JP2001321196A - Culture medium laminate and sheet-like culture medium for salmonella bacterial detection - Google Patents
Culture medium laminate and sheet-like culture medium for salmonella bacterial detectionInfo
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は微生物を培養検出す
るための微生物培地に関する。さらに詳しくは食品や環
境、臨床材料中のサルモネラ菌を培養、検出するための
微生物培地に関する。The present invention relates to a microorganism culture medium for culturing and detecting microorganisms. More particularly, the present invention relates to a microorganism medium for culturing and detecting Salmonella in food, environment, and clinical materials.
【０００２】[0002]
【従来の技術】従来から行われてきた微生物培養検査
は、前もって培地を調製、滅菌しておくなど時間と手間
がかかっていた。さらに、培地を調製、保管するための
一定の場所を確保する必要があった。より簡便、迅速に
微生物培養検査を行うためには、このような、場所や手
間や時間のかかる培地の調製を省くことが好ましい。ま
た、滅菌ペトリ皿として、ガラス製やプラスチック製の
ペトリ皿が使用されているが、食品検査の場合には、多
数の微生物培養検査を行う必要があり、ガラス製ペトリ
皿を培養に使用した場合には、再使用のためにペトリ皿
の洗浄、滅菌等を行わなければならない。これは非常に
手間がかかるため、近年は、廃棄ができる滅菌済プラス
チック製ペトリ皿が利用されるようになってきた。しか
し、この場合には、多量のプラスチック廃棄物となるこ
とから処分等で問題となっていた。2. Description of the Related Art Conventionally, microbial culture tests have required time and labor, such as preparing and sterilizing a medium in advance. Furthermore, it was necessary to secure a certain place for preparing and storing the medium. In order to carry out a microorganism culture test more simply and quickly, it is preferable to omit such a place, labor, and time-consuming preparation of a medium. Glass or plastic Petri dishes are used as sterile Petri dishes, but in the case of food inspection, it is necessary to perform a large number of microbial culture tests. Must be washed, sterilized, etc., for reuse. This is very labor intensive, and in recent years, disposable sterile plastic Petri dishes have been used. However, in this case, since a large amount of plastic waste is generated, there is a problem in disposal and the like.
【０００３】このようなことから、培地調整の手間を省
いた簡易培地が検討され、生産・市販されてきた。これ
ら簡易培地を便宜的に分類すればスタンプタイプ、フィ
ルタータイプ、シートまたはフィルム状タイプ、試験紙
タイプに分類できるが、場所をとらず、保存性と定量性
に優れ、廃棄量も少ないものとなるとシートまたはフィ
ルム状タイプしかない。このようなタイプの簡易培地と
して、特公平２−４９７０５号公報、特開平３−１５３
７９号公報、特開平６-１８１７４１号公報の例があ
る。しかし、これらの公報中には食中毒の起因となり、
衛生予防上管理が必要となるサルモネラ菌の検出につい
ては示されていない。[0003] Under such circumstances, a simple medium in which the trouble of adjusting the medium is omitted has been studied, produced and marketed. If these simple media are conveniently classified, they can be classified into stamp type, filter type, sheet or film type, and test paper type.However, they take up little space, are excellent in preservability and quantification, and require less waste. There is only a sheet or film type. Such a simple medium is disclosed in Japanese Patent Publication No. 2-49705 and Japanese Patent Application Laid-Open No. 3-153.
79 and JP-A-6-181741. However, these publications cause food poisoning,
No mention is made of the detection of Salmonella that requires hygiene control.
【０００４】ただ、これまで平板寒天培地におけるサル
モネラ菌の分離、鑑別培地としては、ブリリアントグリ
ーン−フェノールレッド乳糖寒天、遠藤寒天、サルモネ
ラ菌寒天、ＳＳ寒天、キシロース−リジンデオキシコレ
−ト寒天、Ｒａｍｂａｃｈ寒天など多くのものが知られ
ていて、この中でもチオ硫酸塩と第二鉄塩を含む培地は
サルモネラ菌などの硫化水素産生菌を検出する培地とし
て食品、環境、臨床材料中の検査分野で利用されてい
る。[0004] However, as a separation and differentiation medium for Salmonella on a plate agar medium, there have been many brilliant green-phenol red lactose agar, Endo agar, Salmonella agar, SS agar, xylose-lysine deoxycholate agar, Rambach agar and the like. Among them, a medium containing a thiosulfate and a ferric salt is used as a medium for detecting hydrogen sulfide-producing bacteria such as Salmonella in the field of inspection of food, environment, and clinical materials.
【０００５】本発明者らは、再公表特許ＷＯ９７／２４
４３２号公報で多孔質マトリックス層と水溶性高分子化
合物層からなるシートまたはフィルム状の培養容器また
は培地を開示した。ここで提案した培地は、次のような
特徴を有するものである。即ち、試料液を多孔質マトリ
ックス層に添加すると、試料液は一旦多孔質マトリック
ス層に保持される。そして、多孔質マトリックス層に保
持された試料液中の水により多孔質マトリックス層に接
している水溶性高分子化合物層が溶解し、同時に水溶性
高分子化合物層中に含有する栄養成分も溶け出し、微生
物の生育分裂が開始される。試料液中に存在する微生物
は、試料液を培地に添加することで多孔質マトリックス
層全体に分散するが、水溶性高分子化合物層表面が徐々
に溶解し高粘度溶液を形成するため、水溶性高分子化合
物層内部までは入らない。溶解した水溶性高分子化合物
層と多孔質マトリックス層とが一体化する過程で、微生
物は多孔質マトリックス層の表面まで押し上げられ、多
孔質マトリックス層の表面にコロニーが形成される。こ
のように、多孔質マトリックス層表面にコロニーが形成
されるため、多孔質マトリックスを用いているにもかか
わらず微生物の計数が比較的良好に行われる。The present inventors have re-issued patent WO 97/24.
No. 432 discloses a sheet or film-shaped culture vessel or medium comprising a porous matrix layer and a water-soluble polymer compound layer. The medium proposed here has the following characteristics. That is, when the sample liquid is added to the porous matrix layer, the sample liquid is once held in the porous matrix layer. Then, the water in the sample liquid held by the porous matrix layer dissolves the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer, and at the same time, the nutrients contained in the water-soluble polymer compound layer also elute. Then, the growth and division of the microorganism is started. Microorganisms present in the sample solution are dispersed throughout the porous matrix layer by adding the sample solution to the culture medium, but since the surface of the water-soluble polymer compound layer gradually dissolves to form a high-viscosity solution, It does not enter the inside of the polymer compound layer. In the process of integrating the dissolved water-soluble polymer compound layer and the porous matrix layer, the microorganisms are pushed up to the surface of the porous matrix layer, and colonies are formed on the surface of the porous matrix layer. As described above, since colonies are formed on the surface of the porous matrix layer, microorganisms can be counted relatively well despite the use of the porous matrix.
【０００６】[0006]
【発明が解決しようとする課題】しかし、このように優
れた多孔質マトリックス層と水溶性高分子化合物層から
なるシートまたはフィルム状の培養容器または培地では
あるが、これを用いてサルモネラ菌を検出するには、サ
ルモネラ菌を特異的に検出させたり、長期保存を可能に
することなど、系について検討する必要があった。本発
明の目的は、多孔質マトリックス層と水溶性高分子化合
物層からなる培地積層物およびそれを用いたシート状培
地においてサルモネラ菌を発色させて検出できる微生物
培地を提供することにある。However, a sheet or film-shaped culture vessel or medium comprising such an excellent porous matrix layer and a water-soluble polymer compound layer is used to detect Salmonella bacteria. In addition, it was necessary to examine the system, such as specifically detecting Salmonella and enabling long-term storage. It is an object of the present invention to provide a culture medium laminate comprising a porous matrix layer and a water-soluble polymer compound layer, and a microorganism culture medium capable of coloring and detecting Salmonella in a sheet culture medium using the same.
【０００７】[0007]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意努力
の結果、チオ硫酸塩および多塩基有機酸の第二鉄塩を含
む培地成分が含有された多孔質マトリックス層と水溶性
高分子化合物層からなる培地積層物およびそれを用いた
シート状培地を使用してサルモネラ菌を培養するとき、
硫化水素産生サルモネラ菌が該培地上で黒く発色し、検
出できることを見いだし本発明を完成するに至った。即
ち、本発明は以下の構成を有するものである。 （１）多孔質マトリックス層と水溶性高分子化合物層と
を含み、多孔質マトリックス層から最も離れた側の水溶
性高分子化合物層に接して台紙を含んでもよい積層物で
あって、該積層物にチオ硫酸塩および多塩基有機酸の第
二鉄塩を含む培地成分が含有されていることを特徴とす
るサルモネラ菌検出用培地積層物。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present inventors have made intensive efforts to form a porous matrix layer containing a medium component containing thiosulfate and a ferric salt of a polybasic organic acid and a water-soluble polymer. When culturing Salmonella using a medium laminate comprising a compound layer and a sheet medium using the same,
The present inventors have found that hydrogen sulfide-producing Salmonella develops black color on the medium and can be detected, and has completed the present invention. That is, the present invention has the following configuration. (1) A laminate comprising a porous matrix layer and a water-soluble polymer compound layer, and optionally including a mount in contact with the water-soluble polymer compound layer farthest from the porous matrix layer, wherein the laminate is A medium laminate for detecting Salmonella, wherein the medium contains a medium component containing a thiosulfate and a ferric salt of a polybasic organic acid.
【０００８】（２）水溶性高分子化合物層が２〜７層で
あることを特徴とする、前記（１）項に記載のサルモネ
ラ菌検出用培地積層物。(2) The laminate for detecting Salmonella according to the above (1), wherein the number of the water-soluble polymer compound layers is 2 to 7.
【０００９】（３）多孔質マトリックスが目付４０〜１
００ｇ／ｍ2、通気度７０〜２４０Ｌ／（ｍ2・ｓｅｃ）
のナイロンメルトブロー不織布であることを特徴とす
る、前記（１）または（２）項に記載のサルモネラ菌検
出用培地積層物。(3) The porous matrix has a basis weight of 40-1.
00 g / m 2 , air permeability 70 to 240 L / (m 2 · sec)
The laminate for detecting Salmonella according to the above (1) or (2), wherein the laminate is a nylon melt-blown nonwoven fabric.
【００１０】（４）水溶性高分子化合物が鹸化度７５〜
９５％、分子量２５０００〜２５００００のポリビニル
アルコールであることを特徴とする、前記（１）〜
（３）項のいずれか１項に記載のサルモネラ菌検出用培
地積層物。(4) The water-soluble polymer compound has a saponification degree of 75 or more.
(1) to (5), which are 95%, polyvinyl alcohol having a molecular weight of 25,000 to 250,000.
(3) The laminate for detecting Salmonella according to any one of (3).
【００１１】（５）多孔質マトリックス層が、その表面
にペプトン、酵母エキス、炭酸ナトリウム、塩化ナトリ
ウムおよびクエン酸鉄アンモニウムから選ばれる少なく
とも１種の成分を目付で０．３〜３ｇ／ｍ2塗布したも
のであることを特徴とする、前記（１）〜（４）項のい
ずれか１項に記載のサルモネラ菌検出用培地積層物。(5) The porous matrix layer is coated with at least one component selected from peptone, yeast extract, sodium carbonate, sodium chloride and iron ammonium citrate in an amount of 0.3 to 3 g / m 2 on the surface thereof. The laminate for detecting Salmonella according to any one of the above (1) to (4), which is characterized in that:
【００１２】（６）培地成分として、酵母エキス、ペプ
トン類、肉エキス類および糖アルコールからなる群から
選択される少なくとも２種の栄養成分、アミノ酸成分お
よび糖成分からなる群から選択される少なくとも１種の
判別用成分、塩化ナトリウム、胆汁末、胆汁酸塩、デオ
キシコール酸塩、タージトールＮｏ．４、バイルソルト
Ｎｏ．３、クエン酸ナトリウム、ブリリアントグリーン
およびクリスタルバイオレットからなる群から選択され
る少なくとも１種の選択剤、フェノールレッドおよびニ
ュートラルレッドからなる群から選択される１種のｐＨ
指示薬、ｐＨ調節剤、チオ硫酸塩、多塩基有機酸の第二
鉄塩、および任意成分としてのノボビオシンを含むこと
を特徴とする、前記（１）〜（５）項のいずれか１項に
記載のサルモネラ菌検出用培地積層物。(6) As a medium component, at least two nutrient components selected from the group consisting of yeast extract, peptones, meat extract and sugar alcohol, and at least one nutrient component selected from the group consisting of amino acid component and sugar component. Species identification component, sodium chloride, bile powder, bile salts, deoxycholate, Tarditol No. 4, Vail Salt No. 3. at least one selective agent selected from the group consisting of sodium citrate, brilliant green and crystal violet, and one pH selected from the group consisting of phenol red and neutral red
The method according to any one of the above (1) to (5), comprising an indicator, a pH adjuster, a thiosulfate, a ferric salt of a polybasic organic acid, and novobiocin as an optional component. Of the medium for detecting Salmonella.
【００１３】（７）アミノ酸成分と糖成分をそれぞれ別
の水溶性高分子化合物層に含むことを特徴とする、前記
（６）項に記載のサルモネラ菌検出用培地積層物。(7) The laminate for detecting Salmonella according to the above (6), wherein the amino acid component and the sugar component are contained in separate water-soluble polymer compound layers.
【００１４】（８）培地成分として、それぞれ積層物に
対する目付で０〜３ｇ／ｍ2の酵母エキス、０〜６ｇ／
ｍ2のペプトン、０〜３ｇ／ｍ2の肉エキス、０〜３ｇ／
ｍ2の塩化ナトリウム、０〜１ｇ／ｍ2のデオキシコール
酸ナトリウム、０〜６ｇ／ｍ2の胆汁酸塩、０〜２ｇ／
ｍ2のバイルソルトＮｏ．３、０〜４ｇ／ｍ2のマンニト
ール、０〜３ｇ／ｍ2のＬ−リジン塩酸塩、０〜０．１
ｇ／ｍ2のＬ−シスチン、０〜６ｇ／ｍ2のラクトース、
０〜５ｇ／ｍ2のサッカロース、０〜３ｇ／ｍ2のキシロ
ース、無水物換算で１〜４ｇ／ｍ2のチオ硫酸ナトリウ
ム、０．２〜１．５ｇ／ｍ2のクエン酸鉄（III）アンモ
ニウム、０〜０．１ｇ／ｍ2のフェノールレッド、０〜
０．０１ｇ／ｍ2のブリリアントグリーン、０〜０．０
１ｇ／ｍ2のクリスタルバイオレット、０〜０．３ｇ／
ｍ2のニュートラルレッド、０〜０．０５ｇ／ｍ2のノボ
ビオシン、および０．１〜１ｇ／ｍ2のｐＨ調節剤を含
むことを特徴とする、前記（６）または（７）項に記載
のサルモネラ菌検出用培地積層物。(8) As a medium component, a yeast extract of 0 to 3 g / m 2 and a weight of 0 to 6 g / m
peptone m 2, of 0~3g / m 2 meat extract, 0~3g /
m 2 of sodium chloride, sodium deoxycholate 0～1G / m 2, bile salts 0~6g / m 2, 0~2g /
m 2 of Vail Salt No. 3, 0-4 g / m 2 mannitol, 0-3 g / m 2 L-lysine hydrochloride, 0-0.1
g / m 2 of L- cystine, lactose 0~6g / m 2,
0 to 5 g / m 2 saccharose, 0 to 3 g / m 2 xylose, 1 to 4 g / m 2 sodium thiosulfate in terms of anhydride, 0.2 to 1.5 g / m 2 iron (III) citrate Ammonium, 0-0.1 g / m 2 phenol red, 0-0.1 g / m 2
0.01 g / m 2 brilliant green, 0-0.0
1 g / m 2 crystal violet, 0-0.3 g /
neutral m 2 Red, characterized in that it comprises novobiocin 0～0.05G / m 2, and a pH adjusting agent 0.1 to 1 g / m 2, the (6) or (7) according to item Culture medium laminate for Salmonella detection.
【００１５】（９）培地成分として、それぞれ積層物に
対する目付で１〜２ｇ／ｍ2の酵母エキス、０．２〜１
ｇ／ｍ2のペプトン、０〜２．５ｇ／ｍ2の塩化ナトリウ
ム、２〜３ｇ／ｍ2のＬ−リジン塩酸塩、０〜０．１ｇ
／ｍ2のＬ−シスチン、１〜３ｇ／ｍ2のキシロース、３
〜５ｇ／ｍ2のラクトース、３〜５ｇ／ｍ2のサッカロー
ス、０．１〜１ｇ／ｍ2のデオキシコール酸ナトリウ
ム、０〜１ｇ／ｍ2のバイルソルトＮｏ．３、無水物換
算で３〜４ｇ／ｍ2のチオ硫酸ナトリウム、０．２〜１
ｇ／ｍ2のクエン酸鉄（III）アンモニウム、０〜０．０
５ｇ／ｍ2のノボビオシン、および０．１〜１ｇ／ｍ2の
ｐＨ調節剤を含むことを特徴とする、前記（６）〜
（８）項のいずれか１項に記載のサルモネラ菌検出用培
地積層物。(9) As a medium component, each yeast extract has a basis weight of 1 to 2 g / m 2 ,
g / m 2 of peptone, sodium chloride 0~2.5g / m 2, L- lysine hydrochloride 2~3g / m 2, 0~0.1g
/ M 2 L-cystine, 1-3 g / m 2 xylose, 3
Lactose to 5 g / m 2, saccharose 3 to 5 g / m 2, sodium deoxycholate 0.1 to 1 g / m 2, Bairusoruto of 0~1g / m 2 No. 3, 3-4 g / m 2 of sodium thiosulfate in terms of anhydride, 0.2-1
g / m 2 ammonium iron (III) citrate, from 0 to 0.0
Characterized in that it comprises novobiocin 5 g / m 2, and a pH adjusting agent 0.1 to 1 g / m 2, wherein (6) -
(8) The medium laminate for detecting Salmonella according to any one of (8).
【００１６】（１０）培地成分として、それぞれ積層物
に対する目付で２〜３ｇ／ｍ2の酵母エキス、４〜６ｇ
／ｍ2のペプトン、１〜２ｇ／ｍ2の肉エキス、０〜２ｇ
／ｍ2の塩化ナトリウム、２〜４ｇ／ｍ2のマンニトー
ル、２〜３ｇ／ｍ2のＬ−リジン塩酸塩、０〜０．１ｇ
／ｍ2のＬ−シスチン、０．２〜１ｇ／ｍ2のデオキシコ
ール酸ナトリウム、無水物換算で１〜２ｇ／ｍ2のチオ
硫酸ナトリウム、０．５〜１．５ｇ／ｍ2のクエン酸鉄
（III）アンモニウム、０．００２〜０．０１ｇ／ｍ 2の
ブリリアントグリーン、０．００３〜０．０１ｇ／ｍ2
のクリスタルバイオレット、０〜０．０５ｇ／ｍ2のノ
ボビオシン、および０．１〜１ｇ／ｍ2のｐＨ調節剤を
含むことを特徴とする、前記（６）または（８）項に記
載のサルモネラ菌検出用培地積層物。(10) As a medium component, a laminate
2-3 g / mTwoYeast extract, 4-6g
/ MTwoPeptone, 1-2 g / mTwoMeat extract, 0-2g
/ MTwoSodium chloride, 2-4 g / mTwoMannito
Le, 2-3 g / mTwoL-lysine hydrochloride, 0-0.1 g
/ MTwoL-cystine, 0.2-1 g / mTwoDeoxyco
Sodium oleate, 1-2 g / m in terms of anhydrideTwoThio
Sodium sulfate, 0.5-1.5 g / mTwoIron citrate
(III) ammonium, 0.002 to 0.01 g / m Twoof
Brilliant green, 0.003-0.01 g / mTwo
Crystal violet, 0-0.05g / mTwoNo
Boviosin, and 0.1-1 g / mTwoPH adjuster
(6) or (8).
The laminate for detecting Salmonella described above.
【００１７】（１１）培地成分として、それぞれ積層物
に対する目付で４〜６ｇ／ｍ2のペプトン、４〜６ｇ／
ｍ2のラクトース、４〜５ｇ／ｍ2の胆汁酸塩、４〜６ｇ
／ｍ2のクエン酸ナトリウム、無水物換算で２〜４ｇ／
ｍ2のチオ硫酸ナトリウム、０．２〜１ｇ／ｍ2のクエン
酸鉄（III）アンモニウム、０．００１〜０．００５ｇ
／ｍ2のブリリアントグリーン、０．１〜０．３ｇ／ｍ2
のニュートラルレッド、０〜０．０５ｇ／ｍ2のノボビ
オシン、および０．１〜１ｇ／ｍ2のｐＨ調節剤を含む
ことを特徴とする、前記（６）または（８）項に記載の
サルモネラ菌検出用培地積層物。(11) As a medium component, 4 to 6 g / m 2 of peptone and 4 to 6 g / m 2 in terms of the basis weight of the laminate.
m 2 lactose, 4-5 g / m 2 bile salts, 4-6 g
/ M 2 sodium citrate, 2-4 g / anhydride equivalent
m 2 sodium thiosulfate, 0.2-1 g / m 2 ammonium iron (III) citrate, 0.001-0.005 g
/ M 2 of brilliant green, 0.1 to 0.3 g / m 2
(6) or (8), comprising: neutral red, 0 to 0.05 g / m 2 of novobiocin, and 0.1 to 1 g / m 2 of a pH regulator. Medium culture laminate.
【００１８】（１２）前記（１）〜（１１）項のいずれ
か１項に記載の培地積層物が、その培地積層物より大き
な粘着シートの中心部に多孔質マトリックス層が上にな
るように接着され、その上に前記積層物より大きな透明
フィルムが多孔質マトリックス層に接しかつ前記積層物
と中心部を合わせるように被せられ、この透明フィルム
の前記積層物からはみ出している部分が粘着シートの前
記積層物が接着されていない部分と接着されていること
を特徴とするサルモネラ菌検出用シート状培地。(12) The medium laminate according to any one of the above items (1) to (11) is arranged such that the porous matrix layer is located at the center of the adhesive sheet larger than the medium laminate. It is adhered, and a transparent film larger than the laminate is covered thereon so as to be in contact with the porous matrix layer and align the center with the laminate, and the portion of the transparent film that protrudes from the laminate is the adhesive sheet. A sheet-shaped medium for detecting Salmonella, wherein the laminate is adhered to a part to which the laminate is not adhered.
【００１９】（１３）透明フィルムの少なくとも一部が
粘着シートの端からはみ出るように構成されていること
を特徴とする、前記（１２）項に記載のサルモネラ菌検
出用シート状培地。(13) The sheet-shaped medium for detecting Salmonella according to the above (12), wherein at least a part of the transparent film protrudes from an end of the adhesive sheet.
【００２０】（１４）粘着シートがポリエステルフィル
ム、白色ポリエステルフィルム、ポリオレフィン系合成
紙またはポリオレフィンラミネート紙にアクリル系粘着
剤またはゴム系粘着剤を塗布したものであることを特徴
とする、前記（１２）または（１３）項に記載のサルモ
ネラ菌検出用シート状培地。(14) The adhesive sheet according to (12), wherein the pressure-sensitive adhesive sheet is obtained by applying an acrylic pressure-sensitive adhesive or a rubber-based pressure-sensitive adhesive to a polyester film, a white polyester film, a polyolefin-based synthetic paper or a polyolefin-laminated paper. Or the sheet-shaped medium for detecting Salmonella according to the item (13).
【００２１】（１５）粘着シートの厚さが０．０７〜
０．５ｍｍであることを特徴とする、前記（１２）〜
（１４）項のいずれか１項に記載のサルモネラ菌検出用
シート状培地。(15) The thickness of the pressure-sensitive adhesive sheet is 0.07 to
(12) to (12),
(14) The sheet medium for detecting Salmonella according to any one of (14).
【００２２】（１６）透明フィルムがポリオレフィンフ
ィルムまたは剥離処理ポリオレフィンフィルムであるこ
とを特徴とする、前記（１２）〜（１５）項のいずれか
１項に記載のサルモネラ菌検出用シート状培地。(16) The sheet-shaped medium for detecting Salmonella according to any one of the above (12) to (15), wherein the transparent film is a polyolefin film or a release-treated polyolefin film.
【００２３】（１７）透明フィルムの厚さが２０〜１０
０μｍであることを特徴とする、前記（１２）〜（１
６）項のいずれか１項に記載のサルモネラ菌検出用シー
ト状培地。(17) When the thickness of the transparent film is 20 to 10
(12)-(1)
6) The sheet medium for detecting Salmonella according to any one of the above 6).
【００２４】（１８）粘着シートと透明フィルムとの接
着部分の一部が他の接着部分より強い粘着力になるよう
に接着されていることを特徴とする、前記（１２）〜
（１７）項のいずれか１項に記載のサルモネラ菌検出用
シート状培地。(18) The above-mentioned (12) to (12) to (12), wherein a part of the adhesive part between the adhesive sheet and the transparent film is adhered so as to have a stronger adhesive force than the other adhesive parts.
(17) The sheet medium for detecting Salmonella according to any one of (17).
【００２５】（１９）粘着シートと透明フィルムとの接
着部分の一部がこの粘着シートの粘着力より強い粘着力
の粘着テープにより接着されていることを特徴とする、
前記（１８）項に記載のサルモネラ菌検出用シート状培
地。(19) A part of the adhesive portion between the adhesive sheet and the transparent film is adhered by an adhesive tape having an adhesive force stronger than the adhesive force of the adhesive sheet.
The sheet medium for detecting Salmonella according to the above (18).
【００２６】（２０）前記（１）〜（１１）項のいずれ
か１項に記載の培地積層物または前記（１２）〜（１
９）項のいずれか１項に記載のシート状培地に被検体を
接種して培養し、黒色の痕跡の有無を検出することを特
徴とするサルモネラ菌の検出法。(20) The culture medium laminate according to any one of the above (1) to (11) or the above (12) to (1)
9) A method for detecting Salmonella, which comprises inoculating a sample into the sheet medium according to any one of the items 9) and culturing the sample to detect the presence or absence of a black trace.
【００２７】[0027]
【発明の実施の形態】以下、本発明について詳細に説明
する。本発明の培地積層物およびシート状培地は、水溶
性高分子化合物層と多孔質マトリックス層が積層され、
最上面が多孔質マトリックス層であるように構成された
ものである。チオ硫酸塩および多塩基有機酸の第二鉄塩
を含む培地成分は、検出感度、経済性、保存安定性など
を考慮して、多孔質マトリックス層や水溶性高分子化合
物層中に含有させる必要がある。そのため、水溶性高分
子化合物層を２層以上の多層構造とし、そうすることに
よって、例えば、共存して反応しやすい物質を異なる層
に分散させ保存安定性を高めることができたり、サルモ
ネラ菌が生育する表面近傍の層に抗生物質などの高価な
試薬を配置させることによって、これらの試薬の使用量
を少なくすることなどができる。特に、アミノ酸成分で
あるＬ−リジンやＬ−シスチンと、ラクトース、サッカ
ロース、キシロースなどの糖成分を異なる層に分散、配
置させることが保存安定性のために望ましい。また、経
済性を考慮すると、ノボビオシン等の抗生物質を用いる
ときには、多孔質マトリックス層に接する水溶性高分子
化合物層に含有させるのがよい。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in detail. The medium laminate and sheet-shaped medium of the present invention have a water-soluble polymer compound layer and a porous matrix layer laminated thereon,
The uppermost surface is configured to be a porous matrix layer. Media components containing thiosulfates and ferric salts of polybasic organic acids must be included in the porous matrix layer or water-soluble polymer layer in consideration of detection sensitivity, economy, storage stability, etc. There is. Therefore, the water-soluble polymer compound layer has a multilayer structure of two or more layers, whereby, for example, coexisting and easily reactable substances can be dispersed in different layers to enhance the storage stability, and the growth of Salmonella can be enhanced. By arranging expensive reagents such as antibiotics in a layer near the surface to be used, the usage of these reagents can be reduced. In particular, for storage stability, it is desirable to disperse and arrange the amino acid components L-lysine and L-cystine and sugar components such as lactose, saccharose, and xylose in different layers. In addition, in consideration of economic efficiency, when an antibiotic such as novobiocin is used, it is preferable to include it in the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer.
【００２８】なお、水溶性高分子化合物層の層数は２〜
７層とすることが好ましい。培地成分を多く用いるよう
な場合には、乾燥の具合などから複数の層に分けて含有
させなければならないが、そのような場合には層の厚み
を薄くすることによって７層くらいまで積層することが
できる。しかしながら、７層を超える層数とすること
は、技術的には問題ないが、多孔質マトリックス層から
離れるに従って含有成分の利用度が低くなる危険性を考
慮しなければならず、経済的な観点からは得策ではな
い。The number of the water-soluble polymer compound layers is 2 to 2.
It is preferable to have seven layers. When a lot of medium components are used, they must be contained in multiple layers depending on the condition of drying, etc., but in such a case, it is necessary to laminate up to about 7 layers by reducing the thickness of the layers Can be. However, although the number of layers exceeds 7 layers is not technically a problem, it is necessary to consider the danger that the use of the contained components becomes lower as the layer is separated from the porous matrix layer. Is not a good idea.
【００２９】多孔質マトリックスとしては、目付４０〜
１００ｇ／ｍ2、通気度７０〜２４０Ｌ／（ｍ2・ｓｅ
ｃ）の物性を有するものが好ましく、特に布帛が目付、
通気度を調整することが可能であるため最も好ましい。
試料液中に存在するサルモネラ菌は、試料液が本発明の
培地積層物またはシート状培地に添加されると、試料液
と共に多孔質マトリックス層全体に均一に分散するが、
水溶性高分子化合物層が徐々に溶解して高粘度溶液を形
成するために水溶性高分子化合物層内部までは入らな
い。そして、溶解した水溶性高分子化合物層と多孔質マ
トリックス層とが一体化する過程で、サルモネラ菌は多
孔質マトリックス層の表面まで押し上げられ、多孔質マ
トリックス層の表面または表面近傍にコロニーを形成す
る。なお、サルモネラ菌の検出には、チオ硫酸塩と第二
鉄塩を含む培地で黒色コロニーを作るという硫化水素産
生菌の特徴を利用できる。即ち、本発明の培地積層物お
よびシート状培地においてサルモネラ菌コロニーは黒色
スポットとして視認される。As the porous matrix, a basis weight of 40 to
100 g / m 2 , air permeability 70 to 240 L / (m 2 · se
Those having the physical properties of c) are preferred, and the fabric is particularly
It is most preferable because the air permeability can be adjusted.
Salmonella bacteria present in the sample solution, when the sample solution is added to the medium laminate or sheet-shaped medium of the present invention, is uniformly dispersed throughout the porous matrix layer together with the sample solution,
Since the water-soluble polymer compound layer gradually dissolves to form a high-viscosity solution, it does not enter the inside of the water-soluble polymer compound layer. Then, in the process in which the dissolved water-soluble polymer compound layer and the porous matrix layer are integrated, the Salmonella is pushed up to the surface of the porous matrix layer and forms a colony on or near the surface of the porous matrix layer. For the detection of Salmonella, the characteristic of hydrogen sulfide-producing bacteria that black colonies are formed in a medium containing thiosulfate and ferric salt can be used. That is, Salmonella colonies are visually recognized as black spots in the medium laminate and sheet medium of the present invention.
【００３０】本発明に使用される多孔質マトリックス層
を形成するための材料として繊維が利用でき、ナイロン
繊維，ポリアクリロニトリル繊維，ポリビニルアルコー
ル（ＰＶＡ）繊維，エチレン酢酸ビニル共重合体繊維，
ポリエステル繊維（親水化処理したポリエステル繊維が
より好ましい），ポリオレフィン繊維合成繊維（親水化
処理したポリオレフィン繊維がより好ましい），および
ポリウレタン繊維等の合成繊維、レーヨン繊維等の半合
成繊維、羊毛(獣毛)，絹，コットン繊維，セルロース繊
維，およびパルプ繊維等の天然繊維、ガラス繊維等の無
機繊維等が例示できる。Fibers can be used as a material for forming the porous matrix layer used in the present invention, and nylon fibers, polyacrylonitrile fibers, polyvinyl alcohol (PVA) fibers, ethylene-vinyl acetate copolymer fibers,
Polyester fibers (preferably hydrophilic polyester fibers), polyolefin fiber synthetic fibers (hydrophilic polyolefin fibers are more preferable), synthetic fibers such as polyurethane fibers, semi-synthetic fibers such as rayon fibers, wool (animal hair) ), Natural fibers such as silk, cotton fibers, cellulose fibers, and pulp fibers; and inorganic fibers such as glass fibers.
【００３１】そして、これらの繊維を用いて作られた編
織布および不織布等の布帛や、上記繊維の構成素材で作
られた多孔質フィルム、スポンジ、多孔質セラミックス
等が多孔質マトリックス層として使用できる。なお、目
付、通気度の調整が容易な編織布、不織布等の布帛を用
いることが好ましく、不織布の中でも、さらに比較的容
易に細繊維が得られるメルトブロー製法で作製した不織
布や、分割繊維から製造した極細繊維不織布が特に好ま
しく用いられる。これらの繊維のうちナイロン繊維、コ
ットン繊維、セルロース繊維およびレーヨン繊維が好ま
しく、その中でも特にナイロン繊維が好ましく、さらに
細繊度の繊維径となるメルトブロー製法で作製した不織
布が好ましい。[0031] Fabrics such as knitted and nonwoven fabrics made of these fibers, porous films, sponges, and porous ceramics made of the above-mentioned fiber constituent materials can be used as the porous matrix layer. . In addition, it is preferable to use a fabric such as a knitted or woven fabric or a nonwoven fabric whose weight and air permeability can be easily adjusted. Particularly preferred is an ultrafine fiber nonwoven fabric. Of these fibers, nylon fibers, cotton fibers, cellulose fibers, and rayon fibers are preferable, and among them, nylon fibers are particularly preferable, and nonwoven fabrics produced by a melt-blowing method having a fine fiber diameter are preferable.
【００３２】本発明に用いられる多孔質マトリックス層
は、撥水性であってもよいが、親水性または親水化処理
した多孔質マトリックス層を用いることで、撥水性の多
孔質マトリックス層よりも吸水速度が速くできるため、
試験作業の能率が高くなり好ましい。さらにこれら多孔
質マトリックス層の表面に水溶性物質を塗布しておくこ
とにより、微生物の分散をさらに向上させることができ
る。水溶性物質としては、ペプトン、酵母エキス、リン
酸カリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸鉄アンモニウ
ム、塩化ナトリウム等が好ましく用いられる。これら
は、単独または混合して多孔質マトリックス層に塗布さ
れる。なお、これらの水溶性物質は粉末状のものを塗布
しても良いが、溶液または懸濁液として塗布することが
好ましい。溶液または懸濁液とするときに用いる溶媒は
水溶性物質を溶解または部分溶解し、揮発または蒸発す
るものであればどのようなものでもよいが、水、エタノ
ール、メタノールおよびこれらの混合溶媒が好ましい。The porous matrix layer used in the present invention may be water-repellent. However, by using a hydrophilic or hydrophilized porous matrix layer, the water absorption rate is higher than that of a water-repellent porous matrix layer. Can be faster,
This is preferable because the efficiency of the test operation is increased. Further, by applying a water-soluble substance to the surface of the porous matrix layer, the dispersion of microorganisms can be further improved. As the water-soluble substance, peptone, yeast extract, potassium phosphate, sodium carbonate, iron ammonium citrate, sodium chloride and the like are preferably used. These are applied alone or in combination to the porous matrix layer. Note that these water-soluble substances may be applied in powder form, but are preferably applied as a solution or suspension. The solvent used when forming the solution or suspension may be any solvent that dissolves or partially dissolves the water-soluble substance and volatilizes or evaporates, but water, ethanol, methanol and a mixed solvent thereof are preferable. .
【００３３】また、持ち運びや拭き取りへの利便性の点
から、上記多孔質マトリックス層は水溶性高分子化合物
層と少なくとも部分的には接着して互いにずれないよう
にしなければならない。さらに、その接着には、多孔質
マトリックス層の水分保持能や水溶性高分子化合物層の
均一性を損なわないような方法が望まれる。このような
目的のために、本発明においては多孔質マトリックス層
と接する水溶性高分子化合物層が未乾燥または半乾燥の
状態のときに多孔質マトリックス層を積層し乾燥する。
このとき、多孔質マトリックス層と接する水溶性高分子
化合物層中の水溶性高分子化合物の濃度は８〜１０％
（Ｗ／Ｗ）、またその目付が５〜１５ｇ／ｍ2であるこ
とが好ましい。Further, from the viewpoint of convenience for carrying and wiping, the porous matrix layer must be at least partially adhered to the water-soluble polymer compound layer so as not to be displaced from each other. Furthermore, a method that does not impair the water retention ability of the porous matrix layer and the uniformity of the water-soluble polymer compound layer is desired for the adhesion. For this purpose, in the present invention, the porous matrix layer is laminated and dried when the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer is in an undried or semi-dry state.
At this time, the concentration of the water-soluble polymer compound in the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer is 8 to 10%.
(W / W), and the basis weight is preferably 5 to 15 g / m 2 .
【００３４】本発明で用いられる水溶性高分子化合物層
を形成するための材料としては、試料液を加えたとき
に、試料液中の水により溶解して１０ｃｐｓ（４０℃で
測定した粘度）以上の高粘度を示し、微生物の生育を阻
害しないものが好ましく用いられる。例えば、ポリビニ
ルアルコール、セルロース誘導体、ポリアクリル酸誘導
体、でんぷん誘導体、蛋白質、蛋白質誘導体、および多
糖類等が使用できる。この中でもポリビニルアルコール
がより好ましく、鹸化度が７５〜９５％、分子量が２５
０００〜２５００００のポリビニルアルコールが特に好
ましい。As a material for forming the water-soluble polymer compound layer used in the present invention, when a sample solution is added, the material is dissolved by water in the sample solution and is 10 cps (viscosity measured at 40 ° C.) or more. Those which exhibit a high viscosity and do not inhibit the growth of microorganisms are preferably used. For example, polyvinyl alcohol, cellulose derivatives, polyacrylic acid derivatives, starch derivatives, proteins, protein derivatives, polysaccharides and the like can be used. Among them, polyvinyl alcohol is more preferable, and has a saponification degree of 75 to 95% and a molecular weight of 25.
A polyvinyl alcohol of 000 to 250,000 is particularly preferred.
【００３５】本発明に用いられる培地成分は、酵母エキ
ス、ペプトン類、肉エキス類および糖アルコールからな
る群から選択される少なくとも２種の栄養成分、アミノ
酸成分および糖成分からなる群から選択される少なくと
も１種の判別用成分、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリ
ウム、胆汁末、胆汁酸塩、デオキシコール酸塩、タージ
トールＮｏ．４およびバイルソルトＮｏ．３、ブリリア
ントグリーン、クリスタルバイオレットからなる群から
選択される少なくとも１種の選択剤、フェノールレッド
およびニュートラルレッドからなる群から選択される１
種のｐＨ指示薬、ｐＨ調節剤、チオ硫酸塩、多塩基有機
酸の第二鉄塩、および任意成分としてのノボビオシンを
含むものである。ただ、サルモネラ菌と他の細菌とを判
別しやすくするための成分として用いるアミノ酸成分お
よび糖成分を両方同時に用いる場合には、同じ層に含ま
れるようにすると保存安定性に悪影響が現れるので、そ
れぞれ別の水溶性高分子化合物層に含有されるようにす
る必要がある。The medium component used in the present invention is selected from the group consisting of at least two nutrient components selected from the group consisting of yeast extracts, peptones, meat extracts and sugar alcohols, amino acid components and sugar components. At least one discriminating component, sodium chloride, sodium citrate, bile powder, bile salts, deoxycholate, teritol no. 4 and Vail Salt No. 4 3. at least one selective agent selected from the group consisting of brilliant green and crystal violet, and one selected from the group consisting of phenol red and neutral red
PH indicators, pH regulators, thiosulfates, ferric salts of polybasic organic acids, and optionally novobiocin. However, if both the amino acid component and the sugar component, which are used as components to make it easier to distinguish Salmonella from other bacteria, are used at the same time, if they are contained in the same layer, storage stability will be adversely affected. Must be contained in the water-soluble polymer compound layer.
【００３６】ペプトン類としてはペプトンの他、カゼイ
ンペプトン、ダイズペプトン、肉ペプトン、卵ペプトン
などがあり、肉エキス類には、通常のペースト状肉エキ
スの他、牛脳エキス、牛心臓エキス、粉末肉エキスまた
は魚肉エキスなどがある。また、糖アルコールとしてマ
ンニトールが使用でき、アミノ酸成分としてＬ−リジン
塩酸塩、Ｌ−シスチンなど、糖成分としてはラクトー
ス、キシロース、サッカロースなどが使用できる。Examples of peptones include peptone, casein peptone, soy peptone, meat peptone, egg peptone, and the like. Meat extracts include bovine brain extract, bovine heart extract, and powder in addition to ordinary pasty meat extract. There are meat extract or fish meat extract. In addition, mannitol can be used as a sugar alcohol, L-lysine hydrochloride, L-cystine, etc. can be used as an amino acid component, and lactose, xylose, saccharose, etc. can be used as a sugar component.
【００３７】ｐＨ調節剤としては、リン酸カリウム、リ
ン酸ナトリウム、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウムな
どが使用できる。ここで、リン酸カリウムはリン酸二カ
リウムおよびリン酸二カリウムとリン酸一カリウムの混
合物を、リン酸ナトリウムはリン酸二ナトリウムおよび
リン酸二ナトリウムとリン酸一ナトリウムの混合物をそ
れぞれ示し、炭酸ナトリウムは炭酸ナトリウムの他、炭
酸水素ナトリウムおよび炭酸ナトリウムと炭酸水素ナト
リウムの混合物を、炭酸カリウムは炭酸カリウムの他、
炭酸水素カリウムおよび炭酸カリウムと炭酸水素カリウ
ムの混合物をも示すものであり、これらの塩を組み合わ
せて用いることもできる。そして、これらｐＨ調節剤
は、無水塩として計算するとき合計で目付０．１〜１ｇ
／ｍ2の範囲で使用されるが、この範囲を外れても大き
な悪影響は現れない。As the pH adjuster, potassium phosphate, sodium phosphate, sodium carbonate or potassium carbonate can be used. Here, potassium phosphate indicates dipotassium phosphate and a mixture of dipotassium phosphate and monopotassium phosphate, and sodium phosphate indicates disodium phosphate and a mixture of disodium phosphate and monosodium phosphate, respectively. Sodium is sodium carbonate, sodium bicarbonate and a mixture of sodium carbonate and sodium bicarbonate, potassium carbonate is potassium carbonate,
It also shows potassium hydrogen carbonate and a mixture of potassium carbonate and potassium hydrogen carbonate, and these salts can be used in combination. These pH adjusters have a basis weight of 0.1 to 1 g when calculated as an anhydrous salt.
/ M 2 , but even outside this range, no significant adverse effects will occur.
【００３８】チオ硫酸塩としてはチオ硫酸アンモニウ
ム、チオ硫酸カリウム、またはチオ硫酸ナトリウムなど
を挙げることができるが、チオ硫酸ナトリウムが最も好
ましい。また、本発明で使用できる多塩基有機酸の第二
鉄塩は、水に溶けて第二鉄イオンを生じ、微生物の成育
や系のｐＨに影響を与えない化合物から選択することが
でき、例えば、クエン酸鉄（III）アンモニウム、クエ
ン酸鉄（III）カリウム、酒石酸鉄（III）、酒石酸鉄
（III）アンモニウム、酒石酸鉄（III）カリウム、リン
ゴ酸鉄（III）などが挙げられる。そして、サルモネラ
菌により炭素源として利用される可能性を考慮すると、
これらのうちでクエン酸（塩）が好ましく、クエン酸鉄
（III）アンモニウムが最も好ましい。Examples of the thiosulfate include ammonium thiosulfate, potassium thiosulfate, and sodium thiosulfate, and sodium thiosulfate is most preferred. The ferric salt of a polybasic organic acid that can be used in the present invention can be selected from compounds that dissolve in water to generate ferric ions and do not affect the growth of microorganisms or the pH of the system. Iron (III) citrate, potassium iron (III) citrate, iron (III) tartrate, ammonium (III) iron tartrate, potassium (III) iron tartrate, iron (III) malate and the like. And considering the possibility of being used as a carbon source by Salmonella,
Among these, citric acid (salt) is preferred, and ammonium iron (III) citrate is most preferred.
【００３９】以上に説明した培地成分それぞれの使用量
の好ましい範囲を以下に示す。いずれも積層物に対する
目付で表した値であり、単位はすべてｇ／ｍ2である。
即ち、酵母エキスが０〜３、ペプトンが０〜６、肉エキ
スが０〜３、塩化ナトリウムが０〜３、デオキシコール
酸ナトリウムが０〜１、胆汁酸塩が０〜６、バイルソル
トＮｏ．３が０〜２、マンニトールが０〜４、Ｌ−リジ
ン塩酸塩が０〜３、Ｌ−シスチンが０〜０．１、ラクト
ースが０〜６、サッカロースが０〜５、キシロースが０
〜３、チオ硫酸ナトリウムが無水物換算で１〜４、クエ
ン酸鉄（III）アンモニウムが０．２〜１．５、フェノ
ールレッドが０〜０．１、ブリリアントグリーンが０〜
０．０１、クリスタルバイオレットが０〜０．０１、ニ
ュートラルレッドが０〜０．３、ノボビオシンが０〜
０．０５、そしてｐＨ調節剤が０．１〜１である。な
お、これらの下限はサルモネラ菌培養・検出のための性
能が損なわれ始める限界を、また上限は同じくサルモネ
ラ菌培養・検出のための性能を保ちながら経済的観点か
ら許容できる限界を示すものであるが、どちらもそれら
の値を超えたら直ちに影響が表れるようなはっきりとし
た区切り値を示すものではない。The preferred ranges of the amounts of the respective media components described above are shown below. Each is a value expressed by the basis weight of the laminate, and the unit is all g / m 2 .
That is, yeast extract is 0-3, peptone is 0-6, meat extract is 0-3, sodium chloride is 0-3, sodium deoxycholate is 0-1, bile salt is 0-6, and Veil Salt No. 1 is used. 3 is 0-2, mannitol is 0-4, L-lysine hydrochloride is 0-3, L-cystine is 0-0.1, lactose is 0-6, sucrose is 0-5, xylose is 0.
~ 3, sodium thiosulfate is 1-4 in terms of anhydride, ammonium iron (III) citrate is 0.2 ~ 1.5, phenol red is 0 ~ 0.1, brilliant green is 0 ~ 3
0.01, crystal violet 0-0.01, neutral red 0-0.3, novobiocin 0-
0.05 and the pH regulator is 0.1-1. In addition, these lower limits indicate the limit at which the performance for Salmonella cultivation and detection begins to be impaired, and the upper limit indicates the allowable limit from an economic viewpoint while maintaining the same performance for Salmonella cultivation and detection, Neither does it provide a clear breakpoint beyond which those effects are immediately noticeable.
【００４０】上述の培地成分は、すべてを同時に使用す
るわけではないので、使用する成分の組み合わせに応じ
た更に好ましい範囲の例を以下に示す。いずれも積層物
に対する目付で表した値であり、単位はすべてｇ／ｍ2
である。最初の例は、酵母エキスが１〜２、ペプトンが
０．２〜１、塩化ナトリウムが０〜２．５、Ｌ−リジン
塩酸塩が２〜３、Ｌ−シスチンが０〜０．１、キシロー
スが１〜３、ラクトースが３〜５、サッカロースが３〜
５、デオキシコール酸ナトリウムが０．１〜１、バイル
ソルトＮｏ．３が０〜１、チオ硫酸ナトリウムが無水物
換算で３〜４、クエン酸鉄（III）アンモニウムが０．
２〜１、ノボビオシンが０〜０．０５、そしてｐＨ調節
剤が０．１〜１である。Since not all of the above-mentioned medium components are used at the same time, examples of more preferable ranges according to the combinations of the components used are shown below. Each is a value expressed in basis weight of the laminate, and the unit is g / m 2.
It is. The first example is yeast extract 1-2, peptone 0.2-1, sodium chloride 0-2.5, L-lysine hydrochloride 2-3, L-cystine 0-0.1, xylose 1 to 3, lactose 3 to 5, saccharose 3 to
5, sodium deoxycholate 0.1-1; 3 is 0 to 1, sodium thiosulfate is 3 to 4 in terms of anhydride, and iron (III) ammonium citrate is 0.1 to 0.
2-1; novobiocin 0-0.05; and pH adjuster 0.1-1.
【００４１】次の例は、酵母エキスが２〜３、ペプトン
が４〜６、肉エキスが１〜２、塩化ナトリウムが０〜
２、マンニトールが２〜４、Ｌ−リジン塩酸塩が２〜
３、Ｌ−シスチンが０〜０．１、デオキシコール酸ナト
リウムが０．２〜１、チオ硫酸ナトリウムが無水物換算
で１〜２、クエン酸鉄（III）アンモニウムが０．５〜
１．５、ブリリアントグリーンが０．００２〜０．０
１、クリスタルバイオレットが０．００３〜０．０１、
ノボビオシンが０〜０．０５、そしてｐＨ調節剤が０．
１〜１である。In the following example, yeast extract is 2-3, peptone is 4-6, meat extract is 1-2, sodium chloride is 0-2.
2, 2-4 mannitol, 2 L-lysine hydrochloride
3, L-cystine is 0 to 0.1, sodium deoxycholate is 0.2 to 1, sodium thiosulfate is 1 to 2 in terms of anhydride, iron (III) ammonium citrate is 0.5 to 0.5.
1.5, brilliant green 0.002-0.0
1, Crystal violet is 0.003-0.01,
Novobiocin is 0-0.05 and the pH regulator is 0.
1 to 1.
【００４２】そして第３の例は、ペプトンが４〜６、ラ
クトースが４〜６、胆汁酸塩が４〜５、クエン酸ナトリ
ウムが４〜６、チオ硫酸ナトリウムが無水物換算で２〜
４、クエン酸鉄（III）アンモニウムが０．２〜１、ブ
リリアントグリーンが０．００１〜０．００５、ニュー
トラルレッドが０．１〜０．３、ノボビオシンが０〜
０．０５、そしてｐＨ調節剤が０．１〜１である。In the third example, peptone 4-6, lactose 4-6, bile salt 4-5, sodium citrate 4-6, and sodium thiosulfate 2-4
4. Ammonium iron (III) citrate 0.2-1, brilliant green 0.001-0.005, neutral red 0.1-0.3, novobiocin 0-
0.05 and the pH regulator is 0.1-1.
【００４３】多孔質マトリックス層と複数の水溶性高分
子化合物層とを積層してなる本発明の培地は、より使い
やすくするために、粘着シートに接着し透明フィルムを
被せてシート状培地とすることが好ましい。このシート
状培地は、積層物である培地を該培地より大きな粘着シ
ートの中心部に多孔質マトリックス層が上になるように
接着し、その上に該培地より大きな透明フィルムを多孔
質マトリックス層に接しかつ該培地と中心部を合わせる
ように被せて、この透明フィルムの該培地からはみ出し
ている部分を粘着シートの該培地が接着されていない部
分と接着させて構成するものである。なお、ここでいう
中心部は厳密である必要はないし、場合によっては後述
のように目的に応じて意図的にずらすこともあり得る。
更に、シート状培地の少なくとも一部分において、透明
フィルムが粘着シートの端を超えるように構成すること
も、透明フィルムを開く際の支持部分として利用でき有
効である。The culture medium of the present invention comprising a porous matrix layer and a plurality of water-soluble polymer compound layers laminated thereon is adhered to an adhesive sheet and covered with a transparent film to form a sheet culture medium for easier use. Is preferred. In this sheet-shaped medium, a medium, which is a laminate, is adhered to the center of a pressure-sensitive adhesive sheet larger than the medium such that the porous matrix layer faces upward, and a transparent film larger than the medium is formed on the porous matrix layer. The transparent film is covered so as to be in contact with the medium so that the center thereof is aligned with the medium, and the portion of the transparent film that protrudes from the medium is bonded to the part of the adhesive sheet to which the medium is not adhered. Note that the center here does not need to be strict, and in some cases, it may be intentionally shifted according to the purpose as described later.
Further, it is also effective that at least a part of the sheet-shaped medium is configured so that the transparent film exceeds the edge of the pressure-sensitive adhesive sheet, because it can be used as a support portion when the transparent film is opened.
【００４４】そして、粘着シートのシートの材質はサル
モネラ菌の生育を阻害しないものであればどのようなも
のでも良いが、透明フィルムを剥がしやすくするために
はある程度の腰が必要であり、曲面などをふき取るため
には柔軟であることが好ましい。ポリエステルフィル
ム、白色ポリエステルフィルム、ポリオレフィン系合成
紙またはポリオレフィンラミネート紙であって、厚さが
０．０７〜０．５ｍｍであればこの条件を満たしてい
る。粘着シートに使用する粘着剤もサルモネラ菌の生育
を阻害しないものであればどのようなものでも良いが、
作業性を考えると粘着シートと透明フィルムとを再接着
できさえすれば、粘着力は弱いほど好ましい。ゴム系お
よびアクリル系粘着剤が好ましく、再剥離タイプおよび
微粘着タイプアクリル系粘着剤が特に好ましい。The material of the pressure-sensitive adhesive sheet may be any material as long as it does not inhibit the growth of Salmonella, but a certain amount of stiffness is required to make the transparent film easy to peel off, and a curved surface is required. Preferably, it is flexible for wiping. A polyester film, a white polyester film, a polyolefin-based synthetic paper or a polyolefin-laminated paper having a thickness of 0.07 to 0.5 mm satisfies this condition. The adhesive used for the adhesive sheet may be any as long as it does not inhibit the growth of Salmonella.
Considering workability, the weaker the adhesive force, the better, as long as the adhesive sheet and the transparent film can be re-adhered. Rubber-based and acrylic-based pressure-sensitive adhesives are preferable, and re-peelable and slightly-adhesive-type acrylic pressure-sensitive adhesives are particularly preferable.
【００４５】透明フィルムも生育を阻害しないものであ
ればどのようなものでも良いが、厚みをもった培地が粘
着シートとの間にはいるため、柔軟性が必要である。ポ
リオレフィンフィルム、ポリエステルフィルム、ナイロ
ンフィルムなどが使用でき、剥がしやすくするために剥
離剤処理を施したものも使用できる。透明フィルムは蓋
としての機能を担うものであり、開け閉めなどの作業性
を考慮するとポリオレフィンフィルムが好ましく、厚さ
２０〜１００μｍのポリプロピレンフィルムが特に好ま
しい。The transparent film may be of any type as long as it does not inhibit the growth. However, since a thick medium is interposed between the medium and the adhesive sheet, flexibility is required. A polyolefin film, a polyester film, a nylon film, or the like can be used, and a film subjected to a release agent treatment to facilitate peeling can also be used. The transparent film serves as a lid, and is preferably a polyolefin film in consideration of workability such as opening and closing, and particularly preferably a polypropylene film having a thickness of 20 to 100 μm.
【００４６】透明フィルムを開けるとき、再接着するた
めに一部が剥がれずに残っていることが好ましい。ただ
し、直接スタンプまたはふき取りを行うときは、透明フ
ィルムが付いていると邪魔となることがあるので、完全
に剥がせるようにしておく必要もある。このような要件
を満たすためには、粘着シートと透明フィルムとの接着
部分の一部における粘着力を残りの部分より強くするこ
とが好ましい。このようにすることで、一部が接着した
まま透明フィルムを開けることができ、剥がしたいとき
には完全に剥がすこともできる。When the transparent film is opened, it is preferable that a part of the transparent film remains without being peeled off in order to adhere again. However, when performing direct stamping or wiping, it may be an obstacle if a transparent film is attached, so it is necessary to be able to completely remove the stamp. In order to satisfy such requirements, it is preferable to make the adhesive strength in a part of the adhesive part between the adhesive sheet and the transparent film stronger than the remaining part. By doing so, the transparent film can be opened while a part thereof is adhered, and when it is desired to peel it off, it can be completely peeled off.
【００４７】粘着力の強い部分を作る方法として、粘着
シートと透明フィルムとを粘着シートより強い粘着力の
別の粘着テープなどにより接着する方法、粘着シートと
透明フィルムとの接着すべき部分の一部に粘着シートよ
り強い粘着力の両面テープを挿入して接着する方法、粘
着シートの一部に粘着シートより粘着力の強い粘着剤を
塗布する方法、透明フィルムの一部に粘着シートより粘
着力の強い粘着剤を塗布する方法などがある。別の粘着
テープで接着するときには、粘着シートと透明フィルム
とをずらして重ね、粘着シートの粘着剤塗布面と透明フ
ィルムの培地積層物に接していない面に、または粘着シ
ートの裏面と透明フィルムの培地積層物に接した面に別
の粘着シートを接着する方法、および粘着シートと透明
フィルムとをほとんどずらさずに重ね、別の粘着テープ
を折り曲げて、粘着シートの裏面と透明フィルムの培地
積層物に接していない面に接着する方法がある。別の粘
着テープを折り曲げて、粘着シートの裏面と透明フィル
ムの培地積層物に接していない面に接着したときには、
透明フィルムを開けたとき、粘着シートの裏面と透明フ
ィルムを接着したまま完全に開きことができ便利であ
る。強い粘着力の部分は、残りの部分の２倍以上の粘着
力であることが好ましい。As a method of forming a portion having a strong adhesive force, a method of bonding an adhesive sheet and a transparent film with another adhesive tape having a stronger adhesive force than the adhesive sheet, a method of forming a portion to be bonded between the adhesive sheet and the transparent film. A method of inserting and bonding a double-sided tape with a stronger adhesive force than the adhesive sheet to the part, a method of applying an adhesive that is stronger than the adhesive sheet to a part of the adhesive sheet, and an adhesive force to the part of the transparent film from the adhesive sheet And a method of applying a strong adhesive. When bonding with another adhesive tape, the adhesive sheet and the transparent film are shifted and overlapped, and the adhesive applied surface of the adhesive sheet and the surface of the transparent film that is not in contact with the culture medium laminate, or the back surface of the adhesive sheet and the transparent film A method of adhering another pressure-sensitive adhesive sheet to the surface in contact with the medium laminate, and overlapping the pressure-sensitive adhesive sheet and the transparent film almost without shifting, folding another pressure-sensitive adhesive tape, the medium laminate of the rear surface of the pressure-sensitive adhesive sheet and the transparent film There is a method of bonding to a surface that is not in contact with. When another adhesive tape is folded and adhered to the back side of the adhesive sheet and the surface of the transparent film that is not in contact with the culture medium laminate,
When the transparent film is opened, it can be completely opened with the back surface of the adhesive sheet and the transparent film adhered, which is convenient. It is preferable that the part having a strong adhesive strength has an adhesive strength of twice or more of the remaining part.
【００４８】本発明の培地の作製方法について以下に説
明する。ポリエステル等のフィルムを台紙として用い、
その上にサルモネラ菌生育のための栄養成分、サルモネ
ラ菌以外の微生物の生育を抑える選択剤、ｐＨ調整剤等
を適宜含む水溶性高分子化合物の水溶液を塗布して乾燥
する工程を繰り返し、最後の水溶性高分子化合物層に多
孔質マトリックス層を重ね合わせて乾燥する。多孔質マ
トリックス層を積層して乾燥する工程は、最上層の水溶
性高分子化合物の水溶液を塗布してそのまま又は半乾燥
して多孔質マトリックスを積層するか、最上層の水溶性
高分子化合物層を一旦乾燥後、水または栄養成分等を含
んだ水を加えて湿らせた多孔質マトリックスを積層して
乾燥する方法でおこなわれる。乾燥後、さらに必要に応
じて多孔質マトリックス層上に水溶性物質を塗布し乾燥
する工程を加えてもよい。The method for producing the medium of the present invention will be described below. Using a film such as polyester as the backing paper,
The process of applying and drying an aqueous solution of a water-soluble polymer compound containing a nutrient for growing Salmonella, a selective agent for suppressing the growth of microorganisms other than Salmonella, a pH adjuster, etc., as appropriate, is repeated. The porous matrix layer is overlaid on the polymer compound layer and dried. The step of laminating and drying the porous matrix layer is performed by applying the aqueous solution of the uppermost layer of the water-soluble polymer compound and laminating the porous matrix as it is or semi-drying, or by laminating the uppermost layer of the water-soluble polymer compound layer. Is dried once, and then a porous matrix moistened with water or water containing nutrients is added and dried. After the drying, a step of applying a water-soluble substance on the porous matrix layer and drying may be added if necessary.
【００４９】次に、得られた培地積層物を、台紙として
用いたポリエステル等のフィルムを剥がしまたは剥がさ
ずに、必要に応じて適当な大きさに切断し、袋やシャー
レに入れるなどの措置を施し、60Ｃｏガンマ線、エチレ
ンオキサイドガス等により滅菌を施しサルモネラ菌用培
地積層物とする。また、切断した培地積層物を前記説明
のように、培地積層物より大きな粘着シートに接着して
透明フィルムを被せ、 60Ｃｏガンマ線、エチレンオキサ
イドガス等により滅菌を施しシート状培地とする。Next, the obtained culture medium laminate was used as a mount.
Peel or peel off the used polyester film
And cut into appropriate size if necessary
Take measures such as putting in60Co gamma rays, Echile
Sterilized with oxide gas, etc., and cultured for Salmonella
It is assumed to be a ground laminate. In addition, the cut medium laminate is described above.
Adhere to a larger adhesive sheet than the medium laminate
Cover with a transparent film, 60Co gamma ray, ethylene oxa
It is sterilized by id gas or the like to obtain a sheet-shaped medium.
【００５０】[0050]
【実施例】次に実施例をあげて本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
なお、多孔質マトリックス層の通気度は、ＪＩＳＬ１９
１２医療用不織布試験方法フラジール形法に準じて測定
した。Next, the present invention will be described in detail with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
The air permeability of the porous matrix layer is determined according to JIS L19.
12 Medical nonwoven fabric test method Measured according to the Frazier method.
【００５１】実施例１ （第１工程）１０％（Ｗ／Ｗ）ポリビニルアルコール
（鹸化度８９％、分子量８３０００）水溶液１００ｇに
対し、Ｌ−リジン塩酸塩を１０ｍｇ／ｍｌ、Ｌ−シスチ
ンを０．２ｍｇ／ｍｌの濃度で含む溶液３８．５ｇを加
えてよく撹拌した。この溶液１．８ｇを直径５０ｍｍの
プラスチックシャーレ上で均一に拡げ、６５℃で２時間
半ほど乾燥させてフィルム化した。Example 1 (First Step) L-Lysine hydrochloride and L-cystine were added to 100 g of a 10% (W / W) aqueous solution of polyvinyl alcohol (degree of saponification: 89%, molecular weight: 83,000) in 0.1 g of L-cystine. 38.5 g of a solution containing 2 mg / ml was added, and the mixture was stirred well. 1.8 g of this solution was spread evenly on a plastic Petri dish having a diameter of 50 mm, and dried at 65 ° C. for about 2.5 hours to form a film.
【００５２】（第２工程）その上に、前記ポリビニルア
ルコールの２０％（Ｗ／Ｗ）水溶液１００ｇに対し、１
４％（Ｗ／Ｗ）培地溶液（酵母エキス１．１８ｇ、ラク
トース・１水和物３．１１ｇ、サッカロース２．９５
ｇ、キシロース１．３８ｇ、デオキシコール酸ナトリウ
ム０．２０ｇ、バイルソルトＮｏ．３を０．２０ｇ、ク
エン酸鉄（III）アンモニウム（褐色塩、以下同じ）
０．３９ｇ、チオ硫酸ナトリウム・５水和物４．１７
ｇ、ペプトン０．３９ｇ、フェノールレッド０．０３ｇ
および水８６ｇからなる溶液）４６．２ｇ、およびｐＨ
調整剤としての１０％炭酸ナトリウム溶液１．３ｇを加
えよく撹拌して得られた溶液を０．８１ｇ加えてコーン
ラージ棒にて均一に拡げ、再び６５℃にて１時間乾燥さ
せ積層した。(Second step) On top of this, 100 g of a 20% (W / W) aqueous solution of the polyvinyl alcohol was added
4% (W / W) medium solution (1.18 g of yeast extract, 3.11 g of lactose monohydrate, 2.95 of saccharose
g, xylose 1.38 g, sodium deoxycholate 0.20 g, Vail Salt No. 0.20 g of 3, iron (III) ammonium citrate (brown salt, the same applies hereinafter)
0.39 g, sodium thiosulfate pentahydrate 4.17
g, peptone 0.39 g, phenol red 0.03 g
Solution consisting of 46.2 g) and pH
1.3 g of a 10% sodium carbonate solution as a modifier was added, and 0.81 g of a solution obtained by sufficiently stirring was added, uniformly spread with a cone large bar, dried again at 65 ° C. for 1 hour, and laminated.
【００５３】（第３工程）この積層物上に、前記ポリビ
ニルアルコールの８％（Ｗ／Ｗ）水溶液０．２ｇを加え
て素早く均一に拡げた後直ちに、親水性付与のためペプ
トンを目付０．４ｇ／ｍ2となるように塗布して表面処
理した、目付６５ｇ／ｍ2、通気度１２０Ｌ／（ｍ2・ｓ
ｅｃ）、直径５ｃｍのナイロンメルトブロー不織布を、
親水処理された表面が上になるように張り合わせて６５
℃で５分間乾燥させた。不織布表面の親水化は、不織布
表面に２０ｇ／Ｌのペプトン水がのった８０メッシュサ
イズ（深さ０．２ｍｍ）のグラビア印刷用ロールを通過
させた後、１１０℃で２分間乾燥させることによってお
こなった。(Third step) 0.2 g of an 8% (W / W) aqueous solution of polyvinyl alcohol was added to the laminate, and the mixture was quickly and uniformly spread. Coated at 4 g / m 2 and surface-treated, with a basis weight of 65 g / m 2 and an air permeability of 120 L / (m 2 · s)
ec) Nylon melt blown nonwoven fabric with a diameter of 5 cm,
Laminate 65 so that the hydrophilic surface is on top.
Dry for 5 minutes at ° C. The hydrophilicity of the nonwoven fabric surface is obtained by passing the nonwoven fabric surface through a gravure printing roll of 80 mesh size (depth: 0.2 mm) with 20 g / L of peptone water and drying at 110 ° C. for 2 minutes. I did it.
【００５４】（第４工程）このようにして直径５０ｍｍ
のシャーレ中で得た培地積層物をシャーレからはぎ取
り、水溶性高分子化合物層が下にくるようにして直径５
０ｍｍ、厚さ５０μｍのポリエステルフィルム台紙上に
ずれがないように置き、さらにポリエステルフィルム台
紙側を、厚さ１００μｍ、サイズが８０ｍｍ×９０ｍｍ
のポリエステル粘着フィルムの中央部分に接着した。そ
してその上に、厚さ０.０６ｍｍ、サイズが８０ｍｍ×
９５ｍｍのポリプロピレンフィルムをその一端がポリエ
ステル粘着フィルムの端からはみ出すように被せ、エチ
レンオキサイドガス滅菌を行ってからポリプロピレンフ
ィルムを完全に接着し、最後にポリプロピレンフィルム
がはみ出している部分とは反対側の端に、ポリエステル
粘着フィルムの粘着力より強い粘着力を有するバックシ
ーリングテープを、この端部を挟むように接着してサル
モネラ菌検出用シート状培地を作製した。(Fourth Step) In this way, the diameter is 50 mm.
The layered medium obtained in the Petri dish was peeled off from the Petri dish, and the water-soluble polymer compound layer was placed under the Petri dish so that the diameter was 5 mm.
0 mm, placed on a 50 μm-thick polyester film mount so that there is no shift, and further, the polyester film mount side is 100 μm thick and 80 mm × 90 mm in size.
Was adhered to the center of the polyester adhesive film. And, on top of that, a thickness of 0.06 mm and a size of 80 mm x
Cover a 95mm polypropylene film with one end protruding from the end of the polyester adhesive film, sterilize ethylene oxide gas, completely adhere the polypropylene film, and finally the end opposite to the part where the polypropylene film protrudes. Then, a back sealing tape having an adhesive strength stronger than the adhesive strength of the polyester adhesive film was adhered so as to sandwich this end portion to prepare a sheet-shaped medium for detecting Salmonella.
【００５５】（使用試験）Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔ
ｉｌｉｓ（バシルス サチリス）ＩＦＯ３１３４株、Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ（バシルス セレウス）
ＩＦＯ１３４９４２株、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｄｉ
ｖｅｒｓｕｓ（サイトロバクタ ディバーサス） ＪＣ
Ｍ１６５９株、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄ
ｉｉ（サイトロバクタ フレンディ） ＩＦＯ１２６８
１株、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ Ｉ
ＩＤ９７６株、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａ
ｅ（エンテロバクタ クロアシエ） ＪＣＭ１２３２
株、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（エスシェリヒ
ア コリ） ＩＦＯ１３５００株、Ｋｌｅｂｓｉｓｅｌ
ｌａ ｔｅｒｒｉｇｅｎａ（クレブシエラ テリゲナ）
ＪＣＭ１６８７株、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌ
ｉｓ（プロテウス ミラビィス） ＩＦＯ１３３００
株、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
（シュードモナス エアロギノサ） ＩＦＯ３４４６
株、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ（サ
ルモネラ エンテリティディス） ＩＦＯ３１３３株、
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ ＪＣ
Ｍ１６５２株、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕ
ｒｉｕｍ（サルモネラ チフィリウム） ＩＩＤ１００
株、食品分離硫化水素産生Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属２
株、およびＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ（ロード
コッカス エキ） ＪＣＭ１３１１株を普通ブイヨンで
培養後、滅菌生理食塩水で数十ｃｆｕ／ｍＬとなるよう
に希釈し、その１ｍＬを上記サルモネラ菌用シート状培
地に加えて３５℃で培養した。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ
属の５株すべてとＣｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎ
ｄｉｉ ＩＩＤ９７６株は、約２０〜２４時間後には黒
色スポットを形成した。これ以外の菌株で黒色スポット
は観察されなかった。(Usage test) Bacillus subt
ilis (Bacillus subtilis) IFO3134 strain, B
acillus cereus
IFO134942 strain, Citrobacter di
versus (Site Lacta Diversus) JC
M1659 strain, Citrobacter fresh
ii (Caitorobacta Frendi) IFO1268
1 strain, Citrobacter freundii I
ID976 strain, Enterobacter cloaca
e (Enterobacter cloasier) JCM1232
Strain, Escherichia coli (Escherichia coli) IFO13500 strain, Klebsisel
la terrigena (Klebsiella terrigena)
JCM1687 strain, Proteus mirabil
is (Proteus Miravis) IFO13300
Strain, Pseudomonas aeruginosa
(Pseudomonas aeruginosa) IFO3446
Strain, Salmonella enteritidis (Salmonella enteritidis) IFO3133 strain,
Salmonella enteritidis JC
M1652 strain, Salmonella typhimu
rim (Salmonella typhirium) IID100
Strain, food isolated hydrogen sulfide producing Salmonella sp. 2
The strain and Rhodococcus equi (Rhodococcus equi) The JCM1311 strain was cultured in ordinary broth, diluted with sterile physiological saline to several tens of cfu / mL, and 1 mL thereof was added to the sheet medium for Salmonella at 35 ° C. And cultured. Salmonella
All five strains of the genus Citrobactor freun
The dii IID976 strain formed a black spot after about 20-24 hours. Black spots were not observed in other strains.
【００５６】実施例２ （第１工程）前記ポリビニルアルコールの１０％（Ｗ／
Ｗ）水溶液１．３ｇを直径５０ｍｍのプラスチックシャ
ーレ上で均一に拡げ、６５℃で２時間半ほど乾燥させて
フィルム化した。（第２〜３工程）その上に、前記ポリ
ビニルアルコールの２０％（Ｗ／Ｗ）水溶液１００ｇに
対し、１４％（Ｗ／Ｗ）培地溶液（酵母エキス１．０３
ｇ、ラクトース・１水和物２．７２ｇ、サッカロース
２．５８ｇ、キシロース１．２０ｇ、デオキシコール酸
ナトリウム０．１７ｇ、バイルソルトＮｏ．３を０．１
７ｇ、クエン酸鉄（III）アンモニウム０．３４ｇ、チ
オ硫酸ナトリウム・５水和物３．６５ｇ、ペプトン０．
３４ｇ、フェノールレッド０．０３ｇ、Ｌ−リジン塩酸
塩１．７２ｇ、Ｌ−シスチン０．０３ｇおよび水８６ｇ
からなる溶液）５２．８ｇ、およびｐＨ調整剤としての
１０％炭酸ナトリウム溶液１．３ｇを加えよく撹拌して
得られた溶液の０．８４ｇを添加してコーンラージ棒に
て均一に拡げ、再び６５℃にて１時間乾燥させ積層し
た。以後、実施例１の第３工程と同様にして培地積層物
を作製した。Example 2 (First Step) 10% (W /
W) 1.3 g of the aqueous solution was uniformly spread on a plastic Petri dish having a diameter of 50 mm, and dried at 65 ° C. for about two and a half hours to form a film. (2nd to 3rd steps) On top of that, a 100% aqueous solution of polyvinyl alcohol (20% (W / W)) was added to a 14% (W / W) medium solution (yeast extract 1.03).
g, lactose monohydrate 2.72 g, saccharose 2.58 g, xylose 1.20 g, sodium deoxycholate 0.17 g, Veil Salt No. 3 to 0.1
7 g, iron (III) citrate ammonium 0.34 g, sodium thiosulfate pentahydrate 3.65 g, peptone 0.1 g
34 g, phenol red 0.03 g, L-lysine hydrochloride 1.72 g, L-cystine 0.03 g and water 86 g
52.8 g) and 1.3 g of a 10% sodium carbonate solution as a pH adjuster were added, and 0.84 g of a solution obtained by stirring well was added. It dried at 65 degreeC for 1 hour, and laminated | stacked. Thereafter, a medium laminate was prepared in the same manner as in the third step of Example 1.
【００５７】アミノ酸成分と糖成分が同一層に混在する
本培地積層物と、アミノ酸成分と糖成分が２層に分かれ
て含まれている実施例１の培地積層物の保存安定性を調
べるために、両培地積層物をアルミ蒸着袋に密封し４０
℃にて２４時間放置した。その結果、実施例２の本培地
積層物では明らかな茶褐色化が観察されたのに対し、実
施例１ではわずかな変色しか認められなかった。この結
果からアミノ酸成分と糖成分を２層にわけて分散させ配
置させることが保存安定性に有効であることが確認され
た。In order to examine the storage stability of the present culture medium laminate in which the amino acid component and the sugar component are mixed in the same layer and the culture medium laminate of Example 1 in which the amino acid component and the sugar component are contained in two layers. Then, both culture laminates were sealed in an aluminum evaporation bag and sealed.
Left at 24 ° C. for 24 hours. As a result, in the present culture medium laminate of Example 2, a clear browning was observed, whereas in Example 1, only slight discoloration was observed. From these results, it was confirmed that dispersing and disposing the amino acid component and the sugar component in two layers is effective for storage stability.
【００５８】実施例３ （第１工程）前記ポリビニルアルコールの１０％（Ｗ／
Ｗ）水溶液１．３ｇを直径５０ｍｍのプラスチックシャ
ーレ上で均一に拡げ、６５℃で２時間半ほど乾燥させて
フィルム化した。 （第２工程）その上に、前記ポリビニルアルコールの２
０％（Ｗ／Ｗ）水溶液１００ｇに対し、１５％（Ｗ／
Ｗ）培地溶液（ペプトン３．７４ｇ、酵母エキス１．８
７ｇ、肉エキス１．１２ｇ、マンニトール２．２４ｇ、
デオキシコール酸ナトリウム０．３７ｇ、クエン酸鉄
（III）アンモニウム０．７５ｇ、チオ硫酸ナトリウム
・５水和物１．５０ｇ、Ｌ−リジン塩酸塩１．８７ｇ、
Ｌ−シスチン０．０４ｇ、クリスタルバイオレット０．
００５ｇ、ブリリアントグリン０．００４ｇ、ｐＨ調節
剤としてのリン酸水素２カリウム１．５０ｇ、および水
８５ｇからなる溶液）４８．５ｇを加えよく撹拌して得
られた溶液の０．８２ｇを添加し、直ちにコーンラージ
棒にて均一に拡げ、再び６５℃にて１時間乾燥させて積
層化した。Example 3 (1st step) 10% (W /
W) 1.3 g of the aqueous solution was uniformly spread on a plastic Petri dish having a diameter of 50 mm, and dried at 65 ° C. for about two and a half hours to form a film. (Second step) On top of that, 2
15% (W / W) per 100 g of 0% (W / W) aqueous solution
W) Medium solution (3.74 g of peptone, 1.8 of yeast extract)
7 g, meat extract 1.12 g, mannitol 2.24 g,
0.37 g of sodium deoxycholate, 0.75 g of ammonium iron (III) citrate, 1.50 g of sodium thiosulfate pentahydrate, 1.87 g of L-lysine hydrochloride,
L-cystine 0.04 g, crystal violet 0.
005 g, 0.004 g of brilliant gulin, 1.50 g of dipotassium hydrogen phosphate as a pH regulator, and 85 g of water) 48.5 g, and 0.82 g of a solution obtained by stirring well was added. Immediately, the mixture was uniformly spread with a cone large bar, dried again at 65 ° C. for 1 hour, and laminated.
【００５９】（第３〜４工程）前記ポリビニルアルコー
ルのみの８％（Ｗ／Ｗ）溶液に替えて、ノボビオシンを
２５０μｇ／ｇの濃度で含む前記ポリビニルアルコール
の８％（Ｗ／Ｗ）溶液を用いたこと以外は、実施例１の
第３〜４工程と同様にしてシート状培地を作製し、エチ
レンオキシドガスにて滅菌した。(Steps 3 and 4) Instead of the 8% (W / W) solution of polyvinyl alcohol alone, an 8% (W / W) solution of polyvinyl alcohol containing novobiocin at a concentration of 250 μg / g was used. A sheet-like medium was prepared in the same manner as in the third and fourth steps of Example 1 except for the fact that it was present, and sterilized with ethylene oxide gas.
【００６０】（使用試験）Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔ
ｉｌｉｓ ＩＦＯ３１３４株、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅ
ｒｅｕｓ ＩＦＯ１３４９４２株、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔ
ｅｒｄｉｖｅｒｓｕｓ ＪＣＭ１６５９株、Ｃｉｔｒｏ
ｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ ＩＦＯ１２６８１
株、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ ＩＩ
Ｄ９７６株、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａ
ｅ ＪＣＭ１２３２株、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉ ＩＦＯ１３５００株、 Ｋｌｅｂｓｉｓｅｌｌａ
ｔｅｒｒｉｇｅｎａ ＪＣＭ１６８７株、Ｐｒｏｔｅ
ｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ ＩＦＯ１３３００株、Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＩＦＯ３
４４６株、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄ
ｉｓ ＩＦＯ３１３３株、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎ
ｔｅｒｉｔｉｄｉｓ ＪＣＭ１６５２株、Ｓａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ＩＩＤ１０００
株、食品分離硫化水素産生Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属２
株、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｅｑｕｉ ＪＣＭ１３１１
株を普通ブイヨンで培養後、滅菌生理食塩水で数十ｃｆ
ｕ／ｍＬとなるように希釈して、その１ｍＬを上記シー
ト状培地に加え３５℃で培養した。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌ
ａ属の５株すべてとＣｉｔｒｏｂａｃｔｅｒｆｒｅｕｎ
ｄｉｉ ２株は約２０〜４８時間後には黒色スポットを
形成したが、これ以外の菌株では黒色スポットは観察さ
れなかった。(Usage test) Bacillus subt
ilis IFO3134 strain, Bacillus ce
reus IFO134942 strain, Citrobact
erdiverversus JCM1659 strain, Citro
Bacter Freundii IFO12681
Strain, Citrobacter freundii II
D976 strain, Enterobacter cloaca
e JCM1232 strain, Escherichia co
li IFO13500 strain, Klebsisella
terrigena JCM1687 strain, Prote
us mirabilis IFO13300 strain, Ps
eudomonas aeruginosa IFO3
446 strains, Salmonella enteritid
is IFO3133 strain, Salmonella en
teritidis JCM1652 strain, Salmon
cella typhimurium IID1000
Strain, food isolated hydrogen sulfide producing Salmonella sp. 2
Strain, Rhodococcusequi JCM1311
After culturing the strain in normal broth, several tens of cf with sterile saline
After dilution to u / mL, 1 mL thereof was added to the above-mentioned sheet medium and cultured at 35 ° C. Salmonell
all five strains of the genus a and Citrobacterfreun
The dii 2 strain formed a black spot after about 20 to 48 hours, but no black spot was observed in other strains.
【００６１】実施例４ （第１工程）前記ポリビニルアルコールの１０％（Ｗ／
Ｗ）水溶液１００ｇに対し、２ｍｇ／ｍｌ濃度のクエン
酸鉄（III）アンモニウム溶液３８．５ｇを加えよく撹
拌した。得られた溶液の１．８ｇを直径５０ｍｍのプラ
スチックシャーレ上で均一に拡げ、６５℃で２時間半ほ
ど乾燥させてフィルム化した。Example 4 (First step) 10% (W /
W) 38.5 g of a 2 mg / ml ammonium iron (III) citrate solution was added to 100 g of the aqueous solution, and the mixture was thoroughly stirred. 1.8 g of the obtained solution was spread evenly on a plastic petri dish having a diameter of 50 mm, and dried at 65 ° C. for about two and a half hours to form a film.
【００６２】（第２〜４工程）その上に、前記ポリビニ
ルアルコールの２０％（Ｗ／Ｗ）水溶液１００ｇに対
し、２０％（Ｗ／Ｗ）培地溶液（ペプトン４．２０ｇ、
ラクトース１水和物４．２０ｇ、胆汁酸塩３．６１ｇ、
クエン酸ナトリウム４．２０ｇ、チオ硫酸ナトリウム５
水和物３．７８ｇ、ニュートラルレッド０．１３ｇおよ
び水８０ｇからなる溶液）４３．３ｇ、およびｐＨ調整
剤としての１０％炭酸ナトリウム溶液１．３ｇを加えよ
く撹拌して得られた溶液の０．７９ｇを添加し、直ちに
コーンラージ棒にて均一に拡げ、再び６５℃にて１時間
乾燥させて積層化した。以後、実施例１の第３〜４工程
と同様にしてシート状培地を作製した。(Second to fourth steps) On top of this, a 20% (W / W) medium solution (4.20 g of peptone, 100 g of a 20% (W / W) aqueous solution of polyvinyl alcohol) was added.
4.20 g of lactose monohydrate, 3.61 g of bile salts,
4.20 g of sodium citrate, sodium thiosulfate 5
43.3 g of a solution consisting of 3.78 g of hydrate, 0.13 g of neutral red and 80 g of water), and 1.3 g of a 10% sodium carbonate solution as a pH adjuster were added, and the mixture was stirred well. 79 g was added, immediately spread uniformly with a cone large bar, dried again at 65 ° C. for 1 hour, and laminated. Thereafter, a sheet medium was prepared in the same manner as in the third and fourth steps of Example 1.
【００６３】（使用試験）Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎ
ｔｅｒｉｔｉｄｉｓ ＩＦＯ３１３３株、Ｓａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ ＪＣＭ１６５２
株、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ
ＩＩＤ１０００株を普通ブイヨンで培養後、滅菌生理食
塩水で数十ｃｆｕ／ｍＬとなるように希釈して、その１
ｍＬを上記シート状培地に加え３５℃で培養した。用い
たＳａｌｍｏｎｅｌｌａ属の３株すべてが約２０〜４８
時間後には黒色スポットを形成した。(Use test) Salmonella en
terididis IFO3133 strain, Salmon
ella enteritidis JCM1652
Strain, Salmonella typhimurium
After cultivating the IID 1000 strain in ordinary broth, it is diluted with sterile physiological saline to several tens of cfu / mL.
mL was added to the above-mentioned sheet medium and cultured at 35 ° C. All three strains of the genus Salmonella used were about 20-48
After an hour, a black spot was formed.
【００６４】実施例５ （第１工程）４００ｍｍ×３００ｍｍ×０．０５ｍｍの
ポリエチレンテレフタレート台紙をガラス板に固定し
た。この台紙上に、前記ポリビニルアルコールの２０％
（Ｗ／Ｗ）水溶液を３５０ｇ／ｍ2となるようアプリケ
ーターを用い均一厚にコーティングして１１０℃で７分
乾燥させ、台紙に接着した状態でフィルム化した。Example 5 (First Step) A 400 mm × 300 mm × 0.05 mm polyethylene terephthalate mount was fixed to a glass plate. On this backing, 20% of the polyvinyl alcohol
(W / W) Aqueous solution was coated to a uniform thickness with an applicator so as to be 350 g / m 2 , dried at 110 ° C. for 7 minutes, and formed into a film in a state of being adhered to a mount.
【００６５】（第２工程）次に、上記の２０％ポリビニ
ルアルコール水溶液１００ｇ、Ｌ−リジン塩酸塩４ｇ、
Ｌ−シスチン０．０７ｇ、ｐＨ調節剤としての炭酸ナト
リウム０．１６ｇおよび蒸留水３５．７７ｇからなる溶
液を作製し（以下の溶液の調製に当たってはすべて、最
後にポリビニルアルコール水溶液を加えることにより、
溶液が均一となるようにした。）、上記フィルムに１０
５ｇ／ｍ2となるようコーティングし、１１０℃で４分
間乾燥させてフィルム化した。(Second Step) Next, 100 g of the above 20% aqueous polyvinyl alcohol solution, 4 g of L-lysine hydrochloride,
A solution consisting of 0.07 g of L-cystine, 0.16 g of sodium carbonate as a pH adjuster and 35.77 g of distilled water was prepared (in the preparation of the following solutions, by adding a polyvinyl alcohol aqueous solution at the end,
The solution was made homogeneous. ), 10
It was coated at 5 g / m 2 and dried at 110 ° C. for 4 minutes to form a film.
【００６６】（第３工程）さらに、このフィルムの上
に、前記の２０％ポリビニルアルコール水溶液１００
ｇ、チオ硫酸ナトリウム・５水和物７．０７ｇ、酵母エ
キス１．００ｇ、デオキシコール酸ナトリウム０．３３
ｇ、バイルソルトＮｏ．３の０．３３ｇ、フェノールレ
ッド０．０２ｇ、ｐＨ調節剤としての炭酸ナトリウム
０．１６ｇ、蒸留水３１．０９ｇからなる溶液を１０５
ｇ／ｍ2となるようコーティングし、１１０℃で４分間
乾燥させてフィルム化した。(Third Step) Further, the above-mentioned 20% aqueous solution of polyvinyl alcohol 100
g, sodium thiosulfate pentahydrate 7.07 g, yeast extract 1.00 g, sodium deoxycholate 0.33
g, Vail Salt No. A solution consisting of 0.33 g of Compound No. 3, 0.02 g of phenol red, 0.16 g of sodium carbonate as a pH adjuster, and 31.09 g of distilled water was added to 105
g / m 2 and dried at 110 ° C. for 4 minutes to form a film.
【００６７】（第４工程）さらに、同様にしてこのフィ
ルムの上に、前記の２０％ポリビニルアルコール水溶液
１００ｇ、ラクトース・１水和物５．３３ｇ、サッカロ
ース５．０７ｇ、キシロース２．３３ｇ、酵母エキス
１．００ｇ、デオキシコール酸ナトリウム０．３３ｇ、
バイルソルトＮｏ．３０．３３ｇ、フェノールレッド
０．０２ｇ、ｐＨ調節剤としての炭酸ナトリウム０．１
６ｇ、蒸留水２５．４３ｇからなる溶液を１０５ｇ／ｍ
2となるようコーティングし、１１０℃で４分間乾燥さ
せてフィルム化した。(Fourth Step) Further, similarly, 100 g of the above 20% aqueous solution of polyvinyl alcohol, 5.33 g of lactose monohydrate, 5.07 g of saccharose, 2.33 g of xylose, yeast extract 1.00 g, sodium deoxycholate 0.33 g,
Vail salt No. 30.33 g, phenol red 0.02 g, sodium carbonate 0.1 as a pH adjuster
A solution consisting of 6 g and 25.43 g of distilled water is 105 g / m2.
2 and dried at 110 ° C. for 4 minutes to form a film.
【００６８】（第５工程）上記フィルムの上に、前記の
２０％ポリビニルアルコール水溶液１００ｇ、クエン酸
鉄（III）アンモニウム４．００ｇ、ノボビオシン０．
０２ｇ、酵母エキス１．００ｇおよび蒸留水１４０ｇか
らなる溶液を、１２ｇ／ｍ2となるようコーティング
し、直ちに該フィルムと同サイズの不織布を貼り合わ
せ、１１０℃で３分間乾燥させた。ここで用いた不織布
は、実施例１で用いたものと同じ不織布を実施例１と同
様に親水化処理したものである。(Fifth Step) On the above film, 100 g of the above 20% aqueous solution of polyvinyl alcohol, 4.00 g of ammonium iron (III) citrate, and novobiocin 0.1 g were added.
A solution consisting of 02 g, 1.00 g of yeast extract and 140 g of distilled water was coated so as to have a concentration of 12 g / m 2 , a nonwoven fabric of the same size as the film was immediately attached, and dried at 110 ° C. for 3 minutes. The nonwoven fabric used here is the same nonwoven fabric as that used in Example 1 but subjected to hydrophilic treatment in the same manner as in Example 1.
【００６９】（第６工程）このようにして作製した培地
積層物を直径５ｃｍの円形にカットし、その台紙側を、
厚さ１００μｍでサイズが８０ｍｍ×９０ｍｍのポリエ
ステル粘着フィルムの中央部分に接着し、以後、実施例
１の第４工程と同様にしてシート状培地を作製した。(Sixth step) The thus-prepared culture medium laminate was cut into a circular shape having a diameter of 5 cm, and
It was adhered to the central portion of a polyester adhesive film having a thickness of 100 μm and a size of 80 mm × 90 mm. Thereafter, a sheet medium was prepared in the same manner as in the fourth step of Example 1.
【００７０】（使用試験）Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔ
ｉｌｉｓ ＩＦＯ３１３４株、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅ
ｒｅｕｓ ＩＦＯ１３４９４２株、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔ
ｅｒｄｉｖｅｒｓｕｓ ＪＣＭ１６５９株、Ｃｉｔｒｏ
ｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ ＩＦＯ１２６８１
株、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ ＩＩ
Ｄ９７６株、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａ
ｅ ＪＣＭ１２３２株、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉ ＩＦＯ１３５００株、 Ｋｌｅｂｓｉｓｅｌｌａ
ｔｅｒｒｉｇｅｎａ ＪＣＭ１６８７株、Ｐｒｏｔｅ
ｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ ＩＦＯ１３３００株、Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＩＦＯ３
４４６株、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄ
ｉｓ ＩＦＯ３１３３株、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎ
ｔｅｒｉｔｉｄｉｓ ＪＣＭ１６５２株、Ｓａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ＩＩＤ１０００
株、食品分離硫化水素産生Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属２
株、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｅｑｕｉ ＪＣＭ１３１１
株を普通ブイヨンで培養後、滅菌生理食塩水で数十ｃｆ
ｕ／ｍＬとなるように希釈して、その１ｍＬを上記シー
ト状培地に加え３５℃で培養した。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌ
ａ属の５株すべてとＣｉｔｒｏｂａｃｔｅｒｆｒｅｕｎ
ｄｉｉ ＩＩＤ９７６株は約２０〜４８時間後には黒色
スポットを形成したが、これ以外の菌株では黒色スポッ
トは観察されなかった。(Usage test) Bacillus subt
ilis IFO3134 strain, Bacillus ce
reus IFO134942 strain, Citrobact
erdiverversus JCM1659 strain, Citro
Bacter Freundii IFO12681
Strain, Citrobacter freundii II
D976 strain, Enterobacter cloaca
e JCM1232 strain, Escherichia co
li IFO13500 strain, Klebsisella
terrigena JCM1687 strain, Prote
us mirabilis IFO13300 strain, Ps
eudomonas aeruginosa IFO3
446 strains, Salmonella enteritid
is IFO3133 strain, Salmonella en
teritidis JCM1652 strain, Salmon
cella typhimurium IID1000
Strain, food isolated hydrogen sulfide producing Salmonella sp. 2
Strain, Rhodococcusequi JCM1311
After culturing the strain in normal broth, several tens of cf with sterile saline
After dilution to u / mL, 1 mL thereof was added to the above-mentioned sheet medium and cultured at 35 ° C. Salmonell
all five strains of the genus a and Citrobacterfreun
The dii IID976 strain formed a black spot after about 20 to 48 hours, but no black spot was observed in other strains.
【００７１】[0071]
【発明の効果】本発明の培地積層物またはシート状培地
を用いることにより、培養前の培地の準備が要らず、食
品や環境中等のサルモネラ菌検査が簡便に行える。ま
た、容積が小さいため保存や培養に場所をとらず、廃棄
物の体積も通常の微生物培地に比べ大幅に減少できる。The use of the medium laminate or sheet medium of the present invention does not require preparation of the medium before culturing, and allows easy examination of Salmonella in foods, the environment, and the like. In addition, because of its small volume, it does not require much space for storage and cultivation, and the volume of waste can be greatly reduced as compared with a normal microorganism medium.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｒ 1:42） Ｃ１２Ｒ 1:42） (Ｃ１２Ｍ 1/16 (Ｃ１２Ｍ 1/16 Ｃ１２Ｒ 1:42） Ｃ１２Ｒ 1:42） (Ｃ１２Ｎ 1/20 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:42） Ｃ１２Ｒ 1:42） Ｆターム(参考） 4B029 AA07 AA08 BB02 CC02 CC07 GB02 GB06 GB09 GB10 4B063 QA01 QA18 QQ06 QR69 QS07 QS28 QS36 QX01 4B065 AA46X BB02 BB03 BB08 BB38 BB40 CA46 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) C12R 1:42) C12R 1:42) (C12M 1/16 (C12M 1/16 C12R 1:42) C12R 1 : 42) (C12N 1/20 (C12N 1/20 A C12R 1:42) C12R 1:42) F term (reference) 4B029 AA07 AA08 BB02 CC02 CC07 GB02 GB06 GB09 GB10 4B063 QA01 QA18 QQ06 QR69 QS07 QS28 QS36 QX01 4B065 AA46X BB02 BB03 BB08 BB38 BB40 CA46
Claims (20)
物層とを含み、多孔質マトリックス層から最も離れた側
の水溶性高分子化合物層に接して台紙を含んでもよい積
層物であって、該積層物にチオ硫酸塩および多塩基有機
酸の第二鉄塩を含む培地成分が含有されていることを特
徴とするサルモネラ菌検出用培地積層物。1. A laminate comprising a porous matrix layer and a water-soluble polymer compound layer, and optionally including a mount in contact with the water-soluble polymer compound layer furthest away from the porous matrix layer, A medium laminate for detecting Salmonella, wherein the laminate contains a medium component containing a thiosulfate and a ferric salt of a polybasic organic acid.
とを特徴とする、請求項１に記載のサルモネラ菌検出用
培地積層物。2. The laminate for detecting Salmonella according to claim 1, wherein the number of the water-soluble polymer compound layers is 2 to 7.
／ｍ2、通気度７０〜２４０Ｌ／（ｍ2・ｓｅｃ）のナイ
ロンメルトブロー不織布であることを特徴とする、請求
項１または２に記載のサルモネラ菌検出用培地積層物。3. The porous matrix has a basis weight of 40 to 100 g.
/ M 2, nylon melt characterized in that it is a blown nonwoven claim 1 or Salmonella detecting medium multilayer structure according to the second air permeability 70~240L / (m 2 · sec) .
％、分子量２５０００〜２５００００のポリビニルアル
コールであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれ
か１項に記載のサルモネラ菌検出用培地積層物。4. A water-soluble polymer compound having a degree of saponification of 75 to 95.
%, A polyvinyl alcohol having a molecular weight of 25,000 to 250,000, wherein the laminate for detecting Salmonella bacteria according to any one of claims 1 to 3 is characterized in that:
トン、酵母エキス、炭酸ナトリウム、塩化ナトリウムお
よびクエン酸鉄アンモニウムから選ばれる少なくとも１
種の成分を目付で０．３〜３ｇ／ｍ2塗布したものであ
ることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記
載のサルモネラ菌検出用培地積層物。5. The porous matrix layer has on its surface at least one selected from peptone, yeast extract, sodium carbonate, sodium chloride and iron ammonium citrate.
Characterized in that it is obtained by 0.3 to 3 g / m 2 coated seeds ingredients in basis weight, Salmonella detecting medium laminate according to any one of claims 1-4.
類、肉エキス類および糖アルコールからなる群から選択
される少なくとも２種の栄養成分、アミノ酸成分および
糖成分からなる群から選択される少なくとも１種の判別
用成分、塩化ナトリウム、胆汁末、胆汁酸塩、デオキシ
コール酸塩、タージトールＮｏ．４、バイルソルトＮ
ｏ．３、クエン酸ナトリウム、ブリリアントグリーンお
よびクリスタルバイオレットからなる群から選択される
少なくとも１種の選択剤、フェノールレッドおよびニュ
ートラルレッドからなる群から選択される１種のｐＨ指
示薬、ｐＨ調節剤、チオ硫酸塩、多塩基有機酸の第二鉄
塩、および任意成分としてのノボビオシンを含むことを
特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載のサル
モネラ菌検出用培地積層物。6. A medium component comprising at least two nutrient components selected from the group consisting of yeast extract, peptones, meat extract and sugar alcohol, and at least one selected from the group consisting of amino acid components and sugar components. , Sodium chloride, bile powder, bile salts, deoxycholate, Tarditol No. 4. Vail salt N
o. 3. at least one type of selection agent selected from the group consisting of sodium citrate, brilliant green and crystal violet, one type of pH indicator selected from the group consisting of phenol red and neutral red, a pH regulator, thiosulfate The medium laminate for detecting Salmonella according to any one of claims 1 to 5, comprising: ferric salt of a polybasic organic acid; and novobiocin as an optional component.
性高分子化合物層に含むことを特徴とする、請求項６に
記載のサルモネラ菌検出用培地積層物。7. The laminate for detecting Salmonella according to claim 6, wherein the sugar component and the amino acid component are contained in separate water-soluble polymer compound layers.
目付で０〜３ｇ／ｍ 2の酵母エキス、０〜６ｇ／ｍ2のペ
プトン、０〜３ｇ／ｍ2の肉エキス、０〜３ｇ／ｍ2の塩
化ナトリウム、０〜１ｇ／ｍ2のデオキシコール酸ナト
リウム、０〜６ｇ／ｍ2の胆汁酸塩、０〜２ｇ／ｍ2のバ
イルソルトＮｏ．３、０〜４ｇ／ｍ2のマンニトール、
０〜３ｇ／ｍ2のＬ−リジン塩酸塩、０〜０．１ｇ／ｍ2
のＬ−シスチン、０〜６ｇ／ｍ2のラクトース、０〜５
ｇ／ｍ2のサッカロース、０〜３ｇ／ｍ2のキシロース、
無水物換算で１〜４ｇ／ｍ2のチオ硫酸ナトリウム、
０．２〜１．５ｇ／ｍ2のクエン酸鉄（III）アンモニウ
ム、０〜０．１ｇ／ｍ2のフェノールレッド、０〜０．
０１ｇ／ｍ2のブリリアントグリーン、０〜０．０１ｇ
／ｍ2のクリスタルバイオレット、０〜０．３ｇ／ｍ2の
ニュートラルレッド、０〜０．０５ｇ／ｍ2のノボビオ
シン、および０．１〜１ｇ／ｍ2のｐＨ調節剤を含むこ
とを特徴とする、請求項６または７に記載のサルモネラ
菌検出用培地積層物。8. A medium component for each of the laminates.
0 to 3 g / m in weight TwoYeast extract, 0-6g / mTwoNo pe
Puton, 0-3g / mTwoMeat extract, 0-3g / mTwoSalt
Sodium chloride, 0-1 g / mTwoDeoxycholic acid nato
Li, 0-6 g / mTwoBile salts, 0-2 g / mTwoNo ba
Il salt No. 3, 0-4 g / mTwoMannitol,
0-3g / mTwoL-lysine hydrochloride of 0 to 0.1 g / mTwo
L-cystine, 0-6 g / mTwoLactose, 0-5
g / mTwoSucrose, 0-3 g / mTwoXylose,
1-4 g / m in terms of anhydrideTwoSodium thiosulfate,
0.2-1.5 g / mTwoOf iron (III) citrate ammonium
System, 0-0.1 g / mTwoPhenol red, 0-0.
01 g / mTwoBrilliant Green, 0-0.01g
/ MTwoCrystal violet, 0-0.3g / mTwoof
Neutral Red, 0-0.05g / mTwoNobobio
Syn, and 0.1-1 g / mTwoPH adjuster
Salmonella according to claim 6 or 7, characterized in that:
Culture medium laminate for bacterial detection.
目付で１〜２ｇ／ｍ 2の酵母エキス、０．２〜１ｇ／ｍ2
のペプトン、０〜２．５ｇ／ｍ2の塩化ナトリウム、２
〜３ｇ／ｍ2のＬ−リジン塩酸塩、０〜０．１ｇ／ｍ2の
Ｌ−シスチン、１〜３ｇ／ｍ2のキシロース、３〜５ｇ
／ｍ2のラクトース、３〜５ｇ／ｍ2のサッカロース、
０．１〜１ｇ／ｍ2のデオキシコール酸ナトリウム、０
〜１ｇ／ｍ2のバイルソルトＮｏ．３、無水物換算で３
〜４ｇ／ｍ2のチオ硫酸ナトリウム、０．２〜１ｇ／ｍ2
のクエン酸鉄（III）アンモニウム、０〜０．０５ｇ／
ｍ2のノボビオシン、および０．１〜１ｇ／ｍ2のｐＨ調
節剤を含むことを特徴とする、請求項６〜８のいずれか
１項に記載のサルモネラ菌検出用培地積層物。9. A medium component for each of the laminates.
1-2 g / m in weight TwoYeast extract, 0.2-1 g / mTwo
Peptone, 0-2.5 g / mTwoSodium chloride, 2
~ 3g / mTwoL-lysine hydrochloride of 0 to 0.1 g / mTwoof
L-cystine, 1-3 g / mTwoXylose, 3-5g
/ MTwoLactose, 3-5 g / mTwoSucrose,
0.1-1 g / mTwoSodium deoxycholate, 0
~ 1g / mTwoOf Bayle Salt No. 3, 3 in terms of anhydride
~ 4g / mTwoSodium thiosulfate, 0.2-1 g / mTwo
Ammonium iron (III) citrate, 0-0.05 g /
mTwoNovobiocin, and 0.1-1 g / mTwoPH adjustment
9. A method according to claim 6, further comprising a nodal agent.
2. The medium laminate for detecting Salmonella according to item 1.
る目付で２〜３ｇ／ｍ2の酵母エキス、４〜６ｇ／ｍ2の
ペプトン、１〜２ｇ／ｍ2の肉エキス、０〜２ｇ／ｍ2の
塩化ナトリウム、２〜４ｇ／ｍ2のマンニトール、２〜
３ｇ／ｍ2のＬ−リジン塩酸塩、０〜０．１ｇ／ｍ2のＬ
−シスチン、０．２〜１ｇ／ｍ2のデオキシコール酸ナ
トリウム、無水物換算で１〜２ｇ／ｍ2のチオ硫酸ナト
リウム、０．５〜１．５ｇ／ｍ2のクエン酸鉄（III）ア
ンモニウム、０．００２〜０．０１ｇ／ｍ2のブリリア
ントグリーン、０．００３〜０．０１ｇ／ｍ2のクリス
タルバイオレット、０〜０．０５ｇ／ｍ2のノボビオシ
ン、および０．１〜１ｇ／ｍ2のｐＨ調節剤を含むこと
を特徴とする、請求項６または８に記載のサルモネラ菌
検出用培地積層物。As 10. medium components, weight per unit area at 2 to 3 g / m 2 of yeast extract for each laminate, peptone 4-6 g / m 2, of 1 to 2 g / m 2 meat extract, 0~2g / m 2 Sodium chloride, 2-4 g / m 2 mannitol,
L- lysine hydrochloride 3 g / m 2, the 0~0.1g / m 2 L
- cystine, sodium deoxycholate 0.2~1g / m 2, sodium thiosulfate 1 to 2 g / m 2 on a dry solid basis, iron (III) citrate ammonium 0.5 to 1.5 g / m 2 , of brilliant green 0.002~0.01g / m 2, of crystal violet 0.003~0.01g / m 2, of 0~0.05g / m 2 novobiocin, and of 0.1~1g / m 2 The laminate for detecting Salmonella according to claim 6 or 8, further comprising a pH adjuster.
る目付で４〜６ｇ／ｍ2のペプトン、４〜６ｇ／ｍ2のラ
クトース、４〜５ｇ／ｍ2の胆汁酸塩、４〜６ｇ／ｍ2の
クエン酸ナトリウム、無水物換算で２〜４ｇ／ｍ2のチ
オ硫酸ナトリウム、０．２〜１ｇ／ｍ2のクエン酸鉄（I
II）アンモニウム、０．００１〜０．００５ｇ／ｍ2の
ブリリアントグリーン、０．１〜０．３ｇ／ｍ2のニュ
ートラルレッド、０〜０．０５ｇ／ｍ2のノボビオシ
ン、および０．１〜１ｇ／ｍ2のｐＨ調節剤を含むこと
を特徴とする、請求項６または８に記載のサルモネラ菌
検出用培地積層物。As 11. The medium component, peptone 4-6 g / m 2 in basis weight for each laminate, lactose 4-6 g / m 2, bile salts 4~5g / m 2, 4~6g / m 2 Of sodium citrate, 2 to 4 g / m 2 of sodium thiosulfate in terms of anhydride, and 0.2 to 1 g / m 2 of iron citrate (I
II) ammonium, of brilliant green 0.001~0.005g / m 2, neutral red 0.1~0.3g / m 2, of 0~0.05g / m 2 novobiocin, and 0.1~1g / The medium laminate for detecting Salmonella according to claim 6 or 8, comprising a pH regulator of m 2 .
培地積層物が、その培地積層物より大きな粘着シートの
中心部に多孔質マトリックス層が上になるように接着さ
れ、その上に前記積層物より大きな透明フィルムが多孔
質マトリックス層に接しかつ前記積層物と中心部を合わ
せるように被せられ、この透明フィルムの前記積層物か
らはみ出している部分が粘着シートの前記積層物が接着
されていない部分と接着されていることを特徴とするサ
ルモネラ菌検出用シート状培地。12. The culture medium laminate according to any one of claims 1 to 11, wherein the culture medium laminate is adhered to a central portion of an adhesive sheet larger than the culture medium laminate so that a porous matrix layer faces upward. A transparent film larger than the laminate is covered so as to be in contact with the porous matrix layer and align the center with the laminate, and the portion of the transparent film that protrudes from the laminate is bonded to the laminate of the pressure-sensitive adhesive sheet. A sheet-shaped culture medium for detecting Salmonella, characterized by being adhered to an untreated part.
ートの端からはみ出るように構成されていることを特徴
とする、請求項１２に記載のサルモネラ菌検出用シート
状培地。13. The sheet-shaped culture medium for detecting Salmonella according to claim 12, wherein at least a part of the transparent film protrudes from an end of the adhesive sheet.
色ポリエステルフィルム、ポリオレフィン系合成紙また
はポリオレフィンラミネート紙にアクリル系粘着剤また
はゴム系粘着剤を塗布したものであることを特徴とす
る、請求項１２または１３に記載のサルモネラ菌検出用
シート状培地。14. The pressure-sensitive adhesive sheet according to claim 12, wherein an acrylic pressure-sensitive adhesive or a rubber pressure-sensitive adhesive is applied to a polyester film, a white polyester film, a polyolefin-based synthetic paper or a polyolefin-laminated paper. 2. The sheet-shaped medium for detecting Salmonella according to item 1.
ｍであることを特徴とする、請求項１２〜１４のいずれ
か１項に記載のサルモネラ菌検出用シート状培地。15. The pressure-sensitive adhesive sheet has a thickness of 0.07 to 0.5 m.
The sheet-shaped culture medium for detecting Salmonella according to any one of claims 12 to 14, wherein m is m.
または剥離処理ポリオレフィンフィルムであることを特
徴とする、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載のサ
ルモネラ菌検出用シート状培地。16. The sheet-shaped medium for detecting Salmonella according to any one of claims 12 to 15, wherein the transparent film is a polyolefin film or a release-treated polyolefin film.
であることを特徴とする、請求項１２〜１６のいずれか
１項に記載のサルモネラ菌検出用シート状培地。17. The transparent film has a thickness of 20 to 100 μm.
The sheet-shaped culture medium for detecting Salmonella according to any one of claims 12 to 16, characterized in that:
の一部が他の接着部分より強い粘着力になるように接着
されていることを特徴とする、請求項１２〜１７のいず
れか１項に記載のサルモネラ菌検出用シート状培地。18. A method according to claim 12, wherein a part of the adhesive part between the adhesive sheet and the transparent film is adhered so as to have a stronger adhesive strength than the other adhesive parts. 2. The sheet-shaped medium for detecting Salmonella according to item 1.
の一部がこの粘着シートの粘着力より強い粘着力の粘着
テープにより接着されていることを特徴とする、請求項
１８に記載のサルモネラ菌検出用シート状培地。19. The detection of Salmonella according to claim 18, wherein a part of the adhesive portion between the adhesive sheet and the transparent film is adhered by an adhesive tape having an adhesive strength stronger than that of the adhesive sheet. For sheet medium.
培地積層物または請求項１２〜１９のいずれか１項に記
載のシート状培地に被検体を接種して培養し、黒色の痕
跡の有無を検出することを特徴とするサルモネラ菌の検
出法。20. Inoculation of a test sample onto the culture medium laminate according to any one of claims 1 to 11 or the sheet-form culture medium according to any one of claims 12 to 19, followed by culturing. A method for detecting Salmonella, comprising detecting the presence or absence of a trace.
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