JP2001512494A

JP2001512494A - Method for preventing or delaying the onset of Alzheimer's disease and compositions therefor

Info

Publication number: JP2001512494A
Application number: JP53310199A
Authority: JP
Inventors: ノバク，イーゴン
Original assignee: フォーブスメディ−テックインコーポレイテッド
Priority date: 1998-12-18
Filing date: 1998-12-18
Publication date: 2001-08-21

Abstract

(57)【要約】動物におけるアルツハイマー病を予防するおよび／またはその発病を遅延させる方法は該動物にフィトステロール組成物を投与することからなる。動物におけるアルツハイマー病を予防するおよび／またはその発病を遅延させるために有益な組成物はフィトステロール組成物よりなる。 (57) SUMMARY A method of preventing and / or delaying the onset of Alzheimer's disease in an animal comprises administering to the animal a phytosterol composition. A composition useful for preventing and / or delaying the onset of Alzheimer's disease in an animal comprises a phytosterol composition.

Description

【発明の詳細な説明】アルツハイマー病を予防するまたはその発病を遅延させる方法およびそのための組成物発明の分野本発明はアルツハイマー病の分野およびそれに対する予防およびその発病を遅延させる方法に関する。発明の背景アルツハイマー病〔Alzheimer's disease)，”ＡＤ”〕は不変的に進行する痴呆性の疾病である。主な病理学上の顕著な特徴は幾つかの感受性の高いニューロン細胞における細胞骨格の変化の発生である。これらの変化は年齢の進行とともに必然的におこるのではないが、一度病気が始まると自発的な回復または軽減は見られない。以下にさらに記載すると、初期の皮質の変化は内側の側頭葉の乏しくミエリン化された経嗅脳溝内領域（transentorhinal region）で現れる。次いでそれが他の皮質領域に達するにつれ、予想できるパターンに従う破壊的な過程が起こる。もつれをもつ（tangle-bearing）ニューロンの所在および変化のひどさは臨床的に無症状の段階Ｉ−IIから完全に発病したＡＤを明示する段階Ｖ−ＶＩまでの病気の進行における６つの等級を与える。比較的少ない数の患者は特に早い変化を示すが、高齢は病変の発達に対する先行必要条件でないことを示している。従ってＡＤはこのように年齢に関係があるが年齢依存性の病気ではない。ＡＤ進行の原因および機構のために現在多くの理論があり、多くは遺伝的な欠陥に関するものである。非常に少ない割合のＡＤ患者はアミロイド前駆体タンパク質（amyloid precursor protein，”ＡＰＰ”）の製造のための遺伝子に関する染色体２１に欠陥を有する。ＡＰＰは細胞の成長および修復に関与する大きなタンパク質であり、それが小さい消化できない(indigestible)タンパク質ベータ −アミロイド(beta-amyloid,”Ｂ−Ａ”)に開裂したとき、それは脳内の斑(plaq ues)内に蓄積され得る。別の興味深い研究は晩期発病の家族性ＡＤと、体中の細胞内外のコレステロールと他の脂質の移動に関与する分子量３４，０００のタンパク質であるアポリポ蛋白質−Ｅ（apolipoproein-E，”ａｐｏ−Ｅ”）をコードする染色体１９における多形性遺伝子（polymorphic gean）との関係に焦点を当てている。脂質輸送および代謝におけるａｐｏ−Ｅの役割は重大で（critical）ありさらに以下で議論される。ａｐｏ−Ｅの神経生物学的役割は多年にわたって多くの観察から得られている。第一に、ａｐｏ−ＥのｍＲＮＡは脳中に多く存在し、そこでそれは主にアステロサイトによって合成されそして分泌される(Elshourbagy et al．1985 )。第二にリポ蛋白質を含むａｐｏ−Ｅが脳脊髄液中に見出されそして中枢神経系の脂質輸送における主な役割を演じるようにみえる(Pitas et al.1987)。第三に、コレステロールの源を加えるａｐｏ−Ｅは培養の後根ガングリオン細胞において際立った神経突起伸長を促進する(Handelmann et al.1992)。第四に、末梢神経損傷の後にａｐｏ−Ｅレベルは劇的に増加する(Muller et al.1985)。従ってａｐｏ−Ｅは、軸索変性後に発生した脂質の除去と、軸索再生のための発芽する神経突起へのおよびその後の新しい軸索の髄鞘再形成のためのシュワン細胞へのこれらの脂質の再配分との両方に関与しているようである(Boyles et al.1989 )。単一の遺伝子座において相互優性の様式で受け継がれる、３つの異なる対立遺伝子（Ｅ−２，Ｅ−３，Ｅ−４）によってコード化される３つの異なるイソ型が存在するａｐｏ−Ｅについての役割の意味は、ＡＤの病原論において、ＡＤの２つの特徴的神経病理学的障害−細胞外での神経突起斑（Ｂ−Ａの沈着物に示される）および細胞内での神経原繊維のもつれ（タウ(tau)と呼ばれる微小管が結合したタンパク質のフィラメントに示される）−とのａｐｏ−Ｅの関係から特に生じるものである（レビューのため、Weisgraber et al.1994を御参照）。特に、ａｐｏ−Ｅ４イソ型とＡＤの間の遺伝的関係が見出されている。Ｅ４ホモ接合の個体は、同様にＥ４対立遺伝子を持たない個体よりもより大きな危険を示す、Ｅ４ヘテロ接合の個体よりもＡＤを発病するより大きい危険を示す。それによってこの相関関係が存在する正確な機構は分かりにくいままであるが、研究者らはいくつかの可能な答えを提供している。その方法によって、ＬＤＬレセプターへのａｐｏ−Ｅ２の結合の結合活性(avidity)を減少させてその結果Ｅ２ホモ接合体における血漿コレステロールレベルを増加させる結果となるような方法と同様に、それはこの対立遺伝子によって製造されるタンパク質の生物学的効果に関与しているかもしれない。ストリトマターら(Strittmatter et al(1993))はａｐｏ−Ｅ４が、他の２つのイソ型に比べて、老人性斑の増強された形成を導くＢ−Ａペプチドに対し有効に結合することを示し、そしてそれによりａｐｏ−Ｅ４の存在ではなく、他のａｐｏ−Ｅイソ型の欠損がＡＤへの疾病素因を増加させることを提案している(Strittmatter et al.1994a)。同様に、そのリン酸化された形態が神経原繊維のもつれの主な構成成分であるタウタンパク質とのａｐｏ−Ｅのイソ型−特異的な相互作用に関しては、ａｐｏ −Ｅ４ではなくａｐｏ−Ｅ３が高い結合活性でタウと結合することが示されている(Strittmatter et al(1994a)。この特異な作用はａｐｏ−Ｅ３が通常、タウタンパク質に微小管を安定化させており、１または２つのａｐｏ−Ｅ４対立遺伝子をもつ患者におけるａｐｏ−Ｅ３の減少または不在が、微小管からのタウの分離を引き起こし、その増強されたリン酸化および重合が病理学的に対になったラセン状のフィラメントにするという仮説を導いている。ＡＤ進行の領域の莫大な研究にも係わらず、治療法は少なく、この衰弱させる病気の予防および／または発病を遅延させる方法は実質上存在しない。本発明の目的は上記不利な状況を未然に防ぎまたは緩和することである。発明の要約本発明は動物のアツハイマー病（”ＡＤ”）を予防しおよび／またはその発病を遅延させる方法であって、動物にフィトステロール(phytosterol)組成物を投与することからなる方法を提供する。さらに、本発明はＡＤを予防しおよび／またはその発病を遅延させるのに有効な組成物であって、ベーターシトステロール、カムペステロールおよびスチグマスタノールを含む組成物を提供する。図面の簡単な説明本発明を以下の限定されない図面によって説明する：図１は、プラットフォームが四分円(Quadrant)−１にある場合の、各々の四分円（quadrant）の中にいる時間（％）として表した、モーリス・ウオーター・メイズ(Morris Water Maze)の結果を示すグラフを表す。図２は、プラットフォームを四分円−１から除いた場合の、各々の四分円の中にいる時間（％）として表した、モーリス・ウオーター・メイズの結果を示すグラフを表す。図３は、プラットフォームが四分円−３にある場合の、各々の四分円の中にいる時間（％）として表した、モーリス・ウオーター・メイズの結果を示すグラフを表す。図４は、プラットフォームを四分円−３から除いた場合の、各々の四分円の中にいる時間（％）として表した、モーリス・ウオーター・メイズ(Morris Water Ma ze)の結果を示すグラフを表す。発明の好ましい実施形態フィトステロールはヒトにとって直接の栄養価にならない植物中で合成されるステロール様の化合物である。植物においては、それらはヒトにおいてコレステロールが必要とされるのと同様に細胞機能のために必要とされる。平均的な西欧の食事は１日当たり３６０ｍｇまでのフィトステロールを含む。近年、これらの食物性植物ステロールは、多くの哺乳類種に給餌した場合の、それらの抗癌特性およびそれらのコレステロールレベルを減少させる能力により多くの注目を受けている。これまでは、植物ステロールはＡＤの予防および遅延させた発病（治療）において提案も報告もなされていない。化学的には、フィトステロールは構造においてコレステロールに親密に類似している。主なフィトステロールはβ−シトステロール(beta-sitosterol)、カムペステロール(campesterol)およびスチグマステロール(stigmasterol)である。他ではスチグマスタノール(stigmastanol)〔(β−シスシタノール(beta-sistano l)〕、デスモステロール(desmosterol)、カリナステロール(chalinasterol)、ポリフェラステロール(poriferasterol)、クリオナステロール(clionasterol)およびブラシカステロール(brassicasterol)である。本発明の組成物は全ての天然および合成型のフィトステロール、全ての水素化された類似物(counterparts) 、即ち異性体を含め、スタノールならびに全てのその誘導体を含む。フィトステロールは植物油類および野菜類から入手できるが、その量は十分な濃度または本発明の利点を与える正確な形態であれば必ずしも重要でない。本発明の範囲内で提供されるものは動物、とりわけヒトへ、フィトステロール組成物を投与することによってＡＤを予防しおよび／またはその発病を遅延させる方法である。この組成物はさらに以下で必要とされおよび記載されるような食品サプリメント、油、ビタミン、および治療用の製剤に直接混合できる。本発明のフィトステロール組成物がＡＤの遺伝的な先天的な素質に係わらず、一定地域の人々に広く分布させるための一般的に利用可能な食物品目に混合できることが考えられる。そうでなければ、これらの組成物はＡＤの特別な形態を発生させるリスクを負う個体、即ち家族性ＡＤを標的とする、より積極的なプログラムおいて選択的に投与できる。好ましい形態では組成物はサフラワー油、ゴマ油、コーン油、米糠油、オリーブ油、ナタネ油よりなる群から選択される植物油に混合される。オリーブ油への補足は該油が広く使用され、フィトステロールおよびポリ不飽和脂肪酸が低いので最も好ましい。そうでなければ組成物はバターまたはマーガリンのような飽和脂肪（ラード）ベースの製品またはショートニングに混合することができる。他の具体例では、組成物はＡＤの予防または治療のための他の慣用のまたは草本の（herbal）製品と共に製剤に混合される。これらの物(品)(product)は、それに限定されないが、登録商標アリセプト−リスペリドン（Aricept^TM-risperid one）〔約ＡＤに関係する進行を防除するのに役立つことが現在見出されている精神分裂病薬〕のようなコリンエステラーゼ阻害剤およびイチョウ(ginkgo)のような可能な記憶増強性の草本性治療薬である。本発明の基本となるのはＡＤの予防および／またはその発病を遅延させることにおけるフィトステロールの一般的な使用である。この目的を達成するための好ましい組成物は以下に列挙するが、それらは本発明の広い範囲を限定して説明するのでは決してなく、多くのフィトセテロールが単独でまたは種々の組合せとして同様の結果を達成できる。本願出願の好ましいフィトステロール組成物はβ−シトステロール、カムペステロール、スチグマスタノール（シトスタノール）および、所望により、カムペスタノール、およびそれらの類似体／誘導体である。一つの具体例では、本発明の組成物は少なくとも１０％のカムペステロールおよび７５％までのβ−シトステロールを含む。他の好ましい形態では、前記組成物は１０−２５％のカムペステロール、１０−４０％のスチグマスタノール及び４５−７５％のβ−シトステロールを含む。所望により、１−１０％、さらに好ましくは３％のカムペスタノールも存在していてよい。他の好ましい形態は本発明の組成物は以下の割合のフィトステロールを含む。 β−シトステロール（１）；カムペステロール（０．２−０．４）およびスチグマスタノール（０．２−０．５）。さらに好ましくは、カムペステロールおよびスチグマスタノールは合わせてβ−シトステロールの総濃度の少なくとも５０％に相当する。本発明の組成物は下記３つの基本的な植物ステロールの割合を含む。 β−シトステロールカムペステロールスチグマスタノール１０．３５４０．４１４１０．３３００．２０３１０．２６８０．２９９他の好ましい組成物は以下に示すような、植物ステロール配分（％にて示す）を有することが見出された。 β−シトステロールカムペステロールスチグマスタノール６２．６１６．６２３．２６４．７１６．４１７．２６０．０１３．６１６．３３２．０１４２９２５．５７４２．５５１１４１９６１１７２３しかしながら、これらの好ましい組成物のいずれかにおいて、他の植物ステロールが存在できることと理解するべきである。類似の補助剤または担体は必要なものとしてこの組成物の一部を形成する。本発明の組成物のデリバリーの方法に依存して、投与量は幾分か変更できる。一日当たりおおよそ１．０ｇないし３．０ｇが投与されることが最も好ましい。本発明の方法においては、上記で詳細に記載したフィトステロール組成物の個体への投与によってＡＤは予防されおよび／または発病が遅延される。食事的なフィトステロール投与によって、学習能力および記憶力の増強、年齢依存性シナプス損失の減少、および神経変性過程が見られる正確な機構は明らかではないが、しかしながら本願出願人は以下より詳細に概説する幾つかの理論を有する。これらの理論は本発明の範囲を制限すること意図するものではないが、逆に動物の脂質のホメオシタシスにおけるフィトステロールの複雑さ（complexi ty）を示すために役立つ。上記に示した本発明の背景技術で議論したように、ａｐｏ−Ｅ４表現型はヒトにおけるＡＤの重要な危険因子であることが示されている。ＡＤと心臓血管性の病気の間の相関関係を示す幾つかの証拠がある（Kalaria,1997）。提案されたフィトステロールの作用の機構を理解するために、ａｐｏ−Ｅについて本発明に結び付ける情報と共にａｐｏ−Ｅの機能の概要を以下に提供する。ＡＰＯ−ＥＡｐｏ−Ｅはアポリポ蛋白質と呼ばれる脂質キャリア分子のまさに１つである。これらのタンパク質は３つの主な機能を有する。第一にそれらは高い疎水性のコレステロールおよびトリグリセリドを、リン脂質（複合体のコアが脂質であり外側のシェルはアポリポ蛋白質である）と相互作用させることにより、溶解するのを手助けして、これらの脂質が輸送されることを可能とする。第二に、アポリポ蛋白質は脂質の、リポプロテインリパーゼおよびレクチン；コレステロールアシルトランスフェラーゼのような酵素との反応を調節する。第三にアポリポ蛋白質は細胞表面レセプターと結合し、それにより取込みの部位および他のリポ蛋白質構造体、特にコレステロールの分解の割合を決定する。Ａｐｏ−Ｅはそれが特に神経組織との関係を有するという点でリポタンパクの内でもユニークである。発達の間または末梢神経系の障害の後に、ａｐｏ−Ｅはミエリンおよびニューロン膜の修復、成長および保守におけるコレステロールの移動および再分布を調整する（Boyles et al,1989上記）。中枢神経系ではａｐｏ−Ｅの機能についてはほどんど知られていないが；それによりａｐｏ−Ｅ４がＡＤについての可能なマーカーであることの発見がなされており（上記背景技術のセクションで議論した）よりなお大いに興味をそそることである。ＡＰＯ−Ｅマウス幾つかのヒトおよび動物研究は、Ａｐｏ−Ｅ欠損マウスにおけるフィトステロール組成物の抗アテローム発生効果を含む植物ステロールのコレステロール低減効果を示している(１９９６年４月４日に発行されたPCT特許出願ＰＣＴ／ＣＡ９５／００５５５で、参照によりそのまま本明細書に編入されるおよびMoghadasia n et al．1996)。より最近では、Ａｐｏ−Ｅ欠損マウスはＡＤの病態生理学の研究に適当な動物モデルであることが示されている。ａｐｏ−Ｅ欠損マウスにおいてフィトステロールは異常なコレステロール分布（皮膚、鍵、大動脈および主動脈）を防止するので、フィトステロールはコレステロール組織の分布の決定−脳細胞においても、ａｐｏ−Ｅ表現型とは独立に(本出願人により進行中の研究)− に重要な役割を持っているようである。カイロミクロンの残存体（Chylomicron remnants）カイロミクロンは主に、より少量のリン脂質、遊離のコレステロールおよびエステル類をもつトリグリセリドからなる、最も大きいリポ蛋白質粒子である。それらは食物性の脂肪およびコレステロールに応じて腸または腸内細胞(enterocyt es)で合成され、腸間膜のおよび胸管のリンパに入りそこでapo-Ｅを獲得する。酵素リポプロテインリパーゼ（lipotrotein lipase，”ＬＬ”）はカイロミクロンのトリグリセリドの加水分解を触媒し、そこで発生した遊離脂肪酸が脂肪細胞より最初に取り込まれそして残りのより少ない部分のリポ蛋白質（これらはコレステロールに富む）はカイロミクロン残存体（Chylomicron remnants，”ＣＲ” ）と呼ばれる。ＣＲは選択的な肝臓ａｐｏ−Ｅ依存性レセプター機構（低密度リポ蛋白質に関係したレセプター、”ＬＲＰレセプター”）によって速やかに血漿から取り除かれ、該機構においてはコレステロールは膜またはリポ蛋白質生合成に使用されるかまたは遊離コレステロールとして排出されるかまたは胆汁酸へ代謝される。内在化した（internalized）粒子については、ａｐｏ−Ｅの存在が重要(critical)と考えられる。肝臓および脳細胞は特にこのＬＲＰレセプターに富む。超低密度リポ蛋白質（VERY LOW DENSITY LIPOPROTEINS）超低密度リポ蛋白質（”ＶＬＤＬ”）はカイロミクロンと類似の構造をもつが、より小さく、そしてより少ないトリグリセリドを含むが相対的により多くのコレステロール、リン脂質およびタンパク質（ａｐｏ−Ｅ，ａｐｏ−Ｃおよびａｐｏ−Ｂ１００の混合物）を含む。ＶＬＤＬは主に肝臓中で合成され、その第一の機能はトリグリセリドの輸送である。ＶＬＤＬ粒子は大きさが多様であるが、ＬＬまたは肝臓リパーゼ（hepatic lipase("ＨＬ")）のいずれかによって続いて脂質分解されて一様なより小さい粒子：ＶＬＤＬ残存体（中密度リポ蛋白質（inte rmediate density lipoprotein）としても知られている）および低密度リポ蛋白質（”ＬＤＬ”）を生成する。リポプロテインリパーゼ少なくとも２つの別個のトリグリセリドリパーゼがある。肝臓外のまたはリポプロテインリパーゼ（”ＬＬ”）が主に脂肪組織および骨格筋で見出されている。肝臓リパーゼ("ＨＬ")は肝臓細胞の内皮に局在している。ＬＬおよびＨＬの両方は、ＣＲおよびＶＬＤＬの異化作用に関与している。ＡＰＯ−Ｅレセプター血漿から細胞内へのａｐｏ−Ｅ／リポ蛋白質（カイロミクロン、ＶＬＤＬまたはＬＤＬ）輸送に関与する４つの公知のレセプターがある：低密度リポ蛋白質レセブター（”ＬＤＬレセプター”）、ＬＲＰレセプター（上記で定義された）、新たに記載された超低密度リポ蛋白質レセプター（”ＶＬＤＬレセプター”）および上皮糖蛋白質３３０レセプター（”ＧＰ３３０レセプター）である。全ての４つのレセプターは脳内で発見されている。アルファ２−マクログロブリン（ａｌｐｈａ２Ｍ）の活性型のためのレセプターがＬＲＰレセプターと同じであるという発見はＬＲＰレセプターがａｌｐｈａ２Ｍ／ＬＲＰレセプターと呼ばれる多機能レセプター蛋白質である証拠である。このレセプターは体、特に肝臓および脳の殆ど全ての細胞、標的酵素、蛋白質、ＣＲおよびＬＤＬコレステロールで発現しおよび蛋白分解、免疫性、細胞増殖および細胞死における複合的な役割を演じると考えられている。ａｐｏ−Ｅのニューロン細胞への輸送に関しては、ニューロンが表面でＬＲＰレセプターに非常に富みそしてＬＲＰレセプター免疫活性がＡＤにおける斑(pla ques)の増加させること（Rebeck et al．1993）のみならず、そのａｐｏ−Ｅ／ＬＲＰ複合体がまたヒトの脳の斑に局在していること(Ikeda et al．非公開のデータ)が見出されている。ＬＲＰはａｐｏ−Ｅ含有残存体を結合するだけでなくＬＬのようなカイロミクロン代謝の重要な酵素と相互作用を有する。この後者における結合はａｐｏ−Ｅに依存しない(Beisiegel et al．1991)。注目すべきは、ａｐｏ−Ｅ欠損マウスにおける、アテローム動脈硬化症のプラーク形成の発生を予防するフィトステロールの能力である。肝臓内では、ＣＲはＬＬまたはａｐｏ−Ｅ依存性レセプター機構、即ちＬＲＰまたはａｌｐｈａ２Ｍ／ＬＲＰレセプターによって異化される。提案されたＡＤにおけるフィトステロールの作用の機構フィトステロールがＡＤ予防および発病について有益な作用を及ぼす３つの相互に関係ある主要な機構がある：１）フィトステロールは肝臓において肝臓のＬＲＰを介するアロステリックなＬＬ活性およびＣＲとのＬＬ複合体形成に関与する複合的な（および未だ完全に理解されてない）機構によってａｐｏ−Ｅ非依存性ＣＲ除去を増強する。２）フィトステロールはａｐｏ−Ｅ／リポ蛋白質複合体の、循環および／またはａｐｏ−Ｅ依存性レセプターが媒介する一般的には細胞への、特には脳細胞への取込みを減少させる。３）フィトステロールは内皮細胞の流出（shedding）を減少させおよび血液脳関門の内皮機能を保護する。フィトステロールは循環しているカイロミクロンおよびリポ蛋白質と結合し、血漿内のこれらの粒子について、およびＬＬおよびＨＬのような酵素の物理化学的特性について改質する作用を有する。換言すれば、本願出願人はアポタンパク質としてのフイトステロール機能、それにより循環するカイロミクロンおよびリポ蛋白質の構造、組成および機能を変化させること、加えて、ＬＲＰレセプターによる間接的な他の多くの重大な細胞機能に影響を与えることを提案する。第一の機構に関して簡単に述べればフィトステロールがリポ蛋白質、即ちカイロミクロンと結合し、そしてこれらの粒子がアルファ２Ｍ／ＬＰＲレセプターへの結合および続く細胞関門にまたがる脳内へのこれらの粒子の通過を防止する。従って、神経細胞内のａｐｏ−Ｅの量が減少するだろうがこれはａｐｏ−Ｅ４ホモ接合体であるこれらの個体には特に重要である。加えて、フィトステロールは、アロステリック改質(allosteric modification )を介してＬＬの活性を増加させ、その結果フィトステロールに富むカイロミクロンが速やかに酵素によって代謝される。次にＣＲは、ＬＲＰレセプターと同じであるａｐｏ−Ｅ非依存性肝細胞ＣＲレセプターにより循環から速やかに除去される。上記で議論したように、ＬＬはカルボキシル（”Ｃ”）および窒素（”Ｎ ”）末端を有するトリグリセリド（カイロミクロンおよびＶＬＤＬ）代謝に関与する主な酵素である。その調節、構造および機能の関係およびＣ−末端リポプロテインリパーゼドメイン（ＬＲＰレセプターを介するＣＲ異化の誘導における）は研究者によってかなり十分に理解され、それはａｐｏ−Ｅ非依存性リポ蛋白質異化の可能性に我々の関心を集めさせる。本発明のフィトテロール組成物は、アロステリック改質によってリポ蛋白質の物理化学的特性を変えると信じられている。結局、フィトステロールによって影響を受けるＬＬ活性は”Ｎ”末端触媒部位によるトリグリセリド異化のための酵素量をより有効に利用でき、他方”Ｃ”末端ドメインはＣＲに対するリガンドとして提供できるようである。低脂肪酸肝臓流出とともに”Ｃ”ＬＬドメイン−ＣＲ複合体は次いで、スカベンジャーレセプター（アルファ２Ｍ／ＬＲＰ）と同じレセプターによって内在化され、ＣＲ脂肪酸エステルの著しいさらなる分解を伴い肝臓リパーゼにより異化される。換言すれば、フィトステロールがＣＲに結合するＬＬ”Ｃ”末端リガンドを増強し、そのためＣＲ異化を増加させることが可能である。これらの過程はａｐｏ −Ｅに独立であり、それらはＬＤＬレセプターのアップレギュレーションを生じさせない。補足の機構であるが第三番目に関しては、フィトステロールは細胞流出(cell shedding)を減少させる（内皮的効果）。それは本願出願人によって、正常および高コレステロール症のラットにおいて、フィトステロール組成物の食餌的投与が内皮細胞流出をそれぞれ５０−７０％減少させたことが見出された。このことは血液脳関門におけるおよびＡＤを誘発し得る望ましくない損傷粒子の脳への通過における内皮の役割を考慮する重大な発見である。さらにまた、糖蛋白レセプターの種々の類である、インテグリンは細胞において細胞外マトリックス（extracelluler matrix，”ＥＣＭ”）の相互作用に関与している。脳中におけるインテグリン発現の崩壊はａｐｏ−Ｅ内皮下層浸透度の増加に関係するようである。ＥＣＭは上皮にある成長、分化および機能を指示する（Getlenburg et al.1990）さらにまた、本願発明者は植物ステロールが血液脳関門を含む膜を改質すると信じている。従って、この膜をこえるベータアミロイド前駆体のような潜在的に毒性の物質の輸送は遅延させたＡＤの発病の結果を多分減少させ得る。加えて、ａｐｏ−Ｅ欠損マウスはその脳内で酸化的ストレスを受ける(Mathew et al.1996)。このことは、ＡＤに関係しているようである。本願出願人は現在の進行中の研究において、植物ステロールは抗酸化剤活性をもち得ることを示した。従って、これらのステロールはＡＤの発病の遅延または予防までも誘導しながら酸化的ストレスから脳を保護できる。フィトステロールの作用の可能な形態の要約を以下に示す：１）酵素的効果ＬＬのアロステリック改質および分子配置をリポ蛋白質複合体に変化させる。２）カイロミクロンおよびＣＲ・ＬＬへの刺激→ＬＬ−を多く含むＣＲ・ＨＬの阻害・ＣＲ→レセプター結合および／または内在化のためのリガンドとしてのＬＬモノマーのＣ−末端を利用するＶＬＤＬまたはＬＲＰレセプター非ａｐｏ−Ｅ依存性取込み。ＬＤＬレセプターを介するＣＲ取込みのＨＬモノマー阻害。・スムースな肝細胞小胞体への進入・７−アルファ−ヒドロキシラーゼへの刺激→胆汁酸合成の増大・コレステロール胆汁の排出を増加させ、肝臓コレステロール含量を減少させ、ＬＤＬ代謝に依存しない方法、即ちＶＬＤＬまたはＬＤＬレセプターがＣＲによって阻害され得る、方法によりＩＩＭＧ−ＣｏＡ活性を増加させる・流出する内皮細胞の減少・より親水性の膜の形成以下の制限しない実施例は本発明の種々の見地を示すために提供される。特に、実験はａｐｏ−Ｅ欠損マウスにおけるアテローム性動脈硬化症(atheroscleros is)発病の促進化がフィトステロール組成物の投与によって遅延され、そして、ＡＳ症状発症の改善がある。”ＦＣＰ−３ＰＩ”は本願発明の範囲内にある好ましい組成物である。実施例１ＦＣＰ−３ＰＩによるａｐｏＥ−欠損マウスの学習能力および記憶力の改善概説：ａｐｏＥ−欠損（ａｐｏＥ−ＫＯ）マウスは、アテローム性動脈硬化症、黄色腫症およびアルツハイマー病のモデルとして公知である（１６−１８）。ａｐｏＥ−欠損マウスは脳機能のアポリポ蛋白質Ｅの重要性を学ぶために有益な系として採用されている。これらの研究においては、幾つかはａｐｏＥ−欠損マウスにおける学習能力および作業および参照記憶力に焦点をあてている（１９，２０）。海馬シナプスの密度および海馬の障害後の再生能力はこれらのマウスにおいては減少する（２１，２２）。われわれは、フィトステロール混合物ＦＣＰ−３ＰＩを用いる食餌的補給(dietary supplementation)によって、上述した最初の２つの疾病を有効にその発達を遅延させ／予防した（１１，２３）。本願実験の目的はａｐｏＥ欠損マウスの学習能力および記憶力について３３週にわたり２％（ｗ／ｗ）の割合におけるＦＣＰ−３ＰＩによる食餌的補給の効果を評価することである。仮説：ＦＣＰ−３ＰＩを用いる食餌的補給はａｐｏＥ欠損マウスの学習能力および記憶力を改善する。材料および方法：２４匹のオスの２週齢ａｐｏＥ欠損マウスおよび２４匹の同様の野性型対照体をそれらの養育母体と共にジャクソン・ラボラトリー（Jackson Laboratory）から購入した。それらが４週齢となったところでマウスを離乳し、体重および血漿総コレステロールレベルを合わせた４群に分ける。これらの群は３３週間以下の食餌が給餌される。第１群（ｎ＝１０）：２％（ｗ／ｗ）ＦＣＰ−３ＰＩで補給された、４．５％（ｗ／ｗ）の脂肪を含有する通常のマウス餌（normal mouse chow,ＮＣ）で給餌したａｐｏＥ欠損マウス第２群（ｎ＝１０）：２％（ｗ／ｗ）ＦＣＰ−３ＰＩで補給された、通常のマウス餌（ＮＣ）で給餌した野性型マウス第３群（ｎ＝１０）：通常のマウス餌（ＮＣ）で給餌したａｐｏＥ欠損マウス第４群（ｎ＝１０）：通常のマウス餌（ＮＣ）で給餌した野性型マウス動物は個別に飼育され（それぞれのマウスはそれで遊ばせるために大穴をもつ空のボトルが与えられた）、身体的な活動と行動を観測し、週毎にそれらの体重を記録した。実験の０、４、１７および２９週において、血液を尾静脈から採取しそして血漿コレステロールレベルを酵素的に測定した。実験の食餌の開始後３３週で、既に記載したように行動についてマウスをモーリス・ウォーター・メイズ法(Morris Water Mazetechnique)により試験する。手順はビデオカメラによって記録しそして結果はコンピュータシステムにより分析した。実験の最後に、マウスを断頭に供しそれらの脳を１０％ホルマリンで固定化し、組織化学的評価に使用した。パラフィン−包埋した脳の切断片をａ）組織学的試験用の標準染色法と同様に、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｅ＆Ｈ）で染色し、ｂ）アミロイド斑形成の評価のためコンゴレッド(Congo Red)で染色し、ｃ）軸索の評価のためビエルコウスキー(Bielchowsky)で染色しおよびｄ）ミエリンの試験のためにルクソールファストブルー(Luxol fast blue)で染色した。さらにまた、マイアミ大学と共同で、脳をグリア原繊維性酸性タンパク質(Glial Fibrilary Acidic Pr otein,ＧＦＡ)、アミロイド前駆体タンパク質(Amyloid Precursor Protein,APP) 、神経フィラメント(Neurofilament,NF)およびユビキチン(Ubiquitin)を含む神経変性性疾病の潜在性マーカーについて染色した（免疫的組織化学）。第１群からの１匹のマウスおよび第３群からの１匹のマウスは体重損失および減少した食物摂取のため実験の早い時期に安楽死させた。第２群からの１匹のマウスおよび第４群からの１匹のマウスは他の実験群に合わせるため実験を中止させた。この実験の間、第１群からの１匹のマウスを皮膚病変のために１７週で断頭に供し、そして第３群からの１匹のマウスは１４週において心臓病の可能性で突然死した。モーリス・ウォーター・メイズの過程の間、１匹の対照ａｐｏＥ−ＫＯマウス（第３群からの第１５番）は第１の訓練日の間に２回発作をみせた。結果：Ａ：体重マウス体重を週毎に記録した。結果を表１にまとめる。全ての動物が実験過程の間に体重増加したことは、明らかである。このことはマウスの全ての４群の間で成長および発達が類似していたことを示す。ＦＣＰ−３ＰＩのマウス食餌への添加は体重になんら作用を及ぼさなかった。Ｂ：血漿コレステロールレベル血漿総コレステロールレベルは最初と実験過程の間に測定された。結果を表２にまとめる。われわれの以前の発見に従って、ＦＣＰ−３ＰＩのマウス食餌への添加はａｐｏＥ−ＫＯマウスの血漿総コレステロール濃度の著しい減少に関係した。他方、野性型のマウスにおける血漿総コレステロール濃度においてはＦＣＰ −３ＰＩによるマウス食餌の補給は殆ど効果なかった。Ｃ：モーリス・ウォーター・メイズ試験分析マウスの全ての４群は確立されているモーリス・ウォーター・メイズ法を使用する行動試験を受ける。データのコンピュータ処理による分析はマウスの群間で学習能力および記憶力に関する著しい違いは示さなかった。図１−４にマウスの各群から得られた結果をまとめる。図１は各群のマウスがプラットームの位置を捜し当てるためにプールの各四分円（quadrant）で費やした時間の百分率を示す。図２は各群のマウスが訓練された後にブラットフォームの位置を捜し出すために各々の四分円で費やした時間を示す。これはマウスの空間的記憶力を示す。これによれば、ＦＣＰ−３ＰＩを用いて給餌された野性型のマウスは動物の他の群よりもよりよい記憶力を有する傾向を見せた。図２において明らかなように、ＦＣＰ−３ＰＩを給餌した野性型のマウスはプラットフォームについて四分円１（訓練期間中にプラットフォームが配置された場所）でより長い時間を費やした。このことはまた、ＦＣＰ−３ＰＩ給餌の野性型マウスによってプラットフォーム位置（四分円３）をつきとめることにおいて僅かにより良い学習を示す、図３において明らかである。図４は四分円３の選択（反転したプローブの痕跡）について試験された場合、全ての４群のマウスの間に乏しい記憶力を示して、マウスの群の間で違いがないことを示す。Ｄ：組織化学マウスの全ての群の脳を組織学的に試験した。ヘマトキシリンおよびエオシン染色は動物の４群の全ての脳に僅かな変性性の変化を示した。コンゴレッド染色では動物の４群の全てからのいずれかの脳にもアミロイド斑の形成の証拠を示さなかった。同様に、ビエルコウスキーおよびルクソールファストブルーにおいては脳のミエリンおよび軸索の特有の特徴についてマウスの４群全ての間で何れかの顕著な違いは示されなかった。免疫的組織化学的評価はセントポールズ病院（ St.Paul's Hospital）において独立の神経病理学者によって行われたものである。結果は評価が完了したら直ちに提出されるであろう。解説本実験はＦＣＰ−３ＰＩ（２％ｗ／ｗ）の添加がａｐｏＥ−ＫＯマウスにおいて血漿総コレステロールレベルを著しく減少させたことを示す。このＦＣＰ− ３ＰＩの投与量は明らかな副作用を持たず、そして動物の全ての群によって十分耐性があった。野性型マウスの食餌へのＦＣＰ−３ＰＩの添加は他の群と比較してそれらの学習能力及び記憶力の改善に関連性があった。 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Methods for preventing or delaying the onset of Alzheimer's disease and for the same The composition ofField of the invention The present invention relates to the field of Alzheimer's disease, its prevention and its onset. How to extend.Background of the Invention Alzheimer's disease ("AD") is an invariably progressive disease It is an illness. Key pathological salient features are some sensitive neurons Is the occurrence of cytoskeletal changes in cells. These changes are associated with age It does not necessarily occur, but once the disease has begun, can not see. As further described below, early cortical changes are associated with poor myelin in the inner temporal lobe It appears in the transentorhinal region. Then it is the other As one reaches the cortical area of the cat, a destructive process follows a predictable pattern. Location and severity of tangle-bearing neurons are clinical Diseases from asymptomatic stage I-II to stage V-VI that clearly indicate AD that has fully developed Gives six grades in qi progression. A relatively small number of patients have particularly fast changes As shown, older age is not a prerequisite for lesion development. Follow AD is thus age-related but not an age-dependent disease. There are currently many theories for the causes and mechanisms of AD progression, many of which are genetically defective. It is about falling. A very small percentage of AD patients have amyloid precursor protein Genes for the production of protein (amyloid precursor protein, “APP”) Chromosome 21 is defective. APP is a major factor involved in cell growth and repair A protein, it is a small indigestible protein beta -When cleaved into beta-amyloid ("BA"), it plaques in the brain (plaq ues). Another interesting study is late-onset familial AD and intracellular and extracellular cholesterol in the body. Is a protein with a molecular weight of 34,000 that is involved in the transfer of Chromosome 19 encoding protein-E (apolipoproein-E, "apo-E") Focuses on its relationship to polymorphic geans. Lipid transport And the role of apo-E in metabolism is critical and is discussed further below. Discussed. apo-ENeurobiological roleGained from many observations over many years Have been. First, apo-E mRNA is abundant in the brain, where it is mainly Is synthesized and secreted by astrocytes (Elshourbagy et al. 1985). ). Second, apo-E containing lipoproteins is found in cerebrospinal fluid and It appears to play a major role in the lipid transport of the system (Pitas et al. 1987). Third In addition, apo-E, which adds a source of cholesterol, can be added to dorsal root ganglion cells in culture And promotes prominent neurite outgrowth (Handelmann et al. 1992). Fourth, peripheral Apo-E levels increase dramatically after nerve injury (Muller et al. 1985). Follow Apo-E removes lipids generated after axonal degeneration and germinates for axonal regeneration. Into neurites and into Schwann cells for subsequent remyelination of new axons Appear to be involved in both redistribution of these lipids (Boyles et al. 1989). ). Three different alleles inherited in a dominant manner at a single locus Three different isoforms encoded by the genes (E-2, E-3, E-4) The implications of a role for apo-E that existed are Two characteristic neuropathological disorders-extracellular neurite plaques (shown in BA deposits) ) And intracellular entanglement of neurofibrillary tangles (tau) Especially shown from the relationship between apo-E and- (See Weisgraber et al. 1994 for a review). In particular, a genetic relationship between the apo-E4 isoform and AD has been found. E4 E Mozygous individuals are also at greater risk than individuals without the E4 allele. Shows greater risk of developing AD than indicated E4 heterozygous individuals. It Although the exact mechanism by which this correlation exists remains elusive, Have provided some possible answers. By the method, LDL receptor Reduces the avidity of apo-E2 binding to the Methods that result in increasing plasma cholesterol levels in mozygotes Like, it is the biological effect of the protein produced by this allele You may be involved in Strittmatter et al (1993) apo-E4 leads to enhanced formation of senile plaques compared to the other two isoforms Binding to BA peptide, and thereby apo-E Deficiency of other apo-E isoforms, but not the presence of 4, increases the predisposition to AD (Strittmatter et al. 1994a). Similarly, its phosphorylated form is a major component of neurofibrillary tangles For the isoform-specific interaction of apo-E with tau protein, see apo-E It has been shown that apo-E3, but not E4, binds tau with high binding activity. (Strittmatter et al (1994a). Apo-E3 usually has Protein or microtubule stabilization, one or two apo-E4 alleles Decrease or absence of apo-E3 in patients with Tau is due to separation of tau from microtubules And its enhanced phosphorylation and polymerization are pathologically coupled This leads to the hypothesis that the filament should be shaped like a filament. Despite the vast research in the area of AD progression, treatments are scarce and this debilitates There is virtually no way to prevent disease and / or delay onset. It is an object of the present invention to obviate or mitigate such disadvantageous situations.Summary of the Invention The present invention prevents and / or develops Azheimer's disease ("AD") in animals. A phytosterol composition to an animal. Providing a method comprising: Furthermore, the present invention is effective in preventing AD and / or delaying its onset. Composition comprising beta-sitosterol, campesterol and stigma A composition comprising stanol is provided.BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES The invention is illustrated by the following non-limiting drawings: Figure 1 shows each quadrant when the platform is in Quadrant-1. Maurice Water May, expressed as a percentage of time in the quadrant 4 shows a graph showing the results of the size (Morris Water Maze). FIG. 2 shows that in each quadrant, the platform is removed from quadrant-1. Graph showing Maurice Water Maize results expressed as time spent (%) Represents FIG. 3 is in each quadrant when the platform is in quadrant-3 Graph showing Maurice Water Maze results, expressed as time (%) Represent. FIG. 4 shows the inside of each quadrant when the platform is removed from quadrant-3. Morris Water Maize (%) 9 shows a graph showing the results of (ze).Preferred embodiments of the invention Phytosterols are synthesized in plants that are not directly nutritious to humans It is a sterol-like compound. In plants, they are cholesteric in humans. Rolls are required for cell function as well as required. Average western europe Diet contains up to 360 mg of phytosterols per day. In recent years, these Dietary plant sterols have their anticancer properties when fed to many mammalian species And more attention to their ability to reduce cholesterol levels ing. So far, plant sterols have been used to prevent and delay the onset (treatment) of AD. No suggestions or reports have been made. Chemically, phytosterols closely resemble cholesterol in structure ing. The main phytosterols are beta-sitosterol, cam Pesterol (campesterol) and stigmasterol (stigmasterol). Others include stigmastanol ([β-cisistanol (beta-sistano l)), desmosterol, carinasterol, Rififerosterol (poriferasterol), clionasterol (clionasterol) and And brassicasterol. The composition of the present invention Natural and synthetic phytosterols, all hydrogenated analogues (counterparts) Ie, including isomers, including stanols and all derivatives thereof. Phytosterols are available from vegetable oils and vegetables, but in sufficient quantities. It does not necessarily matter whether the concentration or the exact form provides the advantages of the invention. Departure Provided within the scope of the present invention are animals, especially humans, in which phytosterol compositions are provided. For preventing and / or delaying the onset of AD by administering It is. The composition further comprises a food supplement as required and described below. Lment, oils, vitamins, and can be mixed directly into therapeutic formulations. The phytosterol composition of the present invention is not subject to the genetic innate predisposition of AD, Can be mixed with commonly available food items for wide distribution to people in certain areas Can be considered. Otherwise, these compositions develop a special form of AD. More aggressive programs targeting individuals at risk of developing, ie, familial AD It can be administered selectively in the ram. In a preferred form, the composition is safflower oil, sesame Vegetable oil selected from the group consisting of oil, corn oil, rice bran oil, olive oil, rapeseed oil Is mixed. As a supplement to olive oil, the oil is widely used and phytosterols and And polyunsaturated fatty acids are most preferred. Otherwise the composition is butter Or products based on saturated fat (lard) such as margarine or short nin Can be mixed. In another embodiment, the composition is other conventional or herbal for prevention or treatment of AD. It is mixed into the formulation with the herbal product. These products are Without limitation, Aricept-Risperidone®^TM-risperid one) [approximately currently found to help control progression associated with AD Cholinesterase inhibitors such as schizophrenia and ginkgo It is a possible memory enhancing herbal remedy. The basis of the present invention is to prevent and / or delay the onset of AD Is the general use of phytosterols. Good for achieving this goal Preferred compositions are listed below, but they limit the broad scope of the invention. Rather, many phytoceterols alone or in various combinations Can achieve similar results. Preferred phytosterol compositions of the present application are β-sitosterol, campez Terol, stigmastanol (sitostanol) and, optionally, camp Stanols and their analogs / derivatives. In one embodiment, the invention Of at least 10% campesterol and up to 75% β-cytos Contains Terol. In another preferred form, the composition comprises 10-25% campes. Terol, 10-40% stigmastanol and 45-75% β-sitostere Including roles. If desired, 1-10%, more preferably 3%, campestano Rules may also be present. In another preferred form, the composition according to the invention comprises the following proportions of phytosterols: β-sitosterol (1); campesterol (0.2-0.4) and stig Masternol (0.2-0.5). More preferably, campesterol and Stigmasteranol combined at least 50% of the total concentration of β-sitosterol Is equivalent to The composition of the present invention comprises the following three basic plant sterol proportions: . β-sitosterol campesterol stigmasteranol 1 0.354 0.414 1 0.330 0.203 1 0.268 0.299 Other preferred compositions are plant sterol distributions (shown in%) as shown below Was found to have β-sitosterol campesterol stigmasteranol 62.6 16.6 23.2 64.7 16.4 17.2 60.0 13.6 16.3 32.0 14 29 25.5 7 42.5 51 14 19 61 17 23 However, in any of these preferred compositions, other plant It should be understood that rules can exist. Similar auxiliaries or carriers are needed As such form a part of the composition. In the method of delivering the composition of the present invention Depending on the dosage, it can vary somewhat. Approximately 1.0 g to 3 per day. Most preferably, 0 g is administered. In the method of the present invention, an individual of the phytosterol composition described in detail above is used. AD is prevented and / or its onset delayed by administration to the body. Dietary phytosterols enhance learning and memory, age Clear mechanism reveals reduced dependent synaptic loss and neurodegenerative processes However, Applicants have, however, proposed some theories, which are outlined in more detail below. Have. While these theories are not intended to limit the scope of the invention, Conversely, the complexity of phytosterols in animal lipid homeostasis (complexi ty) help to show. As discussed in the background of the invention above, the apo-E4 phenotype is human Has been shown to be an important risk factor for AD. AD and cardiovascular There is some evidence for a correlation between the diseases (Kalaria, 1997). Suggested files In order to understand the mechanism of action of itosterol, apo-E was concluded in the present invention. An overview of the functions of apo-E is provided below along with the attached information. APO-E Apo-E is just one of the lipid carrier molecules called apolipoproteins. These proteins have three main functions. First, they have a high hydrophobicity Resterols and triglycerides are converted to phospholipids (the core of the complex is Side shell is an apolipoprotein) to dissolve To enable these lipids to be transported. Second, Apolipo Proteins are lipids, lipoprotein lipases and lectins; Regulates the reaction with enzymes such as luciferase. Third, apolipoprotein Binds to cell surface receptors, thereby causing sites of uptake and other lipoproteins Determines the rate of degradation of structures, especially cholesterol. Apo-E expresses lipoproteins in that it has a particular relationship with neural tissue. Unique within. During development or after damage to the peripheral nervous system, apo-E Of cholesterol in the repair, growth and maintenance of myelin and neuronal membranes Adjust for migration and redistribution (Boyles et al, 1989 supra). Ap in the central nervous system Little is known about the function of o-E; It has been discovered that it is a possible marker for AD (see above background art). Is much more intriguing than discussed in the section below). APO-E mouse Several human and animal studies have described phytosterols in Apo-E deficient mice. Cholesterol reduction of plant sterols, including anti-atherogenic effect of cholesterol composition (See PCT Patent Application PCT / CA9, issued April 4, 1996) No. 5/00555, incorporated herein by reference in its entirety and Moghadasia n et al. 1996). More recently, Apo-E deficient mice have been studied for the pathophysiology of AD. It has been shown to be a suitable animal model. apo-E deficient mouse smell Phytosterols have abnormal cholesterol distribution (skin, key, aorta and Phytosterols determine the distribution of cholesterol tissue-the brain Also in cells, independent of the apo-E phenotype (work in progress by the applicant)- Seems to have an important role to play. Chylomicron remnants Chylomicron is primarily composed of smaller amounts of phospholipids, free cholesterol and It is the largest lipoprotein particle consisting of triglycerides with steles. So These are based on dietary fats and cholesterol, depending on intestinal or intestinal cells (enterocyt es) and enters the mesenteric and thoracic lymph, where it acquires apo-E. The enzyme lipotrotein lipase ("LL") is Chiromicro Catalyzes the hydrolysis of triglycerides of fatty acids, and the free fatty acids generated there The lipoproteins that are taken up earlier and the remaining lesser part (these are Sterol-rich) is chylomicron remnants ("CR") ). CR is a selective hepatic apo-E-dependent receptor mechanism (low density Blood is rapidly mediated by lipoprotein-related receptors ("LRP receptors"). Is removed from the plasma, in which cholesterol is bound to membranes or lipoproteins Used for growth or excreted as free cholesterol or to bile acids Metabolized. For internalized particles, the presence of apo-E is Considered critical. Liver and brain cells specifically Rich. VERY LOW DENSITY LIPOPROTEINS Very low density lipoprotein ("VLDL") has a structure similar to chylomicron , Containing smaller and less triglycerides but relatively more Resterol, phospholipids and proteins (apo-E, apo-C and ap o-B100). VLDL is mainly synthesized in the liver and its primary The function is the transport of triglycerides. VLDL particles vary in size, but L Followed by either L or hepatic lipase ("HL") Degraded and uniform smaller particles: VLDL remnant (medium density lipoprotein (inte (also known as rmediate density lipoprotein) and low density lipoprotein Generate quality ("LDL"). Lipoprotein lipase There are at least two separate triglyceride lipases. Extrahepatic or Lipo Protein lipase ("LL") is found primarily in adipose tissue and skeletal muscle . Liver lipase ("HL") is located on the endothelium of liver cells. Both LL and HL Are involved in the catabolism of CR and VLDL. APO-E receptor Apo-E / lipoproteins from plasma into cells (Chylomicron, VLDL or There are four known receptors involved in LDL) transport: low-density lipoprotein Sevter ("LDL receptor"), LRP receptor (as defined above), Newly described very low density lipoprotein receptor ("VLDL receptor") and And epithelial glycoprotein 330 receptor ("GP330 receptor"). Four receptors have been found in the brain. Alpha 2-macroglobulin (a lpha2M) is the same receptor as the LRP receptor The finding was that the LRP receptor was called alpha2M / LRP receptor. Evidence for a functional receptor protein. This receptor is found in the body, especially in the liver and Emitted in almost all cells of the brain, target enzymes, proteins, CR and LDL cholesterol Manifests and plays multiple roles in proteolysis, immunity, cell proliferation and cell death It is thought to be. apo-ENeuron cellAs for the transport to the The receptor is very rich and LRP receptor immunoreactivity is ques) (Rebeck et al. 1993) as well as its apo-E / The LRP complex is also localized to plaques in the human brain (Ikeda et al. Unpublished data). Data) has been found. LRP not only binds apo-E containing remnants but also Interacts with key enzymes of chylomicron metabolism such as LL. To this latter Binding in this manner is independent of apo-E (Beisiegel et al. 1991). What should be noted Of atherosclerotic plaque formation in apo-E deficient mice The ability of phytosterols to prevent. In the liver, CR is an LL or apo-E dependent receptor mechanism, namely LRP Or it is catabolized by the alpha2M / LRP receptor. Proposed mechanism of action of phytosterols in AD Three phases in which phytosterols have beneficial effects on AD prevention and pathogenesis There are major interrelated mechanisms: 1) Phytosterols are allosteric in the liver via hepatic LRP. Complex (and still completely) involved in LL activity and LL complex formation with CR Apo-E-independent CR removal by a mechanism (not understood). 2) Phytosterols are responsible for circulating and / or the apo-E / lipoprotein complex. Is generally mediated by apo-E dependent receptors to cells, especially to brain cells Reduce the uptake of 3) Phytosterols reduce endothelial cell shedding and reduce blood brain Protects barrier endothelial function. Phytosterols bind to circulating chylomicron and lipoproteins, About these particles in plasma and the physicochemistry of enzymes such as LL and HL It has the effect of modifying the mechanical properties. In other words, the applicant of the present application Phytosterol function as quality, thereby circulating chylomicron and Altering the structure, composition and function of a poprotein, in addition to the LRP receptor It is suggested that many other critical cell functions are indirectly affected. Briefly speaking about the first mechanism, phytosterols are lipoproteins, And binds to micron, and these particles bind to the alpha2M / LPR receptor Binding and subsequent passage of these particles into the brain across the cell barrier. Thus, the amount of apo-E in neurons will decrease, but this is not the case with apo-E4. Of particular importance to these individuals that are mozygotes. In addition, phytosterols are allosteric modification ) To increase the activity of LL, resulting in a phytosterol-rich Ron is rapidly metabolized by enzymes. Next, CR is the same as LRP receptor Is rapidly cleared from circulation by the apo-E-independent hepatocyte CR receptor It is. As discussed above, LL consists of carboxyl ("C") and nitrogen ("N"). Involved in the metabolism of triglycerides with terminal ends (chylomicrons and VLDL) The main enzyme to do. Regulation, structure and function relationships and C-terminal lipopro Thein lipase domain (in the induction of CR catabolism via LRP receptor) Is quite well understood by the investigators, and that it is apo-E-independent lipoprotein Involve our interest in the potential for catabolism. The phytoterol composition of the present invention has a lipoprotein It is believed to alter physicochemical properties. After all, shadows by phytosterols The affected LL activity is an enzyme for triglyceride catabolism by the "N" terminal catalytic site. Quantities can be used more efficiently, while the “C” terminal domain can be used as a ligand for CR. It seems that it can be provided. "C" LL domain-C with low fatty acid liver efflux The R complex is then identical to the scavenger receptor (alpha 2M / LRP) Internalized by the receptor with significant further degradation of CR fatty acid esters Is catabolized by hepatic lipase. In other words, phytosterols increase the LL “C” terminal ligand that binds to CR. To increase CR catabolism. These processes are apo -E independent, they cause up-regulation of the LDL receptor Do not let. As a supplementary mechanism, but for the third, phytosterols are cell efflux shedding) (endothelial effect). It has been determined by the applicant that Administration of phytosterol composition in rats with hypercholesterolemia Reduced endothelial cell efflux by 50-70%, respectively. this thing Is not able to pass unwanted damaging particles to the brain at the blood-brain barrier and that can induce AD. This is a significant finding that considers the role of the endothelium in the tissue. Furthermore, various classes of glycoprotein receptors, integrins, are Involved in the interaction of extracelluler matrix ("ECM") ing. Disruption of integrin expression in brain increases apo-E subendothelial permeability It seems to be related to addition. ECM directs growth, differentiation and function in the epithelium (Getlenburg et al. 1990) Furthermore, the present inventor has suggested that plant sterols modify membranes containing the blood-brain barrier. I believe. Therefore, potentially like beta amyloid precursors beyond this membrane The transport of toxic substances may possibly reduce the consequences of delayed onset of AD. In addition, apo-E deficient mice undergo oxidative stress in their brain (Mathew et al. 1996). This appears to be related to AD. Applicant is currently Studies show that plant sterols can have antioxidant activity Was. Therefore, these sterols do not induce or even delay the onset of AD. It can protect your brain from oxidative stress. The following is a summary of the possible forms of action of phytosterols: 1) Enzymatic effect Allosteric modification of LL and changing the molecular configuration to a lipoprotein complex. 2) Chylomicron and CR ・ Stimulation of LL → CR containing a lot of LL- ・ HL inhibition · CR → L as ligand for receptor binding and / or internalization VLDL or LRP receptor non-apo-E utilizing the C-terminus of the L monomer Dependency capture. HL monomer inhibition of CR uptake via LDL receptor. ・ Smooth hepatocyte ER entry ・ Stimulation of 7-alpha-hydroxylase → increased bile acid synthesis Increased cholesterol bile excretion and reduced liver cholesterol content In a method that does not depend on LDL metabolism, ie, VLDL or LDL receptor Increases IIMG-CoA activity by a method that can be inhibited by ・ Reduction of outflowing endothelial cells ・ Formation of more hydrophilic membrane The following non-limiting examples are provided to illustrate various aspects of the present invention. In particular In the experiments, atherosclerosis (atheroscleros) in apo-E-deficient mice is) the onset of onset is delayed by administration of the phytosterol composition, and There is an improvement in the onset of AS symptoms. "FCP-3PI" is preferred within the scope of the present invention. It is a new composition. Example 1 Improvement of learning and memory ability of apoE-deficient mice by FCP-3PI Overview: apoE-deficient (apoE-KO) mice have atherosclerosis, yellow It is known as a model for tumors and Alzheimer's disease (16-18). apo E-deficient mice provide a useful system for learning the importance of apolipoprotein E for brain function. Has been adopted. In these studies, some were in apoE-deficient mice. Focus on learning and work and reference memory in learning (19, 20) . Hippocampal synaptic density and regenerative capacity after hippocampal injury were not Decrease (21, 22). We use the phytosterol mixture FCP-3PI The first two above mentioned by dietary supplementation using Effectively delayed / prevented its development (11,23). Purpose of the experiment Is 2% (w) over 33 weeks for learning and memory in apoE deficient mice. / W) by assessing the effect of dietary supplementation with FCP-3PI on the ratio is there. hypothesis: Dietary supplementation using FCP-3PI is effective for learning ability and Improve your cognition. Materials and methods: 24 male 2-week-old apoE-deficient mice and 24 similar wild-type controls To the Jackson Laboratory with their parenting parent Purchased. When they were 4 weeks of age, mice were weaned and their weight and plasma Divide into four groups that combine total cholesterol levels. These groups are less than 33 weeks Food is provided. Group 1 (n = 10): 4.5% supplemented with 2% (w / w) FCP-3PI ( w / w) normal mouse chow (NC) ApoE deficient mouse Group 2 (n = 10): normal mouse supplemented with 2% (w / w) FCP-3PI Wild-type mice fed on a diet (NC) Group 3 (n = 10): apoE-deficient mice fed with normal mouse chow (NC) Group 4 (n = 10): wild-type mice fed with normal mouse chow (NC) Animals are housed individually (each mouse has a large hole to play with Observed physical activity and behavior, given empty bottles), their weight every week Was recorded. Blood was collected from the tail vein at weeks 0, 4, 17, and 29 of the experiment And plasma cholesterol levels were measured enzymatically. After the start of the experimental diet 3 At three weeks, mice were exposed to Maurice Water May for behavior as previously described. The test is carried out by the Morris Water Mazetechnique method. The procedure depends on the video camera. And the results were analyzed by a computer system. At the end of the experiment, Mice were decapitated and their brains were fixed in 10% formalin for histochemical evaluation. used. Paraffin-embedded brain sections are: a) Standard staining method for histological examination Stained with hematoxylin and eosin (E & H), b) amyloid Stained with Congo Red for evaluation of plaque formation, c) for evaluation of axons Stain with Bielchowsky and d) The cells were stained with Luxol fast blue. Furthermore, Miami In collaboration with the University, the brain was transformed into Glial Fibrilary Acidic Pr otein, GFA), Amyloid Precursor Protein, APP , Including neurofilament (NF) and ubiquitin Stained for potential markers of transgenic disease (immunohistochemistry). First group One of them and one mouse from group 3 had weight loss and reduced diet. He was euthanized early in the experiment for food intake. One mouse from the second group and One mouse from group 4 stopped the experiment to match the other experimental groups. this During the experiment, one mouse from group 1 was subjected to decapitation at 17 weeks for skin lesions, And one mouse from group 3 died suddenly at 14 weeks of possible heart disease . One control apoE-KO mouse during the course of the Maurice Water Maze (No. 15 from Group 3) had two seizures during the first training day. result:A: Weight Mouse weights were recorded weekly. The results are summarized in Table 1. All animals are experimental It is clear that he gained weight during that time. This is true for all four groups of mice Indicates that growth and development were similar. FCP-3PI to mouse diet The addition had no effect on body weight.B: Plasma cholesterol level Plasma total cholesterol levels were measured initially and during the course of the experiment. Table 2 shows the results Put together. According to our previous findings, FCP-3PI was administered to the mouse diet. Addition is associated with a significant decrease in plasma total cholesterol concentration in apoE-KO mice. Was. On the other hand, the plasma total cholesterol concentration in wild type mice Supplementation of the mouse diet with -3PI had little effect.C: Morris Water Maze test analysis All four groups of mice use the established Maurice Water Maze method Take a behavioral test. Computerized analysis of data between groups of mice No significant differences in learning and memory were shown. Figure 1-4 shows the mouse The results obtained from each group are summarized. Figure 1 shows the position of the platform in each group of mice. Shows the percentage of time spent in each quadrant of the pool to find . FIG. 2 shows how to locate the platform after each group of mice has been trained. Shows the time spent in each quadrant. This indicates the spatial memory of the mouse. this According to the study, wild-type mice fed with FCP-3PI were better than other groups of animals. They tend to have better memory. As is evident in FIG. Wild-type mice fed P-3PI had a quadrant 1 (Kun (Where the platform was located during the training period). This This also indicates that FCP-3PI feeding wild type mice Figure 3 shows a slightly better learning in locating the placement (quadrant 3). It is clear. Figure 4 shows the selection of quadrant 3 (trace of inverted probe) When tested, groups of mice showing poor memory among all four groups of mice Indicates that there is no difference betweenD: Histochemistry The brains of all groups of mice were examined histologically. Hematoxylin and eosin Staining showed slight degenerative changes in all brains of the four groups of animals. Congo red staining Shows evidence of amyloid plaque formation in any brain from all four groups of animals Did not. Similarly, in Bielkowski and Luxor Fast Blue Is any among all four groups of mice for unique characteristics of brain myelin and axons Did not show any noticeable difference. Immunohistochemical assessment was performed by St. Paul's Hospital ( St. Paul's Hospital, conducted by an independent neuropathologist . The results will be submitted as soon as the evaluation is completed. Commentary In this experiment, FCP-3PI (2% w / w) was added to apoE-KO mice. And significantly reduced plasma total cholesterol levels. This FCP- The dose of 3PI has no apparent side effects and is sufficient by all groups of animals There was resistance. The addition of FCP-3PI to the diet of wild-type mice compared to the other groups They were associated with improved learning and memory skills.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (81) Designated country EP (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, I T, LU, MC, NL, PT, SE), AL, AM, A T, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA , CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, I D, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR , KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, P L, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK , SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZW

Claims

[Claims] 1. Prevent or delay the onset of Alzheimer's disease in animals A method comprising administering to the animal a phytosterol composition. 2. 2. The method of claim 1, wherein said animal is a human. 3. The composition comprises β-sitosterol, campesterol and stigma. The method of claim 1 comprising stanol. 4. The composition comprises β-sitosterol, campesterol and stigma. Comprising stanol, campesterol and stigmasteranol in the composition A total of at least 50% of the concentration of β-sitosterol. The method according to claim 1. 5. The composition comprises β-sitosterol, campesterol and stigma. Stanol, wherein the composition is 10-25% campesterol, 10-40% 2. Stigmatanol and 45-75% β-sitosterol. The described method. 6. The composition comprises β-sitosterol, campesterol, stigmastano 2. The method of claim 1 comprising the addition of campestanol and campestanol. 7. Contains β-sitosterol, campesterol and stigmastanol A product that is therapeutically effective in preventing Alzheimer's disease. 8. Combination of campesterol and stigmastanol, β-sitosterol 8. The article of claim 7 comprising at least 50% of the concentration of said compound. 9. 10-25% campesterol, 10-25% stigmastanol and 8. The composition of claim 7, comprising 45-75% β-sitosterol. 10. The product of claim 7, further comprising campestanol.