacg ctgagcccag gagcctgcca ggctgacgtg 1860 catcccaccc agacggtgtc ctcttcttgt cgctttttgt catataagga atcccaggaa 1920 ttc 1923 <210> 2 <211> 392 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 cggcacgagg agctggcctg tgacctgaac catgctcctt gcatccagaa agctgctgaa 60 ctcttctccc agtggatgga atccagtgga aaattaaagt agatgtagac ttctgtccta 120 ccctttgttc ttttctcttt gatgtaaaag tctttgatca agcaagacat taggtctaaa 180 accttttagt gaggatagaa aaaaaaacat gctgggcatt acaaaccctg tttcatgctc 240 ttcacattgt aagtgctatg tatgggagga ctagtacaat cttctaccct ggaaatgtaa 300 tggtgtccct ttnttcccgt gctggcttgg ggtgcagtng gccccacgcc ttttaattcc 360 ccgggaantt tgggggagga ccaagggngg gg 392 <210> 3 <211> 591 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 ggtcttctcc aagctgaagg gccgtggcgg tcttctgggg aggcagcgtt cagggagatt 60 actatggaga tctggctgct cgcctgggct atttccccag tagcattgtc cgagagcaca 120 gaccctgaaa cctggcaaag tcgatgtgaa gacagacact tcctcttcaa attcctggtg 180 attggcagtg caggaactgg caaatcatgt ctccttcatc agttcattga gaataagttc 240 aaacaggact ccaaccacac aatcggcgtg gagtttggat cccgggtggt caacgtgggt 300 gggaagactg tgaagctaca gatttgggac acggctggcc aggagcggtt tcggtcagtg 360 acgcggagtt attaccgagg ggcggctgga gcctgctggt gtacgacatc accagccggg 420 agacatacaa ctcactggct gcctggctga cggatgcccg caccctggcc agccccaaca 480 tcgtggtcat cctctgtggc aacaagaagg acctggaccc tgagcgggag gtcactttcc 540 tggaggcctc ccgctttgcc caggagaatg agctgatgtt cctggagacc a 591 <210> 4 <211> 490 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 aanatntgan gctccgtgac acttaagaag aggcctgacg tcgcaaacac gcgtacgtna 60 gcttggatcc tctagagcgg cgcccactac tactatgctg cgagaaagac gacagaaggg 120 caagctcttc attgttccta tctgccaaat cattatactt cctacaagca gtgcagagag 180 ctgagtcttc agcaggtcca agaaatttga acacactgaa ggaagtcagc cttcccacct 240 gaagatcaac atgcctggca ctctagcact tgaggatagc tgaatgaatg tgtatttctt 300 tggtctcttt cctttcttgt ctttgctctt tgttctctat ctaaagtgtg tcttacccaa 360 tttccatggt ttctcttgct aatttctttc gntgtgtgcc tttgcctcat tttctctttt 420 tgttcacaag agtggtctgt gtcntggtct tagacagntc tctcattttt cattttggtg 480 ccagnttggt 490 <210> 5 <211> 710 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 cgcattnagt ccngttcgcc tgcacgtacc ggtccggaat tcccgggtcg acccacgcgt 60 ccggtcctga gctgncacct cattgcccgg ccaaagggca gagacacgag cgactggggg 120 cacctctgac gtgcagttcc tggcctcggt gctgccccca gacacggatc ctgcgttctt 180 cgagcacctt cgggccctcg actgctccga ggtgacggtg cgagccctgc ccgagggctc 240 cctcgccttc cccggagtgc cgctcctgca ggtgtccggg ccgctcctgg tggtgcagct 300 gctggagaca ccgctgctct gcctggtcag ctacgccagc ctggtggcca ccaacgcagc 360 gcggcttcgc ttgatcgcag ggccagagaa gcggctgcta gagatgggcc tgaggcgggc 420 tcagggcccc gatgggggcc tgacagcctc cacctacagc tacctgggcg gcttcgacag 480 cagcagcaac gtgctagcgg gccagctgcg aggtgtgccg gtggccggga ccctggccca 540 ctccttcgtc acttcctttt caggcagcga ggtgccccct gacccggtca gtccctcctc 600 taaaccctgc tgtctccagg cgacaggccc caagccagcc cttgccctgg cgagaggtgt 660 ggccacccaa ggcaggtcac cccagtgctg tcccaaggaa gcttggcacc 710 <210> 6 <211> 777 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 gaattcggca cgagcgcact cgcagccctg gcaggcggca ctggtcatgg aaaacgaatt 60 gttctgctcg ggcgtcctgg tgcatccgca gtgggtgctg tcagccgcac actgtttcca 120 gaactcctac accatcgggc tgggcctgca cagtcttgag gccgaccaag agccagggag 180 ccagatggtg gaggccagcc tctccgtacg gcacccagag tacaacagac ccttgctcgc 240 taacgacctc atgctcatca agttggacga atccgtgtcc gagtctgaca ccatccggag 300 catcagcatt gcttcgcagt gccctaccgc ggggaactct tgcctcgttt ctggctgggg 360 tctgctggcg aacggcagaa tgctaccgtg ctgcagtgcg tgaacgtgtc ggtggtgtct 420 gaggaggtct gcagtaagct ctatgacccg ctgtaccacc ccagcatgtt ctgcgccggc 480 ggagggcaag accagaagga ctcctgcaac ggtgactctg gggggccctg atntgnaacg 540 gggncttgca gggccttgtg tctttcggaa aagcccgtgt ggcaagttgg cgtgcaggtg 600 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gaactttctc taaatctgaa tgggaaagat gcgataaata tttatcaaat 780 tttagagtga gttagtgccc tagcaacctc caaagttgac aaatgagtat ttctttaaag 840 caaggtatgg cccaaccaat actttgaaac tagcatgttt agaatagagc aggaggaaac 900 tatatttgaa aggtcagaag tggaaagact aagagggcct gaacaataag aggacagaac 960 caagaggagt tggcaactaa ttggatgtgg ggattaagga aaggtaagca tcaaagatta 1020 cctccaagtt tgttagaagg ttagtagcag gattctgatg ccattcaagt aaatacaggt 1080 ctcagtcaga tggaccccag gagccacatg tatttgaggg gtactttgtc tcacactttt 1140 gcctgttaca tggttttcgg taatttagaa tttaagccag tagtggggcg actgtacatc 1200 tatcgacatg gtgaggtaga gcatgtttgg gaggaaagac gttgaatccc atttggtgac 1260 agtgagcttg aggtgctgcc agaacactgc actgaagata ggaggagact gtaggaaata 1320 caagatagga aaggtctcca ctgaaatgtt aactctttct ctctaaacag ccatccaggc 1380 ctcaatgtct gcagtttctg atctgtgatt atgacttatc caaatcttac atttcttaaa 1440 aatagtcata gatgaaggga atcacagttg atggttatat ggtgacatta gtggcttaaa 1500 ttctaaatag ctggaaactg tataataggc aaaactgtga ggcaaataaa atgcttctca 1560 aatctgtgtg gctcttatgg 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gcattccaaa aggtttttgc tttgaaagtg ttagcagaag 1200 catgttgatg tgaattatga tttcttcatg tgctactgtt agcacactga gtttttatag 1260 ttgcacatca ttcctcattg tgccttgttt tatccatttt ataaatagag tagatatttg 1320 atataccact ctgataactc atataaaaat atcatcataa aaagcttaat ttcatccctt 1380 ttatgttggt tttaaaaggt aaatgcttac catattttat aattgagaac tcttacatag 1440 tagaatccat tctataatac atgtgttgac aaagctttag agaaagtttc ctattctctt 1500 ccatttcccc tgcccaaagt gctgacatag gcagtgatga agaatcttta ccaagatttt 1560 cagggtgtac ctatgaaatt gctttaaatg cactgctggt gtaaataatt agcaagcaaa 1620 agcgtttctg tgacttcagg taccagctta aagagcacta gggatgggga acgaatgcca 1680 aatcagactc cacctagagc accaggaaac agcttgtacc ctggtaggga aatggtgttg 1740 ctgaaagggg aggctgagcc agtgcgagac tgaacttgtg cagccttagc caagacaaag 1800 cagtgttttt cagcagacgg ctgatgggac aggaattgaa gaagagaatt gactcgtatg 1860 aacaggacag ggtgaaaatg ctgggaatta taatgggaaa caaaactatc tatgttcata 1920 ttttgtaata tttcatttgt taagtttata tctggatata atgttctttt taaacaagta 1980 taatcatatc gtcggaggtt 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ttttctttgg ttgtccctat taacaaaaaa gtattttaat 3720 aaaaaattga aatgagtgag tc 3742 <210> 230 <211> 2942 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 230 aaaaaaaaaa gttcccacag ctcaccacta cagaagcagg gaagacaact atgcagaaaa 60 cagagttagt ggcggtcagc aggaatgcag ctggtctttt ggacccctac gggatggggg 120 cagtgcagaa gacactggtg aagtccttta tactgaagac ctgtggttgg gagcaggggt 180 agtccatggg tctgctgatt ttttttccct atttagtact aatgtgtgtg tgatctttgt 240 tttacaaaca gtaccttttg ggttttctgc atattttata atttttgtac agttttgaat 300 tctatagatt gtcttggaag gatactgtgt gatgggtcag gcacacagta attggagact 360 tttaatgtat gtaatatttc atagattgca tgctattaat catctgtgag ggtagtattt 420 tttgttttat tgtaagtttc cctctttttt tataaattaa aagatggttg gtattaggaa 480 tttcaaatga atgcagaaaa tcttacatgc tgtgtactat taatattata acagacgatc 540 caagtccaaa atctgaccaa taaagcaacc attttatcaa gatagaggga ttctaatggg 600 agaggggatt cttccctcct gaagtttgtg tgtccagtcc ccttaaaaaa aatgaatagt 660 tgtcttttct tgtcatatta atactcgaaa gtccatggtg gtattaatga aagtacactt 720 tattgttgcc tttgaactta 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aaaagttaag agttctattt ggtgttttca 1620 ggaatatacg tgaaaagaca tgccatgttt tggtaaatac catcagagtt gtgtaaaggc 1680 gtgtactaag tgcaatctta atttgtggaa ataatcttca tttacccctc ctaaaactac 1740 actcagtata aacactttcc cataaggtgt gtgcagtaaa aatgttatat tactccaaca 1800 ctggcaggag cacagcacag cagccttatt ggagagagcc ttataaaagt gattaaatgg 1860 aggcattgag ctcattacct ttaagtttac tttgtgctga cctttgttcc tgttttgaga 1920 atctcatata attattaaaa aaaaaaaaca attaaaacga aacggcgggg cctagctgtg 1980 tataaatgat ccttgctgaa tatcttaagg ttttttgtaa gaaaaaagaa aaaccaacaa 2040 aaaaagctta ttttcacatt aaaatgaaac ctcttttgca acttaagaat tctatggaaa 2100 agcagttttt atcatatttt gtgtccatgc accatttttc ttaaaatggc ttacaaaaaa 2160 gaatgtaaac aatttgtgat ctggccagtt gtacttttag ctcccagagg gagagttggt 2220 ggtattatga gttgagtaaa aaccatccag gggaacttga gggagcagtc tgttgccagt 2280 aatgttcctt gtgtgccatt aaaccacctc cagatgagtg gaggaacatc acttttaatt 2340 ttttaatgta tttggaattt tatttaggtc aagttcttag tacacggcaa caattccaaa 2400 tacaattaaa aaattaaaaa gtgatgttcc 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ttttgaggaa cttgatgtaa acatggtgtt cagaaatctc gtgtctatct caatgggata 3060 tttcttgtat tacaccttgt catttttttc acaatttatt tacatctact tttgtttgaa 3120 ctggaatgaa gagatgaaac actatggata tgttttccat tcaaatggca ctttagcata 3180 ttgttctgtt ttcctgtaaa acatcatggg tgtgattttt atactgctgc tgcttgtcac 3240 aattattata acttctctgt aatttcctct gaaataaaat tgaatcacct gaggtgcaaa 3300 ccaaaatact tctgtaactt tttttgatat atactgtcat tctaagtaca tatactcctt 3360 gtgacttggg aagtatttgt cttgaggcaa gtatttacca cccacactaa aataatgctg 3420 gaaaaaataa aatactaaac tgaaggcaca gtattattag aaagtgtaac attttcattt 3480 tctcttttac tctacatttt aaagatacga gggttattgt tcttgaaata attacctata 3540 ttaaattatc atagaatgtg tctataaaca tttgacgaaa aatgttgatt ttcctccaga 3600 ataatgtgaa gtccatactc agaaattaac tagaaaggtt ttagacatta cttaaataaa 3660 ttattcacat tgcatttgta ttgcttgctc tgtgtaatgg ataagtataa caatcatatc 3720 actacagttt gtcaggtttt cttcttatca tatttgatga atattaagtt tttctgttat 3780 gaaaacatat tcctctaaaa tttggcttct aaattttcta 3820 <210> 319 <211> 587 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 319 gcggtgacga cctacgcaca cgagaacatg cctgtgagtg ctttggtcca ggtttcggcg 60 gagatctcgc tgttctgtcc gaactctccc ctcacgctga tttcggatcg tagagggtcc 120 tcatttaccc tctgcacttc ttaggacatt aactccaggg accgcagcgg cccacgggcc 180 acccgcatag acgggagcgg agaggagata agatggcggc ccagctgcgc agacaccagg 240 ggcggcgagg ggcgagctct ccccgctcgc aaaggatctc cttcatccct ctccagaaga 300 ggagaagagg aaacacaaga agaaacgcct ggtgcagagc cccaattcct acttcatgga 360 tgtgaaatgc ccaggatgct ataaaatcac cacggtcttt agccatgcac aaacggtagt 420 tttgtgtgtt ggctgctcca ctgtcctctg ccagcctaca ggaggaaaag caaggcttac 480 agaaggatgt tccttcagga ggaagcagca ctaaaagcac tctgagtcaa gatgagtggg 540 aaaccatctc aataaacaca ttttggataa aacaaaaaaa aaaaggg 587 <210> 320 <211> 382 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 320 tcccttaagg cccaaaactc ctaaatttgc ccttttgagg ttattttcta gatcttgcag 60 gcatgttaca atttttaaat tcttttatct tttatacata atcctttgat tatgtataat 120 cacagtcctt tgtgtatttt caaatagcct gttttcaaga ttactaatta tttcttatgc 180 ttgatcacgt ctgctgataa gaggttctga tgcattcttt agtatgtcaa ttgtattttc 240 atctccagaa tttctgcttg attcttttaa attatatcaa tctctgtaaa atttatctga 300 taaaattcca aattccttct ctgtgttatc ctggattttg ttgagtttcc tcaaaacagc 360 taatctgaat tcattttcca aa 382 <210> 321 <211> 1769 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 321 cctctgaggc tgagcattta gtgtgtttgt taaacagttg gcctttttac ttttatggta 60 acacacataa atgttatata tgtgttaagg ctagttaaat acatgcaaat ggtaggtatg 120 atatcaccaa atttgtgacc cttatgtggt aagatacctg tactatatta ttcagatgga 180 cagtgagtaa aacaaaattg ctcatcctta ccagctgctg tttgtttctt tttaatcttt 240 aagttttaca tggacggatg gcaaattaaa cagcagtaac ttggtaattc tgtctggcca 300 agtggttgaa cactttgatc tggagttccg aatcctgtat gcccagtcca agcccatcag 360 ccccaaactc ctgtctcact tccagagcag caacaagttt gatcacctca ccaaccgaaa 420 accacagtcc aaggagctca ccctgggcaa cctgctgcgg atgcggctgg ctaggctgtc 480 aagtactccc aggaaggcgg acctggaccc agagatgccc gcagagggca aggcagagcg 540 caagccccat gactgtgagt cctctactgt tagtgaggaa gactacttca gcagccacag 600 ggacgagctc cagagcagaa aggccattga cgctgccact caaacagagc caggagagga 660 gatgccaggg ctgagtgtga gtgaggtggg aacacaaacc agcatcacca cagcatgtgc 720 tggtacccag actgcagtca tcaccaggat agcaagctct caaaccacga tttggtccag 780 atcgaccact actcagactg acatggatga gaacattctc tttcctcgag gaactcaatc 840 tacagaaggg tcaccagtct caaaaatgtc tgtatcgaga tcttccagtt tgaagtcttc 900 ctcctctgtg tcttcccaag gctctgtggc aagctccact ggttctcccg cttccatcag 960 aaccactgac ttccacaatc ctggctatcc caagtacctg ggcacccccc acctggaact 1020 gtacttgagt gactcactta gaaacttgaa caaagagcgg caattccact tcgctggtat 1080 caggtcccgg ctcaaccaca tgctggctat gctgtcaagg agaacactct ttactgaaaa 1140 ccaccttggc cttcattctg gcaatttcag cagagttaat ttgcttgctg ttagagatgt 1200 agcactttat ccttcctatc agtaactgct ccgtgttcag actcctggtt tcttccaggc 1260 ttacagtgga catcatcagc ttcctgcttt aaaaaatatc ttatgtccct aattgccttt 1320 cttttacctg actttgtcac ctttgttgtc tttgaattct ttaggctgca tattatttta 1380 catgctttgt tttgtcatgt atataccagg tattggtttt atggtttaaa cactatggat 1440 acaggggttt gttttgcaca attttaatag tcatgcacta cataatgatg ttttggtcaa 1500 tgacagacca cgtatatgtt ggcagtctca taagattata atactgtatt tttactatac 1560 cttttctatg tttagataca aataccatta tgttacagtt gcctacagta ttcagtgcag 1620 taacatgatg tacaggtttg tagcctgttt tgcatttttc ttaggttgta tgctcttctg 1680 ttttaaaggt ttgaatcacc agcatttttg tgatcaaaat cctatttaga aaaaataaaa 1740 ctactttctg tttatctctt tagaaaaaa 1769 <210> 322 <211> 1865 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 322 tctagagccg ccgcctgccg ggactggagc gcgccgtccg ccgcggacaa gaccctggcc 60 tcacgccgga gcagccccat catgccgagg gagcgcaggg agcgggatgc gaaggagcgg 120 gacaccatga aggaggacgg cggcgcggag ttctcggctc gctccaggaa gaggaaggca 180 aacgtgaccg tttttttgca ggatccagat gaagaaatgg ccaaaatcga caggacggcg 240 agggaccagt gtgggagcca gccttgggac aataatgcag tctgtgcaga cccctgctcc 300 ctgatcccca cacctgacaa agaagatgat gaccgggttt acccaaactc aacgtgcgag 360 cctcggatta ttgcaccatc cagaggctcc ccgctgcctg tactgagctg ggcaaataga 420 gaggaagtct ggaaaatcat gttaaacaag gaaaagacat acttaaggga tcagcacttt 480 cttgagcaac accctcttct gcagccaaaa atgcgagcaa ttcttctgga ttggttaatg 540 gaggtgtgtg aagtctataa acttcacagg gagacctttt acttggcaca agatttcttt 600 gaccggtata tggcgacaca agaaaatgtt gtaaaaactc ttttacagct tattgggatt 660 tcatctttat ttattgcagc caaacttgag gaaatctatc ctccaaagtt gcaccagttt 720 gcgtatgtga cagatggagc ttgttcagga gatgaaattc tcaccatgga attaatgatt 780 atgaaggccc ttaagtggcg tttaagtccc ctgactattg tgtcctggct gaatgtatac 840 atgcaggttg catatctaaa tgacttacat gaagtgctac tgccgcagta tccccagcaa 900 atctttatac agattgcaga gctgttggat ctctgtgtcc tggatgttga ctgccttgaa 960 tttccttatg gtatacttgc tgcttcggcc ttgtatcatt tctcgtcatc tgaattgatg 1020 caaaaggttt cagggtatca gtggtgcgac atagagaact gtgtcaagtg gatggttcca 1080 tttgccatgg ttataaggga gacggggagc tcaaaactga agcacttcag gggcgtcgct 1140 gatgaagatg cacacaacat acagacccac agagacagct tggatttgct ggacaaagcc 1200 cgagcaaaga aagccatgtt gtctgaacaa aatagggctt ctcctctccc cagtgggctc 1260 ctcaccccgc cacagagcgg taagaagcag agcagcgggc cggaaatggc gtgaccaccc 1320 catccttctc caccaaagac agttgcgcgc ctgctccacg ttctcttctg tctgttgcag 1380 cggaggcgtg cgtttgcttt tacagatatc tgaatggaag agtgtttctt ccacaacaga 1440 agtatttctg tggatggcat caaacagggc aaagtgtttt ttattgaatg cttataggtt 1500 ttttttaaat aagtgggtca agtacaccag ccacctccag acaccagtgc gtgctcccga 1560 tgctgctatg gaaggtgcta cttgacctaa gggactccca caacaacaaa agcttgaagc 1620 tgtggagggc cacggtggcg tggctctcct cgcaggtgtt ctgggctccg ttgtaccaag 1680 tggagcaggt ggttgcgggc aagcgttgtg cagagcccat agccagctgg gcagggggct 1740 gccctctcca cattatcagt tgacagtgta caatgccttt gatgaactgt tttgtaagtg 1800 ctgctatatc tatccatttt ttaataaaga taatactgtt tttgagacaa aaaaaaaaaa 1860 aaaaa 1865 <210> 323 <211> 600 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 323 Glu Phe Ser Gly Leu Pro Ser Gly Ile Ala Glu Val Ser Gly Glu Ser 1 5 10 15 Ser Arg Ala Glu Ile Gly Ser Ser Leu Pro Ser Gly Ala Tyr Tyr Gly 20 25 30 Ser Gly Thr Pro Ser Ser Phe Pro Thr Val Ser Leu Val Asp Arg Thr 35 40 45 Leu Val Glu Ser Val Thr Gln Ala Pro Thr Ala Gln Glu Ala Gly Glu 50 55 60 Gly Pro Ser Gly Ile 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His Leu Tyr Ala Leu Val Leu Val Asn Asn Lys Ile Ser Lys 115 120 125 Ile His Glu Lys Ala Phe Ser Pro Leu Arg Lys Leu Gln Lys Leu Tyr 130 135 140 Ile Ser Lys Asn His Leu Val Glu Ile Pro Pro Asn Leu Pro Ser Ser 145 150 155 160 Leu Val Glu Leu Arg Ile His Asp Asn Arg Ile Arg Lys Val Pro Lys 165 170 175 Gly Val Phe Ser Gly Leu Arg Asn Met Asn Cys Ile Glu Met Gly Gly 180 185 190 Asn Pro Leu Glu Asn Ser Gly Phe Glu Pro Gly Ala Phe Asp Gly Leu 195 200 205 Lys Leu Asn Tyr Leu Arg Ile Ser Glu Ala Lys Leu Thr Gly Ile Pro 210 215 220 Lys Asp Leu Pro Glu Thr Leu Asn Glu Leu His Leu Asp His Asn Lys 225 230 235 240 Ile Gln Ala Ile Glu Leu Glu Asp Leu Leu Arg Tyr Ser Lys Leu Tyr 245 250 255 Arg Leu Gly Leu Gly His Asn Gln Ile Arg Met Ile Glu Asn Gly Ser 260 265 270 Leu Ser Phe Leu Pro Thr Leu Arg Glu Leu His Leu Asp Asn Asn Lys 275 280 285 Leu Ala Arg Val Pro Ser Gly Leu Pro Asp Leu Lys Leu Leu Gln Val 290 295 300 Val Tyr Leu His Ser Asn Asn Ile Thr Lys Val Gly Val Asn Asp Phe 305 310 315 320 Cys Pro Met Gly Phe Gly Val Lys Arg Ala Tyr Tyr Asn Gly Ile Ser 325 330 335 Leu Phe Asn Asn Pro Val Pro Tyr Trp Glu Val Gln Pro Ala Thr Phe 340 345 350 Arg Cys Val Thr Asp Arg Leu Ala Ile Gln Phe Gly Asn Tyr Lys Lys 355 360 365 <210> 355 <211> 161 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 355 Met Asp Asp Ile Tyr Lys Ala Ala Val Glu Gln Leu Thr Glu Glu Gln 1 5 10 15 Lys Asn Glu Phe Lys Ala Ala Phe Asp Ile Phe Val Leu Gly Ala Glu 20 25 30 Asp Gly Cys Ile Ser Thr Lys Glu Leu Gly Lys Val Met Arg Met Leu 35 40 45 Gly Gln Asn Pro Thr Pro Glu Glu Leu Gln Glu Met Ile Asp Glu Val 50 55 60 Asp Glu Asp Gly Ser Gly Thr Val Asp Phe Asp Glu Phe Leu Val Met 65 70 75 80 Met Val Arg Cys Met Lys Asp Asp Ser Lys Gly Lys Ser Glu Glu Glu 85 90 95 Leu Ser Asp Leu Phe Arg Met Phe Asp Lys Asn Ala Asp Gly Tyr Ile 100 105 110 Asp Leu Asp Glu Leu Lys Ile Met Leu Gln Ala Thr Gly Glu Thr Ile 115 120 125 Thr Glu Asp Asp Ile Glu Glu Leu Met Lys Asp Gly Asp Lys Asn Asn 130 135 140 Asp Gly Arg Ile Asp Tyr Asp Glu Phe Leu Glu Phe Met Lys Gly Val 145 150 155 160 Glu

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｍ 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (72)発明者 木村 徹 大阪府大阪市此花区春日出中３丁目１番98 号 住友製薬株式会社内 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA36 DA77 4B024 AA01 AA11 BA80 CA01 CA09 HA12 4B063 QA01 QA18 QA19 QQ01 QQ08 QQ42 QQ52 QR08 QR42 QR55 QR62 QR82 QS25 QS34 QS36 QX02 4C084 AA17 NA14 ZA961

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、
   9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、2
   1、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、3
   3、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、4
   5、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、5
   7、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、6
   9、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、8
   1、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、9
   3、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、10
   4、105、106、107、108、109、110、111、112、113、11
   4、115、116、117、118、119、120、121、122、123、12
   4、125、126、127、128、129、130、131、132、133、13
   4、135、136、137、138、139、140、141、142、143、14
   4、145、146、147、148、149、150、151、152、153、15
   4、155、156、157、158、159、160、161、162、163、16
   4、165、166、167、168、169、170、171、172、173、17
   4、175、176、177、178、179、180、181、182、183、18
   4、185、186、187、188、189、190、191、192、193、19
   4、195、196、197、198、199、200、201、202、203、20
   4、205、206、207、208、209、210、211、212、213、21
   4、215、216、217、218、219、220、221、222、223、22
   4、225、226、227、228、229、230、231、232、233、23
   4、235、236、237、238、239、240、241、242、243、24
   4、245、246、247、248、249、250、251、252、253、25
   4、255、256、257、258、259、260、261、262、263、26
   4、265、266、267、268、269、270、271、272、273、27
   4、275、276、277、278、279、280、281、282、283、28
   4、285、286、287、288、289、290、291、292、293、29
   4、295、296、297、298、299、300、301、302、303、30
   4、305、306、307、308、309、310、311、312、313、31
   4、315、316、317、318、319、320、321、又は322のい
   ずれかに記載の塩基配列において、連続する少なくとも
   15塩基を有するポリヌクレオチド及び／またはそれに相
   補的なポリヌクレオチドからなる、破骨細胞の分化・活
   性化の亢進に関連した骨代謝異常疾患の疾患マーカー。
2. 【請求項２】 破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連し
   た骨代謝異常疾患の検出においてプローブまたはプライ
   マーとして使用される請求項１記載の疾患マーカー。
3. 【請求項３】 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を
   含む、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝
   異常疾患の検出方法： （ａ）被験者の生体試料から調製されたRNAまたはそれ
   から転写された相補的なポリヌクレオチドと請求項１ま
   たは２に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
   （ｂ）該疾患マーカーに特異的に結合した生体試料由来
   のRNAまたはそれから転写された相補的なポリヌクレオ
   チドを、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
   （ｃ）（ｂ）の測定結果に基づいて、破骨細胞の分化・
   活性化の亢進に関連した骨代謝異常疾患の罹患を判断す
   る工程。
4. 【請求項４】 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を
   含む、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝
   異常疾患の検出方法： （ａ）被験者の生体試料から調製されたRNAまたはそれ
   から転写された相補的なポリヌクレオチドと、請求項１
   または２に記載の疾患マーカーのうち、配列番号：1、
   2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、1
   6、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、2
   8、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、4
   0、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、5
   2、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、6
   4、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、7
   6、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、8
   8、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、10
   0、101、102、103、104、105、106、107、108、109、11
   0、111、112、113、114、115、116、117、118、119、12
   0、121、122、123、124、125、126、127、128、129、13
   0、131、132、133、134、135、136、137、138、139、14
   0、141、142、143、144、145、146、147、148、149、19
   8、199、200、201、202、203、204、205、206、207、20
   8、209、210、211、212、213、214、215、216、217、21
   8、219、220、221、222、223、224、225、226、227、22
   8、229、230、231、232、233、234、235、236、237、23
   8、239、240、241、242、243、244、245、246、247、24
   8、249、250、251、252、253、254、255、256、257、25
   8、259、260、261、262、263、264、265、266、267、26
   8、269、270、271、272、273、274、275、276、277、27
   8、279、280、281、282、283、284、285、286、287、28
   8、289、290、291、292、293、294、295、296、297、29
   8、299、300、または301に記載の塩基配列に基づく疾患
   マーカーとを結合させる工程、（ｂ）上記疾患マーカー
   に特異的に結合した生体試料由来のRNAまたはそれから
   転写された相補的なポリヌクレオチドを、上記疾患マー
   カーを指標として測定する工程、（ｃ）（ｂ）で得られ
   る被験者の測定結果が、正常な生体試料について得られ
   る結果に比して疾患マーカーへの結合量が増大している
   ことを指標として、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関
   連した骨代謝異常疾患の罹患を判断する工程。
5. 【請求項５】 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を
   含む、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝
   異常疾患の検出方法： （ａ）被験者の生体試料から調製されたRNAまたはそれ
   から転写された相補的なポリヌクレオチドと、請求項１
   または２に記載の疾患マーカーのうち、配列番号：15
   0、151、152、153、154、155、156、157、158、159、16
   0、161、162、163、164、165、166、167、168、169、17
   0、171、172、173、174、175、176、177、178、179、18
   0、181、182、183、184、185、186、187、188、189、19
   0、191、192、193、194、195、196、197、302、303、30
   4、305、306、307、308、309、310、311、312、313、31
   4、315、316、317、318、319、320、321、又は322に記
   載の塩基配列に基づく疾患マーカーとを結合させる工
   程、（ｂ）上記疾患マーカーに特異的に結合した生体試
   料由来のRNAまたはそれから転写された相補的なポリヌ
   クレオチドを、上記疾患マーカーを指標として測定する
   工程、（ｃ）（ｂ）で得られる被験者の測定結果が、正
   常な生体試料について得られる結果に比して疾患マーカ
   ーへの結合量が減少していることを指標として、破骨細
   胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝異常疾患の罹
   患を判断する工程。
6. 【請求項６】 配列番号：323、324、325、326、327、3
   28、329、330、331、332、333、334、335、336、337、3
   38、339、340、341、342、343、344、345、346、347、3
   48、349、350、351、352、353、354、または355に記載
   のアミノ酸配列を有するタンパク質を認識する抗体を有
   する破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝異
   常疾患の疾患マーカー。
7. 【請求項７】 破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連し
   た骨代謝異常疾患の検出においてプローブとして使用さ
   れる請求項６記載の疾患マーカー。
8. 【請求項８】 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を
   含む、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝
   異常疾患の検出方法： （ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と請
   求項６または７に記載の疾患マーカーとを結合させる工
   程、（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のタ
   ンパク質またはその部分ペプチドを、上記疾患マーカー
   を指標として測定する工程、（ｃ）（ｂ）の測定結果に
   基づいて、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨
   代謝異常疾患の罹患を判断する工程。
9. 【請求項９】 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を
   含む、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝
   異常疾患の検出方法： （ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と、
   請求項６または７に記載の疾患マーカーのうち配列番
   号：323、324、325、326、327、328、329、330、331、3
   32、333、334、335、336、337、338、339、340、または
   341に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質を認識す
   る抗体を有する疾患マーカーとを結合させる工程 （ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のタンパ
   ク質またはその部分ペプチドを、上記疾患マーカーを指
   標として測定する工程、 （ｃ）（ｂ）で得られる被験者の測定結果が、正常な生
   体試料について得られる結果に比して疾患マーカーへの
   結合量が増大していることを指標として、破骨細胞の分
   化・活性化の亢進に関連した骨代謝異常疾患の罹患を判
   断する工程。
10. 【請求項１０】 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）
    を含む、破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代
    謝異常疾患の検出方法： （ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と、
    請求項６または７に記載の疾患マーカーのうち配列番
    号：342、343、344、345、346、347、348、349、350、3
    51、352、353、354、または355に記載のアミノ酸配列を
    有するタンパク質を認識する抗体を有する疾患マーカー
    とを結合させる工程、（ｂ）該疾患マーカーに結合した
    生体試料由来のタンパク質またはその部分ペプチドを、
    上記疾患マーカーを指標として測定する工程、（ｃ）
    （ｂ）で得られる被験者の測定結果が、正常な生体試料
    について得られる結果に比して疾患マーカーへの結合量
    が減少していることを指標として、破骨細胞の分化・活
    性化の亢進に関連した骨代謝異常疾患の罹患を判断する
    工程。
11. 【請求項１１】 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）
    を含む、配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、1
    1、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、2
    3、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、3
    5、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、4
    7、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、5
    9、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、7
    1、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、8
    3、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、9
    5、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、1
    06、107、108、109、110、111、112、113、114、115、1
    16、117、118、119、120、121、122、123、124、125、1
    26、127、128、129、130、131、132、133、134、135、1
    36、137、138、139、140、141、142、143、144、145、1
    46、147、148、149、150、151、152、153、154、155、1
    56、157、158、159、160、161、162、163、164、165、1
    66、167、168、169、170、171、172、173、174、175、1
    76、177、178、179、180、181、182、183、184、185、1
    86、187、188、189、190、191、192、193、194、195、1
    96、197、198、199、200、201、202、203、204、205、2
    06、207、208、209、210、211、212、213、214、215、2
    16、217、218、219、220、221、222、223、224、225、2
    26、227、228、229、230、231、232、233、234、235、2
    36、237、238、239、240、241、242、243、244、245、2
    46、247、248、249、250、251、252、253、254、255、2
    56、257、258、259、260、261、262、263、264、265、2
    66、267、268、269、270、271、272、273、274、275、2
    76、277、278、279、280、281、282、283、284、285、2
    86、287、288、289、290、291、292、293、294、295、2
    96、297、298、299、300、301、302、303、304、305、3
    06、307、308、309、310、311、312、313、314、315、3
    16、317、318、319、320、321、又は322のいずれかに記
    載の塩基配列を有する遺伝子の発現を制御する物質のス
    クリーニング方法： (ａ) 被験物質と配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、
    9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、2
    1、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、3
    3、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、4
    5、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、5
    7、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、6
    9、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、8
    1、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、9
    3、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、10
    4、105、106、107、108、109、110、111、112、113、11
    4、115、116、117、118、119、120、121、122、123、12
    4、125、126、127、128、129、130、131、132、133、13
    4、135、136、137、138、139、140、141、142、143、14
    4、145、146、147、148、149、150、151、152、153、15
    4、155、156、157、158、159、160、161、162、163、16
    4、165、166、167、168、169、170、171、172、173、17
    4、175、176、177、178、179、180、181、182、183、18
    4、185、186、187、188、189、190、191、192、193、19
    4、195、196、197、198、199、200、201、202、203、20
    4、205、206、207、208、209、210、211、212、213、21
    4、215、216、217、218、219、220、221、222、223、22
    4、225、226、227、228、229、230、231、232、233、23
    4、235、236、237、238、239、240、241、242、243、24
    4、245、246、247、248、249、250、251、252、253、25
    4、255、256、257、258、259、260、261、262、263、26
    4、265、266、267、268、269、270、271、272、273、27
    4、275、276、277、278、279、280、281、282、283、28
    4、285、286、287、288、289、290、291、292、293、29
    4、295、296、297、298、299、300、301、302、303、30
    4、305、306、307、308、309、310、311、312、313、31
    4、315、316、317、318、319、320、321、又は322のい
    ずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子を発現可能な細
    胞とを接触させる工程、(ｂ) 被験物質を接触させた細
    胞の、配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、1
    1、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、2
    3、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、3
    5、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、4
    7、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、5
    9、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、7
    1、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、8
    3、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、9
    5、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、1
    06、107、108、109、110、111、112、113、114、115、1
    16、117、118、119、120、121、122、123、124、125、1
    26、127、128、129、130、131、132、133、134、135、1
    36、137、138、139、140、141、142、143、144、145、1
    46、147、148、149、150、151、152、153、154、155、1
    56、157、158、159、160、161、162、163、164、165、1
    66、167、168、169、170、171、172、173、174、175、1
    76、177、178、179、180、181、182、183、184、185、1
    86、187、188、189、190、191、192、193、194、195、1
    96、197、198、199、200、201、202、203、204、205、2
    06、207、208、209、210、211、212、213、214、215、2
    16、217、218、219、220、221、222、223、224、225、2
    26、227、228、229、230、231、232、233、234、235、2
    36、237、238、239、240、241、242、243、244、245、2
    46、247、248、249、250、251、252、253、254、255、2
    56、257、258、259、260、261、262、263、264、265、2
    66、267、268、269、270、271、272、273、274、275、2
    76、277、278、279、280、281、282、283、284、285、2
    86、287、288、289、290、291、292、293、294、295、2
    96、297、298、299、300、301、302、303、304、305、3
    06、307、308、309、310、311、312、313、314、315、3
    16、317、318、319、320、321、又は322のいずれかに記
    載の塩基配列を有する遺伝子の発現量を測定し、該発現
    量を被験物質を接触させない対照細胞の上記対応する遺
    伝子の発現量と比較する工程、(ｃ) （ｂ）の比較結果
    に基づいて、配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、9、1
    0、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、2
    2、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、3
    4、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、4
    6、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、5
    8、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、7
    0、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、8
    2、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、9
    4、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、10
    5、106、107、108、109、110、111、112、113、114、11
    5、116、117、118、119、120、121、122、123、124、12
    5、126、127、128、129、130、131、132、133、134、13
    5、136、137、138、139、140、141、142、143、144、14
    5、146、147、148、149、150、151、152、153、154、15
    5、156、157、158、159、160、161、162、163、164、16
    5、166、167、168、169、170、171、172、173、174、17
    5、176、177、178、179、180、181、182、183、184、18
    5、186、187、188、189、190、191、192、193、194、19
    5、196、197、198、199、200、201、202、203、204、20
    5、206、207、208、209、210、211、212、213、214、21
    5、216、217、218、219、220、221、222、223、224、22
    5、226、227、228、229、230、231、232、233、234、23
    5、236、237、238、239、240、241、242、243、244、24
    5、246、247、248、249、250、251、252、253、254、25
    5、256、257、258、259、260、261、262、263、264、26
    5、266、267、268、269、270、271、272、273、274、27
    5、276、277、278、279、280、281、282、283、284、28
    5、286、287、288、289、290、291、292、293、294、29
    5、296、297、298、299、300、301、302、303、304、30
    5、306、307、308、309、310、311、312、313、314、31
    5、316、317、318、319、320、321、又は322のいずれか
    に記載の塩基配列を有する遺伝子の発現量を変動させる
    被験物質を選択する工程。
12. 【請求項１２】 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）
    を含む、配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、1
    1、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、2
    3、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、3
    5、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、4
    7、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、5
    9、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、7
    1、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、8
    3、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、9
    5、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、1
    06、107、108、109、110、111、112、113、114、115、1
    16、117、118、119、120、121、122、123、124、125、1
    26、127、128、129、130、131、132、133、134、135、1
    36、137、138、139、140、141、142、143、144、145、1
    46、147、148、149、198、199、200、201、202、203、2
    04、205、206、207、208、209、210、211、212、213、2
    14、215、216、217、218、219、220、221、222、223、2
    24、225、226、227、228、229、230、231、232、233、2
    34、235、236、237、238、239、240、241、242、243、2
    44、245、246、247、248、249、250、251、252、253、2
    54、255、256、257、258、259、260、261、262、263、2
    64、265、266、267、268、269、270、271、272、273、2
    74、275、276、277、278、279、280、281、282、283、2
    84、285、286、287、288、289、290、291、292、293、2
    94、295、296、297、298、299、300、または301のいず
    れかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を抑制する
    物質のスクリーニング方法： (ａ) 被験物質と配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、
    9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、2
    1、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、3
    3、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、4
    5、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、5
    7、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、6
    9、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、8
    1、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、9
    3、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、10
    4、105、106、107、108、109、110、111、112、113、11
    4、115、116、117、118、119、120、121、122、123、12
    4、125、126、127、128、129、130、131、132、133、13
    4、135、136、137、138、139、140、141、142、143、14
    4、145、146、147、148、149、198、199、200、201、20
    2、203、204、205、206、207、208、209、210、211、21
    2、213、214、215、216、217、218、219、220、221、22
    2、223、224、225、226、227、228、229、230、231、23
    2、233、234、235、236、237、238、239、240、241、24
    2、243、244、245、246、247、248、249、250、251、25
    2、253、254、255、256、257、258、259、260、261、26
    2、263、264、265、266、267、268、269、270、271、27
    2、273、274、275、276、277、278、279、280、281、28
    2、283、284、285、286、287、288、289、290、291、29
    2、293、294、295、296、297、298、299、300、または3
    01のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子を発現可
    能な細胞とを接触させる工程、(ｂ) 被験物質を接触さ
    せた細胞の、配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、9、1
    0、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、2
    2、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、3
    4、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、4
    6、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、5
    8、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、7
    0、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、8
    2、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、9
    4、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、10
    5、106、107、108、109、110、111、112、113、114、11
    5、116、117、118、119、120、121、122、123、124、12
    5、126、127、128、129、130、131、132、133、134、13
    5、136、137、138、139、140、141、142、143、144、14
    5、146、147、148、149、198、199、200、201、202、20
    3、204、205、206、207、208、209、210、211、212、21
    3、214、215、216、217、218、219、220、221、222、22
    3、224、225、226、227、228、229、230、231、232、23
    3、234、235、236、237、238、239、240、241、242、24
    3、244、245、246、247、248、249、250、251、252、25
    3、254、255、256、257、258、259、260、261、262、26
    3、264、265、266、267、268、269、270、271、272、27
    3、274、275、276、277、278、279、280、281、282、28
    3、284、285、286、287、288、289、290、291、292、29
    3、294、295、296、297、298、299、300、または301の
    いずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現量を測
    定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞の上
    記対応する遺伝子の発現量と比較する工程、(ｃ)
    （ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：1、2、3、4、
    5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、1
    8、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、3
    0、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、4
    2、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、5
    4、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、6
    6、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、7
    8、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、9
    0、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、1
    02、103、104、105、106、107、108、109、110、111、1
    12、113、114、115、116、117、118、119、120、121、1
    22、123、124、125、126、127、128、129、130、131、1
    32、133、134、135、136、137、138、139、140、141、1
    42、143、144、145、146、147、148、149、198、199、2
    00、201、202、203、204、205、206、207、208、209、2
    10、211、212、213、214、215、216、217、218、219、2
    20、221、222、223、224、225、226、227、228、229、2
    30、231、232、233、234、235、236、237、238、239、2
    40、241、242、243、244、245、246、247、248、249、2
    50、251、252、253、254、255、256、257、258、259、2
    60、261、262、263、264、265、266、267、268、269、2
    70、271、272、273、274、275、276、277、278、279、2
    80、281、282、283、284、285、286、287、288、289、2
    90、291、292、293、294、295、296、297、298、299、3
    00、または301のいずれかに記載の塩基配列を有する遺
    伝子の発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
13. 【請求項１３】 下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）
    を含む、配列番号：150、151、152、153、154、155、15
    6、157、158、159、160、161、162、163、164、165、16
    6、167、168、169、170、171、172、173、174、175、17
    6、177、178、179、180、181、182、183、184、185、18
    6、187、188、189、190、191、192、193、194、195、19
    6、197、302、303、304、305、306、307、308、309、31
    0、311、312、313、314、315、316、317、318、319、32
    0、321、又は322のいずれかに記載の塩基配列を有する
    遺伝子の発現を増加させる物質のスクリーニング方法： (ａ) 被験物質と配列番号：150、151、152、153、154、
    155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、
    165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、
    175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、
    185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、
    195、196、197、302、303、304、305、306、307、308、
    309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、
    319、320、321、又は322のいずれかに記載の塩基配列を
    有する遺伝子を発現可能な細胞とを接触させる工程、
    (ｂ) 被験物質を接触させた細胞の、配列番号：150、15
    1、152、153、154、155、156、157、158、159、160、16
    1、162、163、164、165、166、167、168、169、170、17
    1、172、173、174、175、176、177、178、179、180、18
    1、182、183、184、185、186、187、188、189、190、19
    1、192、193、194、195、196、197、302、303、304、30
    5、306、307、308、309、310、311、312、313、314、31
    5、316、317、318、319、320、321、又は322のいずれか
    に記載の塩基配列を有する遺伝子の発現量を測定し、該
    発現量を被験物質を接触させない対照細胞の上記対応す
    る遺伝子の発現量と比較する工程、(ｃ) （ｂ）の比較
    結果に基づいて、配列番号：150、151、152、153、15
    4、155、156、157、158、159、160、161、162、163、16
    4、165、166、167、168、169、170、171、172、173、17
    4、175、176、177、178、179、180、181、182、183、18
    4、185、186、187、188、189、190、191、192、193、19
    4、195、196、197、302、303、304、305、306、307、30
    8、309、310、311、312、313、314、315、316、317、31
    8、319、320、321、又は322のいずれかに記載の塩基配
    列を有する遺伝子の発現量を増加させる被験物質を選択
    する工程。
14. 【請求項１４】 破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連
    した骨代謝異常疾患の改善または治療剤の有効成分を探
    索するための方法である、請求項１１乃至１３のいずれ
    かに記載のスクリーニング方法。
15. 【請求項１５】 配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、
    9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、2
    1、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、3
    3、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、4
    5、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、5
    7、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、6
    9、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、8
    1、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、9
    3、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、10
    4、105、106、107、108、109、110、111、112、113、11
    4、115、116、117、118、119、120、121、122、123、12
    4、125、126、127、128、129、130、131、132、133、13
    4、135、136、137、138、139、140、141、142、143、14
    4、145、146、147、148、149、198、199、200、201、20
    2、203、204、205、206、207、208、209、210、211、21
    2、213、214、215、216、217、218、219、220、221、22
    2、223、224、225、226、227、228、229、230、231、23
    2、233、234、235、236、237、238、239、240、241、24
    2、243、244、245、246、247、248、249、250、251、25
    2、253、254、255、256、257、258、259、260、261、26
    2、263、264、265、266、267、268、269、270、271、27
    2、273、274、275、276、277、278、279、280、281、28
    2、283、284、285、286、287、288、289、290、291、29
    2、293、294、295、296、297、298、299、300、または3
    01のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を
    抑制する物質を有効成分とする破骨細胞の分化・活性化
    の亢進に関連した骨代謝異常疾患の改善または治療剤。
16. 【請求項１６】 配列番号：1、2、3、4、5、6、7、8、
    9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、2
    1、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、3
    3、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、4
    5、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、5
    7、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、6
    9、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、8
    1、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、9
    3、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、10
    4、105、106、107、108、109、110、111、112、113、11
    4、115、116、117、118、119、120、121、122、123、12
    4、125、126、127、128、129、130、131、132、133、13
    4、135、136、137、138、139、140、141、142、143、14
    4、145、146、147、148、149、198、199、200、201、20
    2、203、204、205、206、207、208、209、210、211、21
    2、213、214、215、216、217、218、219、220、221、22
    2、223、224、225、226、227、228、229、230、231、23
    2、233、234、235、236、237、238、239、240、241、24
    2、243、244、245、246、247、248、249、250、251、25
    2、253、254、255、256、257、258、259、260、261、26
    2、263、264、265、266、267、268、269、270、271、27
    2、273、274、275、276、277、278、279、280、281、28
    2、283、284、285、286、287、288、289、290、291、29
    2、293、294、295、296、297、298、299、300、または3
    01のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を
    抑制する物質が請求項１２に記載のスクリーニング法に
    より得られるものである、請求項１５記載の骨代謝異常
    疾患の改善または治療剤。
17. 【請求項１７】 配列番号：150、151、152、153、15
    4、155、156、157、158、159、160、161、162、163、16
    4、165、166、167、168、169、170、171、172、173、17
    4、175、176、177、178、179、180、181、182、183、18
    4、185、186、187、188、189、190、191、192、193、19
    4、195、196、197、302、303、304、305、306、307、30
    8、309、310、311、312、313、314、315、316、317、31
    8、319、320、321、又は322のいずれかに記載の塩基配
    列を有する遺伝子の発現を増加させる物質を有効成分と
    する破骨細胞の分化・活性化の亢進に関連した骨代謝異
    常疾患の改善または治療剤。
18. 【請求項１８】 配列番号：150、151、152、153、15
    4、155、156、157、158、159、160、161、162、163、16
    4、165、166、167、168、169、170、171、172、173、17
    4、175、176、177、178、179、180、181、182、183、18
    4、185、186、187、188、189、190、191、192、193、19
    4、195、196、197、302、303、304、305、306、307、30
    8、309、310、311、312、313、314、315、316、317、31
    8、319、320、321、又は322のいずれかに記載の塩基配
    列を有する遺伝子の発現を増加させる物質が請求項１３
    に記載のスクリーニング法により得られるものである、
    請求項１７記載の骨代謝異常疾患の改善または治療剤。