JP2002303632A - Thromboplastin reagent and its manufacturing method - Google Patents
Thromboplastin reagent and its manufacturing methodInfo
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明が属する技術分野】本発明は、凝固因子測定に使
用されるトロンボプラスチン試薬であって、測定感受性
の高い新規な試薬の提供およびその製造方法に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a thromboplastin reagent used for measuring a coagulation factor, which provides a novel reagent having high measurement sensitivity and a method for producing the same.
【０００２】[0002]
【従来の技術】患者血漿中における凝固因子の欠損をス
クリーニングする試験としてＱｕｉｃｋのプロトロンビ
ン時間（ＰＴ）が使用されている。ＰＴはまた、経口抗
凝固剤による治療のモニターにも用いられる。このＰＴ
の測定は、トロンボプラスチン試薬の性能によって異な
るが、正常血漿ドナーのＰＴは１０〜１４秒を示し、凝
固因子欠損血漿のＰＴは、凝固因子の欠損の程度に応じ
て延長するように調製されたトロンボプラスチン試薬を
用いるのが好ましい。2. Description of the Related Art Quick prothrombin time (PT) has been used as a test for screening coagulation factor deficiency in patient plasma. PT is also used to monitor treatment with oral anticoagulants. This PT
Is different depending on the performance of the thromboplastin reagent, but the PT of the normal plasma donor shows 10 to 14 seconds, and the PT of the coagulation factor-deficient plasma is adjusted to be prolonged according to the degree of coagulation factor deficiency. Preferably, a reagent is used.
【０００３】活性なトロンボプラスチンは血漿中で凝固
を誘導し、脂質成分とタンパク質成分から構成される。
タンパク質すなわち組織因子は膜に結合し、多くの様々
な組織に見出される。タンパク質と脂質の間の結合は疎
水性相互作用に基づきＣａ2+非依存性である。タンパク
質残基は分子量４３〜５３kDaを有する糖タンパク質か
らなる。組織因子の１分子は凝固ＶＩＩ因子または凝固
ＶＩＩａ因子の１分子に結合することができる。凝固Ｖ
ＩＩ因子／凝固ＶＩＩａ因子の組織因子への結合はＣａ
2+依存性である。脂質、組織因子および凝固ＶＩＩａ因
子からなる複合体は凝固Ｘ因子を切断して凝固Ｘａ因子
を形成し、それによって最終的にプロトロンビンによる
血液凝固を誘発する。トロンボプラスチン試薬の添加後
１０〜１４秒での血漿中における凝固の開始は、凝固系
が無傷であることを指示する。凝固時間の増大は、ある
障害を示す。障害は１種または２種以上の凝固因子の濃
度が低すぎる結果として起こる。[0003] Active thromboplastin induces coagulation in plasma and is composed of lipid and protein components.
Proteins or tissue factors bind to membranes and are found in many different tissues. The binding between protein and lipid is Ca 2+ independent based on hydrophobic interactions. The protein residues consist of glycoproteins having a molecular weight of 43-53 kDa. One molecule of tissue factor can bind to one molecule of coagulation factor VII or coagulation factor VIIa. Coagulation V
Factor II / coagulation factor VIIa binding to tissue factor is Ca
2+ dependency. The complex consisting of lipids, tissue factor and coagulation factor VIIa cleaves coagulation factor X to form coagulation factor Xa, thereby ultimately triggering blood coagulation by prothrombin. Initiation of coagulation in plasma 10-14 seconds after addition of the thromboplastin reagent indicates that the coagulation system is intact. Increased clotting time is indicative of certain disorders. The disorder results from too low a concentration of one or more clotting factors.
【０００４】トロンボプラスチンは種々の動物性原料の
多種類の組織から抽出することができる。これらの原料
の限られる入手性、それらの価格等のために普遍的に利
用される原料が限られているが、最も一般的な原料であ
るウサギの脳から誘導されるトロンボプラスチンは典型
的にはヒト組織から誘導されるトロンボプラスチンと比
べて相対的に低い感度を有する。トロンボプラスチンの
原料、抽出方法、および試薬の組成が試薬感度を決める
際の重要な要素となる。そこで、トロンボプラスチンの
感度を向上させるために硫酸バリウム、非イオン性界面
活性剤を用いて抽出する等の検討が試みられ、報告され
ている（特表平3−503534公報）。[0004] Thromboplastin can be extracted from a variety of tissues from various animal sources. Although the raw materials commonly used are limited due to the limited availability of these raw materials, their price, etc., the most common raw material, thromboplastin derived from rabbit brain, is typically It has relatively low sensitivity compared to thromboplastin derived from human tissue. The source of thromboplastin, the extraction method, and the composition of the reagent are important factors in determining the reagent sensitivity. Therefore, in order to improve the sensitivity of thromboplastin, studies such as extraction using barium sulfate and a nonionic surfactant have been attempted and reported (Japanese Patent Publication No. 3-503534).
【０００５】他の感度向上の方法として、少量のタンパ
ク質を特異的に除去する方法が報告されている。様々な
起源のトロンボプラスチン試薬は、特定の因子の欠損を
指示するそれらの感度において異なることが多い。これ
は、測定すべき因子の少量が試薬中に持ち込まれること
による場合がある。例えば、トロンボプラスチン試薬に
残留する凝固VII因子／凝固VIIa因子を選択的に阻害す
ることによる感度向上の方法についても報告されている
（特開平10-330400公報）。As another method for improving the sensitivity, a method for specifically removing a small amount of a protein has been reported. Thromboplastin reagents of various origins often differ in their sensitivity, which indicates a lack of a particular factor. This may be due to a small amount of the factor to be measured being brought into the reagent. For example, a method for improving sensitivity by selectively inhibiting coagulation factor VII / coagulation factor VIIa remaining in the thromboplastin reagent has also been reported (JP-A-10-330400).
【０００６】より正確な凝固時間測定のために、ＰＴ測
定の標準化が行われている。そのために、トロンボプラ
スチン試薬の標準品を設定し、これを基本として各試薬
の感度を国際感度指数（International Sensitivity In
dex, 以下「ＩＳＩ」と略す。）で表示し、各試薬に記
載される。[0006] In order to measure the coagulation time more accurately, standardization of PT measurement has been performed. For this purpose, a standard thromboplastin reagent was set, and the sensitivity of each reagent was used as the basis for determining the international sensitivity index (International Sensitivity Index).
dex, hereinafter abbreviated as "ISI". ) And described for each reagent.
【０００７】トロンボプラスチン試薬を用いてＰＴを測
定した場合に、正常人血漿のＰＴと凝固因子欠乏血漿の
ＰＴを測定したときのＰＴの差が大きくなるほどＩＳＩ
値は低くなり、差が少ないほどＩＳＩ値は高くなる。従
って、測定感度の良いトロンボプラスチン試薬のＩＳＩ
値は低いものであり、このような試薬が望まれている。
トロンボプラスチンの国際標準品のＩＳＩ値は、１．０
である。When the PT is measured using a thromboplastin reagent, ISI increases as the difference between the PT of normal human plasma and the PT of coagulation factor-deficient plasma increases.
The lower the value, the lower the difference, the higher the ISI value. Therefore, the ISI of thromboplastin reagent with good measurement sensitivity
The values are low and such reagents are desired.
The ISI value of the international standard product of thromboplastin is 1.0
It is.
【０００８】しかし、トロンボプラスチン試薬は、その
原料組成物により性状が異なることは上述したとおりで
あるが、例えばヒト、ウサギまたはウシ由来の原料によ
り、その性状は異なり、１．０より大きいＩＳＩ値を示
すトロンボプラスチン含有組成物となる場合が多い。[0008] However, as described above, the thromboplastin reagent has different properties depending on the raw material composition. For example, the properties vary depending on the raw material derived from human, rabbit or cow, and the ISI value is larger than 1.0. The thromboplastin-containing composition shown is often the case.
【０００９】さらに、トロンボプラスチン試薬の製造工
程における凍結乾燥処理工程が凝固時間測定に影響を及
ぼす場合がある。すなわち、該凍結乾燥処理したトロン
ボプラスチン試薬を用いてＰＴを測定した場合に、正常
血漿の場合でも１４秒を超える値を示す場合があり、こ
のような現象を凍乾落ちという。正常血漿で１４秒以上
の値を示すトロンボプラスチン試薬の使用は、測定の効
率からも望ましくなく、凍乾落ちを排除できるような製
法の開発も望まれている。Further, the freeze-drying process in the production process of the thromboplastin reagent may affect the measurement of the coagulation time. That is, when PT is measured using the freeze-dried thromboplastin reagent, the value may exceed 14 seconds even in the case of normal plasma, and such a phenomenon is referred to as freeze-drying. Use of a thromboplastin reagent showing a value of 14 seconds or more in normal plasma is not desirable from the viewpoint of measurement efficiency, and development of a production method capable of eliminating lyophilization is also desired.
【００１０】[0010]
【発明が解決しようとする課題】本発明が解決しようと
する課題は、測定感受性が大きい新規なトロンボプラス
チン試薬を提供することである。An object of the present invention is to provide a novel thromboplastin reagent having high measurement sensitivity.
【００１１】[0011]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＩＳＩ値
に着目し、鋭意検討を行った結果、ＩＳＩ値が１．０よ
り大きい値のトロンボプラスチン含有組成物にアミノ酸
またはアミノ酸誘導体を添加すると、ＩＳＩ値を１．０
に近づける場合があることを見出した。このような機能
を有するアミノ酸またはアミノ酸誘導体をトロンボプラ
スチン試薬において有効量添加することにより、本発明
を完成した。さらに、該アミノ酸またはアミノ酸誘導体
の添加時期についても検討した結果、凍結乾燥による活
性低下のない、安定なトロンボプラスチン試薬を提供す
ることができることを見出し、本発明を完成した。Means for Solving the Problems The present inventors have focused on the ISI value and made intensive studies. As a result, when an amino acid or an amino acid derivative was added to a thromboplastin-containing composition having an ISI value larger than 1.0. , ISI value of 1.0
Have been found to be close to The present invention has been completed by adding an effective amount of an amino acid or an amino acid derivative having such a function to a thromboplastin reagent. Furthermore, as a result of studying the timing of addition of the amino acid or amino acid derivative, it was found that a stable thromboplastin reagent free from activity reduction due to freeze-drying could be provided, and the present invention was completed.
【００１２】すなわち本発明は、 １．トロンボプラスチン試薬の製造工程において、１．
０より大きい国際感度指数（ＩＳＩ）を示すトロンボプ
ラスチン含有組成物のＩＳＩを１．０に近づける機能を
有するアミノ酸またはその誘導体を有効量添加する工程
を含むことを特徴とするトロンボプラスチン試薬の製造
方法、 ２．前項１に記載のアミノ酸またはその誘導体の有効量
として、終濃度が0.01〜20 W/V %になるように添加する
ことを特徴とする前項１に記載の製造方法、 ３．前項１に記載のアミノ酸またはその誘導体が、グル
タミン酸、グルタミン酸ナトリウムまたはグリシンであ
ることを特徴とする前項１または２に記載の製造方法、 ４．アミノ酸またはその誘導体を添加する工程が、原料
組成物からトロンボプラスチンを抽出する工程後凍結乾
燥前であることを特徴とする前項１〜３のいずれか１に
記載の製造方法、 ５．アミノ酸またはその誘導体を添加する工程が、原料
組成物からトロンボプラスチンを抽出し、凍結乾燥した
後であることを特徴とする前項１〜３のいずれか１に記
載の製造方法、 ６．前項１〜５のいずれか１の方法で製造されたトロン
ボプラスチン試薬、 ７．１．０より大きい国際感度指数（ＩＳＩ）を示すト
ロンボプラスチン含有組成物のＩＳＩを１．０に近づけ
る機能を有するアミノ酸またはその誘導体を有効量含有
することを特徴とするトロンボプラスチン試薬、 ８．前項７に記載のアミノ酸またはその誘導体の有効量
として、終濃度が0.01〜10 W/V %になるように添加する
ことを特徴とする前項７に記載のトロンボプラスチン試
薬、 ９．前項７に記載のアミノ酸またはその誘導体がグルタ
ミン酸、グルタミン酸ナトリウムまたはグリシンである
ことを特徴とする前項７または８に記載のトロンボプラ
スチン試薬、 １０．前項６〜９のいずれか１に記載のトロンボプラス
チン試薬を含む凝固時間測定試薬キット、からなる。That is, the present invention provides: In the production process of the thromboplastin reagent,
A method for producing a thromboplastin reagent, comprising: a step of adding an effective amount of an amino acid or a derivative thereof having a function of bringing the ISI of a thromboplastin-containing composition exhibiting an International Sensitivity Index (ISI) larger than 0 close to 1.0 to 2. . 2. The production method according to item 1, wherein an effective amount of the amino acid or derivative thereof according to item 1 is added so that the final concentration is 0.01 to 20 W / V%. 3. The production method according to the above 1 or 2, wherein the amino acid or the derivative thereof according to the above 1 is glutamic acid, sodium glutamate or glycine; 4. The production method according to any one of the above items 1 to 3, wherein the step of adding the amino acid or a derivative thereof is after the step of extracting thromboplastin from the raw material composition and before freeze-drying; 5. The production method according to any one of the above items 1 to 3, wherein the step of adding the amino acid or a derivative thereof is performed after extracting thromboplastin from the raw material composition and freeze-drying it. 7. A thromboplastin reagent produced by the method according to any one of the above items 1 to 5, 7. An amino acid having a function of bringing the ISI of a thromboplastin-containing composition exhibiting an International Sensitivity Index (ISI) larger than 1.0 to 1.0, or an amino acid thereof. 7. a thromboplastin reagent comprising an effective amount of a derivative; 8. The thromboplastin reagent according to item 7, wherein an effective amount of the amino acid or derivative thereof according to item 7 is added so as to have a final concentration of 0.01 to 10 W / V%. 9. The thromboplastin reagent according to item 7 or 8, wherein the amino acid or derivative thereof according to item 7 is glutamic acid, sodium glutamate, or glycine. A kit for measuring a coagulation time, comprising the thromboplastin reagent according to any one of the above items 6 to 9.
【００１３】[0013]
【発明の実施の形態】ＰＴの新しい記載法としてＩＮＲ
（International Normalized Ratio）が用いられる。Ｉ
ＮＲ値はプロトロンビン比（ＰＲ）のＩＳＩ乗で求めら
れ、正常値は１．０である。ここで、プロトロンビン比
とは、正常人血漿のＰＴに対する試料血漿ＰＴの比をい
い、ＰＲであらわす。ＩＮＲとＩＳＩの関係は次式で表
される。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION As a new description method of PT, INR is used.
(International Normalized Ratio) is used. I
The NR value is obtained by raising the prothrombin ratio (PR) to the power of ISI, and the normal value is 1.0. Here, the prothrombin ratio refers to the ratio of the sample plasma PT to the PT of normal human plasma, and is expressed as PR. The relationship between INR and ISI is represented by the following equation.
【００１４】ＩＮＲ＝ＰＲISI＝（試料血漿のＰＴ／正
常人血漿のＰＴ）ISI INR = PR ISI = (PT of sample plasma / PT of normal human plasma) ISI
【００１５】すなわち、トロンボプラスチン試薬におい
てＩＳＩ値が大きい値を示すということは、正常人血漿
のＰＴと凝固因子が欠乏した血漿のＰＴの差異が少ない
試薬であることを示し、ＩＳＩ値が低い値を示すという
ことは、正常人血漿のＰＴと、凝固因子が欠乏した血漿
のＰＴの差異が大きい試薬であるということができる。
そうすると、含有されている凝固因子の量に依存してＰ
Ｔが変化するほうが、感度良く凝固因子の量を測定でき
ると判断される。That is, a large ISI value in the thromboplastin reagent indicates that the reagent has a small difference between the PT of normal human plasma and the PT of plasma deficient in coagulation factors. This means that the reagent has a large difference between the PT of normal human plasma and the PT of plasma lacking coagulation factors.
Then, depending on the amount of coagulation factor contained, P
It is determined that the amount of coagulation factor can be measured with higher sensitivity when T changes.
【００１６】現在、ヒト胎盤由来、ウサギ脳由来、ウシ
脳由来等の各種トロンボプラスチン含有組成物が、トロ
ンボプラスチン試薬の原料バルクとして使用されている
が、それらの組成物のほとんどが１．０より大きいＩＳ
Ｉを示すものである。そこで、ＩＳＩを１．０に近づけ
ることにより、感度の良いトロンボプラスチン試薬を提
供することができる。この考えは、天然物由来のトロン
ボプラスチン試薬に限定されるものではなく、遺伝子組
換え技術によりつくられたトロンボプラスチン試薬にも
応用される。本発明において、トロンボプラスチン含有
組成物とは、トロンボプラスチン（組織因子）を含有す
るものであれば良く、その由来は限定されない。例え
ば、ヒト胎盤由来、ウサギ脳由来、ウシ脳由来等の天然
物由来のものの他、遺伝子組換え技術等によりつくられ
たトロンボプラスチン含有組成物も含まれる。At present, various thromboplastin-containing compositions derived from human placenta, rabbit brain, bovine brain and the like are used as raw material bulks of thromboplastin reagents.
It shows I. Therefore, by making ISI close to 1.0, a highly sensitive thromboplastin reagent can be provided. This idea is not limited to a thromboplastin reagent derived from a natural product, but is also applied to a thromboplastin reagent produced by a genetic recombination technique. In the present invention, the thromboplastin-containing composition is not particularly limited as long as it contains thromboplastin (tissue factor). For example, a thromboplastin-containing composition produced by a genetic recombination technique or the like is included in addition to those derived from natural products such as human placenta, rabbit brain, bovine brain, and the like.
【００１７】１．０より大きいＩＳＩを示すトロンボプ
ラスチン含有組成物のＩＳＩを１．０に近づける機能を
有するアミノ酸またはその誘導体とは、トロンボプラス
チンの組成物に対して、適当量添加したときに、ＩＳＩ
値を低下させ、１．０に近づける機能を有する物質であ
って、アミノ酸またはその誘導体を意味する。このよう
な機能を有するアミノ酸またはその誘導体の例として、
アラニン、アミノブチリックアシッド（以下「ＡＢＡ」
という。）、グルタミン、グルタミン酸、グルタミン酸
ナトリウム、グリシン、メチオニン、プロリン、セリ
ン、チロシン等があげられる。好ましくは、アラニン、
アミノブチリックアシッド（以下「ＡＢＡ」とい
う。）、グルタミン酸ナトリウム、グルタミン酸、グリ
シンであり、さらに好ましくはグルタミン酸ナトリウ
ム、グルタミン酸、グリシンが挙げられる。An amino acid or a derivative thereof having a function of bringing the ISI of the composition containing thromboplastin closer to 1.0 to an ISI of greater than 1.0 is defined as an ISI when added in an appropriate amount to the thromboplastin composition.
A substance having a function of decreasing the value to approach 1.0, and means an amino acid or a derivative thereof. Examples of amino acids or derivatives thereof having such a function include:
Alanine, aminobutyric acid (hereinafter “ABA”)
That. ), Glutamine, glutamic acid, sodium glutamate, glycine, methionine, proline, serine, tyrosine and the like. Preferably, alanine,
Aminobutyric acid (hereinafter referred to as “ABA”), sodium glutamate, glutamic acid and glycine, more preferably sodium glutamate, glutamic acid and glycine.
【００１８】上記機能を有するアミノ酸またはその誘導
体の有効量とは、ＩＳＩ値を低下させ、１．０に近づけ
る機能を発揮する量であれば特に限定されないが、例え
ばトロンボプラスチン試薬の最終濃度として、0.01-20w
/v%、好適には0.1-10w/v%、より好適には0.5-5w/v%の範
囲が挙げられる。The effective amount of the amino acid or a derivative thereof having the above function is not particularly limited as long as it can reduce the ISI value and exert a function of approaching 1.0. For example, the final concentration of the thromboplastin reagent may be 0.01 to 0.01. -20w
/ v%, preferably 0.1-10 w / v%, more preferably 0.5-5 w / v%.
【００１９】上記機能を有するアミノ酸またはその誘導
体は、製造工程のいずれの時期に添加しても良く特に限
定されない。また、試薬組成物として調製した後に、上
記有効量添加することも可能である。特にいわゆる凍結
乾燥による活性低下を防ぐ目的で上記機能を有するアミ
ノ酸またはその誘導体を添加する場合には、製造工程の
うち凍結乾燥前に添加することが好ましい。The amino acid having the above function or a derivative thereof may be added at any time during the production process, and is not particularly limited. It is also possible to add the above-mentioned effective amount after preparing as a reagent composition. In particular, when an amino acid having the above function or a derivative thereof is added for the purpose of preventing a decrease in activity due to so-called lyophilization, it is preferable to add the amino acid or lyophilized derivative in the production process before lyophilization.
【００２０】本発明のトロンボプラスチン試薬は凍結乾
燥品の他、液状品、凍結品であっても良い。The thromboplastin reagent of the present invention may be a lyophilized product, a liquid product or a frozen product.
【００２１】[0021]
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに説明す
るが、本発明は実施例に限定されるものではない。EXAMPLES The present invention will be further described below with reference to examples, but the present invention is not limited to the examples.
【００２２】[0022]
【実施例１】特開平5-60762公報に記載の方法に基づき
調製されたトロンボプラスチンバルク溶液（ウサギ脳由
来）に、各種アミノ酸またはアミノ酸誘導体を各濃度添
加した場合のＰＴを測定し、あらかじめＩＮＲが規定さ
れている補正血漿をもとに各試料についてのＩＳＩ値を
求めた。ＰＴの測定は、公知の測定方法に従って行っ
た。具体的には、以下の方法で測定した。各種アミノ酸
またはアミノ酸誘導体を最終濃度が各々1, 2, 3w/v％と
なるようにトロンボプラスチンバルク溶液に添加し、こ
れに終濃度10mMとなるようにカルシウム塩を加え凍結乾
燥したものをトロンボプラスチン試薬とした。補正血漿
0.05mLを分取し、約１分間37℃で加温した。これに、予
め精製水で再溶解し37℃に加温された濃度10mMのカルシ
ウムを混入したトロンボプラスチン試薬0.1mLを加えて
全自動血液凝固分析装置コアグレックス700（島津製作
所社製）によってＰＴを測定した。Example 1 PT was measured when various amino acids or amino acid derivatives were added at various concentrations to a thromboplastin bulk solution (derived from rabbit brain) prepared according to the method described in JP-A-5-60762. The ISI value for each sample was determined based on the defined corrected plasma. The measurement of PT was performed according to a known measurement method. Specifically, it was measured by the following method. Various amino acids or amino acid derivatives were added to the thromboplastin bulk solution to a final concentration of 1, 2, 3 w / v%, and calcium salts were added thereto to a final concentration of 10 mM. did. Corrected plasma
0.05 mL was collected and heated at 37 ° C. for about 1 minute. To this, add 0.1 mL of thromboplastin reagent mixed with 10 mM calcium, which has been redissolved in purified water and heated to 37 ° C, and measure the PT with a fully automatic blood coagulation analyzer Coagrex 700 (manufactured by Shimadzu Corporation). did.
【００２３】補正血漿のＩＮＲ値およびＰＴ測定値か
ら、各トロンボプラスチン試薬のＩＳＩ値を換算して求
め、各種添加物のＩＳＩに及ぼす効果を調べた。The ISI value of each thromboplastin reagent was calculated from the INR value and PT measurement value of the corrected plasma, and the effect of various additives on ISI was examined.
【００２４】その結果を表１に示した。その結果、補正
血漿（ＡＫ−Ａ）については、アミノ酸またはその誘導
体を添加したトロンボプラスチン試薬を用いた場合に
は、いずれについても無添加のトロンボプラスチン試薬
を用いた場合に比べ、ＰＴが短縮した。このことは、ト
ロンボプラスチンバルクに各種添加物を加えることで、
いわゆる凍結乾燥による活性低下を防ぎ、安定性の高い
試薬を提供することが可能と考えられた。The results are shown in Table 1. As a result, with respect to the corrected plasma (AK-A), when the thromboplastin reagent to which the amino acid or its derivative was added was used, the PT was shortened as compared with the case where the thromboplastin reagent without any addition was used. This is achieved by adding various additives to thromboplastin bulk.
It was thought that it was possible to prevent a decrease in activity due to so-called freeze-drying and to provide a highly stable reagent.
【００２５】また、補正血漿（ＡＫ−Ｄ）については、
１％アラニンを添加した場合を除き、ＰＴは延長した。
このことは、補正血漿（ＡＫ−Ａ〜Ｄ）に含まれる凝固
因子の含有量の低下に依存してＰＴが延長し、より感度
の良い測定が可能となることが示唆された。Further, the corrected plasma (AK-D)
PT was prolonged except when 1% alanine was added.
This suggested that the PT was prolonged depending on the decrease in the content of the coagulation factor contained in the corrected plasma (AK-AD), and more sensitive measurement was possible.
【００２６】各トロンボプラスチン試薬のＩＳＩ値はい
ずれも無添加のトロンボプラスチンのＩＳＩ値より小さ
くなった。The ISI value of each thromboplastin reagent was smaller than the ISI value of the thromboplastin without addition.
【００２７】[0027]
【表１】 [Table 1]
【００２８】[0028]
【実施例２】トロンボプラスチンバルク溶液への添加物
としてグルタミン酸ナトリウムを最終濃度が各々1, 2,
3, 4, 5w/v％各濃度添加した場合のＰＴを測定し、ＩＳ
Ｉ値を求めた。ＰＴの測定およびＩＳＩ値の換算は、実
施例１と同様に行った。その結果を表２に示した。Example 2 Sodium glutamate was added as an additive to the thromboplastin bulk solution to a final concentration of 1, 2,
The PT was measured when 3, 4, 5 w / v% was added at each concentration.
The I value was determined. The measurement of the PT and the conversion of the ISI value were performed in the same manner as in Example 1. The results are shown in Table 2.
【００２９】[0029]
【表２】 [Table 2]
【００３０】各トロンボプラスチン試薬のＩＳＩ値は、
グルタミン酸ナトリウムの濃度依存的に小さくなり、各
トロンボプラスチン試薬の感度の向上がみとめられた。The ISI value of each thromboplastin reagent is
The concentration of sodium glutamate became smaller depending on the concentration, and the sensitivity of each thromboplastin reagent was improved.
【００３１】一方、補正血漿（ＡＫ−Ａ）のＰＴは、２
w/v％または３w/v％のグルタミン酸ナトリウムを添加し
た場合に最も短くなり、安定性の高いトロンボプラスチ
ン試薬が得られた。On the other hand, the PT of the corrected plasma (AK-A) is 2
The shortest and highly stable thromboplastin reagent was obtained when w / v% or 3 w / v% sodium glutamate was added.
【００３２】[0032]
【発明の効果】以上説明したように、トロンボプラスチ
ン試薬の製造工程において、１．０より大きい国際感度
指数（ＩＳＩ）を示すトロンボプラスチン含有組成物の
ＩＳＩを１．０に近づける機能を有するアミノ酸または
その誘導体を有効量添加する工程を含むことにより、測
定感受性が高く、安定性の高いトロンボプラスチン試薬
を提供することが可能となった。As described above, in the process of producing a thromboplastin reagent, an amino acid or a derivative thereof having a function of bringing the ISI of a thromboplastin-containing composition exhibiting an International Sensitivity Index (ISI) of greater than 1.0 close to 1.0 to 1.0. By adding a step of adding an effective amount of, a thromboplastin reagent having high measurement sensitivity and high stability can be provided.
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Claims (10)
て、１．０より大きい国際感度指数（ＩＳＩ）を示すト
ロンボプラスチン含有組成物のＩＳＩを１．０に近づけ
る機能を有するアミノ酸またはその誘導体を有効量添加
する工程を含むことを特徴とするトロンボプラスチン試
薬の製造方法。1. A process for producing a thromboplastin reagent, comprising adding an effective amount of an amino acid or a derivative thereof having a function of bringing the ISI of a thromboplastin-containing composition exhibiting an International Sensitivity Index (ISI) of greater than 1.0 to close to 1.0. A method for producing a thromboplastin reagent, comprising:
体の有効量として、終濃度が0.01〜20 W/V %になるよう
に添加することを特徴とする請求項１に記載の製造方
法。2. The method according to claim 1, wherein an effective amount of the amino acid or a derivative thereof according to claim 1 is added so as to have a final concentration of 0.01 to 20 W / V%.
体が、グルタミン酸、グルタミン酸ナトリウムまたはグ
リシンであることを特徴とする請求項１または２に記載
の製造方法。3. The method according to claim 1, wherein the amino acid or the derivative thereof according to claim 1 is glutamic acid, sodium glutamate or glycine.
が、原料組成物からトロンボプラスチンを抽出する工程
後凍結乾燥前であることを特徴とする請求項１〜３のい
ずれか１に記載の製造方法。4. The method according to claim 1, wherein the step of adding the amino acid or a derivative thereof is performed after the step of extracting thromboplastin from the raw material composition and before the freeze-drying.
が、原料組成物からトロンボプラスチンを抽出し、凍結
乾燥した後であることを特徴とする請求項１〜３のいず
れか１に記載の製造方法。5. The method according to claim 1, wherein the step of adding the amino acid or a derivative thereof is performed after extracting thromboplastin from the raw material composition and freeze-drying it.
れたトロンボプラスチン試薬。6. A thromboplastin reagent produced by the method according to claim 1.
を示すトロンボプラスチン含有組成物のＩＳＩを１．０
に近づける機能を有するアミノ酸またはその誘導体を有
効量含有することを特徴とするトロンボプラスチン試
薬。7. An International Sensitivity Index (ISI) greater than 1.0.
Of the thromboplastin-containing composition exhibiting
A thromboplastin reagent comprising an effective amount of an amino acid or a derivative thereof having a function close to the above.
て、終濃度が0.01〜20W/V %になるように添加すること
を特徴とする請求項７に記載のトロンボプラスチン試
薬。8. The thromboplastin reagent according to claim 7, wherein an effective amount of the amino acid or its derivative is added so as to have a final concentration of 0.01 to 20 W / V%.
酸、グルタミン酸ナトリウムまたはグリシンであること
を特徴とする請求項７または８に記載のトロンボプラス
チン試薬。9. The thromboplastin reagent according to claim 7, wherein the amino acid or its derivative is glutamic acid, sodium glutamate or glycine.
ンボプラスチン試薬を含む凝固時間測定試薬キット。A reagent kit for measuring a coagulation time, comprising the thromboplastin reagent according to any one of claims 6 to 9.
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|---|---|---|---|
| JP2002025719A JP2002303632A (en) | 2001-02-05 | 2002-02-01 | Thromboplastin reagent and its manufacturing method |
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| JP2001028828 | 2001-02-05 | ||
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013205087A (en) * | 2012-03-27 | 2013-10-07 | Sysmex Corp | Reagent for coagulation time measurement, reagent kit for coagulation time measurement and coagulation time measuring method |
| US10640805B2 (en) | 2016-03-30 | 2020-05-05 | Sysmex Corporation | Reagent for prothrombin time measurement, method for production thereof, and method for measurement of prothrombin time |
-
2002
- 2002-02-01 JP JP2002025719A patent/JP2002303632A/en not_active Withdrawn
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| US10640805B2 (en) | 2016-03-30 | 2020-05-05 | Sysmex Corporation | Reagent for prothrombin time measurement, method for production thereof, and method for measurement of prothrombin time |
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