【発明の詳細な説明】
粒状組成物
本発明は、非経口投与が可能な粒状組成物、特に造影剤、例えば、核磁気共鳴
画像診断法（ＭＲＩ）、Ｘ線、超音波、光画像または核画像の造影剤、特にＸ線
造影剤、さらに特に小胞を含有するＸ線造影剤に関する。
造影剤は、得られる画像のコントラストを増強するために、例えば、異なる臓
器間もしくは正常組織と病変組織の差の識別を助けるために、画像診断療法（例
えば、ＣＴ、ＭＲＩ、超音波等）において広く使用されている。
Ｘ線画像診断の分野において、市販の造影剤は、主に次の２つに分類される。
すなわち、胃腸（ＧＩ）管の画像診断のための不溶性無機重金属塩類（例えば、
バリウム硫酸塩）、および非経口投与用もしくは同じくＧＩ画像診断用の可溶性
ヨウ化有機化合物（通常、トリヨードフェニルモノマー類およびダイマー類、例
えば、イオヘキソールおよびイオジキサノール）に分類される。
親水性で小分子量の性質から、可溶性ヨウ化有機化合物類は、非経口投与後の
体内分布および生体からの排出パターンがどれも類似しており、また、腎臓から
排出される前の比較的早いうちに細胞外液（ＥＣＦ）部に分布する。したがって
、患者の不快感および忍容性の点でより良好であることから非経口投与としては
、非イオン性化合物（例えば、イオヘキソール）がイオン性化合物（例えば、メ
トリゾエート）より著明に好ましいにもかかわらず、それらの臨床的指示は同じ
である。
しかし、臓器特異性を有する新しい造影剤、特に、肝臓（肝臓造影剤）、血管
系（血液貯留造影剤）およびリンパ節（リンパ造影剤）等の特定の臓器のコント
ラストを増強する標的物質への需要が高まっている。
肝臓の需要に応えるために、粒状性の性質をもつために網内皮系によって血液
から抽出され、肝臓に蓄積される粒状造影剤を製造するための様々な試みがなさ
れてきた。血液貯留造影剤の需要に応えるために、ヨードフェニル造影剤に高分
子量の物質もしくは構造を付与し、その血中半減期を延長してきた。リンパ節画
像診断については、粒状造影剤を局所投与（例えば、皮下投与）する試みがなさ
れてきた。しかし、粒状造影剤を静脈投与してリンパ節を画像化することも可能
である。
有望な肝臓造影剤としては、生分解性粒子（ＷＯ89/00988およびＷＯ90/07491
参照）、リポソーム含有Ｘ線造影剤（ＷＯ95/26205参照）および乳濁液（ＥＰ-
Ａ-294534参照）に基にした造影剤が製造されているが、いずれもまだ市販され
ていない。したがって、効率性、安定性をもつ非毒性の臓器特異的なＸ線造影剤
を達成する必要がある。
小胞を含有する造影剤、例えば、ＷＯ95-26205に記載のリポソーム造影剤は、
動物実験において有望な肝臓画像診断結果を示し、前臨床試験において良好な安
全性プロファイルを示している。しかし、診断的に望ましい用量を用いたヒト志
願者での試験では、程度は低いが不快な副作用が発生した。
したがって、リン脂質リポソーム（平均（Ｚ平均）粒径約350nm、組成物の体
積全体の約40％を構成）に取り込まれ、ほぼ同濃度の前記リポソーム用水性懸濁
媒体に溶解した80mg I/mLの水溶性非イオン性Ｘ線造影剤を有するリポソーム造
影剤（用量70〜100mg I/kg（体重））は、発熱、寒気、頭痛、吐気および嘔吐と
いった副作用を引き起こした。これらの副作用は、患者に投与した粒子数に関連
するとの報告がなされている。
本発明は、診断的効果のある用量のヨウ素では、そのような副作用をきたさず
、または、副作用を忍容レベルにまで減らした粒状造影剤を提供することを目的
とする。
例えば、より高濃度のヨウ素を使用して、および／または、より高容量の小胞
を使用して、組成物中に含まれるヨウ素の粒子数（個／mg）を減らすことによっ
て、本発明は上記目的を達成することができる。
したがって、一つの態様によれば、本発明は造影剤組成物、好ましくは水性媒
体の懸濁液中に小胞（例えば、ミセルもしくはリポソーム）を含むＸ線造影剤で
あって、前記小胞、および任意に前記水性媒体は、ヨウ化Ｘ線造影剤を含有し、
前記小胞に取り込まれた100mgのＩを含有する前記組成物は、一用量に8×1012以
下の小胞（好ましくは、6×1012未満、特に好ましくは4×1012未満、さらに好ま
しくは2×1012未満、そしてさらに特に1012未満、例えば3〜9×1011、特に好ま
しくは、1×107〜9×1011未満、例えば1×107〜9.8×109の小胞）を含有するこ
とを特徴とする造影剤組成物を提供する。カプセル化されたヨウ素と小胞膜物質
（例えば、脂質）の重量比は、好ましくは1.8：1以上、例えば2：1以上、例えば
2〜5：1、より好ましくは2.5〜4.8：1、特に好ましくは3.0〜4.5：1である。前
記組成物において、前記小胞中のヨウ素含率は40％以上であることが好ましい。
カプセル化されたヨウ素の含有量は好ましくは30mg/mL以上（組成物全体に対す
る）、より好ましくは60mg/mL以上、特に好ましくは100mg/mL以上である。
さらに別の態様によれば、本発明は、コントラストが増強された画像、例えば
、Ｘ線画像を生成する方法であって、本発明の造影剤組成物をヒトまたはヒト以
外の動物（好ましくは、哺乳動物）の体に非経口（例えば、経静脈もしくは経動
脈）投与し、前記体の少なくとも一部、好ましくは少なくとも肝臓の画像、好ま
しくはＸ線（例えば、ＣＴ）画像を生成する方法を提供する。
本発明の組成物において、前記小胞は、ユニラメラであってもマルチラメラで
あってもよい。前記組成物は、バイラメラまたはトリラメラリポソーム、および
／または、ユニラメラ小胞を高いレベルで有することが好ましい。小胞（ここで
使われている小胞という語は、ユニラメラおよびマルチラメラの両方を示す）に
おいて、前記ヨウ素は、例えば、小胞核内にカプセル化することによって、およ
び／または、小胞膜内に組込むことによって、全体に、またはほぼ全体に小胞を
伴うことができる。
しかし、中に小胞が懸濁している水性媒体は、溶解したヨウ化有機造影剤を、
特に小胞の核内のヨウ素濃度またはそれに近い濃度で含むことが特に好ましい。
このように、前記造影剤は、3重の造影効果を有する、すなわち、前記小胞は、
血液貯留およびＲＥＳ（例えば、肝臓やリンパ節）のコントラストを増強し、ま
た、水性懸濁液媒体中の前記ヨウ化造影剤は、血液貯留および他のＥＣＦのコン
トラストを作り出す。一般的に、前記組成物中のヨウ素濃度は、好適には100〜5
00mg I/mL、特に100〜460mg I/mL、さらに150〜420mg I/mL、特に200〜400mg I/
mL、さらに特に225〜370mg I/mLである。小胞でカプセル化された造影剤の濃度
は、組成物全体の体積に対して、40mg I/mL以上（例えば、40〜160mg I/m
L）、特に40〜100mg I/mL以上であることが好ましい。時間をかけて、もしくは
動的に肝臓を画像化するために投与された場合、その用量は、好ましくは体重1k
g当り60〜600mg I（合計）、好ましくは150〜500mg I/kg、より好ましくは200〜
400mg I/kgである。このようにヨウ素濃度を上昇させて、特に診断的効果のある
ヨウ素濃度で、注射もしくは注入、特にボーラス注射によって、造影剤を血管内
に投与する。
小胞の内部とその周りのヨウ素濃度が実質的に同じであることは、造影剤の製
造の簡略化、滅菌、特に高圧滅菌の点でさらに好都合である。なぜなら、取り込
まれていないヨウ素を除去する必要がなく、時間をかけた分散（したがって保存
性）がヨウ素の分布を大幅に変化させることがないからである。
本発明の造影剤の粒子数、例えば、ｍＬ当りの小胞数は、それ自体は重要なパ
ラメータではない。用量（つまり、特に患者の体重１ｋｇ当りの用量）当りの粒
子数が重要であり、したがって、本発明の特徴をなしているのである。
従来技術の非経口投与の粒状Ｘ線造影剤の副作用および撮像効果の低さは、肝
臓で粒状吸収システムが過剰に蓄積することから生じること、また、したがって
、肝臓のコントラストを増強させるために、忍容できない副作用をきたす程の吸
収飽和を引き起こすことなく、診断的効果のある用量のヨウ素を肝臓に送達する
ことが重要であると本発明者らは考えている。
本発明の組成物に使用されるＸ線造影剤は、好ましくはトリヨードフェニル化
合物、特に好ましくは非イオン性化合物である。モノマー類（例えば、イオヘキ
ソール）およびダイマー類（例えば、イオジキサノール）の両方を使用すること
ができる。好適なＸ線造影剤の例としては、ＷＯ-Ａ-96/09282、ＷＯ-Ａ-96/092
85に記載の化合物、ならびにイオジキサノール、イオペントール、イオヘキソー
ル、メトリザミド、メトリゾエート、イオベルソル、イオキシラン、イオキサグ
ラート、イオパミドール、イオトロラン、イオグリケート（ioglicate）、イオ
メプロール（iomeprol）、ヨーフェンジラート、イオプロミド、イオジミド（io
simide）、イオタースル（iotasul）、ヨータラム酸塩、イオトロキセート（iot
roxate）およびイオキシタラム酸等の化合物があげられる。しかし、イオヘキソ
ール、イオパミドールおよびイオペントール等の非イオン性モノマー類およびイ
オジキサノールおよびイオトロラン等の非イオン性ダイマー類がもっとも好まし
い。
カプセル化されたヨウ素を肝臓に輸送するための小胞として本発明の組成物中
で使用される小胞は、小胞膜形成物質、好ましくはリン脂質を用いて従来の方法
によって製造することができる。好適な膜形成物質の例がWO95/26205に挙げられ
ているが、ここにその開示を参考のために記載する。つまり、前記膜は、中性リ
ン脂質および荷電リン脂質の両方を含むことが好ましい。さらに、両方のリン脂
質がほぼ飽和していることが好ましい。
中性リン脂質は、少なくとも1つのほぼ飽和した脂肪酸残基を含むことが好ま
しい。そのような脂肪酸残基中の炭素数は、好ましくは15以上、より好ましくは
16以上である。そのような脂肪酸残基中の炭素数が14未満の場合、リポソームの
内部水相に対する保持能は低く、投与後の血中リポソームの安定性は低い。一方
、脂肪酸残基の炭素数が28以上の場合、生体適合性が低くなり、また、リポソー
ム製造中、高温を保つことが必要となる。
上で使用されている「ほぼ飽和した」という表現は、中性もしくは荷電リン脂
質の脂肪酸残基が完全に飽和していること（すなわち、炭素−炭素の二重結合を
含まない）、または、例えば、ヨウ素価が20以下、好ましくは10以下、もっとも
好ましくは5以下であることからわかるように、それらの不飽和度が非常に低い
ことを意味する。不飽和度が高すぎるとリポソームは容易に酸化する。
前記小胞膜は、荷電リン脂質、例えば、少なくとも１つのほぼ飽和した脂肪酸
残基を有するものを含むことが好ましい。そのような脂肪酸残基中の炭素数は、
通常14以上、好ましくは15以上、より好ましくは16以上である。理由は上に述べ
た通りである。
本発明の組成物中の小胞のゼータ電位の絶対値は、−50mV未満、とくに−58未
満、さらに−60未満、例えば、−50〜−70mVであることが好ましい。
本発明に有用な中性リン脂質としては、例えば、中性グリセロホスホリピド、
例えば、部分的もしくは完全に水素化された天然発生性（例えば、大豆由来もし
くは卵黄由来）または合成ホスファチジルコリン、半合成または合成ジパルミト
イルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、またはジステアロイルホスファチジル
コリン（ＤＳＰＣ）が挙げられる。
本発明に有用な荷電リン脂質としては、例えば、正電荷もしくは負電荷を帯び
たグリセロホスホリピド類が挙げられる。負電荷を帯びたリン脂質類としては、
例えばホスファチジルセリン、例えば部分的もしくは完全に水素化された天然発
生性（例えば大豆由来もしくは卵黄由来）または半合成ホスファチジルセリン、
特に半合成または合成ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、また
はジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）；ホスファチジルグリセロ
ール、例えば、部分的もしくは完全に水素化された天然発生性（例えば大豆由来
もしくは卵黄由来）または半合成ホスファチジルグリセロール、特に半合成また
は合成ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、またはジステ
アロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）；ホスファチジルイノシトー
ル、例えば部分的もしくは完全に水素化された天然発生性（例えば大豆由来もし
くは卵黄由来）または半合成ホスファチジルイノシトール、特に半合成または合
成ジパルミトイルホスファチジルイノシトール（ＤＰＰＩ）、またはジステアロ
イルホスファチジルイノシトール（ＤＳＰＩ）；ホスファチジン酸、例えば部分
的もしくは完全に水素化された天然発生性（例えば大豆由来もしくは卵黄由来）
または半合成ホスファチジン酸、特に半合成または合成ジパルミトイルホスファ
チジン酸（ＤＰＰＡ）、またはジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）が
挙げられる。通常、そのようは荷電リン脂質は単独で使用するが、複数の荷電リ
ン脂質を使用してもよい。複数の荷電リン脂質を使用する場合、凝集を避けるた
めに、両方の荷電リン脂質を正に荷電することが好ましく、または両方の荷電リ
ン脂質を負に荷電することが好ましい。
正の電荷を帯びた脂質としては、例えば、アミノアルコールを含むホスファチ
ジン酸のエステル、例えば、ジパルミトイルホスファチジン酸またはヒドロキシ
エチレンジアミンを含むジステアロイルホスファチジン酸のエステルが挙げられ
る。
本発明によれば、中性リン脂質と荷電リン脂質の比率は、重量比で通常200：1
〜3：1、好ましくは60：1〜4：1、より好ましくは40：1〜5：1、例えば、約10：
1である。
小胞の平均サイズは、50〜4000nm、特に100〜3000nm、さらに150〜2000nmであ
ることが好ましい。そのサイズの上限は、毛細管のサイズの制約に部分的に影響
されるが、特に柔軟な膜を有する小胞の場合は、その範囲を超えてもよい。その
サイズの下限は、本発明の望ましい局面によれば、診断効果のある用量のヨウ素
を肝臓およびＲＥＳの他の部分に送達するのに必要とされる数の小胞を最小限に
するために決定される。小胞のサイズ選別は、適切な孔径のフィルターを通して
、より大きな小胞を抽出することによって（バイオ ケミバイオ フィジアクタ、
Biochem Biophys Acta 557：9（1979））、または重力もしくは遠心分離技術に
よって達成できる。
本発明の造影剤組成物は、膜生成物質およびＸ線造影剤の他に様々な任意の成
分を有してもよい。例えば、抗酸化剤としてビタミンＥ（α−トコフェロール）
および／またはビタミンＥ酢酸エステルを、脂質総量に対して0.01〜2モル％、
好ましくは0.1〜1モル％の量で含んでもよい。同様に、ソルビトールを張度(ton
icity)調整剤として含むことが好ましい（特に、非イオン性ダイマーをＸ線造影
剤として使用する場合重要である）。
上記リン脂質類を含有する小胞を含む診断用組成物の脂質の総量に対する濃度
は、前記小胞中の造影剤のカプセル化を高めるために、通常10mg/ml〜100mg/ml
、好ましくは15mg/ml〜90mg/ml、そしてより好ましくは20mg/ml〜80mg/mlである
。
そのような造影剤は、投与後、小胞が体内で安定に保持されるように、適切な
媒体中で、小胞中に等張液もしくは懸濁液の形状（体内での生理学的な浸透圧に
関係する）でカプセル化されることが好ましい。媒体として、水、ＴＲＩＳ−Ｈ
ＣＬ緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液等の緩衝液等を使用することができ
る。
室温でのｐＨ範囲は、4.5〜8.5であることが好ましい。6.8〜7.8であることが
より好ましい。造影剤が、多数の水酸基を有する非イオン性Ｘ線造影剤、例えば
、イオヘキソール、イオジキサノールもしくはイオパミドールである場合、緩衝
液は、US-A-4278654に記載のように負の温度係数を持つものであることが好まし
い。アミン緩衝液は、必要とされる特性、特にＴＲＩＳを有する。この型の緩衝
液は、高圧滅菌温度でのｐＨがより低く、高圧滅菌中のＸ線造影剤の安定性を増
加させ、一方、室温で生理学的により良好なｐＨに戻る。
等張液または懸濁液を得るために、前記造影剤を、等張液を提供する濃度での
媒体に溶解もしくは懸濁させる。例えば、造影剤の溶解度が低いなどの理由で、
造影剤が単独で等張液を生成できない場合、等張液を生成するために他の非毒性
水溶性物質、例えば、塩化ナトリウム等の塩類や、マンニトール、グルコース、
スクロース、ソルビトール等の糖類を媒体中に添加してもよい。
WO95/26205にも開示されているが、本発明の組成物の１つの特に有利な点は、
高圧滅菌に耐えられることである。本発明の組成物は、カプセル化能力が高く、
また、それらが脂質組成物であることからカプセル化率が高い。
前記小胞は、マルチラメラリポソームの製造に使用される従来の方法によって
製造することができる。この方法としては、バンガム（Bangham）法（ジャーナ
ル オフ モル ダイアル（J.Mol．Dial.）13，238-252，1965）、多価アルコール
法（日本特許公報（公告）4-36734号）、脂質溶液法（日本特許公報（公告）4-3
6735号）および機械化学法（日本特許公報（公告）4-28412号）が挙げられる。
通常、望ましいマルチラメラ小胞は、前記リン脂質を、クロロフォルム、メタ
ノール、ジクロロメタン、エタノール等の揮発性有機溶媒、または、前記有機溶
媒と水との混合溶媒に溶解し、前記溶媒を除去し、得られた残留物と造影剤を含
有する水相とを混合し、その混合物を攪拌することによって調製することができ
る。
前記方法における溶媒除去工程として、バンガム法では蒸着を利用しているが
、噴霧乾燥もしくは凍結乾燥も利用できる。
前記小胞調製工程において、脂質に対する溶媒の使用量は重要ではなく、脂質
を溶解させ得る量であればよい。得られた脂質と溶媒の混合物からの溶媒の除去
は、従来の方法、例えば、減圧下、もしくは、必要であれば不活性ガスの存在下
で蒸着することによって行うことができる。実際、前記揮発性有機溶媒を、望ま
しくは、前記有機溶媒（体積10）と水（体積1まで）との混合物中で使用するこ
ともできる。
凍結乾燥によって溶媒除去を行うために、約0.005〜0.1Torrの減圧下で、その
溶媒の凍結温度より低い温度、通常−30℃〜−50℃で除去することができる溶媒
を選ぶ。必要であれば、トレハロースもしくはスクロース等の凍結防止剤を添加
してもよい。噴霧乾燥によって溶媒の除去を行う場合、通常空気圧を1.0kg/cm2
、空気流速を0.35cm2/分に調節する。吸気口の温度は、使用する溶媒の沸点より
高い温度に調節する。例えば前記溶媒にクロロホルムを用い、温度を60〜90℃に
調節することができる。尚噴霧乾燥は、従来の方法によって行うことができる。
このようにして得た脂質残基を、造影剤を含有する水溶液と、使用する脂質の
相転移温度（Tc）と等しいか、もしくはそれより高い温度のもとで混合し、続い
てその混合物を激しく、もしくはより穏やかに振とうし、または、前記Tcと等し
いか、もしくはそれより高い温度で攪拌し、造影剤を含有する水溶液中に懸濁し
た望ましい小胞を生成する。造影剤を含有する水溶液中の電解質イオン濃度は、
望ましくは、カプセル化の効率に悪影響をもたらさない範囲でできるだけ低くす
べきであり、通常、造影剤を離れる陽イオンと陰イオンの濃度の合計は、40mM以
下であることが望ましく、20mM以下であることが望ましい。
このようにして調製した小胞は、水性媒体（外液）中に懸濁物として存在し、
通常それ自身で診断用組成物として使用される。小胞の製造中、小胞内でカプセ
ル化されなかった造影剤の溶液が外液として存在する。また、その外液は、他の
液体に変えることが可能である。もっとも、造影剤の濃度は、外液と内液で同じ
であることが望ましい。いずれにしても、その外液（分散媒体）は、小胞の内側
の液体相と等しい浸透圧であることが好ましい。このようにして調製された懸濁
液の電解質イオン濃度は、できるだけ低いことが望ましく、通常、造影剤から離
れた陽イオンと陰イオンの合計濃度は、加熱殺菌および長期保存の際の小胞の安
定性を高めるために、約40mM以下であることが望ましく、約20mM以下であること
が好ましい。
前記小胞のカプセル化能力は、通常、5ml/g（脂質）以上であるが、6ml/g以上
であることが好ましい。本発明の方法によってヨウ化Ｘ線造影剤をカプセル化す
る際、水溶液原液中の造影剤の濃度は高いことが望ましい。例えば、200〜460mg
I/mL、さらに250〜400mg I/mLであることが好ましい。
本発明のもっとも好ましいＸ線造影剤組成物は、中性リン脂質（例えば、水素
化されたフォスファチジルコリン）および荷電リン脂質（例えば、水素化された
フォスファチジルセリン）を重量比約10：1で含有するリポソームを含む。その
ような組成物は、カプセル化能7ml/g以上をもち得る。そのような組成物を使用
したもっとも好ましいＸ線造影剤は、イオジキサノールおよびイオヘキソールで
ある。リポソームの内側と外側の水性媒体は、好ましくは約300〜400mg I(イオ
ジキサノール)/ml、ならびにソルビトール等の張度調整剤、ＥＤＴＡＮａ2Ｃａ
等の安定剤およびＴＲＩＳ緩衝剤（ｐＨ約7.4）を含むことが好ましい。
本発明では、小胞組成物に関して述べてきたが、非経口投与（特に、経静脈投
与及び経動脈投与）用の他の粒子含有水性組成物でもよい。ここで、その粒子は
Ｘ線造影剤、例えば、ヨウ化化合物であるか、またはそれを含有する。そのよう
な粒子は、懸濁液、例えば、水溶性液体Ｘ線造影剤の小滴であってもよく、また
は、それらは水溶性固体Ｘ線造影剤の固体粒状物であってもよい。そのような粒
子は、8×1012以下（好ましくは6×1012未満、特に好ましくは4×1012未満、さ
らに特に好ましくは2×1012未満、さらに1012未満、例えば、0.3〜4.5×1012小
胞）の粒子中に100mg Iの用量が含有されるようなヨウ素含有量とすべきである
。また、そのような、組成物は、望ましくは、水相に溶解したヨウ化Ｘ線造影剤
を、例えば、ヨウ素用量の合計を最高60％とするように含むことが好ましい。
ここに引用した文献は、参考のために引用した。
以下の実施例および添付の図面によって本発明をさらに説明する。
図１は、本発明の調製物をラットに経静脈投与した４時間後の粒径（Ｄｚ）に
対する肝臓：脾臓分布率のプロットを示す。
実施例１の懸濁液は、実施例9〜12の懸濁液と同一とする。実施例2の懸濁液は
実施例13および17の懸濁液と同一とする。実施例5の懸濁液は、実施例10および1
4の懸濁液と同一とする。実施例11の懸濁液は、実施例15および19の懸濁液と同
一とする。実施例１（比較例）〜４
イオジキサノール溶液をビーカーに準備し、攪拌しながら95℃まで加熱し、透
明溶液を得た。もっとも濃度の高いイオジキサノール溶液を、多めの水に溶解し
、過剰分を後に蒸発させた。その溶液を暗室で一晩4℃で保存した。その後、張
度を調節するために、必要に応じてソルビトールを添加した。前記イオジキサノ
ール溶液を、80℃の水槽に連結した加熱ジャケットの付いたガラス製リアクター
に入れた。前記リン脂質混合物（水素化卵ホスファチジルコリンと水素化卵ホス
ファチジルセリンを重量比11：1で混合）を前記溶液に攪拌しながら添加した。
その分散液を攪拌しながら65〜76℃に加熱し、さらに20分以上攪拌した。その分
散液を高速ローターステーター（イーストラル（Ystral））を用いて13000rpmで
ホモジナイズし、その後、80℃の加熱ジャケットの付いた圧力タンクに移した。
その分散液を、７つの1.0μｍポリカーボネートフィルターに通して3〜6Barで抽
出した。そのリポソーム懸濁液を50℃以下に冷却した後、ＴＲＩＳ／ＥＤＴＡ溶
液を添加し、その調製物を高圧滅菌した。
その組成の詳細を下記の表1および2に示す。
実施例２
1μｍではなく3〜5μｍの大きな孔径に通して抽出した以外は、実施例1と同様
にリポソームを作製した。粒径範囲の小さい粒子を遠心分離またはクロスフロー
濾過によって除去し、脂質比率3.6、平均体積径(mean volume diameter)0.95μ
ｍのカプセル化されたヨウ素を含む粒子を生成した。
100mgのカプセル化されたヨウ素用量に必要な粒子数は、9.2×109である。実施例５〜８
イオヘキソール溶液をビーカーに準備し、攪拌しながら95℃まで加熱し、透明
溶液を得た。その後、張度を調節するために、必要に応じてソルビトールを添加
した。
前記イオヘキソール溶液を、80℃の水槽に連結した加熱ジャケットの付いたガ
ラス製のリアクターに添加した。脂質混合物（実施例1〜4と同様）を前記溶液に
攪拌しながら添加した。その分散液を攪拌しながら65〜75℃に加熱し、さらに20
分以上攪拌した。その分散液を高速ローターステーター（イーストラル(Ystral
））を用いて13000rpmでホモジナイズし、その後、80℃の加熱ジャケットの付い
た圧力タンクに移した。
前記分散液を、７つの1.0μｍポリカーボネートフィルターに通して3〜6Barで
抽出した。前記リポソーム懸濁液を50℃以下に冷却した後、ＴＲＩＳ／ＥＤＴＡ
溶液を添加し、その後バイアルに注いだ。そのバイアルを連続的に振とうしなが
ら高圧滅菌した。
実施例5〜8の分散液を100mg（カプセル化Ｉ）／kg（体重）の用量でラットに
静脈注射した。
実施例９（比較例）−11
下記に挙げたリポソームを100mg（カプセル化Ｉ）／kg（体重）の用量でウサ
ギに静脈注射したところ、ウサギの正常な肝組織にリポソームが特異的に蓄積し
、40HU（ハウンズフィールド単位）を上まわるコントラスト増強が認められた。
肝臓内の転移病巣はリポソームを吸収しないので、リポソーム注射後、病巣では
画像が増強されることになる。
フィリップストモスキャン(PhlipsTomoscan)SR7000で画像化診断を行った。薄
片厚さ(slice thickness)5mm、スキャン時間1秒、ウサギ4羽を1群とした。 実施例12（比較例）〜15および16（比較例）〜20
100mg（カプセル化Ｉ）／kg（体重）の用量でラットに静脈注射したところ、
カプセル化イオジキサノールは、主に肝臓のクッパー細胞に吸収され、クッパー
細胞での吸収に続いて脾臓で濾過される。正常な肝臓でリポソームが特異的に吸
収され、40HUを上まわる増強効果をもたらすことが、ラットおよびウサギの両方
で証明された。このコントラスト増強効果を高めるヨウ素濃度は、１mg Ｉ/g（
肝臓）以上である。表7〜10に示すように、使用した前記調製物の肝臓における
ヨウ素濃度は、1mg Ｉ/g（組織）以上となった。
投与4時間後の粒径分布と肝臓／脾臓比率を添付図面の図１に示す。
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Granular composition
The present invention relates to a parenterally administrable granular composition, especially a contrast agent, for example, nuclear magnetic resonance.
Diagnostic imaging (MRI), X-ray, ultrasound, optical or nuclear imaging contrast agents, especially X-rays
The invention relates to contrast agents, more particularly X-ray contrast agents containing vesicles.
Contrast agents can be used, for example, in different organs to enhance the contrast of the resulting image.
Diagnostic imaging therapy (eg, to help identify differences between organs or normal and diseased tissue)
For example, it is widely used in CT, MRI, ultrasound, and the like.
In the field of X-ray imaging, commercially available contrast agents are mainly classified into the following two types.
That is, insoluble inorganic heavy metal salts for diagnostic imaging of the gastrointestinal (GI) tract (for example,
Barium sulfate), and soluble for parenteral administration or also for GI imaging
Organic iodide compounds (typically triiodophenyl monomers and dimers, e.g.
For example, iohexol and iodixanol).
Due to its hydrophilicity and small molecular weight, soluble organic iodides are
The biodistribution and elimination patterns from the body are all similar, and
It is distributed relatively early in the extracellular fluid (ECF) area before being excreted. Therefore
For parenteral administration because it is better in terms of patient discomfort and tolerability
, A non-ionic compound (eg, iohexol) is converted to an ionic compound (eg,
Trizoate), despite their marked preference, their clinical indications are the same
It is.
However, new contrast agents with organ specificity, especially liver (liver contrast agent), blood vessels
Control of specific organs such as the system (blood pool contrast agent) and lymph nodes (lymphatic contrast agent)
There is a growing demand for target substances that enhance last.
To meet the demands of the liver, blood by the reticuloendothelial system to have a granular nature
Various attempts have been made to produce a particulate contrast agent extracted from and stored in the liver.
I have been. High demand for iodophenyl contrast agent to meet demand for blood storage contrast agent
It has given a small amount of substance or structure to prolong its blood half-life. Lymph node painting
Regarding diagnostic imaging, no attempt has been made to administer the granular contrast agent locally (for example, subcutaneously).
I have been. However, granular nodes can be administered intravenously to image lymph nodes
It is.
Promising liver contrast agents include biodegradable particles (WO 89/00988 and WO 90/07491).
X-ray contrast agent containing liposome (see WO95 / 26205) and emulsion (EP-
A-294534), but contrast agents have been manufactured, but none of them are commercially available.
Not. Therefore, an efficient and stable non-toxic organ-specific X-ray contrast agent
Need to be achieved.
Contrast agents containing vesicles, for example, liposome contrast agents described in WO95-26205,
Promising liver imaging results in animal experiments, and good safety in preclinical studies
2 shows the integrity profile. However, humans using diagnostically desirable doses
In the applicant's test, to a lesser extent, unpleasant side effects occurred.
Thus, phospholipid liposomes (average (Z-average) particle size about 350 nm,
About 40% of the total volume of the liposome)
Preparation of liposomes containing 80 mg I / mL of water-soluble nonionic X-ray contrast agent dissolved in a medium
Contrast agents (dose 70-100 mg I / kg (body weight)) may cause fever, chills, headache, nausea and vomiting.
Caused these side effects. These side effects are related to the number of particles administered to the patient
It has been reported.
The present invention shows that at diagnostically effective doses of iodine, such side effects do not occur.
Or to provide a granular contrast agent with reduced side effects to tolerable levels
And
For example, using higher concentrations of iodine and / or higher volume vesicles
Is used to reduce the number of iodine particles (particles / mg) contained in the composition.
Thus, the present invention can achieve the above object.
Thus, according to one aspect, the invention relates to a contrast agent composition, preferably an aqueous medium.
X-ray contrast agents containing vesicles (eg, micelles or liposomes) in body suspension
Wherein the vesicles, and optionally the aqueous medium, contain an iodine x-ray contrast agent;
The composition containing 100 mg of I incorporated into the vesicles contains 8 × 1012Less than
The lower vesicle (preferably 6 × 1012Less than 4 × 10 particularly preferred12Less, even more preferred
Or 2 × 1012Less than, and more particularly 1012Less than, for example, 3-9 × 1011Especially preferred
Or 1 × 107~ 9 × 1011Less than, for example, 1 × 107~ 9.8 × 109Vesicles)
And a contrast agent composition characterized by the following. Encapsulated iodine and vesicle membrane material
The weight ratio of (eg, lipids) is preferably 1.8: 1 or more, such as 2: 1 or more, for example,
It is 2 to 5: 1, more preferably 2.5 to 4.8: 1, particularly preferably 3.0 to 4.5: 1. Previous
In the above composition, the iodine content in the vesicle is preferably 40% or more.
The content of the encapsulated iodine is preferably 30 mg / mL or more (based on the whole composition).
), More preferably at least 60 mg / mL, particularly preferably at least 100 mg / mL.
According to yet another aspect, the present invention provides an image having enhanced contrast, for example,
A method for generating an X-ray image, comprising the steps of:
Parenteral (eg, intravenous or transarterial) to the body of an external animal, preferably a mammal
Pulse) to administer at least part of the body, preferably at least an image of the liver, preferably
Alternatively, a method for generating an X-ray (eg, CT) image is provided.
In the composition of the present invention, the vesicle is unilamellar or multilamellar.
There may be. The composition comprises a bilamellar or trilamellar liposome, and
It is preferred to have high levels of unilamellar vesicles. Vesicles (where
The term vesicle is used to refer to both unilamellar and multilamellar)
The iodine is, for example, encapsulated in the vesicle nucleus,
And / or by incorporating the vesicles into the vesicle membrane,
Can accompany.
However, the aqueous medium in which the vesicles are suspended, dissolves the dissolved iodine organic contrast agent,
In particular, it is particularly preferable to contain iodine in the nucleus of the vesicle or at a concentration close thereto.
Thus, the contrast agent has a triple contrast effect, i.e., the vesicles
Enhances contrast in blood pooling and RES (eg, liver and lymph nodes)
In addition, the iodinated contrast agent in an aqueous suspension medium can be used to control blood pooling and other ECF.
Create a trust. Generally, the iodine concentration in the composition is suitably between 100 and 5
00 mg I / mL, especially 100-460 mg I / mL, further 150-420 mg I / mL, especially 200-400 mg I / mL
mL, more particularly 225-370 mg I / mL. Concentration of contrast agent encapsulated in vesicles
Is 40 mg I / mL or more (for example, 40 to 160 mg I / m
L), particularly preferably 40 to 100 mg I / mL or more. Over time, or
When administered to dynamically image the liver, the dose is preferably
60-600 mg I / g (total), preferably 150-500 mg I / kg, more preferably 200-
400 mg I / kg. Increasing iodine concentration in this way has a particularly diagnostic effect
Intravascular injection of contrast agent by iodine concentration by injection or infusion, especially by bolus injection
To be administered.
The fact that the iodine concentration inside and around the vesicles is substantially the same indicates that the contrast agent
This is further advantageous in terms of simplification of the structure, sterilization, and particularly high-pressure sterilization. Because the capture
No need to remove iodine that is rare, dispersion over time (and thus
) Does not significantly change the iodine distribution.
The number of particles of the contrast agent of the present invention, for example, the number of vesicles per mL, is an important parameter per se.
Not a parameter. Grains per dose (ie dose per kg of patient in particular)
The number of children is important, and thus is a feature of the present invention.
The side effects and low imaging effect of the prior art parenterally administered granular X-ray contrast agent are
Resulting from excessive accumulation of the particulate absorption system in the organs, and therefore
Inhalation that can cause intolerable side effects to enhance liver contrast
Deliver a diagnostically effective dose of iodine to the liver without causing aberrant saturation
We believe that is important.
The X-ray contrast agent used in the composition of the present invention is preferably a triiodophenylated
Compounds, particularly preferably non-ionic compounds. Monomers (eg, iohex
Use both dimers (eg, sole) and dimers (eg, iodixanol)
Can be. Examples of suitable X-ray contrast agents include WO-A-96 / 09282, WO-A-96 / 092
85. The compound according to 85, as well as iodixanol, iopentol, iohexo
, Metrizamide, metrizoate, ioversol, ioxirane, ioxag
Lat, Iopamidol, Iotrolan, Ioglycate, Io
Meprol (iomeprol), iofendilate, iopromide, iodimide (io
simide), iotasul, iothalamate, iotroxate (iot)
roxate) and compounds such as ioxythalamic acid. But Iohexo
And nonionic monomers such as thiol, iopamidol and iopentol
Non-ionic dimers such as odixanol and iotrolane are most preferred
No.
In compositions of the invention as vesicles for transporting encapsulated iodine to the liver
The vesicles used in the above are prepared by a conventional method using a vesicle membrane-forming substance, preferably a phospholipid.
Can be manufactured by Examples of suitable film-forming substances are given in WO 95/26205
However, the disclosure is described here for reference. That is, the film is neutral
It is preferred to include both phospholipids and charged phospholipids. In addition, both phosphorus fats
Preferably, the quality is substantially saturated.
Neutral phospholipids preferably contain at least one nearly saturated fatty acid residue.
New The number of carbon atoms in such a fatty acid residue is preferably 15 or more, more preferably
16 or more. When the number of carbon atoms in such a fatty acid residue is less than 14, liposome
The ability to retain in the internal aqueous phase is low, and the stability of blood liposomes after administration is low. on the other hand
If the fatty acid residue has 28 or more carbon atoms, biocompatibility will be low, and liposome
During production, it is necessary to maintain high temperatures.
The term "almost saturated" as used above refers to neutral or charged phosphate
Quality fatty acid residues are completely saturated (ie, a carbon-carbon double bond is
Not included) or, for example, an iodine value of 20 or less, preferably 10 or less, most
Preferably their unsaturation is very low, as can be seen from preferably less than 5
Means that. If the degree of unsaturation is too high, the liposomes are easily oxidized.
The vesicle membrane may be a charged phospholipid, such as at least one substantially saturated fatty acid.
It is preferable to include those having a residue. The number of carbons in such fatty acid residues is
Usually, it is 14 or more, preferably 15 or more, more preferably 16 or more. The reasons mentioned above
As expected.
The absolute value of the zeta potential of the vesicles in the composition of the present invention is less than -50 mV, especially less than -58.
Preferably, it is full, and even less than -60, for example, -50 to -70 mV.
Neutral phospholipids useful in the present invention include, for example, neutral glycerophospholipid,
For example, partially or fully hydrogenated naturally occurring (eg, from soybeans)
Or derived from egg yolk) or synthetic phosphatidylcholine, semi-synthetic or synthetic dipalmit
Ilphosphatidylcholine (DPPC) or distearoylphosphatidyl
Choline (DSPC).
Charged phospholipids useful in the present invention include, for example, those having a positive or negative charge.
Glycerophospholipids. As negatively charged phospholipids,
E.g., phosphatidylserine, e.g., partially or fully hydrogenated naturally occurring
Raw (eg soy or egg yolk) or semi-synthetic phosphatidylserine,
Especially semi-synthetic or synthetic dipalmitoyl phosphatidylserine (DPPS),
Is distearoyl phosphatidylserine (DSPS); phosphatidylglycero
For example, partially or fully hydrogenated naturally occurring (eg, from soybeans)
Or from egg yolk) or semisynthetic phosphatidylglycerol, especially semisynthetic or
Is synthetic dipalmitoyl phosphatidylglycerol (DPPG),
Aroyl phosphatidyl glycerol (DSPG); phosphatidylinositol
Such as partially or fully hydrogenated naturally occurring (eg, soybean-derived
Or from egg yolk) or semisynthetic phosphatidylinositol, especially semisynthetic or synthetic
Adult dipalmitoyl phosphatidylinositol (DPPI) or distearo
Ilphosphatidylinositol (DSPI); phosphatidic acid, eg, a moiety
Naturally or completely hydrogenated (eg soybean or egg yolk)
Or semisynthetic phosphatidic acid, especially semisynthetic or synthetic dipalmitoylphospha
Thidic acid (DPPA) or distearoyl phosphatidic acid (DSPA)
No. Typically, such charged phospholipids are used alone, but multiple charged
A phospholipid may be used. To avoid aggregation when using multiple charged phospholipids
It is preferred that both charged phospholipids are positively charged, or that both charged phospholipids are positively charged.
It is preferred that the lipid be negatively charged.
Examples of positively charged lipids include phosphatids containing amino alcohols.
Esters of dic acid, such as dipalmitoyl phosphatidic acid or hydroxy
Esters of distearoyl phosphatidic acid including ethylene diamine;
You.
According to the invention, the ratio of neutral phospholipid to charged phospholipid is usually 200: 1 by weight.
~ 3: 1, preferably 60: 1 to 4: 1, more preferably 40: 1 to 5: 1, for example about 10:
Is one.
The average size of the vesicles is between 50 and 4000 nm, especially between 100 and 3000 nm, and even between 150 and 2000 nm.
Preferably. Its size limit partially affects capillary size constraints
However, in the case of vesicles having a flexible membrane, the range may be exceeded. That
The lower size limit, according to a desirable aspect of the invention, is a diagnostically effective dose of iodine.
The number of vesicles needed to deliver hepatic and other parts of the RES
To be determined. Vesicle size selection is performed through a filter of appropriate pore size
, By extracting larger vesicles (Bio ChemiBio Physiactor,
Biochem Biophys Acta 557: 9 (1979)), or gravity or centrifugation techniques
Thus it can be achieved.
The contrast agent composition of the present invention may be any of a variety of optional ingredients in addition to the film forming material and the X-ray contrast agent.
May have minutes. For example, vitamin E (α-tocopherol) as an antioxidant
And / or vitamin E acetate in an amount of 0.01 to 2 mol% based on the total amount of lipids,
Preferably, it may be contained in an amount of 0.1 to 1 mol%. Similarly, add sorbitol to tonicity (ton
icity) It is preferable to include it as a regulator (particularly, non-ionic dimers are subjected to X-ray imaging.
Important when used as an agent).
Concentration of diagnostic composition containing vesicles containing phospholipids with respect to total lipid content
Is usually from 10 mg / ml to 100 mg / ml to enhance the encapsulation of the contrast agent in the vesicles.
Preferably between 15 mg / ml and 90 mg / ml, and more preferably between 20 mg / ml and 80 mg / ml
.
Such a contrast agent is suitable for maintaining the vesicles stable in the body after administration.
In the medium, in the form of isotonic solutions or suspensions in vesicles (to the physiological osmotic pressure in the body)
Related). Water, TRIS-H as medium
Buffers such as CL buffer, phosphate buffer and citrate buffer can be used.
You.
The pH range at room temperature is preferably between 4.5 and 8.5. 6.8 to 7.8
More preferred. The contrast agent is a nonionic X-ray contrast agent having a large number of hydroxyl groups, for example,
, Iohexol, iodixanol or iopamidol, buffer
The liquid preferably has a negative temperature coefficient as described in US-A-4278654.
No. The amine buffer has the required properties, especially TRIS. This type of buffer
The solution has a lower pH at the autoclaving temperature and increases the stability of the X-ray contrast agent during autoclaving.
While returning to a physiologically better pH at room temperature.
To obtain an isotonic solution or suspension, the contrast agent is used at a concentration that provides an isotonic solution.
Dissolve or suspend in the vehicle. For example, because the solubility of the contrast agent is low,
If the contrast agent alone cannot produce an isotonic solution, other non-toxic
Water-soluble substances, for example, salts such as sodium chloride, mannitol, glucose,
Saccharides such as sucrose and sorbitol may be added to the medium.
Although also disclosed in WO95 / 26205, one particularly advantageous aspect of the compositions of the present invention is that
It can withstand high pressure sterilization. The composition of the present invention has a high encapsulation ability,
Moreover, since they are lipid compositions, the encapsulation rate is high.
Said vesicles are prepared according to the conventional methods used for the production of multilamellar liposomes.
Can be manufactured. This includes the Bangham method (Journal
Leoff mole dial (J. Mol. Dial.)13238-252 1965), polyhydric alcohol
Law (Japanese Patent Publication (publication) 4-36734), Lipid Solution Method (Japanese Patent Publication (publication) 4-3)
No. 6735) and a mechanochemical method (Japanese Patent Publication No. 4-28412).
Usually, the preferred multilamellar vesicles include the phospholipids in chloroform, meta
Or a volatile organic solvent such as ethanol,
It is dissolved in a mixed solvent of a medium and water, the solvent is removed, and the resulting residue and the contrast agent are contained.
Can be prepared by mixing with water phase and stirring the mixture
You.
As the solvent removal step in the above method, evaporation is used in the bangham method.
Spray drying or freeze drying can also be used.
In the vesicle preparation step, the amount of solvent used for the lipid is not important,
Any amount can be used as long as it can dissolve the compound. Removal of solvent from the resulting lipid-solvent mixture
Can be carried out in a conventional manner, for example under reduced pressure or, if necessary, in the presence of an inert gas.
Can be performed by vapor deposition. In fact, the volatile organic solvents are desirable
Or in a mixture of the organic solvent (volume 10) and water (up to volume 1).
Can also be.
Under reduced pressure of about 0.005 to 0.1 Torr to remove the solvent by lyophilization
Solvent that can be removed at a temperature lower than the freezing temperature of the solvent, usually -30 ° C to -50 ° C
Choose If necessary, add antifreeze such as trehalose or sucrose
May be. When removing the solvent by spray drying, usually the air pressure is 1.0 kg / cmTwo
, Air velocity 0.35cmTwoAdjust to / min. The temperature of the inlet is higher than the boiling point of the solvent used.
Adjust to a higher temperature. For example, use chloroform as the solvent, and raise the temperature to 60 to 90 ° C.
Can be adjusted. The spray drying can be performed by a conventional method.
The thus obtained lipid residue is combined with an aqueous solution containing a contrast agent and a lipid used.
Mix at a temperature equal to or higher than the phase transition temperature (Tc), then
Shake the mixture vigorously or more gently, or
Stir at squid or higher temperature and suspend in aqueous solution containing contrast agent
To produce the desired vesicles. The electrolyte ion concentration in the aqueous solution containing the contrast agent is
Desirably, it should be as low as possible without adversely affecting the encapsulation efficiency.
Normally, the sum of cation and anion concentrations leaving the contrast agent should not exceed 40 mM.
It is desirable that it is below, and it is desirable that it is 20 mM or less.
The vesicles thus prepared are present as a suspension in an aqueous medium (external solution),
Usually used by itself as a diagnostic composition. Capsules in vesicles during vesicle production
A solution of the contrast agent that has not been converted is present as an external solution. In addition, the external solution
It can be changed to a liquid. However, the concentration of the contrast agent is the same in the external solution and the internal solution
It is desirable that In any case, the external liquid (dispersion medium) is inside the vesicle
It is preferable that the osmotic pressure is equal to that of the liquid phase. The suspension thus prepared
It is desirable that the electrolyte ion concentration of the solution be as low as possible,
The total concentration of cations and anions that have been isolated should be
To improve the qualitative value, it is desirable to be about 40 mM or less, and about 20 mM or less
Is preferred.
The encapsulation capacity of the vesicle is usually 5 ml / g (lipid) or more, but 6 ml / g or more.
It is preferred that Encapsulating iodine X-ray contrast agent by the method of the present invention
In this case, it is desirable that the concentration of the contrast agent in the aqueous solution is high. For example, 200-460mg
It is preferably I / mL, more preferably 250-400 mg I / mL.
The most preferred X-ray contrast agent compositions of the present invention are neutral phospholipids (eg, hydrogen
Phosphatidylcholine) and charged phospholipids (eg, hydrogenated
Phosphatidylserine) in a weight ratio of about 10: 1. That
Such compositions may have an encapsulation capacity of 7 ml / g or more. Use such a composition
Most preferred X-ray contrast agents were iodixanol and iohexol.
is there. The aqueous medium inside and outside the liposomes is preferably about 300-400 mg I (Io
Dixanol) / ml, and a tonicity adjusting agent such as sorbitol, EDTANaTwoCa
And a TRIS buffer (pH about 7.4).
Although the present invention has been described with reference to the vesicle composition, parenteral administration (particularly, intravenous administration) is performed.
Administration and transarterial administration). Where the particles are
An X-ray contrast agent, for example, or contains an iodide compound. Like that
The fine particles may be a suspension, for example, a droplet of a water-soluble liquid X-ray contrast agent,
May be solid particulates of a water-soluble solid X-ray contrast agent. Such grains
The child is 8 × 1012Below (preferably 6 × 1012Less than 4 × 10 particularly preferred12Less than
Especially preferably 2 × 1012Less than 1012Less than, for example, 0.3-4.5 × 1012small
The iodine content should be such that a dose of 100 mg I is contained in the particles of
. Also, such a composition desirably comprises an iodinated X-ray contrast agent dissolved in an aqueous phase.
For example, such that the total iodine dose is up to 60%.
The references cited herein are cited for reference.
The present invention is further described by the following examples and the accompanying drawings.
FIG. 1 shows the particle size (Dz) 4 hours after intravenous administration of the preparation of the present invention to rats.
Shown is a plot of liver: spleen distribution rate versus.
The suspension of Example 1 is identical to the suspensions of Examples 9-12. The suspension of Example 2 is
Same as the suspensions of Examples 13 and 17. The suspension of Example 5 is the same as that of Examples 10 and 1.
Same as suspension of 4. The suspension of Example 11 is the same as the suspensions of Examples 15 and 19.
One.Examples 1 (Comparative Examples) to 4
Prepare the iodixanol solution in a beaker, heat to 95 ° C with stirring, and
A light solution was obtained. Dissolve the most concentrated iodixanol solution in plenty of water
The excess was later evaporated. The solution was stored at 4 ° C. in the dark overnight. Then Zhang
Sorbitol was added as needed to adjust the degree. The iodixano
A glass reactor with a heating jacket connecting the cooling solution to an 80 ° C water bath
Put in. The phospholipid mixture (hydrogenated egg phosphatidylcholine and hydrogenated egg phos- phos)
(Fatidylserine was mixed at a weight ratio of 11: 1) was added to the solution with stirring.
The dispersion was heated to 65-76 ° C. with stirring and further stirred for more than 20 minutes. That much
Sprinkled liquid at 13000 rpm using high-speed rotor stator (Ystral)
Homogenized and then transferred to a pressure tank with a heating jacket at 80 ° C.
The dispersion is passed through seven 1.0 μm polycarbonate filters and extracted at 3-6 Bar.
Issued. After cooling the liposome suspension to 50 ° C or lower, the TRIS / EDTA
The liquid was added and the preparation was autoclaved.
Details of the composition are shown in Tables 1 and 2 below.
Example 2
Same as Example 1 except that extraction was performed not through 1 μm but through a large pore size of 3-5 μm
A liposome was prepared. Centrifuge or cross flow small particles
Removed by filtration, lipid ratio 3.6, mean volume diameter 0.95μ
Particles containing m encapsulated iodine were produced.
The number of particles required for a 100 mg encapsulated iodine dose is 9.2 x 109It is.Examples 5 to 8
Prepare the iohexol solution in a beaker, heat to 95 ° C with stirring, and
A solution was obtained. Then add sorbitol as needed to adjust tonicity
did.
The iohexol solution was heated with a heating jacket connected to an 80 ° C water bath.
It was added to the Russ reactor. A lipid mixture (as in Examples 1-4) is added to the solution
It was added with stirring. The dispersion is heated to 65-75 ° C. with stirring, and
Stir for more than a minute. The dispersion is transferred to a high-speed rotor stator (Ystral
)) And homogenize at 13000 rpm, then with 80 ° C heating jacket
Transferred to a pressure tank.
The dispersion is passed through seven 1.0 μm polycarbonate filters at 3-6 Bar.
Extracted. After cooling the liposome suspension to 50 ° C. or less, TRIS / EDTA
The solution was added and then poured into vials. While continuously shaking the vial
Then, it was autoclaved.
The dispersions of Examples 5 to 8 were administered to rats at a dose of 100 mg (encapsulation I) / kg (body weight).
It was injected intravenously.
Example 9 (Comparative Example) -11
The following liposomes were used at a dose of 100 mg (encapsulation I) / kg (body weight)
When injected intravenously into guinea pigs, liposomes specifically accumulate in normal liver tissue of rabbits.
, 40HU (Hounsfield unit).
Metastatic foci in the liver do not absorb liposomes, so
The image will be enhanced.
Imaging diagnosis was performed with a Philips Tomoscan SR7000. Thin
A slice thickness of 5 mm, a scan time of 1 second, and four rabbits were set as one group. Examples 12 (Comparative Example) to 15 and 16 (Comparative Example) to 20
Rats were injected intravenously at a dose of 100 mg (encapsulated I) / kg (body weight),
Encapsulated iodixanol is mainly absorbed by Kupffer cells in the liver,
It is filtered in the spleen following absorption in the cells. Liposomes specifically adsorb in normal liver
Can produce potentiating effects above 40 HU in both rats and rabbits
Proven in. The iodine concentration that enhances this contrast enhancement effect is 1 mg I / g (
Liver). As shown in Tables 7-10, in the liver of the preparation used
The iodine concentration was 1 mg I / g (tissue) or more.
The particle size distribution and liver / spleen ratio 4 hours after administration are shown in FIG. 1 of the accompanying drawings.
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(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ
Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ
，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，
ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ
Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ
，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ
，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，
ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，Ｆ
Ｉ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ
，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，
ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，Ｍ
Ｗ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ
，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，
ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ
(72)発明者 ジェークネス、キャスリン
ノルウェー、エヌ―0401 オスロー、ナイ
コヴェイエン １―２、ナイコムド イメ
ージング エーエス内
(72)発明者 ファールビック、アン、ケルスティ
ノルウェー、エヌ―0401 オスロー、ナイ
コヴェイエン １―２、ナイコムド イメ
ージング エーエス内────────────────────────────────────────────────── ───
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(81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE,
DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, L
U, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF)
, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE,
SN, TD, TG), AP (GH, KE, LS, MW, S
D, SZ, UG, ZW), EA (AM, AZ, BY, KG)
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(72) Inventor Jakeness, Kathryn
Norway, N-4001 Oslo, Nai
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(72) Inventors Farbic, Ann, Kelsty
Norway, N-4001 Oslo, Nai
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