JP2002514764A - Indicator strip for detecting antibodies in serum - Google Patents
Indicator strip for detecting antibodies in serumInfo
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Abstract
(57)【要約】 本発明は、患者の血清中の抗体を検出するための指示片（１）であって、１つまたは複数の疾病に対する抗原が固定され、そこで患者の血清が添加されると、対応する抗原が該疾病に相当する抗体に粘着し、該抗体が続く反応において着色ステインの形で可視化する、１つまたは複数の区域（５）を含んでなる指示片に関する。ヒト抗体が異なった濃度で固定されている、本発明の別の区域（６）が、前記抗体を定性的のみならず、その量をも決定するできるように提供される。生成する着色ステインを評価することによって、血清中の抗体の濃度を推定することが可能になる。 (57) [Summary] The present invention relates to an indicator (1) for detecting an antibody in a serum of a patient, wherein an antigen against one or more diseases is fixed, and the serum of the patient is added thereto. And an indicator strip comprising one or more zones (5) in which the corresponding antigen adheres to the antibody corresponding to the disease and the antibody visualizes in the subsequent reaction in the form of colored stains. Another area of the invention (6), in which the human antibodies are immobilized at different concentrations, is provided so that the antibodies can be determined not only qualitatively, but also in their quantity. By assessing the stain produced, it is possible to estimate the concentration of the antibody in the serum.
Description
【０００１】[0001]
本発明は、患者の血清中の抗体を検出するための指示片であって、１つまたは
複数の疾病に対する抗原が固定化された、１つまたは複数の区域を含んでなり、
そこで患者の血清が添加されると、対応する抗原が該疾病に相当する抗体に粘着
し、該抗体が続く反応において着色ステインの形で可視化される前記指示片に関
する。The present invention provides an indicator for detecting an antibody in a patient's serum, comprising one or more areas on which antigens for one or more diseases are immobilized,
Thus, when the patient's serum is added, the corresponding antigen adheres to the antibody corresponding to the disease and the antibody relates to the indicator strip which is visualized in the subsequent reaction in the form of a colored stain.
【０００２】[0002]
このような酵素免疫アッセイと称される、血液中の抗体の検査のための指示片
は、ドイツ公開ＤＥ３３４６７９５Ａ１からすでに公知であり、特許請求の範囲
の請求項１の前提部を構成する。そこに記載された検査は、ウイルス、細菌等の
病原菌よって引き起こされる感染のような疾病の血清学的検出に役立つ。前記検
査は、疾病が存在するとき生体が病原菌抗原にぴったり適合する抗体を血清（血
液）中につくる（それらは抗原に結合し、無害化する）事実を利用する。従って
、このような疾病特異的な抗体が血清中に検出されうるならば、患者は現在また
は過去にその疾病を持っていたことが間接的に導かれる。その作用機構のために
、前記検査は所謂、間接測定方法に属する。何故なら、検査は病原菌（抗原）を
それ自体検出するのではなく、病原菌に応答して生体によってつくられる特異的
な抗体を検出するからである。Such an indicator for the examination of antibodies in the blood, called an enzyme immunoassay, is already known from DE 33 47 595 A1 and constitutes a preamble of claim 1 of the appended claims. The tests described therein are useful for the serological detection of diseases such as infections caused by pathogens such as viruses, bacteria and the like. The test makes use of the fact that the body produces antibodies in the serum (blood) that exactly match the pathogen antigens in the presence of the disease, which binds and renders them harmless. Thus, if such disease-specific antibodies could be detected in the serum, it would indirectly indicate that the patient had present or past disease. Due to its mechanism of action, said inspection belongs to the so-called indirect measurement method. This is because the test does not detect pathogens (antigens) per se, but rather detects specific antibodies produced by the organism in response to the pathogens.
【０００３】 前記公知の検査片を製造するために、まず抗原、すなわち既知の疾病の原因と
なる蛋白を種々の疾病について複数の検査区域（特に、ニトロセルロースフィル
ムまたはポリアミドフィルム）の固相上に塗付し、固定化する。その後、抗原に
よって占有されていないフィルムの吸着部位が飽和される。前記検査を実施する
ためには、患者の血清を滴らす。該患者の血清中に、病原菌に特異的な抗体が存
在するかぎり、沈積した疾病に対応する抗原と特異的な結合（すなわち、抗原抗
体反応、Ａｇ−Ａｋ−または免疫反応）を形成する。それから抗原と反応した抗
体は、続く反応で例えば、特定の酵素コンジュゲート（接合体）との処理、およ
びその後該コンジュゲート中に含まれる酵素の基質と色素前駆体とを加えること
によって可視化される。その結果、明瞭に見え、そしてフィルムにしっかり付着
する着色ステイン（「ブロット」、または免疫反応の後では「免疫ブロット」と
呼ばれる）がフィルム上に形成する。上記の処理工程の各々の後で、過剰な試薬
が付加的な工程で洗浄によって除去される。最後に、フィルム上の暗色染色（Ｄ
ｕｎｋｅｌｆａｒｂｕｎｇ）を可視的に評価する。以前に罹った、または現在あ
る疾病に対応する区域は、染色されるが、一方他の区域は、染色されない。In order to produce the known test strips, an antigen, ie a protein causing a known disease, is first deposited on a solid phase in a plurality of test zones (in particular nitrocellulose films or polyamide films) for various diseases. Apply and fix. Thereafter, the adsorption sites of the film not occupied by the antigen are saturated. To perform the test, the patient's serum is dripped. As long as an antibody specific for the pathogenic bacterium is present in the patient's serum, it forms a specific bond with the antigen corresponding to the deposited disease (ie, antigen-antibody reaction, Ag-Ak- or immune reaction). Antibodies that have reacted with the antigen are then visualized in a subsequent reaction, for example, by treatment with a specific enzyme conjugate (conjugate) and then adding the enzyme substrate and the dye precursor contained in the conjugate. . As a result, a colored stain (called a "blot", or after an immune reaction, an "immunoblot") is formed on the film that is clearly visible and adheres firmly to the film. After each of the above processing steps, the excess reagent is removed by washing in an additional step. Finally, the dark stain on the film (D
unkelfarbung) is evaluated visually. Areas corresponding to previously affected or existing disease are stained, while other areas are not stained.
【０００４】[0004]
上記の方法およびそれに使用する測定片は、血清中の病原菌に特異的な抗体（
従って、疾病）を定性的に検出するのを可能にするが、定量的検出は可能にしな
い。疾病がある、或いはあったかどうか知るだけではなく、どれだけの抗体が存
在するか、すなわち、前記疾病の重症度および急性度を知ることも望ましい。The above-described method and the measuring strip used for the method are used for antibodies specific to pathogenic bacteria in serum (
Therefore, it is possible to qualitatively detect (disease), but not quantitatively. It is also desirable not only to know if there is or was a disease, but also to know how many antibodies are present, ie the severity and acuteness of the disease.
【０００５】 従って、本発明は血液中に存在する抗体の定量化を可能にする指示片を提供す
る課題を基礎におく。Accordingly, the present invention is based on the task of providing an indicator that allows the quantification of antibodies present in blood.
【０００６】[0006]
上記課題を解決するために、本発明の指示片はそれにヒト基準抗体が異なる濃
度で固定化されている別の区域が提供されていることを特徴とする。前記区域は
、免疫反応の後に続く公知の（酵素）反応の際、抗体の数に対応して染色される
。該区域と抗原区域の着色度（明度の比較）とを比較することによって、どのよ
うな疾病が存在するかのみならず血清中の抗体の量、すなわち該疾病の重症度お
よび急性度を判定することができる。In order to solve the above-mentioned problem, the indicator of the present invention is characterized in that it is provided with another area on which a human reference antibody is immobilized at different concentrations. Said area is stained corresponding to the number of antibodies during a known (enzymatic) reaction following the immune reaction. By comparing the degree of coloration (comparing the lightness) of the area and the antigen area, it is possible to determine not only what disease is present but also the amount of antibody in the serum, that is, the severity and acuteness of the disease. be able to.
【０００７】 本発明は、着色化反応（染色反応）が検査する液体（体液）からの固相に固定
化された生体固有の抗体のみならず、固相に提供された基準抗体をも均等に標識
するという、予期せずに発見された事実を利用する。酵素−基質染色反応は、生
体固有の抗体と同様に基準抗体の暗色染色をも引き起こす。基準抗体は、検査片
の固相に異なった濃度で塗付されているが、酵素−基質染色反応は、該基準抗体
のそれぞれの濃度に特徴的な着色ステインを形成するので、色の比較尺度および
それとともに固相上の抗体の濃度に対する比較標準がつくられる。この比較標準
と生体固有の抗体それぞれの暗色染色との間の視覚による色の検定によって、抗
体の定量が直接的に可能になる。従って、沈積している基準抗体の濃度を読み取
ることによって、色が同一であるなら、量も同一性と言える。生体固有の抗体の
染色強度が沈積している基準抗体の濃度の二つの染色強度間にある場合、生体固
有の抗体量もその二つの濃度の間にある値として読み取られうる。従って、免疫
性、すなわち病原菌に対する後天性の抵抗力を調べること、並びに感染病、自己
免疫病（例えば、リウマチ、アレルギー、腫瘍等）のような根底にある疾病の状
態または重症度を決定することができる。According to the present invention, not only a living body-specific antibody immobilized on a solid phase from a liquid (body fluid) to be tested for a coloring reaction (staining reaction) but also a reference antibody provided on the solid phase can be uniformly used. Take advantage of the unexpected finding of labeling. The enzyme-substrate staining reaction causes dark staining of the reference antibody as well as the native antibody. The reference antibody is applied at different concentrations to the solid phase of the test strip, but the enzyme-substrate staining reaction forms a colored stain characteristic of each concentration of the reference antibody, and thus a color comparison scale. And with it a comparison standard for the concentration of the antibody on the solid phase. A visual color assay between this reference standard and the dark staining of each of the organism-specific antibodies directly allows quantification of the antibodies. Thus, by reading the concentration of the deposited reference antibody, if the colors are the same, then the amount can be said to be the same. If the staining intensity of the organism-specific antibody is between the two staining intensities of the deposited reference antibody concentration, the amount of the organism-specific antibody can also be read as a value between the two concentrations. Thus, examining immunity, ie, acquired resistance to pathogens, and determining the state or severity of underlying diseases such as infectious diseases, autoimmune diseases (eg, rheumatism, allergies, tumors, etc.). Can be.
【０００８】 ある所定の病原菌に対する薬剤そして／または該薬剤の用量の有効性を本発明
に従い抗体の濃度を決定することによって、インキュベーション時間の後で定量
的に調べることができるので、本発明はある疾病の動的な進行具合をよりよくモ
ニターすることも可能にする。本発明は、さらに液体中の抗体を定量的に検出す
るための測定装置を提供し、該装置は直接読み取ることができ、普遍的にいつい
かなる場所でも使用することができるのみならず、安価に製造することができる
。The present invention is directed to the present invention because the efficacy of a drug and / or dose of the drug against a given pathogen can be determined quantitatively after the incubation time by determining the concentration of the antibody according to the present invention. It also allows better monitoring of the dynamic progress of the disease. The present invention further provides a measurement device for quantitatively detecting an antibody in a liquid, which device can be directly read, can be universally used at any place, and is inexpensive. Can be manufactured.
【０００９】 本発明を実施するにあたり、特定の抗原（単一の疾病を検出するための片の場
合）または特定の抗原類（複数の疾病を検出するための片の場合）が好適に、固
相に塗付される。このようにして、抗体の該固相への結合を保証する。異なった
複数の抗原を前記固相に塗付し、幾つか疾病、例えば異なった感染症を同時に検
査することができる。In carrying out the present invention, a specific antigen (in the case of detecting a single disease) or specific antigens (in the case of detecting a plurality of diseases) is preferably used. Applied to the phase. In this way, binding of the antibody to the solid phase is guaranteed. Different antigens can be applied to the solid phase to test for several diseases, eg, different infections, simultaneously.
【００１０】[0010]
本発明の１つの有利な実施の形態は、同一の亜型特異的なクラス、例えばＩｇＧ
、ＩｇＡ、ＩｇＭ等を有する基準抗体が塗付されることにある。このようにして
、検査（検定）はある所定の疾病を検査するために定量化にいたる。言い換えれ
ば、基準抗体としてある所定の亜型特異的なクラスを適用すると疾病を検出する
のに要求される決定的な基準が提供される。比較標準を備える異なった亜型特異
的な基準抗体を用いることによって、体液中に存在する亜型特異的な抗体クラス
もまた決定することができる。One advantageous embodiment of the invention is the use of the same subtype-specific class, for example IgG.
, IgA, IgM and the like. In this way, a test (assay) leads to a quantification to test for a given disease. In other words, the application of a given subtype-specific class as a reference antibody provides the definitive criteria required to detect disease. By using different subtype-specific reference antibodies with comparative standards, the subtype-specific antibody class present in the body fluid can also be determined.
【００１１】 本発明の別の実施の形態に従えば、抗体および基準抗体を検出するために、固
相を酵素コンジュゲート、例えば亜型特異的な免疫グロブリンＧ型、Ａ型、また
はＭ型（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ）等で処理することになる。このようにして、
使用した酵素コンジュゲートと比較して同一の亜型特異的なクラスが占有すると
ころの抗体および基準抗体のみが標識される。検査する液体中に存在する抗体ク
ラスを決定するのに、同一の亜型特異的なクラスの基準抗体および酵素コンジュ
ゲートを用いる。According to another embodiment of the invention, the solid phase is enzymatically conjugated to detect antibodies and reference antibodies, such as subtype-specific immunoglobulin types G, A or M ( (IgG, IgA, IgM) or the like. In this way,
Only those antibodies and reference antibodies that are occupied by the same subtype-specific class as compared to the enzyme conjugate used are labeled. The same subtype-specific class of reference antibodies and enzyme conjugates are used to determine the antibody class present in the fluid under test.
【００１２】 本発明の１つの有利な実施の形態は、基質として、好ましくはテトラメチルベ
ンジジンに基づく酵素基質が沈殿着色に用いられることにある。このようにして
、高い感度を有する、よく粘着し、安定な着色が固相上に、しかも標識された抗
体が位置する箇所のみならず、標識された基準抗体が位置する箇所にも生成する
。One advantageous embodiment of the invention consists in using an enzyme substrate, preferably based on tetramethylbenzidine, as the substrate for precipitation coloring. In this way, a highly sensitive, well-adhered, stable color is produced on the solid phase, not only where the labeled antibody is located, but also where the labeled reference antibody is located.
【００１３】 抗原としては有機物質、特にタンパク質、炭水化物、脂肪、核酸等、また同様
に無機物質も含まれ得る。このようにして、有機物質のみならず、無機物質によ
って生体内で産生される抗体が、固相に結合されるので、本発明の指示片によっ
て化学物質に対する免疫性および例えば、化学毒素による敗血症の経過の検査が
可能となる。Antigens can include organic substances, especially proteins, carbohydrates, fats, nucleic acids, etc., as well as inorganic substances. In this way, antibodies produced in vivo by inorganic as well as organic substances are bound to the solid phase, so that the indicator of the present invention provides immunity to chemicals and, for example, sepsis due to chemical toxins. The progress can be checked.
【００１４】 本発明の別の好適な実施の形態に従えば、蛍光性または放射性標識物質として
のトレーサーを使用することができる。とりわけ、このようにして、その目的の
ために特に装備された実験室内で前記検査片で測定した抗体濃度の正確な数値を
求めることが可能になり、そこで分光光度計、電気泳動装置、および／または放
射能測定装置を前記計数に使用することができる。According to another preferred embodiment of the present invention, a tracer can be used as a fluorescent or radiolabel. Among other things, this makes it possible to determine the exact value of the antibody concentration measured on the test strip in a laboratory specially equipped for that purpose, where the spectrophotometer, the electrophoresis device and / or Alternatively, a radioactivity measurement device can be used for the counting.
【００１５】 本発明の指示片の１つの好適な実施の形態は、固相が吸着フィルムとし形成さ
れることにある。こうして、抗原および基準抗体の吸着フィルムの表面上への沈
積が達成される。沈積物は、安定であるので本発明の測定片が好ましくは４℃の
環境温度で数ヶ月貯蔵できる。One preferred embodiment of the indicator of the present invention is that the solid phase is formed as an adsorption film. Thus, deposition of the antigen and the reference antibody on the surface of the adsorption film is achieved. Since the deposit is stable, the measuring strip of the present invention can be stored for several months at an ambient temperature of preferably 4 ° C.
【００１６】 本発明のさらに好適な特徴に従えば、反応区域および／または標準区域は、例
えば検査する病原菌の名称、対照ラベル、記号等のデータ区域に、分類され、例
えば印刷されている。このようにして測定片を評価するとき、その属する反応区
域が、染色を示すと、検査される疾病の１つを直接的に検出することが可能であ
る。さらに、例えば、印刷された対照ラベルを備える基準区域は、異なった濃度
の基準抗体が塗付された基準区域の再構成が確認されているので、評価によって
疾病の重症度も直接的に決定できる。このため酵素−基質染色反応によっておき
る反応区域の暗色染色と基準区域の暗色染色とを互いに比較する。According to a further preferred feature of the invention, the reaction zone and / or the standard zone are classified, for example printed, into data zones, for example the name of the pathogen to be tested, control labels, symbols, etc. When evaluating the test strip in this way, if the reaction zone to which it belongs shows staining, it is possible to directly detect one of the diseases examined. In addition, for example, a reference zone with a printed control label has been confirmed to reconstitute the reference zone with a different concentration of the reference antibody, so that the severity of the disease can also be directly determined by the evaluation. . For this purpose, the dark staining of the reaction zone caused by the enzyme-substrate staining reaction is compared with the dark staining of the reference zone.
【００１７】 複数の異なった病原菌を検出する酵素免疫アッセイのための本発明の指示片の
２つの実施例は、後の図面に例示された例に基づいて、詳細に説明される。さら
に、記載された、および／例示されたすべての特徴は、単独でまたは任意の組み
合わせで本発明の主題を構成する。Two examples of the indicator of the present invention for an enzyme immunoassay for detecting a plurality of different pathogens will be described in detail based on examples illustrated in the following drawings. Furthermore, all features described and / or illustrated, alone or in any combination, constitute the subject of the present invention.
【００１８】 図１および図２は、抗体を検出するための本発明に従う測定片の可能な実施の
形態を示す。FIGS. 1 and 2 show possible embodiments of a measuring strip according to the invention for detecting antibodies.
【００１９】 本発明の測定片１は、図１に示されており、０．４５μｍの孔径を有する、市
販のニトロセルローズフィルム材２を含む。外側の境界線３および同定区域４は
、前記ニトロセルローズフィルム２上で指示片１の大きさに印刷されている。さ
らに、上下に配置された複数の抗原区域５および抗体区域６が左および右欄にそ
れぞれ印刷されている。加えて、検査する病原菌の名称が行として配置されてい
る左側の抗原区域５の上方にそれぞれ印刷されている。対照ラベルは、異なった
濃度を表す、例えばＡからＨの文字でそれぞれ右側抗体区域６の上方に印刷され
ている。ここで選択された、検査する８個の呼吸器系病原菌の実施例の場合、こ
れは左側の欄にあるインフルエンザウイルスＡおよびＢ、アデノウイルス、肺炎
マイコプラズマ菌、百日咳菌、パラインフルエンザ１〜３、ＲＳＶ、ＨＳＶ、そ
してコクサッキーウイルスである。The measuring strip 1 of the present invention, shown in FIG. 1, comprises a commercially available nitrocellulose film material 2 having a pore size of 0.45 μm. The outer boundary 3 and the identification area 4 are printed on the nitrocellulose film 2 to the size of the indicator 1. Further, a plurality of antigen zones 5 and antibody zones 6 arranged vertically are printed on the left and right columns, respectively. In addition, the names of the pathogens to be tested are printed above each of the left antigen zones 5 arranged as rows. The control labels are printed above the right antibody zone 6, respectively, with different concentrations, for example the letters A to H, respectively. For the example of the eight respiratory pathogens to be tested, selected here, this is the influenza virus A and B, adenovirus, Mycoplasma pneumoniae, B. pertussis, parainfluenza 1-3, in the left column. RSV, HSV, and Coxsackie virus.
【００２０】 本発明の指示片の作製は、例えば、ニトロセルロースフィルム２をリン酸緩衝
液（ＰＢＳバッファ）中で湿らせることにより実施される。さらに、検査する病
原菌用の蛋白抗原の溶液は、市販の蛋白抗原から公知の様式で５〜１５ｎｇ／μ
ｌの濃度に調製される。The production of the indicator piece of the present invention is performed by, for example, moistening the nitrocellulose film 2 in a phosphate buffer (PBS buffer). Further, a solution of the protein antigen for the pathogenic bacterium to be tested is prepared in a known manner from a commercially available protein antigen at 5 to 15 ng / μm.
It is adjusted to a concentration of 1.
【００２１】 ニトロセルロースフィルム２は、続いて通常のドットブロット装置、例えばＨ
ｏｆｅｒ社製「スロットブロッター（ＳｌｏｔＢｌｏｔｔｅｒ）」にはめ込まれ
る。The nitrocellulose film 2 is subsequently coated with a conventional dot blot apparatus, for example, H
Others are fitted in "SlotBlotter".
【００２２】 引き続き、１５０μｌの希釈した蛋白抗原溶液（約５００ｎｇ〜１．５μｇタ
ンパク質に相当する）がニトロセルロースフィルム２の左側の欄の一部をなして
いる抗原区域５に塗付される。それから、連続して増加する濃度のヒト抗体を含
む溶液がニトロセルロースフィルム２の右側の欄の抗体区域６に塗付される。Subsequently, 150 μl of the diluted protein antigen solution (corresponding to about 500 ng to 1.5 μg of protein) are applied to the antigen area 5 which forms part of the left column of the nitrocellulose film 2. Then a solution containing a continuously increasing concentration of human antibody is applied to the antibody area 6 in the right column of the nitrocellulose film 2.
【００２３】 前記タンパク質溶液とヒト抗体溶液の吸着を許す反応時間の後、ニトロセルロ
ースフィルム２をＰＢＳバッファで洗浄する。After the reaction time allowing the protein solution and the human antibody solution to adsorb, the nitrocellulose film 2 is washed with a PBS buffer.
【００２４】 ニトロセルロースフィルム２をそれから粉ミルク溶液で処理して、該フィルム
の占有されていない吸着箇所のまわりを飽和させる。The nitrocellulose film 2 is then treated with a milk powder solution to saturate the film around unoccupied adsorption sites.
【００２５】 その後、ニトロセルロースフィルム２をＰＢＳバッファで３回続けて洗浄し、
それから室温で減圧下、乾燥する。Thereafter, the nitrocellulose film 2 is washed three times successively with a PBS buffer,
It is then dried at room temperature under reduced pressure.
【００２６】 最後に、本発明の測定片１を境界線３の外側で打ち抜く。このようにして製造
された本発明の指示片１をフィルムの状態で乾燥剤とともにパックし、４℃で後
の使用のために貯蔵する。Finally, the measuring piece 1 of the present invention is punched outside the boundary 3. The indicator piece 1 of the present invention thus produced is packed in a film with a desiccant and stored at 4 ° C. for later use.
【００２７】 測定片１は、医者によってまたは実験室で、例えばまず測定片１を上記の調製
された粉ミルク溶液で処理し、再生することにより使用できる。それから、検査
する患者の血清を粉ミルク溶液中、公知の方法に従い希釈し、測定片１に塗付す
る。これによって、免疫反応が起き、前記血清中に含まれる病原菌特異的抗体が
左側の欄上の抗原区域５に沈積している抗原と特異的な結合を形成する。The measuring strip 1 can be used by a doctor or in the laboratory, for example by first treating the measuring strip 1 with the above prepared milk powder solution and regenerating it. Then, the serum of the patient to be examined is diluted in a milk powder solution according to a known method and applied to the measuring piece 1. As a result, an immune reaction occurs, and the pathogen-specific antibody contained in the serum forms a specific bond with the antigen deposited in the antigen section 5 on the left column.
【００２８】 続いて、結合しない血清の成分を、吸引し、そして測定片１を通常のＰＢＳ−
Ｔｗｅｅｎ洗剤で３回洗浄する。Subsequently, the unbound serum components were aspirated, and the test strip 1 was replaced with normal PBS-
Wash 3 times with Tween detergent.
【００２９】 その後で、随意のクラスの抗ヒト免疫グロブリン酵素コンジュゲートとのイン
キュベーションが続き、それによって病原菌特異的抗体が標識される。酵素コン
ジュゲートの添加によって、測定片の右側欄に塗付された異なる濃度のヒト抗体
も標識される。[0029] This is followed by incubation with an optional class of anti-human immunoglobulin enzyme conjugates, thereby labeling the pathogen-specific antibody. The addition of the enzyme conjugate also labels the different concentrations of the human antibody applied to the right column of the test strip.
【００３０】 ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ洗剤でのさらなる洗浄工程が続き、そこではＰＢＳ−Ｔｗ
ｅｅｎ洗剤を３回交換する。洗剤を除去するためにフィルムをもう一度蒸留水で
洗浄する。An additional washing step with PBS-Tween detergent follows, where PBS-Tween is used.
Change eeen detergent three times. The film is washed once more with distilled water to remove the detergent.
【００３１】 染色はテトラメチルベンジジンに基づく、Ｋｉｒｋｅ−Ｇａａｒｄ Ｐｅｒｒ
ｙ社の市販基質（製品コード５０−７７−０２）を各フィルムあたり１ｍｌを用
いて、生成される。The staining is based on tetramethylbenzidine, Kirke-Gard Perr
Produced using a commercial substrate from y (product code 50-77-02), 1 ml per film.
【００３２】 測定片１を蒸留水で徹底的に洗浄して、染色工程を終了する。The measuring piece 1 is thoroughly washed with distilled water, and the dyeing process is completed.
【００３３】 ８個の呼吸器系病原菌の実施例を参照すると、測定片１の左側欄に配置された
抗原区域５は、異なった着色ステインを示し、その着色強度は血清に含まれる病
原菌特異的な抗体のそれぞれの量に依存する。測定片１の右側欄に配置された抗
体区域６は、継続的に増加する着色強度を有する着色ステインを示し、これは塗
付されたヒト抗体の異なる濃度によって生じる。Referring to the example of the eight respiratory pathogens, the antigen area 5 arranged on the left side column of the measurement strip 1 shows a different colored stain, and its coloring intensity is specific to the pathogenic bacteria contained in the serum. Depends on the amount of each antibody. The antibody area 6 arranged in the right-hand column of the measuring strip 1 shows a colored stain with a continuously increasing color intensity, which is caused by different concentrations of the applied human antibody.
【００３４】 患者の血清中の抗体の量から疾病の病状についての結論を導き出すことは、測
定片１の左側欄の区域５の着色強度と右側欄の区域６の着色強度との視覚による
色の検定で実現する。左側抗原区域５の一つまたは複数の着色（例えば、「アデ
ノウイルス」と表示された区域）が右側の抗体区域６の一つの着色（例えば、対
照ラベルＦ）と同一ならば、患者の血清中に含まれるアデノウイルスの抗体濃度
は、対応する暗色染色を有する抗体区域６の値に相当する。左側区域５の一つの
着色強度（例えば、「ＨＳＶ」と表示された区域）が二つの隣接する右側区域６
の着色強度の中間（例えば、対照ラベルＤおよびＥの着色強度の間）にあるなら
ば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶウイルス）に対する患者の血清に含まれる抗
体濃度は、対応する区域６Ｄと６Ｅとの二つの濃度の中間値に相当する。To draw conclusions about the pathology of the disease from the amount of antibody in the serum of the patient, the visual color of the color intensity of the area 5 in the left column and the color intensity of the area 6 in the right column of the test strip 1 is determined. It is realized by the test. If one or more stains in the left antigen zone 5 (eg, the zone labeled “adenovirus”) is the same as one stain in the right antibody zone 6 (eg, control label F), the serum The antibody concentration of the adenovirus contained in the corresponding to the value of the antibody zone 6 with the corresponding dark staining. One coloring intensity (e.g., the area labeled "HSV") of the left side area 5 has two adjacent right side areas 6
Is in the middle (eg, between the coloring intensities of the control labels D and E), the antibody concentration contained in the patient's serum against herpes simplex virus (HSV virus) is higher than that of the corresponding areas 6D and 6E. It corresponds to the intermediate value of the two densities.
【００３５】 図２は、同定区域４ａ、ならびに上下に配置された複数の抗原区域５および抗
体区域６を有する非常に狭い測定片１ａを示す。これは特に小さく（例えば、５
ｘ３ｍｍ）、それによって１つの検査に患者の血清の極少量しか必要とされない
。検査する病原菌の名称は、それぞれ抗原区域５の上方に、そして各濃度は抗体
区域６の上方に、例えば、異なる濃度についてＡ〜Ｄの文字、さらに対照チェッ
クの区域（抗体なし）について「−」が印刷されている。FIG. 2 shows a very narrow measuring strip 1 a having an identification zone 4 a and a plurality of antigen zones 5 and antibody zones 6 arranged one above the other. This is particularly small (eg, 5
x3 mm), whereby only a small amount of the patient's serum is required for one test. The names of the pathogens to be tested are respectively above the antigen zone 5 and each concentration above the antibody zone 6, for example the letters A to D for different concentrations, and "-" for the control check zone (no antibody). Is printed.
【図１】 抗体を検出するための本発明に従う測定片の可能な実施の形態を示す。FIG. 1 shows a possible embodiment of a measuring strip according to the invention for detecting antibodies.
【図２】 抗体を検出するための本発明に従う測定片の可能な実施の形態を示す。FIG. 2 shows a possible embodiment of a measuring strip according to the invention for detecting antibodies.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＣＮ，ＪＰ，Ｋ Ｒ，ＵＳ──────────────────────────────────────────────────続 き Continuation of front page (81) Designated country EP (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE ), CN, JP, KR, US
Claims (6)
、１つまたは複数の疾病に対する抗原が固定化された、１つまたは複数の区域（
５）を含んでなり、そこで患者の血清が添加されると、対応する抗原が該疾病に
相当する抗体に粘着し、該抗体が続く反応において着色ステインの形で可視化さ
れ、さらにヒト基準抗体が異なる濃度で固定化されている、別の区域（６）によ
って特徴付けられる前記指示片。1. An indicator (1) for detecting an antibody in a serum of a patient, wherein the indicator (1) comprises one or more areas (1) on which antigens for one or more diseases are immobilized.
5), wherein when the serum of the patient is added, the corresponding antigen adheres to the antibody corresponding to the disease, which is visualized in the subsequent reaction in the form of colored stains, and the human reference antibody is Said indicator strip characterized by another zone (6), immobilized at different concentrations.
定の抗原が固相（２）上に塗付されることを特徴とする、請求項１に記載の指示
片。2. The indicator according to claim 1, wherein at least one specific antigen is applied on a solid phase as a means for immobilizing the reference antibody.
等を有する基準抗体が提供されていることを特徴とする、請求項１または２に記
載の指示片。3. The same subtype-specific class, such as IgG, IgA, IgM.
The indicator according to claim 1 or 2, wherein a reference antibody having the above-mentioned properties is provided.
特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の指示片。4. The indicator according to claim 1, wherein the subsequent reaction is performed using an enzyme conjugate.
ジジンに基づく酵素基質が沈殿着色のために使用されることを特徴とする、請求
項１〜４のいずれか１項に記載の指示片。5. The method according to claim 1, wherein an enzyme substrate, preferably based on tetramethylbenzidine, is used for the precipitation coloring as substrate in the subsequent reaction. Instruction piece.
そこで後者の場合、前記着色ステインは、非光学スペクトル領域に位置すること
を特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の指示片。6. A fluorescent or radiolabeled substance is used for the subsequent reaction,
Therefore, in the latter case, the indicator piece according to any one of claims 1 to 5, wherein the colored stain is located in a non-optical spectrum region.
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