JP2001289862A - Method and kit for detecting protein - Google Patents

Method and kit for detecting protein

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JP2001289862A JP2001082943A JP2001082943A JP2001289862A JP 2001289862 A JP2001289862 A JP 2001289862A JP 2001082943 A JP2001082943 A JP 2001082943A JP 2001082943 A JP2001082943 A JP 2001082943A JP 2001289862 A JP2001289862 A JP 2001289862A
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a kit for detecting protein which does not contaminate samples, can safely and quantitatively keep residual reagents, and makes protein detecting time shorter and, in addition, does not allow the colored matter of a reaction reagent to be left in the samples. SOLUTION: In this kit, a detecting medium which removes a protein from the surfaces of the samples and a reagent which reacts to the protein and brings out a color are combinedly housed.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【0001】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は蛋白質の検出方法及び蛋
白質検出用キットに関する。
The present invention relates to a method for detecting a protein and a kit for detecting the protein.

【0002】[0002]

【従来の技術】人間生活を営んでいく物質的条件の3大
要素である衣、食、住のうち衣、住は環境、その他の条
件である程度は閑却できるが、食は日常、必須不可欠で
ある。
2. Description of the Related Art Clothes, food, and dwelling, which are the three major elements of material conditions for human life, can be laid off to some extent under environmental and other conditions, but food is indispensable daily. It is.

【0003】従って食物は生命維持の根源としてつねに
適度な栄養源を含むと共に、健康に危害を与えることが
あってはならない。我が国の公衆衛生状態はめざましく
進歩改善をみせているが、こと食品衛生の面では、質的
観点から完全に衛生的とは言えない。
[0003] Food must therefore always contain adequate nutrients as a source of life support and must not be harmful to health. Although the public health situation in Japan has made remarkable progress and improvement, in terms of food hygiene, it is not completely hygienic from a qualitative point of view.

【0004】飲食に起因する衛生上の危害が発生しない
様、飲食関連の添加物、容器、包装環境等は衛生的に品
質、性状を管理する必要がある。
It is necessary to control the quality and properties of food-related additives, containers, packaging environments, etc. in a hygienic manner so that no hygiene hazards due to eating and drinking occur.

【0005】しかし、従来の蛋白質検出方法は試料(対
象物)に直接反応試薬を付着させるため、検体の汚染、
残留試薬の安全性が問題であり、反応試薬の着色物が検
体に残り、水等で簡単に落とせない等の問題もあった。
また上記検出方法では定量性に乏しく、検出結果がでる
までに3〜72時間以上かかる場合があった。
However, in the conventional protein detection method, since the reaction reagent is directly attached to the sample (target), contamination of the sample,
The safety of the residual reagent is a problem, and there is also a problem that a colored substance of the reaction reagent remains in the sample and cannot be easily removed with water or the like.
In addition, the above detection method has poor quantitative properties, and it sometimes takes 3 to 72 hours or more before a detection result is obtained.

【0006】[0006]

【発明が解決しようとする課題】従って上記問題を解決
することは急務で、本発明の課題は、試料の汚染、残留
試薬の安全性に優れ、且つ定量性があり、反応試薬の着
色物が試料に残ることがなく、蛋白質の検出時間が迅速
である蛋白質の検出方法及び蛋白質検出用キットを提供
することにある。
Therefore, it is an urgent need to solve the above problems, and it is an object of the present invention to provide a sample which is excellent in the contamination of the sample, the safety of the remaining reagent, and has a quantitative property. An object of the present invention is to provide a protein detection method and a protein detection kit in which the detection time of the protein is short without remaining in the sample.

【0007】[0007]

【課題を解決するための手段】本発明の上記課題は以下
の構成により達成される。
The above object of the present invention is achieved by the following constitution.

【0008】1.蛋白質を発色させる試薬が封入された
小容器、蛋白質を移しとる検出部分を有する検出媒体及
び前記試薬と検出媒体とが接触する場とが組み合わされ
て一つに収納されてなる蛋白質検出用キットであって、
前記試薬と検出媒体との接触が、蛋白質を検出媒体に移
しとった後に、前記試薬の封入された容器を潰すことに
より起こることを特徴とする蛋白質検出用キット。
[0008] 1. A protein detection kit comprising a small container in which a reagent for coloring a protein is enclosed, a detection medium having a detection portion for transferring the protein, and a field in which the reagent and the detection medium come into contact with each other in combination. So,
A kit for detecting a protein, wherein the contact between the reagent and the detection medium is caused by crushing a container in which the reagent is sealed after transferring the protein to the detection medium.

【0009】2.前記試薬の封入された容器が可撓性部
材からなることを特徴とする請求項1記載の蛋白質検出
用キット。
[0009] 2. 2. The protein detection kit according to claim 1, wherein the container enclosing the reagent is made of a flexible member.

【0010】3.前記検出部分が、試料から蛋白質を移
しとる前に予め水性媒体により湿潤していることを特徴
とする請求項1〜2いずれか記載の蛋白質検出用キッ
ト。
[0010] 3. The protein detection kit according to any one of claims 1 to 2, wherein the detection portion is wetted with an aqueous medium before transferring the protein from the sample.

【0011】以下本発明を詳述する。Hereinafter, the present invention will be described in detail.

【0012】本発明は試料の表面の蛋白質を検出媒体に
該蛋白質を移し、あらかじめ調製された蛋白質反応発色
試薬溶液中に蛋白質が転移した検出媒体を好ましくは20
〜80℃、更に好ましくは30〜60℃、1〜60分間接触させ
た後、発色した濃度を、例えば蛋白質量に対応した発色
濃度を示す色見本(蛋白質定量のための)、検量線(蛋
白質量−発色濃度)、分光光度計、カラーメーターで該
試料に付着した蛋白質量を1〜60分間の短時間で定量で
きる蛋白質の検出方法である。
In the present invention, the protein on the surface of the sample is transferred to a detection medium, and the protein is transferred to a previously prepared protein reaction color reagent solution.
After contacting at 80 to 80 ° C, more preferably 30 to 60 ° C for 1 to 60 minutes, the density of the developed color is determined by, for example, a color sample (for protein quantification) showing a color density corresponding to the protein mass, a calibration curve (protein (Amount-color density), a spectrophotometer, and a color meter, which is a protein detection method capable of quantifying the amount of protein attached to the sample in a short time of 1 to 60 minutes.

【0013】本発明に使用される試料とは表面に蛋白質
が付着しているか調べたいものである。
The sample used in the present invention is a sample for which it is desired to check whether a protein is attached to the surface.

【0014】本発明の検出媒体とは試料の表面の蛋白質
を移しとれる媒体である。本発明の検出媒体は、例えば
検出部分と軸とからなる例えば綿棒、メンブレンフィル
ター、吸着材料をつけたテープ、スタンプ、ストリップ
ベース、吸着材料をつけたローラ、吸水性の綿棒、フィ
ルター、スポイド等が挙げられる。これらのなかで検出
部分と軸とからなる検出媒体が好ましく、軸の先端に吸
水性検出部分を有する形状が更に好まく、該軸は弾性部
材(例えばプラスチック等)で、できていることが試料
表面を拭う際に圧着させるため、試料表面の蛋白質の移
しとる効率が良く好ましい。
The detection medium of the present invention is a medium that can transfer proteins on the surface of a sample. The detection medium of the present invention includes, for example, a swab, a membrane filter, a tape with an adsorbent material, a stamp, a strip base, a roller with an adsorbent material, a roller with an adsorbent material, a water-absorbent swab, a filter, a spoid, etc. No. Of these, a detection medium comprising a detection portion and a shaft is preferable, and a shape having a water-absorbing detection portion at the tip of the shaft is more preferable. The sample is preferably made of an elastic member (eg, plastic). Since the surface is pressed when wiping the surface, the efficiency of transferring proteins on the surface of the sample is high, which is preferable.

【0015】前記試料表面の蛋白質を前記検出媒体に移
しとる方法としては例えば、ぬぐう、圧着させる、吸い
とる方法等がある。ぬぐう方法としては例えば綿棒等ス
ワブを使う、メンブレンフィルター等を使う方法があ
る。圧着させる方法としては例えば吸着材料をつけたテ
ープ、スタンプ、ストリップベース等で圧着させる、吸
着材料をつけたローラで圧着させる方法がある。吸いと
る方法としては例えば、吸水性の綿棒、フィルターで吸
いとる、スポイド等で直接で吸いとる方法がある。
As a method for transferring the protein on the sample surface to the detection medium, for example, a wiping method, a pressing method, a sucking method, and the like are available. Examples of the wiping method include a method using a swab such as a cotton swab and a method using a membrane filter or the like. As a method of pressing, for example, there is a method of pressing with a tape, a stamp, a strip base, or the like to which an adsorbing material is applied, or a method of pressing with a roller to which an adsorbing material is applied. As a method of sucking, for example, there is a method of sucking with a water-absorbing swab or a filter, or a method of sucking directly with a spoid.

【0016】吸いとる方法の場合、例えば試料表面に界
面活性剤水溶液を垂らしてしばらく時間をおいた後、該
表面の蛋白質を浮かせて吸いとることが本発明の効果を
奏する。
In the case of the sucking method, the effect of the present invention is achieved, for example, by suspending an aqueous solution of the surfactant on the surface of the sample, leaving it for a while, and then floating the protein on the surface to suck the sample.

【0017】また前記本発明の検出媒体は吸水部分を有
してることが好ましく、また該吸水部分が予め水性媒体
で湿潤されていることが好ましい。
The detection medium of the present invention preferably has a water-absorbing portion, and the water-absorbing portion is preferably wetted with an aqueous medium in advance.

【0018】上記水性媒体としては、例えば生理食塩
水、精製水(例えば蒸留水、脱イオン水等)、界面活性
剤水溶液、水溶性有機溶媒(例えば、アセトン、エタノ
ール、プロピルアルコール、メチルエチルケトン等)水
溶液(1〜95%溶液)が挙げられる。
Examples of the aqueous medium include physiological saline, purified water (eg, distilled water, deionized water, etc.), surfactant aqueous solution, and water-soluble organic solvent (eg, acetone, ethanol, propyl alcohol, methyl ethyl ketone, etc.) aqueous solution. (1 to 95% solution).

【0019】前記界面活性剤水溶液中の界面活性剤とし
ては例えば以下のものが具体的に挙げられる。
Specific examples of the surfactant in the surfactant aqueous solution include the following.

【0020】非イオン系活性剤 1.ソルビタン脂肪酸エステル 2.グリセリン脂肪酸エステル 3.デカグリセリン脂肪酸エステル 4.ポリグリセリン脂肪酸エステル 5.プロピレングリコール・ペンタエリスリトール脂肪
酸エステル 6.ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル 7.ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル 8.ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル 9.ポリエチレングリコール脂肪酸エステル 10.ポリオキシエチレンアルキルエーテル 11.ポリオキシエチレンフィトステロール・フィトスタ
ノール 12.ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキル
エーテル 13.ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル 14.ポリオキシエチレンヒマシ油・硬化ヒマシ油 15.ポリオキシエチレンラノリン・ラノリンアルコール
・ミツロウ誘導体 16.ポリオキシエチレンアルキルアミン。脂肪酸アミド 17.ポリオキシエチレンアルキルフェニルホルムアルデ
ヒド縮合物 18.単一鎖長ポリオキシエチレンアルキルエーテル 上記のアルキルとしては直鎖、分岐の炭素数1〜18を表
す。
Nonionic activator 1. Sorbitan fatty acid ester 2. Glycerin fatty acid ester 3. Decaglycerin fatty acid ester 4. Polyglycerin fatty acid ester 5. Propylene glycol / pentaerythritol fatty acid ester 6. Polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester 7. Polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester 8. Polyoxyethylene glycerin fatty acid ester Polyethylene glycol fatty acid ester 10. Polyoxyethylene alkyl ether 11. Polyoxyethylene phytosterol phytostanol 12. Polyoxyethylene polyoxypropylene alkyl ether 13. Polyoxyethylene alkyl phenyl ether 14. Polyoxyethylene castor oil and hydrogenated castor oil 15. Polyoxyethylene lanolin, lanolin alcohol and beeswax derivatives 16. Polyoxyethylene alkylamine. Fatty acid amide 17. 17. Polyoxyethylene alkylphenyl formaldehyde condensate Single chain length polyoxyethylene alkyl ether The above alkyl represents a linear or branched C1-C18.

【0021】アニオン界面活性剤 1.アルキル硫酸塩 2.ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩 3.N-アシルアミノ酸、その塩 4.N-アシルメチルタウリン塩 5.ポリオキシエチレンアルキルエーテル酢酸塩 6.アルキルスルホカルボン酸塩、α-オレフィンスル
ホン酸塩 7.アルキルリン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエ
ーテルリン酸塩 上記のアルキルとしては直鎖、分岐の炭素数1〜8を表
す。
Anionic surfactant 1. Alkyl sulfates 2. 2. Polyoxyethylene alkyl ether sulfate 3. N-acyl amino acids and salts thereof 4. N-acylmethyltaurine salt 5. polyoxyethylene alkyl ether acetate 6. alkyl sulfocarboxylate, α-olefin sulfonate Alkyl phosphates, polyoxyethylene alkyl ether phosphates The above alkyls represent straight-chain, branched C1-C8.

【0022】カチオン界面活性剤 1.アルキルアンモニウム塩 2.アルキルベンジルアンモニウム塩 上記のアルキルとしては直鎖、分岐の炭素数1〜8を表
す。
Cationic surfactant 1. 1. alkyl ammonium salt Alkylbenzylammonium salt The above alkyl represents a straight-chain or branched carbon number of 1 to 8.

【0023】両性界面活性剤 1.酢酸ベタイン、イミダゾリニウムベタイン 2.レシチン また上記界面活性剤の市販品としては例えば以下のもの
が挙げられる。
Amphoteric surfactant 1. Betaine acetate, imidazolinium betaine 2. Lecithin Commercially available surfactants include, for example, the following.

【0024】非イオン界面活性剤:Triton X-100(和光
純薬工業(株)、Tween-20(和光純薬工業(株)、Nonidet
P−40(ベーリンガー・マンハイム山之内(株)) アニオン界面活性剤:Triton X-770(シグマ) カチオン界面活性剤:塩化ベンザルコニウム 両性界面活性剤:AM-301(日光ケミカルズ(株)) また前記蛋白質反応発色試薬は当業界公知のものが使用
でき、これらの試薬を適宜調合し、蛋白質反応発色試薬
溶液として本発明の蛋白質の検出に使用できる。
Nonionic surfactant: Triton X-100 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), Tween-20 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Nonidet)
P-40 (Boehringer Mannheim Yamanouchi Co., Ltd.) Anionic surfactant: Triton X-770 (Sigma) Cationic surfactant: Benzalkonium chloride amphoteric surfactant: AM-301 (Nikko Chemicals Co., Ltd.) As the protein reaction coloring reagent, those known in the art can be used, and these reagents can be appropriately prepared and used as a protein reaction coloring reagent solution for detecting the protein of the present invention.

【0025】蛋白質反応発色試薬を調製する際、検出蛋
白質量の感度を高める、発色反応時間の短縮等の目的で
ほう酸ナトリウムを0.1%〜5%添加することもある。
In preparing the protein reaction coloring reagent, sodium borate may be added in an amount of 0.1% to 5% for the purpose of increasing the sensitivity of the amount of the detected protein and shortening the coloring reaction time.

【0026】本発明の蛋白質検出用キットは、例えば、
検出媒体、蛋白質反応発色用試薬、蛋白質反応発色試薬
調製容器、蛋白質を移しとった検出媒体と蛋白質反応発
色試薬溶液と反応させる容器(例えばキャップがついて
いるガラスまたはプラスチックチューブ)、蛋白質反応
発色試薬滴定用プレート、色見本、試薬の表面の蛋白質
を検出媒体に移させる為に、こする面積が一定になるよ
うな枠体が一式となっているものをいい、具体的には実
施例で詳述する。
The kit for detecting a protein of the present invention includes, for example,
Detection medium, protein reaction coloring reagent, protein reaction coloring reagent preparation container, container in which the protein is transferred and reacted with the protein reaction coloring reagent solution (eg, a glass or plastic tube with a cap), protein reaction coloring reagent titration For transfer of proteins on the surface of plates, color samples and reagents to the detection medium, refers to a set of frames so that the area to be rubbed is constant.Specifically, it is described in detail in Examples. I do.

【0027】[0027]

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明す
るが、本発明の態様はこれに限定されない。
EXAMPLES The present invention will be described below in detail with reference to examples, but embodiments of the present invention are not limited thereto.

【0028】実施例 1.試薬調製 蛋白質反応発色試薬Rの調製 下記組成の試薬A,Bを調製し、試薬Aと試薬Bを100
対2の割合で混合したものを蛋白質反応発色試薬Rとし
て用いる。発色液は波長562nmにおいて、その吸光度を
測定する。
Embodiment 1 Preparation of Reagents Preparation of Protein Reaction Coloring Reagent R Reagents A and B having the following composition were prepared, and reagents A and B were
The mixture obtained at a ratio of 2 is used as a protein reaction coloring reagent R. The absorbance of the coloring solution is measured at a wavelength of 562 nm.

【0029】試薬Aの調製 次の組成の脱イオン水溶液を試薬Aとして用いる。すな
わち、1% BCA-Na2(2,2′ビシンコニン酸2ナトリウ
ム)、2%Na2CO3・H2O、0.16%酒硫酸2ナトリウム、
0.4% NaOH、0.95% NaHCO3の脱イオン水溶液。また、p
H調整は5% NaOH水溶液またはNaHCO3を添加溶解する
ことでpH11.25に合わせる。
Preparation of Reagent A A deionized aqueous solution having the following composition is used as reagent A. That is, 1% BCA-Na2 (2,2 'bicinchoninic acid disodium), 2% Na2CO3.H2O, 0.16% disodium sulfate,
0.4% NaOH, 0.95% NaHCO3 in deionized water. Also, p
The H is adjusted to pH 11.25 by adding and dissolving a 5% NaOH aqueous solution or NaHCO3.

【0030】試薬Bの調製 4%CuSO4・5H2Oの脱イオン水溶液を試薬Bとして用い
る。
Preparation of Reagent B A deionized aqueous solution of 4% CuSO4.5H2O is used as reagent B.

【0031】尚、上記試薬A,試薬Bを下記に詳述する
各キットに使用した。
The reagents A and B were used in each kit described in detail below.

【0032】2.キットの形態と測定手順 以下に蛋白質検出のキットの形態および測定手順を示
す。
2. Kit form and measurement procedure The form and measurement procedure of the kit for protein detection are shown below.

【0033】キットの操作時において、いずれも蛋白質
サンプリング時には指、手などが試薬、サンプリングの
媒体に、直接触れないように十分注意する。
During the operation of the kit, care should be taken so that fingers and hands do not directly touch the reagents and the sampling medium during protein sampling.

【0034】2−1.標準型キット 本発明の一例を示す蛋白質検出用キット構成(図1)
は、次の構成である。すなわち、図1(a)中の5の試
薬B(点眼ビン形状の容器に充填)、6の生理食塩水
(点眼ビン形状の容器に充填)、サンプリングスワブ1
(形状:綿棒状のもの、柄はプラスティック製2mm
φ)、キャップ2がついた3のガラスチューブ10φ×70
mm(4の試薬Aを1ml充填してある)から構成されてい
る。
2-1. Standard type kit Construction of protein detection kit showing one example of the present invention (FIG. 1)
Has the following configuration. That is, in FIG. 1 (a), 5 reagent B (filled in an eye drop bottle-shaped container), 6 saline (filled in an eye drop bottle-shaped container), and a sampling swab 1
(Shape: Swab-shaped, plastic handle 2 mm
φ), 3 glass tubes with cap 2 10φ × 70
mm (1 ml filled with 4 reagents A).

【0035】その他に、恒温槽(ブロックヒーターな
ど、温度が60℃に安定設定できるもの)、分光光度計
(波長562nm吸光度が測定可能のもの)、カラーメータ
ー(図1(b))、標準カラースケール(図1
(c))、試験管立てを用意する。
In addition, a thermostat (a block heater or the like whose temperature can be stably set to 60 ° C.), a spectrophotometer (a device capable of measuring the absorbance at a wavelength of 562 nm), a color meter (FIG. 1B), a standard color Scale (Figure 1
(C)) Prepare a test tube stand.

【0036】本キットの場合カラーメーター(図1
(b))、標準カラースケール(図1(c))がセット
されている。図1(b)、図1(c)において1aは標
準カラースケール、1bはライト、1cは比色窓、1dは
標準カラースケールホルダー、1eは試験管ホルダー、
1fは蛋白質量表示、1gは比色の度合を示すものであ
る。
In the case of this kit, a color meter (FIG. 1)
(B)) and a standard color scale (FIG. 1 (c)) are set. 1 (b) and 1 (c), 1a is a standard color scale, 1b is a light, 1c is a colorimetric window, 1d is a standard color scale holder, 1e is a test tube holder,
1f indicates the amount of protein, and 1g indicates the degree of colorimetry.

【0037】キット操作法 ガラスチューブ3のキャップ2を開け、5の試薬Bを2
滴添加し、軽く振とうして混ぜる。サンプリングスワブ
1に生理食塩水6を2〜3滴(100μl程度)を含ませ、
試料のおよそ7cm平方の面積をくまなく拭う。その際、
目安として、拭う強さはサンプリングスワブ1の柄がし
なう程度、拭き取り動作が20往復で目的面積をくまなく
拭える程度で、サンプリングスワブ1はおよそ40往復さ
せる。先のガラスチューブ3に、そのサンプリングスワ
ブ1をそのまま浸す。ブランクとして未処理のサンプリ
ングスワブ1を用意し、同様にガラスチューブ3に浸
す。次いでそれぞれガラスチューブを恒温槽で60℃、5
分間の条件で加温する。ガラスチューブを室温で冷ま
し、カラーメーターにて発色度合をブランクと比較す
る。このとき、カラーメーターには標準カラースケール
を予め用意しておき、これと比較することによりサンプ
リングスワブ1に吸着した蛋白質の半定量が可能であ
る。
Kit operation method Open the cap 2 of the glass tube 3 and add 5 reagent B to 2
Add drops and shake gently to mix. Sampling swab 1 contains 2-3 drops of physiological saline 6 (about 100 μl),
Wipe all around a 7 cm square area of the sample. that time,
As a guide, the wiping strength is such that the handle of the sampling swab 1 does not work, and the wiping operation is such that the wiping operation is performed 20 times and the entire target area is wiped, and the sampling swab 1 makes about 40 reciprocations. The sampling swab 1 is immersed in the glass tube 3 as it is. An untreated sampling swab 1 is prepared as a blank, and is similarly immersed in the glass tube 3. Next, each glass tube was placed in a thermostat at 60 ° C and 5 ° C.
Warm for minutes. The glass tube is cooled at room temperature, and the degree of color development is compared with the blank using a color meter. At this time, a standard color scale is prepared in the color meter in advance, and by comparing with the standard color scale, the protein adsorbed on the sampling swab 1 can be semi-quantified.

【0038】また、分光光度計を用いて、562nm波長の
吸光度を測定する事により、予め求めておいた蛋白質検
量線から(図7に示す)サンプリングスワブ1に吸着し
た蛋白質量を正確に測定することができる。
Further, by measuring the absorbance at a wavelength of 562 nm using a spectrophotometer, the amount of protein adsorbed on the sampling swab 1 (shown in FIG. 7) is accurately measured from a previously determined protein calibration curve. be able to.

【0039】2−2.標準改良型キット 本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット構成(図2)
と準備 本キットは次の構成である。すなわち、10φ×75mmガラ
スチューブ9に生理食塩水10が500μlが入っており、キ
ャップ7の下段には8,12の試薬A,Bを封入した可撓
性ケース11が装着してある。キャップ7の底には、サン
プリングスワブ13が固定されている。キャップ7の両側
を握ることにより可撓性ケース11が潰れ、中の上記試薬
A,Bがガラスチューブ9内へ落ち、サンプリングスワ
ブ13と接触する仕組みとなっている。14は検出部分であ
る。
2-2. Standard improved kit Construction of kit for protein detection showing another example of the present invention (FIG. 2)
And Preparation This kit has the following configuration. That is, 500 μl of physiological saline 10 is contained in a 10φ × 75 mm glass tube 9, and a flexible case 11 in which 8,12 reagents A and B are sealed is mounted on the lower part of the cap 7. A sampling swab 13 is fixed to the bottom of the cap 7. By gripping both sides of the cap 7, the flexible case 11 is crushed, and the reagents A and B therein fall into the glass tube 9 and come into contact with the sampling swab 13. 14 is a detection part.

【0040】その他に、恒温槽(ブロックヒーターな
ど、温度が60℃に安定設定できるもの)、分光光度計:
波長562nm吸光度が測定可能のもの、カラーメーター、
標準カラースケール(必要に応じて)、試験管立てを用
意する。
In addition, a thermostat (a block heater or the like whose temperature can be stably set to 60 ° C.), a spectrophotometer:
562nm wavelength absorbance can be measured, color meter,
Prepare a standard color scale (if necessary) and test tube stand.

【0041】キット操作法 図2においてキャップ7を外し、サンプリングスワブ13
の先端に対し、2−1.キット操作法に示した要領で試
料からサンプルする。サンプリングスワブ13をガラスチ
ューブへ戻し、キャップ7を閉める。8、12の試薬A,
Bの入った可撓性ケース11を潰して、該試薬A,Bをガ
ラスチューブ9内へ落とす。該ガラスチューブを軽く振
って上記試薬A,Bを撹拌した後、該ガラスチューブを
恒温槽で60℃、5分間の条件で加温する。該ガラスチュ
ーブを室温で冷まし、カラーメーターにて発色程度をブ
ランクと比較する。このとき、カラーメーターには標準
カラースケールを予め用意しておき、これと比較するこ
とによりサンプリングスワブに吸着した蛋白質の半定量
が可能である。
Kit operation method In FIG. 2, the cap 7 is removed, and the sampling swab 13 is removed.
2-1. Sample from the sample as described in the kit procedure. The sampling swab 13 is returned to the glass tube, and the cap 7 is closed. 8, 12 reagents A,
The flexible case 11 containing B is crushed, and the reagents A and B are dropped into the glass tube 9. After the glass tubes are gently shaken to stir the reagents A and B, the glass tubes are heated in a thermostat at 60 ° C. for 5 minutes. The glass tube is cooled at room temperature, and the degree of color development is compared with a blank using a color meter. At this time, a standard color scale is prepared in advance in the color meter, and by comparing with this, it is possible to semi-quantify the protein adsorbed on the sampling swab.

【0042】また、分光光度計を用いて、562nm波長の
吸光度を測定する事により、予め求めておいた蛋白質検
量線から、サンプリングスワブ13に吸着した蛋白量を正
確に測定することができる。14は検出部分である。
Further, by measuring the absorbance at a wavelength of 562 nm using a spectrophotometer, the amount of protein adsorbed on the sampling swab 13 can be accurately measured from a previously determined protein calibration curve. 14 is a detection part.

【0043】2−3.簡易型キット 本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット構成(図3)
と準備 本キットは次の構成である。すなわち、15の試薬A、5
の試薬B(点眼ビン形状の容器に充填)、試薬R充填容
器17(点眼ビン形状の容器)、生理食塩水6(点眼ビン
形状の容器に充填)、サンプリングスワブ1(形状は2
−1標準型キット内備品と同様)、ガラスチューブ:10
φ×70mmである。
2-3. Simplified kit Configuration of a kit for protein detection showing another example of the present invention (FIG. 3)
And Preparation This kit has the following configuration. That is, 15 reagents A, 5
Reagent B (filled in an eye drop bottle-shaped container), reagent R filled container 17 (filled in an eye drop bottle-shaped container), physiological saline 6 (filled in an eye drop bottle-shaped container), sampling swab 1 (shape is 2
-1 same as standard kit), glass tube: 10
It is φ70mm.

【0044】その他に、恒温槽(ブロックヒーターな
ど、温度が60℃に安定設定できるもの)、カラーメータ
ー、標準カラースケール(必要に応じて)、試験管立て
を用意する。
In addition, a thermostat (such as a block heater capable of stably setting the temperature to 60 ° C.), a color meter, a standard color scale (if necessary), and a test tube stand are prepared.

【0045】キット操作法 試薬R充填容器17に、15の試薬Aを1ml、5の試薬Bを
2〜3滴落とし、軽く混ぜる。こうして作った試薬Rは
常温で10日間は安定である。サンプリングスワブ1に生
理食塩水6を2〜3滴落とし湿らせた後、2−1キット
操作法の要領で試料からサンプリングスワブ1にサンプ
ルする。次いで試薬R充填容器17から試薬R2〜3滴を
サンプリングスワブ1の先端に落とす。直ちにサンプリ
ングスワブ1の先端で発色反応が開始するので、先端が
汚れないように基盤等に立てかけ、室温あるいは、必要
に応じてガラスチューブに入れて恒温槽で60℃、1〜30
分間の条件で加温する。サンプリングスワブ1に吸着し
た蛋白質量に応じて、サンプリングスワブ1の先端がご
く薄い緑から赤紫へ着色する。必要があれば、標準カラ
ースケールで発色の度合を比較することにより、半定量
が可能である。
Kit operation method 1 ml of 15 reagents A and 2 to 3 drops of 5 reagents B are dropped into the container 17 filled with the reagent R and mixed gently. The reagent R thus prepared is stable at room temperature for 10 days. After dropping 2 to 3 drops of physiological saline 6 on the sampling swab 1 and moistening the sample, the sample is sampled on the sampling swab 1 according to the procedure of the 2-1 kit operation. Next, two to three drops of the reagent R are dropped onto the tip of the sampling swab 1 from the reagent R container 17. The coloring reaction starts immediately at the tip of the sampling swab 1. Therefore, place the tip of the sampling swab 1 on a substrate or the like so that the tip is not stained, and place it in a glass tube at room temperature or, if necessary, at 60 ° C and 1 to 30 ° C.
Warm for minutes. The tip of the sampling swab 1 is colored from very pale green to reddish purple according to the amount of protein adsorbed on the sampling swab 1. If necessary, semi-quantitative analysis is possible by comparing the degree of color development on a standard color scale.

【0046】2−4.プレート型キット 本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット構成(図4)
と準備 本キットは次の構成である。すなわち、15の試薬A、5
の試薬B(点眼ビン形状の容器に充填)、生理食塩水6
(点眼ビン形状の容器に充填)、サンプリングスワブ20
(形状は綿球状)、発色反応トレイ19、ピンセット18で
ある。
2-4. Plate type kit A kit configuration for protein detection showing another example of the present invention (FIG. 4)
And Preparation This kit has the following configuration. That is, 15 reagents A, 5
Reagent B (filled in an eye drop bottle-shaped container), physiological saline 6
(Filled in an eye drop bottle shaped container), sampling swab 20
(The shape is a cotton ball), a color reaction tray 19, and tweezers 18.

【0047】その他に、恒温槽(ブロックヒーターな
ど、温度が60℃に安定設定できるもの)、カラーメータ
ー、標準カラースケール(必要に応じて)を用意する。
In addition, a thermostat (a heater such as a block heater whose temperature can be stably set to 60 ° C.), a color meter, and a standard color scale (if necessary) are prepared.

【0048】キット操作法 発色反応トレイ19の窪みに15の試薬Aを1ml入れ、次い
で5の試薬Bを2〜3滴添加する。発色反応トレイ19を
軽く振とうして、該試薬A,Bを混ぜる。サンプリング
スワブ20(綿球)をピンセット18で摘み、該サンプリン
グスワブに生理食塩水6を2〜3滴含ませる。2−1キ
ット操作法にある要領で試料からサンプリングスワブに
サンプルする。サンプリングスワブ20(綿球)を上記発
色反応トレイ19の窪みに落とす。室温で、必要であれば
恒温槽で60℃、1〜30分間の条件でトレイを加温する。
室温で冷まし、カラーメーターにて発色の度合をブラン
クと比較する。このとき、カラーメーターには標準カラ
ースケールを予め用意しておき、これと比較することに
よりサンプリングスワブに吸着した蛋白質の半定量が可
能である。
Kit operation method 1 ml of 15 reagent A is put into the depression of the color reaction tray 19, and then 2 to 3 drops of 5 reagent B are added. The reagents A and B are mixed by gently shaking the coloring reaction tray 19. The sampling swab 20 (cotton ball) is picked up with tweezers 18, and the sampling swab is made to contain 2-3 drops of physiological saline 6. 2-1 Sample from the sample to the sampling swab as described in the kit operation method. The sampling swab 20 (cotton ball) is dropped into the depression of the color reaction tray 19. The tray is heated at room temperature, if necessary, in a thermostat at 60 ° C. for 1 to 30 minutes.
Cool at room temperature and compare the degree of color development with the blank using a color meter. At this time, a standard color scale is prepared in advance in the color meter, and by comparing with this, it is possible to semi-quantify the protein adsorbed on the sampling swab.

【0049】2−5.ストリップ型キット 本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット構成(図5)
と準備 本キットは次の構成である。すなわち図5(a)、
(b)において、15の試薬A、5の試薬B(それぞれ点
眼ビン形状の容器に充填)、試薬R充填容器17(点眼ビ
ン形状の容器)、生理食塩水6(点眼ビン形状の容器に
充填)、サンプリングフィルターストリップ(形状はベ
ース付き膜状フィルター)、発色反応プレートから構成
されている。
2-5. Strip-type kit Construction of a kit for protein detection showing another example of the present invention (FIG. 5)
And Preparation This kit has the following configuration. That is, FIG.
In (b), 15 reagents A, 5 reagents B (each filled in an eye drop bottle-shaped container), a reagent R filled container 17 (an eye drop bottle-shaped container), and physiological saline 6 (filled in an eye drop bottle-shaped container) ), A sampling filter strip (the shape is a membrane filter with a base), and a color reaction plate.

【0050】その他に、恒温槽(ブロックヒーターな
ど、温度が60℃に安定設定できるもの)、カラーメータ
ー、標準カラースケール(必要に応じて)を用意する。
In addition, a thermostat (a block heater or the like whose temperature can be stably set to 60 ° C.), a color meter, and a standard color scale (as needed) are prepared.

【0051】キット操作法 試薬R充填容器17(点眼ビン形状の容器)に、15の試薬
A(点眼ビン形状の容器に充填)を1ml、5の試薬B
(点眼ビン形状の容器に充填)を2〜3滴落とし、軽く
混ぜる。こうして作った試薬Rは常温で10日間は安定で
ある。次いで、ストリップをチャック付きケース24から
取り出し、サンプリングフィルター21に生理食塩水6
(点眼ビン形状の容器に充填)を2〜3滴落とし湿らせ
る。ストリップベースホルダー23を持ち、サンプリング
フィルター21の面を試料にあてて、擦り付ける。要領は
2−1.キット操作法に示したサンプリング方法に従
う。発色反応プレートに、サンプルしたストリップベー
ス22を乗せ、試薬R充填容器17から試薬Rを2〜3滴落
とす。その後、室温で、または必要であれば恒温槽で60
℃、1〜30分間の条件でトレイを加温する。標準カラー
スケールを予め用意しておき、これと発色の度合を比較
することによりサンプリングフィルター21に吸着した蛋
白質の半定量が可能である。
Kit operation method 1 ml of 15 reagents A (filled in the container of eye drop bottle) is filled with 1 ml of 15 reagents A and 5 reagent B in the container 17 filled with reagent R (container of eye drop bottle shape).
(Fill into a container in the form of eye drops), drop 2-3 drops and mix gently. The reagent R thus prepared is stable at room temperature for 10 days. Next, the strip is taken out of the case 24 with the zipper, and the saline 6 is added to the sampling filter 21.
(Fill into a container in the shape of an eye drop bottle) and moisten it by dropping 2-3 drops. Hold the strip base holder 23, and rub the surface of the sampling filter 21 against the sample. The procedure is 2-1. Follow the sampling method shown in the kit operation method. The sample strip base 22 is placed on the color reaction plate, and two to three drops of the reagent R are dropped from the reagent R-filled container 17. Then at room temperature or, if necessary, in a thermostat for 60
Heat the tray at 1 ° C. for 1 to 30 minutes. By preparing a standard color scale in advance and comparing the color development degree with the standard color scale, semi-quantitative determination of the protein adsorbed on the sampling filter 21 is possible.

【0052】2−6.スタンプ型キット 本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット構成(図6)
と準備 本キットは 2−5.備品のサンプリングフィルター21
をスタンプホルダーに装着したもので、その他は2−5
と同様である。
2-6. Stamp type kit Construction of protein detection kit showing another example of the present invention (FIG. 6)
And preparation This kit is 2-5. Equipment sampling filters 21
Is attached to the stamp holder, others are 2-5
Is the same as

【0053】キット操作法 図6(a)、(b)において、試薬R充填容器17(点眼
ビン形状の容器)に、15の試薬A(点眼ビン形状の容器
に充填)を1ml、5の試薬B(点眼ビン形状の容器に充
填)を2〜3滴落とし、軽く混ぜる。こうして作った試
薬Rは常温で10日間は安定である。次いでスタンプホル
ダー25を取り出し、サンプリングフィルター26に生理食
塩水6(点眼ビン形状の容器に充填)を2〜3滴落とし
湿らせる。スタンプホルダー25を持ち、サンプリングフ
ィルター26の面を試料にあてて、擦り付ける。要領は2
−1.キット操作法に示したサンプリング方法に従う。
フィルター面に、試薬Rを2〜3滴落とす。その後、室
温で、または必要であれば恒温槽で60℃、1〜30分間の
条件でホルダーを加温する。標準カラースケールを予め
用意しておき、これと発色の度合を比較することにより
フィルターに吸着した蛋白質の半定量も可能である。
Kit Operation Method In FIGS. 6 (a) and 6 (b), 1 ml of 15 reagents A (filled in an eye drop bottle-shaped container) and 5 B. Drop 2-3 drops of B (filled in a container in the form of eye drops) and mix gently. The reagent R thus prepared is stable at room temperature for 10 days. Next, the stamp holder 25 is taken out, and two or three drops of physiological saline 6 (filled in a container in the form of an eye drop) are dropped on the sampling filter 26 and moistened. Hold the stamp holder 25, and rub the surface of the sampling filter 26 against the sample. The point is 2
-1. Follow the sampling method shown in the kit operation method.
Drop 2-3 drops of reagent R on the filter surface. Thereafter, the holder is heated at room temperature or, if necessary, in a thermostat at 60 ° C. for 1 to 30 minutes. By preparing a standard color scale in advance and comparing the color development degree with the standard color scale, semi-quantitative determination of the protein adsorbed on the filter is also possible.

【0054】3.発色形態と試料からのサンプリング方
法 発色形態と試料からのサンプリング方法について比較し
た。検討には2−1.標準型、2−3.簡易型の測定キ
ットを用いた。
3. Coloring Form and Sampling Method from Sample We compared the coloring form and sampling method from sample. For examination, 2-1. Standard type, 2-3. A simple measurement kit was used.

【0055】発色形態として、試薬R溶液中で発色させ
る(2−1.標準型キット)、サンプリングスワブの先
端で発色させる(2−3.簡易型キット)の2条件、サ
ンプリング方法に関しては、方法A:媒体を湿らせる
(サンプリングスワブに生理食塩水などを適量含ませ
る)、方法B:媒体を湿らせない(乾いたサンプリング
スワブを使う)の2条件で比較検討した。これらの条件
の組み合わせにより、発色形態においては吸光度で、に
おいては標準カラースケールを用いて発色程度の比較を
した。
As for the form of color development, two conditions of color development in the reagent R solution (2-1. Standard type kit) and color development at the tip of the sampling swab (2-3. Simple type kit), and the sampling method, are as follows. A: Comparative study was conducted under two conditions: A: wetting the medium (appropriate amount of physiological saline is included in the sampling swab), and B: not wetting the medium (using a dry sampling swab). By the combination of these conditions, the degree of color development was compared using a standard color scale in terms of absorbance in the form of color development.

【0056】先ず、シャーレに蛋白質としてBSA(ウ
シ血清アルブミン)水溶液(100mg/ml)を1ml入れて
均一に延ばし、乾燥機内で乾燥させた。対照(ブラン
ク)としてBSAを含まない水溶液に対して同様な処理
を行った。これらを試料として供した。
First, 1 ml of a BSA (bovine serum albumin) aqueous solution (100 mg / ml) as a protein was placed in a petri dish, uniformly spread, and dried in a drier. The same treatment was performed on an aqueous solution containing no BSA as a control (blank). These were provided as samples.

【0057】サンプリングは、方法Aでは、サンプリン
グスワブに生理食塩水100μlを含ませ、先に用意したシ
ャーレからキット操作法に従い、サンプリングスワブに
蛋白質を拭った。方法Bでは、サンプリングスワブは乾
いた状態で、以下方法Aと同様な処理を行った。
In the sampling method, in the method A, 100 μl of physiological saline was contained in the sampling swab, and the protein was wiped from the prepared petri dish according to the kit operation method. In the method B, the same processing as the method A was performed with the sampling swab dried.

【0058】サンプリングしたサンプリングスワブの蛋
白質検出(発色)について、次の手順で検出を行った。
発色処理1は、方法Aでサンプリングしたサンプリング
スワブを、標準型キット操作法による手順で発色させ、
発色液の吸光度(λ:562nm)を測定した。発色処理2
は、方法Bでサンプリングしたサンプリングスワブを、
簡易型キット操作法にある手順で発色させ、標準カラー
スケールと比較し、発色程度を判定した。
The protein detection (color development) of the sampled swab was detected by the following procedure.
In the coloring process 1, the sampling swab sampled by the method A is colored by a procedure according to a standard kit operation method.
The absorbance (λ: 562 nm) of the coloring solution was measured. Coloring process 2
Is the sampling swab sampled by method B,
Color was developed according to the procedure in the simplified kit operation method, and compared with a standard color scale to determine the degree of color development.

【0059】測定結果を以下に示す。The measurement results are shown below.

【0060】 発色形態とサンプリング方法の検討 サンプリング方法 ブランク サンプル 発色処理1 A 0.003 0.375 562nmO.D* B 0.003 0.155 発色処理2 A − +++ カラースケール B − + 以上から明らかなようにどちらの発色形態においても、
試料からのサンプリングは検出媒体を適当に湿らせるこ
とがサンプル(試料)表面の蛋白質の検出力において、
より優れていることが分かる。*:波長562nmにおける
吸光度。
Examination of Color Form and Sampling Method Sampling method Blank sample Color processing 1 A 0.003 0.375 562 nm O.D * B 0.003 0.155 Color processing 2 A − ++++ Color scale B− + ,
Sampling from a sample requires that the detection medium be appropriately moistened to detect proteins on the surface of the sample.
It turns out that it is better. *: Absorbance at a wavelength of 562 nm.

【0061】また、本発明によれば試料の汚染、蛋白質
発色反応試薬が残留することがなく、従来法に比して明
らかに優れていることが分かる。
Further, according to the present invention, there is no contamination of the sample and no protein coloring reaction reagent remains, and it is apparent that the present invention is clearly superior to the conventional method.

【0062】4.水性媒体の検討 水性媒体の種類に関して、サンプリングスワブ等検出媒
体に含ませる水溶性媒体として1精製水、2生理食塩
水、3界面活性剤水溶液、4エチルアルコール水溶液を
用いて検討した。蛋白質のサンプリングは前記3と同様
に行い、蛋白質の検出は同じく前記3の発色処理1の手
順で行った。結果を以下に示す。
4. Investigation of aqueous medium The type of aqueous medium was examined using 1 purified water, 2 physiological saline, 3 surfactant aqueous solution, and 4 ethyl alcohol aqueous solution as the aqueous medium to be contained in the detection medium such as a sampling swab. Sampling of the protein was performed in the same manner as in 3 above, and detection of the protein was performed in the same manner as in the above-described 3 color development processing 1. The results are shown below.

【0063】 各種水性媒体の検討結果(562nmO.D*) 水性媒体 ブランク サンプル 精製水 蒸留水 0.005 0.363 脱イオン水 0.004 0.378 生理食塩水 0.005 0.368 界面活性剤水溶液 0.5% Brij35 0.006 0.415 0.5% Nonidet P-40 0.006 0.425 1.0% Triton X-100 0.007 0.388 1.0% SDS 0.006 0.405 アルコール70%エタノール 0.005 0.386 以上から明らかなように検出媒体に水性媒体を含ませる
ことにより、サンプル(試料)表面から蛋白質を検出媒
体へ効率的に移しとることができることが分かる。中で
も界面活性剤水溶液を含ませることによりその効果が良
好であることが分かる。*:波長562nmにおける吸光
度。
Examination results of various aqueous media (562 nm O.D *) Aqueous media Blank Sample Purified water Distilled water 0.005 0.363 Deionized water 0.004 0.378 Physiological saline 0.005 0.368 Surfactant aqueous solution 0.5% Brij35 0.006 0.415 0.5% Nonidet P-40 0.006 0.425 1.0% Triton X-100 0.007 0.388 1.0% SDS 0.006 0.405 Alcohol 70% ethanol 0.005 0.386 As can be seen from the above, the efficiency of protein transfer from the sample (sample) surface to the detection medium by including an aqueous medium in the detection medium It can be seen that it can be transferred to the target. Above all, it can be seen that the effect is good by including a surfactant aqueous solution. *: Absorbance at a wavelength of 562 nm.

【0064】5.蛋白質検量線 本発明の蛋白質の検出方法および蛋白質検出用キットの
蛋白質の定量性を2−1.標準型キットを用いて示す。
5. Protein calibration curve The protein detection method and the protein detection kit of the present invention are described in 2-1. Shown using a standard kit.

【0065】8cmφシャーレに各標準BSA水溶液
(0、10、20、100、400、800μg/ml)を1mlずつ入
れ、均一に延ばす。次いで、乾燥機内で乾燥させ、それ
を試料とする。
1 ml of each standard BSA aqueous solution (0, 10, 20, 100, 400, 800 μg / ml) is placed in an 8 cmφ petri dish and uniformly spread. Next, it is dried in a drier and used as a sample.

【0066】試薬Rをガラスチューブ(10mmφ×70mm)
へ1mlずつ入れる。蛋白質のサンプリングは、キット内
のサンプリングスワブに0.5%Nonidet P−40水溶液を1
00μl含ませ、2−1のキットの操作法に従い、先に用
意したシャーレより行う。サンプリングスワブを試薬R
の入ったガラスチューブへ浸し、60℃の恒温槽で10分間
加温する。ブランクとして、蛋白質をサンプリングして
いないスワブに対し、同様の処理をする。室温で冷まし
た後、分光光度計で発色液の562nm吸光度を測定する。
測定はひとつのサンプルに対し、二重測定を行い、5サ
ンプルを測定した(N=5)。図7は検量線を示した図
である。
Reagent R in glass tube (10mmφ × 70mm)
1 ml each. For protein sampling, add 0.5% Nonidet P-40 aqueous solution to the sampling swab in the kit.
Including 100 μl, carry out from the previously prepared petri dish according to the operation method of the kit 2-1. Replace sampling swab with reagent R
And heat it in a 60 ° C constant temperature bath for 10 minutes. As a blank, a swab in which no protein is sampled is subjected to the same treatment. After cooling at room temperature, the absorbance of the coloring solution at 562 nm is measured with a spectrophotometer.
For the measurement, double measurement was performed for one sample, and five samples were measured (N = 5). FIG. 7 is a diagram showing a calibration curve.

【0067】測定値を表1に示す。尚、本発明の蛋白質
検出用キットの蛋白質検量線は図7に示す。
Table 1 shows the measured values. FIG. 7 shows a protein calibration curve of the protein detection kit of the present invention.

【0068】[0068]

【表1】 [Table 1]

【0069】表1、図7から明らかなように本発明の蛋
白質の検出方法及び蛋白質検出用キットは蛋白質の定量
性に優れていることが分かる。
As is clear from Table 1 and FIG. 7, it can be seen that the protein detection method and the protein detection kit of the present invention are excellent in protein quantification.

【0070】6.蛋白質測定限界 本発明の蛋白質検出法における蛋白質反応試薬の蛋白質
測定限界を示す。尚、蛋白質検出用キットは本発明の2
−1標準型キットを用いた。
6. Fig. 4 shows the protein measurement limit of the protein reaction reagent in the protein detection method of the present invention. The protein detection kit is the same as the kit of the present invention.
-1 standard type kit was used.

【0071】ガラスチューブ(10mmφ×70mm)に試薬R
を1mlずつ入れた。次に、標準BSA水溶液(蛋白濃
度:0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.8、1.0μg/ml)をそ
れぞれ1ml添加し、軽く振とうした。これを各5本用意
し、60℃の恒温槽で10分間加温した。室温で冷ました
後、分光光度計で562nmの吸光度(OD)を測定した。
The reagent R was placed in a glass tube (10 mmφ × 70 mm).
Was added in 1 ml portions. Next, 1 ml of standard BSA aqueous solution (protein concentration: 0, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.8, 1.0 μg / ml) was added, and the mixture was gently shaken. Five of these were prepared and heated in a 60 ° C. constant temperature bath for 10 minutes. After cooling at room temperature, the absorbance (OD) at 562 nm was measured with a spectrophotometer.

【0072】表2に標準BSA水溶液各濃度におけるO.
D値と標準偏差を示した。
Table 2 shows the O.D. at each concentration of the standard BSA aqueous solution.
D value and standard deviation are shown.

【0073】図8は本発明の蛋白質の検出方法に用いた
蛋白質反応試薬の測定限界を示した図であり、図8には
各測定点におけるO.D値の平均値±2SDの領域を示し
た。
FIG. 8 is a diagram showing the measurement limit of the protein reaction reagent used in the protein detection method of the present invention. FIG. 8 shows the area of the average OD value at each measurement point ± 2 SD.

【0074】また図8中□は平均値(n=10)を示し、
バーチカルバーは平均値±2SDの領域を示し、縦軸は
吸光度(0.D)、横軸は蛋白質量(μg)を示す。
In FIG. 8, □ indicates an average value (n = 10).
The vertical bar indicates the area of the average value ± 2 SD, the vertical axis indicates the absorbance (0.D), and the horizontal axis indicates the protein amount (μg).

【0075】[0075]

【表2】 [Table 2]

【0076】蛋白質測定限界は、標準BSA水溶液0μg/
mlO.Dの平均値+2SDのO.D値と、ある濃度のO.D値の
平均値−2SDのO.D値が重ならない濃度を最低測定限
界と定めた。
The protein measurement limit was 0 μg / standard BSA aqueous solution.
The concentration at which the average value of mlOD.D + the OD value of 2SD and the average value of the OD value at a certain concentration-the OD value of 2SD did not overlap was defined as the lowest measurement limit.

【0077】この定義から測定限界を測定すると、本発
明の蛋白質検出法及び蛋白質検出用キットにおける蛋白
質測定限界は0.4μgである。
When the measurement limit is measured from this definition, the protein measurement limit in the protein detection method and protein detection kit of the present invention is 0.4 μg.

【0078】[0078]

【発明の効果】本発明による蛋白質の検出方法及び蛋白
質検出用キットは、試料の汚染、残留試薬の安全性に優
れ、且つ定量性があり、反応試薬の着色物が試料に残る
ことがなく、蛋白質の検出時間が迅速であり良好な効果
を有する。
Industrial Applicability The method for detecting a protein and the kit for detecting a protein according to the present invention are excellent in the contamination of a sample, the safety of a residual reagent, and are quantitative, so that a colored substance of a reaction reagent does not remain in the sample. The protein detection time is quick and has a good effect.

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

【図1】本発明の一例を示す蛋白質検出用キット(標準
型)構成図である。
FIG. 1 is a block diagram of a protein detection kit (standard type) showing an example of the present invention.

【図2】本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット(改
良型)構成図である。
FIG. 2 is a configuration diagram of a protein detection kit (improved type) showing another example of the present invention.

【図3】本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット(簡
易型)構成図である。
FIG. 3 is a configuration diagram of a protein detection kit (simple type) showing another example of the present invention.

【図4】本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット(綿
球型)構成図である。
FIG. 4 is a block diagram of a protein detection kit (cotton ball type) showing another example of the present invention.

【図5】本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット(ス
トリップ型)構成図である。
FIG. 5 is a configuration diagram of a protein detection kit (strip type) showing another example of the present invention.

【図6】本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット(ス
タンプ型)構成図である。
FIG. 6 is a configuration diagram of a protein detection kit (stamp type) showing another example of the present invention.

【図7】本発明の蛋白質検出用キットの蛋白質検量線を
示した図である。
FIG. 7 is a diagram showing a protein calibration curve of the protein detection kit of the present invention.

【図8】本発明の蛋白質の検出方法に用いた蛋白質反応
試薬の測定限界を示した図である。
FIG. 8 is a diagram showing the measurement limit of a protein reaction reagent used in the protein detection method of the present invention.

【符号の説明】[Explanation of symbols]

1 サンプリングスワブ 2 キャップ 3 ガラスチューブ 4 試薬A 5 試薬B 6 生理食塩水 7 キャップ 8 試薬A 9 ガラスチューブ 10 生理食塩水 11 可撓性ケース 12 試薬B 13 サンプリングスワブ 14 検出部分 15 試薬A 17 試薬R充填容器 18 ピンセット 19 発色反応トレイ 20 サンプリングスワブ(綿球) 21 サンプリングフィルター 22 ストリップベース 23 ベースホルダー 24 チャック付きケース 25 スタンプホルダー サンプリングフィルター DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Sampling swab 2 Cap 3 Glass tube 4 Reagent A 5 Reagent B 6 Physiological saline 7 Cap 8 Reagent A 9 Glass tube 10 Physiological saline 11 Flexible case 12 Reagent B 13 Sampling swab 14 Detection part 15 Reagent A 17 Reagent R Filling container 18 Tweezers 19 Color reaction tray 20 Sampling swab (cotton ball) 21 Sampling filter 22 Strip base 23 Base holder 24 Case with chuck 25 Stamp holder Sampling filter

Claims (3)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】 蛋白質を発色させる試薬が封入された小
容器、蛋白質を移しとる検出部分を有する検出媒体及び
前記試薬と検出媒体とが接触する容器とが組み合わされ
て一つに収納されてなる蛋白質検出用キットであって、
前記試薬と検出媒体との接触が、蛋白質を検出媒体に移
しとった後に、前記試薬の封入された容器を潰すことに
より起こることを特徴とする蛋白質検出用キット。
1. A small container enclosing a reagent for coloring a protein, a detection medium having a detection portion for transferring the protein, and a container in which the reagent comes into contact with the detection medium are combined and housed in one. A kit for detecting a protein,
A kit for detecting a protein, wherein the contact between the reagent and the detection medium is caused by crushing a container in which the reagent is sealed after transferring the protein to the detection medium.
【請求項2】 前記試薬の封入された容器が可撓性部材
からなることを特徴とする請求項1記載の蛋白質検出用
キット。
2. The protein detection kit according to claim 1, wherein the container enclosing the reagent is made of a flexible member.
【請求項3】 前記検出部分が、試料から蛋白質を移し
とる前に予め水性媒体により湿潤していることを特徴と
する請求項1〜2いずれか記載の蛋白質検出用キット。
3. The protein detection kit according to claim 1, wherein the detection portion is wetted with an aqueous medium before transferring the protein from the sample.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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