JP2002510281A

JP2002510281A - 抗イディオタイプ抗体３ｈ１を用いてｃｅａ関連腫瘍の発達を遅延させる方法

Info

Publication number: JP2002510281A
Application number: JP53720497A
Authority: JP
Inventors: チャタージー，マラヤ; エイ．フーン，ケネス; ケイ．チャタージー，スンイル
Original assignee: ザユニバーシティオブケンタッキーリサーチファウンデーション
Priority date: 1996-04-12
Filing date: 1997-04-11
Publication date: 2002-04-02

Abstract

(57)【要約】本発明は、特に、高い危険性の個体において、抗イディオタイプ抗体3H1を用いてCEA関連腫瘍の発達を遅延する方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】抗イディオタイプ抗体３Ｈ１を用いてＣＥＡ関連腫瘍の発達を遅延させる方法関連出願に対する相互参照本願は、1996年４月12日に出願された米国仮出願番号（未知）（以前は米国特許出願第08/631,085号）および1997年４月９日に出願された米国非仮出願（番号未知）の利点を請求する。連邦政府により支援された研究下で行われた本発明に対する権利の声明（適用なし）発明の分野本発明は、抗イディオタイプ抗体の使用に関する。より詳細には、抗イディオタイプ抗体3H1を使用する処置方法に関し、ここで3H1の投与はCEA関連腫瘍の発達を遅延する。発明の背景広範な医学的研究および多くの進歩にもかかわらず、ガンは、依然として米国における第２の主な死因である。結腸直腸ガンは、第３の最も一般的なガンであり、そして第２の主なガン死因である。伝統的な治療様式（例えば、手術、放射線治療、および化学療法）は広く使用され、そして多くの場合では成功しているが、一方結腸直腸ガンのようなガンの高い死亡率がなお存在することは、代替のまたはさらなる様式の治療を強く必要とさせている。患者が伝統的様式の治療に応答しても、しばしば、疾患再発の著しい危険性がある。これは、診断時に疾患が転移していた場合に、特に真である。回復が観察される、「成功した」処置の後でさえ、患者は再発の高い危険性を有し得、そして「観察して待つ」だけしかし得ない。現在、再発を遅延または予防するさらなる行動手段は存在しない。ガン治療への１つのアプローチは免疫療法である。しかし、腫瘍細胞または腫瘍由来ワクチンを用いるヒトガンの免疫療法は、いくつかの理由により期待外れであった。しばしば化学的に不明確であり、そして精製することが困難である、多量のまたは精製した腫瘍関連抗原を得ることは一貫して難しかった。さらに、依然として、腫瘍抗原に対する免疫生物学的応答能の問題、すなわち言い換えれば、ガン患者が、彼または彼女の腫瘍に対する免疫応答を効果的に増大させ得るか否かの問題が存在する。腫瘍関連抗原(TAA)は、しばしば「自己」の一部であり、そして通常、抗原に対する寛容（例えば、Ｔ細胞媒介抑制）により腫瘍保有宿主において非常にわずかな免疫応答を惹起する。さらに、ガン患者は、免疫抑制される傾向があり、そして特定のＴ依存性抗原にのみ応答する。免疫生物学者は、乏しい抗原（免疫応答を誘発する点で）が、分子環境を変化させることにより、強力な抗原に変えられ得ることを学んだ。ハプテンキャリアの変化により、Ｔ細胞ヘルパー細胞が活性になり、全免疫応答が強力になる。従って、キャリアの変化はまた、寛容性抗原を有効な抗原に変え得る。McBridgeら（1986）Br.J.Cancer 53:707。しばしば、ガン患者の免疫学的状態は抑制され、その結果、患者は、単に、特定のＴ依存性抗原に応答し得るが、他の抗原形態には応答し得ない。これらの考察から、それらをワクチンとして使用する前に、分子変化を腫瘍関連抗原に導入する意味をなす。不幸なことに、これは、ほとんどの腫瘍抗原で達成することが不可能である。なぜなら、それらは十分に定義されておらず、そして精製が非常に困難だからである。 Lindemann((1973)Ann.Immunol ．124:171-184)およびJerne((1974)Ann.Immunol ． 125:373-389)のネットワーク仮説は、しばしば、エピトープ構造を抗体の表面に発現されるイディオタイプ決定基に形質転換するすばらしいアプローチを提供する。ネットワーク概念に従って、所定の腫瘍関連抗原での免疫化は、Ab1と呼ばれるこの腫瘍関連抗原に対する抗体の産生を生じる；次いで、このAb1を使用して、Ab2と呼ばれるAb1に対する一連の抗イディオタイプ抗体を生じる。これらのAb2分子のうちのいくつかは、Ab1により同定される腫瘍関連抗原の３次元構造を効果的に模倣し得る。Ab2βと呼ばれるこれらの特定の抗イディオタイプは、A b1のパラトープに適合し、そして腫瘍関連抗原の内部イメージを現す。Ab2βは、元の腫瘍関連抗原により誘導されたものと同様の特定の免疫応答を誘導し得、従って、代理腫瘍関連抗原として使用され得る。Ab2βによる免疫化は、Ab1により同定される対応する元の腫瘍関連抗原を認識する抗-抗イディオタイプ抗体(Ab3) の生成を導き得る。このAb1様反応性により、Ab3はまた、その他のイディオトープにおいてAb1とは異なり得ることを示すためにAb1'と呼ばれる。ガン処置に対する潜在的に見込みのあるアプローチは、抗イディオタイプ抗体を使用する免疫療法である。この形態の治療において、腫瘍関連タンパク質のエピトープを模倣する抗体が、腫瘍関連タンパク質を介して、腫瘍に対する患者の免疫系を刺激する努力において投与される。WO 91/11465は、霊長類抗イディオタイプ抗体を用いて、悪性細胞または感染因子に対してヒトにおいて免疫応答を刺激する方法を記載する。しかし、全ての抗イディオタイプ抗体が、腫瘍に対する治療レジメに使用され得るわけでない。第１に、Ab1に対して惹起される抗体の画分だけが、Ab1のパラトープに対する反応性に限定される（すなわち、宿主内の他の潜在的な抗体に共有される特性に対して非反応性である）。第２に、抗イディオタイプ抗体が、必ずしも免疫原性でない。第３に、抗イディオタイプが免疫応答を誘発しても、これらの免疫原性抗イディオタイプの画分のみが、腫瘍抗原に対する免疫応答を誘発し、そしてより少ない特異性を有する他の抗原に対しては免疫応答を誘発しない。さらに、異なるガンが広範な種々の分子および臨床的特徴を有するので、抗イディオタイプ治療は、腫瘍起源および発現される抗原の点から、ケースバイケースで評価されるべきであることが示唆されている。腫瘍関連抗原と構造的に似ている抗Idモノクローナル抗体は、ガン患者における抗原置換物として使用されている。Herlynら(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A . 84:8055-8059;Mittlemanら(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89:466-470;Chatt erjeeら(1993)Ann.N.Y.Acad.Sci.690:376-278。これらの研究の全てが、進行した疾患を有する患者で行われた。少なくともいくつかの患者において観察された免疫応答に基づいて、抗Idが、免疫原状況において腫瘍関連抗原の部分的アナログを提供することが提案されている。ガン胎児性抗原(CEA)は、胃腸管（例えば、結腸直腸および膵臓ガン）ならびに他の腺ガン（例えば、乳ガンおよび肺ガン）の内胚葉由来新生物に存在する18 0,000キロダルトンの糖タンパク質腫瘍関連抗原である。結腸直腸、胃、膵臓、ならびに乳房および非小細胞肺のガン腫の大部分は、CEAに関連する。CEAはまた、ヒト胎児の消化器官において見出される。循環CEAは、CEA陽性腫瘍を有する患者の非常に大多数において検出され得る。特異的なモノクローナル抗体がCEAに対して惹起され、そしていくつかが診断および臨床研究のために放射標識されている。Hansenら(1993)Cancer 71:3478-3485;Karokiら(1992)Hybridoma 11:391-4 07;Goldenberg(1993)Am.J.Med ．94:297-312。ほとんどの腫瘍関連抗原が免疫系により自己抗原として示されるので、ガン患者は、CEAに対して免疫学的に「寛容」である（その腫瘍胎児起源に関係するようである）。これは、CEAに基づく免疫療法を実質的に不可能にしている。CEA陽性腫瘍を有する患者に対する今日までの研究は、CEAに対して免疫を生じる能力を証明しなかった。それにもかかわらず、CEAは、いくつかの理由により抗イディオタイプ抗体での活動的な免疫療法のすばらしい腫瘍関連抗原である。CEAは、代表的に、腫瘍細胞表面に高レベルで存在する。CEAはまた、その遺伝子配列が既知であり、そしてその３次元構造が同定されているので、最も十分に特徴づけられた抗原の１つである。CEAは、細胞-細胞相互作用に関与すると考えられる、第19番染色体に位置する免疫グロブリンスーパー遺伝子ファミリーのメンバーである。 CEA上のエピトープのいくつかが正常組織と共有されるので、インタクトなCEA 分子での免疫化は、潜在的に有害な自己免疫反応を誘発し得る。一方、腫瘍関連エピトープに対する免疫反応が所望される。多くの研究者は、ラット、マウス、ヒヒ、およびヒトにおいて、CEAを模倣する抗イディオタイプ抗体を生成した。例えば、Hinodaら(1995)Tumor Biol ．16:48-55;Losmanら(1994)Int.J.Cancer 56 :580-584;Irvineら(1993)Cancer Immunol.Immunother ．36:281-292を参照のこと。しかし、CEA（およびおそらく多くのエピトープ）のサイズおよびCEAがいくつかの正常組織で発現される事実を考えると、抗イディオタイプ抗体が、抗腫瘍免疫をもたらす抗CEA応答の誘発に効果的であるか否かは知られていなかった。 CEA関連腫瘍（例えば、胃腸管のガン腫）は、しばしば標準的な治療により治療し得ない。患者が伝統的な治療に応答しても、しばしば再発の著しい危険性が存在する。従って、この疾患に対する新規の治療アプローチが必要とされる。本発明は、免疫寛容をまぬがれ、そして抗CEA免疫応答を誘導するモノクローナル抗イディオタイプ抗体(3H1)を用いて、CEA関連腫瘍に対する処置の方法を提供することにより、先行技術の欠陥を克服する。本明細書中に引用される全ての参考文献は、その全体が参考として援用される。発明の要旨本発明は、抗イディオタイプ抗体3H1の治療的使用に関する。従って、本発明の１つの局面は、低い腫瘍負担を有する個体、特に高い危険性の個体においてCEA関連腫瘍の発達を遅延する方法である。これらの方法は、有効量の抗イディオタイプ抗体3H1の個体への投与を含む。別の局面において、本発明は、3H1のアジュバントとの投与をさらに含む。別の局面において、低い腫瘍負担を有する個体におけるCEA関連腫瘍の処置のための方法が提供され、この方法は有効量の3H1を個体に投与する工程を必要とする。別の局面において、低い腫瘍負担を有し、そして約50ng/ml未満の循環CEAのレベルを有する個体におけるCEA関連腫瘍の処置のための方法が提供され、この方法は有効量の3H1の個体への投与を必要とする。別の局面において、3H1は、結腸または結腸直腸起源のCEA関連腫瘍を処置するために使用される。これらの方法は、有効量の5-フルオロウラシル、塩酸レバミゾールまたはロイコボリンカルシウム、および有効量の3H1の個体への投与を必要とする。図面の簡単な説明図１(A)〜(D)は、3H1で接種されたマウスにおける免疫応答の発生を示すグラフである。図1(A)は、抗3H1抗体のアッセイを示す；図1(B)は、抗CEA抗体のアッセイを示す；図1(C)および1(D)は、T細胞増殖応答を示す（黒色の棒はCEAを示す；白色の棒は3H1を示す）。ＮはPBSワクチン接種マウスを示す。図２は、3H1で接種したマウスにおける腫瘍攻撃後の増大した生存を示す一連のグラフである。生存性を、3H1で６回免疫化した後に測定した。丸はMC38(CEA 陰性)細胞での攻撃を示す；四角はMC38cea(CEA陽性)細胞での攻撃を示す。図2(A )は、3H1-KLHで免疫化したマウスの生存パーセントを示す。図2(B)は、KLHに結合したアイソタイプ適合抗イディオタイプ抗体11D10で免疫化したマウスの生存パーセントを示す。図2(C)は、PBSで免疫化したマウスの生存パーセントを示す。図３は、６人の高い危険性の患者血清（3H1投与後）の存在下でAb1(8019)のAb 2(3H1)への結合阻害を示すグラフである。中心に点がある四角は患者＃１を示す；黒ダイアモンドは患者＃２を示す；白中心がある黒四角は患者＃３を示す；白ダイアモンドは患者＃４を示す；黒四角は患者＃５を示す；白四角は患者＃６を示す。患者＃１〜３は、3H1と同時にフルオロウラシル(5-FU)およびレバミゾールを受けていた。図４は、3H1を受けている６人の高い危険性の患者の血清における抗体依存性細胞傷害性(ADCC)を示す棒グラフである。１番目から６番目の棒は、それぞれ、患者番号１〜６を示す。図５は、3H1を受けている２人の高い危険性の患者の血清におけるADCCを示す棒グラフである。グラフの両半分において、患者＃１由来のエフェクター細胞を使用した。Ab3は患者＃1（左側）または患者＃２（右側）に由来した。図６は、3H1の軽鎖可変領域および隣接残基のcDNA配列（配列番号３；図6A）およびアミノ酸配列（配列番号４；図6B）を示す。図７は、3H1の重鎖可変領域および隣接残基のcDNA配列（配列番号５；図7A）およびアミノ酸配列（配列番号６；図7B）を示す。図8(A)および(B)は、血清の種々の希釈でのマウスにおける3H1に対する免疫応答の検出を示すグラフである。図8(A)は抗3H1抗体のアッセイを示す；図8(B)は、抗CEA(Ab1')抗体のアッセイを示す；図8(A)において、Ab2-C1はコントロール抗体1A7を示す；Ab2-C2は、3H1でコートされたコントロールプレートを示すが、血清サンプルは、1A7-KLH結合体で５回免疫化したマウス由来であった。グラフにおける他の線は、異なる回数の免疫化（３×；５×；６×；７×）および免疫前血清を示す。図8(B)において、吸光度は、３(「３×」)、５(「５×」)、および７(「７×」)の毎週注射の前後に測定された。図9(A)〜(F)は、3H1での免疫化によりマウスにおいて生成したAb1'のフローサイトメトリー分析の記録である。図9(A)〜(C)は、MC-38-cea細胞のインキュベーションを示す（Ａ，3H1-KLH結合体による６回の免疫化前後のマウス由来血清；Ｂ、PBSおよびモノクローナル抗CEA抗体8019；Ｃ、アイソタイプ適合非関連抗イディオタイプ抗体1A7-KLHによる６回の免疫化前後のマウス由来血清。図9(D)〜( F)は、MC-38細胞のインキュベーション（Ｄ、3H1-KLH結合体による６回の免疫化前後；Ｅ、PBSおよび8019；F、1A7-KLHによる６回の免疫化前後）を示す。図10は、3H1で免疫化したマウス由来の血清によるADCCを示す棒グラフである。斜平行線の棒は3H1(1:5)を示す；白色の棒は3H1(1:10)を示す；斜交平行線の棒はPBS(1:5)を示す；垂直平行線の棒はPBS(1:10)を示す。本発明の詳細な説明本発明者らは、3H1投与が、CEA陽性腫瘍を有するマウスにおける生存を増大させ、そして腫瘍攻撃からマウスを保護することを発見した。本発明者らはまた、首尾良く処置されたCEA関連腫瘍を有していたヒト（すなわち、検出可能な転移または疾患なし）における抗イディオタイプ抗体3H1の投与が、CEA特異的免疫応答を誘発することを見出した。重要なことに、本発明者らはまた、CEA関連腫瘍の再発の高い危険性のある、低い腫瘍負担を有する患者への3H1の投与が、統計学的に期待されるより長く兆候がないままであることを発見した。特に、６ヶ月以内に実質的に100％再発する危険性を有する１人の患者は、3H1を受けた後20ヶ月以上兆候がないままであった。本発明者らは、3H1の投与がCEA関連腫瘍の出現の危険性を、特に、アジュバント設定において高い危険性の個体で低減し得るとを考える。 3H1は、腫瘍関連抗原であるガン胎児性抗原(CEA)の異なるおよび特定のエピトープに対して特定の免疫応答を誘導するマウスモノクローナル抗イディオタイプ (Id)抗体(Ab2)である。このエピトープはCEAに独特であり、そして正常組織でもまた見出されるこのファミリーの他のCEA関連低分子量メンバーに存在しない。3 H1が惹起されたモノクローナル抗体8019(Ab1)により定義される抗原決定基は、免疫ペルオキシダーゼ染色および造血分析により証明されたように、正常な成人組織に存在しない。3H1の作製および特徴づけ、ならびに3H1の可変領域（軽鎖および重鎖）をコードするDNA配列は、共有に係る特許出願第08/579,940号（代理人記録番号30414-2000121）に記載されている。3H1を産生するハイブリドーマは、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約の規定に基づき、アメリカンタイプカルチャーコレクション(ATCC)，12301 Parklawn Drive， Rock ville，MD，U.S.A．20852に1995年12月15日に寄託された。登録番号HB1200 3が与えられた。以前のフェーズＩ臨床試験において、進行したCEA関連疾患を有する（以前の全ての治療に失敗し、そしてなお高い腫瘍負担を有する）12人の結腸直腸ガン患者に3H1を投与した。Bhattacharya-Chatterjeeら(1994)XVI Internat l Cancer Congress 495-498頁。12人の患者のうち９人が、Ab1のAb2またはCEAへの結合を阻害し得る高力価の特異的抗-抗Id(Ab3)抗体を発生した。これらの患者のうち９人全てがまた、精製CEAと反応しそして自己および同種異系の結腸腫瘍においてA b1と同一の免疫染色パターンを示す特異的抗CEA抗体を生成した。さらに、12人の患者のうち７人が、Id特異的Ｔ細胞増殖応答を示した。これらの７人の患者のうち４人はまた、CEAの存在下でＴ細胞増殖を示した。毒性は、12人全ての患者に対して最小であった。しかし、これらの患者の全てが正常な疾患進行を示した。定義本明細書中で使用する用語「3H1」、「3H1抗体」、および「3H1モノクローナル抗イディオタイプ抗体」は、ヒト膵臓および結腸の腫瘍細胞により高密度で主に発現される、180,000M.W.ガン胎児性抗原(CEA)の異なるおよび特異的エピトープに少なくとも部分的に似ているエピトープを含む抗イディオタイプ抗体(Ab2) を言及するために相互交換可能に使用される。3H1の作製および特徴づけは、共有に係る特許出願第08/579,940号（代理人記録番号30414-2000121）に記載されている。異なる生物学的機能は3H1に関し、Ab1(8019)および／またはAb3への結合、ならびに進行したCEA関連疾患（特に、CEA関連腫瘍）を有するマウス、ウサギ、サル、およびヒト、ならびにCEA関連疾患の病歴を有するが検出可能な疾患を有さないヒトにおいて、CEAに対して免疫応答（体液性および／または細胞性）を誘導する能力を含むが、それらに限定されない。「CEA関連腫瘍」は、CEA抗原を含む（特に、腫瘍細胞表面上に発現される）腫瘍である。CEAを検出する方法は当該分野で公知であり、そして実施例が本明細書中に記載される。本明細書中で使用する「処置」は、有益なまたは所望の臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果として、以下の１つ以上が挙げられるが、それらに限定されない：症状の軽減、疾患の程度の低減、疾患の安定化（すなわち悪化しない）状態、疾患の拡大（すなわち転移）の予防、疾患の出現または再発の予防、疾患進行の遅延または減速、疾患状態の改善、および回復（部分的または完全のいずれか）。CEA関連腫瘍の病理学的結果の減少もまた「処置」に含まれる。本明細書中で使用する、CEA関連腫瘍の発達の「遅延」は、疾患の発達を延期し、遅らせ、減速させ、妨害し、安定化させ、そして／または伸ばすことを意味する。この遅延は、処置される疾患および／または個体の病歴に依存して、種々の長さの時間であり得る。当業者には明らかなように、十分なまたは著しい遅延はまた、実質的に、個体が疾患を発達させない点で予防を含み得る。CEA関連腫瘍の発達を「遅延する」方法は、その方法を使用しない場合と比較して、所定の時間枠内での疾患発達の確率を低減させる方法、および／または所定の時間枠内での疾患の程度を低減させる方法である。このような比較は、代表的に、統計学的に有意な数の被験体を用いた臨床研究に基づく。 CEA関連腫瘍の「発達」は、腫瘍の進行を意味する。腫瘍発達は、本明細書中に記載の標準的な臨床技術を用いて検出可能であり得る。しかし、発達は、検出不可能であり得る疾患進行もいう。本発明の目的のために、進行は、この場合（すなわちCEA関連腫瘍）、疾患状態（CEA関連腫瘍の細胞分裂および/または転移）の生物学的経過をいう。「発達」は、出現、再発、および開始を含む。本明細書中で使用するCEA関連疾患の「開始」または「出現」は、最初の開始および／または再発を含む。本明細書中で使用する「低い腫瘍負担」は、個体が進行したCEA関連腫瘍を有さないことを意味する。「進行した」CEA関連腫瘍は、検出可能な転移、すなわち腫瘍の一次部位以外の部位で検出可能な腫瘍塊が存在することを意味する。腫瘍塊は、当該分野で公知の造影技術（例えば、Ｘ線、CTスキャン、またはMRI）により好ましく検出される。「進行した」疾患は、リンパ節の関与を含まない。用語が示すように、「低い腫瘍負担」は、CEA関連腫瘍について記載された最大レベルまたは末期レベルより少ない程度の疾患を示す。「低い腫瘍負担」がまた、検出不可能な腫瘍を含むことが理解される。低い腫瘍負担カテゴリーの例は以下に提供される。本明細書中で使用する「高い危険性」の個体は、CEA関連腫瘍の発達の著しい危険性を有する個体である。「高い危険性」の個体は、検出可能な疾患を有しても有さなくてもよく、そして本明細書中に記載の処置方法前に、示された検出可能な疾患を有しても有さなくてもよい。「高い危険性」は、個体が、CEA関連腫瘍の発達と相関する測定可能なパラメーターである、１つ以上のいわゆる危険因子を有することを示す。これらの危険因子のうちの１つ以上を有する個体は、これらの危険因子を有さない個体よりもCEA関連腫瘍を発達させる確率が高い。これらの危険因子として、年齢、性別、人種、食餌、以前の疾患の病歴、前兆疾患の存在、遺伝的（すなわち遺伝的）考慮、および環境暴露が挙げられるが、それらに限定されない。高い危険性群の例（すなわちカテゴリー）は以下に記載される。高い危険性の評価の根拠および状況に依存して、疾患もしくは腫瘍の発達、進行、および／または開始がおそらく起こる時間枠は変化する。例えば、アジュバント設定(adjuvant setting)における乳ガン、結腸直腸ガン、および／または腺ガンの高い危険性の患者では、出現の危険性は、代表的に１〜２年以内で測定される。前兆疾患を示す患者については、出現の危険性は、より長い時間枠で測定される。例えば、遺伝子的または遺伝的考慮に帰因して高い危険性であるとみなされる個体については、出現の危険性は、さらにより長い時間枠（個体の予想される寿命を含む）で測定され得る。「低い危険性」を有する個体は、「高い危険性」を有するとみなされない個体である。「アジュバント設定(adjuvant setting)」は、個体がCEA関連疾患（特に、CEA 関連腫瘍）の病歴を有し、そして治療に応答した臨床設定をいう。以前の治療として、外科的切除、放射線治療、および化学療法が挙げられ得るが、それらに限定されない。この以前の治療の結果として、これらの個体は、臨床的に測定可能な腫瘍を有さない。しかし、CEA関連疾患のそれらの病歴のため、これらの個体は、疾患の発達の危険性を有するとみなされる。「アジュバント設定」における処置または投与は、その後の処置の様式をいう。危険性の程度（すなわち、アジュバント設定における個体が、「高い危険性」または「低い危険性」のいずれでみなされても）は、いくつかの因子、最も通常には最初に処置された疾患の程度に依存する。本明細書中で使用する「アジュバント設定」は、その免疫原性を増強するために薬剤（例えば、抗体、ポリヌクレオチド、またはポリペプチド）と組み合わせて与えられた薬学的調製物中の化学的または生物学的薬剤をいう「アジュバント (adjuvant)」とは区別される。アジュバントの例は本明細書中に記載される。「新(neo)アジュバント設定」は、診断後であるが、3H1投与以外の処置様相の開始前の期間をいう。例えば、個体が、手術が指摘されるCEA関連腫瘍（例えば結腸直腸腫瘍）を有すると診断された場合、新アジュバント設定における3H1の投与は、3H1投与が手術前に開始することを意味する。「有効量」は、有益なまたは所望の臨床結果をもたらすのに十分な量をいう。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。本発明の目的のために、3H1の有効量は、CEA関連疾患状態（特に、CEA関連腫瘍）の発達を改善するか、安定化するか、または遅延するのに十分な3H1量である。効力のこれらの指標の検出および測定は以下で議論される。「個体」は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳動物として、飼育動物、競技動物、およびペットが挙げられるが、それらに限定されない。発明の実施態様１つの実施態様において、本発明はCEA関連腫瘍の発達を遅延する方法を提供し、ここで有効量の3H1が、低い腫瘍負担を有する個体に投与される。CEA関連腫瘍の例として、胃腸管のガン腫（結腸直腸ガンを含む）、他の腺ガン（例えば、乳ガン、肺（小細胞でない）ガン）、胆嚢（胆嚢樹(biliary tree)を含む）ガン、および婦人科学的ガンが挙げられるが、これらに限定されない。CEA関連腫瘍を検出する方法は当該分野で公知であり、標準的なイムノアッセイ技術を含む。例として、CEA関連腫瘍は、例えば、間接的免疫蛍光アッセイにおける一次抗体として8019を用いて、罹患組織の標準的な免疫組織学的試験により検出され得る。１つの実施態様において、本発明は、低い腫瘍負担を有する高い危険性の個体への3H1の投与を含む。上記のように、高い危険性の個体は、CEA関連腫瘍発達と相関する１つ以上の危険因子を示す。高い（すなわち増大した）危険性は、例えば、個体の遺伝子型（例えば、家族性ポリープ）、腫瘍関連遺伝子の発現の増大または腫瘍サプレッサー遺伝子の発現の減少、前兆疾患（例えばポリープ）の存在、CEA関連ガンの家族病歴、発ガン性または奇形発生性であることが知られているかまたは疑われる（特に、CEA関連腫瘍を引き起こすと疑われる）環境物質または放射線形態への暴露歴、潜在的に発ガン性の病原体（例えばレトロウイルス）への暴露、あるいは他の型のガンまたは他の型の異常組織増殖もしくは非調節組織増殖の病歴に基づいて示され得る。抗CEA免疫学的反応性についての陽性試験に基づいてCEA陽性腫瘍を有すると疑われる個体もまた、高い危険性に含まれる。 CEA関連腫瘍を発達させる全ての危険因子は知られておらず、そしてこれらの因子（全ての危険に関して）間の相互作用は十分に理解されていないので、本発明の目的のための3H1の投与に適した個体が共通の臨床的特徴を有し得ること、ならびに、それにもかかわらず上記のカテゴリーに明らかに入らない個体が3H1 の投与に適した候補であると考えられ得ることは、当業者には明らかである。熟達した臨床医は、個体が3H1処置に適するか否かを経験的に決定し得る。例えば、結腸直腸ガンの家族的（すなわち遺伝的）病歴を有する個体は、この個体における以前の疾患が全く観察されなくても、「高い危険性」であるとみなされ得る。この状況において、このような個体への3H1投与は、個体が自身の寿命内で疾患を発達させない（または予想されるより遅くそれを発達させる）程度まで、疾患出現の遅延をもたらし得る。別の例は、従来の様式の治療を用いて処置され、そしてその治療に対して臨床的応答性（すなわち回復）を示す個体である。このような個体は、治療の初期経過がまだ完了していなくても、臨床医による臨床進行の予測によって「高い危険性」として判断され得、そして初期治療の完了前に3H 1を受けるのに適した候補であり得る。当業者である臨床医は、3H1を用いた処置が必要であり得るか否かを決定する決定権を有する。個体が、一致した臨床的危険性評価基準に従って高い危険性であると判断されない（すなわち「低い危険性」）場合でさえも、3H1の投与が必要であり得ることもまた明らかである。例えば、首尾良く処置され、高い危険性であるとみなされない（例えば、診断時での検出可能な浸潤性疾患の欠如による）個体は、それにもかかわらず、予防手段として（特に、これまでに3H1から観察されている禁忌の欠如および所望でない副作用の欠如を考慮して）3H1を受ける候補であり得る。従って、疾患進行の危険性は、3H1投与の投与によってさらになお下げられ得る。別の例として、個体は、自身が疾患発達の危険性を有することを信じ得、そして3H1受容がこの危険性を低減させることを決心し得る。通常でない(supern ormal)レベルの循環CEAおよび／または通常でないレベルのCEA発現を有する個体もまた適切である。CEAの循環レベルは、市販されている(Hybritech)標準的なイムノアッセイ(ELISA)技術により決定され得る。CEA発現のレベルは、例えば、間接的免疫蛍光アッセイにおける一次抗体として8019を用いて、例えば、罹患組織の免疫組織学的試験により決定され得る。本明細書中で使用するCEAの「通常でない」レベルは約３ng/mlを超える。当業者には明らかなように、循環CEAのレベルは研究室間で（そして使用する方法および／または市販キットに依存して）変化し得る。従って、CEAの通常でないレベルは、約１ng/mlを超えるレベル〜約５ng/mlを超えるレベルであり得る。本発明の別の実施態様において、3H1は、アジュバント設定において高い危険性の個体に投与される。アジュバント設定における高い危険性の個体を示すものとして代表的な因子は、隣接組織への腫瘍による浸潤（すなわち、広範囲疾患）および／またはリンパ節関与である。アジュバント設定における高い危険性の個体の例として、（ａ）自身の腫瘍を切除した、陽性リンパ節を有する肺の第II期または第IIIA期腺ガンを有する患者（これらの患者は、最初の２年以内に60〜8 0％の再発率を有する）；（ｂ）好ましくは少なくとも５つ、より好ましくは少なくとも10の陽性リンパ節を有する乳ガンを有する患者（少なくとも10の陽性リンパ節を有する患者については最初の２年以内に70〜80％の再発率）；および（ｃ）少なくとも４つの陽性リンパ節を有する結腸ガンを有する患者（最初の２年以内に70〜80％の再発率）が挙げられるが、それらに限定されない。アジュバント設定における高い危険性の個体の別の例は、切除された胃CEA関連腫瘍（膵臓ガン、胃ガン、および胆嚢（胆嚢樹を含む）ガンを含むが、これらに限定されない）を有する個体である。別の実施態様において、3H1は、新アジュバント設定で投与される。本発明の目的のために、新アジュバント設定における個体は低い腫瘍負担を有すると理解される。本発明に記載の3H1治療に適切な個体の別の例は、低い腫瘍負担を有する個体である。従って、本発明は、低い腫瘍負担を有する個体においてCEA関連腫瘍を処置する方法を含み、これは有効量の3H1を投与する工程を含む。上記で定義されたように、「低い」腫瘍負担は、疾患が進行しているとみなされないことを意味する。例えば、低い腫瘍負担は、臨床分野の当業者により判断されるように部分的または完全な回復における疾患であり得る。「低い」腫瘍負担はまた、疾患の程度がもはや進行しているとみなされないような進行した疾患の腫瘍負担の低減により生じ得る。低い腫瘍負担の他の例として、限定されたリンパ節関与に含まれる疾患が挙げられる。これらの個体について、循環CEAレベルは、通常約50n g/ml以下であり、好ましくは約10ng/ml以下であり、より好ましくは約５ng/ml以下であり、さらにより好ましくは約３ng/ml以下である。低い腫瘍負担を有する個体は、個体の臨床病歴に依存して「高い危険性」または「低い危険性」にさらに分類され得る。本発明はまた、残存疾患（特に、最小の残存疾患）を有する個体に対して3H1 を使用する処置の方法を含む。「残存」疾患は、治療後に残存しているが検出不可能な任意のCEA関連疾患（特に、CEA関連腫瘍）である。従って、「残存疾患」は、検出可能な疾患中に発達し得る疾患の見込みのある存在をいい、そしてアジュバント設定においてなされる臨床的予後および／または想定をいう。CEA関連腫瘍の型および例えば診断の際の疾患程度に依存して、個体は、検出可能な疾患が全く存在していなくても、残存疾患を有すると判断され得る。例えば、切除可能な肺腺ガンを有する個体は、明らかに完全な回復が生じても、手術（すなわち切除）後に残存疾患を有する。同様に、結腸直腸ガンを有する個体は、化学療法後に残存疾患を有し得る。あるいは、CEA関連腫瘍に対する治療を現在受けている個体もまた「残存」疾患を有する。本明細書中で使用する「残存」疾患は、進行した疾患を含まないことが理解される。本発明はまた、CEA関連疾患（特にCEA関連腫瘍）の発生の危険性を減少させる方法を含む。これらの方法において、有効量の3H1は、CEA関連疾患を発達させる危険性を有する個体に投与される。「発生の危険性を減少させる」は、CEA関連疾患の発生および／または再発の危険性が、3H1を受けていない（同じ発生の危険性を有する）それらの個体より、3H1を受けている個体において低いことを意味する。CEA関連疾患を発達させる「危険性を有する」個体は、臨床的および遺伝的病歴ならびに個体の状態に依存して、高い危険性または低い危険性であり得る。本発明はまた、低い腫瘍負担を有しそして約50ng/ml未満の循環レベルのCEAを有する個体における、CEA関連疾患の処置の方法を含む。これらの方法は、有効量の3H1の個体への投与を含む。好ましくは、個体は、約30ng/ml未満の循環レベルのCEA、より好ましくは約25ng/ml未満の循環レベルのCEA、なおより好ましくは約20ng/ml未満の循環レベルのCEA、さらにより好ましくは約15ng/ml未満の循環レベルのCEA、さらにより好ましくは約10ng/ml未満の循環レベルのCEA、さらにより好ましくは約５ng/ml未満の循環レベルのCEAを有する。循環CEAのレベルを測定する方法は当該分野で公知であり、そしていくつかは本明細書中に記載される（例えば、実施例４を参照のこと）。別の実施態様において、本発明は、塩酸レバミゾールまたはロイコボリンカルシウムおよび3H1を伴うフルオロウラシル(5-FU)の投与を含む、CEA関連腫瘍（特に腺ガン、特に結腸および／または直腸の腺ガン）を処置する方法を提供する。本発明者らは、5-FUおよびレバミゾールまたはロイコボリンが、3H1と相乗作用的に作用して免疫応答を増強すると考えている。レバミゾールまたはロイコボリンを伴う5-FUは、現在当該分野で公知の処置法であり、そして本発明の目的のために、それらは容認された臨床プロトコル（以下により詳細に記載）に従って投与される。本発明の上記の全ての実施態様のために、3H1は、以下の節に記載のように、調製され、投与され、そしてモニターされ得る。抗イディオタイプ抗体3H1の調製および投与本発明の全ての実施態様は、有効量の3H1の投与を含む。 3H1は、いくつかの方法により得られ得る。3H1は、本明細書中に記載のハイブリドーマATCC番号HB12003から産生され得る。抗体単離方法は当該分野で周知である。例えば、HarlowおよびLane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，New YorkならびにSambrookら(1989)Molecular Clo ning ：A Laboratory Manual ，Cold Spring Harbor Laboratoryを参照のこと。抗体は、組織培養を介してハイブリドーマから、またはマウス腹水から得られ得る。これらの技術は当該分野で公知である。例えば、細胞は適切な培地中で培養され、そして使用済みの培地は抗体供給源として使用され得る。必要に応じて、マトリックスコートチャンネルまたはビーズおよび細胞同時培養物が、抗体産生細胞の増殖を増強するために含まれ得る。多量の抗体の産生のために、腹水液を得ることが一般的により好都合である。このような方法は当該分野で公知であり、そして一般的に、ハイブリドーマ細胞を免疫学的に未処置の組織適合性または免疫寛容性哺乳動物（特にマウス）に注射する工程を含む。哺乳動物は、必要に応じて、適切な組成物（例えばPristane）の先の投与により、腹水産生についてプライムされる。好ましくは、3H1は、組換えプロテインＧ-アガロースクロマトグラフィー、続いてプロテインＡ-CL-セファロース4Bクロマトグラフィーを用いて BALB/c腹水から精製される。あるいは、3H1は、当該分野で公知の技術を用いて、例えば、市販の自動化ペプチド合成機（例えば、Applied Biosystems，Inc.(Foster City，CA)製のもの）を用いて化学的に合成され得る。 3H1はまた、Sambrookら(1989)に記載されるような日常的な組換え方法を用いて得られ得る。例えば、3H1重鎖または軽鎖のいずれかをコードするポリヌクレオチドが、適切な発現ベクター（転写のための制御配列（例えば、プロモーター）を含む）にクローニングされ得る。次いで、発現ベクターは、宿主細胞に導入される。宿主細胞は適切な条件下で増殖され、その結果ポリヌクレオチドが転写され、そしてタンパク質に翻訳される。3H1の重鎖および軽鎖は別々に産生され、次いでジスルフィド結合再配列により組み合わされ得る。あるいは、3H1の各鎖をコードする別々のポリヌクレオチドを有するベクター、または別々の転写物として両鎖をコードする単一のポリヌクレオチドを有するベクターは、単一の宿主細胞にトランスフェクトされ得、次いで完全な分子を産生し、そして集合させ得る。好ましくは、宿主細胞は、分子の正常な炭水化物相補物を提供し得る高等真核生物細胞である。従って、宿主細胞において産生された3H1は、当該分野で標準的な技術を用いて精製され得る。次に、これらの方法のいずれかによる3H1の産生における使用のための、3H1をコードするポリヌクレオチドは、3H1産生ハイブリドーマから得られ得るか、または共有に係る特許出願第08/579,940号（代理人記録番号30414-20001.21）および同第08/579,916号（代理人記録番号30414-20001.20）に記載されるDNA配列から、当該分野で標準的な技術を用いて合成的にまたは組換え的に産生され得る。図6Aは、3H1の軽鎖可変領域のcDNA配列（配列番号３）を示す；図7Aは、3H1の重鎖可変領域のcDNA配列（配列番号５）を示す。11D10軽鎖および重鎖定常領域の全配列は決定されていないが、他のマウス免疫グロブリン分子のものと同一またはほぼ同一であると予想される。マウスκ軽鎖定常領域について、２つのタンパク質アロタイプをコードする４つの遺伝子アロタイプは、Solinら(1993)Immunog enetics 37:401-407（本明細書中に参考として援用される）により公表されている。Solinらの図１は、マウスおよびラット免疫グロブリンκ鎖遺伝子配列を示し、異なる株についてのκ鎖定常領域内の配列を比較し、そしてアロタイプ差を強調する。BALB/c、PL、SJL、およびM.spretusについてのκ鎖定常領域配列が含まれる。他の天然に存在するアロタイプが可能である。新生マウス由来のマウス γ₁重鎖定常領域DNA配列は、Honjoら(1979)Cell 18:559-568（本明細書中に参考として援用される）により公表されている。Honjoらの図５は、コードされるタンパク質配列と共に、生殖系列DNA配列を示す。マウスミエローマM0PC21から得られた別のタンパク質配列が上の行に示される。他の天然に存在するアロタイプが可能である。 3H1をコードするポリヌクレオチドはまた、3H1のアミノ酸配列から得られ得る。3H1の可変領域は、図６（軽鎖；配列番号４）および図７（重鎖；配列番号６）に提供される。3H1のアミノ酸配列が与えられれば、当業者は3H1をコードするポリヌクレオチドを設計し得る。 3H1抗体は、IgG1マウスサブクラスであり、そしてこのアイソタイプの免疫グロブリンに適切な任意の技術により単離され得る。精製方法は、塩析（例えば、硫酸アンモニウムによる）、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陽イオンまたは陰イオン交換カラム上で中性pHにて放流し(run)、そして漸増イオン強度の段階勾配で溶出させる）、ゲル濾過クロマトグラフィー（ゲル濾過HPLCを含む）、ならびにアフィニティ樹脂（例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、ハイドロキシアパタイト、および抗免疫グロブリン）上でのクロマトグラフィーを含み得る。3H1はまた、8019パラトープ（例えば精製Ab1またはAb3の形態）を含むアフィニティカラム上で精製され得る。 3H1が個体に投与される場合、3H1は、好ましくは少なくとも80％純粋であり、より好ましくは少なくとも90％純粋であり、さらにより好ましくは少なくとも95 ％純粋であり、さらにより好ましくは少なくとも98％純粋であり、ならびに発熱物質および他の汚染物質を含まない。この状況において、純度のパーセントは、調製物の総タンパク質含有量の重量パーセントとして計算される。実施例１は、免疫のための3H1の調製を記載する。好ましくは、3H1は、薬学的に受容可能な賦形剤と共に投与される。薬学的に受容可能な賦形剤は、薬理学的に効果的な物質の投与を容易にする相対的に不活性な物質である。例えば、賦形剤は、ワクチン組成物に対して形態もしくは粘度を与え得るか、または希釈剤として作用し得る。適切な賦形剤として、安定化剤、湿潤および乳化剤、浸透圧を変化させるための塩、カプセル化剤、緩衝液、ならびに皮膚浸透増強剤が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に受容可能な賦形剤の例は、Remington s Pharmaceutical Sciences(Alfonso R.Gennaro 編、第18版、1990)に記載される。好ましくは、3H1は、3H1の浸透を増強するか、さもなくば3H1に対する免疫応答を増強するアジュバントと共に使用される。適切なアジュバントとして、水酸化アルミニウム、ミョウバン、QS-21(米国特許第5,057,540号)、DHEA(米国特許第5,407,684号および同第5,077,284号)およびその誘導体（塩を含む）および前駆体（例えば、DHEA-S）、β-2ミクログロブリン(WO 91/16924)、ムラミルジペプチド、ムラミルトリペプチド(米国特許第5,171,568号)、モノホスホリル脂質Ａ(米国特許第4,436,728号；WO 92/16231)およびその誘導体（例えば、DETOX^TM ）、ならびにBCG(米国特許第4,726,947号)が挙げられる。他の適切なアジュバントとして、アルミニウム塩、スクアレン混合物(SAF-1)、ムラミルペプチド、サポニン誘導体、ミコバクテリア壁調製物、ミコール酸誘導体、非イオン性ブロックコポリマー界面活性剤、Quil A、コレラ毒素Ｂサブユニット、ポリホスファゼンおよび誘導体、ならびにTakahashiら(1990)Nature 344:873-875により記載されるような免疫刺激複合体(ISCOM)が挙げられるが、これらに限定されない。獣医学的使用および動物における抗体産生については、フロイントアジュバントの分裂促進性成分が使用され得る。アジュバントの選択は、部分的に、アジュバントの存在下でのワクチンの安定性、投与経路、および特にヒト使用が意図された場合のアジュバントの調節受容性に依存する。例えば、ミョウバンは、ヒトにおけるアジュバントとしての使用について、米国食品医薬品局(FDA)により認可されている。好ましくは、ミョウバン沈殿3H1が使用される。水酸化アルミニウム沈殿3H1の調製は、実施例１に記載される。 3H1は、他の免疫モジュレーター（例えば、インターロイキン2(IL-2)、IL-4、 IL-3、IL-12、GM-CSF、G-CSF、インターフェロン、およびキーホールリンペットヘモシアニン(KLH)と共に使用され得る。 3H1はまた、3H1の有効性を増強および／または相補するのに役立つ他の薬剤と共に使用され得る。このような薬剤の例として、CEAまたは3H1に由来するペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。好ましいCEAおよび3H1ペプチドは、 3H1とCEAとの間の相同性に基づくものである。好ましい実施態様において、配列 IYRANRLIDGV（配列番号１）を有するペプチドが3H1と共に投与される。この配列は、3H1可変領域の一部であり、そしてCEAの３つの相同的反復ドメインの一部と相同である（Orkawaら(1987)Biochem.Biophys.Res.Comm ．142:511-518）。別の実施態様において、3H1と共に投与されるペプチドは、配列PPAQYSWLIDGN（配列番号２）を有する。このペプチドは、CEA内に含まれるアミノ酸配列を有する。Ｔ細胞活性を刺激するペプチドを含む、他のペプチドが適切であり得る。あるいは、3H1は、リポソーム中にカプセル化され得る。細胞への送達のためにポリペプチドをパッケージングするのに適したリポソームは、当該分野で公知である。 3H1は投与前に熱処理され得、そして熱処理は、アジュバント（例えば、ミョウバン）の存在下であり得る。例えば、3H1は、約40℃〜80℃で、好ましくは45 ℃〜60℃で、約５分〜2時間、好ましくは15分〜１時間の期間で加熱され得る。熱処理は、好ましくは水浴中で滅菌バイアルにおいて45℃で30分間である。熱処理は、投与前にはいつでも起こり得る。好ましくは、熱処理は、投与の７日以内である。他の熱処理手順は、3H1の所望の活性が著しく損なわれない限り、使用され得る。次いで、熱処理3H1は、本明細書中に記載のように投与される。 3H1を用いた処置のために、有効量の3H1が、非経口的に、好ましくは皮内的に個体に投与される。他の投与経路として、筋肉内および内皮が挙げられるが、これらに限定されない。3H1はまた、培養細胞の処理に続いてこれらの培養細胞を個体に導入することにより、間接的に投与され得る。投与経路はまた、処置の経過中に変化し得る。例えば、個体は、静脈内に続いて腹腔内投与で3H1を受け得る。個体に与えられる3H1の量は、いくつかの要素（例えば、個体の状態、個体の重さ、処置される障害または疾患の性質、疾患の程度、投与経路、投与される用量の回数、および所望の目的）に依存する。好ましくは、投与あたりの用量は、約10μg〜20mg、好ましくは200μg〜15μg、より好ましくは500μg〜10mg、さらにより好ましくは１mg〜約４mg、さらにより好ましくは２mgの範囲である。好ましくは、用量は、２mgのミョウバン沈殿3H1である。 3H1投与間の間隔は変化し得、そして処置される障害および個体の応答性に依存する。3H1は、好ましくは最初プライミング用量で、続いて少なくとも１回の追加免疫用量で投与される。さらなる追加免疫用量が、周期的ベースでの応答を増強または一新させるために与えられ得る。3H1は、毎週ベース、好ましくは隔週ベースで、所望の測定可能なパラメーター（例えば、免疫応答の誘発）が検出されるまで投与され得る。次いで、投与は、あまり頻繁でないベースで（適当に、隔月または毎月）続けられ得る。その後の注射（すなわち、維持用量）のタイミングは、とりわけ、処置される個体の状態および応答に依存する。Ab3レベルは、好ましくは本明細書中に記載の診断方法によりモニターされて、維持（追加免疫）投与が与えられるべき時期を決定し得る（これは、一般的に約２ヶ月から３ヶ月毎であり得る）。１つの実施態様において、投与の最初のシリーズは、計４回の注射については隔週間隔で、続いて毎月の注射で与えられる。いくつかの状況について、3H1を受ける個体は、以前の処置の性質、疾患自身、またはその両方の、いずれかに起因して中程度から重篤に免疫が損なわれ得る (immunocompromised)ことが理解される。従って、免疫応答を増大させるために必要とされる時間および／または3H1の注射回数および／または投与あたりの3H1 量は変化し得る。例えば、個体は、一旦3H1が投与されると、免疫応答を誘発するためにより長い時間を必要とし得る。この場合、最初の（すなわち、最初の月内の）免疫応答が検出されていなくても、個体は免疫応答についてモニターされ続けることが推奨される。別の例として、個体は、免疫応答を誘発するために平均回数よりも多くの注射を必要とし得る。あるいは、例えば、免疫応答（例えば、Ｔ細胞応答）を最適化するために、１ヶ月より長い注射間隔を有することが所望され得る。 3H1投与の有効性の、または3H1投与が必要であるか否かの１つの可能な徴候は、腫瘍細胞上のCEA密度である。この密度は個体間で広範に変化し得、そして3H1 投与の経過および／または疾患の経過にわたって変化し得る。本明細書中で使用するCEAの「密度」は、以下のいずれかまたは両方をいい得る：（ａ）所定の生物学的サンプルにおける総細胞あたりの、それらの表面上にCEAを有する細胞数；（ｂ）各細胞の表面上のCEA量。密度（ａ）は、総細胞数で除した、染色されるかさもなくばCEAが存在することを示すサンプル中の細胞数を書き留めることにより、計算される。この密度は、好ましくは約20％を超え、より好ましくは約 3 0％を超え、より好ましくは約50％を超え、さらにより好ましくは約70％を超え、さらにより好ましくは約80％を超え、最も好ましくは約90％を超える。従って、本発明は、約20％を超える、好ましくは約30％を超える、より好ましくは約70 ％を超える、さらにより好ましくは約80％を超える、最も好ましくは約90％を超えるCEAの密度を有する個体への3H1の投与を含む。密度（ｂ）は、例えば、別の個体由来のサンプルと比較した、１人の個体由来のサンプル中の細胞の相対的な染色強度（または、CEAの存在を示す任意の測定の強度）で示される。この密度について、当業者は、密度を経験的に決定し得る。密度（ｂ）は正常組織（すなわち、CEAを欠く細胞または非罹患細胞）に対して比較され、その好ましい範囲は、免疫組織学的染色密度により検出されるように、非罹患細胞よりも約l.5倍、好ましくは約３倍、より好ましくは約10倍高い発現であり得る。非罹患細胞はまた、同じ個体由来であり得る。これは、より低い密度（例えば、約50％未満）を有する個体が、3H1投与を必要とするということではない。単一の理論に縛られることを望まないが、3H1投与は、CEA関連腫瘍（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞応答）に対して効果的なより一般的な応答をもたらす一連の免疫応答を誘発し得る可能性がある。しかし、より低い密度は、さらなる治療が所望されることを示し得る。密度はまた、疾患の程度および3H1投与に対する応答の指標として使用され得ることが理解される。例えば、3H1投与開始にて個体から採取されたサンプルは、約80％の密度を示し得る（すなわち、約80％の細胞がCEAを示す）。3H1を受けた後、同じ位置から採取されたサンプルは、約50％のみの密度を示し得、これは CEA発現細胞が破壊されていることを示す。同様に、3H1を受ける個体由来のサンプルの染色強度が3H1を受けた際に減少した場合、これはCEA保持腫瘍が破壊されていることを示す。免疫応答を惹起する目的のために、3H1は、非改変形態で投与され得る。時折、その免疫原性を改善するために3H1を改変することが好ましくあり得る。本明細書中で使用する「免疫原性」は、特異的抗体もしくは細胞性免疫応答、またはその両方を誘発する能力をいう。免疫原性を改善する方法は、とりわけ、グルタルアルデヒドもしくは二官能カップリング剤のような薬剤での架橋、または多価プラットフォーム分子への付着を含む。免疫原性はまた、タンパク質キャリア（特に、Ｔ細胞エピトープを含むもの）へのカップリングによって改善され得る。 3H1投与は、単独で、または他の形態の治療（確立されているか実験的であるかにかかわらず）と共に生じ得る。「と共に」は、3H1が他の治療の前後に同時に与えられ得ることを意味する。例えば、3H1は、他の治療に関して同時にまたは連続的にのいずれかで、手術、放射線治療、化学療法、および／または他の薬物治療を相補するために使用され得る。これらの投与の順序およびタイミングは経験的に決定され得、そして処置される疾患、患者の状態、臨床的病歴および徴候、ならびに／または種々の治療に対する応答性のような変数に依存する。このような決定は当該技術の範囲内である。好ましくは、3H1は、他の補助治療（例えば、化学療法および／または放射線）の投与前に投与される。好ましくは、3H1は、化学療法および／または放射線治療の最初の経過の１日前、好ましくは３〜５日前に、ならびに化学療法および／または放射線治療の各サイクルの１日前、好ましくは３〜５日前に投与される。これは、個体がより多くの時間で免疫応答を増大させることを可能にする。１つの実施態様において、3H1は、フルオロウラシル(Roche Laboratories)おンカルシウム(Immunex)と共に投与される。これらの化合物は、Dukeの第Ｃ期結腸ガンを有する患者における外科的切除後のアジュバント治療（レバミゾール）、ならびに進行した結腸直腸ガンを有する患者の待期的処置（ロイコボリン）として必要とされる。これらの化合物投与のためのプロトコルは当該分野で公知であり、そして製造者により提供される。フルオロウラシルおよびレバミゾールは、好ましくは以下のように投与される：（ａ）最初の治療、手術の７〜30日後に開始して、３日間にわたり８時間毎に50mgレバミゾール；フルオロウラシル、レバミゾールの３日間の経過と同時に、手術の21〜34日後に開始して５日間にわたり静脈内に450mg/m²/日；（ｂ）維持治療、２週間毎に３日間にわたり50mgレバミゾール；フルオロウラシル、５日間の経過の開始の28日後に開始して、１週間に１回静脈内に450mg/m²/日。以下のレジメのいずれかが、ロイコボリンの投与のために使用され得る：（１）最低３分以上の緩徐な静脈内注射により200mg/m² のロイコボリンを投与した後、静脈内注射により370mg/m²のフルオロウラシルを投与する；（２）静脈内注射により20mg/m²のロイコボリンを投与した後、静脈内注射により425mg/m²のフルオロウラシルを投与する。いずれかのレジメを用いた処置は、５日間にわたり毎日繰り返される。これは、２つのコースで28日間隔で繰り返され得、次いで４〜５週間間隔で繰り返され得る。他のレジメもまた使用され得る。これらの用量は、個体の状態（例えば、白血球数）に従って判断され得る。フルオロウラシルとレバミゾールまたはロイコボリンとが使用される場合、3H 1は、化学療法の投与前に、好ましくは１日前に、より好ましくは３〜５日前に投与される。 3H1投与は、処置される個体および疾患に依存して、種々のコースで継続し得る。好ましくは、3H1投与は、個体が免疫応答（体液性および／または細胞性にかかわらず）を増大させ得る限り継続される。3H1投与は、個体が3H1投与に関連した受容不可能な有害な反応を示す場合に中断されるべきであり、そして個体が進行性疾患を示す場合に継続されても継続されなくてもよい。進行性疾患の事象における3H1投与の継続は、少なくとも部分的には、3H1の継続した投与が他の必要とされる治療を補充し得るか否かに依存する。3H1 投与の効果の決定 3H1での投与の効果を決定するために、個体は、CEAに対する抗体（体液性）免疫応答もしくは細胞性免疫応答のいずれか、またはその組み合わせについてモニターされ得る。個体はまた、疾患進行についてモニターされ得る。生物学的サンプル中のCEA抗体(Ab3)のレベルを決定するために、例えば、血清または血漿が個体から得られ得る。サンプルは、必要に応じて、アッセイが行われる前に免疫グロブリンについて富化され得るが、これは通常必要とされない。マウス免疫グロブリン（例えば、3H1）がアッセイ試薬として使用される場合、サンプルは、好ましくは、抗マウス免疫グロブリン活性を取り除くために前処理される。これは、例えば、マウス免疫グロブリンカラム上での枯渇により、または非特異的マウス免疫グロブリンをサンプルに混合し、そして形成された任意の免疫沈降物を除去することにより行われ得る。このアッセイを行うために、サンプル中に存在し得る抗CEAは、非限定量のCEA の抗原性等価物と接触される。これは、単離されたCEA、直接的ブロッティングまたはポリアクリルアミドゲルからの転移により付着されたCEAを有するニトロセルロース、CEA発現細胞（例えば、LS174-T細胞）、このような細胞からの膜調製物、またはCEAを含む固定組織切片であり得る。あるいは、抗イディオタイプ、特に3H1が使用され得る。一旦免疫複合体が形成されると、一般的に、それは非複合体化CEAアナログから分離され、そして存在する複合体量が決定される。複合体は、例えば、細胞もしくは免疫沈降物を回収するための遠心分離または固相による捕獲により分離され得る。存在する複合体量は、直接的または二次試薬とのインキュベーションのいずれかで、標識を有するCEAアナログを提供することにより測定され得る。あるいは、競合アッセイが行われ得、ここでサンプルは、最初にCEAアナログとインキュベートされ、次いでサンプル中に存在する抗CEAと競合する非限定量の標識抗CEA試薬が添加される。適切な標識として、放射標識、酵素標識、蛍光標識、および化学ルミネッセンス標識が挙げられる。標準曲線は、サンプルの代わりに、抗CEAを含まないことが知られている溶液、および種々の相対濃度の抗CEAを有する溶液を用いて構築される。未知量の抗CEAを含むサンプルが一般的に並行してアッセイされ、そしてそこに含まれる抗CEAの相対量が、標準曲線との比較により決定される。3H1抗体を用いて抗CEAレベルを決定するための好ましいアッセイは、ラジオイムノアッセイ（実施例４）である。抗CEA抗体のアイソタイプは、イムノアッセイ中にアイソタイプ特異的試薬（分離または標識段階のいずれかで）を含めることにより測定され得る。例えば、抗ヒトIgGを使用して、ヒト起源の臨床サンプル中に存在するIgGクラスの抗体を分離または検出し得る。IgGクラスの特異的抗CEAの存在は、一般的に、記憶応答を示す。IgMクラスの抗CEAの存在は、一般的に、CEA発現腫瘍の存在に起因し得るような進行中の免疫刺激、または3H1での進行中の処置を示す。所望であれば、生物学的サンプル中に検出される抗CEA抗体は、さらに特徴付けられ得る；例えば、抗8019(Ab1)との競合により、それらがCEA上の関連エピトープに特異的であるか否かを決定する。Ab1とAb3との間の競合アッセイは、実施例４に記載される。抗CEA抗体はまた、それが細胞傷害性であるか否かを決定するために試験され得る。補体媒介細胞傷害性(CMC)は、例えば、⁵¹Crで標識したCEA発現標的細胞（例えば、LS174-T）を使用することにより測定される。標識は、約10⁶個の細胞を約200μCi Na₂ ⁵¹CrO₄と37℃で60分間インキュベートし、続いて洗浄することにより達成され得る。このアッセイは、抗体（または抗体を含む臨床サンプル）を標的細胞とインキュベートすることにより行われる。次いで、オプソニン化細胞は洗浄され、そして補体供給源（例えば、内因性抗体活性を除去するために予め吸着されたモルモット血清）とインキュベートされる。37℃での適切なインキュベーション期間の後、培地への⁵¹Cr放出が測定され、そして非オプソニン化コントロール細胞由来のものと比較される。⁵¹Cr放出は、CMC活性と相関する。抗CEA抗体を特徴づける別の方法は、ADCC応答（Chereshら(1986)Cancer Res.4 6:5112）に参加するその能力を試験することによる。放射標識CEA発現標的細胞は、抗CEA（熱不活化血清の形態）およびエフェクター細胞とインキュベートされる。正常ヒト末梢血単核細胞(PBMC)は適切なエフェクター細胞であり、そして好ましくは約100のエフェクター：標的の比で使用される。37℃で約４時間後、放出された⁵¹Crの割合がADCC活性の測定により決定される。高い危険性の患者の血清におけるADCC活性は、実施例４に示される。 3H1が投与されている被験体における細胞性免疫応答は、特異的Ｔ細胞活性についての標準機能的アッセイを行うことにより定量され得る。アッセイの１つの型はＴ細胞増殖を測定する。この試験において、末梢血単核細胞(PBMC)は、処置された個体から回収された全血サンプルから得られる。実験動物については、脾臓細胞もまた使用され得る。Ｔ細胞は、例えば、FICOLL^TMのような勾配上での遠心分離により富化され得る。次いで、細胞は、CEAまたは（より通常は）放射線照射されたCEA発現細胞の存在下で種々の濃度で培養される。好ましくは、スティミュレーター細胞は、特に組織適合クラスII抗原に関してレスポンダー細胞と自己由来である。必要に応じて、Ｔ細胞集団は、CEAまたは関連細胞株で前刺激され得る。次いで、増殖の程度は、非刺激細胞と比較して（しばしば、³Ｈチミジン取り込みに関して）測定される。高い危険性の患者の血清におけるＴ細胞増殖活性は、実施例４に示される。別の型のアッセイは、Ｔ細胞細胞傷害性を測定する。この試験において、富化Ｔ細胞集団は、上記のように調製された、⁵¹Cr標識CEA発現標的細胞の溶解をもたらすために使用される。好ましくは、エフェクター細胞は、組織適合クラスI 抗原に関して標的細胞と自己由来である。Ｔ細胞集団は、必要に応じてCEAまたは関連する細胞株で予め刺激され得る。次いで、Ｔ細胞は、約10⁴個の標識標的細胞と種々の比で；例えば、マイクロタイタープレートのウェル中で組み合わされる。プレートは、必要に応じて細胞接触を開始するように遠心分離され、そして細胞は、37℃で４〜16時間共に培養される。培地への⁵¹Crの比放出(specific release)のパーセントは、単独で培養された標識標的（ネガティブコントロール）および0.1％ Triton^TMX-100のような界面活性剤で溶解した標的（ポジティブコントロール）と比較して測定される。 3H1投与の効果を決定するための他の関連測定法として、疾患進行の直接的徴候または間接的徴候にかかわらず、疑わしい型のガンの発達（すなわち進行）を測定するのに適切であり得る臨床試験が挙げられる。このような試験として、血液検査、乳房撮影、ラジオシンチグラフィー、CTスキャン、およびMRIが挙げられる。疾患進行と相関する任意の測定可能な変数が適切である。例えば、血中の測定可能なCEAに関連するCEA関連腫瘍または障害について、CEAレベルが測定され得る。CEAの血清レベルを測定する方法は当該分野で公知であり、そして診断キットとして市販されている（Hybritech Enzyme Immunoassay）。この試験のために、血清は以下のように調製される：3H1で処置された個体は、１mlの酢酸緩衝液(pH5.0)での処理に続いて90℃で15分間加熱された0.5mlの血清を有する。20 00rpmで10分間の遠心分離の後、透明な上清は、実施例４に記載のようにCEAについて試験される。血清は、記載のように試験前に熱不活化されるべきである。なぜなら、市販のCEAキットはマウス抗CEA抗体を含み、そして3H1を受けた個体は、通常ヒトマウス抗体（HAMA）を有するからである。任意の他の腫瘍関連マーカー（例えば、CA-125）が、治療経過をモニターするのに適している。本発明はまた、CEA関連腫瘍の処置において、特に低い腫瘍負担を有する個体において使用される医薬品を調製するための3H1の使用を含む。以下の実施例は、例示のために提供されるが、本発明を限定しない。実施例１免疫のための3H1抗イディオタイプ抗体の産生マウスモノクローナル抗体8019（CEAの異なるエピトープを認識する）を使用して、共有に係る特許出願第08/579,940号（代理人記録番号30414/2000121）に記載のように、抗イディオタイプ抗体3H1(IgG1-κ)の産生のために同系BALB/cマウスを免疫化した。Bhattacharya-Chatterjeeら(1987)J.Immunol. 5:562-573；B hattacharya-Chatterjeeら(1988)J.Immunol.141:1398-1403もまた参照のこと。B ALB/cマウスの免疫化、ハイブリドーマ融合およびクローニング、抗イディオタイプ(Ab2)の選択ならびにマウスにおける大量の腹水の生成を、以前に記載されたように行った。Ab2抗イディオタイプ3H1(IgG1)を、プロテインＡ-CLセファロース4Bカラムでのアフィニティークロマトグラフィー、それに続くDEAE-セファロースイオン交換クロマトグラフィーにより腹水から精製した。単離された免疫グロブリンの純度(＞95％)を、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)および高速液体クロマトグラフィー技術により決定した。無菌性、発熱性、ポリヌクレオチド、マイコプラズマ、および外来ウイルス汚染、ならびにレトロウイルス除去確認試験を、米国食品医薬品局ガイドラインに従って行った。精製mAb抗Id(3H1)の５mgアリコートに、１mlの２％ Alu-Gel S(Serva Fine Bi ochem,Inc.，Garden City，Long Island，NY)を添加した。次いで、容量をD-PBS で10mlに調節し、そして混合物を室温で１時間ボルテックスでインキュベートした。次いで、混合物を、2000rpmで24℃で10分間遠心分離した。ゲル層に結合した・Abの量を、上清中の非結合抗体の量を分光光度計で測定することにより決定したmAlu-Gel沈降抗体を、使用まで４℃で保存した。これらの手順を、層流フード内で無菌的に行い、そして最終産物を滅菌し、そして抗Id 3H1 Alu-Gelとしてはっきりと標識し、そして発熱物質を含まない滅菌ガラスバイアルにアリコートした。実施例２ 3H1 投与によるマウスにおける腫瘍負担の改善本発明者らは、同系C57BL/6(H-2^b)マウスにおけるCEA腫瘍モデルを使用して、 3H1により誘導される腫瘍特異的免疫を評価した。Robbinsら((1991)Cancer Res. 51:3657-3662)は、高濃度でCEAを発現する形質導入されたマウス腫瘍株の開発を報告した。この細胞株MC-38ceaは、細胞媒介免疫および体液性免疫に対する優れた標的であるらしい。非形質導入MC-38ならびにCEA形質導入細胞株は、NCIのDr. Jeffrey Schlomにより快く提供された。マウスを、3H1-KLH結合体（50μg/マウス）で免疫化した。マウスの最初の免疫化を、フロイント完全アジュバントを用いて腹腔内に行った。その後の週の免疫化を、フロイント不完全アジュバントを用いて皮下に行った。血清を、各免疫の１週間後にマウスの尾静脈から採取し、そしてAb2(3H1)コートプレート上での RIAによるAb3応答および精製CEAコートプレート上でのELISAによる抗CEA(Ab1)応答について試験した。３匹のマウスからの脾臓を、Ｔ細胞増殖アッセイ用にプールした。ADCCのために、標的MC-38-cea細胞を、[⁵¹Cr]クロム酸ナトリウムで標識し、そして免疫化マウス由来の脾臓細胞とインキュベートした。放出パーセントは、自発性（ベースライン）放出で補正された総放出放射能に対する実験放出放射能の割合である。総放出を、標識細胞への１％Triton X-100の添加の際の放射能を測定することにより測定した。自発性放出を、⁵¹Cr標識細胞から放出された放射能のアッセイにより測定した。MC-38およびMC-38-cea細胞を、10％FCS、１％L-グルタミン、100μg/mlペニシリン、および0.25μg/mlストレプトマイシンを含むDMEMで増殖させた。MC-38-cea細胞を、200μg/mlネオマイシンアナログ G-418の存在下で培養した。図１に記載した結果は、５回の免疫化が、有意な量のAb3（図1A）およびAb1（図1B）の誘導に必要であったことを示す。図8(A)におけるデータは、Ab3が300倍の希釈後でさえも免疫化マウスの血清中で検出可能であったことを示す。図8(B) におけるデータは、Ab1が、80〜160倍の希釈後でさえも免疫化マウスの血清中で検出可能であり得ることを示す。イディオタイプおよびCEA特異的Ｔ細胞増殖もまた、５〜６回の免疫後にピークとなった（図1C）。 3H1ワクチンによりマウスにおいて誘導されたAb3のイディオタイプを、マウス血清によるAb1およびAb2結合の阻害により分析した。これらの実験結果を、表１に示す。これらの実験について、５匹のマウスそれぞれからの血清を別々にアッセイして、平均および標準誤差を得た。Ab1-Ab2結合阻害アッセイにおいて、コントロール正常血清プールによる阻害は、10〜15％で変化し、そして阻害は、2. 5μgの8019で完全であった。細胞結合阻害アッセイにおいて、正常血清による阻害は、バックグラウンドレベルであった。 Ab1(8019)の3H1への結合は、どの抗体がプレートをコートするのに使用されたかにかかわらず、５匹の免疫マウスの５匹由来の血清により阻害された。¹²⁵I標識8019のCEAへの結合阻害を、CEA陽性MC-38-cea細胞を用いることにより測定した。さらに、５匹のマウスの５匹由来の血清はこの結合を阻害し、そしてこの阻害は、血清の８倍希釈後でさえも有意であった。これらの結果は、3H1-KLH結合体によりマウスにおいて誘導されたAb3がAb1と同じイディオタイプを共有することを示唆した。 3H1ワクチン接種により誘導されたAb1の性質をさらに検証するために、免疫前血清および3H1-KLH結合体での６回の免疫後の３匹のマウスからプールされた血清のフローサイトメトリー分析を行った。図９に示された結果は、3H1ワクチンで免疫化したマウス由来の血清が、モノクローナル抗CEA抗体8019（図9B）と同じくMC-38-cea細胞表面に結合し得る（図9A）が、免疫前血清またはアイソタイプ適合抗イディオタイプ抗体1A7で免疫化したマウスの血清では結合が観察されなかった（図9C）ことを証明する。CEA陰性MC38細胞は、3H1ワクチンで免疫化したマウス由来の血清（図9D）、モノクローナル抗CEA抗体8019で免疫化したマウス由来の血清（図9E）、または1A7で免疫化したマウスの血清（図9F）に結合しなかった。 3H1免疫化により生じたAb1'が、CEA陽性腫瘍細胞（例えば、MC-38-cea）に対して細胞溶解性であるか否かを決定するために、ADCCを測定した。ADCC実験の結果を図10に要約する。各個々のマウス由来の血清による特定の細胞溶解の程度は変化したが（33±７、1:5希釈；13.2±5、1:10希釈）、有意なADCCを５匹のマウスのうち５匹において観察した。ごくわずかなADCCを、PBSで免疫化したマウス由来の血清において観察した（図10）。確立した腫瘍の治療のためのこのワクチンの効果を評価するために、一群のマウスに５×10⁵個のMC38cea細胞を注射した。３日後、一群のマウスを、４日間隔で3H1ワクチンで処置した。コントロール群を、乳房腫瘍関連抗原を認識する、別の抗Idである11D10で処置した。結果を表２に示す。腫瘍を両方の群で増殖させたが、3H1ワクチンで処置した９匹のマウスのうち６匹の腫瘍は、治療の５〜６経過後壊死し、そして退行した。２つの群間の差異は、Fisherの正確検定によりP<.05で有意であった。８匹のマウスのうち１匹のみが、コントロール抗Idワクチン11D10で処置した群において腫瘍壊死を有していた。これらの結果から、本発明者らは、3H1が腫瘍特異的治療効果を有すると結論づけた。実施例３ 3H1 を受けたマウスにおける腫瘍発達の遅延 C57BL/6(H-2^b)マウスを、実施例２に記載のように免疫化した。腫瘍攻撃実験を、６回目の免疫化の２週間後に開始した。上記のように免疫化したC57BL/6マウスの一群を、各々12マウスの２群に分けた。第１群を、５×10⁵個のMC38cea腫瘍細胞で攻撃し、そして第２群を等数のMC38腫瘍細胞で攻撃した。MC38ceaで攻撃したマウスにおいて腫瘍発達の遅延が存在した。結果を図２に示す。これらのマウスで発達した腫瘍はすぐに壊死し、そしてマウス生存がかなり延びた。CEA 陰性結腸直腸腫瘍細胞MC38を注射した3H1免疫化マウスは、７〜10日以内に触診可能な腫瘍を発達させ、そして２〜３週間以内に死んだ。他のコントロール群（非関連抗Id(11D10；図2B)で免疫化したマウスおよびPBSでワクチン接種されたマウス（図2C））もまた、MC38cea細胞で攻撃された場合に２〜３週間以内に死んだ。これらの実験は、CEA腫瘍細胞で攻撃した場合に、3H1マウスを受けたマウスの延長した生存（すなわち、腫瘍発達における遅延）を示す。実施例４アジュバント設定における高い危険性の個体を処置するための3H1の使用患者の選択 CEA陽性腫瘍を有する６人の高い危険性の患者を、本研究のために選択した（表３）。患者のうち３人（＃１、＃２、＃３）は、DukeのＣガン腫の手術をしており、そして5-FUおよびレバミゾールを受けている。患者のうち２人は、高い危険性の肺の腺ガンを有した（＃４、IV期、外科的に切除；＃５、II期、切除、２つの陽性の気管支周囲リンパ節）。１人の患者（＃６）は、結腸直腸ガンの２番目の再発の外科的切除を有した。ベースライン研究は、完全な身体検査、胸部Ｘ線撮影、腹部のコンピューター軸方向Ｘ線断層撮影試験、血清CEAレベル、日常的な血球計算および血液化学を含んだ。全ての患者は、治療前少なくとも４週間休み、そしてステージング(staging)を治療の終わりに繰り返した。 Ab2 の調製 3H1を、実施例１に記載のように得、そしてミョウバン沈殿させた。最終産物を、使用前にモルモットで無菌性、発熱性、および一般的な安全性について試験した。Investigational New Drug Applicationは、米国食品医薬品局(BB-IND 50 55)より認可された。投与前に、3H1を、水浴中で45℃で30分間アジュバントの存在下で熱処理した。処置スケジュール６人全ての患者は、２mgの熱処理ミョウバン沈殿3H1を皮内に受けた。４回の注射を、２週間毎に行い、続いて毎月注射した。患者を、12週間毎に評価した。 3H1と同時にフルオロウラシル(5-FU)およびレバミゾールを受けた患者（患者＃１、２、および３）に対して、3H1を5-FUの投与前に２〜５日間投与した。進行性疾患を証明した場合、患者を本研究から除いた。毒性および臨床応答毒性を、軽い紅班を有する注射部位での局所のみの反応および硬化および軽い熱およびアセタミノフェンにより和らげた悪寒を伴って最小であった。抗イディオタイプ処置は、造血細胞、腎臓または肝臓機能に対していずれの有害な効果も有さなかった。患者を、疾患活性について非常に密接にモニターした。精製CEA 精製CEAを、Rougier Bio-tech,Montreal,Canada(カタログ番号70015)から商業的に得た。CEAを、過塩素酸抽出により結腸腫瘍のヒト肝臓転移から単離し、そしてイオン交換クロマトグラフィーにより２回、続いてゲル濾過および数工程の HPLCクロマトグラフィーにより精製した。CEAは100％純粋であり、高速液体クロマトグラフィーおよびSDS-PAGEにより180,000分子量で単一のバンドを生じ、そしてウマならびにウサギ抗CEA抗体により単一のバンドとして免疫沈降させた。C EA調製物を、マウスモノクローナル抗体抗CEAを用いたウェスタンブロット分析により180,000および200,000分子量での２つの密接に移動するバンドに分離した。本発明者らは、モノクローナル抗体8019を用いたウェスタンブロット分析により物質を再チェックした。循環CEAの連続モニタリング疾患程度の間接的測定値(CEAレベル)を免疫前に記録し、そして免疫後、次いで免疫スケジュールの完了後月に一回測定した。このために、患者の血清を熱不活化して、CEAモニタリングアッセイを妨害する免疫グロブリン（マウスモノクローナルAb1を含む）を沈殿させた。CEAは熱安定性であり、これを日常的なELIS Aアッセイ（Hybritech Enzymeイムノアッセイキット、カタログ番号4063）により透明な遠心分離上清において測定した。CEAの連続モニタリングは、疾患進行、および臨床的に進行した全ての患者、およびCEAを分泌しなかった患者を除いたそれらの血清CEAレベルの上昇と相関した。 CEAを熱抽出血清において定量した。このために、１mlの0.2M酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.0)を0.5mlの血清に添加し、ボルテックス混合し、15分間90℃でインキュベートし、そして遠心分離した（1200×g、10分）。上清を同じ日にアッセイするか、またはアッセイまで-20℃で凍結保存した。次いで、100マイクロリットルの上清を、記載されたように（Hansenら(1989)Clin.Chem.35(1):146-151）、 CEAに対する酵素イムノアッセイによりアッセイした。体液性免疫についてのアッセイ（ａ）総抗3H1応答ミョウバン沈殿3H1での免疫化により誘導された体液性免疫の発生を、治療前およびワクチンでの各処置後の患者から得られた血清を試験することにより評価した。血清を、Khajaeliら(1988)J.Natl Cancer Inst.80:937-942に記載されるように、サンドイッチラジオイムノアッセイにより総ヒト抗マウス抗体（抗アイソ／アロ／および抗-抗イディオタイプ抗体を含む）応答について最初に試験した。簡単には、マイクロタイタープレートを3H1でコートし、そして患者血清の異なる希釈物とインキュベートした。洗浄後、抗原-抗体反応を、均一サンドイッチラジオイムノアッセイにおいて¹²⁵I標識抗Id 3H1を用いてタグ化した。3H1 はインタクトなIgG1として注射されるので、タンパク質はヒト抗マウス抗体応答を増大させると予想される。６人全ての患者からの過免疫血清（3H1の４回目の注射後）は、均一サンドイッチラジオイムノアッセイにより測定されたように、Ab2、3H1免疫に対して、著しいレベルの総ヒト抗マウス抗体（抗アイソ／アロ／および抗-抗イディオタイプ抗体を含む）応答を示した。（ｂ）Ab2 に対する特異的Ab3応答これらの免疫化患者由来の血清を、ラジオイムノアッセイによりプレート上で¹²⁵ I標識Ab1(8019)のAb2(3H1)への結合を阻害する能力またはその逆（プレート上のAb1への放射標識Ab2結合の阻害）についてチェックした。これらの反応を、アイソタイプおよびアロタイプ決定基に対するヒト抗体をブロックするために、過剰な正常マウス免疫グロブリンの存在下で行った。４回目の処置後に患者から得た粗血清を、正常マウス免疫グロブリンとプレインキュベートして、アイソタイプおよびアロタイプ決定基に対してヒト抗体をブロックした。本発明者らは、最低４回目の免疫化が、免疫を誘導するのに動物モデルにおいて必要であるので、日常的に４回目の免疫化後に使用した。４回を超える注射を受けた患者については、免疫応答は、力価が同等のままであったか、または増大し続けた。次いで、血清の連続希釈物を、Ab1-Ab2結合アッセイにおける阻害について試験した。全てのアッセイを、３連で行った。Ab1とAb2との間の直接的阻害アッセイのために、精製3H1(Ab2)を使用してプレートをコートし（ 500ng/ウェル）、そして放射標識8019(Ab1)のAb2への結合を、異なる患者の過免疫Ab3血清およびAb1の存在下での阻害について試験した。これは、患者血清中の Ab3がイディオトープを8019(Ab1)と共有するか否かを証明した。また、このAb3 血清によるAb1-Ab2結合間の阻害アッセイは、Ab3が真の抗抗イディオタイプであるか否かを示した。非関連Ab3をコントロールとして使用した。洗浄後、抗原-抗体反応を、上記の均一サンドイッチラジオイムノアッセイにおいて¹²⁵I標識抗イディオタイプ試薬を用いてタグ化した。前処理、非免疫血清および正常ドナー由来の血清を、コントロールとして使用した。図３は、６人全ての患者からのデータを示す。６人全ての患者はAb3を産生した。図３は、治療への20ヶ月もの長い間での患者血清によるAb1結合のAb2への阻害を示す。１人の患者（＃１）のみが、この患者が５ヶ月の治療の間顕著な阻害を示していても、有意な減少を示した。この患者は最終的に疾患進行を示し、本研究から除いた。Ab3結合による立体障害はこれらのアッセイで排除され得ないが、結果は、Ab1とイディオタイプを共有する真の抗-抗イディオタイプ抗体の存在を示唆する。６人の患者全てが、このアッセイによりAb3応答について陽性であった。（ｃ）抗CEA抗体の3H1による誘導このアッセイを、モノクローナルマウスAb2により患者中に誘導されるAb3のいくつかがAb1型であり、そしてCEAに結合するか否かを決定するために行った。Ro ugier Biotech(上記)から得たCEAの純粋な調製物を使用して、非特異的結合による偽陽性結果を得る危険性を減少させた。精製CEAを、クロラミンＴ法によりＩ¹ ²⁵ で放射標識した。放射標識CEA（１×10⁶cpm）を、プロテインＧ-セファロースビーズに予め吸着させた0.5mlの患者血清と反応させた。反応後、ビーズを洗浄し、そしてγ線分光光度計でカウントした。各サンプルを２連で行い、そして平均の結合cpmを示す。免疫前血清、リン酸緩衝化生理食塩水-ウシ血清アルブミン、ならびにＴ細胞リンパ腫の非関連マウスモノクローナル抗体で処置した患者から得られたAb3血清を、これらのアッセイにおけるコントロールとして使用した。 3H1での免疫化は、ラジオイムノアッセイまたはELISAにより測定されたように、６人全ての患者において放射標識CEAに結合する抗体を誘導した。処置前、非免疫血清、および正常ドナー由来の血清を、これらのアッセイにおけるコントロールとして使用した。（ｄ）LS174-T 細胞への結合に対するAb1および患者Ab3の競合 Ab3がAb1と同様の結合部位を有しているのであれば、LS174-T細胞上のCEAへの結合についてAb1と競合するはずである。固定量の放射標識8019(約90,000cpm)を、異なる濃度の患者精製Ab3またはAb1調製物およびLS174-Ｔ細胞と同時にインキュベートした。 Ab3を以下のように患者血清から精製した。50ミリリットルの過免疫血清を、セファロース4Bに結合した免疫化抗イディオタイプ免疫グロブリン(3H1)からなる免疫吸着カラム上を通過させた。カラムに結合した抗抗イディオタイプ抗体(A b3)を、0.1Mグリシン-塩酸緩衝液(pH2.4)で溶出させた。溶出した抗体を、3M Tr isで中和し、PBS(pH7.2)に対して透析し、次いで、セファロース4Bに結合したアロタイプ適合正常マウス免疫グロブリンからなる免疫吸着カラム上を通過させて、抗イディオタイプおよび抗アロタイプ反応性を除去した。通過した抗体を濃縮し、そして精製Ab3として使用した。Ab3アイソタイプ(isotope)を、ヒト抗アイソタイプ(isotope)特異的試薬(Tago)を用いてELISAにより決定した。全体的にみて、Ab1およびAb3で得た阻害曲線は、異なる希釈物で非常に類似していた。これは、患者のAb3はAb1と同じ抗原エピトープに結合し、従って、Ab1 特性を有する抗体分子を含むことを示した。（ｅ）Ab1 およびAb3によるCEAの免疫沈降精製CEAを、クロラミンＴ法によりI¹²⁵で標識し、そして、プロテインＧ-セフアロースビーズに予め吸着させた、精製Ab3(10μg)もしくはAb1(10μg)、またはリンパ腫患者由来の非関連コントロールAb3(10μg)、またはPBS-BSAコントロールと反応させた。洗浄後、抗原-抗体コートビーズを、Laemmli((1970)Nature 22 7 :680-685)の方法に従ってSDS-PAGEにより分析し、そしてオートラジオグラフィーを行った。 Ab1 8019は、SDS-PAGE分析により180,000分子量CEAを特異的に免疫沈降させたことが以前に示されている（Bhattacharya-Chatterjee(1990)）。3H1により誘導されたAb3がCEA分子に特異的であることを確認するために、ヨウ素化精製CEA調製物を、２人の患者から得た精製Ab3調製物ならびにAb1により免疫沈降させ、そしてSDS-PAGEにより分析した。結果は、患者のAb3が、マウスAb1 8019のものと同じ180,000分子量CEAのバンドを沈降させたことを示した。ヨウ素化CEAを、非関連Ab2(4DC6)で処理した患者から得た精製Ab3と反応させた場合に交差反応は存在しなかった。（ｆ）抗体依存性の細胞の細胞傷害性次いで、本発明者らは、抗体依存性の細胞の細胞傷害性(ADCC)を媒介する能力について患者血清を試験した。Chereshら(1986)Cancer Research 46:5112-5118 。このアッセイのために、培養ヒトLS-174T細胞（細胞表面上にCEAを発現する）を標的細胞として使用し、そして⁵¹Crで標識した。正常ヒト末梢血単核細胞(PBM C)を、エフェクター細胞として使用した。ADCCアッセイを、100:1のエフェクター対標的細胞比で、熱不活化患者血清の存在下で４時間行い、続いて⁵¹Cr放出量を測定した。結果を、図４および５に示す。本発明者らは、3H1に対するポリクローナルヒト抗抗イディオタイプ抗体応答がADCCを媒介することを見出した。Ｔ細胞増殖応答についてのアッセイ細胞性免疫応答を、水酸化アルミニウム沈殿抗イディオタイプ抗体3H1および水酸化アルミニウム沈殿アイソタイプ(isotope)適合コントロール抗イディオタイプ抗体4DC6とインキュベーションした末梢血単核細胞の増殖により測定した。末梢血単核細胞を、４回の免疫化後に、標準的なFicoll-Hypaque密度勾配遠心分離法により得た血液から単離し、そしてウェルあたり５×10⁶個の細胞を、５パーセント熱不活化ウシ胎児血清およびペニシリンおよびストレプトマイシンを含むRPMI培地中で、異なる濃度の3H1-Alugelおよびコントロール4DC6-Alugel(10 μg〜２μg)とインキュベートした。非特異的マイトジェンフィトヘマグルチニン-Pを、ウェルあたり２μgおよび１μgで陽性コントロールとして使用した。細胞を、５パーセント二酸化炭素を含む雰囲気下で37℃で５日間インキュベートした後、それらを、³H-チミジン(１μCi/ウェル)で20時間、パルスした。³H-チミジン取り込みを、治療前後のサンプルで測定した。データを、１分の³H-チミジン取り込みあたりの平均カウント（３連のウェル）として表す。データの標準偏差は、各測定について＜10％であった。数名の選択した患者から単離した末梢血単核細胞もまた、上記のプロトコルのように、異なる濃度の精製CEA(10ng〜250ng)および3H1（IYRANRLIDGV；配列番号１）とCEA（PPAQYSWLIDGN；配列番号２）との間の配列相同性に基づいたペプチドとインキュベートした。陽性増殖応答が、６人の患者全てにおいて見られた。免疫前細胞は、抗イディオタイプ抗体に対して増殖応答を有さなかったが、過免疫細胞は有意な応答を有した。アイソタイプ(isotope)適合4DC6水酸化アルミニウム沈殿抗イディオタイプ抗体に対する応答もまた存在した；この応答は、3H1応答のものより著しく低く、これは免疫グロブリン分子の非イディオタイプ成分に対する応答を示すと思われる。コントロール4DC6-Alugelと比較した3H1-Alugelに対する応答の差異は、BSAと比較したCEAに対する応答（p<0.005）と同様に有意であった（p<0.003）。Alugel自身に対する応答は存在しなかった。６人の患者のうち３人は、ペプチドに対して増殖応答を示した。生存結果これらの６人の患者のうち４人は、3H1治療の開始後１〜2.5年疾患が無いままであり、５人のうち１人は2.5年、疾患が無かった。１人の患者（＃３）は、21 ヶ月後に進行を示した。別の患者（＃６；以下に記載）は、20ヶ月後に進行を示した。実施例５ CEA 関連腫瘍を有する極度に高い危険性の患者の3H1を用いた長期生存実施例４での研究からの１人の患者（＃４）は、結腸直腸ガンの以前の病歴を有し、２回別々に骨盤が再発し、これを２年の経過にわたって外科的に切除した。この患者は、最後の切除の12ヶ月以内に90％を超える再発の危険性を有する、非常に高い再発の危険性を有していた。患者は、実施例５に記載のような3H1のレジメに置かれた。この患者は、優れた体液性応答および細胞性応答を示し、そして処置が始まった後21ヶ月間疾患が無いままであった（すなわち、検出可能な疾患が無い）。処置の21ヶ月後、CATスキャンは、腹膜後リンパ節および肝臓の潜在的な転移性疾患を明らかにした。実施例６アジュバント設定における高い危険性の個体を処置するための3H1の使用についてのさらなるデータ実施例４に記載の研究を、計15人の患者を含むように拡大した。プロトコルおよび試験は、実施例４に記載の通りであった。表４は、全ての患者についてのデータを提供する（番号付けは表２に対応する）。全てのさらなる患者は、治療（すなわち、外科的切除、放射線治療、および／または化学療法）を以前に受けていた。表における進行は、研究に入った日から測定した進行に対する時間を示す。データは、進行していた９人の患者のデータを示し、（研究に入った日からの）進行に対する時間の範囲は、１ヶ月から36ヶ月であり、これらの患者のうち６人が 3H1での処置の20ヶ月以上まで進行しなかった。進行していなかった８人の患者のうち、１人の患者（＃８）は、処置の11ヶ月後でもなお疾患が無かった。患者＃５（23ヶ月後に進行した）と同じ医学的病歴を有する患者は、12ヶ月以内に約 80％の確率の再発を有すると評価される。実施例５に記載のように、医学的病歴に基づいて、患者＃４（21ヶ月後に進行した）は、12ヶ月以内に90％以上の可能性の再発を有すると評価される。別の有用な統計量は、最後の処置の日から測定された検出可能でない疾患の（または進行に対する）時間（すなわち、検出可能な疾患がない期間）である。従って、測定された患者番号１および２は、進行まで23ヶ月間疾患がなかった。患者＃５は、進行まで24ヶ月間疾患が無かった。患者＃７は、22ヶ月後でもなお疾患が無かった。前述の発明は、理解の明瞭の目的のための例示および例のためにいくらか詳細に記載されたが、特定の変化および改変が行われ得ることは当業者には明らかである。従って、説明および実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきでなく、添付の請求の範囲により正確に概説される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者フーン，ケネスエイ. アメリカ合衆国ケンタッキー 40506, レキシントン，ローズストリート 800 (72)発明者チャタージー，スンイルケイ. アメリカ合衆国ケンタッキー 40502, レキシントン，ザウッズレーン 2400

Claims

【特許請求の範囲】１．低い腫瘍負担を有する個体においてCEA関連腫瘍の発達を遅延する方法であって、有効量の抗イディオタイプ抗体3H1を個体へ投与する工程を包含する、方法。２．前記個体が高い危険性を有する、請求項１に記載の方法。３．前記個体がアジュバント設定においてである、請求項２に記載の方法。４．前記3H1がアジュバントと共に投与される、請求項１に記載の方法。５．前記アジュバントが水酸化アルミニウムである、請求項４に記載の方法。６．前記CEA関連腫瘍が胃腸起源である、請求項１に記載の方法。７．前記CEA関連腫瘍が結腸直腸である、請求項６に記載の方法。８．前記CEA関連腫瘍が肺である、請求項１に記載の方法。９．前記3H1が約１mg〜約４mgの量で投与される、請求項１に記載の方法。１０．前記3H1が約２mgの量で投与される、請求項９に記載の方法。１１．前記3H1が１週間間隔で投与される、請求項１に記載の方法。１２．前記3H1が２週間間隔で投与される、請求項１に記載の方法。１３．前記3H1が投与前に熱処理される、請求項１に記載の方法。１４．前記個体が、約50ng/ml未満の循環CEAレベルを有する、請求項１に記載の方法。１５．低い腫瘍負担を有する個体におけるCEA関連腫瘍の処置の方法であって、有効量の抗イディオタイプ抗体3H1を該個体に投与する工程を包含する、方法。１６．低い腫瘍負担を有する個体におけるCEA関連腫瘍の処置の方法であって、該個体が約50ng/ml未満の循環CEAのレベルを有し、該方法が有効量の抗イディオタイプ抗体3H1を該個体に投与する工程を包含する、方法。１７．個体における大腸または結腸直腸起源のCEA関連腫瘍の処置の方法であって、（ａ）5-フルオロウラシルを投与する工程、（ｂ）塩酸レバミゾールまたはロイコボリンカルシウムを投与する工程；および（ｃ）有効量の3H1該個体に投与する工程を包含する、方法。