JP2002255969A - New physiologically active substance fo-7711cd4 and/or cd6 and method for producing the same - Google Patents
New physiologically active substance fo-7711cd4 and/or cd6 and method for producing the sameInfo
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Abstract
Description
【0001】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明はとくに多剤耐性黄色
ブドウ球菌(KB324)の増殖を抑制する新規な生理
活性物質FO−7711 CD4及び/又はCD6(以
下時としてFO−7711 CD4及び/又はCD6物
質と呼称することもある)、並びに本FO−7711
CD4及び/又はCD6物質が微生物生産菌の培養によ
って生産される生理活性物質FO−7711 CD4及
び/又はCD6の新規な製造法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel bioactive substance FO-7711 CD4 and / or CD6 (hereinafter sometimes referred to as FO-7711 CD4 and / or CD6) which suppresses the growth of multidrug-resistant Staphylococcus aureus (KB324). FO-7711)
The present invention relates to a novel method for producing a physiologically active substance FO-7711 CD4 and / or CD6 in which a CD4 and / or CD6 substance is produced by culturing a microorganism-producing bacterium.
【0002】[0002]
【従来の技術】感染症の治療は主として化学療法によっ
て行われており、これまでに、イミペネム(Imipe
nem)、カナマイシン(Kanamycin)を始め
とするさまざまな感染症治療薬が開発されてきた。これ
らの感染症治療薬によって、人類は感染症を克服したか
に思えたが、新たにこれらの感染症治療薬に対する耐性
菌の出現が増加している。特に最近においては、感染症
の中で治療が困難となっている院内感染が大きな社会問
題となっている。2. Description of the Related Art Infectious diseases are mainly treated by chemotherapy, and so far imipenem (Imipene) has been used.
nem), kanamycin, and various other therapeutic agents for infectious diseases have been developed. Although it seems that humans have overcome infectious diseases with these infectious disease drugs, the emergence of resistant bacteria against these infectious disease drugs is increasing. Particularly in recent years, nosocomial infection, which is difficult to treat among infectious diseases, has become a major social problem.
【0003】[0003]
【発明が解決しようとする課題】近年における感染症患
者においては多剤耐性化している場合が多くなり、より
治療を困難にしている。もともと、これらの院内感染を
受けるのは、感染に対して抵抗力の低下した患者、すな
わち重篤な基礎疾患を持っている患者、大手術後などの
患者が多く、感染症が致命的となることもありうる。そ
こで、これまでの感染症治療薬に耐性化している菌に対
しても抗菌活性を有する新たな治療薬の開発が強く望ま
れていた。In recent years, patients with infectious diseases have become multidrug resistant in many cases, making treatment more difficult. Originally, these nosocomial infections are mainly caused by patients with reduced resistance to infection, that is, patients with serious underlying illness or after major surgery, and the infection is fatal It is possible. Thus, there has been a strong demand for the development of a new therapeutic agent having antibacterial activity against bacteria that have become resistant to conventional infectious disease therapeutic agents.
【0004】本発明は、このような要望を満足し得る新
規な生理活性物質FO−7711CD4及び/又はCD
6を提供するものである。更に本発明は、ペニシリウム
属に属する生理活性物質FO−7711 CD4及び/
又はCD6を生産する能力を有する微生物を培地に培養
して、該培養物中に生理活性物質FO−7711CD4
及び/又はCD6を蓄積せしめ、該培養物から生理活性
物質FO−7711 CD4及び/又はCD6を採取す
ることを特徴とする新規な生理活性物質FO−7711
CD4及び/又はCD6の製造法を提供するものであ
る。[0004] The present invention provides a novel bioactive substance FO-7711CD4 and / or CD which can satisfy such a demand.
6 is provided. Further, the present invention provides a bioactive substance FO-7711 CD4 belonging to the genus Penicillium and / or
Alternatively, a microorganism having the ability to produce CD6 is cultured in a medium, and the physiologically active substance FO-7711CD4 is contained in the culture.
And / or accumulating CD6, and collecting a physiologically active substance FO-7711 CD4 and / or CD6 from the culture.
The present invention provides a method for producing CD4 and / or CD6.
【0005】[0005]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、新規な生
理活性物質の探索を目的として種々の土壌から菌株を分
離し、その生産する代謝産物について研究を続けた結
果、新たに採取された土壌から分離した菌株FO−77
11の培養物中に、多剤耐性黄色ブドウ球菌の増殖を抑
制する物質が産生されることを見出した。次いで、該培
養物から該有効物質を分離、精製した結果、このような
化学構造およびその物理化学的性質を有する物質は従来
まったく知られていないことから、本生理活性物質をF
O−7711 CD4及び/又はCD6物質と呼称する
ことにした。本発明はかかる知見に基づいて完成された
ものであって、下記式[I]及び/又は式[II]DISCLOSURE OF THE INVENTION The present inventors have isolated bacterial strains from various soils for the purpose of searching for new physiologically active substances, and have continued to study metabolites produced by the same. Strain FO-77 isolated from soils
It has been found that a substance that suppresses the growth of multidrug-resistant Staphylococcus aureus is produced in 11 cultures. Next, as a result of separating and purifying the active substance from the culture, no substance having such a chemical structure and its physicochemical properties has been known so far.
O-7711 CD4 and / or CD6 material. The present invention has been completed based on such findings, and has the following formula [I] and / or formula [II]
【0006】[0006]
【化2】 で表される化合物であることを特徴とする新規な生理活
性物質FO−7711CD4及び/又はCD6に関す
る。Embedded image A novel physiologically active substance FO-7711CD4 and / or CD6 characterized by being a compound represented by the formula:
【0007】本発明は更に、下記の物理化学的性質を有
する新規な生理活性物質FO−7711 CD4及び/
又はCD6に関する。 〔1〕生理活性物質FO−7711 CD4 (1)性状 :白色粉末 (2)分子量 :503[高分解能高速原子衝撃(FA
B)マススぺクトルによる] (3)分子式 :C32H41O4 N1 The present invention further provides a novel physiologically active substance FO-7711 CD4 having the following physicochemical properties:
Or regarding CD6. [1] Bioactive substance FO-7711 CD4 (1) Property: white powder (2) Molecular weight: 503 [High-resolution fast atom bombardment (FA
B) Mass spectrum] (3) Molecular formula: C 32 H 41 O 4 N 1
【0008】(4)紫外・可視部吸収スペクトル:メタ
ノール中で測定した紫外部吸収スペクトルは図1に示す
通りであり、266(log ε=3.44)、235
(log ε=3.56)、212(log ε=3.
74)nm付近に特徴的な吸収極大を示す (5)赤外部吸収スペクトル:臭化カリウム法で測定し
た赤外部吸収スペクトルは図2に示す通りであり、34
19、2949、2924、1687、1614、15
06、1226cm-1に特徴的な吸収帯を有する(4) Ultraviolet / visible absorption spectrum: The ultraviolet absorption spectrum measured in methanol is as shown in FIG. 1 and is 266 (log ε = 3.44), 235
(Log ε = 3.56), 212 (log ε = 3.
74) Characteristic absorption maximum near nm. (5) Infrared absorption spectrum: The infrared absorption spectrum measured by the potassium bromide method is as shown in FIG.
19, 2949, 2924, 1687, 1614, 15
06, with a characteristic absorption band at 1226 cm -1
【0009】(6)比旋光度[α]D 27+50.0°
(c=0.1、CHCl3 ) (7)溶剤に対する溶解性:アセトン、クロロホルム、
酢酸エチル、メタノール、エタノールに可溶、水に難溶 (8)呈色反応:硫酸、ヨウ素に陽性(6) Specific rotation [α] D 27 + 50.0 °
(C = 0.1, CHCl 3 ) (7) Solubility in solvent: acetone, chloroform,
Soluble in ethyl acetate, methanol and ethanol, poorly soluble in water (8) Color reaction: positive for sulfuric acid and iodine
【0010】〔2〕生理活性物質FO−7711 CD
6 (1)性状 :白色粉末 (2)分子量 :503[高分解能高速原子衝撃(FA
B)マススぺクトルによる] (3)分子式 :C32H41O4 N1 [2] Bioactive substance FO-7711 CD
6 (1) Property: white powder (2) Molecular weight: 503 [High-resolution high-speed atom bombardment (FA
B) Mass spectrum] (3) Molecular formula: C 32 H 41 O 4 N 1
【0011】(4)紫外・可視部吸収スペクトル:メタ
ノール中で測定した紫外部吸収スペクトルは図5に示す
通りであり、271(ショルダー、log ε=3.5
2)、224(log ε=4.19)nm付近に特徴
的な吸収極大を示す (5)赤外部吸収スペクトル:臭化カリウム法で測定し
た赤外部吸収スペクトルは図6に示す通りであり、34
23、2949、2924、1689、1612、15
06、1227cm-1に特徴的な吸収帯を有する(4) Ultraviolet / visible absorption spectrum: The ultraviolet absorption spectrum measured in methanol is as shown in FIG. 5 and is 271 (shoulder, log ε = 3.5)
2) shows a characteristic absorption maximum near 224 (log ε = 4.19) nm. (5) Infrared absorption spectrum: The infrared absorption spectrum measured by the potassium bromide method is as shown in FIG. 34
23, 2949, 2924, 1689, 1612, 15
06, having a characteristic absorption band at 1227 cm -1
【0012】(6)比旋光度[α]D 27+112.8°
(c=0.1、CHCl3 ) (7)溶剤に対する溶解性:アセトン、クロロホルム、
酢酸エチル、メタノール、エタノールに可溶、水に難溶 (8)呈色反応:硫酸、ヨウ素に陽性(6) Specific rotation [α] D 27 + 12.8 °
(C = 0.1, CHCl 3 ) (7) Solubility in solvent: acetone, chloroform,
Soluble in ethyl acetate, methanol and ethanol, poorly soluble in water (8) Color reaction: positive for sulfuric acid and iodine
【0013】本発明は更に、ペニシリウム属に属する生
理活性物質FO−7711 CD4及び/又はCD6を
生産する能力を有する微生物を培地に培養して、その培
養物中に生理活性物質FO−7711 CD4及び/又
はCD6を蓄積せしめ、該培養物から生理活性物質FO
−7711 CD4及び/又はCD6を採取することを
特徴とする新規な生理活性物質FO−7711 CD4
及び/又はCD6の製造法に関する。Further, the present invention further comprises culturing a microorganism having the ability to produce the physiologically active substance FO-7711 CD4 and / or CD6 belonging to the genus Penicillium in a medium, and adding the physiologically active substance FO-7711 CD4 and And / or allow CD6 to accumulate and allow the bioactive substance FO
-7711 CD4, a novel bioactive substance characterized by collecting CD4 and / or CD6
And / or a method for producing CD6.
【0014】本発明は更に、ペニシリウム属に属し、生
理活性物質FO−7711 CD4及び/又はCD6を
生産する能力を有する微生物が、ペニシリウム エスピ
ー(Penicillium sp.)FO−7711
株に関するものであり、更にまた本発明は、ペニシリウ
ム属に属し、生理活性物質FO−7711 CD4及び
/又はCD6を生産する能力を有する微生物が、ペニシ
リウム エスピー(Penicillium sp.)
FO−7711(FERM P−18211)に関す
る。The present invention further relates to a microorganism belonging to the genus Penicillium and capable of producing the physiologically active substance FO-7711 CD4 and / or CD6, wherein the microorganism is Penicillium sp. FO-7711.
The present invention also relates to a strain belonging to the genus Penicillium and having the ability to produce the physiologically active substance FO-7711 CD4 and / or CD6, wherein the microorganism is Penicillium sp.
FO-7711 (FERM P-18211).
【0015】本発明の生理活性物質FO−7711 C
D4及び/又はCD6物質生産菌については、ペニシリ
ウム属で、FO−7711 CD4及び/又はCD6物
質生産能を有するものであればよく、特に制限されるこ
とはない。本発明のFO−7711 CD4及び/又は
CD6物質を生産するために使用される菌株の好適な一
例としては、本発明者らによって長崎県の土壌から新た
に分離したペニシリウム エスピー(Penicill
ium sp.)FO−7711株が挙げられる。本菌
株の菌学的性状を示すと以下の通りである。The physiologically active substance FO-7711 C of the present invention
The D4 and / or CD6 substance producing bacterium is not particularly limited, as long as it is a genus Penicillium and has an ability to produce FO-7711 CD4 and / or CD6 substance. A preferred example of the strain used for producing the FO-7711 CD4 and / or CD6 substance of the present invention is Penicillium sp. Newly isolated from the soil of Nagasaki Prefecture by the present inventors.
ium sp. ) FO-7711 strain. The bacteriological properties of this strain are as follows.
【0016】1.形態的性質 本菌株は、ツァぺック・イースト寒天培地、25%グリ
セリン・硝酸塩寒天培地、コーン・ミール寒天培地など
で良好に生育し、分生子の着生も良好である。コーン・
ミール寒天培地に生育したコロニーを顕微鏡で観察する
と菌糸は透明で隔壁を有しており、分生子柄(12.5
〜75×2.5〜3.0μm)は基底菌糸より直立する
か、または分岐した気菌糸(1.8〜3.0μm)より
伸長している。1. Morphological properties This strain grows well on Tsakku yeast agar medium, 25% glycerin / nitrate agar medium, corn / meal agar medium, etc., and has good conidium formation. corn·
When the colonies grown on the meal agar medium were observed with a microscope, the hyphae were transparent and had partition walls, and the conidiophores (12.5
7575 × 2.5-3.0 μm) stand upright from the basal hyphae or extend from the branched aerial hyphae (1.8-3.0 μm).
【0017】ペニシラスは複輪生でメトレ(10〜20
×1.8〜3.0μm)、フィアライド(8.8〜15
×1.0〜3.0μm)に分岐している。メトレは1〜
3個に分岐し、フィアライドはアンプル型で3〜4個群
生する。フィアロ型分生子は、はじめフィアライドの頂
端に一個着生し、培養時間の経過とともに連鎖状とな
る。分生子は球形で大きさは1.8〜3.0μmであ
り、表面は粗面である。Penicillus is a two-wheeler and metre (10-20
× 1.8-3.0 μm), phialide (8.8-15)
× 1.0 to 3.0 μm). Metre is 1
It branches into three, and the phialides are ampoule-shaped and grow in groups of three to four. At first, one phialo-conidium attaches to the apex of phialide and becomes chain-like as the culture time elapses. The conidium is spherical and has a size of 1.8 to 3.0 μm, and the surface is rough.
【0018】2.各種培地上での諸性状 各種寒天培地上で25℃、2週間培養した場合の肉眼的
観察の結果を表1に示した。2. Various properties on various media Table 1 shows the results of macroscopic observation when cultured at 25 ° C for 2 weeks on various agar media.
【0019】[0019]
【表1】 [Table 1]
【0020】3.生理的、生態的性状 (1)最適生育条件 本菌の最適生育条件は、pH4〜7、生育温度は13〜
32℃である。 (2)生育の範囲 本菌の生育範囲は、pH3〜10、生育温度は7.0〜
36℃である。 (3)好気性、嫌気性の区別 本菌は好気性である。3. Physiological and ecological properties (1) Optimal growth conditions The optimal growth conditions for this fungus are pH 4-7, and the growth temperature is 13-
32 ° C. (2) Growth range The growth range of this fungus is pH 3 to 10, and the growth temperature is 7.0 to 7.0.
36 ° C. (3) Distinguishing between aerobic and anaerobic conditions This bacterium is aerobic.
【0021】上記に述べた本FO−7711株の形態的
特徴、培養性状および生理的性状に基づき、既知菌種と
の比較を試みた結果、本菌株をペニシリウム(Peni
cillium)属に属する一菌株と同定し、ペニシリ
ウム エスピー FO−7711と命名した。本菌株は
ペニシリウム エスピー FO−7711(Penic
illium sp.FO−7711)として、茨城県
つくば市東1丁目1番3号に所在する工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されている。寄託日は平成13
年2月19日、受託番号はFERM P−18211で
ある。Based on the morphological characteristics, culture characteristics and physiological characteristics of the FO-7711 strain described above, the strain was compared with known bacterial strains. As a result, the strain was identified as Penicillium (Peni).
and identified as Penicillium sp. FO-7711. This strain is Penicillium sp. FO-7711 (Penic
illium sp. FO-7711) is deposited at the Institute of Biotechnology and Industrial Technology, located at 1-3 1-3 Higashi, Tsukuba, Ibaraki Prefecture. Deposit date is 2001
On February 19, the accession number is FERM P-18211.
【0022】本発明の好ましい菌株として、本FO−7
711 CD4及び/又はCD6物質生産菌について説
明したが、糸状菌の一般的性状として菌学上の性状はき
わめて変異し易く、一定したものではなく、自然的にあ
るいは通常行なわれる紫外線照射、X線照射または変異
誘導体剤などを用いる人工的変異手段により変異するこ
とは周知の事実であり、このような人工的変異株は勿
論、自然変異株も含め、ペニシリウム属に属し、本FO
−7711 CD4及び/又はCD6物質を生産する能
力を有する菌株は、すべて本発明に使用することができ
る。また、細胞融合、遺伝子操作などの細胞工学的に変
異させた菌株も本FO−7711 CD4及び/又はC
D6物質生産菌として包含される。As a preferred strain of the present invention, the present FO-7
711 CD4 and / or CD6 substance-producing bacteria have been described, but as a general property of filamentous fungi, the mycological properties are extremely variable and not constant. It is a well-known fact that mutation is performed by artificial mutation means using irradiation or a mutant derivative agent. Such artificial mutants, as well as natural mutants, belong to the genus Penicillium and
Any strain capable of producing -7711 CD4 and / or CD6 material can be used in the present invention. In addition, strains mutated by cell engineering such as cell fusion and genetic manipulation are also used in the present FO-7711 CD4 and / or C
Included as D6 substance producing bacteria.
【0023】本発明においては、先ずペニシリウム属に
属する本FO−7711 CD4及び/又はCD6物質
生産菌が、適当な培地に培養される。本菌株の培養にお
いては、通常の糸状菌の培養方法が一般に適用される。
培地としては微生物が同化し得る炭素源、消化し得る窒
素源、さらに必要に応じて無機塩などを含有させた栄養
培地が用いられる。In the present invention, first, the present FO-7711 CD4 and / or CD6 substance producing bacterium belonging to the genus Penicillium is cultured in an appropriate medium. In culturing this strain, a general method for culturing filamentous fungi is generally applied.
As the medium, a nutrient medium containing a carbon source that can be assimilated by microorganisms, a nitrogen source that can be digested, and, if necessary, inorganic salts and the like is used.
【0024】上記の本FO−7711 CD4及び/又
はCD6物質の生産に適した栄養源としては、糸状菌の
栄養源として使用し得るものであればよい。例えば、市
販のペプトン、肉エキス、コーン・スティープ・リカ
ー、綿実粉、落花生粉、大豆粉、酵母エキス、NZ−ア
ミン、カゼインの水和物、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム等の窒素源、グリセリン、澱粉、
グルコース、ガラクトース、マンノース等の炭水化物、
あるいは脂肪等の炭素源、及び食塩、リン酸塩、炭酸カ
ルシウム、硫酸マグネシウム等の無機塩を単独あるいは
組み合わせて使用できる。The nutrient source suitable for producing the above-mentioned FO-7711 CD4 and / or CD6 substance may be any nutrient source that can be used as a nutrient source for filamentous fungi. For example, commercially available peptone, meat extract, corn steep liquor, cottonseed flour, peanut flour, soybean flour, yeast extract, NZ-amine, casein hydrate, sodium nitrate, ammonium nitrate, nitrogen source such as ammonium sulfate, glycerin ,starch,
Glucose, galactose, carbohydrates such as mannose,
Alternatively, a carbon source such as fat, and an inorganic salt such as salt, phosphate, calcium carbonate, and magnesium sulfate can be used alone or in combination.
【0025】その他必要に応じて微量の金属塩などを添
加することもでき、液体培養において、発泡があるとき
は、シリコン油、植物油、界面活性剤などの消泡剤を適
宜使用してもよい。これらのものは生産菌を利用し、本
FO−7711 CD4及び/又はCD6物質の生産に
役だつものであればよく、公知の糸状菌の培養材料はす
べて用いることができる。本FO−7711 CD4及
び/又はCD6物質の大量培養には液体培養が好まし
く、培養温度は生産菌が発育し、本FO−7711 C
D4及び/又はCD6物質を生産できる範囲で適用でき
る。培養に際しては、以上に述べた条件を本FO−77
11 CD4及び/又はCD6物質生産菌の性質に応じ
て適宜選択して行うことができる。In addition, if necessary, a trace amount of a metal salt or the like can be added. If foaming occurs in the liquid culture, an antifoaming agent such as silicone oil, vegetable oil, or a surfactant may be appropriately used. . Any of these can be used as long as they utilize the producing bacteria and can contribute to the production of the FO-7711 CD4 and / or CD6 substance. All known culture materials of filamentous fungi can be used. For large-scale culture of the present FO-7711 CD4 and / or CD6 substance, liquid culture is preferred.
Applicable to the extent that D4 and / or CD6 substances can be produced. When culturing, the conditions described above were applied to the FO-77.
11 It can be appropriately selected according to the properties of the bacteria producing CD4 and / or CD6 substance.
【0026】このようにして得られた培養液中に蓄積さ
れたFO−7711 CD4及び/又はCD6物質は、
培養ろ液または培養菌体中に含まれているので、培養ろ
液を必要に応じて濾過補助剤、例えばセライト、ハイフ
ロースーパーセル等を加えて濾過するか、または遠心分
離して培養ろ液と菌体とに分離し、培養ろ液と菌体との
有機溶媒抽出物を濃縮したものの混合物から本FO−7
711 CD4及び/又はCD6物質を採取するのが有
利である。The FO-7711 CD4 and / or CD6 substance accumulated in the culture solution thus obtained is
Since it is contained in the culture filtrate or cultured cells, the culture filtrate may be filtered by adding a filter aid, for example, celite, high flow supercell, or the like, or may be centrifuged to separate the culture filtrate. The FO-7 is separated from the mixture of the filtrate obtained by concentrating the organic solvent extract of the culture filtrate and the cells.
It is advantageous to collect 711 CD4 and / or CD6 material.
【0027】また、培養ろ液及び菌体を分離しないでエ
タノール、アセトンなどの親水性有機溶媒により抽出
し、得られた抽出液を減圧濃縮し、その濃縮物を酢酸エ
チル、クロロホルムなどの非親水性溶媒で抽出すること
ができる。また、本FO−7711 CD4及び/又は
CD6物質の含有量が培養ろ液と菌体のどちらかに極端
に多いときは、その多い方から抽出してもよい。培養菌
体からFO−7711CD4及び/又はCD6物質を分
離、精製するためには、通常、培養ろ液と菌体との有機
溶媒抽出物を濃縮したものの混合物またはそれぞれを非
親水性溶媒、例えば酢酸エチル、クロロホルムで抽出す
ることにより本FO−7711 CD4及び/又はCD
6物質が有機溶媒に転溶される。Further, the culture filtrate and the cells are extracted with a hydrophilic organic solvent such as ethanol or acetone without separation, and the obtained extract is concentrated under reduced pressure, and the concentrate is non-hydrophilic such as ethyl acetate or chloroform. It can be extracted with a neutral solvent. Further, when the content of the FO-7711 CD4 and / or CD6 substance is extremely large in either the culture filtrate or the bacterial cells, the FO-711 may be extracted from the larger one. In order to separate and purify the FO-7711 CD4 and / or CD6 substance from the cultured cells, usually, a mixture of the organic solvent extract of the culture filtrate and the cells is concentrated or a mixture of the non-hydrophilic solvent such as acetic acid is used. The FO-711 CD4 and / or CD is extracted by extracting with ethyl and chloroform.
Six substances are dissolved in the organic solvent.
【0028】このようにして得られた有機溶媒層は、必
要に応じて種々の脱水剤、たとえば無水硫酸ナトリウ
ム、ビーズゲルなどを加えて脱水された後、減圧下で有
機溶媒が留去される。この濃縮操作において、本FO−
7711 CD4及び/又はCD6物質は安定である
が、通常、加熱温度を50℃以下となるように行うこと
が好ましく、特に好ましくは30℃〜40℃である。The organic solvent layer thus obtained is dehydrated by adding various dehydrating agents, for example, anhydrous sodium sulfate, bead gel or the like, if necessary, and then the organic solvent is distilled off under reduced pressure. In this concentration operation, the FO-
7711 CD4 and / or CD6 substance is stable, but it is usually preferable to carry out the heating at a temperature of 50 ° C. or lower, particularly preferably 30 ° C. to 40 ° C.
【0029】得られた抽出物をさらに精製するために
は、本FO−7711 CD4及び/又はCD6物質と
それらの混合物との溶解度の差や、混じり合わない二液
層間の分配の差や、各種吸着担体に対する吸着力の差を
利用した多くの手段が可能であるが、特にクロマトグラ
フィーは、本FO−7711 CD4及び/又はCD6
物質の精製に有効な方法である。In order to further purify the obtained extract, the difference in solubility between the FO-7711 CD4 and / or CD6 substance and a mixture thereof, the difference in partition between two immiscible liquid layers, various Many means utilizing the difference in adsorptive power to the adsorbent are possible. In particular, chromatography is performed using the FO-7711 CD4 and / or CD6.
This is an effective method for purifying substances.
【0030】本FO−7711 CD4及び/又はCD
6物質の精製に有効なクロマトグラフィーは、シリカゲ
ル、アルミナ、活性炭セルロース、ヒドロキシアパタイ
ト、HP−20などの吸着樹脂などによる吸着クロマト
グラフィー、シラン化シリカゲル、オクタデシルシラン
化シリカゲルなどを用いる逆相分配クロマトグラフィ
ー、セファデックスLH−20、トヨパール(商品名、
HW−40)などを用いる分子ふるいにもとづくゲルろ
過クロマトグラフィーなどを用いるイオン交換クロマト
グラフィーなどが挙げられるThe FO-7711 CD4 and / or CD
Chromatography effective for the purification of the six substances includes adsorption chromatography using an adsorption resin such as silica gel, alumina, activated carbon cellulose, hydroxyapatite, and HP-20, and reversed-phase partition chromatography using silanized silica gel, octadecyl silanized silica gel, and the like. , Sephadex LH-20, Toyopearl (trade name,
HW-40) and the like, and ion-exchange chromatography using gel filtration chromatography based on a molecular sieve.
【0031】本FO−7711 CD4及び/又はCD
6物質はこれらのクロマトグラフィーや電気泳動、向流
分配、限外ろ過などの手段を、単独あるいは任意の順序
にて組合せまたは反復して用いることにより分離、精製
することができる。例えば、上記粗製物を少量のクロロ
ホルムに溶かし、シリカゲルに吸着させ、クロロホルム
−メタノール系混合溶媒液を用いて、カラムクロマトグ
ラフィーを行い、その活性画分を減圧濃縮後、少量のメ
タノールに溶かし、これを逆相の高速液体クロマトグラ
フィーを行うことにより、分離、精製することができ
る。The present FO-7711 CD4 and / or CD
The six substances can be separated and purified by using these means such as chromatography, electrophoresis, countercurrent distribution, and ultrafiltration singly or in combination or repetition in any order. For example, the above crude product is dissolved in a small amount of chloroform, adsorbed on silica gel, and subjected to column chromatography using a chloroform-methanol mixed solvent, and the active fraction is concentrated under reduced pressure, and then dissolved in a small amount of methanol. Can be separated and purified by reverse-phase high performance liquid chromatography.
【0032】次に本発明のFO−7711 CD4物質
の物理化学的性質について述べる。 (1)性状 :白色粉末 (2)分子量 :503[高分解能高速原子衝撃(FA
B)マススペクトルによる] (3)分子式 :C32H41O4 N1 (4)比旋光度:[α]D 27+50.0°(c=0.
1、CHCl3 ) (5)高分解能スペクトル:FAB−MS 502(M
−H)- Next, the physicochemical properties of the FO-7711 CD4 substance of the present invention will be described. (1) Property: white powder (2) Molecular weight: 503 [High-resolution high-speed atom bombardment (FA
B) by mass spectrum] (3) Molecular formula: C 32 H 41 O 4 N 1 (4) Specific rotation: [α] D 27 + 50.0 ° (c = 0.
1, CHCl 3 ) (5) High resolution spectrum: FAB-MS 502 (M
-H) -
【0033】(6)紫外・可視部吸収スペクトル:メタ
ノール中で測定した紫外部吸収スペクトルは図1に示す
通りであり、266(log ε=3.44)、235
(log ε=3.56)、212(log ε=3.
74)nm付近に特徴的な吸収極大を示す (7)赤外部吸収スペクトル:臭化カリウム法で測定し
た赤外部吸収スペクトルは図2に示す通りであり、34
19、2949、2924、1687、1614、15
06、1226cm-1に特徴的な吸収帯を有する (8)溶剤に対する溶解性:アセトン、クロロホルム、
酢酸エチル、メタノール、エタノールに可溶、水に難溶(6) Ultraviolet / visible absorption spectrum: The ultraviolet absorption spectrum measured in methanol is as shown in FIG. 1 and is 266 (log ε = 3.44), 235
(Log ε = 3.56), 212 (log ε = 3.
74) shows a characteristic absorption maximum near nm. (7) Infrared absorption spectrum: The infrared absorption spectrum measured by the potassium bromide method is as shown in FIG.
19, 2949, 2924, 1687, 1614, 15
06, having a characteristic absorption band at 1226 cm -1 (8) Solubility in solvents: acetone, chloroform,
Soluble in ethyl acetate, methanol and ethanol, poorly soluble in water
【0034】(9)呈色反応:硫酸、ヨウ素に陽性 (10)プロトン核磁気共鳴スペクトル:バリアン ジ
ャパン(VarianJapan)社製、XL−400
型NMRスペクトロメータを用いて測定した 1H−核磁
気共鳴スペクトル(重ジメチルスルホキシド溶液中で測
定、400MHz)は図3に示す通りであり、水素およ
び炭素の化学シフト(ppm)は、下記の表2に示す通
りである (11)13C−核磁気共鳴スペクトル(重ジメチルスル
ホキシド溶液中で測定、100.58MHz)は図4に
示す通りであり、水素および炭素の化学シフト(pp
m)は、下記の表2に示す通りである。(9) Color reaction: positive for sulfuric acid and iodine (10) Proton nuclear magnetic resonance spectrum: Varian
XL-400, manufactured by Varian Japan
Was measured using a type NMR spectrometer. 1H-nuclear magnet
Gas resonance spectrum (measured in deuterated dimethyl sulfoxide solution)
400 MHz) is as shown in FIG.
And chemical shifts (ppm) of carbon are shown in Table 2 below.
(11)13C-nuclear magnetic resonance spectrum (deuterated dimethyl sulf
(Measured in a hydroxide solution, 100.58 MHz) is shown in FIG.
As shown, the chemical shifts of hydrogen and carbon (pp
m) is as shown in Table 2 below.
【0035】[0035]
【表2】 表中において、sは一重線、dは二重線、tは三重線、
qは四重線、mは多重線、Hはプロトンの数、Jはスピ
ン結合定数(Hz)を示す。 (12)化学構造:下記式[I]のとおり[Table 2] In the table, s is a singlet, d is a doublet, t is a triplet,
q indicates a quadruple, m indicates a multiplet, H indicates the number of protons, and J indicates a spin coupling constant (Hz). (12) Chemical structure: as in the following formula [I]
【0036】[0036]
【化3】 Embedded image
【0037】次に本発明のFO−7711 CD6物質
の物理化学的性質について述べる。 (1)性状 :白色粉末 (2)分子量 :503[高分解能高速原子衝撃(FA
B)マススペクトルによる] (3)分子式 :C32H41O4 N1 (4)比旋光度[α]D 27+112.8°(c=0.
1、CHCl3 ) (5)高分解能スペクトル:FAB−MS 502(M
−H)- Next, the physicochemical properties of the FO-7711 CD6 substance of the present invention will be described. (1) Property: white powder (2) Molecular weight: 503 [High-resolution high-speed atom bombardment (FA
B) Mass spectrum] (3) Molecular formula: C 32 H 41 O 4 N 1 (4) Specific rotation [α] D 27 + 12.8 ° (c = 0.
1, CHCl 3 ) (5) High resolution spectrum: FAB-MS 502 (M
-H) -
【0038】(6)紫外・可視部吸収スペクトル:メタ
ノール中で測定した紫外部吸収スペクトルは図5に示す
通りであり、271(ショルダー、log ε=3.5
2)、224(log ε=4.19)nm付近に特徴
的な吸収極大を示す (7)赤外部吸収スペクトル:臭化カリウム法で測定し
た赤外部吸収スペクトルは図6に示す通りであり、34
23、2949、2924、1689、1612、15
06、1227cm-1に特徴的な吸収帯を有する (8)溶剤に対する溶解性:アセトン、クロロホルム、
酢酸エチル、メタノール、エタノールに可溶、水に難溶(6) Ultraviolet / visible absorption spectrum: The ultraviolet absorption spectrum measured in methanol is as shown in FIG. 5, and is 271 (shoulder, log ε = 3.5)
2) shows a characteristic absorption maximum near 224 (log ε = 4.19) nm. (7) Infrared absorption spectrum: The infrared absorption spectrum measured by the potassium bromide method is as shown in FIG. 34
23, 2949, 2924, 1689, 1612, 15
06, having a characteristic absorption band at 1227 cm -1 (8) Solubility in solvents: acetone, chloroform,
Soluble in ethyl acetate, methanol and ethanol, poorly soluble in water
【0039】(9)呈色反応:硫酸、ヨウ素に陽性 (10)プロトン核磁気共鳴スペクトル:バリアン ジ
ャパン(VarianJapan)社製、UNITY
INOVA型NMRスペクトロメータを用いて測定した
1H−核磁気共鳴スペクトル(重ジメチルスルホキシド
溶液中、600MHz)は図7に示す通りであり、水素
および炭素の化学シフト(ppm)は、下記の表3に示
す通りである (11)13C−核磁気共鳴スペクトル(重ジメチルスル
ホキシド溶液中、150.84MHz)は図8に示す通
りであり、水素および炭素の化学シフト(ppm)は、
下記の表3に示す通りである。(9) Color reaction: positive for sulfuric acid and iodine (10) Proton nuclear magnetic resonance spectrum: UNITY manufactured by Varian Japan
Measured using an INOVA type NMR spectrometer
The 1 H-nuclear magnetic resonance spectrum (in deuterated dimethyl sulfoxide solution, 600 MHz) is as shown in FIG. 7, and the chemical shifts (ppm) of hydrogen and carbon are as shown in Table 3 below. (11) 13 C -The nuclear magnetic resonance spectrum (150.84 MHz in deuterated dimethyl sulfoxide solution) is as shown in FIG. 8, and the chemical shifts (ppm) of hydrogen and carbon are as follows:
It is as shown in Table 3 below.
【0040】[0040]
【表3】 表中において、sは一重線、dは二重線、tは三重線、
qは四重線、mは多重線、Hはプロトンの数、Jはスピ
ン結合定数(Hz)を示す。 (12)化学構造:下記式[II]のとおり[Table 3] In the table, s is a singlet, d is a doublet, t is a triplet,
q indicates a quadruple, m indicates a multiplet, H indicates the number of protons, and J indicates a spin coupling constant (Hz). (12) Chemical structure: as in the following formula [II]
【0041】[0041]
【化4】 Embedded image
【0042】以上のように、本FO−7711 CD4
及び/又はFO−7711 CD6物質の各種物理学的
性状やスペクトルデータを詳細に検討した結果、本生理
活性物質FO−7711 CD4及び/又はFO−77
11 CD6は下記式[I]及び/又は[II]で表さ
れる化学構造であることが決定された。As described above, the present FO-7711 CD4
As a result of examining various physical properties and spectrum data of the FO-7711 CD6 substance in detail, the physiologically active substance FO-7711 CD4 and / or FO-77 was obtained.
11 CD6 was determined to have a chemical structure represented by the following formulas [I] and / or [II].
【0043】[0043]
【化5】 Embedded image
【0044】上記したように、本FO−7711 CD
4及び/又はFO−7711 CD6物質の各種物理化
学的性状について詳述したが、このような性質に一致す
る化合物はこれまでに全く報告されておらず、式[I]
及び/又は[II]で表される生理活性物質FO−77
11 CD4及び/又はFO−7711 CD6は新規
物質であると決定した。As described above, the present FO-7711 CD
4 and / or various physical-chemical properties of the FO-7711 CD6 substance have been described in detail, but no compound corresponding to such properties has been reported so far, and the compound of the formula [I]
And / or the biologically active substance FO-77 represented by [II]
11 CD4 and / or FO-7711 CD6 were determined to be novel substances.
【0045】次に、本発明のFO−7711 CD4物
質の生物学的性質について以下に述べる。本FO−77
11 CD4物質の抗菌活性については、日本化学療法
学会標準法(Chemotherapy 29,76
(1981)に基づき、最小発育阻止濃度(MIC)を
測定した。Muller−Hilon Broth(D
ifco社製)に1.5%の寒天を加え、培地を溶解
し、その温度が60〜50℃になったところで、100
0μg/mLから2倍希釈を行った抗菌剤溶液を1/9
量加え、よくまぜ合わせ、シャーレに分注して平板とし
た。増菌用培地に培養後菌数を約106 /mLに調整し
たものを接種菌液とし、1スポット接種した。18〜2
0時間、37℃にて培養後、完全に培養が阻止された最
低濃度をもってMIC値とした。本FO−7711 C
D4物質の結果は表4に示す通りである。Next, the biological properties of the FO-7711 CD4 substance of the present invention will be described below. Book FO-77
11 Regarding the antimicrobial activity of the CD4 substance, the standard method of the Japanese Society of Chemotherapy (Chemotherapy 29,76)
(1981), the minimum inhibitory concentration (MIC) was measured. Muller-Hilon Broth (D
ifco), 1.5% agar was added to dissolve the medium, and when the temperature reached 60 to 50 ° C, 100% was added.
The antibacterial agent solution diluted 2-fold from 0 μg / mL was added to 1/9
The resulting mixture was mixed well, mixed well, and dispensed into petri dishes to form flat plates. After culturing in a culture medium for enrichment, the number of bacteria was adjusted to about 10 6 / mL and used as an inoculum, and one spot was inoculated. 18-2
After culturing at 37 ° C. for 0 hour, the MIC value was defined as the lowest concentration at which culturing was completely inhibited. This FO-7711 C
The results for substance D4 are shown in Table 4.
【0046】[0046]
【表4】 [Table 4]
【0047】次にまた、本発明のFO−7711 CD
6物質の生物学的性質について以下に述べる。本FO−
7711 CD6物質の抗菌活性については、日本化学
療法学会標準法(Chemotherapy 29,7
6(1981)に基づき、最小発育阻止濃度(MIC)
を測定した。Muller−Hilon Broth
(Difco社製)に1.5%の寒天を加え、培地を溶
解し、その温度が60〜50℃になったところで、10
00μg/mLから2倍希釈を行った抗菌剤溶液を1/
9量加え、よくまぜ合わせ、シャーレに分注して平板と
した。増菌用培地に培養後菌数を約106 /mLに調整
したものを接種菌液とし、1スポット接種した。18〜
20時間、37℃にて培養後、完全に培養が阻止された
最低濃度をもってMIC値とした。本FO−7711
CD6物質の結果は表5に示す通りである。Next, the FO-7711 CD of the present invention
The biological properties of the six substances are described below. This FO-
7711 The antimicrobial activity of the CD6 substance is determined by the standard method of the Japanese Chemotherapy Society (Chemotherapy 29,7).
6 (1981), minimum inhibitory concentration (MIC)
Was measured. Muller-Hilon Broth
(Manufactured by Difco), 1.5% agar was added to dissolve the medium, and when the temperature reached 60 to 50 ° C, 10%
The antibacterial agent solution diluted 2-fold from 00 μg / mL was added to 1 /
Nine amounts were added, mixed well, and dispensed into a petri dish to form a plate. After culturing in a culture medium for enrichment, the number of bacteria was adjusted to about 10 6 / mL and used as an inoculum, and one spot was inoculated. 18 ~
After culturing at 37 ° C. for 20 hours, the MIC value was defined as the lowest concentration at which culturing was completely inhibited. This FO-7711
The results for the CD6 material are shown in Table 5.
【0048】[0048]
【表5】 [Table 5]
【0049】次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれのみに限定されるものではない。Next, the present invention will be described specifically with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
【実施例】ペニシリウム エスピー FO−7711
(Penicillium sp.FO−7711)
(FERM P−18211)の胞子懸濁液(107 /
mL)150μLを、グルコース2.0%、ポリペプト
ン(日本製薬社製)0.5%、寒天0.1%、酵母エキ
ス(オリエンタル酵母工業社製)0.2%、硫酸マグネ
シウム7水和物0.05%、リン酸二水素カリウム0.
1%からなる液体培地(pH6.0)を100mlづつ
分注した500ml容三角フラスコ1本に接種し、27
℃で3日間振とう培養し、種培養液とした。[Example] Penicillium sp. FO-7711
(Penicillium sp. FO-7711)
(FERM P-18211) spore suspension (10 7 /
mL) of glucose 2.0%, polypeptone (Nippon Pharmaceutical Co., Ltd.) 0.5%, agar 0.1%, yeast extract (Oriental Yeast Co., Ltd.) 0.2%, magnesium sulfate heptahydrate 0 0.05%, potassium dihydrogen phosphate 0.
A 1% liquid medium (pH 6.0) was inoculated into one 500 ml Erlenmeyer flask dispensed 100 ml at a time.
C. for 3 days with shaking to obtain a seed culture solution.
【0050】マルトース2.0%、乾燥酵母3.0%、
臭化カリウム1.0%、リン酸二水素ナトリウム0.0
5%、硫酸マンガン7水和物0.05%を溶解した液体
培地(pH6.0)を30リットル容ジャーファーメン
ターの20リットル仕込み、滅菌した後、上記の方法で
得られた種培養液200mL(1%)を無菌液に移植
し、27℃、6日間通気攪拌培養して、培養液約20リ
ットルを得た。Maltose 2.0%, dried yeast 3.0%,
Potassium bromide 1.0%, sodium dihydrogen phosphate 0.0
After adding 20 liters of a liquid medium (pH 6.0) in which 5% and 0.05% of manganese sulfate heptahydrate were dissolved in a 30-liter jar fermenter, sterilized, and then 200 mL of a seed culture solution obtained by the above method was used. (1%) was transplanted to a sterile solution, and cultured with aeration and agitation at 27 ° C. for 6 days to obtain about 20 liters of the culture solution.
【0051】培養液は遠心分離し、得られた菌体をアセ
トン5リットルで抽出し、蒸留水3リットルを加えて、
減圧濃縮してアセトンを留去し、水に転溶した。これに
酢酸エチルを等量加えて充分攪拌した後、遠心分離によ
り酢酸エチル抽出液を分離した。また、培養液は等量の
酢酸エチルを加えて充分攪拌した後、遠心分離により酢
酸エチル抽出液を分離した。それぞれから得られた酢酸
エチル抽出液を混合してロータリーエバポレーターにて
減圧濃縮して粗エキス5.2gを得た。The culture solution was centrifuged, and the obtained cells were extracted with 5 L of acetone, and 3 L of distilled water was added.
After concentration under reduced pressure, acetone was distilled off and the solution was dissolved in water. An equal amount of ethyl acetate was added thereto, and the mixture was sufficiently stirred, and then an ethyl acetate extract was separated by centrifugation. Further, the culture solution was added with an equal volume of ethyl acetate, stirred sufficiently, and then an ethyl acetate extract was separated by centrifugation. The ethyl acetate extracts obtained from each were mixed and concentrated under reduced pressure using a rotary evaporator to obtain 5.2 g of a crude extract.
【0052】この粗エキスについて、あらかじめクロロ
ホルムで充填されたシリカゲル(70〜230メッシ
ュ、メルク社製)カラムに吸着せしめ、クロロホルム−
メタノール混合溶媒系で溶出し、FO−7711 CD
4及び/又はCD6物質を含む活性画分を得た。さら
に、この活性画分をあらかじめクロロホルムで充填され
たシリカゲル(70〜230メッシュ、メルク社製)カ
ラムに吸着せしめ、クロロホルム−メタノール混合溶媒
系で溶出し、FO−7711 CD4及び/又はCD6
物質を含む活性画分を得た。The crude extract was adsorbed on a silica gel (70-230 mesh, Merck) column previously filled with chloroform, and the chloroform-
Elution with a mixed solvent of methanol and FO-7711 CD
An active fraction containing 4 and / or CD6 material was obtained. Further, this active fraction was adsorbed onto a silica gel (70-230 mesh, Merck) column previously filled with chloroform, eluted with a chloroform-methanol mixed solvent system, and FO-7711 CD4 and / or CD6 was eluted.
An active fraction containing the substance was obtained.
【0053】更に、この活性画分を少量のメタノールに
溶解し、高速液体クロマトグラフィー(センシューパッ
ク・ペガシルB、内径20mm、長さ250mm)にか
け、80%アセトニトリル−H2 O溶液を移動相として
分取することにより、本FO−7711 CD4物質の
純品36.4mg、FO−7711 CD6物質の純品
68.8mgをそれぞれ得た。Further, this active fraction was dissolved in a small amount of methanol and subjected to high performance liquid chromatography (Sensepak Pegasil B, inner diameter 20 mm, length 250 mm), and an 80% acetonitrile-H 2 O solution was used as a mobile phase. By fractionation, 36.4 mg of a pure product of the present FO-7711 CD4 substance and 68.8 mg of a pure product of the FO-7711 CD6 substance were obtained.
【0054】[0054]
【発明の効果】以上のとおり、ペニシリウム属に属する
生理活性物質FO−7711 CD4及び/又はCD6
を生産する能力を有する微生物を培地に培養して、その
培養物中に生理活性物質FO−7711 CD4及び/
又はCD6を蓄積せしめ、該培養物から生理活性物質F
O−7711 CD4及び/又はCD6を採取した物質
は、多剤耐性黄色ブドウ球菌の発育を抑制することが認
められた。従って、多剤耐性菌が関与すると考えられる
疾患、例えば院内感染などの感染症に対しての効果が期
待される。As described above, the physiologically active substance FO-7711 belonging to the genus Penicillium CD4 and / or CD6
A microorganism having the ability to produce E. coli is cultured in a culture medium, and the physiologically active substance FO-7711 CD4 and / or
Alternatively, CD6 is accumulated and the physiologically active substance F
The substance from which O-7711 CD4 and / or CD6 was collected was found to inhibit the growth of multidrug-resistant Staphylococcus aureus. Therefore, it is expected to be effective against diseases considered to involve multidrug-resistant bacteria, for example, infectious diseases such as hospital-acquired infections.
【図1】本発明による生理活性物質FO−7711 C
D4の紫外部吸収スペクトル(メタノール中)である。FIG. 1 shows a physiologically active substance FO-7711 C according to the present invention.
It is an ultraviolet absorption spectrum (in methanol) of D4.
【図2】本発明による生理活性物質FO−7711 C
D4の赤外部吸収スペクトル(臭化カリウム)である。FIG. 2 shows a physiologically active substance FO-7711 C according to the present invention.
It is an infrared absorption spectrum (potassium bromide) of D4.
【図3】本発明による生理活性物質FO−7711 C
D4の 1H−核磁気共鳴スペクトル(重ジメチルスルホ
キシド溶液中、400MHz)である。FIG. 3 is a physiologically active substance FO-7711 C according to the present invention.
1 is a 1 H-nuclear magnetic resonance spectrum of D4 (400 MHz in a heavy dimethyl sulfoxide solution).
【図4】本発明による生理活性物質FO−7711 C
D4の13C−核磁気共鳴スペクトル(重ジメチルスルホ
キシド溶液中、100.58MHz)である。FIG. 4 is a physiologically active substance FO-7711 C according to the present invention.
It is a 13 C-nuclear magnetic resonance spectrum (100.58 MHz in deuterated dimethyl sulfoxide solution) of D4.
【図5】本発明による生理活性物質FO−7711 C
D6の紫外部吸収スペクトル(メタノール中)である。FIG. 5 is a physiologically active substance FO-7711 C according to the present invention.
It is an ultraviolet absorption spectrum (in methanol) of D6.
【図6】本発明による生理活性物質FO−7711 C
D6の赤外部吸収スペクトル(臭化カリウム)である。FIG. 6 shows a physiologically active substance FO-7711 C according to the present invention.
It is an infrared absorption spectrum (potassium bromide) of D6.
【図7】本発明による生理活性物質FO−7711 C
D6の 1H−核磁気共鳴スペクトル(重ジメチルスルホ
キシド溶液中、600MHz)である。FIG. 7 shows a physiologically active substance FO-7711 C according to the present invention.
1 is a 1 H-nuclear magnetic resonance spectrum of D6 (in a heavy dimethyl sulfoxide solution, 600 MHz).
【図8】本発明による生理活性物質FO−7711 C
D6の13C−核磁気共鳴スペクトル(重ジメチルスルホ
キシド溶液中、150.84MHz)である。FIG. 8 is a physiologically active substance FO-7711 C according to the present invention.
It is a 13 C-nuclear magnetic resonance spectrum of D6 (150.84 MHz in deuterated dimethyl sulfoxide solution).
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 FI テーマコート゛(参考) (C12P 17/18 (C12P 17/18 C C12R 1:80) C12R 1:80) (72)発明者 林 正彦 東京都港区白金5丁目9番1号 社団法人 北里研究所内 (72)発明者 増間 碌郎 東京都港区白金5丁目9番1号 社団法人 北里研究所内 (72)発明者 深海 明子 東京都港区白金5丁目9番1号 社団法人 北里研究所内 Fターム(参考) 4B064 AE58 BA06 BE07 BE09 BE10 BE14 BG01 BH01 BH02 BH06 BH10 CA05 CE08 CE09 CE10 DA01 4B065 AA67X AC14 BA22 BD16 CA18 CA34 CA44 4C050 AA01 BB04 CC20 EE01 GG03 HH01 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) (C12P 17/18 (C12P 17/18 C C12R 1:80) C12R 1:80) (72) Inventor Hayashi Masahiko 5-9-1, Shirogane, Minato-ku, Tokyo Inside Kitasato Institute (72) Inventor Rokuro Masuma 5-9-1, Shirogane, Minato-ku, Tokyo Inside Kitasato Institute (72) Inventor Akiko Fukami Tokyo 5-9-1 Shirogane, Minato-ku, Tokyo F-term in Kitasato Institute (reference) 4B064 AE58 BA06 BE07 BE09 BE10 BE14 BG01 BH01 BH02 BH06 BH10 CA05 CE08 CE09 CE10 DA01 4B065 AA67X AC14 BA22 BD16 CA18 CA34 CA44 4C050 AA01EE0104 CC GG03 HH01
Claims (6)
性物質FO−7711CD4及び/又はCD6。1. The following formula [I] and / or formula [II] A novel physiologically active substance FO-7711CD4 and / or CD6, which is a compound represented by the formula:
理活性物質FO−7711 CD4及び/又はCD6。 〔1〕生理活性物質FO−7711 CD4 (1)性状 :白色粉末 (2)分子量 :503[高分解能高速原子衝撃(FA
B)マススぺクトルによる] (3)分子式 :C32H41O4 N1 (4)紫外・可視部吸収スペクトル:メタノール中で測
定した紫外部吸収スペクトルは図1に示す通りであり、
266(log ε=3.44)、235(log ε
=3.56)、212(log ε=3.74)nm付
近に特徴的な吸収極大を示す (5)赤外部吸収スペクトル:臭化カリウム法で測定し
た赤外部吸収スペクトルは図2に示す通りであり、34
19、2949、2924、1687、1614、15
06、1226cm-1に特徴的な吸収帯を有する (6)比旋光度[α]D 27+50.0°(c=0.1、
CHCl3 ) (7)溶剤に対する溶解性:アセトン、クロロホルム、
酢酸エチル、メタノール、エタノールに可溶、水に難溶 (8)呈色反応:硫酸、ヨウ素に陽性 〔2〕生理活性物質FO−7711 CD6 (1)性状 :白色粉末 (2)分子量 :503[高分解能高速原子衝撃(FA
B)マススぺクトルによる] (3)分子式 :C32H41O4 N1 (4)紫外・可視部吸収スペクトル:メタノール中で測
定した紫外部吸収スペクトルは図5に示す通りであり、
271(ショルダー、log ε=3.52)、224
(log ε=4.19)nm付近に特徴的な吸収極大
を示す (5)赤外部吸収スペクトル:臭化カリウム法で測定し
た赤外部吸収スペクトルは図6に示す通りであり、34
23、2949、2924、1689、1612、15
06、1227cm-1に特徴的な吸収帯を有する (6)比旋光度[α]D 27+112.8°(c=0.
1、CHCl3 ) (7)溶剤に対する溶解性:アセトン、クロロホルム、
酢酸エチル、メタノール、エタノールに可溶、水に難溶 (8)呈色反応:硫酸、ヨウ素に陽性2. A novel physiologically active substance FO-7711 CD4 and / or CD6 having the following physicochemical properties. [1] Bioactive substance FO-7711 CD4 (1) Property: white powder (2) Molecular weight: 503 [High-resolution fast atom bombardment (FA
B) Mass spectrum] (3) Molecular formula: C 32 H 41 O 4 N 1 (4) Ultraviolet / visible absorption spectrum: The ultraviolet absorption spectrum measured in methanol is as shown in FIG.
266 (log ε = 3.44), 235 (log ε
= 3.56) and a characteristic absorption maximum near 212 (log ε = 3.74) nm. (5) Infrared absorption spectrum: The infrared absorption spectrum measured by the potassium bromide method is as shown in FIG. And 34
19, 2949, 2924, 1687, 1614, 15
06, having a characteristic absorption band at 1226 cm -1 (6) Specific rotation [α] D 27 + 50.0 ° (c = 0.1,
CHCl 3 ) (7) Solubility in solvent: acetone, chloroform,
Soluble in ethyl acetate, methanol and ethanol, poorly soluble in water (8) Color reaction: positive for sulfuric acid and iodine [2] Bioactive substance FO-7711 CD6 (1) Property: white powder (2) Molecular weight: 503 [ High resolution fast atom bombardment (FA
B) Mass spectrum] (3) Molecular formula: C 32 H 41 O 4 N 1 (4) Ultraviolet / visible absorption spectrum: The ultraviolet absorption spectrum measured in methanol is as shown in FIG.
271 (shoulder, log ε = 3.52), 224
(Log ε = 4.19) shows a characteristic absorption maximum near nm. (5) Infrared absorption spectrum: The infrared absorption spectrum measured by the potassium bromide method is as shown in FIG.
23, 2949, 2924, 1689, 1612, 15
06, having a characteristic absorption band at 1227 cm -1 (6) Specific rotation [α] D 27 + 12.8 ° (c = 0.
1, CHCl 3 ) (7) Solubility in solvent: acetone, chloroform,
Soluble in ethyl acetate, methanol and ethanol, poorly soluble in water (8) Color reaction: positive for sulfuric acid and iodine
O−7711 CD4及び/又はCD6を生産する能力
を有する微生物を培地に培養して、その培養物中に生理
活性物質FO−7711 CD4及び/又はCD6を蓄
積せしめ、該培養物から生理活性物質FO−7711
CD4及び/又はCD6を採取することを特徴とする新
規な生理活性物質FO−7711 CD4及び/又はC
D6の製造法。3. A physiologically active substance F belonging to the genus Penicillium
A microorganism having the ability to produce O-7711 CD4 and / or CD6 is cultured in a medium to accumulate the physiologically active substance FO-7711 CD4 and / or CD6 in the culture. −7711
A novel bioactive substance FO-7711 CD4 and / or C characterized by collecting CD4 and / or CD6
Method for producing D6.
O−7711 CD4及び/又はCD6を生産する能力
を有する微生物が、ペニシリウム エスピー(Peni
cillium sp.)FO−7711株である請求
項3記載の製造法。4. A bioactive substance F belonging to the genus Penicillium
A microorganism capable of producing O-7711 CD4 and / or CD6 is Penicillium sp.
C. sp. 4. The method according to claim 3, which is FO-7711 strain.
O−7711 CD4及び/又はCD6を生産する能力
を有する微生物。5. A bioactive substance F belonging to the genus Penicillium
O-7711 A microorganism capable of producing CD4 and / or CD6.
enicillium sp.)FO−7711(FE
RM P−18211)である請求項5記載の微生物。6. The method according to claim 6, wherein the microorganism is penicillium sp.
enicilium sp. ) FO-7711 (FE
The microorganism according to claim 5, which is RMP-18211).
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