JP2002338494A - ムチン合成インヒビター - Google Patents
ムチン合成インヒビターInfo
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- JP2002338494A JP2002338494A JP2001316115A JP2001316115A JP2002338494A JP 2002338494 A JP2002338494 A JP 2002338494A JP 2001316115 A JP2001316115 A JP 2001316115A JP 2001316115 A JP2001316115 A JP 2001316115A JP 2002338494 A JP2002338494 A JP 2002338494A
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- mucin
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ムチン合成を調節する方法、および疾患（例
えば、喘息および慢性気管支炎、炎症性肺疾患、嚢胞性
線維症ならびに急性または慢性の呼吸器感染疾患を含
む、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））に関連したムチン
過剰産生を制御する際の化合物の治療適用を提供するこ
と。 【解決手段】 ムチンの産生によって特徴付けられる疾
患を有する被験体の処置方法であって、該被験体におけ
るムチンの合成またはレベルを減少させる少なくとも１
つの化合物を含む組成物の有効量を該被験体に投与する
工程を包含する、方法。
えば、喘息および慢性気管支炎、炎症性肺疾患、嚢胞性
線維症ならびに急性または慢性の呼吸器感染疾患を含
む、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））に関連したムチン
過剰産生を制御する際の化合物の治療適用を提供するこ
と。 【解決手段】 ムチンの産生によって特徴付けられる疾
患を有する被験体の処置方法であって、該被験体におけ
るムチンの合成またはレベルを減少させる少なくとも１
つの化合物を含む組成物の有効量を該被験体に投与する
工程を包含する、方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】（発明の分野）本発明は、ム
チン合成を調節する方法、および疾患（例えば、喘息、
慢性気管支炎、炎症性肺疾患、嚢胞性線維症および急性
または慢性の呼吸器感染疾患ならびに慢性閉塞性肺疾患
（ＣＯＰＤ））に関連するムチン過剰産生を制御する際
の化合物の治療適用に関する。
チン合成を調節する方法、および疾患（例えば、喘息、
慢性気管支炎、炎症性肺疾患、嚢胞性線維症および急性
または慢性の呼吸器感染疾患ならびに慢性閉塞性肺疾患
（ＣＯＰＤ））に関連するムチン過剰産生を制御する際
の化合物の治療適用に関する。
【０００２】
【従来の技術】（関連出願の引用）本出願の基礎出願
は、２００１年８月２日に出願された米国出願第０９／
９２０，２８７号の一部継続出願であり、そして２００
１年８月１日に出願された米国出願第０９／９１８，７
１１号の一部継続出願である。米国出願第０９／９２
０，２８７号および米国出願第０９／９１８，７１１号
は両方とも、２００１年１月３１日に出願された米国出
願第０９／７７４，２４３号の一部継続出願である。米
国出願第０９／７７４，２４３号は、２０００年１月３
１日に出願された米国仮出願第６０／１７９，１２７
号、２０００年３月３０日に出願した米国仮出願第６０
／１９３，１１１号、２０００年９月７日に出願した米
国仮出願第６０／２３０，７８３号、２０００年１０月
２３日に出願した米国仮出願第６０／２４２，１３４号
および２０００年１１月２０日に出願した米国仮出願第
６０／２５２，０５２号の利益を主張する。これらの出
願は全て、その全体が本明細書中に参考として援用され
る。
は、２００１年８月２日に出願された米国出願第０９／
９２０，２８７号の一部継続出願であり、そして２００
１年８月１日に出願された米国出願第０９／９１８，７
１１号の一部継続出願である。米国出願第０９／９２
０，２８７号および米国出願第０９／９１８，７１１号
は両方とも、２００１年１月３１日に出願された米国出
願第０９／７７４，２４３号の一部継続出願である。米
国出願第０９／７７４，２４３号は、２０００年１月３
１日に出願された米国仮出願第６０／１７９，１２７
号、２０００年３月３０日に出願した米国仮出願第６０
／１９３，１１１号、２０００年９月７日に出願した米
国仮出願第６０／２３０，７８３号、２０００年１０月
２３日に出願した米国仮出願第６０／２４２，１３４号
および２０００年１１月２０日に出願した米国仮出願第
６０／２５２，０５２号の利益を主張する。これらの出
願は全て、その全体が本明細書中に参考として援用され
る。
【０００３】本発明はまた、１９９６年８月２３日に出
願され、２０００年３月１４日に米国特許第６，０３
７，１４９号として発行された米国特許出願第０８／７
０２，１１０号の主題に関し、そして１９９９年６月９
日に出願された米国特許出願第０９／３２５，５７１号
および１９９９年６月１日に発行された米国特許第５，
９０８，８３９号に関する。これらは全て、その全体が
本明細書中に参考として援用される。さらに、本出願
は、その全体が本明細書中に参考として援用される、１
９９７年１２月１日に出願した米国特許出願第０８／９
８０，８７２号に関する。
願され、２０００年３月１４日に米国特許第６，０３
７，１４９号として発行された米国特許出願第０８／７
０２，１１０号の主題に関し、そして１９９９年６月９
日に出願された米国特許出願第０９／３２５，５７１号
および１９９９年６月１日に発行された米国特許第５，
９０８，８３９号に関する。これらは全て、その全体が
本明細書中に参考として援用される。さらに、本出願
は、その全体が本明細書中に参考として援用される、１
９９７年１２月１日に出願した米国特許出願第０８／９
８０，８７２号に関する。
【０００４】（発明の背景）気道上皮は、粘膜線毛（ｍ
ｕｃｏｃｉｌｉａｒｙ）系および機械的障壁を通して、
気道防御機構において肝要な役割を果たすことが公知で
ある。近年の研究は、気道上皮細胞（ＡＥＣ）が活性化
されて、複数の気道障害の病因において重要な生物学的
メディエーターを産生および放出し得ることを示す（Ｐ
ｏｌｉｔｏおよびＰｒｏｕｄ、１９９８；Ｔａｋｉｚａ
ｗａ、１９９８）。上皮が、慢性気道障害（例えば、喘
息、慢性気管支炎、気腫および嚢胞性線維症）において
基本的に障害を受けているという証拠が示された（Ｈｏ
ｌｇａｔｅら、１９９９；Ｊｅｆｆｅｒｙ ＰＫ、１９
９１；Ｓａｌｖａｔｏ、１９６８；ＧｌｙｎｎおよびＭ
ｉｃｈａｅｌｓ、１９６０）。これらの気道障害の特徴
の１つは、ＡＥＣによる粘液の過剰産生である。粘液の
主要な高分子成分は、ムチンとして公知の大きな糖タン
パク質である。近年、少なくとも７つのヒトムチンの分
子構造が決定された。公知のムチン転写産物は、不均質
であり、これらの遺伝子間に配列相同性はない（Ｖｏｙ
ｎｏｗおよびＲｏｓｅ、１９９４）が、これらはその全
体的な繰り返し構造が類似している。
ｕｃｏｃｉｌｉａｒｙ）系および機械的障壁を通して、
気道防御機構において肝要な役割を果たすことが公知で
ある。近年の研究は、気道上皮細胞（ＡＥＣ）が活性化
されて、複数の気道障害の病因において重要な生物学的
メディエーターを産生および放出し得ることを示す（Ｐ
ｏｌｉｔｏおよびＰｒｏｕｄ、１９９８；Ｔａｋｉｚａ
ｗａ、１９９８）。上皮が、慢性気道障害（例えば、喘
息、慢性気管支炎、気腫および嚢胞性線維症）において
基本的に障害を受けているという証拠が示された（Ｈｏ
ｌｇａｔｅら、１９９９；Ｊｅｆｆｅｒｙ ＰＫ、１９
９１；Ｓａｌｖａｔｏ、１９６８；ＧｌｙｎｎおよびＭ
ｉｃｈａｅｌｓ、１９６０）。これらの気道障害の特徴
の１つは、ＡＥＣによる粘液の過剰産生である。粘液の
主要な高分子成分は、ムチンとして公知の大きな糖タン
パク質である。近年、少なくとも７つのヒトムチンの分
子構造が決定された。公知のムチン転写産物は、不均質
であり、これらの遺伝子間に配列相同性はない（Ｖｏｙ
ｎｏｗおよびＲｏｓｅ、１９９４）が、これらはその全
体的な繰り返し構造が類似している。
【０００５】有害な刺激は、ＡＥＣを活性化することが
公知である。これらの刺激は、慢性閉塞性肺疾患の形態
に関連した薬物または環境汚染物質、タバコの煙および
感染性因子に対するアレルギー性疾患において抗原によ
って変化し得る。ＡＥＣの活性化は、イオン輸送の変
化、毛様体の拍動の変化、ならびにムチンの産生および
分泌の増加をもたらし、粘液の増加をもたらす。ＡＥＣ
活性化に応答して産生されるメディエーターとしては、
炎症細胞の流入を促進するケモカインが挙げられる（Ｔ
ａｋｉｚａｗａ、１９９８）。これらの炎症細胞は次い
で、ＡＥＣを損傷し得るメディエーターを産生し得る。
ＡＥＣの損傷は、前炎症（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔ
ｏｒｙ）産物（肺の破壊および機能喪失をもたらし得
る、気道壁再造形を駆動する、プロテアーゼおよび増殖
因子を含む）の拡大しかつ連続した供給源をもたらす、
細胞増殖を刺激する（杯細胞および粘膜下腺細胞過形
成）（Ｈｏｌｇａｔｅら、１９９９）。
公知である。これらの刺激は、慢性閉塞性肺疾患の形態
に関連した薬物または環境汚染物質、タバコの煙および
感染性因子に対するアレルギー性疾患において抗原によ
って変化し得る。ＡＥＣの活性化は、イオン輸送の変
化、毛様体の拍動の変化、ならびにムチンの産生および
分泌の増加をもたらし、粘液の増加をもたらす。ＡＥＣ
活性化に応答して産生されるメディエーターとしては、
炎症細胞の流入を促進するケモカインが挙げられる（Ｔ
ａｋｉｚａｗａ、１９９８）。これらの炎症細胞は次い
で、ＡＥＣを損傷し得るメディエーターを産生し得る。
ＡＥＣの損傷は、前炎症（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔ
ｏｒｙ）産物（肺の破壊および機能喪失をもたらし得
る、気道壁再造形を駆動する、プロテアーゼおよび増殖
因子を含む）の拡大しかつ連続した供給源をもたらす、
細胞増殖を刺激する（杯細胞および粘膜下腺細胞過形
成）（Ｈｏｌｇａｔｅら、１９９９）。
【０００６】粘液の過剰産生およびその生理化学的特徴
の変化は、肺の病因に多くの方法で寄与し得る。ムチン
の過剰産生による生理学的粘膜線毛クリアランスの破壊
は、粘液のつまり、空気の捕捉、およびしばしば感染を
併発する無気肺をもたらし得る。
の変化は、肺の病因に多くの方法で寄与し得る。ムチン
の過剰産生による生理学的粘膜線毛クリアランスの破壊
は、粘液のつまり、空気の捕捉、およびしばしば感染を
併発する無気肺をもたらし得る。
【０００７】喘息は、有病率および重篤度が増加してい
るようである慢性の閉塞性肺障害である（Ｇｅｒｇｅｎ
およびＷｅｉｓｓ、１９９２）。人口の３０〜４０％が
アトピー性アレルギーに罹患しており、そして人口のう
ち小児の１５％および成人の５％が喘息に罹患している
と見積もられている（ＧｅｒｇｅｎおよびＷｅｉｓｓ、
１９９２）。
るようである慢性の閉塞性肺障害である（Ｇｅｒｇｅｎ
およびＷｅｉｓｓ、１９９２）。人口の３０〜４０％が
アトピー性アレルギーに罹患しており、そして人口のう
ち小児の１５％および成人の５％が喘息に罹患している
と見積もられている（ＧｅｒｇｅｎおよびＷｅｉｓｓ、
１９９２）。
【０００８】喘息では、抗原による免疫系の活性化が、
アレルギー性炎症をもたらす。この型の免疫活性化が生
じた場合、これは、肺の炎症、気管支反応性亢進（ｂｒ
ｏｎｃｈｉａｌ ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅ
ｓｓ）、杯細胞および粘膜下腺過形成、ならびにムチン
の過剰産生および過剰分泌を併発する（Ｂａｓｌｅら、
１９８９）（Ｐａｉｌｌａｓｓｅ、１９８９）（Ｂｏｓ
ｑｕｅら、１９９０）。杯細胞および粘膜下腺細胞過形
成に関連した粘液の過剰産生およびつまりは、喘息の病
因の重要な部分であり、そして軽度の喘息および喘息発
作重積状態で死亡した個体の両方の気道の検査について
記載されている（Ｅａｒｌｅ、１９５３）（Ｃａｒｄｅ
ｌｌおよびＰｅａｒｓｏｎ、１９５９）（Ｄｕｎｎｉｌ
ｌ、１９６０）（Ｄｕｎｎｉｌｌら、１９６９）（Ａｉ
ｋａｗａら、１９９２）（Ｃｕｔｚら、１９７８）。特
定の炎症細胞は、この反応において重要である。このよ
うな炎症細胞としては、Ｔ細胞、抗原提示細胞、ＩｇＥ
を産生するＢ細胞、ＩｇＥを結合する好塩基球、および
好酸球が挙げられる。これらの炎症細胞は、アレルギー
性炎症の部位に蓄積し、そしてこれらが放出する毒性産
物は、ＡＥＣおよびこれらの障害に関連する他の組織の
破壊に寄与する。
アレルギー性炎症をもたらす。この型の免疫活性化が生
じた場合、これは、肺の炎症、気管支反応性亢進（ｂｒ
ｏｎｃｈｉａｌ ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅ
ｓｓ）、杯細胞および粘膜下腺過形成、ならびにムチン
の過剰産生および過剰分泌を併発する（Ｂａｓｌｅら、
１９８９）（Ｐａｉｌｌａｓｓｅ、１９８９）（Ｂｏｓ
ｑｕｅら、１９９０）。杯細胞および粘膜下腺細胞過形
成に関連した粘液の過剰産生およびつまりは、喘息の病
因の重要な部分であり、そして軽度の喘息および喘息発
作重積状態で死亡した個体の両方の気道の検査について
記載されている（Ｅａｒｌｅ、１９５３）（Ｃａｒｄｅ
ｌｌおよびＰｅａｒｓｏｎ、１９５９）（Ｄｕｎｎｉｌ
ｌ、１９６０）（Ｄｕｎｎｉｌｌら、１９６９）（Ａｉ
ｋａｗａら、１９９２）（Ｃｕｔｚら、１９７８）。特
定の炎症細胞は、この反応において重要である。このよ
うな炎症細胞としては、Ｔ細胞、抗原提示細胞、ＩｇＥ
を産生するＢ細胞、ＩｇＥを結合する好塩基球、および
好酸球が挙げられる。これらの炎症細胞は、アレルギー
性炎症の部位に蓄積し、そしてこれらが放出する毒性産
物は、ＡＥＣおよびこれらの障害に関連する他の組織の
破壊に寄与する。
【０００９】上記に述べた関連の特許出願では、出願人
は、インターロイキン−９（ＩＬ９）、そのレセプター
およびＩＬ９によってもたらされる活性が、アトピー性
アレルギー、喘息および関連の障害において治療介入の
適切な標的であることを実証した。アレルゲンによって
肥満細胞から放出されるメディエーターは、アレルギー
における重要な開始事象であると考えられてきた。ＩＬ
９は元々、肥満細胞増殖因子として同定され、そしてＩ
Ｌ９が肥満細胞プロテアーゼ（ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−
２、ＭＣＰ−４を含む）（Ｅｋｌｕｎｄら、１９９３）
およびグランザイムＢ（Ｌｏｕａｈｅｄら、１９９５）
の発現をアップレギュレートすることが実証された。従
って、ＩＬ９は、肥満細胞の増殖およびまたは分化にお
いて役割を果たすようである。さらに、ＩＬ９は、高親
和性ＩｇＥレセプターのα鎖の発現をアップレギュレー
トする（Ｄｕｇａｓら、１９９３）。さらに、インビト
ロおよびインビボの両方での研究は、刺激されたＢ細胞
からのＩｇＥの放出をＩＬ９が増強することを示した
（Ｐｅｔｉｔ−Ｆｒｅｒｅら、１９９３）。
は、インターロイキン−９（ＩＬ９）、そのレセプター
およびＩＬ９によってもたらされる活性が、アトピー性
アレルギー、喘息および関連の障害において治療介入の
適切な標的であることを実証した。アレルゲンによって
肥満細胞から放出されるメディエーターは、アレルギー
における重要な開始事象であると考えられてきた。ＩＬ
９は元々、肥満細胞増殖因子として同定され、そしてＩ
Ｌ９が肥満細胞プロテアーゼ（ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−
２、ＭＣＰ−４を含む）（Ｅｋｌｕｎｄら、１９９３）
およびグランザイムＢ（Ｌｏｕａｈｅｄら、１９９５）
の発現をアップレギュレートすることが実証された。従
って、ＩＬ９は、肥満細胞の増殖およびまたは分化にお
いて役割を果たすようである。さらに、ＩＬ９は、高親
和性ＩｇＥレセプターのα鎖の発現をアップレギュレー
トする（Ｄｕｇａｓら、１９９３）。さらに、インビト
ロおよびインビボの両方での研究は、刺激されたＢ細胞
からのＩｇＥの放出をＩＬ９が増強することを示した
（Ｐｅｔｉｔ−Ｆｒｅｒｅら、１９９３）。
【００１０】近年、ＩＬ９は、ムチン合成を刺激するこ
とが示された。そしてＩＬ９は、アレルギー性気道疾患
における肺の流体のムチン刺激活性のうちの５０〜６０
％程度を占め得る（Ｌｏｎｇｐｒｅら、１９９９）。バ
ックグラウンド系統由来のマウスと比較したムチン合成
および粘液過剰産生の正味のアップレギュレーション
は、ＩＬ９トランスジェニックマウスにおいて生じる。
ＩＬ９は、ＭＵＣ２およびＭＵＣ５ＡＣの遺伝子および
タンパク質をインビトロおよびインビボで特異的にアッ
プレギュレートする（Ｌｏｕａｈｅｄら、２０００）。
さらに、ＩＬ９中和抗体は、喘息の動物モデルにおける
抗原チャレンジに応答したムチンのアップレギュレーシ
ョンを完全に阻害する（ＭｃＬａｎｅら、２０００）。
とが示された。そしてＩＬ９は、アレルギー性気道疾患
における肺の流体のムチン刺激活性のうちの５０〜６０
％程度を占め得る（Ｌｏｎｇｐｒｅら、１９９９）。バ
ックグラウンド系統由来のマウスと比較したムチン合成
および粘液過剰産生の正味のアップレギュレーション
は、ＩＬ９トランスジェニックマウスにおいて生じる。
ＩＬ９は、ＭＵＣ２およびＭＵＣ５ＡＣの遺伝子および
タンパク質をインビトロおよびインビボで特異的にアッ
プレギュレートする（Ｌｏｕａｈｅｄら、２０００）。
さらに、ＩＬ９中和抗体は、喘息の動物モデルにおける
抗原チャレンジに応答したムチンのアップレギュレーシ
ョンを完全に阻害する（ＭｃＬａｎｅら、２０００）。
【００１１】現行の喘息処置は、多数の欠点がある。主
な治療剤であるβ−レセプターアゴニストは、症状を減
少させ、それによって肺の機能を一時的に改善させる
が、基礎をなす炎症には影響を与えず、かつムチン産生
を抑制もしない。さらに、β−レセプターアゴニストの
不断の使用は、脱感作を生じ、これにより、その効力お
よび安全性が低下する（Ｍｏｌｉｎｏｆｆら、１９９
５）。基礎をなす炎症を減少させ得、それによってムチ
ン産生を減少させ得る薬剤（例えば、抗炎症ステロイ
ド）は、免疫抑制から骨損失までの範囲にわたる、それ
自体の欠点のリストを有する（Ｍｏｌｉｎｏｆｆら、１
９９５）。
な治療剤であるβ−レセプターアゴニストは、症状を減
少させ、それによって肺の機能を一時的に改善させる
が、基礎をなす炎症には影響を与えず、かつムチン産生
を抑制もしない。さらに、β−レセプターアゴニストの
不断の使用は、脱感作を生じ、これにより、その効力お
よび安全性が低下する（Ｍｏｌｉｎｏｆｆら、１９９
５）。基礎をなす炎症を減少させ得、それによってムチ
ン産生を減少させ得る薬剤（例えば、抗炎症ステロイ
ド）は、免疫抑制から骨損失までの範囲にわたる、それ
自体の欠点のリストを有する（Ｍｏｌｉｎｏｆｆら、１
９９５）。
【００１２】慢性気管支炎は、別の形態の慢性閉塞性肺
障害である。成人のうちのほぼ５％がこの肺障害に罹患
している。慢性気管支炎は、痰の慢性過剰産生として定
義される。粘液過剰産生は一般に、誘導気道の炎症に関
連している。好中球およびマクロファージを含む、炎症
細胞のメディエーターは、この障害におけるムチン遺伝
子発現増加に関連し得る（Ｖｏｙｎｏｗら、１９９９；
Ｂｏｒｃｈｅｒｓら、１９９９）。粘液産生増加は、気
道閉塞に関連しており、気道閉塞は、この肺障害の主な
特徴のうちの一つである。治療は主に症候性であり、そ
して感染を制御することおよび肺機能のさらなる欠損を
防ぐことに集中する。気管支炎の症状を処置するために
しばしば用いられる、鬱血除去薬、去痰薬およびこれら
の薬剤の組み合わせは、ムチン産生を変化させるとは考
えられない。粘液溶解は、気道分泌物の粘度および／ま
たは弾性を減少させることによって粘膜線毛クリアラン
スを促進し得、そして症状の軽減を提供し得るが、ムチ
ンの合成も粘液過剰産生をも阻害しない（Ｔａｋａｈａ
ｓｈｉら、１９９８）。
障害である。成人のうちのほぼ５％がこの肺障害に罹患
している。慢性気管支炎は、痰の慢性過剰産生として定
義される。粘液過剰産生は一般に、誘導気道の炎症に関
連している。好中球およびマクロファージを含む、炎症
細胞のメディエーターは、この障害におけるムチン遺伝
子発現増加に関連し得る（Ｖｏｙｎｏｗら、１９９９；
Ｂｏｒｃｈｅｒｓら、１９９９）。粘液産生増加は、気
道閉塞に関連しており、気道閉塞は、この肺障害の主な
特徴のうちの一つである。治療は主に症候性であり、そ
して感染を制御することおよび肺機能のさらなる欠損を
防ぐことに集中する。気管支炎の症状を処置するために
しばしば用いられる、鬱血除去薬、去痰薬およびこれら
の薬剤の組み合わせは、ムチン産生を変化させるとは考
えられない。粘液溶解は、気道分泌物の粘度および／ま
たは弾性を減少させることによって粘膜線毛クリアラン
スを促進し得、そして症状の軽減を提供し得るが、ムチ
ンの合成も粘液過剰産生をも阻害しない（Ｔａｋａｈａ
ｓｈｉら、１９９８）。
【００１３】嚢胞性線維症（ＣＦ）は、肺に変化をもた
らし、そして濃い分泌物に関連するなお別の疾患であ
り、気道閉塞および吸入された病原性微生物によるその
後の集落形成（ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）および感染
をもたらす（Ｅｎｇら、１９９６）。ＤＮＡレベルは、
ＣＦ肺において顕著に増加し、そして痰の粘度を上昇さ
せ得る。エアゾール化された組換えＤＮａｓｅはこれら
の患者において有益なものであるが、病原性の粘液過剰
産生について有効な処置は存在しない。従って、当該分
野には、ＣＦにおける気道上皮細胞によるムチン過剰産
生を阻害し得る薬剤の同定についての特異的な、まだ対
処されていない必要性がある。ムチン分泌物によって引
き起こされる気道閉塞に加えて、ＣＦ患者はまた、消化
管への消化酵素の送達を妨げる、膵管での粘液つまりを
罹患する。この結果は、吸収不良症候群、脂肪便および
下痢である。
らし、そして濃い分泌物に関連するなお別の疾患であ
り、気道閉塞および吸入された病原性微生物によるその
後の集落形成（ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）および感染
をもたらす（Ｅｎｇら、１９９６）。ＤＮＡレベルは、
ＣＦ肺において顕著に増加し、そして痰の粘度を上昇さ
せ得る。エアゾール化された組換えＤＮａｓｅはこれら
の患者において有益なものであるが、病原性の粘液過剰
産生について有効な処置は存在しない。従って、当該分
野には、ＣＦにおける気道上皮細胞によるムチン過剰産
生を阻害し得る薬剤の同定についての特異的な、まだ対
処されていない必要性がある。ムチン分泌物によって引
き起こされる気道閉塞に加えて、ＣＦ患者はまた、消化
管への消化酵素の送達を妨げる、膵管での粘液つまりを
罹患する。この結果は、吸収不良症候群、脂肪便および
下痢である。
【００１４】慢性非アレルギー性副鼻腔炎には頻繁に、
この疾患に寄与する粘液産生における定量的変化および
定性的な変化が伴う。これらの変化としては、ＭＵＣ
２、ＭＵＣ５Ａ／ＣおよびＭＵＣ５Ｂのようなゲル形成
ムチンの分泌過多が挙げられる。さらに、慢性副鼻腔炎
を伴う患者は頻繁に、ムコイドまたは粘液膿性鼻漏を訴
える。近年の研究は、慢性副鼻腔炎に関与する分泌過多
が局所的に増加したムチン合成の結果であり得ることを
示唆する（Ｓｈｉｎｏｇｉら、Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐ
ｅ １１１（２）：２４０−２４５、２００１）。
この疾患に寄与する粘液産生における定量的変化および
定性的な変化が伴う。これらの変化としては、ＭＵＣ
２、ＭＵＣ５Ａ／ＣおよびＭＵＣ５Ｂのようなゲル形成
ムチンの分泌過多が挙げられる。さらに、慢性副鼻腔炎
を伴う患者は頻繁に、ムコイドまたは粘液膿性鼻漏を訴
える。近年の研究は、慢性副鼻腔炎に関与する分泌過多
が局所的に増加したムチン合成の結果であり得ることを
示唆する（Ｓｈｉｎｏｇｉら、Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐ
ｅ １１１（２）：２４０−２４５、２００１）。
【００１５】粘液過剰産生は多くの慢性閉塞性肺障害の
特徴のうちの１つであるが、当該分野には、これらの肺
障害に関連したムチンの合成または過剰産生をブロック
する方法はない。従って、当該分野には、ムチンの過剰
産生を阻害し、そしてこれらの患者の分泌物を薄めて粘
膜線毛クリアランスを促進し、そして肺の機能を保つと
いう、特定の必要性が存在する。
特徴のうちの１つであるが、当該分野には、これらの肺
障害に関連したムチンの合成または過剰産生をブロック
する方法はない。従って、当該分野には、ムチンの過剰
産生を阻害し、そしてこれらの患者の分泌物を薄めて粘
膜線毛クリアランスを促進し、そして肺の機能を保つと
いう、特定の必要性が存在する。
【００１６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ムチン合成
を調節する方法、および疾患（例えば、喘息および慢性
気管支炎、炎症性肺疾患、嚢胞性線維症ならびに急性ま
たは慢性の呼吸器感染疾患を含む、慢性閉塞性肺疾患
（ＣＯＰＤ））に関連したムチン過剰産生を制御する際
の化合物の治療適用を提供することを目的とする。
を調節する方法、および疾患（例えば、喘息および慢性
気管支炎、炎症性肺疾患、嚢胞性線維症ならびに急性ま
たは慢性の呼吸器感染疾患を含む、慢性閉塞性肺疾患
（ＣＯＰＤ））に関連したムチン過剰産生を制御する際
の化合物の治療適用を提供することを目的とする。
【００１７】
【課題を解決するための手段】本発明の処置方法は、ム
チンの産生によって特徴付けられる疾患を有する被験体
の処置方法であって、該被験体におけるムチンの合成ま
たはレベルを減少させる少なくとも１つの化合物を含む
組成物の有効量を該被験体に投与する工程を包含する。
チンの産生によって特徴付けられる疾患を有する被験体
の処置方法であって、該被験体におけるムチンの合成ま
たはレベルを減少させる少なくとも１つの化合物を含む
組成物の有効量を該被験体に投与する工程を包含する。
【００１８】１つの実施形態では、上記ムチン合成は、
塩素イオンチャネル依存性であり得る。
塩素イオンチャネル依存性であり得る。
【００１９】１つの実施形態では、上記化合物は、ＩＣ
ＡＣＣ塩素イオンチャネルを発現する細胞におけるムチ
ンの合成を減少させ得る。
ＡＣＣ塩素イオンチャネルを発現する細胞におけるムチ
ンの合成を減少させ得る。
【００２０】１つの実施形態では、上記化合物は、アン
トラニル酸のアナログおよび誘導体、２−アミノ−ニコ
チン酸のアナログおよび誘導体、２−アミノ−フェニル
酢酸のアナログおよび誘導体、ベンドロフルメチアジ
ド、アミノキノリンのアナログおよび誘導体、それらの
塩およびそれらのプロドラッグからなる群より選択され
得る。
トラニル酸のアナログおよび誘導体、２−アミノ−ニコ
チン酸のアナログおよび誘導体、２−アミノ−フェニル
酢酸のアナログおよび誘導体、ベンドロフルメチアジ
ド、アミノキノリンのアナログおよび誘導体、それらの
塩およびそれらのプロドラッグからなる群より選択され
得る。
【００２１】１つの実施形態では、上記化合物は、タル
ニフルマート、フルフェナム酸、ニフルム酸、メフェナ
ム酸、ベンドロフルメチアジド、Ｎ−（３−フルオロベ
ンジル）−３−アミノキノリン、それらの塩、それらの
誘導体およびそれらのプロドラッグからなる群より選択
され得る。
ニフルマート、フルフェナム酸、ニフルム酸、メフェナ
ム酸、ベンドロフルメチアジド、Ｎ−（３−フルオロベ
ンジル）−３−アミノキノリン、それらの塩、それらの
誘導体およびそれらのプロドラッグからなる群より選択
され得る。
【００２２】１つの実施形態では、上記組成物は、タル
ニフルマート、タルニフルマート誘導体、それらの塩ま
たはそれらのプロドラッグを含み得る。
ニフルマート、タルニフルマート誘導体、それらの塩ま
たはそれらのプロドラッグを含み得る。
【００２３】１つの実施形態では、上記組成物は、吸入
によって投与され得る。
によって投与され得る。
【００２４】１つの実施形態では、上記組成物は、液体
の形態であり得る。
の形態であり得る。
【００２５】１つの実施形態では、上記組成物は、粉末
の形態であり得る。
の形態であり得る。
【００２６】１つの実施形態では、上記液体は、エアゾ
ール化されていてもよい。
ール化されていてもよい。
【００２７】１つの実施形態では、上記組成物は、少な
くとも１つの去痰薬、粘液溶解剤、抗生物質または鬱血
除去剤をさらに含み得る。
くとも１つの去痰薬、粘液溶解剤、抗生物質または鬱血
除去剤をさらに含み得る。
【００２８】１つの実施形態では、上記去痰薬は、グア
イフェネシンであり得る。
イフェネシンであり得る。
【００２９】１つの実施形態では、上記組成物は、少な
くとも１つの安定剤、吸収増強剤または矯味矯臭剤をさ
らに含み得る。
くとも１つの安定剤、吸収増強剤または矯味矯臭剤をさ
らに含み得る。
【００３０】１つの実施形態では、上記安定剤はシクロ
デキストランであり得る。
デキストランであり得る。
【００３１】１つの実施形態では、上記吸収増強剤はキ
トサンであり得る。
トサンであり得る。
【００３２】１つの実施形態では、上記疾患は、慢性閉
塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性肺疾患、嚢胞性線維症
および急性または慢性の感染性疾患からなる群より選択
され得る。
塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性肺疾患、嚢胞性線維症
および急性または慢性の感染性疾患からなる群より選択
され得る。
【００３３】１つの実施形態では、上記組成物は、吸入
によって投与され得る。
によって投与され得る。
【００３４】１つの実施形態では、上記組成物は、吸入
によって肺または鼻の通路へと投与され得る。
によって肺または鼻の通路へと投与され得る。
【００３５】１つの実施形態では、上記ＣＯＰＤは、気
腫、慢性気管支炎および喘息からなる群より選択され得
る。
腫、慢性気管支炎および喘息からなる群より選択され得
る。
【００３６】本発明の組成物は、肺への吸入送達のため
に処方された治療組成物であって、タルニフルマート、
フルフェナム酸、ニフルム酸、メフェナム酸、Ｎ−（３
−フルオロベンジル）−３−アミノキノリン、それらの
塩、それらの誘導体およびそれらのプロドラッグからな
る群より選択される少なくとも１つの化合物をムチンの
産生またはレベルを減少させるのに有効な量で含み得
る。
に処方された治療組成物であって、タルニフルマート、
フルフェナム酸、ニフルム酸、メフェナム酸、Ｎ−（３
−フルオロベンジル）−３−アミノキノリン、それらの
塩、それらの誘導体およびそれらのプロドラッグからな
る群より選択される少なくとも１つの化合物をムチンの
産生またはレベルを減少させるのに有効な量で含み得
る。
【００３７】１つの実施形態では、上記組成物は、タル
ニフルマート、タルニフルマート誘導体、それらの塩ま
たはそれらのプロドラッグを含み得る。
ニフルマート、タルニフルマート誘導体、それらの塩ま
たはそれらのプロドラッグを含み得る。
【００３８】１つの実施形態では、上記組成物は、液体
の形態であり得る。
の形態であり得る。
【００３９】１つの実施形態では、上記組成物は、粉末
の形態であり得る。
の形態であり得る。
【００４０】１つの実施形態では、上記組成物は、少な
くとも１つの去痰薬、粘液溶解剤、抗生物質または鬱血
除去剤をさらに含み得る。
くとも１つの去痰薬、粘液溶解剤、抗生物質または鬱血
除去剤をさらに含み得る。
【００４１】１つの実施形態では、上記去痰薬は、グア
イフェネシンであり得る。
イフェネシンであり得る。
【００４２】１つの実施形態では、上記組成物は、少な
くとも１つの安定剤、吸収増強剤または矯味矯臭剤をさ
らに含み得る。
くとも１つの安定剤、吸収増強剤または矯味矯臭剤をさ
らに含み得る。
【００４３】１つの実施形態では、上記安定剤は、シク
ロデキストランであり得る。
ロデキストランであり得る。
【００４４】１つの実施形態では、上記吸収増強剤は、
キトサンであり得る。
キトサンであり得る。
【００４５】本発明の吸入デバイスは、上記のいずれか
の治療組成物を含む。
の治療組成物を含む。
【００４６】１つの実施形態では、上記化合物は、タル
ニフルマートであり得る。
ニフルマートであり得る。
【００４７】１つの実施形態では、上記化合物は、Ｎ−
（３−フルオロベンジル）−３−アミノキノリン、その
塩、その誘導体およびそのプロドラッグからなる群より
選択され得る。
（３−フルオロベンジル）−３−アミノキノリン、その
塩、その誘導体およびそのプロドラッグからなる群より
選択され得る。
【００４８】１つの実施形態では、上記化合物は、経口
投与され得る。
投与され得る。
【００４９】１つの実施形態では、上記組成物は、経口
投与され得る。
投与され得る。
【００５０】本発明の方法は、ムチンの産生によって特
徴付けられる疾患を有する被験体を処置する方法であっ
て、該被験体におけるムチンの合成またはレベルを減少
させ、そしてシクロオキシゲナーゼ酵素を阻害する少な
くとも１つの化合物を含む組成物の有効量を該被験体に
投与する工程を包含する。
徴付けられる疾患を有する被験体を処置する方法であっ
て、該被験体におけるムチンの合成またはレベルを減少
させ、そしてシクロオキシゲナーゼ酵素を阻害する少な
くとも１つの化合物を含む組成物の有効量を該被験体に
投与する工程を包含する。
【００５１】１つの実施形態では、上記化合物は、シク
ロオキシゲナーゼ２を特異的に阻害し得る。
ロオキシゲナーゼ２を特異的に阻害し得る。
【００５２】１つの実施形態では、上記化合物は、アン
トラニル酸のアナログおよび誘導体、２−アミノ−ニコ
チン酸のアナログおよび誘導体、２−アミノ−フェニル
酢酸のアナログおよび誘導体、ベンドロフルメチアジ
ド、アミノキノリンのアナログおよび誘導体、それらの
塩およびそれらのプロドラッグからなる群より選択され
得る。
トラニル酸のアナログおよび誘導体、２−アミノ−ニコ
チン酸のアナログおよび誘導体、２−アミノ−フェニル
酢酸のアナログおよび誘導体、ベンドロフルメチアジ
ド、アミノキノリンのアナログおよび誘導体、それらの
塩およびそれらのプロドラッグからなる群より選択され
得る。
【００５３】１つの実施形態では、上記化合物は、タル
ニフルマート、フルフェナム酸、ニフルム酸、メフェナ
ム酸、ベンドロフルメチアジド、Ｎ−（３−フルオロベ
ンジル）−３−アミノキノリン、それらの塩、それらの
誘導体およびそれらのプロドラッグからなる群より選択
され得る。
ニフルマート、フルフェナム酸、ニフルム酸、メフェナ
ム酸、ベンドロフルメチアジド、Ｎ−（３−フルオロベ
ンジル）−３−アミノキノリン、それらの塩、それらの
誘導体およびそれらのプロドラッグからなる群より選択
され得る。
【００５４】１つの実施形態では、上記組成物は、タル
ニフルマート、タルニフルマート誘導体、それらの塩ま
たはそれらのプロドラッグを含み得る。
ニフルマート、タルニフルマート誘導体、それらの塩ま
たはそれらのプロドラッグを含み得る。
【００５５】１つの実施形態では、上記組成物は、Ｎ−
（３−フルオロベンジル）−３−アミノキノリン、その
塩、その誘導体およびそのプロドラッグを含み得る。
（３−フルオロベンジル）−３−アミノキノリン、その
塩、その誘導体およびそのプロドラッグを含み得る。
【００５６】１つの実施形態では、上記組成物は、肺へ
の吸入送達のために処方されていてもよい。
の吸入送達のために処方されていてもよい。
【００５７】１つの実施形態では、上記組成物は、経口
送達のために処方されていてもよい。
送達のために処方されていてもよい。
【００５８】１つの実施形態では、上記組成物は、バイ
オアベイラビリティーを増加させるように処方されてい
てもよい。
オアベイラビリティーを増加させるように処方されてい
てもよい。
【００５９】１つの実施形態では、上記組成物は、微粉
化されていてもよい。
化されていてもよい。
【００６０】１つの実施形態では、上記組成物は、バイ
オアベイラビリティーを増加させるように処方されてい
てもよい。
オアベイラビリティーを増加させるように処方されてい
てもよい。
【００６１】１つの実施形態では、上記組成物は、微粉
化されていてもよい。
化されていてもよい。
【００６２】本発明の方法は、ムチンの産生によって特
徴付けられる慢性副鼻腔炎を有する被験体の処置方法で
あって、該被験体におけるムチンの合成またはレベルを
減少させる少なくとも１つの化合物を含む組成物の有効
量を該被験体に投与する工程を包含する。
徴付けられる慢性副鼻腔炎を有する被験体の処置方法で
あって、該被験体におけるムチンの合成またはレベルを
減少させる少なくとも１つの化合物を含む組成物の有効
量を該被験体に投与する工程を包含する。
【００６３】１つの実施形態では、上記組成物は、タル
ニフルマートを含み得る。
ニフルマートを含み得る。
【００６４】本願発明は、ムチン合成を調節する方法、
および疾患（例えば、喘息および慢性気管支炎、炎症性
肺疾患、嚢胞性線維症ならびに急性または慢性の呼吸器
感染疾患を含む、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））に関
連したムチン過剰産生を制御する際の化合物の治療適用
に関する。
および疾患（例えば、喘息および慢性気管支炎、炎症性
肺疾患、嚢胞性線維症ならびに急性または慢性の呼吸器
感染疾患を含む、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））に関
連したムチン過剰産生を制御する際の化合物の治療適用
に関する。
【００６５】
【発明の実施の形態】（発明の要旨）本発明は、ムチン
糖タンパク質の合成および過剰産生を阻害する薬剤の発
見、ならびに慢性閉塞性肺障害および他の疾患における
粘液の病理的な過剰産生を処置するためのこれらの分子
を使用する方法に関する。
糖タンパク質の合成および過剰産生を阻害する薬剤の発
見、ならびに慢性閉塞性肺障害および他の疾患における
粘液の病理的な過剰産生を処置するためのこれらの分子
を使用する方法に関する。
【００６６】１つの局面では、本発明は、ムチンの産生
によって特徴付けられる呼吸器疾患を有する被験体を処
置する方法を提供し、この方法は、肺または胃腸管にお
けるムチンの合成またはレベルを減少させる少なくとも
１つの化合物を含む組成物の有効量をこの被験体に投与
する工程を包含する。いくつかの実施形態では、ムチン
合成は、塩素イオンチャネル依存性であり得る。いくつ
かの実施形態では、この化合物は、ＩＣＡＣＣ塩素イオ
ンチャネルを発現する細胞におけるムチン合成を減少さ
せる。いくつかの実施形態では、この化合物は、アント
ラニル酸のアナログおよび誘導体、２−アミノ−ニコチ
ン酸のアナログおよび誘導体、２−アミノ−フェニル酢
酸のアナログおよび誘導体、ベンドロフルメチアジド、
それらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群より
選択される。いくつかの好ましい実施形態では、この化
合物は、タルニフルマート、フルフェナム酸、ニフルム
酸、メフェナム酸、それらの塩、それらの誘導体および
それらのプロドラッグからなる群より選択される。いく
つかの好ましい実施形態では、本発明の組成物は、タル
ニフルマート、タルニフルマート誘導体、それらの塩ま
たはそれらのプロドラッグを含む。
によって特徴付けられる呼吸器疾患を有する被験体を処
置する方法を提供し、この方法は、肺または胃腸管にお
けるムチンの合成またはレベルを減少させる少なくとも
１つの化合物を含む組成物の有効量をこの被験体に投与
する工程を包含する。いくつかの実施形態では、ムチン
合成は、塩素イオンチャネル依存性であり得る。いくつ
かの実施形態では、この化合物は、ＩＣＡＣＣ塩素イオ
ンチャネルを発現する細胞におけるムチン合成を減少さ
せる。いくつかの実施形態では、この化合物は、アント
ラニル酸のアナログおよび誘導体、２−アミノ−ニコチ
ン酸のアナログおよび誘導体、２−アミノ−フェニル酢
酸のアナログおよび誘導体、ベンドロフルメチアジド、
それらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群より
選択される。いくつかの好ましい実施形態では、この化
合物は、タルニフルマート、フルフェナム酸、ニフルム
酸、メフェナム酸、それらの塩、それらの誘導体および
それらのプロドラッグからなる群より選択される。いく
つかの好ましい実施形態では、本発明の組成物は、タル
ニフルマート、タルニフルマート誘導体、それらの塩ま
たはそれらのプロドラッグを含む。
【００６７】いくつかの実施形態では、本発明の組成物
は、肺または胃腸管におけるムチンの合成またはレベル
を減少させる少なくとも１つの化合物を含み得、ここ
で、この化合物は、キノリンまたはキノリン誘導体であ
る。いくつかの実施形態では、この化合物は、アミン基
を用いて、好ましくはキノリンの２位または３位で改変
されたキノリンであり得る。好ましい実施形態では、こ
の化合物は、環外窒素が１以上の部分を用いて改変され
た３−アミノ−キノリンであり得る。いくつかの実施形
態では、この環外アミン基は、芳香族部分を用いて改変
され得る。この芳香族部分は、改変されていても改変さ
れていなくてもよい。好ましい実施形態では、この芳香
族基は、１以上の置換基を用いて改変され得るベンジル
基である。適切な置換基としては、ハロゲンが挙げられ
るがこれらに限定されない。好ましい実施形態では、こ
の化合物は、Ｎ−（フルオロベンジル）−３−アミノ−
キノリン（図１９）であり、好ましくは、このフッ素は
メタ位に存在する。
は、肺または胃腸管におけるムチンの合成またはレベル
を減少させる少なくとも１つの化合物を含み得、ここ
で、この化合物は、キノリンまたはキノリン誘導体であ
る。いくつかの実施形態では、この化合物は、アミン基
を用いて、好ましくはキノリンの２位または３位で改変
されたキノリンであり得る。好ましい実施形態では、こ
の化合物は、環外窒素が１以上の部分を用いて改変され
た３−アミノ−キノリンであり得る。いくつかの実施形
態では、この環外アミン基は、芳香族部分を用いて改変
され得る。この芳香族部分は、改変されていても改変さ
れていなくてもよい。好ましい実施形態では、この芳香
族基は、１以上の置換基を用いて改変され得るベンジル
基である。適切な置換基としては、ハロゲンが挙げられ
るがこれらに限定されない。好ましい実施形態では、こ
の化合物は、Ｎ−（フルオロベンジル）−３−アミノ−
キノリン（図１９）であり、好ましくは、このフッ素は
メタ位に存在する。
【００６８】本発明の別の局面では、ムチン合成を減少
させる化合物はまた、酵素シクロオキシゲナーゼのイン
ヒビター（例えば、タルニフルマート）である。より好
ましい実施形態では、この化合物は、酵素シクロオキシ
ゲナーゼ−２の特異的インヒビターである。
させる化合物はまた、酵素シクロオキシゲナーゼのイン
ヒビター（例えば、タルニフルマート）である。より好
ましい実施形態では、この化合物は、酵素シクロオキシ
ゲナーゼ−２の特異的インヒビターである。
【００６９】別の実施形態では、本発明は、吸入によっ
て本発明の組成物を投与することによって、ムチンの産
生によって特徴付けられる呼吸器疾患を有する被験体を
処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、こ
の組成物は、液体の形態または粉末の形態である。いく
つかの実施形態では、この組成物は、エアゾール化され
ている。他の実施形態では、この組成物はさらに、少な
くとも１つの去痰薬、抗ヒスタミン薬、粘液溶解剤、抗
生物質または鬱血除去剤を含む。いくつかの実施形態で
は、この去痰薬は、グアイフェネシンである。本発明の
組成物は、少なくとも１つの安定剤、吸収増強剤または
矯味矯臭剤を含み得る。いくつかの好ましい実施形態で
は、この安定剤はシクロデキストランであり、そして／
またはこの吸収増強剤はキトサンである。
て本発明の組成物を投与することによって、ムチンの産
生によって特徴付けられる呼吸器疾患を有する被験体を
処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、こ
の組成物は、液体の形態または粉末の形態である。いく
つかの実施形態では、この組成物は、エアゾール化され
ている。他の実施形態では、この組成物はさらに、少な
くとも１つの去痰薬、抗ヒスタミン薬、粘液溶解剤、抗
生物質または鬱血除去剤を含む。いくつかの実施形態で
は、この去痰薬は、グアイフェネシンである。本発明の
組成物は、少なくとも１つの安定剤、吸収増強剤または
矯味矯臭剤を含み得る。いくつかの好ましい実施形態で
は、この安定剤はシクロデキストランであり、そして／
またはこの吸収増強剤はキトサンである。
【００７０】いくつかの好ましい実施形態では、本発明
の組成物および方法は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰ
Ｄ）、炎症性肺疾患、嚢胞性線維症および急性または慢
性の感染性疾患からなる群より選択される呼吸器疾患を
処置するために用いられ得る。これらの疾患のうちのい
ずれか１つの処置は、１以上の本発明の組成物を吸入に
よって投与することによって行われ得る。いくつかの実
施形態では、この組成物は、吸入によって肺へと投与さ
れる。好ましい実施形態では、本発明は、気腫、慢性気
管支炎および喘息からなる群より選択されるＣＯＰＤを
処置するための方法および材料を提供する。
の組成物および方法は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰ
Ｄ）、炎症性肺疾患、嚢胞性線維症および急性または慢
性の感染性疾患からなる群より選択される呼吸器疾患を
処置するために用いられ得る。これらの疾患のうちのい
ずれか１つの処置は、１以上の本発明の組成物を吸入に
よって投与することによって行われ得る。いくつかの実
施形態では、この組成物は、吸入によって肺へと投与さ
れる。好ましい実施形態では、本発明は、気腫、慢性気
管支炎および喘息からなる群より選択されるＣＯＰＤを
処置するための方法および材料を提供する。
【００７１】別の好ましい実施形態では、本発明の組成
物および方法は、嚢胞性線維症の胃腸合併症（例えば、
吸収不良症候群、脂肪便および下痢）を処置するために
用いられ得る。この疾患の処置は、本発明の１以上の組
成物を経口投与することによって行われ得る。
物および方法は、嚢胞性線維症の胃腸合併症（例えば、
吸収不良症候群、脂肪便および下痢）を処置するために
用いられ得る。この疾患の処置は、本発明の１以上の組
成物を経口投与することによって行われ得る。
【００７２】別の実施形態では、本発明は、吸入送達の
ために処方された治療組成物を提供し、この組成物は、
タルニフルマート、フルフェナム酸、ニフルム酸、メフ
ェナム酸、それらの塩、それらの誘導体およびそれらの
プロドラッグからなる群より選択される少なくとも１つ
の化合物を、ムチンの産生またはレベルを減少させるの
に有効な量で含む。いくつかの好ましい実施形態では、
この組成物は、タルニフルマート、タルニフルマート誘
導体、それらの塩またはそれらのプロドラッグを含む。
いくつかの実施形態では、この組成物は、液体の形態ま
たは粉末の形態である。いくつかの実施形態では、この
組成物は、少なくとも１つの去痰薬、粘液溶解剤、抗生
物質、抗ヒスタミン薬または鬱血除去剤をさらに含む。
いくつかの実施形態では、この去痰薬は、グアイフェネ
シンである。
ために処方された治療組成物を提供し、この組成物は、
タルニフルマート、フルフェナム酸、ニフルム酸、メフ
ェナム酸、それらの塩、それらの誘導体およびそれらの
プロドラッグからなる群より選択される少なくとも１つ
の化合物を、ムチンの産生またはレベルを減少させるの
に有効な量で含む。いくつかの好ましい実施形態では、
この組成物は、タルニフルマート、タルニフルマート誘
導体、それらの塩またはそれらのプロドラッグを含む。
いくつかの実施形態では、この組成物は、液体の形態ま
たは粉末の形態である。いくつかの実施形態では、この
組成物は、少なくとも１つの去痰薬、粘液溶解剤、抗生
物質、抗ヒスタミン薬または鬱血除去剤をさらに含む。
いくつかの実施形態では、この去痰薬は、グアイフェネ
シンである。
【００７３】上記の薬剤に加えて、吸入のために処方さ
れた本発明の薬学的組成物は、少なくとも１つの安定
剤、吸収増強剤または矯味矯臭剤をさらに含み得る。い
くつかの実施形態では、この安定剤はシクロデキストラ
ンであり、そして／またはこの吸収増強剤はキトサンで
ある。
れた本発明の薬学的組成物は、少なくとも１つの安定
剤、吸収増強剤または矯味矯臭剤をさらに含み得る。い
くつかの実施形態では、この安定剤はシクロデキストラ
ンであり、そして／またはこの吸収増強剤はキトサンで
ある。
【００７４】本発明はまた、上記のような治療組成物を
含む吸入デバイスを提供する。
含む吸入デバイスを提供する。
【００７５】（発明の詳細な説明）本発明は部分的に、
肺の非線毛性上皮細胞の活性化からもたらされる粘液過
剰産生が、ＭＵＣ２およびＭＵＣ５ＡＣを含むムチン遺
伝子の誘導によって引き起こされるという知見から誘導
される。従って、本発明の１つの局面は、上皮細胞活性
化の阻害である。ＡＥＣ活性化のこの阻害は、ケモカイ
ン産生、気管支応答性およびムチン遺伝子発現をダウン
レギュレートする。それゆえ、ムチンの合成またはレベ
ルを減少させる分子は、本発明の一部である。
肺の非線毛性上皮細胞の活性化からもたらされる粘液過
剰産生が、ＭＵＣ２およびＭＵＣ５ＡＣを含むムチン遺
伝子の誘導によって引き起こされるという知見から誘導
される。従って、本発明の１つの局面は、上皮細胞活性
化の阻害である。ＡＥＣ活性化のこの阻害は、ケモカイ
ン産生、気管支応答性およびムチン遺伝子発現をダウン
レギュレートする。それゆえ、ムチンの合成またはレベ
ルを減少させる分子は、本発明の一部である。
【００７６】（ムチンの合成またはレベルを減少させる
薬剤）本明細書中に記載する場合、本発明の処方物およ
び組成物は、ムチンの合成もしくはレベルを減少させる
か、または何らかの方法でムチンの過剰産生を減少させ
る薬剤を含む。本明細書中で使用する場合、「減少させ
る」は、ムチンのレベル、活性化、機能、安定性または
合成のダウンレギュレーションと定義される。好ましい
薬剤は、ムチンの塩素イオンチャネル依存性のレベル、
活性化、機能、安定性または合成を減少させる。本明細
書中で使用される場合、「塩素イオンチャネル」とは、
ＩＣＡＣＣ塩素イオンチャネルおよびＷＯ ９９／４４
６２０（これは、その全体が本明細書中に参考として援
用される）において言及された関連するチャネルをいう
がこれらに限定されない。これらの定義に入る薬剤は、
実施例に記載のアッセイにおけるスクリーニングによっ
てそれらの活性が同定され得るかまたは確認され得る。
例えば、実施例７および８に記載されるインビトロおよ
びインビボでのアッセイを用いて、薬剤の活性をスクリ
ーニング、同定または確認し得る。
薬剤）本明細書中に記載する場合、本発明の処方物およ
び組成物は、ムチンの合成もしくはレベルを減少させる
か、または何らかの方法でムチンの過剰産生を減少させ
る薬剤を含む。本明細書中で使用する場合、「減少させ
る」は、ムチンのレベル、活性化、機能、安定性または
合成のダウンレギュレーションと定義される。好ましい
薬剤は、ムチンの塩素イオンチャネル依存性のレベル、
活性化、機能、安定性または合成を減少させる。本明細
書中で使用される場合、「塩素イオンチャネル」とは、
ＩＣＡＣＣ塩素イオンチャネルおよびＷＯ ９９／４４
６２０（これは、その全体が本明細書中に参考として援
用される）において言及された関連するチャネルをいう
がこれらに限定されない。これらの定義に入る薬剤は、
実施例に記載のアッセイにおけるスクリーニングによっ
てそれらの活性が同定され得るかまたは確認され得る。
例えば、実施例７および８に記載されるインビトロおよ
びインビボでのアッセイを用いて、薬剤の活性をスクリ
ーニング、同定または確認し得る。
【００７７】ムチンの合成またはレベルを減少させる分
子としては、アントラニル酸（２−アミノ安息香酸）の
アナログおよび誘導体が挙げられる。いくつかの好まし
い実施形態では、この分子は、Ｎ−誘導体化アントラニ
ル酸であり得る。いくつかの実施形態では、アントラニ
ル酸のアミノ基は、１以上の基で改変され得る。いくつ
かの実施形態では、この基は、芳香族基であり得る。好
ましい実施形態では、この基は、トリフルオロメチル−
フェニル基（好ましくは３−トリフルオロメチル−フェ
ニル基）であり得、そしてムチンの合成またはレベルを
減少させる分子はフルフェナム酸である。別の好ましい
実施形態では、このアミノ基は、２，３−ジメチル−フ
ェニル基で誘導体化され得、そしてムチンの合成または
レベルを減少させる分子はメフェナム酸である。当業者
は、アントラニル酸の他のフェニル誘導体が本発明にお
いて用いられ得ることを認識する。他の好ましい実施形
態では、安息香酸の環は、１以上の置換基を含み得る。
好ましい実施形態では、安息香酸の環およびアミノ基の
両方が改変され得る。他の好ましい実施形態は、安息香
酸の環上の置換基および芳香族基がアミノ基に結合した
分子を含む。
子としては、アントラニル酸（２−アミノ安息香酸）の
アナログおよび誘導体が挙げられる。いくつかの好まし
い実施形態では、この分子は、Ｎ−誘導体化アントラニ
ル酸であり得る。いくつかの実施形態では、アントラニ
ル酸のアミノ基は、１以上の基で改変され得る。いくつ
かの実施形態では、この基は、芳香族基であり得る。好
ましい実施形態では、この基は、トリフルオロメチル−
フェニル基（好ましくは３−トリフルオロメチル−フェ
ニル基）であり得、そしてムチンの合成またはレベルを
減少させる分子はフルフェナム酸である。別の好ましい
実施形態では、このアミノ基は、２，３−ジメチル−フ
ェニル基で誘導体化され得、そしてムチンの合成または
レベルを減少させる分子はメフェナム酸である。当業者
は、アントラニル酸の他のフェニル誘導体が本発明にお
いて用いられ得ることを認識する。他の好ましい実施形
態では、安息香酸の環は、１以上の置換基を含み得る。
好ましい実施形態では、安息香酸の環およびアミノ基の
両方が改変され得る。他の好ましい実施形態は、安息香
酸の環上の置換基および芳香族基がアミノ基に結合した
分子を含む。
【００７８】いくつかの実施形態では、ムチンの合成を
減少させる分子は、２−アミノ−ニコチン酸のアナログ
および誘導体を含む。いくつかの実施形態では、環外ア
ミノ基は、１以上の基を含むように改変され得る。いく
つかの好ましい実施形態では、この環外アミン基は、全
ての芳香族基で改変され得る。適切な芳香族基として
は、以下が挙げられるがこれらに限定されない：フェニ
ル基、改変されたフェニル基、ベンジル基、改変された
ベンジル基など。好ましい実施形態では、この芳香族基
は３−トリフルオロメチル−フェニル基であり得、そし
て２−アミノ−ニコチン酸の誘導体はニフルム酸であ
る。
減少させる分子は、２−アミノ−ニコチン酸のアナログ
および誘導体を含む。いくつかの実施形態では、環外ア
ミノ基は、１以上の基を含むように改変され得る。いく
つかの好ましい実施形態では、この環外アミン基は、全
ての芳香族基で改変され得る。適切な芳香族基として
は、以下が挙げられるがこれらに限定されない：フェニ
ル基、改変されたフェニル基、ベンジル基、改変された
ベンジル基など。好ましい実施形態では、この芳香族基
は３−トリフルオロメチル−フェニル基であり得、そし
て２−アミノ−ニコチン酸の誘導体はニフルム酸であ
る。
【００７９】いくつかの実施形態では、ムチンの合成を
減少させる分子は、２−アミノ−フェニル酢酸のアナロ
グまたは誘導体であり得る。いくつかの実施形態では、
このアミノ基は、１以上の基を含むように改変され得
る。いくつかの実施形態では、このアミノ基は、芳香族
基で改変され得る。適切な芳香族基としては以下が挙げ
られるがこれらに限定されない：フェニル基、改変され
たフェニル基、ベンジル基、改変されたベンジル基な
ど。好ましい実施形態では、２−アミノ−フェニル酢酸
は２，６−ジクロロフェニル基でＮ−改変され、そして
ムチンの合成またはレベルを減少させる分子はタルニフ
ルマートである。
減少させる分子は、２−アミノ−フェニル酢酸のアナロ
グまたは誘導体であり得る。いくつかの実施形態では、
このアミノ基は、１以上の基を含むように改変され得
る。いくつかの実施形態では、このアミノ基は、芳香族
基で改変され得る。適切な芳香族基としては以下が挙げ
られるがこれらに限定されない：フェニル基、改変され
たフェニル基、ベンジル基、改変されたベンジル基な
ど。好ましい実施形態では、２−アミノ−フェニル酢酸
は２，６−ジクロロフェニル基でＮ−改変され、そして
ムチンの合成またはレベルを減少させる分子はタルニフ
ルマートである。
【００８０】いくつかの実施形態では、ムチンの合成ま
たはレベルを減少させる分子はベンドロフルメチアジド
であり得る。
たはレベルを減少させる分子はベンドロフルメチアジド
であり得る。
【００８１】本発明はまた、上記の、ムチンの合成また
はレベルを減少させる分子の１以上のプロドラッグの使
用を意図する。本明細書中で定義するように、プロドラ
ッグは、上記の形態以外の形態で投与され、そして被験
体の身体中で、記載された形態へと変換される分子であ
る。好ましいプロドラッグとしては、フェナメートのプ
ロドラッグが挙げられるがこれらに限定されない。いく
つかの好ましいプロドラッグは、ムチンの合成またはレ
ベルを減少させる酸の形態の分子のエステルである。好
ましいエステルとしては、ＮＦＡのエステル（例えば、
β−モルホリノエチルエステル、モルニフルメート（ｍ
ｏｒｎｉｆｌｕｍａｔｅ）およびフタリジルエステル、
タルニフルマート）が挙げられるがこれらに限定されな
い。
はレベルを減少させる分子の１以上のプロドラッグの使
用を意図する。本明細書中で定義するように、プロドラ
ッグは、上記の形態以外の形態で投与され、そして被験
体の身体中で、記載された形態へと変換される分子であ
る。好ましいプロドラッグとしては、フェナメートのプ
ロドラッグが挙げられるがこれらに限定されない。いく
つかの好ましいプロドラッグは、ムチンの合成またはレ
ベルを減少させる酸の形態の分子のエステルである。好
ましいエステルとしては、ＮＦＡのエステル（例えば、
β−モルホリノエチルエステル、モルニフルメート（ｍ
ｏｒｎｉｆｌｕｍａｔｅ）およびフタリジルエステル、
タルニフルマート）が挙げられるがこれらに限定されな
い。
【００８２】（ムチンの産生を調節する薬剤についての
用途）実施例に提供するように、ムチンの発現を調節、
減少またはダウンレギュレートさせる薬剤を用いて、ム
チン産生に関連した、生物学的プロセスおよび病理プロ
セスを改変し得る。
用途）実施例に提供するように、ムチンの発現を調節、
減少またはダウンレギュレートさせる薬剤を用いて、ム
チン産生に関連した、生物学的プロセスおよび病理プロ
セスを改変し得る。
【００８３】出願人は、ＩＬ９がムチン遺伝子産物の発
現を選択的に誘導することを観察した。従って、ＩＬ９
（これは、多数の抗原誘発性応答に対して重要である）
についての多面的役割は部分的に、ＡＥＣにおけるムチ
ンのアップレギュレーションに依存する。ＩＬ９の機能
が中和抗体処置によってダウンレギュレートされる場
合、動物は、肺における抗原誘発性応答から完全に防御
され得る。これらの応答としては、以下が挙げられる：
気管支反応性亢進、気管支洗浄液における好酸球増加お
よび細胞数上昇、血清ＩｇＥの上昇、炎症に関連した、
肺における組織学的変化、ならびに粘液の過剰産生に関
連した杯細胞および粘膜下腺細胞過形成。ＩＬ９のダウ
ンレギュレーションおよび喘息様応答は、ムチンのダウ
ンレギュレートされた発現に関連する（図１０）。従っ
て、喘息の病因の基礎となり、そしてムチン産生をダウ
ンレギュレーションすることによって、この障害に関連
したアレルギー性炎症を特徴付ける、このような応答の
処置は、本発明の範囲内にある。
現を選択的に誘導することを観察した。従って、ＩＬ９
（これは、多数の抗原誘発性応答に対して重要である）
についての多面的役割は部分的に、ＡＥＣにおけるムチ
ンのアップレギュレーションに依存する。ＩＬ９の機能
が中和抗体処置によってダウンレギュレートされる場
合、動物は、肺における抗原誘発性応答から完全に防御
され得る。これらの応答としては、以下が挙げられる：
気管支反応性亢進、気管支洗浄液における好酸球増加お
よび細胞数上昇、血清ＩｇＥの上昇、炎症に関連した、
肺における組織学的変化、ならびに粘液の過剰産生に関
連した杯細胞および粘膜下腺細胞過形成。ＩＬ９のダウ
ンレギュレーションおよび喘息様応答は、ムチンのダウ
ンレギュレートされた発現に関連する（図１０）。従っ
て、喘息の病因の基礎となり、そしてムチン産生をダウ
ンレギュレーションすることによって、この障害に関連
したアレルギー性炎症を特徴付ける、このような応答の
処置は、本発明の範囲内にある。
【００８４】ＩＬ９トランスジェニックマウス気道の組
織学的分析は、非線毛化上皮細胞におけるムチン過剰産
生を示した（Ｔｅｍａｎｎら、１９９８；Ｌｏｕａｈｅ
ｄら、２０００）。ＩＬ９トランスジェニックマウスの
肺におけるムチンの誘導は、ＩＬ９がこれらの細胞によ
る粘液産生を促進することを示唆する（図８を参照のこ
と）。ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵ
Ｃ５ＢおよびＭＵＣ５ＡＣのｍＲＮＡを発現する、活性
化されたＣａｃｏ２細胞が産生され、そしてムチン産生
のインヒビターについての試験のために用いられた。こ
れらの細胞は、過ヨウ素酸シッフ染色（ＰＡＳ）を用い
てムチンについて染色され得る。図１Ａに示すように、
処理されていない活性化されたＣａｃｏ２細胞は、ＰＡ
Ｓ陽性ムチン糖結合体について強く染まる。コントロー
ルの細胞および活性化された細胞は、ニフルム酸（ＮＦ
Ａ）または４，４’−ジイソチオシアノスチルベン−
２，２’−ジスルホン酸（ＤＩＤＳ）の存在下で培養さ
れた。インヒビターで処理した活性化された細胞のＰＡ
Ｓ染色は、未処理細胞と比較して有意に少ない陽性染色
糖結合体を示した（図１Ｂと比較して図１Ｄ）。
織学的分析は、非線毛化上皮細胞におけるムチン過剰産
生を示した（Ｔｅｍａｎｎら、１９９８；Ｌｏｕａｈｅ
ｄら、２０００）。ＩＬ９トランスジェニックマウスの
肺におけるムチンの誘導は、ＩＬ９がこれらの細胞によ
る粘液産生を促進することを示唆する（図８を参照のこ
と）。ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵ
Ｃ５ＢおよびＭＵＣ５ＡＣのｍＲＮＡを発現する、活性
化されたＣａｃｏ２細胞が産生され、そしてムチン産生
のインヒビターについての試験のために用いられた。こ
れらの細胞は、過ヨウ素酸シッフ染色（ＰＡＳ）を用い
てムチンについて染色され得る。図１Ａに示すように、
処理されていない活性化されたＣａｃｏ２細胞は、ＰＡ
Ｓ陽性ムチン糖結合体について強く染まる。コントロー
ルの細胞および活性化された細胞は、ニフルム酸（ＮＦ
Ａ）または４，４’−ジイソチオシアノスチルベン−
２，２’−ジスルホン酸（ＤＩＤＳ）の存在下で培養さ
れた。インヒビターで処理した活性化された細胞のＰＡ
Ｓ染色は、未処理細胞と比較して有意に少ない陽性染色
糖結合体を示した（図１Ｂと比較して図１Ｄ）。
【００８５】ムチンダウンレギュレーションについての
治療の可能性が、喘息において同定された一方で、出願
人はまた、嚢胞性線維症におけるムチンのダウンレギュ
レーションについての治療の可能性を認めた。嚢胞性線
維症を有する患者は、濃い分泌物によって特徴付けられ
る肺疾患によって障害を受けている。これは、気道閉塞
および吸入された病原性微生物によるその後の集落形成
および感染を引き起こす（Ｅｎｇら、１９９６）。それ
ゆえ、出願人は、肺におけるムチン産生をダウンレギュ
レートすることによって嚢胞性線維症を処置するための
方法を提供する。
治療の可能性が、喘息において同定された一方で、出願
人はまた、嚢胞性線維症におけるムチンのダウンレギュ
レーションについての治療の可能性を認めた。嚢胞性線
維症を有する患者は、濃い分泌物によって特徴付けられ
る肺疾患によって障害を受けている。これは、気道閉塞
および吸入された病原性微生物によるその後の集落形成
および感染を引き起こす（Ｅｎｇら、１９９６）。それ
ゆえ、出願人は、肺におけるムチン産生をダウンレギュ
レートすることによって嚢胞性線維症を処置するための
方法を提供する。
【００８６】嚢胞性線維症におけるムチンの過剰産生は
また、消化酵素を消化管へと送達する膵管に存在して、
吸収不良症候群、脂肪便および下痢をもたらす。それゆ
え、出願人はまた、膵臓におけるムチン産生をダウンレ
ギュレートすることによって嚢胞性線維症を処置するた
めの方法を提供する。
また、消化酵素を消化管へと送達する膵管に存在して、
吸収不良症候群、脂肪便および下痢をもたらす。それゆ
え、出願人はまた、膵臓におけるムチン産生をダウンレ
ギュレートすることによって嚢胞性線維症を処置するた
めの方法を提供する。
【００８７】出願人はまた、慢性気管支炎および気腫に
おけるムチンダウンレギュレーションについての治療の
可能性を同定した。慢性気管支炎および気腫を有する患
者は、濃い分泌物によって特徴付けられる肺疾患によっ
て妨げられている。これは、気道閉塞および吸入された
病原性微生物によるその後の集落形成および感染を引き
起こす（Ｅｎｇら、１９９６）。それゆえ、出願人は、
肺におけるムチン産生をダウンレギュレートすることに
よって慢性気管支炎および気腫を処置するための方法を
提供する。
おけるムチンダウンレギュレーションについての治療の
可能性を同定した。慢性気管支炎および気腫を有する患
者は、濃い分泌物によって特徴付けられる肺疾患によっ
て妨げられている。これは、気道閉塞および吸入された
病原性微生物によるその後の集落形成および感染を引き
起こす（Ｅｎｇら、１９９６）。それゆえ、出願人は、
肺におけるムチン産生をダウンレギュレートすることに
よって慢性気管支炎および気腫を処置するための方法を
提供する。
【００８８】本明細書中で使用する場合、哺乳動物がム
チン産生によって媒介される病理プロセスまたは生物学
的プロセスの調節を必要とする限り、被験体は、任意の
哺乳動物であり得る。用語「哺乳動物」は、哺乳綱に属
する個体を意味する。本発明はヒト被験体の処置におい
て特に有用である。
チン産生によって媒介される病理プロセスまたは生物学
的プロセスの調節を必要とする限り、被験体は、任意の
哺乳動物であり得る。用語「哺乳動物」は、哺乳綱に属
する個体を意味する。本発明はヒト被験体の処置におい
て特に有用である。
【００８９】病理プロセスとは、有害な効果を生ずる生
物学的プロセスのカテゴリーをいう。例えば、本発明の
ムチンの過剰産生は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、
炎症性肺疾患、嚢胞性線維症ならびに急性または慢性の
感染性疾患を含む、呼吸器疾患に関連し得る。ＣＯＰＤ
としては、気管支炎、喘息および気腫が挙げられるがこ
れらに限定されない。ムチンの過剰産生はまた、嚢胞性
線維症において存在する胃腸管疾患（例えば、吸収不良
症候群、脂肪便および下痢）に関連し得る。
物学的プロセスのカテゴリーをいう。例えば、本発明の
ムチンの過剰産生は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、
炎症性肺疾患、嚢胞性線維症ならびに急性または慢性の
感染性疾患を含む、呼吸器疾患に関連し得る。ＣＯＰＤ
としては、気管支炎、喘息および気腫が挙げられるがこ
れらに限定されない。ムチンの過剰産生はまた、嚢胞性
線維症において存在する胃腸管疾患（例えば、吸収不良
症候群、脂肪便および下痢）に関連し得る。
【００９０】本明細書中で使用される場合、薬剤が、病
理プロセスの程度または重篤度を減少させる場合、その
薬剤は、病理プロセスを調節すると言われる。例えば、
気道閉塞は、ムチンの合成、レベルおよび／または過剰
産生を何らかの方法で減少させるかまたは調節する薬剤
の投与によって、予防され得るか、または疾患の進行が
調節され得る。
理プロセスの程度または重篤度を減少させる場合、その
薬剤は、病理プロセスを調節すると言われる。例えば、
気道閉塞は、ムチンの合成、レベルおよび／または過剰
産生を何らかの方法で減少させるかまたは調節する薬剤
の投与によって、予防され得るか、または疾患の進行が
調節され得る。
【００９１】（治療組成物）本発明の薬剤は、単独で提
供され得るか、または特定の病理プロセスを調節する他
の薬剤と組み合わせて提供され得る。例えば、本発明の
薬剤は、抗喘息剤と組み合わせて投与され得る。別の実
施形態では、薬剤は、去痰薬、粘液溶解剤、抗生物質、
抗ヒスタミン薬または鬱血除去薬と組み合わせて投与さ
れ得る。なお別の実施形態では、薬剤は、界面活性剤、
安定剤、吸収増強剤、βアドレナリン作用性レセプター
もしくはプリンレセプターのアゴニストまたは矯味矯臭
剤または組成物の嗜好性を増加させる他の薬剤とともに
投与され得る。一例として、本発明の組成物は、活性薬
剤に加えて、去痰薬（例えば、グアイフェネシン）、安
定剤（例えば、シクロデキストラン）および／または吸
収増強剤（例えば、キトサン）を含み得る。任意のこの
ような薬剤は、本発明の組成物において使用され得る。
供され得るか、または特定の病理プロセスを調節する他
の薬剤と組み合わせて提供され得る。例えば、本発明の
薬剤は、抗喘息剤と組み合わせて投与され得る。別の実
施形態では、薬剤は、去痰薬、粘液溶解剤、抗生物質、
抗ヒスタミン薬または鬱血除去薬と組み合わせて投与さ
れ得る。なお別の実施形態では、薬剤は、界面活性剤、
安定剤、吸収増強剤、βアドレナリン作用性レセプター
もしくはプリンレセプターのアゴニストまたは矯味矯臭
剤または組成物の嗜好性を増加させる他の薬剤とともに
投与され得る。一例として、本発明の組成物は、活性薬
剤に加えて、去痰薬（例えば、グアイフェネシン）、安
定剤（例えば、シクロデキストラン）および／または吸
収増強剤（例えば、キトサン）を含み得る。任意のこの
ような薬剤は、本発明の組成物において使用され得る。
【００９２】本明細書中で使用される場合、２以上の薬
剤は、これらの薬剤が同時に投与されるかまたはこのよ
うな薬剤が同時に作用するような様式で独立して投与さ
れる場合、組み合わせて投与されるといわれる。
剤は、これらの薬剤が同時に投与されるかまたはこのよ
うな薬剤が同時に作用するような様式で独立して投与さ
れる場合、組み合わせて投与されるといわれる。
【００９３】本発明の処置方法において用いられる化合
物は、処置されるべき条件、部位特異的処置の必要性、
投与されるべき薬物の量および同様の考慮すべき事柄の
ような考慮すべき事柄に依存して、全身的または局所的
に投与され得る。例えば、本発明の薬剤は、非経口経
路、皮下経路、静脈内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、
経皮経路、局所経路または頬内経路を通して投与され得
る。あるいは、または同時に、投与は、経口経路もしく
は鼻腔内経路によって行われ得るか、または肺へと直接
的に行われ得る。好ましい実施形態では、本発明の化合
物は、吸入によって投与され得る。吸入治療のために
は、この化合物は、液体エアゾール、計量用量吸入器に
よる投与に有用な溶液、または乾燥粉末吸入器に適切な
形態であり得る。投与される投薬量（ｄｏｓａｇｅ）
は、レシピエントの年齢、健康状態および体重、同時に
行われる処置の種類（存在する場合）、処置の頻度、お
よび所望される効果の性質に依存する。
物は、処置されるべき条件、部位特異的処置の必要性、
投与されるべき薬物の量および同様の考慮すべき事柄の
ような考慮すべき事柄に依存して、全身的または局所的
に投与され得る。例えば、本発明の薬剤は、非経口経
路、皮下経路、静脈内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、
経皮経路、局所経路または頬内経路を通して投与され得
る。あるいは、または同時に、投与は、経口経路もしく
は鼻腔内経路によって行われ得るか、または肺へと直接
的に行われ得る。好ましい実施形態では、本発明の化合
物は、吸入によって投与され得る。吸入治療のために
は、この化合物は、液体エアゾール、計量用量吸入器に
よる投与に有用な溶液、または乾燥粉末吸入器に適切な
形態であり得る。投与される投薬量（ｄｏｓａｇｅ）
は、レシピエントの年齢、健康状態および体重、同時に
行われる処置の種類（存在する場合）、処置の頻度、お
よび所望される効果の性質に依存する。
【００９４】いくつかの好ましい実施形態では、本発明
の薬剤は、エアゾールとして処方され得る。薬学的エア
ゾールの処方は、当業者には慣用である。例えば、Ｓｃ
ｉａｒｒａ，Ｊ．、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａ
ｒｍａｃｙ 第１９版、第９５章、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ
ｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡを
参照のこと。この薬剤は、乾燥粉末、エマルジョンまた
は半固体調製物の溶液のエアゾール、分散物または懸濁
物のエアゾールとして処方され得る。このエアゾール
は、当業者に公知の任意のプロペラント系を用いて送達
され得る。このエアゾールは、例えば、鼻腔内吸入によ
り、上気道に、または下気道に、あるいはその両方に適
用され得る。
の薬剤は、エアゾールとして処方され得る。薬学的エア
ゾールの処方は、当業者には慣用である。例えば、Ｓｃ
ｉａｒｒａ，Ｊ．、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａ
ｒｍａｃｙ 第１９版、第９５章、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ
ｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡを
参照のこと。この薬剤は、乾燥粉末、エマルジョンまた
は半固体調製物の溶液のエアゾール、分散物または懸濁
物のエアゾールとして処方され得る。このエアゾール
は、当業者に公知の任意のプロペラント系を用いて送達
され得る。このエアゾールは、例えば、鼻腔内吸入によ
り、上気道に、または下気道に、あるいはその両方に適
用され得る。
【００９５】本発明の他の好ましい実施形態では、この
治療薬剤は、粒子へと処方されてまたは微粉化されて、
バイオアベイラビリティーおよび消化吸収を改善し得
る。特に、タルニフルマートは、当該分野で標準的な技
術を用いて処方および微粉化され得る。このような方法
としては、Ｃｈａｕｍｅｉｌ，Ｊ．Ｃ．ら、Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌ．２０（３）：２１１−２１５（１９９８）に記載さ
れた方法が挙げられる。このプロセスにおいて、本発明
のタルニフルマートまたは他の薬剤の粉砕は、慣習的な
種類のボールミルまたはハンマーミル中で行われ得る。
これらの手順はまた、微粉化される物質を加熱しないと
いう利点を有するガスジェットミクロナイザー（ｇａｓ
ｅｏｕｓｊｅｔ ｍｉｃｒｏｎｉｚｅｒ）中での微粉化
によって行われ得る。
治療薬剤は、粒子へと処方されてまたは微粉化されて、
バイオアベイラビリティーおよび消化吸収を改善し得
る。特に、タルニフルマートは、当該分野で標準的な技
術を用いて処方および微粉化され得る。このような方法
としては、Ｃｈａｕｍｅｉｌ，Ｊ．Ｃ．ら、Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌ．２０（３）：２１１−２１５（１９９８）に記載さ
れた方法が挙げられる。このプロセスにおいて、本発明
のタルニフルマートまたは他の薬剤の粉砕は、慣習的な
種類のボールミルまたはハンマーミル中で行われ得る。
これらの手順はまた、微粉化される物質を加熱しないと
いう利点を有するガスジェットミクロナイザー（ｇａｓ
ｅｏｕｓｊｅｔ ｍｉｃｒｏｎｉｚｅｒ）中での微粉化
によって行われ得る。
【００９６】他の実施形態において、任意の一般的な局
所的処方物（例えば、溶液、懸濁物、ゲル、軟膏（ｏｉ
ｎｔｍｅｎｔ）もしくは軟膏（ｓａｌｖｅ）など）が用
いられ得る。このような局所処方物の調製は、例えば、
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓによって例示されるように、薬学
的処方物の分野において充分に記載されている。局所適
用のためには、これらの化合物はまた、粉末またはスプ
レーとして、特にエアゾール形態で投与され得る。その
活性成分は、全身投与に適合させた薬学的組成物中で投
与され得る。公知のとおり、薬物が全身投与される場合
には、薬物は、経口投与のための散剤、丸剤、錠剤など
として、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤とし
て、調製され得る。静脈内、腹腔内または病巣内（ｉｎ
ｔｒａ−ｌｅｓｉｏｎａｌ）投与のためには、この化合
物は、注射により投与され得る溶液または懸濁物として
調製される。特定の場合には、これらの化合物を坐剤形
態で、または皮膚下貯蔵（ｄｅｐｏｓｉｔ ｕｎｄｅｒ
ｔｈｅ ｓｋｉｎ）のための長期放出処方物または筋
肉内注射として処方することが有用であり得る。
所的処方物（例えば、溶液、懸濁物、ゲル、軟膏（ｏｉ
ｎｔｍｅｎｔ）もしくは軟膏（ｓａｌｖｅ）など）が用
いられ得る。このような局所処方物の調製は、例えば、
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓによって例示されるように、薬学
的処方物の分野において充分に記載されている。局所適
用のためには、これらの化合物はまた、粉末またはスプ
レーとして、特にエアゾール形態で投与され得る。その
活性成分は、全身投与に適合させた薬学的組成物中で投
与され得る。公知のとおり、薬物が全身投与される場合
には、薬物は、経口投与のための散剤、丸剤、錠剤など
として、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤とし
て、調製され得る。静脈内、腹腔内または病巣内（ｉｎ
ｔｒａ−ｌｅｓｉｏｎａｌ）投与のためには、この化合
物は、注射により投与され得る溶液または懸濁物として
調製される。特定の場合には、これらの化合物を坐剤形
態で、または皮膚下貯蔵（ｄｅｐｏｓｉｔ ｕｎｄｅｒ
ｔｈｅ ｓｋｉｎ）のための長期放出処方物または筋
肉内注射として処方することが有用であり得る。
【００９７】これらに含まれる組成物または薬剤の有効
量は、ムチンの活性化、機能、安定性または合成を減
少、低下またはダウンレギュレートする量である。好ま
しい組成物または薬剤は、ＩＣＡＣＣ塩素イオンチャネ
ル依存性のムチンの活性化、機能、安定性または合成を
含む、塩素イオンチャネル依存性のムチンの活性化、機
能、安定性または合成を減少、低下、もしくはダウンレ
ギュレートする。所定の有効量は、状態によって変化
し、そして特定の場合では、処置される状態の重篤度お
よび患者の処置への感受性により変化し得る。従って、
所定の有効量は、慣用的な実験によりその時点および場
所について最良に決定される。しかし、本発明による慢
性閉塞性肺障害の処置において、０．００１重量パーセ
ントと５重量パーセントとの間、好ましくは約０．０１
〜１％を含む処方物が、通常、治療有効量を構成するこ
とが予想される。全身投与される場合、大部分の場合、
１日あたり体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇと１００ｍｇ
との間の量、しかし好ましくは約０．１〜１０ｍｇ／ｋ
ｇ／日が、治療結果を達成する。
量は、ムチンの活性化、機能、安定性または合成を減
少、低下またはダウンレギュレートする量である。好ま
しい組成物または薬剤は、ＩＣＡＣＣ塩素イオンチャネ
ル依存性のムチンの活性化、機能、安定性または合成を
含む、塩素イオンチャネル依存性のムチンの活性化、機
能、安定性または合成を減少、低下、もしくはダウンレ
ギュレートする。所定の有効量は、状態によって変化
し、そして特定の場合では、処置される状態の重篤度お
よび患者の処置への感受性により変化し得る。従って、
所定の有効量は、慣用的な実験によりその時点および場
所について最良に決定される。しかし、本発明による慢
性閉塞性肺障害の処置において、０．００１重量パーセ
ントと５重量パーセントとの間、好ましくは約０．０１
〜１％を含む処方物が、通常、治療有効量を構成するこ
とが予想される。全身投与される場合、大部分の場合、
１日あたり体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇと１００ｍｇ
との間の量、しかし好ましくは約０．１〜１０ｍｇ／ｋ
ｇ／日が、治療結果を達成する。
【００９８】吸入により投与される場合、大部分の場
合、１日あたり体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇと１００
ｍｇとの間の量、しかし好ましくは約０．１０〜１０ｍ
ｇ／ｋｇ／日が、治療結果を達成する。いくつかの例で
は、計量用量エアゾール単位は、約０．８ｍｇの本発明
の化合物（例えば、タルニフルマート）を含む。この処
方では、成体のための維持用量は、約２回の吸入（約
１．６ｍｇ）を１日２回（約３．２ｍｇ）である。
合、１日あたり体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇと１００
ｍｇとの間の量、しかし好ましくは約０．１０〜１０ｍ
ｇ／ｋｇ／日が、治療結果を達成する。いくつかの例で
は、計量用量エアゾール単位は、約０．８ｍｇの本発明
の化合物（例えば、タルニフルマート）を含む。この処
方では、成体のための維持用量は、約２回の吸入（約
１．６ｍｇ）を１日２回（約３．２ｍｇ）である。
【００９９】本発明はまた、本発明の化合物を薬学的に
受容可能なキャリアとともに含む薬学的組成物を含む。
薬学的に受容可能なキャリアは、無菌の溶液（例えば、
水および油）であり得る。このような油としては、石
油、動物、植物または合成の起源の油（例えば、ラッカ
セイ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油など）が挙げられる。
水は、薬学的組成物が静脈内にまたは吸入によって投与
される場合、好ましいキャリアである。生理食塩水また
はリン酸緩衝化生理食塩水はまた、キャリアとして特に
エアゾールによる吸入のために用いられ得る。乳酸加生
理食塩水溶液ならびにデキストロースおよびグリセロー
ルの水溶液もまた、液体キャリアとして、特に注射可能
溶液のために用いられ得る。適切な薬学的キャリアは、
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５に記載される。
受容可能なキャリアとともに含む薬学的組成物を含む。
薬学的に受容可能なキャリアは、無菌の溶液（例えば、
水および油）であり得る。このような油としては、石
油、動物、植物または合成の起源の油（例えば、ラッカ
セイ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油など）が挙げられる。
水は、薬学的組成物が静脈内にまたは吸入によって投与
される場合、好ましいキャリアである。生理食塩水また
はリン酸緩衝化生理食塩水はまた、キャリアとして特に
エアゾールによる吸入のために用いられ得る。乳酸加生
理食塩水溶液ならびにデキストロースおよびグリセロー
ルの水溶液もまた、液体キャリアとして、特に注射可能
溶液のために用いられ得る。適切な薬学的キャリアは、
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５に記載される。
【０１００】薬理学的に活性な薬剤に加えて、本発明の
組成物は、作用部位への送達のために薬学的に用いられ
得る調製物への活性化合物の加工を促進する賦形剤およ
び補助物質を含む、適切な薬学的に受容可能なキャリア
を含み得る。非経口投与のために適切な処方物として
は、水溶性形態（例えば、水溶性塩）の活性化合物の水
溶液が挙げられる。さらに、適切な油状注射懸濁物とし
ての活性化合物の懸濁物が投与され得る。適切な親油性
溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油（例えば、ゴマ
油）または合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エ
チルもしくはトリグリセリド）が挙げられる。水性注射
懸濁物は、懸濁物の粘度を増加させる物質（例えば、カ
ルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールお
よび／またはデキストランが挙げられる）を含み得る。
必要に応じて、懸濁物はまた、上記の通りの安定剤を含
み得る。リポソームもまた、細胞への送達のために薬剤
をカプセル化するために用いられ得る。
組成物は、作用部位への送達のために薬学的に用いられ
得る調製物への活性化合物の加工を促進する賦形剤およ
び補助物質を含む、適切な薬学的に受容可能なキャリア
を含み得る。非経口投与のために適切な処方物として
は、水溶性形態（例えば、水溶性塩）の活性化合物の水
溶液が挙げられる。さらに、適切な油状注射懸濁物とし
ての活性化合物の懸濁物が投与され得る。適切な親油性
溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油（例えば、ゴマ
油）または合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エ
チルもしくはトリグリセリド）が挙げられる。水性注射
懸濁物は、懸濁物の粘度を増加させる物質（例えば、カ
ルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールお
よび／またはデキストランが挙げられる）を含み得る。
必要に応じて、懸濁物はまた、上記の通りの安定剤を含
み得る。リポソームもまた、細胞への送達のために薬剤
をカプセル化するために用いられ得る。
【０１０１】上記で議論した通り、本発明による、全身
投与のための薬学的処方物は、腸内、非経口または局所
での投与のために処方され得る。実際、３つ全ての型の
処方物は、同時に用いて、活性成分の全身投与を達成し
得る。
投与のための薬学的処方物は、腸内、非経口または局所
での投与のために処方され得る。実際、３つ全ての型の
処方物は、同時に用いて、活性成分の全身投与を達成し
得る。
【０１０２】経口投与のために適切な処方物としては、
硬質または軟質のカプセル剤、丸剤、錠剤（コーティン
グされた錠剤を含む）、エリキシル剤、懸濁剤、シロッ
プ剤または吸入剤およびそれらの制御放出形態が挙げら
れる。経口吸入または鼻腔内吸入のために適切な処方物
としては、当該分野で周知の賦形剤を含むかまたは含ま
ない、水溶液が挙げられる。
硬質または軟質のカプセル剤、丸剤、錠剤（コーティン
グされた錠剤を含む）、エリキシル剤、懸濁剤、シロッ
プ剤または吸入剤およびそれらの制御放出形態が挙げら
れる。経口吸入または鼻腔内吸入のために適切な処方物
としては、当該分野で周知の賦形剤を含むかまたは含ま
ない、水溶液が挙げられる。
【０１０３】本発明の治療的または薬学的な組成物また
は処方物は、この組成物または処方物が、気管支分泌物
が濃くなること、刺激された気道膜が粘液の流れの増加
を通して滑らかになることならびに／または粘着性の濃
縮した粘液の産生の減少およびその除去を促進すること
によって、下気道排液を促進する能力について扱う説明
書またはラベルを伴って、容器、バイアル、吸入デバイ
スなどの中に充填され得る。このラベルまたは説明書は
また、指標および使用法（例えば、本明細書中に記載さ
れるような種々の状態の症状の軽減の維持）を扱い得
る。このような状態としては、中程度から重度の喘息、
慢性気管支炎、嚢胞性線維症、上気道および下気道の感
染および気道または身体の他の場所における粘着性の粘
液の存続を伴う他の状態が挙げられるがこれらに限定さ
れない。
は処方物は、この組成物または処方物が、気管支分泌物
が濃くなること、刺激された気道膜が粘液の流れの増加
を通して滑らかになることならびに／または粘着性の濃
縮した粘液の産生の減少およびその除去を促進すること
によって、下気道排液を促進する能力について扱う説明
書またはラベルを伴って、容器、バイアル、吸入デバイ
スなどの中に充填され得る。このラベルまたは説明書は
また、指標および使用法（例えば、本明細書中に記載さ
れるような種々の状態の症状の軽減の維持）を扱い得
る。このような状態としては、中程度から重度の喘息、
慢性気管支炎、嚢胞性線維症、上気道および下気道の感
染および気道または身体の他の場所における粘着性の粘
液の存続を伴う他の状態が挙げられるがこれらに限定さ
れない。
【０１０４】本発明のデバイスは、１以上の治療組成物
を上気道および／または下気道へと導入することに適応
させた任意のデバイスであり得る。いくつかの好ましい
実施形態では、本発明のデバイスは、計量用量吸入器で
あり得る。このデバイスは、本発明の治療組成物を、細
かく分散された霧状の液体、発泡物または粉末の形態で
送達するために適合され得る。このデバイスは、ポン
プ、液化ガス、圧縮ガスなどを含むがこれらに限定され
ない、当業者に公知の任意のプロペラント系を用い得
る。本発明のデバイスは代表的に、治療組成物の流れが
移動する１以上のバルブおよびこの流れを制御するため
のアクチュエータを備える容器を含む。本発明における
使用のために適切なデバイスは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔ
ｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版、第９５
章、１６７６−１６９２頁、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈ
ｉｎｇＣｏ．、Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ １９９５において
見出され得る。
を上気道および／または下気道へと導入することに適応
させた任意のデバイスであり得る。いくつかの好ましい
実施形態では、本発明のデバイスは、計量用量吸入器で
あり得る。このデバイスは、本発明の治療組成物を、細
かく分散された霧状の液体、発泡物または粉末の形態で
送達するために適合され得る。このデバイスは、ポン
プ、液化ガス、圧縮ガスなどを含むがこれらに限定され
ない、当業者に公知の任意のプロペラント系を用い得
る。本発明のデバイスは代表的に、治療組成物の流れが
移動する１以上のバルブおよびこの流れを制御するため
のアクチュエータを備える容器を含む。本発明における
使用のために適切なデバイスは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔ
ｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版、第９５
章、１６７６−１６９２頁、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈ
ｉｎｇＣｏ．、Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ １９９５において
見出され得る。
【０１０５】本発明の実施では、当業者の通常の技術範
囲内である、分子生物学、薬理学、免疫学および生化学
の従来の用語および技術を用い得る。例えば、Ｓａｍｂ
ｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８５を参照のこと。
囲内である、分子生物学、薬理学、免疫学および生化学
の従来の用語および技術を用い得る。例えば、Ｓａｍｂ
ｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８５を参照のこと。
【０１０６】さらに説明することなしに、当業者は、前
述の記載および以下の例示的な実施例を用いて、本発明
の化合物を作製および利用し得、そして本願方法を実施
し得ると考えられる。それゆえ、以下の実施例は、本発
明の好ましい実施形態を具体的に指摘する。そして、以
下の実施例は、残りの部分の開示を制限するとは決して
解釈されるべきでない。
述の記載および以下の例示的な実施例を用いて、本発明
の化合物を作製および利用し得、そして本願方法を実施
し得ると考えられる。それゆえ、以下の実施例は、本発
明の好ましい実施形態を具体的に指摘する。そして、以
下の実施例は、残りの部分の開示を制限するとは決して
解釈されるべきでない。
【０１０７】
【実施例】（実施例１：ＮＦＡは、ムチンを過剰産生す
るように活性化されたＣａｃｏ２細胞によるムチン産生
を阻害する）ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ
４、ＭＵＣ５ＢおよびＭＵＣ５ＡＣのｍＲＮＡを発現す
る活性化されたＣａｃｏ２細胞を作製し、そしてこれを
用いてムチン産生のインヒビターについて試験した。こ
れらの細胞は、ムチンについて過ヨウ素酸シッフ染色
（ＰＡＳ）を用いて染色され得る。図１に示すように、
Ｃａｃｏ２コントロール細胞は、いくつかの小さな糖結
合体小胞が散在した基本的なＰＡＳ染色を提示した（パ
ネルＡ）とはいえ、Ｃａｃｏ２細胞の活性化は、ＰＡＳ
陽性ムチン糖結合体の数および強度を劇的に増加させた
（パネルＢ）。この活性化されたＣａｃｏ２細胞を、ニ
フルム酸（ＮＦＡ）または４，４’−ジイソチオシアノ
スチルベン−２，２’−ジスルホン酸（ＤＩＤＳ）の存
在下で培養した。示した濃度（ＮＦＡについては１００
μｍ、そしてＤＩＤＳについては３００μｍ）、インヒ
ビターで処理された活性化されたＣａｃｏ２細胞のＰＡ
Ｓ染色は、未処理の細胞と比較して有意に少ない陽性染
色ムチン糖結合体を示した（図１Ｂと比較して図１
Ｄ）。さらに、コントロール細胞において見られたわず
かな染色もまた阻害された（図１Ａと比較して図１
Ｃ）。活性化されたＣａｃｏ２細胞によるムチン産生も
また、フルフェナメート（ＦＦＡ）、トルフェナメート
（ＴＦＬＡ）のような他のフェナメートによって阻害さ
れ得、そしてメフェナメート（ＭＦＡ）およびメクロフ
ェナメート（ＭＬＦＡ）によって部分的に阻害され得た
（図２）。関連する化合物であるナプロキセン（ＭＭＮ
Ａ）およびスリンダクは無効であった。ＮＦＡ処理細胞
におけるこの減少したムチン産生は、この細胞の生理学
的条件の劇的な変化には起因しなかった。なぜなら、こ
れらの細胞の生存率は、さらに高い濃度のＮＦＡによっ
て影響されなかったからである（図３）。総合すると、
この結果は、これらの薬物が上皮の活性化を阻害するこ
とと一致する。さらに、この結果は、複数の慢性閉塞性
肺障害の特徴である粘液の過剰産生に対するＮＦＡおよ
びそのアナログ（図１１に示すフェニルアントラニル酸
誘導体）、ＤＩＤＳおよびＳＩＤＳの直接的な効果を明
らかに実証する。
るように活性化されたＣａｃｏ２細胞によるムチン産生
を阻害する）ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ
４、ＭＵＣ５ＢおよびＭＵＣ５ＡＣのｍＲＮＡを発現す
る活性化されたＣａｃｏ２細胞を作製し、そしてこれを
用いてムチン産生のインヒビターについて試験した。こ
れらの細胞は、ムチンについて過ヨウ素酸シッフ染色
（ＰＡＳ）を用いて染色され得る。図１に示すように、
Ｃａｃｏ２コントロール細胞は、いくつかの小さな糖結
合体小胞が散在した基本的なＰＡＳ染色を提示した（パ
ネルＡ）とはいえ、Ｃａｃｏ２細胞の活性化は、ＰＡＳ
陽性ムチン糖結合体の数および強度を劇的に増加させた
（パネルＢ）。この活性化されたＣａｃｏ２細胞を、ニ
フルム酸（ＮＦＡ）または４，４’−ジイソチオシアノ
スチルベン−２，２’−ジスルホン酸（ＤＩＤＳ）の存
在下で培養した。示した濃度（ＮＦＡについては１００
μｍ、そしてＤＩＤＳについては３００μｍ）、インヒ
ビターで処理された活性化されたＣａｃｏ２細胞のＰＡ
Ｓ染色は、未処理の細胞と比較して有意に少ない陽性染
色ムチン糖結合体を示した（図１Ｂと比較して図１
Ｄ）。さらに、コントロール細胞において見られたわず
かな染色もまた阻害された（図１Ａと比較して図１
Ｃ）。活性化されたＣａｃｏ２細胞によるムチン産生も
また、フルフェナメート（ＦＦＡ）、トルフェナメート
（ＴＦＬＡ）のような他のフェナメートによって阻害さ
れ得、そしてメフェナメート（ＭＦＡ）およびメクロフ
ェナメート（ＭＬＦＡ）によって部分的に阻害され得た
（図２）。関連する化合物であるナプロキセン（ＭＭＮ
Ａ）およびスリンダクは無効であった。ＮＦＡ処理細胞
におけるこの減少したムチン産生は、この細胞の生理学
的条件の劇的な変化には起因しなかった。なぜなら、こ
れらの細胞の生存率は、さらに高い濃度のＮＦＡによっ
て影響されなかったからである（図３）。総合すると、
この結果は、これらの薬物が上皮の活性化を阻害するこ
とと一致する。さらに、この結果は、複数の慢性閉塞性
肺障害の特徴である粘液の過剰産生に対するＮＦＡおよ
びそのアナログ（図１１に示すフェニルアントラニル酸
誘導体）、ＤＩＤＳおよびＳＩＤＳの直接的な効果を明
らかに実証する。
【０１０８】（実施例２：ＮＦＡは、ムチンを過剰産生
するように活性化されたＣａｃｏ２細胞によるエオタキ
シン産生を阻害する）エオタキシンを発現および分泌す
る活性化されたＬＨＬ４細胞が産生され、そしてこの細
胞を用いて、エオタキシン産生のインヒビターについて
試験した。これらの細胞を、当該分野で周知のＥＬＩＳ
Ａ技術（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によってエオタキシ
ンについてインビトロでアッセイした。図４に示すよう
に、活性化されたＬＨＬ４細胞を、ニフルム酸（ＮＦ
Ａ）の非存在下（コントロール）または漸増濃度のニフ
ルム酸の存在下で培養した。エオタキシン産生の顕著な
阻害が、漸増濃度のＮＦＡについて注目された。同様の
阻害は、同一の実験においてＤＩＤＳおよびＳＩＤＳに
ついて見られた。Ｍａｄ／Ｃ３細胞は、ＮＦＡ、ＤＩＤ
ＳおよびＳＩＤＳによるエオタキシン産生の類似の阻害
を示す。まとめると、これらの結果は明らかに、エオタ
キシン産生に対するＮＦＡの直接的な効果を実証する。
するように活性化されたＣａｃｏ２細胞によるエオタキ
シン産生を阻害する）エオタキシンを発現および分泌す
る活性化されたＬＨＬ４細胞が産生され、そしてこの細
胞を用いて、エオタキシン産生のインヒビターについて
試験した。これらの細胞を、当該分野で周知のＥＬＩＳ
Ａ技術（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によってエオタキシ
ンについてインビトロでアッセイした。図４に示すよう
に、活性化されたＬＨＬ４細胞を、ニフルム酸（ＮＦ
Ａ）の非存在下（コントロール）または漸増濃度のニフ
ルム酸の存在下で培養した。エオタキシン産生の顕著な
阻害が、漸増濃度のＮＦＡについて注目された。同様の
阻害は、同一の実験においてＤＩＤＳおよびＳＩＤＳに
ついて見られた。Ｍａｄ／Ｃ３細胞は、ＮＦＡ、ＤＩＤ
ＳおよびＳＩＤＳによるエオタキシン産生の類似の阻害
を示す。まとめると、これらの結果は明らかに、エオタ
キシン産生に対するＮＦＡの直接的な効果を実証する。
【０１０９】（実施例３：ＮＦＡによる、喘息のマウス
モデルにおけるムチン過剰産生の阻害）以下の系統（Ｄ
ＢＡ、Ｃ５７Ｂ６およびＢ６Ｄ２Ｆ１）の保証されたウ
イルスフリーの雄性および雌性のマウスを、Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅまたはＪａ
ｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａ
ｒｂｏｒ ＭＥ）から購入した。ＩＬ−９トランスジェ
ニックマウス（Ｔｇ５）およびそれらの親系統（ＦＶ
Ｂ）を、Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｂｒｕｓ
ｓｅｌｓ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）から入手した。動物を、高
い効率の粒子濾過空気施設で飼育し、そして実験操作の
前に３日間〜７日間にわたって食物および水を自由に摂
らせた。この動物施設を２２℃に維持し、そして明暗周
期を自動的に制御した（１０時間：１４時間の明：
暗）。
モデルにおけるムチン過剰産生の阻害）以下の系統（Ｄ
ＢＡ、Ｃ５７Ｂ６およびＢ６Ｄ２Ｆ１）の保証されたウ
イルスフリーの雄性および雌性のマウスを、Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅまたはＪａ
ｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａ
ｒｂｏｒ ＭＥ）から購入した。ＩＬ−９トランスジェ
ニックマウス（Ｔｇ５）およびそれらの親系統（ＦＶ
Ｂ）を、Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｂｒｕｓ
ｓｅｌｓ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）から入手した。動物を、高
い効率の粒子濾過空気施設で飼育し、そして実験操作の
前に３日間〜７日間にわたって食物および水を自由に摂
らせた。この動物施設を２２℃に維持し、そして明暗周
期を自動的に制御した（１０時間：１４時間の明：
暗）。
【０１１０】（表現型分類および前処理の効力）動物
は、気管支反応性亢進、気管支肺胞洗浄液の組成、ムチ
ン産生および血清ＩｇＥに対する前処理の効果を評価す
るために、前処理を受けなかったかまたはＡｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ抗原の鼻腔内呼吸によ
って感作されたかのいずれかであった。マウスに、Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓまたは生理食塩水を鼻腔内抗原投与
（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）し（０日目、７日目、１４日
目、２１日目および２２日目）、そして最後の用量の２
４時間後に表現型分類（ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）した。感
作したマウスを、０〜２１日目にＰＢＳまたは１００μ
ｇのＮＦＡのいずれかで、気管内点滴注入（ＩＴ）によ
って処置した。肺における粘液産生およびムチン発現の
阻害を用いて、ＮＦＡの処置効果を評価したか、または
これを用いて、他の薬物候補の処置効果を評価し得る。
気管支収縮応答を決定するために、薬物への曝露の前お
よび曝露の間に呼吸器系の圧力を気管で測定し、そして
記録した。以前に記載されたように、マウスに麻酔を
し、そして器具を取り付けた（Ｌｅｖｉｔｔら、１９８
８；ＬｅｖｉｔｔおよびＭｉｔｚｎｅｒ、１９８９；Ｋ
ｌｅｅｂｅｒｇｅｒら、１９９０；Ｌｅｖｉｔｔ、１９
９１；ＬｅｖｉｔｔおよびＥｗａｒｔ、１９９５；Ｅｗ
ａｒｔら、１９９５）。気道応答性を、以下のうちの１
以上について測定する：５−ヒドロキシトリプタミン、
アセチルコリン、アトラクリウムまたはサブスタンスＰ
アナログ。気管支収縮抗原投与後のピーク吸息圧におけ
る変化の単純かつ反復可能な測定を用いた。これを、気
道圧力時間指数（Ａｉｒｗａｙ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｔ
ｉｍｅ Ｉｎｄｅｘ；ＡＰＴＩ）（Ｌｅｖｉｔｔら、１
９８８；ＬｅｖｉｔｔおよびＭｉｔｚｎｅｒ、１９８
９）と呼んだ。ＡＰＴＩを、注射時点から、ピーク圧力
がベースラインまたはプラトーに戻るまで積算されたピ
ーク吸息圧における変化によって評価した。ＡＰＴＩ
は、気道抵抗に匹敵した。しかし、ＡＰＴＩは、気管支
収縮からの回復に関連するさらなる成分を含む。
は、気管支反応性亢進、気管支肺胞洗浄液の組成、ムチ
ン産生および血清ＩｇＥに対する前処理の効果を評価す
るために、前処理を受けなかったかまたはＡｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ抗原の鼻腔内呼吸によ
って感作されたかのいずれかであった。マウスに、Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓまたは生理食塩水を鼻腔内抗原投与
（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）し（０日目、７日目、１４日
目、２１日目および２２日目）、そして最後の用量の２
４時間後に表現型分類（ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）した。感
作したマウスを、０〜２１日目にＰＢＳまたは１００μ
ｇのＮＦＡのいずれかで、気管内点滴注入（ＩＴ）によ
って処置した。肺における粘液産生およびムチン発現の
阻害を用いて、ＮＦＡの処置効果を評価したか、または
これを用いて、他の薬物候補の処置効果を評価し得る。
気管支収縮応答を決定するために、薬物への曝露の前お
よび曝露の間に呼吸器系の圧力を気管で測定し、そして
記録した。以前に記載されたように、マウスに麻酔を
し、そして器具を取り付けた（Ｌｅｖｉｔｔら、１９８
８；ＬｅｖｉｔｔおよびＭｉｔｚｎｅｒ、１９８９；Ｋ
ｌｅｅｂｅｒｇｅｒら、１９９０；Ｌｅｖｉｔｔ、１９
９１；ＬｅｖｉｔｔおよびＥｗａｒｔ、１９９５；Ｅｗ
ａｒｔら、１９９５）。気道応答性を、以下のうちの１
以上について測定する：５−ヒドロキシトリプタミン、
アセチルコリン、アトラクリウムまたはサブスタンスＰ
アナログ。気管支収縮抗原投与後のピーク吸息圧におけ
る変化の単純かつ反復可能な測定を用いた。これを、気
道圧力時間指数（Ａｉｒｗａｙ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｔ
ｉｍｅ Ｉｎｄｅｘ；ＡＰＴＩ）（Ｌｅｖｉｔｔら、１
９８８；ＬｅｖｉｔｔおよびＭｉｔｚｎｅｒ、１９８
９）と呼んだ。ＡＰＴＩを、注射時点から、ピーク圧力
がベースラインまたはプラトーに戻るまで積算されたピ
ーク吸息圧における変化によって評価した。ＡＰＴＩ
は、気道抵抗に匹敵した。しかし、ＡＰＴＩは、気管支
収縮からの回復に関連するさらなる成分を含む。
【０１１１】屠殺の前に、全血を、麻酔した動物の下大
静脈の針穿刺によって血清ＩｇＥ測定のために収集し
た。サンプルを遠心分離して細胞を分離し、そして血清
を収集し、この血清を用いて総ＩｇＥレベルを測定し
た。すぐに測定しないサンプルを、−２０℃にて凍結さ
せた。
静脈の針穿刺によって血清ＩｇＥ測定のために収集し
た。サンプルを遠心分離して細胞を分離し、そして血清
を収集し、この血清を用いて総ＩｇＥレベルを測定し
た。すぐに測定しないサンプルを、−２０℃にて凍結さ
せた。
【０１１２】全てのＩｇＥ血清サンプルを、ＥＬＩＳＡ
抗体サンドイッチアッセイを用いて測定した。マイクロ
タイタープレートを、アジ化ナトリウムを含む炭酸ナト
リウム−重炭酸ナトリウムのコーティング緩衝液中２．
５μｇ／ｍｌの濃度のラット抗マウスＩｇＥ抗体（Ｓｏ
ｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で１ウェ
ルあたり５０μｌでコーティングした。プレートを、プ
ラスチックラップで覆い、そして４℃にて１６時間イン
キュベートした。このプレートを、１回の洗浄につき５
分間インキュベートして、リン酸緩衝化生理食塩水中
０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０の洗浄緩衝液で３回洗浄
した。非特異的結合部位のブロッキングを、リン酸緩衝
化生理食塩水中５％ウシ血清アルブミンを１ウェルあた
り２００μｌ添加し、プラスチックラップで覆い、そし
て３７℃にて２時間インキュベートすることによって達
成した。洗浄緩衝液で３回洗浄した後、２連の５０μｌ
の試験サンプルを各ウェルに添加した。試験サンプル
を、洗浄緩衝液中の５％ウシ血清アルブミンで１：１
０、１：５０および１：１００に希釈した後でアッセイ
した。試験サンプルに加えて、洗浄緩衝液中の５％ウシ
血清アルブミン中の０．８ｎｇ／ｍｌ〜２００ｎｇ／ｍ
ｌの濃度のＩｇＥ標準（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）のセッ
トをアッセイして、標準曲線を作成した。サンプルも標
準もないブランクを用いて、プレートリーダーを０にし
た（バックグラウンド）。サンプルおよび標準を加えた
後、プレートをプラスチックラップで覆い、そして室温
にて２時間インキュベートした。洗浄緩衝液で３回洗浄
した後、５０μｌの二次抗体ラット抗マウスＩｇＥ−西
洋ワサビペルオキシダーゼ結合体を、洗浄緩衝液中の５
％ウシ血清アルブミン中２５０ｎｇ／ｍｌの濃度で添加
した。このプレートをプラスチックラップで覆い、そし
て室温にて２時間インキュベートした。洗浄緩衝液で３
回洗浄した後、０．１Ｍクエン酸緩衝液中の基質０．５
ｍｇ／ｍｌ ｏ−フェニレンジアミン１００μｌを全て
のウェルに添加した。５〜１０分後、この反応を５０μ
ｌの１２．５％硫酸で停止させ、そして吸光度をＭＲ５
０００プレートリーダー（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）で４９０
ｎｍにて測定した。標準曲線を、Ｘ軸を抗原濃度（対数
目盛）およびＹ軸を吸光度（一様目盛）にして標準Ｉｇ
Ｅ濃度から作成した。サンプル中のＩｇＥの濃度を、標
準曲線から外挿した。
抗体サンドイッチアッセイを用いて測定した。マイクロ
タイタープレートを、アジ化ナトリウムを含む炭酸ナト
リウム−重炭酸ナトリウムのコーティング緩衝液中２．
５μｇ／ｍｌの濃度のラット抗マウスＩｇＥ抗体（Ｓｏ
ｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で１ウェ
ルあたり５０μｌでコーティングした。プレートを、プ
ラスチックラップで覆い、そして４℃にて１６時間イン
キュベートした。このプレートを、１回の洗浄につき５
分間インキュベートして、リン酸緩衝化生理食塩水中
０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０の洗浄緩衝液で３回洗浄
した。非特異的結合部位のブロッキングを、リン酸緩衝
化生理食塩水中５％ウシ血清アルブミンを１ウェルあた
り２００μｌ添加し、プラスチックラップで覆い、そし
て３７℃にて２時間インキュベートすることによって達
成した。洗浄緩衝液で３回洗浄した後、２連の５０μｌ
の試験サンプルを各ウェルに添加した。試験サンプル
を、洗浄緩衝液中の５％ウシ血清アルブミンで１：１
０、１：５０および１：１００に希釈した後でアッセイ
した。試験サンプルに加えて、洗浄緩衝液中の５％ウシ
血清アルブミン中の０．８ｎｇ／ｍｌ〜２００ｎｇ／ｍ
ｌの濃度のＩｇＥ標準（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）のセッ
トをアッセイして、標準曲線を作成した。サンプルも標
準もないブランクを用いて、プレートリーダーを０にし
た（バックグラウンド）。サンプルおよび標準を加えた
後、プレートをプラスチックラップで覆い、そして室温
にて２時間インキュベートした。洗浄緩衝液で３回洗浄
した後、５０μｌの二次抗体ラット抗マウスＩｇＥ−西
洋ワサビペルオキシダーゼ結合体を、洗浄緩衝液中の５
％ウシ血清アルブミン中２５０ｎｇ／ｍｌの濃度で添加
した。このプレートをプラスチックラップで覆い、そし
て室温にて２時間インキュベートした。洗浄緩衝液で３
回洗浄した後、０．１Ｍクエン酸緩衝液中の基質０．５
ｍｇ／ｍｌ ｏ−フェニレンジアミン１００μｌを全て
のウェルに添加した。５〜１０分後、この反応を５０μ
ｌの１２．５％硫酸で停止させ、そして吸光度をＭＲ５
０００プレートリーダー（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）で４９０
ｎｍにて測定した。標準曲線を、Ｘ軸を抗原濃度（対数
目盛）およびＹ軸を吸光度（一様目盛）にして標準Ｉｇ
Ｅ濃度から作成した。サンプル中のＩｇＥの濃度を、標
準曲線から外挿した。
【０１１３】気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）および細胞分析
を、以前に記載された（Ｋｌｅｅｂｅｒｇｅｒら、１９
９０）ように行った。肺の組織学を、肺にインサイチュ
で固定液を満たし、そしてホルマリンを入れた後、また
は、抽出し、そして液体窒素中で直ちに凍結した後のい
ずれかの後に行った。先の器具使用がアーチファクトを
導入し得ることから、別々の動物をこれらの研究に用い
た。従って、小さな群の動物を、これらの動物を気管支
応答性試験以外の他の試験に用いないこと以外は種々の
前処置を受けたコホートと正確に同じに並行して処置し
た。気管支応答性試験の後、肺を取り出し、そして上記
の通りに液体窒素に浸漬した。凍結切片化、染色および
組織学的検査を、当業者に明らかな様式で実施した。
を、以前に記載された（Ｋｌｅｅｂｅｒｇｅｒら、１９
９０）ように行った。肺の組織学を、肺にインサイチュ
で固定液を満たし、そしてホルマリンを入れた後、また
は、抽出し、そして液体窒素中で直ちに凍結した後のい
ずれかの後に行った。先の器具使用がアーチファクトを
導入し得ることから、別々の動物をこれらの研究に用い
た。従って、小さな群の動物を、これらの動物を気管支
応答性試験以外の他の試験に用いないこと以外は種々の
前処置を受けたコホートと正確に同じに並行して処置し
た。気管支応答性試験の後、肺を取り出し、そして上記
の通りに液体窒素に浸漬した。凍結切片化、染色および
組織学的検査を、当業者に明らかな様式で実施した。
【０１１４】ＮＦＡは、上皮細胞活性化をブロックし、
そしてインビトロでのムチンおよびエオタキシンの産生
をダウンレギュレートする。ＮＦＡを治療的に用いて、
抗原誘発性ムチン産生、気管支応答性、血清ＩｇＥおよ
びマウスにおいてＢＡＬによって評価した場合の気道炎
症に対するインビボでの上皮細胞活性化の重要性を評価
した。ビヒクル処置をした一致するコントロールと比較
した、気道応答性、ＢＡＬ、粘液産生および血清ＩｇＥ
レベルに対するＮＦＡ処置の効果を決定した。図５およ
び図６は、ＮＦＡが、気道反応性亢進およびＢＡＬ肺好
酸球増加をそれぞれ抑制し得るが、血清ＩｇＥレベルに
対しては何の効果もないことを示す。さらに、ＮＦＡは
また、抗原に対する曝露によって引き起こされる肺にお
ける粘液の過剰産生を抑制し得る（図７）。
そしてインビトロでのムチンおよびエオタキシンの産生
をダウンレギュレートする。ＮＦＡを治療的に用いて、
抗原誘発性ムチン産生、気管支応答性、血清ＩｇＥおよ
びマウスにおいてＢＡＬによって評価した場合の気道炎
症に対するインビボでの上皮細胞活性化の重要性を評価
した。ビヒクル処置をした一致するコントロールと比較
した、気道応答性、ＢＡＬ、粘液産生および血清ＩｇＥ
レベルに対するＮＦＡ処置の効果を決定した。図５およ
び図６は、ＮＦＡが、気道反応性亢進およびＢＡＬ肺好
酸球増加をそれぞれ抑制し得るが、血清ＩｇＥレベルに
対しては何の効果もないことを示す。さらに、ＮＦＡは
また、抗原に対する曝露によって引き起こされる肺にお
ける粘液の過剰産生を抑制し得る（図７）。
【０１１５】（実施例４：トランスジェニックマウスに
おけるＩＬ９による上皮活性化は、粘液過剰産生および
ムチン遺伝子のアップレギュレーションを生じる。薬物
スクリーニングについてのモデル）５〜６週齢の保証さ
れたウイルスフリーの雄性および雌性のＩＬ９トランス
ジェニックマウス（ＩＬ９ＴＧ５−ＦＶＢ／Ｎ）を、本
発明者らの研究室で交配させた。５〜６週齢の雄性およ
び雌性のＦＶＢ／Ｎマウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ ＭＥ）か
ら購入した。動物を、高い効率の粒子濾過空気施設で飼
育し、そして実験操作の前に３日間〜７日間にわたって
食物および水を自由に摂らせた。この動物施設を２２℃
に維持し、そして明暗周期を自動的に制御した（１０時
間：１４時間の明：暗）。
おけるＩＬ９による上皮活性化は、粘液過剰産生および
ムチン遺伝子のアップレギュレーションを生じる。薬物
スクリーニングについてのモデル）５〜６週齢の保証さ
れたウイルスフリーの雄性および雌性のＩＬ９トランス
ジェニックマウス（ＩＬ９ＴＧ５−ＦＶＢ／Ｎ）を、本
発明者らの研究室で交配させた。５〜６週齢の雄性およ
び雌性のＦＶＢ／Ｎマウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ ＭＥ）か
ら購入した。動物を、高い効率の粒子濾過空気施設で飼
育し、そして実験操作の前に３日間〜７日間にわたって
食物および水を自由に摂らせた。この動物施設を２２℃
に維持し、そして明暗周期を自動的に制御した（１０時
間：１４時間の明：暗）。
【０１１６】（表現型分類および処置の効力）動物を、
未刺激、または気管内(ＩＴ）偽（ビヒクル）処置を受
けてから２４時間後、同一に処置したコントロールで用
いたビヒクルと同じビヒクル中での薬物を受けてから２
４時間後に表現型分類した。マウスを、ＩＴで一日１
回、３日間にわたって処置した。ＮＦＡ（１００μｇ）
またはＩＬ−９に対する抗体を、ＰＢＳ中でＩＴで投与
した。処置応答を、組織学的検査（処置肺およびコント
ロール肺の全体についての１０を超える切片のＰＡＳ染
色または同じ肺からのＭＵＣ１、ＭＵＣ２およびＭＵＣ
３の発現のウェスタンブロット）によるムチン阻害の評
価によって測定した。図８は、ＩＬ−９トランスジェニ
ックマウスが、コントロールのＦＶＢマウスと比較して
ムチンを構成的に過剰産生することを示す。喘息性ＩＬ
９トランスジェニックにおいて生じる高レベルの構成性
ムチン産生（図８）（未刺激およびビヒクルコントロー
ル）から、ＦＶＢ／Ｎ肺（正常な陽性コントロール）に
おいて見出されるずっと低いベースラインのムチン産生
に匹敵するレベルへの減少を、任意の薬物について有意
であるとみなした。ＩＬ９トランスジェニックにおける
粘液産生のアップレギュレーションは、ＲＴ−ＰＣＲに
よって示されるようなＭＵＣ２およびＭＵＣ５ＡＣの増
加した定常ｍＲＮＡレベルに特異的に関連する（図
９）。
未刺激、または気管内(ＩＴ）偽（ビヒクル）処置を受
けてから２４時間後、同一に処置したコントロールで用
いたビヒクルと同じビヒクル中での薬物を受けてから２
４時間後に表現型分類した。マウスを、ＩＴで一日１
回、３日間にわたって処置した。ＮＦＡ（１００μｇ）
またはＩＬ−９に対する抗体を、ＰＢＳ中でＩＴで投与
した。処置応答を、組織学的検査（処置肺およびコント
ロール肺の全体についての１０を超える切片のＰＡＳ染
色または同じ肺からのＭＵＣ１、ＭＵＣ２およびＭＵＣ
３の発現のウェスタンブロット）によるムチン阻害の評
価によって測定した。図８は、ＩＬ−９トランスジェニ
ックマウスが、コントロールのＦＶＢマウスと比較して
ムチンを構成的に過剰産生することを示す。喘息性ＩＬ
９トランスジェニックにおいて生じる高レベルの構成性
ムチン産生（図８）（未刺激およびビヒクルコントロー
ル）から、ＦＶＢ／Ｎ肺（正常な陽性コントロール）に
おいて見出されるずっと低いベースラインのムチン産生
に匹敵するレベルへの減少を、任意の薬物について有意
であるとみなした。ＩＬ９トランスジェニックにおける
粘液産生のアップレギュレーションは、ＲＴ−ＰＣＲに
よって示されるようなＭＵＣ２およびＭＵＣ５ＡＣの増
加した定常ｍＲＮＡレベルに特異的に関連する（図
９）。
【０１１７】中和ＩＬ−９抗体は、ＩＬ９トランスジェ
ニック肺においてムチン産生の有意な減少を生じること
が示された（図１０）。ＮＦＡはまた、このモデルにお
けるムチン産生を減少させた。
ニック肺においてムチン産生の有意な減少を生じること
が示された（図１０）。ＮＦＡはまた、このモデルにお
けるムチン産生を減少させた。
【０１１８】（実施例５：タルニフルマートによる喘息
のマウスモデルにおけるムチン過剰産生の阻害）５〜６
週齢の保証されたウイルスフリーの雄性のＢ６Ｄ２Ｆ１
マウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ ＭＥ）から購入した。動物
を、高い効率の粒子濾過空気施設で飼育し、そして実験
操作の前に５日間〜７日間にわたって食物および水を自
由に摂らせた。この動物施設を２２℃に維持し、そして
明暗周期を自動的に制御した（１２時間：１２時間の
明：暗）。
のマウスモデルにおけるムチン過剰産生の阻害）５〜６
週齢の保証されたウイルスフリーの雄性のＢ６Ｄ２Ｆ１
マウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ ＭＥ）から購入した。動物
を、高い効率の粒子濾過空気施設で飼育し、そして実験
操作の前に５日間〜７日間にわたって食物および水を自
由に摂らせた。この動物施設を２２℃に維持し、そして
明暗周期を自動的に制御した（１２時間：１２時間の
明：暗）。
【０１１９】（表現型分類および処置の効力）動物に、
タルニフルマートを含むマウス用餌または通常のマウス
用餌のいずれかを自由に給餌した。動物は、気管支反応
性亢進、気管支肺胞洗浄液の組成、ムチン産生および血
清ＩｇＥに対する前処置の効果を評価するために、感作
を受けなかったかまたはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕ
ｍｉｇａｔｕｓ抗原の鼻腔内吸入によって感作されたか
のいずれかであった。マウスに、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓを鼻腔内抗原投与し（０日目、７日目、１６日目およ
び１７日目）、そして最後の用量の２４時間後に表現型
を決定した。肺における粘液産生の阻害を用いて、タル
ニフルマートの処置効果を評価したか、またはこの阻害
を用いて、他の薬物候補の処置効果を評価し得る。気管
支収縮応答を決定するために、薬物への曝露の前および
曝露の間に呼吸器系の圧力を気管で測定し、そして記録
した。以前に記載されたように、マウスに麻酔をし、そ
して器具を取り付けた（Ｌｅｖｉｔｔら、１９８８；Ｌ
ｅｖｉｔｔおよびＭｉｔｚｎｅｒ、１９８９；Ｋｌｅｅ
ｂｅｒｇｅｒら、１９９０；Ｌｅｖｉｔｔ、１９９１；
ＬｅｖｉｔｔおよびＥｗａｒｔ、１９９５；Ｅｗａｒｔ
ら、１９９５）。気道応答性を、以下のうちの１以上に
ついて測定する：５−ヒドロキシトリプタミン、アセチ
ルコリン、アトラクリウムまたはサブスタンスＰアナロ
グ。気管支収縮抗原投与後のピーク吸息圧における変化
の単純かつ反復可能な測定を用いた。これを、気道圧力
時間指数（ＡＰＴＩ）（Ｌｅｖｉｔｔら、１９８８；Ｌ
ｅｖｉｔｔおよびＭｉｔｚｎｅｒ、１９８９）と呼ん
だ。ＡＰＴＩを、注射時点から、ピーク圧力がベースラ
インまたはプラトーに戻るまで積算されたピーク吸息圧
における変化によって評価した。ＡＰＴＩは、気道抵抗
に匹敵した。しかし、ＡＰＴＩは、気管支収縮からの回
復に関連するさらなる成分を含む。気管支肺胞洗浄（Ｂ
ＡＬ）および細胞分析を、以前に記載された（Ｋｉｅｅ
ｂｅｒｇｅｒら、１９９０）通りに行った。肺の組織学
を、肺を採取し、そして液体窒素中で直ちに凍結した後
に実施した。気管支応答性試験の後、肺を取り出し、そ
して上記の通りに液体窒素に浸漬した。凍結切片化、染
色および組織学的検査を、当業者に明らかな様式で実施
した。
タルニフルマートを含むマウス用餌または通常のマウス
用餌のいずれかを自由に給餌した。動物は、気管支反応
性亢進、気管支肺胞洗浄液の組成、ムチン産生および血
清ＩｇＥに対する前処置の効果を評価するために、感作
を受けなかったかまたはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕ
ｍｉｇａｔｕｓ抗原の鼻腔内吸入によって感作されたか
のいずれかであった。マウスに、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓを鼻腔内抗原投与し（０日目、７日目、１６日目およ
び１７日目）、そして最後の用量の２４時間後に表現型
を決定した。肺における粘液産生の阻害を用いて、タル
ニフルマートの処置効果を評価したか、またはこの阻害
を用いて、他の薬物候補の処置効果を評価し得る。気管
支収縮応答を決定するために、薬物への曝露の前および
曝露の間に呼吸器系の圧力を気管で測定し、そして記録
した。以前に記載されたように、マウスに麻酔をし、そ
して器具を取り付けた（Ｌｅｖｉｔｔら、１９８８；Ｌ
ｅｖｉｔｔおよびＭｉｔｚｎｅｒ、１９８９；Ｋｌｅｅ
ｂｅｒｇｅｒら、１９９０；Ｌｅｖｉｔｔ、１９９１；
ＬｅｖｉｔｔおよびＥｗａｒｔ、１９９５；Ｅｗａｒｔ
ら、１９９５）。気道応答性を、以下のうちの１以上に
ついて測定する：５−ヒドロキシトリプタミン、アセチ
ルコリン、アトラクリウムまたはサブスタンスＰアナロ
グ。気管支収縮抗原投与後のピーク吸息圧における変化
の単純かつ反復可能な測定を用いた。これを、気道圧力
時間指数（ＡＰＴＩ）（Ｌｅｖｉｔｔら、１９８８；Ｌ
ｅｖｉｔｔおよびＭｉｔｚｎｅｒ、１９８９）と呼ん
だ。ＡＰＴＩを、注射時点から、ピーク圧力がベースラ
インまたはプラトーに戻るまで積算されたピーク吸息圧
における変化によって評価した。ＡＰＴＩは、気道抵抗
に匹敵した。しかし、ＡＰＴＩは、気管支収縮からの回
復に関連するさらなる成分を含む。気管支肺胞洗浄（Ｂ
ＡＬ）および細胞分析を、以前に記載された（Ｋｉｅｅ
ｂｅｒｇｅｒら、１９９０）通りに行った。肺の組織学
を、肺を採取し、そして液体窒素中で直ちに凍結した後
に実施した。気管支応答性試験の後、肺を取り出し、そ
して上記の通りに液体窒素に浸漬した。凍結切片化、染
色および組織学的検査を、当業者に明らかな様式で実施
した。
【０１２０】処置応答を、組織学的検査（処置肺および
コントロール肺のＰＡＳ染色）によるムチン阻害の評価
によって測定した。
コントロール肺のＰＡＳ染色）によるムチン阻害の評価
によって測定した。
【０１２１】タルニフルマートでの経口処置は、ムチン
染色を減少させた。図１５Ａは、通常のマウス用餌を給
餌したＡｓｐ−ｓｅｎｓマウスから得られたマウス肺に
おけるＰＡＳ染色を示す。図１５Ｂは、タルニフルマー
トを含む餌を給餌したＡｓｐ−ｓｅｎｓマウスから得ら
れた結果を示す。図１６は、タルニフルマートでコーテ
ィングされたマウス用餌を給餌した結果を、気管支肺胞
洗浄によって決定した肺好酸球増加について示す。タル
ニフルマートは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇ
ａｔｕｓに感作させたマウスから得られる好酸球細胞の
数を、標準的なマウス用餌を給餌した感作したマウスと
比較して減少させた。
染色を減少させた。図１５Ａは、通常のマウス用餌を給
餌したＡｓｐ−ｓｅｎｓマウスから得られたマウス肺に
おけるＰＡＳ染色を示す。図１５Ｂは、タルニフルマー
トを含む餌を給餌したＡｓｐ−ｓｅｎｓマウスから得ら
れた結果を示す。図１６は、タルニフルマートでコーテ
ィングされたマウス用餌を給餌した結果を、気管支肺胞
洗浄によって決定した肺好酸球増加について示す。タル
ニフルマートは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇ
ａｔｕｓに感作させたマウスから得られる好酸球細胞の
数を、標準的なマウス用餌を給餌した感作したマウスと
比較して減少させた。
【０１２２】（実施例６：上皮細胞株におけるＩＣＡＣ
Ｃ−１の過剰発現は、ムチン産生を増強する）ＮＣＩ−
Ｈ２９２細胞（ヒト肺粘液性類表皮癌細胞株）を、Ａｍ
ｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃ
ｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ ＶＡ）から購入し、そし
て１０％ ＦＢＳおよび１％ ペニシリン／ストレプト
マイシン（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）を補充したＲＰＭＩ１
６４０培地中で培養した。加湿し、５％ ＣＯ2を補充
した空気含有インキュベーター中で３７℃にてこの細胞
を増殖させた。ｈＩＣＡＣＣ−Ｉを過剰発現する安定な
ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞株を、製造業者の指示書（Ｂｏｅ
ｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）に従ってＦｕｊｉ
ｎ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎキットを用いたｐｃＤＮ
Ａ３−ｈＩＣＡＣＣ−１のトランスフェクションによっ
て樹立した。同じ手順を用いたＮＣＩ−Ｈ２９２細胞株
へのｐｃＤＮＡ３（ｃｔｌ）のトランスフェクションに
よってコントロール細胞株ＮＣＩ−Ｈ２９２／ｃｔｌを
産生した。ｈＩＣＡＣＣ−１遺伝子の発現は、ノーザン
分析によってｐｃＤＮＡ３−ｈＩＣＡＣＣ−１トランス
フェクタントについて確認された。
Ｃ−１の過剰発現は、ムチン産生を増強する）ＮＣＩ−
Ｈ２９２細胞（ヒト肺粘液性類表皮癌細胞株）を、Ａｍ
ｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃ
ｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ ＶＡ）から購入し、そし
て１０％ ＦＢＳおよび１％ ペニシリン／ストレプト
マイシン（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）を補充したＲＰＭＩ１
６４０培地中で培養した。加湿し、５％ ＣＯ2を補充
した空気含有インキュベーター中で３７℃にてこの細胞
を増殖させた。ｈＩＣＡＣＣ−Ｉを過剰発現する安定な
ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞株を、製造業者の指示書（Ｂｏｅ
ｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）に従ってＦｕｊｉ
ｎ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎキットを用いたｐｃＤＮ
Ａ３−ｈＩＣＡＣＣ−１のトランスフェクションによっ
て樹立した。同じ手順を用いたＮＣＩ−Ｈ２９２細胞株
へのｐｃＤＮＡ３（ｃｔｌ）のトランスフェクションに
よってコントロール細胞株ＮＣＩ−Ｈ２９２／ｃｔｌを
産生した。ｈＩＣＡＣＣ−１遺伝子の発現は、ノーザン
分析によってｐｃＤＮＡ３−ｈＩＣＡＣＣ−１トランス
フェクタントについて確認された。
【０１２３】ｓ−ＥＬＬＡ（特異的酵素結合レクチンア
ッセイ）のために、細胞を２４ウェル組織培養プレート
にプレーティングし、そして７２時間インキュベートし
てコンフルエントにした。上清を、１μｇ／ｍｌの抗Ｍ
ＵＣ５Ａ／Ｃ抗体（Ｎｅｗｍａｒｋｅｒ、Ｆｒｅｍｏｎ
ｔ ＣＡ）で予めコーティングしかつ１％ ＢＳＡでブ
ロックした９６ウェルプレート中に移した。次いで、抗
体が結合したＭＵＣ５Ａ／Ｃを、ＨＲＰ−レクチン（Ｓ
ｉｇｍａ）を用いて検出した。
ッセイ）のために、細胞を２４ウェル組織培養プレート
にプレーティングし、そして７２時間インキュベートし
てコンフルエントにした。上清を、１μｇ／ｍｌの抗Ｍ
ＵＣ５Ａ／Ｃ抗体（Ｎｅｗｍａｒｋｅｒ、Ｆｒｅｍｏｎ
ｔ ＣＡ）で予めコーティングしかつ１％ ＢＳＡでブ
ロックした９６ウェルプレート中に移した。次いで、抗
体が結合したＭＵＣ５Ａ／Ｃを、ＨＲＰ−レクチン（Ｓ
ｉｇｍａ）を用いて検出した。
【０１２４】ＲＴ−ＰＣＲのために、総ＲＮＡを、製造
業者のプロトコルに従ってＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｇｉｂｃ
ｏ／ＢＲＬ）を用いて細胞株から単離した。ＲＴ−ＰＣ
Ｒを、１μｇの総ＲＮＡを逆転写し、そして適切なプラ
イマーを用いてＰＣＲによってｃＤＮＡを増幅すること
によって行った。産物を、２％アガロースゲルでの電気
泳動によって分離し、そして臭化エチジウム染色によっ
て可視化した。ヒトＩＣＡＣＣ−１メッセージを作製す
るために用いたプライマー対は以下の通りであった：セ
ンス５’−ＧＧＣＡＣＡＧＡＴＣＴＴＴＴＣＡＴＴＧＣ
ＴＡ−３’およびアンチセンス５’−ＧＴＧＡＡＴＧＣ
ＣＡＧＧＡＡＴＧＧＴＧＣＴ−３’（これらは、１８２
ｂｐの産物を産生する）。ムチンのメッセージを作成す
るために用いられたプライマー対を表１に列挙する。
業者のプロトコルに従ってＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｇｉｂｃ
ｏ／ＢＲＬ）を用いて細胞株から単離した。ＲＴ−ＰＣ
Ｒを、１μｇの総ＲＮＡを逆転写し、そして適切なプラ
イマーを用いてＰＣＲによってｃＤＮＡを増幅すること
によって行った。産物を、２％アガロースゲルでの電気
泳動によって分離し、そして臭化エチジウム染色によっ
て可視化した。ヒトＩＣＡＣＣ−１メッセージを作製す
るために用いたプライマー対は以下の通りであった：セ
ンス５’−ＧＧＣＡＣＡＧＡＴＣＴＴＴＴＣＡＴＴＧＣ
ＴＡ−３’およびアンチセンス５’−ＧＴＧＡＡＴＧＣ
ＣＡＧＧＡＡＴＧＧＴＧＣＴ−３’（これらは、１８２
ｂｐの産物を産生する）。ムチンのメッセージを作成す
るために用いられたプライマー対を表１に列挙する。
【０１２５】
【表１】
【０１２６】ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞はＭＵＣ１を構成的
に発現し、一方、ＭＵＣ２およびＭＵＣ５Ａ／Ｃ ｍＲ
ＮＡ発現は、ベースラインでは検出レベル未満である。
図１２Ａは、ｐｃＤＮＡ３−ｈＩＣＡＣＣ−１でトラン
スフェクトされた細胞のノーザンブロット分析の結果を
示し、これは、ＩＣＡＣＣ ｍＲＮＡについての発現レ
ベルの増加を示す。ＩＣＡＣＣ−１を過剰発現するクロ
ーンからの細胞全体の溶解産物のウェスタンブロット分
析は、ＭＵＣ２タンパク質産生の増強を示した（図１２
Ｂ）。ＭＵＣ５Ａ／Ｃ発現は、ＩＣＡＣＣ−１を過剰発
現する細胞において有意に増加し、一方、ＭＵＣ１は、
ＲＴ−ＰＣＲ分析において変化しなかった（図１２
Ｃ）。特異的ＥＬＬＡ分析はまた、トランスフェクトし
ていないＮＣＩ−Ｈ２９２細胞または空のベクターでト
ランスフェクトした細胞と比較して、ＩＣＡＣＣ−Ｉを
発現するクローンにおいてＭＵＣ５Ａ／Ｃタンパク質の
過剰産生を示した（図１２Ｄ）。
に発現し、一方、ＭＵＣ２およびＭＵＣ５Ａ／Ｃ ｍＲ
ＮＡ発現は、ベースラインでは検出レベル未満である。
図１２Ａは、ｐｃＤＮＡ３−ｈＩＣＡＣＣ−１でトラン
スフェクトされた細胞のノーザンブロット分析の結果を
示し、これは、ＩＣＡＣＣ ｍＲＮＡについての発現レ
ベルの増加を示す。ＩＣＡＣＣ−１を過剰発現するクロ
ーンからの細胞全体の溶解産物のウェスタンブロット分
析は、ＭＵＣ２タンパク質産生の増強を示した（図１２
Ｂ）。ＭＵＣ５Ａ／Ｃ発現は、ＩＣＡＣＣ−１を過剰発
現する細胞において有意に増加し、一方、ＭＵＣ１は、
ＲＴ−ＰＣＲ分析において変化しなかった（図１２
Ｃ）。特異的ＥＬＬＡ分析はまた、トランスフェクトし
ていないＮＣＩ−Ｈ２９２細胞または空のベクターでト
ランスフェクトした細胞と比較して、ＩＣＡＣＣ−Ｉを
発現するクローンにおいてＭＵＣ５Ａ／Ｃタンパク質の
過剰産生を示した（図１２Ｄ）。
【０１２７】（実施例７：ｈＩＣＡＣＣ−１を過剰発現
するＮＣＩ−Ｈ２９２細胞における粘液過剰産生および
ＭＵＣ ５Ａ／Ｃ発現の阻害）粘液糖結合体産生の決定
のために、ＮＣＩ−Ｈ２９２／ｃｔｌおよびＮＣＩ−Ｈ
２９２／ｈＩＣＡＣＣ−１（ＡＡＦ １５）細胞を、２
４ウェルプレート中で３日間にわたって培養した。次い
で、細胞をホルマリンで固定し、そして粘液糖結合体を
ＡＢ／ＰＡＳ染色（Ｓｉｇｍａ）によって可視化した。
ＮＣＩ−Ｈ２９２コントロール細胞は、いくつかの散在
した顆粒を伴って基本的ＰＡＳ染色を提示した（図１３
Ａ）が、ＩＣＡＣＣ−１の過剰発現は、ＰＡＳ陽性粘液
糖結合体の数および強度を劇的に増加させた（図１３
Ｂ）。塩素イオンチャネル遮断研究のために、細胞を、
１００μＭ濃度のニフルム酸（ＮＦＡ）（Ｓｉｇｍ
ａ）、１２５μＭもしくは２５０μＭのメフェナム酸
（ＭＦＡ）または１２．５μＭ、２５μＭもしくは５０
μＭのタルニフルマートの存在下で、または培地単独で
培養した。ＮＦＡ、ＭＦＡまたはタルニフルマートで処
理した細胞のＰＡＳ染色は、未処理の細胞と比較して有
意に少ない陽性染色粘液糖結合体を示した（図１３Ｃお
よび図１３Ｄならびに図１４の挿入図）。インヒビター
で処理したコントロール細胞のＰＡＳ染色は、未処理の
細胞との相違を実質的に全く示さなかった（図１３Ａお
よび図１３Ｃ）。
するＮＣＩ−Ｈ２９２細胞における粘液過剰産生および
ＭＵＣ ５Ａ／Ｃ発現の阻害）粘液糖結合体産生の決定
のために、ＮＣＩ−Ｈ２９２／ｃｔｌおよびＮＣＩ−Ｈ
２９２／ｈＩＣＡＣＣ−１（ＡＡＦ １５）細胞を、２
４ウェルプレート中で３日間にわたって培養した。次い
で、細胞をホルマリンで固定し、そして粘液糖結合体を
ＡＢ／ＰＡＳ染色（Ｓｉｇｍａ）によって可視化した。
ＮＣＩ−Ｈ２９２コントロール細胞は、いくつかの散在
した顆粒を伴って基本的ＰＡＳ染色を提示した（図１３
Ａ）が、ＩＣＡＣＣ−１の過剰発現は、ＰＡＳ陽性粘液
糖結合体の数および強度を劇的に増加させた（図１３
Ｂ）。塩素イオンチャネル遮断研究のために、細胞を、
１００μＭ濃度のニフルム酸（ＮＦＡ）（Ｓｉｇｍ
ａ）、１２５μＭもしくは２５０μＭのメフェナム酸
（ＭＦＡ）または１２．５μＭ、２５μＭもしくは５０
μＭのタルニフルマートの存在下で、または培地単独で
培養した。ＮＦＡ、ＭＦＡまたはタルニフルマートで処
理した細胞のＰＡＳ染色は、未処理の細胞と比較して有
意に少ない陽性染色粘液糖結合体を示した（図１３Ｃお
よび図１３Ｄならびに図１４の挿入図）。インヒビター
で処理したコントロール細胞のＰＡＳ染色は、未処理の
細胞との相違を実質的に全く示さなかった（図１３Ａお
よび図１３Ｃ）。
【０１２８】タルニフルマート（図１４）、ニメスリド
（図１７）およびＭＳＩ−２０７９（図１８、ＭＳＩ−
２０７９の構造を図１９に示す）についてのＩＣ50値
を、ｈＣＬＣＡ１を発現するＨ２９２細胞におけるＭＵ
Ｃ５Ａ／Ｃ分泌の阻害に基づいて決定した。コンフルエ
ントな細胞を、このインヒビターで、ＯＰＴＩ ＭＥＭ
中で０μＭ〜２５０μＭの濃度で処理した。分泌された
ＭＵＣ５Ａ／Ｃは、実施例５に記載される通りのＥＬＬ
Ａアッセイによってこのインヒビターの添加の４８時間
後に検出された。ＩＣ50値を、データ分析ソフトウェア
ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍを用いて決定した。図１４
の挿入図は、ＰＡＳ染色によって検出された、タルニフ
ルマート処理に応答した細胞内ムチンレベルを示す。
（図１７）およびＭＳＩ−２０７９（図１８、ＭＳＩ−
２０７９の構造を図１９に示す）についてのＩＣ50値
を、ｈＣＬＣＡ１を発現するＨ２９２細胞におけるＭＵ
Ｃ５Ａ／Ｃ分泌の阻害に基づいて決定した。コンフルエ
ントな細胞を、このインヒビターで、ＯＰＴＩ ＭＥＭ
中で０μＭ〜２５０μＭの濃度で処理した。分泌された
ＭＵＣ５Ａ／Ｃは、実施例５に記載される通りのＥＬＬ
Ａアッセイによってこのインヒビターの添加の４８時間
後に検出された。ＩＣ50値を、データ分析ソフトウェア
ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍを用いて決定した。図１４
の挿入図は、ＰＡＳ染色によって検出された、タルニフ
ルマート処理に応答した細胞内ムチンレベルを示す。
【０１２９】（実施例８：ＣＦアッセイにおけるタルニ
フルマートおよびアナログの効果）ＣＦマウス（ＣＦノ
ックアウトマウスおよびＣＦ ΔＦ５０８マウスの両
方）は、機能的なＣＦＴＲタンパク質を発現しない。こ
れらのＣＦマウスを、離乳させ、そして浸透圧剤を投与
して生存させた。離乳の２週間以内に、浸透圧剤処置を
中断し、そしてこのマウスに、タルニフルマートを含む
餌またはコントロールの餌のいずれかを摂らせた。コン
トロールの餌を消費するＣＦマウスは、浸透圧剤の７日
以内に１０〜１５％体重が減少し、そして死亡した（Ｃ
Ｆノックアウト）かまたは動物の瀕死の状態に起因して
安楽死させた（ＣＦ ΔＦ５０８）。対照的に、タルニ
フルマート（経口で１００ｍｇ／ｋｇのおよその用量）
を消費したＣＦマウスは、８〜１２％体重が増加し、そ
して少なくとも２６日間生存し、この時点で、これらの
マウスを屠殺して組織病理を評価した（図２０を参照の
こと）。
フルマートおよびアナログの効果）ＣＦマウス（ＣＦノ
ックアウトマウスおよびＣＦ ΔＦ５０８マウスの両
方）は、機能的なＣＦＴＲタンパク質を発現しない。こ
れらのＣＦマウスを、離乳させ、そして浸透圧剤を投与
して生存させた。離乳の２週間以内に、浸透圧剤処置を
中断し、そしてこのマウスに、タルニフルマートを含む
餌またはコントロールの餌のいずれかを摂らせた。コン
トロールの餌を消費するＣＦマウスは、浸透圧剤の７日
以内に１０〜１５％体重が減少し、そして死亡した（Ｃ
Ｆノックアウト）かまたは動物の瀕死の状態に起因して
安楽死させた（ＣＦ ΔＦ５０８）。対照的に、タルニ
フルマート（経口で１００ｍｇ／ｋｇのおよその用量）
を消費したＣＦマウスは、８〜１２％体重が増加し、そ
して少なくとも２６日間生存し、この時点で、これらの
マウスを屠殺して組織病理を評価した（図２０を参照の
こと）。
【０１３０】ムチン産生に対するタルニフルマート誘導
体の効果をまた、上記の方法において記載されるように
ＥＬＬＡおよびＩＣ50（表２）における変化についてア
ッセイした。
体の効果をまた、上記の方法において記載されるように
ＥＬＬＡおよびＩＣ50（表２）における変化についてア
ッセイした。
【０１３１】
【表２】
【０１３２】タルニフルマートの所望のアナログ(図２
１を参照のこと）を、以下に記載の反応スキームを介し
て合成した。ジメチルメチルホスホネートのアニオン
を、テトラヒドロフラン中で−７８℃にてこのホスホネ
ートへブチルリチウムを添加することによって作製し
た。ニフルム酸メチルエステル（１［表２における対応
する化合物番号を参照のこと］）を、ホスホネートカル
ボアニオンのこの溶液へと添加して、β−ケトホスホネ
ート（２）を生成した。次の反応工程では、（２）のホ
スホネートカルボアニオンを、テトラヒドロフラン中で
の（２）の溶液への、塩基であるナトリウム第三ブトキ
シド（ｓｏｄｉｕｍ ｔｅｒｔｂｕｔｏｘｉｄｅ）の添
加によって生成する。安息香酸２−カルボキシアルデヒ
ド（２−ｃａｒｂｏｘａｌｄｅｈｙｄｅ）のベンジルエ
ステルを、ホスホネートカルボアニオンを含む反応容器
に添加して、α，β不飽和ケトン（３）を生成した。ギ
酸および炭素担持Ｐｄ触媒を用いた（３）の交換水素化
は、２つの生成物を生じた。主要な生成物は所望のラク
トン（４）であり、そしてより少ない量は還元生成物
（５）である。
１を参照のこと）を、以下に記載の反応スキームを介し
て合成した。ジメチルメチルホスホネートのアニオン
を、テトラヒドロフラン中で−７８℃にてこのホスホネ
ートへブチルリチウムを添加することによって作製し
た。ニフルム酸メチルエステル（１［表２における対応
する化合物番号を参照のこと］）を、ホスホネートカル
ボアニオンのこの溶液へと添加して、β−ケトホスホネ
ート（２）を生成した。次の反応工程では、（２）のホ
スホネートカルボアニオンを、テトラヒドロフラン中で
の（２）の溶液への、塩基であるナトリウム第三ブトキ
シド（ｓｏｄｉｕｍ ｔｅｒｔｂｕｔｏｘｉｄｅ）の添
加によって生成する。安息香酸２−カルボキシアルデヒ
ド（２−ｃａｒｂｏｘａｌｄｅｈｙｄｅ）のベンジルエ
ステルを、ホスホネートカルボアニオンを含む反応容器
に添加して、α，β不飽和ケトン（３）を生成した。ギ
酸および炭素担持Ｐｄ触媒を用いた（３）の交換水素化
は、２つの生成物を生じた。主要な生成物は所望のラク
トン（４）であり、そしてより少ない量は還元生成物
（５）である。
【０１３３】（実施例９：ＣＯＰＤアッセイにおけるタ
ルニフルマートの効果）ＭＵＣ２転写を、Ｌｉら（１９
９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳ
Ａ、第９５巻、５７１８−５７２３頁に記載される通り
にモニタリングした。手短に述べると、上皮細胞株を、
ルシフェラーゼレポーター遺伝子の上流にクローニング
された、ＭＵＣ２遺伝子由来のプロモーター領域を含む
レポーター構築物でトランスフェクトした。トランスフ
ェクトされた細胞を、無血清培地（ＳＦＭ）単独で、ま
たは示すように、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ細菌由来のリポテイ
コ酸（ＬＴＡ）、アデノシン（ａｄｅｎ）もしくはタル
ニフルマート（ＭＳＩ）を含む無血清培地で処理した。
次いで細胞を溶解させ、そして溶解産物中のルシフェラ
ーゼ酵素活性を測定した（ＲＬＵ）。タルニフルマート
は、ＭＵＣ２のリポテイコ酸誘導を調節した（図２２を
参照のこと）。これはまた、ＣＦについて適切なモデル
である。
ルニフルマートの効果）ＭＵＣ２転写を、Ｌｉら（１９
９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳ
Ａ、第９５巻、５７１８−５７２３頁に記載される通り
にモニタリングした。手短に述べると、上皮細胞株を、
ルシフェラーゼレポーター遺伝子の上流にクローニング
された、ＭＵＣ２遺伝子由来のプロモーター領域を含む
レポーター構築物でトランスフェクトした。トランスフ
ェクトされた細胞を、無血清培地（ＳＦＭ）単独で、ま
たは示すように、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ細菌由来のリポテイ
コ酸（ＬＴＡ）、アデノシン（ａｄｅｎ）もしくはタル
ニフルマート（ＭＳＩ）を含む無血清培地で処理した。
次いで細胞を溶解させ、そして溶解産物中のルシフェラ
ーゼ酵素活性を測定した（ＲＬＵ）。タルニフルマート
は、ＭＵＣ２のリポテイコ酸誘導を調節した（図２２を
参照のこと）。これはまた、ＣＦについて適切なモデル
である。
【０１３４】（実施例１０．塩素イオンチェネル活性に
対するタルニフルマートの効果）図２３は、塩素イオン
チャネルを発現するプラスミドでトランスフェクトされ
た細胞についてのパッチクランプ実験の結果を示す。ヒ
ト塩素イオンチャネルｈＩＣＡＣＣ−１を発現するプラ
スミドでトランスフェクトされたＮＣＩ−Ｈ２９２細胞
をパッチクランプし、そして塩素イオン電流（Ｉ）を一
定範囲の電圧（Ｖ）について測定した。ベースライン
（四角）と比較してかなりの塩素イオン電流が、２μＭ
イオノマイシンおよび２ｍＭカルシウム（丸）の添加に
よって誘起された。このことは、ｈＩＣＡＣＣ−１の活
性化を示す。５マイクロモルのタルニフルマート（三
角）の添加は、陽電圧において塩素イオン電流の減少を
生じた。このことは、チャネル活性の阻害を示す。
対するタルニフルマートの効果）図２３は、塩素イオン
チャネルを発現するプラスミドでトランスフェクトされ
た細胞についてのパッチクランプ実験の結果を示す。ヒ
ト塩素イオンチャネルｈＩＣＡＣＣ−１を発現するプラ
スミドでトランスフェクトされたＮＣＩ−Ｈ２９２細胞
をパッチクランプし、そして塩素イオン電流（Ｉ）を一
定範囲の電圧（Ｖ）について測定した。ベースライン
（四角）と比較してかなりの塩素イオン電流が、２μＭ
イオノマイシンおよび２ｍＭカルシウム（丸）の添加に
よって誘起された。このことは、ｈＩＣＡＣＣ−１の活
性化を示す。５マイクロモルのタルニフルマート（三
角）の添加は、陽電圧において塩素イオン電流の減少を
生じた。このことは、チャネル活性の阻害を示す。
【０１３５】タルニフルマートで観察された結果とは対
照的に、ジクロフェナクは、塩素イオンチャンネル活性
を阻害しなかった。マウス塩素イオンチャネルｍＩＣＡ
ＣＣ−１を発現するプラスミドでトランスフェクトした
ＨＥＫ２９３細胞をパッチクランプし、そして塩素イオ
ン電流を、一定範囲の電圧（Ｖ、左の欄）について測定
した。そして結果を以下の表３に示す。各列は、イオノ
マイシンおよびカルシウムの非存在下（−）または存在
下（＋）、および示した濃度（μＭ）のジクロフェナク
の存在下における特定の陽電圧で誘起された電流を列挙
する。かなりの電流が、２μＭイオノマイシンおよび２
ｍＭカルシウムの添加によって誘起された（最初の２つ
の欄を比較する）。このことは、イオノマイシン／カル
シウム処理によるｍＩＣＡＣＣ−１の活性化を示す。例
えば、１００ｍＶの陽電圧では、塩素イオン電流は、３
９ｎＡ／ｐＦから１０５ｎＡ／ｐＦへと増加した。ジク
ロフェナクによるチャネル活性の阻害は、５μＭから５
０μＭの範囲のジクロフェナクの濃度では観察されなか
った。１００ｍＶの陽電圧では、ジクロフェナクの非存
在下では１０５ｎＡ／ｐＦの電流が観察されたのと比較
して、５μＭジクロフェナクは１１５ｎＡ／ｐＦの電流
を、２０μＭジクロフェナクは１０９ｎＡ／ｐＦの電流
を、そして５０μＭジクロフェナクは１０６ｎＡ／ｐＦ
の電流をもたらした。
照的に、ジクロフェナクは、塩素イオンチャンネル活性
を阻害しなかった。マウス塩素イオンチャネルｍＩＣＡ
ＣＣ−１を発現するプラスミドでトランスフェクトした
ＨＥＫ２９３細胞をパッチクランプし、そして塩素イオ
ン電流を、一定範囲の電圧（Ｖ、左の欄）について測定
した。そして結果を以下の表３に示す。各列は、イオノ
マイシンおよびカルシウムの非存在下（−）または存在
下（＋）、および示した濃度（μＭ）のジクロフェナク
の存在下における特定の陽電圧で誘起された電流を列挙
する。かなりの電流が、２μＭイオノマイシンおよび２
ｍＭカルシウムの添加によって誘起された（最初の２つ
の欄を比較する）。このことは、イオノマイシン／カル
シウム処理によるｍＩＣＡＣＣ−１の活性化を示す。例
えば、１００ｍＶの陽電圧では、塩素イオン電流は、３
９ｎＡ／ｐＦから１０５ｎＡ／ｐＦへと増加した。ジク
ロフェナクによるチャネル活性の阻害は、５μＭから５
０μＭの範囲のジクロフェナクの濃度では観察されなか
った。１００ｍＶの陽電圧では、ジクロフェナクの非存
在下では１０５ｎＡ／ｐＦの電流が観察されたのと比較
して、５μＭジクロフェナクは１１５ｎＡ／ｐＦの電流
を、２０μＭジクロフェナクは１０９ｎＡ／ｐＦの電流
を、そして５０μＭジクロフェナクは１０６ｎＡ／ｐＦ
の電流をもたらした。
【０１３６】
【表３】
【０１３７】本発明を種々の特定の材料、手順および例
を参照して本明細書中に記載および例示してきたが、本
発明は、その目的のために選択された材料および手順の
特定の組み合わせに制限されないことが理解される。こ
のような詳細の多数のバリエーションは、当業者に認識
されるように示され得る。本出願を通して引用される全
ての特許、特許出願および他の参考文献は、その全体が
本明細書中に参考として援用される。
を参照して本明細書中に記載および例示してきたが、本
発明は、その目的のために選択された材料および手順の
特定の組み合わせに制限されないことが理解される。こ
のような詳細の多数のバリエーションは、当業者に認識
されるように示され得る。本出願を通して引用される全
ての特許、特許出願および他の参考文献は、その全体が
本明細書中に参考として援用される。
【０１３８】（参考文献）以下の参考文献は、本出願に
おいて言及された全ての参考文献、特許または特許出願
と同様に、その全体が本明細書中に参考として援用され
る。
おいて言及された全ての参考文献、特許または特許出願
と同様に、その全体が本明細書中に参考として援用され
る。
【０１３９】
【表４】
【０１４０】
【０１４１】
【０１４２】
【０１４３】
【０１４４】
【発明の効果】本発明により、ムチン合成を調節する方
法、および疾患（例えば、喘息および慢性気管支炎、炎
症性肺疾患、嚢胞性線維症ならびに急性または慢性の呼
吸器感染疾患を含む、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））
に関連したムチン過剰産生を制御する際の化合物の治療
適用が提供される。
法、および疾患（例えば、喘息および慢性気管支炎、炎
症性肺疾患、嚢胞性線維症ならびに急性または慢性の呼
吸器感染疾患を含む、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））
に関連したムチン過剰産生を制御する際の化合物の治療
適用が提供される。
【図１】図１は、ムチン産生に対するＮＦＡの効果を示
す顕微鏡写真である。ＮＦＡインヒビターは、インビト
ロでのムチン過剰産生をブロックする。
す顕微鏡写真である。ＮＦＡインヒビターは、インビト
ロでのムチン過剰産生をブロックする。
【図２】図２は、ＮＦＡおよび種々の化合物の、活性化
されたＣａｃｏ２細胞によるムチンの過剰産生を抑制す
る能力を示す顕微鏡写真である。この図は、フェナメー
トによる、活性化されたＣａｃｏ２細胞におけるムチン
産生の阻害を示す。
されたＣａｃｏ２細胞によるムチンの過剰産生を抑制す
る能力を示す顕微鏡写真である。この図は、フェナメー
トによる、活性化されたＣａｃｏ２細胞におけるムチン
産生の阻害を示す。
【図３】図３は、活性化されたＣａｃｏ２細胞株の、Ｎ
ＦＡでの処理が、そのＣａｃｏ２細胞株の生存率に影響
を有さないことを示すグラフである。この図は、ＮＦＡ
が上皮細胞増殖に影響を有さないことを示す。
ＦＡでの処理が、そのＣａｃｏ２細胞株の生存率に影響
を有さないことを示すグラフである。この図は、ＮＦＡ
が上皮細胞増殖に影響を有さないことを示す。
【図４】図４は、ケモカインであるエオタキシンの上皮
細胞による産生の阻害を示すグラフである。この図は、
ＮＦＡが、ケモカイン産生を含む上皮活性化をブロック
することを示す。
細胞による産生の阻害を示すグラフである。この図は、
ＮＦＡが、ケモカイン産生を含む上皮活性化をブロック
することを示す。
【図５】図５は、ＮＦＡの気管内投与が、リン酸緩衝化
生理食塩水（ＰＢＳ）と比較して、抗原誘発性気道反応
性亢進（Ａｆ＋ＮＦＡ）を抑制することを示すグラフで
ある。この図は、ＮＦＡが、気道反応性亢進を含む上皮
抗原応答をブロックすることを示す。
生理食塩水（ＰＢＳ）と比較して、抗原誘発性気道反応
性亢進（Ａｆ＋ＮＦＡ）を抑制することを示すグラフで
ある。この図は、ＮＦＡが、気道反応性亢進を含む上皮
抗原応答をブロックすることを示す。
【図６】図６は、ＮＦＡの気管内投与の結果を示すグラ
フである。この図は、ＮＦＡが抗原誘発性肺好酸球増加
をインビボで減少させることを示す。これは、ＮＦＡの
存在下でＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（Ａｆ＋ＮＦＡ）を用
いた活性化後の好酸球増加を、ＮＦＡが存在しないリン
酸緩衝化生理食塩水（Ａｆ＋ＰＢＳ）での活性化後の好
酸球増加と比較することにより見られる。
フである。この図は、ＮＦＡが抗原誘発性肺好酸球増加
をインビボで減少させることを示す。これは、ＮＦＡの
存在下でＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（Ａｆ＋ＮＦＡ）を用
いた活性化後の好酸球増加を、ＮＦＡが存在しないリン
酸緩衝化生理食塩水（Ａｆ＋ＰＢＳ）での活性化後の好
酸球増加と比較することにより見られる。
【図７】図７は、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）と
比較した、粘液（ムチン糖結合体）における抗原誘発性
増加に対するＮＦＡの気管内投与（Ａｆ＋ＮＦＡ）の結
果を示す顕微鏡写真である。この図は、曝露したマウス
の肺における抗原に起因して、ＮＦＡがムチン発現の増
加をブロックすることを示す。
比較した、粘液（ムチン糖結合体）における抗原誘発性
増加に対するＮＦＡの気管内投与（Ａｆ＋ＮＦＡ）の結
果を示す顕微鏡写真である。この図は、曝露したマウス
の肺における抗原に起因して、ＮＦＡがムチン発現の増
加をブロックすることを示す。
【図８】図８は、コントロールのＦＶＢマウスとは対照
的に、ＩＬ９トランスジェニックマウスが、気道におい
てムチンを構成的に過剰産生することを示す顕微鏡写真
である。
的に、ＩＬ９トランスジェニックマウスが、気道におい
てムチンを構成的に過剰産生することを示す顕微鏡写真
である。
【図９】図９は、ＩＬ９トランスジェニックマウスの肺
におけるムチンの構成的過剰産生が、バックグラウンド
の系統（ＦＶＢ／ＮＪ）のマウスと比較して、ＭＵＣ２
およびＭＵＣ５ＡＣの定常状態の転写物の特異的アップ
レギュレーションに関連することを示す顕微鏡写真であ
る。この図は、特異的ムチン遺伝子が、ＩＬ−９トラン
スジェニックマウスの肺においてアップレギュレートさ
れることを示す。
におけるムチンの構成的過剰産生が、バックグラウンド
の系統（ＦＶＢ／ＮＪ）のマウスと比較して、ＭＵＣ２
およびＭＵＣ５ＡＣの定常状態の転写物の特異的アップ
レギュレーションに関連することを示す顕微鏡写真であ
る。この図は、特異的ムチン遺伝子が、ＩＬ−９トラン
スジェニックマウスの肺においてアップレギュレートさ
れることを示す。
【図１０】図１０は、抗原に曝露されたマウスの肺にお
けるムチン過剰産生に対する抗ＩＬ−９抗体の効果を示
す顕微鏡写真である。この図は、中和ＩＬ−９抗体が、
抗原に曝露したマウスにおけるムチン過剰産生を妨げる
ことを示す。
けるムチン過剰産生に対する抗ＩＬ−９抗体の効果を示
す顕微鏡写真である。この図は、中和ＩＬ−９抗体が、
抗原に曝露したマウスにおけるムチン過剰産生を妨げる
ことを示す。
【図１１】図１１は、ムチン産生をブロックするフェニ
ルアントラニル酸アナログの一般式を示す化学式であ
り、ここで、Ｘ1〜Ｘ9＝各々他とは独立して、Ｃ、Ｓ、
ＯまたはＮであり得、Ｒ1〜Ｒ11＝各々他とは独立し
て、水素、アルキル、アリール、置換アルキル、置換ア
リール、ハロゲン、ハロゲン置換アルキル、ハロゲン置
換アリール、環を形成するアルキル、環を形成するアリ
ール、環を形成する置換アルキル、環を形成する置換ア
リール、ヒドロキシル、アルキルエーテル、アリールエ
ーテル、アミン、アルキルアミン、アリールアミン、ア
ルキルエステル、アリールエステル、アルキルスルホン
アミド、アリールスルホンアミド、チオール、アルキル
チオエーテル、アリールチオエーテル、アルキルスルホ
ン、アリールスルホン、アルキルスルホキシド、アリー
ルスルホキシド、アルキルスルホンアミドまたはアリー
ルスルホンアミドであり得、Ｙ＝カルボキシレート、ア
ルキルカルボキシレート、スルフェート、スルホネー
ト、ホスフェート、ホスホネート、カルボン酸のアミ
ド、カルボン酸のエステル、リン酸のアミド、リン酸の
エステル、スルホン酸のアミド、スルホン酸のエステ
ル、ホスホン酸のアミド、ホスホン酸のエステル、スル
ホンアミド、ホスホンアミド（ｐｈｏｓｐｈｏｎａｍｉ
ｄｅ）、テトラゾール、ヒドロキサム酸または他の酸の
同配体、Ｚ＝Ｏ、ＮＲ10、Ｓ、ＣＲ10Ｒ11、スルホキシ
ドまたはスルホン、ｍ＝０または１、ｎ＝１または２で
ある。
ルアントラニル酸アナログの一般式を示す化学式であ
り、ここで、Ｘ1〜Ｘ9＝各々他とは独立して、Ｃ、Ｓ、
ＯまたはＮであり得、Ｒ1〜Ｒ11＝各々他とは独立し
て、水素、アルキル、アリール、置換アルキル、置換ア
リール、ハロゲン、ハロゲン置換アルキル、ハロゲン置
換アリール、環を形成するアルキル、環を形成するアリ
ール、環を形成する置換アルキル、環を形成する置換ア
リール、ヒドロキシル、アルキルエーテル、アリールエ
ーテル、アミン、アルキルアミン、アリールアミン、ア
ルキルエステル、アリールエステル、アルキルスルホン
アミド、アリールスルホンアミド、チオール、アルキル
チオエーテル、アリールチオエーテル、アルキルスルホ
ン、アリールスルホン、アルキルスルホキシド、アリー
ルスルホキシド、アルキルスルホンアミドまたはアリー
ルスルホンアミドであり得、Ｙ＝カルボキシレート、ア
ルキルカルボキシレート、スルフェート、スルホネー
ト、ホスフェート、ホスホネート、カルボン酸のアミ
ド、カルボン酸のエステル、リン酸のアミド、リン酸の
エステル、スルホン酸のアミド、スルホン酸のエステ
ル、ホスホン酸のアミド、ホスホン酸のエステル、スル
ホンアミド、ホスホンアミド（ｐｈｏｓｐｈｏｎａｍｉ
ｄｅ）、テトラゾール、ヒドロキサム酸または他の酸の
同配体、Ｚ＝Ｏ、ＮＲ10、Ｓ、ＣＲ10Ｒ11、スルホキシ
ドまたはスルホン、ｍ＝０または１、ｎ＝１または２で
ある。
【図１２】図１２は、ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞においてｈ
ＩＣＡＣＣ−１によって誘導されたムチン発現を示すノ
ーザンブロットである。
ＩＣＡＣＣ−１によって誘導されたムチン発現を示すノ
ーザンブロットである。
【図１３】図１３は、ｈＩＣＡＣＣ−１を過剰発現する
ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞における粘液過剰産生を示す顕微
鏡写真である。
ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞における粘液過剰産生を示す顕微
鏡写真である。
【図１４】図１４は、タルニフルマートによるムチン産
生の阻害を示すグラフである。
生の阻害を示すグラフである。
【図１５Ａ】図１５Ａは、マウスにおけるタルニフルマ
ートの経口投与によるムチン過剰産生の阻害を示す顕微
鏡写真である。図１５Ａは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｆｕｍｉｇａｔｕｓに対して感作し、そして通常のマウ
ス用の餌を採らせたマウス由来の肺（Ｈ＆Ｅで染色し
た）の切片を示す。
ートの経口投与によるムチン過剰産生の阻害を示す顕微
鏡写真である。図１５Ａは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｆｕｍｉｇａｔｕｓに対して感作し、そして通常のマウ
ス用の餌を採らせたマウス由来の肺（Ｈ＆Ｅで染色し
た）の切片を示す。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、マウスにおけるタルニフルマ
ートの経口投与によるムチン過剰産生の阻害を示す顕微
鏡写真である。図１５Ｂは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｆｕｍｉｇａｔｕｓに対して感作し、そしてタルニフル
マートを含有するマウス用の餌を採らせたマウス由来の
肺（Ｈ＆Ｅで染色した）の切片を示す。
ートの経口投与によるムチン過剰産生の阻害を示す顕微
鏡写真である。図１５Ｂは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｆｕｍｉｇａｔｕｓに対して感作し、そしてタルニフル
マートを含有するマウス用の餌を採らせたマウス由来の
肺（Ｈ＆Ｅで染色した）の切片を示す。
【図１６】図１６は、マウスにおけるタルニフルマート
の経口投与による肺好酸球増加の阻害を示すグラフであ
る。この図は、ＡＨＲ３７３：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｆｕｍｉｇａｔｕｓで感作したＢ６Ｄ２Ｆ１／Ｊ雄性マ
ウスのＢＡＬに対するタルニフルマートマウス用餌の効
果を示す。
の経口投与による肺好酸球増加の阻害を示すグラフであ
る。この図は、ＡＨＲ３７３：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｆｕｍｉｇａｔｕｓで感作したＢ６Ｄ２Ｆ１／Ｊ雄性マ
ウスのＢＡＬに対するタルニフルマートマウス用餌の効
果を示す。
【図１７】図１７は、ニメスリドによるＭＵＣ５Ａ／Ｃ
分泌の阻害を示すグラフである。
分泌の阻害を示すグラフである。
【図１８】図１８は、ＭＳＩ−２０７９によるＭＵＣ５
Ａ／Ｃ分泌の阻害を示すグラフである。
Ａ／Ｃ分泌の阻害を示すグラフである。
【図１９】図１９は、ＭＳＩ−２０７９の構造を示す化
学式である。
学式である。
【図２０】図２０は、ＣＦマウスに対するタルニフルマ
ートの効果を示すグラフである。
ートの効果を示すグラフである。
【図２１】図２１は、ＭＳＩ２２１４〜ＭＳＩ２２１７
の構造を示す化学式である。
の構造を示す化学式である。
【図２２】図２２は、ＭＵＣ２のリポテイコ酸（ｌｉｐ
ｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ）依存性誘導に対するタ
ルニフルマートの効果を示すグラフである。
ｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ）依存性誘導に対するタ
ルニフルマートの効果を示すグラフである。
【図２３】図２３は、ｈＩＣＡＣＣ−Ｉを発現する細胞
における電圧の関数としての塩素イオン電流のグラフで
ある。
における電圧の関数としての塩素イオン電流のグラフで
ある。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/09 Ａ６１Ｋ 31/09 31/196 31/196 31/36 31/36 31/44 31/44 31/443 31/443 31/47 31/47 31/549 31/549 47/40 47/40 Ａ６１Ｍ 11/00 Ａ６１Ｍ 11/00 Ｄ 15/00 15/00 Ｚ Ａ６１Ｐ 11/00 Ａ６１Ｐ 11/00 11/02 11/02 11/06 11/06 11/10 11/10 43/00 １２３ 43/00 １２３ (31)優先権主張番号 ０９／７７４，２４３ (32)優先日 平成13年１月31日(2001．1．31) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／２４２，１３４ (32)優先日 平成12年10月23日(2000．10．23) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／２５２，０５２ (32)優先日 平成12年11月20日(2000．11．20) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (72)発明者 ユーホン チョウ アメリカ合衆国 ペンシルベニア 19462, ミィーティング ハウス， キャンパス ドライブ 5110 (72)発明者 ロイ シー． レビット アメリカ合衆国 ペンシルベニア 19462, ミィーティング ハウス， キャンパス ドライブ 5110 (72)発明者 ニコラス シー． ニコレイディス アメリカ合衆国 ペンシルベニア 19462, ミィーティング ハウス， キャンパス ドライブ 5110 (72)発明者 スティーブ ジョーンズ アメリカ合衆国 ペンシルベニア 19462, ミィーティング ハウス， キャンパス ドライブ 5110 (72)発明者 マイク マクレーン アメリカ合衆国 ペンシルベニア 19462, ミィーティング ハウス， キャンパス ドライブ 5110 Ｆターム(参考） 4C076 AA11 AA24 AA29 AA93 BB01 BB25 BB27 CC04 CC15 CC42 EE37N EE39Q FF04 FF34 FF36 4C084 AA17 AA27 MA13 MA16 MA43 MA52 MA56 MA59 NA03 NA05 NA15 ZA34 ZA59 ZA63 ZC54 4C086 AA01 AA02 BC19 BC28 BC87 GA02 GA08 MA05 MA13 MA17 MA43 MA52 MA56 MA59 NA03 NA05 ZA59 4C206 AA01 AA02 CA34 FA33 KA01 MA05 MA33 MA37 MA63 MA72 MA76 MA79 ZA59
Claims (47)
- 【請求項１】 ムチンの産生によって特徴付けられる疾
患を有する被験体の処置方法であって、該被験体におけ
るムチンの合成またはレベルを減少させる少なくとも１
つの化合物を含む組成物の有効量を該被験体に投与する
工程を包含する、方法。 - 【請求項２】 前記ムチン合成が、塩素イオンチャネル
依存性である、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 前記化合物が、ＩＣＡＣＣ塩素イオンチ
ャネルを発現する細胞におけるムチンの合成を減少させ
る、請求項２に記載の方法。 - 【請求項４】 前記化合物が、アントラニル酸のアナロ
グおよび誘導体、２−アミノ−ニコチン酸のアナログお
よび誘導体、２−アミノ−フェニル酢酸のアナログおよ
び誘導体、ベンドロフルメチアジド、アミノキノリンの
アナログおよび誘導体、それらの塩およびそれらのプロ
ドラッグからなる群より選択される、請求項１に記載の
方法。 - 【請求項５】 前記化合物が、タルニフルマート、フル
フェナム酸、ニフルム酸、メフェナム酸、ベンドロフル
メチアジド、Ｎ−（３−フルオロベンジル）−３−アミ
ノキノリン、それらの塩、それらの誘導体およびそれら
のプロドラッグからなる群より選択される、請求項４に
記載の方法。 - 【請求項６】 前記組成物が、タルニフルマート、タル
ニフルマート誘導体、それらの塩またはそれらのプロド
ラッグを含む、請求項５に記載の方法。 - 【請求項７】 前記組成物が、吸入によって投与され
る、請求項４に記載の方法。 - 【請求項８】 前記組成物が、液体の形態である、請求
項７に記載の方法。 - 【請求項９】 前記組成物が、粉末の形態である、請求
項７に記載の方法。 - 【請求項１０】 前記液体が、エアゾール化されてい
る、請求項８に記載の方法。 - 【請求項１１】 前記組成物が、少なくとも１つの去痰
薬、粘液溶解剤、抗生物質または鬱血除去剤をさらに含
む、請求項１に記載の方法。 - 【請求項１２】 前記去痰薬が、グアイフェネシンであ
る、請求項１１に記載の方法。 - 【請求項１３】 前記組成物が、少なくとも１つの安定
剤、吸収増強剤または矯味矯臭剤をさらに含む、請求項
１に記載の方法。 - 【請求項１４】 前記安定剤がシクロデキストランであ
る、請求項１３に記載の方法。 - 【請求項１５】 前記吸収増強剤がキトサンである、請
求項１３に記載の方法。 - 【請求項１６】 前記疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯ
ＰＤ）、炎症性肺疾患、嚢胞性線維症および急性または
慢性の感染性疾患からなる群より選択される、請求項１
〜１５のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項１７】 前記組成物が、吸入によって投与され
る、請求項１６に記載の方法。 - 【請求項１８】 前記組成物が、吸入によって肺または
鼻の通路へと投与される、請求項１７に記載の方法。 - 【請求項１９】 前記ＣＯＰＤが、気腫、慢性気管支炎
および喘息からなる群より選択される、請求項１６に記
載の方法。 - 【請求項２０】 肺への吸入送達のために処方された治
療組成物であって、タルニフルマート、フルフェナム
酸、ニフルム酸、メフェナム酸、Ｎ−（３−フルオロベ
ンジル）−３−アミノキノリン、それらの塩、それらの
誘導体およびそれらのプロドラッグからなる群より選択
される少なくとも１つの化合物をムチンの産生またはレ
ベルを減少させるのに有効な量で含む、治療組成物。 - 【請求項２１】 前記組成物が、タルニフルマート、タ
ルニフルマート誘導体、それらの塩またはそれらのプロ
ドラッグを含む、請求項２０に記載の治療組成物。 - 【請求項２２】 前記組成物が、液体の形態である、請
求項２０に記載の治療組成物。 - 【請求項２３】 前記組成物が、粉末の形態である、請
求項２０に記載の治療組成物。 - 【請求項２４】 前記組成物が、少なくとも１つの去痰
薬、粘液溶解剤、抗生物質または鬱血除去剤をさらに含
む、請求項２０に記載の治療組成物。 - 【請求項２５】 前記去痰薬が、グアイフェネシンであ
る、請求項２４に記載の治療組成物。 - 【請求項２６】 前記組成物が、少なくとも１つの安定
剤、吸収増強剤または矯味矯臭剤をさらに含む、請求項
２０に記載の治療組成物。 - 【請求項２７】 前記安定剤が、シクロデキストランで
ある、請求項２６に記載の治療組成物。 - 【請求項２８】 前記吸収増強剤が、キトサンである、
請求項２６に記載の治療組成物。 - 【請求項２９】 請求項２０〜２８のいずれか１項に記
載の治療組成物を含む、吸入デバイス。 - 【請求項３０】 前記化合物が、タルニフルマートであ
る、請求項５に記載の方法。 - 【請求項３１】 前記化合物が、Ｎ−（３−フルオロベ
ンジル）−３−アミノキノリン、その塩、その誘導体お
よびそのプロドラッグからなる群より選択される、請求
項５に記載の方法。 - 【請求項３２】 前記化合物が、経口投与される、請求
項４に記載の方法。 - 【請求項３３】 前記組成物が、経口投与される、請求
項３０に記載の方法。 - 【請求項３４】 ムチンの産生によって特徴付けられる
疾患を有する被験体を処置する方法であって、該被験体
におけるムチンの合成またはレベルを減少させ、そして
シクロオキシゲナーゼ酵素を阻害する少なくとも１つの
化合物を含む組成物の有効量を該被験体に投与する工程
を包含する、方法。 - 【請求項３５】 前記化合物が、シクロオキシゲナーゼ
２を特異的に阻害する、請求項３４に記載の方法。 - 【請求項３６】 前記化合物が、アントラニル酸のアナ
ログおよび誘導体、２−アミノ−ニコチン酸のアナログ
および誘導体、２−アミノ−フェニル酢酸のアナログお
よび誘導体、ベンドロフルメチアジド、アミノキノリン
のアナログおよび誘導体、それらの塩およびそれらのプ
ロドラッグからなる群より選択される、請求項３４に記
載の方法。 - 【請求項３７】 前記化合物が、タルニフルマート、フ
ルフェナム酸、ニフルム酸、メフェナム酸、ベンドロフ
ルメチアジド、Ｎ−（３−フルオロベンジル）−３−ア
ミノキノリン、それらの塩、それらの誘導体およびそれ
らのプロドラッグからなる群より選択される、請求項３
４に記載の方法。 - 【請求項３８】 前記組成物が、タルニフルマート、タ
ルニフルマート誘導体、それらの塩またはそれらのプロ
ドラッグを含む、請求項３４に記載の方法。 - 【請求項３９】 前記組成物が、Ｎ−（３−フルオロベ
ンジル）−３−アミノキノリン、その塩、その誘導体お
よびそのプロドラッグを含む、請求項３４に記載の方
法。 - 【請求項４０】 前記組成物が、肺への吸入送達のため
に処方されている、請求項３４に記載の方法。 - 【請求項４１】 前記組成物が、経口送達のために処方
されている、請求項３４に記載の方法。 - 【請求項４２】 前記組成物が、バイオアベイラビリテ
ィーを増加させるように処方されている、請求項６に記
載の方法。 - 【請求項４３】 前記組成物が、微粉化されている、請
求項４２に記載の方法。 - 【請求項４４】 前記組成物が、バイオアベイラビリテ
ィーを増加させるように処方されている、請求項２１に
記載の組成物。 - 【請求項４５】 前記組成物が、微粉化されている、請
求項４４に記載の組成物。 - 【請求項４６】 ムチンの産生によって特徴付けられる
慢性副鼻腔炎を有する被験体の処置方法であって、該被
験体におけるムチンの合成またはレベルを減少させる少
なくとも１つの化合物を含む組成物の有効量を該被験体
に投与する工程を包含する、方法。 - 【請求項４７】 前記組成物が、タルニフルマートを含
む、請求項４６に記載の方法。
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| US25205200P | 2000-11-20 | 2000-11-20 | |
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| US09/918,711 | 2000-11-20 | ||
| US60/252,052 | 2000-11-20 | ||
| US09/774,243 US6737427B2 (en) | 2000-01-31 | 2001-01-31 | Mucin synthesis inhibitors |
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ID=27559313
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP2001316115A Pending JP2002338494A (ja) | 2000-10-23 | 2001-10-12 | ムチン合成インヒビター |
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|---|---|
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2001
- 2001-10-12 JP JP2001316115A patent/JP2002338494A/ja active Pending
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