JP2000510107A - Biological material free of viral and molecular pathogens and method for producing the same - Google Patents

Biological material free of viral and molecular pathogens and method for producing the same

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JP2000510107A JP09538394A JP53839497A JP2000510107A JP 2000510107 A JP2000510107 A JP 2000510107A JP 09538394 A JP09538394 A JP 09538394A JP 53839497 A JP53839497 A JP 53839497A JP 2000510107 A JP2000510107 A JP 2000510107A
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Abstract

(57)【要約】 特定の病原体、特にウイルス性病原体を含有しない生物学的材料、及び生物学的材料を特定の病原体のレセプター又はリガンドと反応する少なくとも一つのリガンド又はレセプターと混合しリガンド／レセプター複合体を形成し、生物学的材料から複合体を形成した病原体を部分的又は完全に分離しうる方法でリガンド／レセプター複合体を分離することにより、生物学的材料中のウイルス性及び分子性病原体を枯渇化する方法、及び該方法の生物学的材料の調製における使用。   (57) [Summary] Mixing the biological material with a specific pathogen, particularly a viral pathogen-free biological material, and at least one ligand or receptor that reacts with the specific pathogen receptor or ligand to form a ligand / receptor complex; Method for depleting viral and molecular pathogens in biological material by separating ligand / receptor complexes in a manner that can partially or completely separate complexed pathogens from biological material And the use of the method in the preparation of biological material.

Description

【発明の詳細な説明】 ウイルス性及び分子性病原体不含の生物学的材料及びその製造方法 技術分野 本発明はある種の病原体、特にウイルス性病原体を含有しない生物学的材料、 並びに生物学的材料中のウイルス性及び分子性病原体を枯渇化する（除去する） 方法に関する。 背景技術 ヒト又は動物組織、又は血液又は血漿などの液体、並びに連続的に増殖する形 質転換した哺乳動物細胞からの抽出による治療用のタンパク質及び製品の製造に はしばしば、ウイルス、ウイルス様粒子又はプリオンなどの病原体による潜在的 な汚染の危険性がひそんでいる。従って、そのような存在しうる病原体が人に伝 染しないように手段を講じる必要がある。 ヒト血液又は血漿は、それぞれ、例えば、AIDS、Ｂ型肝炎、又はＣ型肝炎など の病気を起こすウイルスを含有しているかもしれない。血漿プールから誘導した 血漿タンパクの場合、ウイルスのような感染性作因の伝染の危険性は、血液又は 血漿の献血を選別すること、及び製造方法により非常に低下する。危険性の高い 献血者を献血から除外するなどの適当な手段や、献血された血液又は血漿につい て感染性献血を検出してさらに分配されることを除くこと、及び大多数の感染性 献血を排除することを可能ならしめる分析では、たいていの場合、各々、及びす べてのものを検出することはできない。生物学的材料中の感染性ウイルスを検出 するための現存の分析システムは、常に潜在的な病原体の伝染に関する懸念を完 全に除くとは限らない。その理由は広範な感染性病原体が存在するので、出発物 質を、サンプル中に存在しうるウイルス性又は分子性病原体(molecular pathoge n)のすべてに間して分析することが不可能だからである。さらに、大多数のアッ セイはウイルスではなくウイルスに対して発現された抗体を検出するものであり 、いわゆる「ディアグノスティックウインドウ（diagnostic window）」の期間中汚染を検出できないようになっている。その上、あるウイル ス群については信頼できる又は十分に感受性のある検出法が存在しない．新規に 開発されたアッセイ、特に核酸増幅法、例えばＰＣＲ法、は非常に感受性が高く 特異的で、核酸配列既知の病原体のみに適用可能である。ヒト病原体が知られて いるが感受性の検出法が存在しない場合には、ウイルス含有量が低すぎる、すな わち、ウイルス含量がアッセイ系の感受性限界以下であるために、負の結果しか 得られないという不確実性が依然として残っている。 従って、もはや感染性粒子が最終生成物中に予測されないために、ウイルス枯 渇化のための特異的な除去及び／又は不活化の方法が、製薬及び治療用製品の調 製のために開発された。 多くの不活化法は熱及び／又は化学物質による物理化学的な処理に基づいてい る。方法としては、特に熱処理、低温殺菌法、タンパク溶液のβ−プロピオラク トン及びＵＶ光による処理、溶媒と洗浄剤との併用による処理（いわゆるＳ／Ｄ 法）又はタンパク溶液を光力学的な物質の添加に暴露する方法などが用いられる 。これらの方法で１０6のlog（対数）段階までのウイルスの不活化が達成された 。しかし、不活化法の効率はウイルスの型によって変動する。Ｓ／Ｄ処理した血 液製品はＨＣＶ、ＨＢＶ又はＨＩＶの伝染に関しては比較的安全であると考えら れるが、非−エンベロープ型ウイルス、ＨＡＶ又はパルボウイルスなどはこの方 法では不活化されない（Prowse C．1994、Vox Sang，67:191‐196）。 不活化法の型はまた製品にも影響する可能性があり、そして製品の損失を防ぐ ためにしばしば安定化が必要であった。さらに、幾つかの不活化法では、続いて 、添加した化学物質を除去するための精製工程が必要であった。 EP-0679405に記載されているように、特にクロマトグラフフィー的方法、タン パク溶液をメンブランフィルターでろ過するかウイルスを固相に吸着させた後、 固相を除去することを含む、ウイルスを枯渇化法がある。しかしながら、例えば AerosilTMのような固相による処理により免疫グロブリン含有溶液からＨＩＶを ４対数段階(４ log step)まで除去することができるが、ＩｇＧの損失も４２％ に達し得る（Gaoら、1993、Vox Sang．64:204‐209）。そのような高い損失率で は大量工業規模への適用にはむしろ不適当であろう。 ウイルス粒子のサイズの違いの効果により、限外ろ過によってウイルス枯渇が 起こる。Bechtelら(Biomat.,Art.Cells，Art．Org．16:123-128)は異なるサイズ (EMC:30-50nm，Sindbis virus:50-70nm，VSV:80-100nm)のウイルスについて、全 ての場合で3.3〜3.5対数段階のウイルス枯渇が達成されること、従って、限外ろ 過による枯渇はウイルスのサイズに依存せず選択性が十分でないことを示した。 従来のメンブランフィルターの排除サイズは約0.1μｍから0.2μｍであり、殆ど 全てのウイルスがフィルターを自由に通り抜けることができるという不都合があ る。１５から７５nm又は７０から１６０kdの様々な公称排除サイズを有するナノ フィルターの開発により28nmまでのサイズのウイルスを保持することが可能にな った（DiLeoら、(1991)，Nature 351:420-421，DiLeoら(1992)Bio/Technology 1 0:182-188，Burnouf-Radisevich et al．(1994)Vox Sang．67:132-138，Hamamot o et al.，(1989)Vox．Sang 56:230-236）。 ウイルス枯渇にナノフィルターを使用することで、最終生成物が変化せず、よ りサイズの小さいウイルスを生物学的材料から除去することができる温和な方法 を用いることが可能になる。Hofferら(1995，J．Chromatography B，669:187-19 6)は排除サイズ70kDのViresolveTMメンブランを用いる正接フローろ過(tangenti al flow filtration)に基づく因子ＩＸ−濃縮液の製造のためのウイルス枯渇化 法を記載しており、彼らは包膜（エンベロープのある）ウイルスの場合には減少 係数が3.5対数段階であり、非−包膜ウイルスの場合には７.２対数段階であるこ とを見出した。しかしながら、彼らは、これらのフィルターに高分子量生成物が 保持されることに気づいた。因子ＩＸ又は因子ＸＩのような低分子量の血液因子 は排除サイズ１５から３５ｎｍの間のナノフィルターを自由に通過できる(Burno uf-Radosevichら(1994)，Vox Sang．67:132-138，Feldmanら、（1995）Acta Hae matol．94:25-34)。因子ＶＩＩＩ（３５０ｋＤ）、ｖＷＦ（2,000ｋＤまで）又 は免疫グロブリン（ＩｇＧ，１５０ｋＤ）のような高分子量の生成物はより大き い排除サイズのフィルターのみを通過できる。しかしながら、このフィルターに よっては、ずっと小さい直径のウイルスが保持されずろ液に入る危険性がある。 従って、ウイルス−安全な、特にＨＡＶ又はパルボウイルスなどの小さいウイル スを含まない、治療上使用可能な生成物の製造へのナノろ 過の適用は、それ自身、小さい排除サイズのナノフィルターを自由に通過し得る 小さい分子サイズのタンパクを含有する生成物に限定される。すなわち、１５ｎ ｍという小さい排除サイズのナノフィルターの使用によってのみ、ＨＡＶ及びパ ルボウイルスＢ１９を生物学的生成物から確実に除去することができる。しかし ながら、不都合な点は、このような排除サイズを有するフィルターを用いるナノ ろ過は高分子量のタンパク質を含有する生成物の製造には適用できない。なぜな ら、後者はフィルターを通過できず丁度、ウイルスと同じくフィルターに保持さ れるからである。 ナノろ過におけるその他の潜在的な問題として、様々なウイルスについて記載 されている直径が必ずしも絶対的なものでないことがある。ＨＣＶについて一般 的に示されているサイズは４０−５０ｎｍである(Murphyetal．(1995)，Archive s of Virology 10:424)。しかしながらMuchmoreら((1993)，International Symp osium on Viral Hepatitis and Liver Diseases，Tokyo)は、３５ｎｍナノフィ ルターでろ過したＨＣＶ‐含有溶液によってチンパンジーがＨＣＶに感染したこ とを見出した。このような様々なウイルスにおけるサイズの変化性（変わりやす いこと）は、ウイルス枯渇及びウイルス−不含の生成物の製造にナノフィルター を用いることを制限し、あるいは危険因子をはらんでいる。 従って、動物又はヒト起源の医薬又は治療用製品、又は遺伝子工学的な方法で 細胞培養物から製造される製品によって治療される患者における感染の危険性を 減少するために、タンパク溶液からウイルスを安全に分離するための工業的に適 用可能な方法が必要とされている。 また、生成物の生物学的活性に大きく影響せず維持する緩和な製造方法であり 、その製造方法によりいかなる病原体も伝達されないことが保証されている、病 原体を含有しないウイルス−安全な生物学的生成物が求められている。 発明の開示 このように本願発明の目的は所望により高分子量の医薬に関連したタンパク質 を含有しており、特定のウイルス性及び分子性病原体を含有しない生物学的材料 、及びそのような生物学的材料の製造方法を提供することである。 さらに本発明の目的は、細菌を通さないフィルター(bacterial-proof filter) に類似して、安全にウイルスが除去され標的ウイルスを含有せず、＞１０7の減 少係数(reduction factor)が達成されている生物学的材料を回収することである 。 本発明によって上記の目的は達成され、本発明の特定の病原体を含有しない安 全な生物学的材料が提供される。該生物学的材料は次のようにして得られる。生 物学的材料中に含有される少なくとも１つのリガンド又はレセプターが特定の病 原体のレセプター又はリガンドと反応し、その結果複合体を形成した病原体のリ ガンド／レセプター複合体が形成される。次いで複合体病原体を部分的又は完全 に分離し得る方法で生物学的材料からリガンド／レセプター複合体を除去する。 病原体のレセプター又はリガンドと反応するリガンド又はレセプターは出発原 料中にすでに存在していても良い。しかしながら、生物学的材料を、特定の病原 体のレセプター又はリガンドと反応する少なくとも１つのリガンド又はレセプタ ーと混合することが好ましい。このことにより、例えばリガンド又はレセプター の量、リガンド又はレセプターの選択、又は様々なリガンド又はレセプターの混 合等のパラメーターを最適なものに調整するため、又は所望により複合体の形成 を助けるさらに追加の成分の付加のために、十分に目標を定めた方法を採用する ことが可能になる。同様に、複合体形成が起こる時間も具体的に決めることがで きる。このように、例えば、病原体の分離に先立って幾つかの作業又は精製工程 が実行される場合には、リガンド又はレセプターを分離前の最終工程の直前、特 に生物学的材料を透過性フィルターに貫通させる前に混合してもよい。このよう に、ろ過のすぐ前にリガンド又はレセプターを混合することが好ましい。 生物学的材料に混合されるリガンド又はレセプターは、リガンド又はレセプタ ー、従って病原体の特異的結合部位に結合可能な成分であり、該成分は病原体と 複合体、好ましくは高分子複合体を形成することができる。この場合、病原体の リガンド又はレセプターは、抗原、エピトープ、又は抗原決定基である。本発明 によれば、生物学的材料と混合される、結合し得る反応性のリガンド又はレセプ ターは、特異抗体又は抗体のフラグメントであって病原体のリガンド又はレセプ ターに結合しうるフラグメントであることが好ましい。 好ましくは、本発明の生物学的材料は、病原体のリガンド又はレセプターと反応 するリガンド又はレセプターとして抗体を用い、病原体のリガンド又はレセプタ ーが抗原であり、かくしてリガンド／レセプター複合体として抗体／抗原複合体 が形成される方法で得られる。本発明によれば、次いで複合体を生物学的材料か ら除去する。 本発明の特別な側面では、特定の病原体を含有しない生物学的材料は、溶液を 透過性フィルターに貫通（浸透）させることによりリガンド／レセプター複合体 、好ましくは抗体／抗原複合体を生物学的材料から除去することで得られる。溶 液からの複合体の分離は、沈降、好ましくは密度勾配遠心分離法によっても行う ことができる。 本発明によれば、抗体又は少なくとも１つの感染性物質と結合することができ る抗体の部分を、感染性病原体を含有する可能性が疑われる生物学的材料と混合 する。しかしながら、幾つかの既知の感染性ウイルス（例えば、ＨＡＶ、ＨＢＶ 、ＨＣＶ、ＨＤＶ、ＨＥＶ、ＨＧＶ、ＨＩＶ、ＣＭＶ又はパルボウイルス）、又 は分子性病原体（例えばプリオン）に対する抗体も加えることができる。抗体の 添加は、免疫グロブリン−含有溶液をタンパク−含有溶液に加えることで行うこ とができ、また、免疫グロブリンを過剰に（そして、すなわち中和濃度で）加え て遊離形の潜在的な病原体が生物学的材料中に依然として存在する危険性を除去 することが可能である。しかしながら、本発明の範囲において、抗血清を非−中 和濃度加えることによって生物学的材料から病原体を完全かつ十分に枯渇させる ことができることも分かった。 このように、リガンド又はレセプター、特に抗体を、非−中和濃度、ただし、 存在する病原体が複合体を形成し分離工程によって生物学的材料から完全に除去 されるに十分な濃度、で加えることが好ましい。 ある場合には、たまたま様々なサイズの凝集体が形成されるかもしれず、また フィルターを自由に通過できるか、その沈降濃度が生物学的材料からのそれらの 分離に不充分な小さい凝集物が形成される可能性もある。 本発明の他の側面では、従って、リガンド／レセプター複合体の分離を改善す るために、生物学的材料に、免疫グロブリン含有溶液に加えてさらに凝集剤を加 えることにより複合体の凝集を増加する。この追加の凝集剤は遊離の病原体をさ らに凝集させるか、リガンド／レセプター複合体の形成を増大する。これは、レ クチン、１又はそれ以上の補体成分、コングルチニン、リウマチ因子、非毒性、 水溶性合成ポリマー、特にポリエチレングリコール、又はアルブミン（少なくと も１０％、好ましくは２０％）又は先行技術で既知の他の凝集剤などの凝集剤を 加えることで行うことができる。凝集剤は、好ましくは光学顕微鏡形で観察可能 なサイズの抗原／抗体複合体が形成されるように添加する。 本発明の生物学的物質は特に、確実に、脂質包膜−ウイルス及び非−包膜ウイ ルスの両者に由来の特定のウイルス性病原体を含まないという特徴を有する。そ れらには、ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＧＶ、ＨＩＶ、ＨＥＶ、ＨＤＶ、ＣＭＶ 又はパルボウイルスなどの具体的なウイルスが含まれる。リガンド又はレセプタ ーとして好適に用いられる特定の抗体は、各ウイルスの表面の対応する抗原を認 識しそれに結合することができるので、各ウイルス（それに対する抗体が入手可 能であるか、それに対する特異抗体を調製することができるか、免疫グロブリン 溶液中に含有されているか後者から単離可能であるか）を複合体とすることがで き、その複合体は生物学的材料から本発明に従って除去することができる。この 方法で既知のウイルスと同様未だ同定されていないウイルスであって、それらに 対する免疫グロブリン含有溶液が入手可能であるウイルスを複合体にし、所望に よりそれらを完全に中和し、生物学的複合体から抗体／抗原複合体を分離し、か くして安全で病原体不含の生物学的材料を回収することが可能である。 過去数年、例えばプリオンのような潜在的に感染性の病原体の伝染にも特別の 注意が払われてきた。現在のところ、Creutzfeldt-Jakob病（クロイツフェルト ・ヤコブ病）又はＢＳＥ（牛海綿状脳症「狂牛病」）の病因物質を減少するため に利用可能な方法はほんの幾つかしかない。Pocchiariら(1991，Horm．Res．35: 161-166)はいわゆる”遅いウイルス”の枯渇化のために限外ろ過と６Ｍ尿素の組 み合わせを提案した。しかし、彼らはこのようにして処理されたタンパクの生物 学的活性がどの程度不利な影響を受けたかについてなんら詳細な記載をしていな い。しかしながら、高濃度のタンパク−変性性尿素による処理により、このよう にして処理された溶液中のタンパクは、少なくとも部分的に変性され、かく して不活化されると推定される。 さらに他の側面では、このように、本発明の生物学的材料はまた例えばＢＳＥ 又はクロイツフェルト・ヤコブ病の病原体のような分子性病原体、特にプリオン 、をも含有しない。これらの病原体に対する特異的な抗体を製造するか、特に抗 −β−アミロイド抗体を含有する免疫グロブリン含有溶液を得ることができる。 抗−β−アミロイド抗体を含有する免疫グロブリン含有溶液を生物学的材料に加 えることにより、潜在的な分子性病原体も複合体中に結合し、複合体を生物学的 材料から除去することができる。 リガンド／レセプター複合体の分離、即ち複合体を形成した病原体の分離はウ イルスの物理化学的性質とは無関係であるので、ウイルス枯渇法による影響を受 けない物理化学的性質を有する、ウイルス−安全で病原体不含の生物学的材料が 得られる。従来の不活化法では、例えば、安定化剤の添加などの適当な手段を講 じないと、化学物質の添加又は熱処理により生成物そのものが影響を受けること が知られている。物理化学的処理なしにリガンド又はレセプターとの複合体を形 成し複合体を生物学的材料から分離することにより病原体を枯渇化することには 、病原体が効率的に除去されかつ生成物がその本来の形に影響を受けないという 大きい利点がある。このようにして得られた生物学的材料は、枯渇化工程の前の 出発原料中の本来のタンパクの性質に相当する性質を持ち、活性が不変のままで あるタンパクを含有している。さらに、ある種のウイルス不活化法におけるよう な、余分な複雑な精製工程でタンパク溶液から再度分離しなければならない変性 タンパクの形成の可能性も回避される。 もちろん、生物学的材料からの病原体の枯渇化に際して、得られた病原体不含 材料を、さらに精製工程に供し、最終生成物中には好ましくないであろう随伴タ ンパクを除去することができる。この目的のためには、例えばクロマトグラフィ ー、特にイオン交換クロマトグラフィー又はアフィニティークロマトグラフィー 、又はゲルろ過などの従来技術で既知の全ての方法を実行することができる。 本発明の生物学的材料からの付随タンパクの分離、例えば免疫グロブリン含有 標品の調製用に決定されている画分からの血液因子類の分離、はまたウイルス枯 渇化の前に行ってもよい。しかしながら、生物学的材料からの病原体の枯渇化を 、 随伴タンパクのクロマトグラフィーによる分離に先立って行うことが好ましい。 それはクロマトグラフィー法により、精製効果とは別に、複合体を形成している 病原体や始めに生物学的材料に混合されなおも残存している可能性のあるリガン ドやレセプターの、より一層の除去が可能だからである。 本発明によって得られた生物学的材料は、特に、病原体が実質上完全に生物学 的材料から除去されてしまっているので、特定のウイルス及び分子病原体を含有 せず安全であるという特徴を有する。この場合、「完全に」なる語句は、この方 法による生物学的材料中の病原体の枯渇化における減少係数が少なくとも約７対 数段階を達成していること−細菌を通さないフィルター(bacteria-proof filter )に類似して−を意味する。好ましくは、分離は＞７対数段階、好ましくは＞９ 対数段階、特に好ましくは＞１０対数段階の能力で行われる。米国薬局方(1995 ，USP 23，NF 18:1978-1980)によれば、フィルターの保持能力は対数減少値(log reduction value;RF)で記載されている。例えば、１０7の微生物を保持するこ とができる0.2μｍの滅菌フィルターの保持能力は少なくとも７対数段階である 。この場合、この量はフィルターによりウイルスが完全に分離されたものと見ら れる。 抗体−含有高免疫グロブリン(hyperimmunoglobulin)溶液を所望により過剰に 生物学的材料と混合しあらゆる遊離の感染性病原体の複合体を形成させるので、 本発明の生物学的材料はときには複合体を形成していない遊離形の抗体をも含有 する。抗体／抗原複合体をろ過又は沈降により生物学的材料から分離したとき、 病原体不含生物学的材料は抗−ＨＡＶ、抗−ＨＣＶ、抗−ＨＢＶ又は抗−パルボ ウイルス特異的抗体をも含有する可能性がある。 過剰のリガンド又はレセプター、それは、それぞれ、生物学的材料に含有され るか添加され、病原体と結合し複合体を形成するので、遊離のウイルスはもはや 生物学的材料中に存在せず、複合体形（複合体を形成した）病原体の分離はろ過 又は沈降のいずれかにより実施され、遊離の形の病原体及びリガンド／レセプタ ーと複合体を形成した病原体のいずれも、ろ液には入り込まない。このようにし て本発明に従って得られた生物学的材料を含有するろ液は非複合体形及び遊離形 の病原体を含有しないのみならず抗体などのリガンドとの複合体中に存在する病 原体をも含有していない。 本発明によって得ることができる病原体−不含生物学的材料は血漿画分、免疫 グロブリン含有血漿画分、因子ＩＩ、因子ＶＩＩ、因子ＶＩＩＩ、因子ＩＸ、因 子Ｘ、因子ＸＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、ｖＷＦなどの血液因子を含有す る血漿タンパク−含有画分、上記血液因子の１つを含有する濃縮物、ハイブリド ーマ細胞系の上清、形質転換された又は感染した哺乳動物細胞の細胞培養物上清 、又は動物又はヒト組織からの抽出物であってよい。 本発明の他の側面では生物学的材料からのウイルス性及び分子性病原体の枯渇 化法並びにウイルス性及び分子性病原体を含有しない安全な生物学的材料を回収 する方法を提供する。その方法は、特に、生物学的材料（特定の抗原病原体の存 在が疑われる）に含有される少なくとも１つのレセプター又はリガンドが病原体 のレセプター又はリガンドと反応し、それにより複合体形病原体のリガンド／レ セプター複合体が形成されうることを特徴とする。好ましくは病原体のレセプタ ー又はリガンドと反応するリガンド又はレセプターを生物学的材料に加える。形 成され得るリガンド／レセプター複合体を次いで複合体を形成した病原体を部分 的又は完全に分離する方法により生物学的材料から除去する。遊離の病原体を複 合体中でリガンドと複合体形成させることにより、増大された複合体形病原体部 分（partical）、それは遊離の病原体よりも高密度（density）であるか高い沈 降係数を持つ、が得られる。 さらに、複合体は遊離の病原体よりも高集合物であるため、その高凝集性の故 に複合体化した病原体の直径は拡大しておりある種のメンブランフィルター通過 能力が変化している。 このように、病原体を枯渇化し病原体不含生物学的材料を回収するための本発 明方法は、病原体とリガンド／レセプターと複合体を形成させることにより、凝 集の増加による密度又は沈降特性の増加と、直径を拡大させることにより遂行さ れる。次に、このように性質の変化した複合体を形成した病原体を生物学的材料 から分離する。 本発明の好ましい態様では、リガンド／レセプター−病原体−複合体の分離を 、該複合体は選択的にフィルターに保持される透過性フィルターを通すことによ り 行う。本発明に従えば、フィルターの排除サイズは、例えば、因子ＶＩＩＩ、ｖ ＷＦ又は免疫グロブリン類などの高分子量タンパクもフィルターを自由に通過で きるようなサイズ、また、高濃度タンパク溶液を用いる場合にはフィルター孔の 目詰まりが予測されないようなサイズを選ぶ。もちろん、フィルターの排除サイ ズはリガンド／レセプター複合体、特に抗体／抗原（病原体）複合体の可能な最 高の凝集サイズを超えることはない。さもなくば高分子量、高密度の病原体／抗 体複合体がフィルターを通過しろ液中に混入する。 このように、ナノフィルターは本発明の実施に好適である。特に、公称排除サ イズが３５から１００nmのナノフィルターが好ましい。この排除サイズは、高分 子量タンパク質をしてフィルターを自由に通過させるが、同時にそれらは、直径 ＞１００nmの遊離の複合体を形成していない病原体並びにこのようなサイズの病 原体複合体を保持する。その上、平均排除サイズのフィルターを用いると、生物 学的材料中に存在しうる高分子量タンパク及び他の成分によって起こりうる、フ ィルターの通過能力を低下させる目詰まりが回避される。また、正接フローろ過 を採用するときは、液体がフィルターを通過するために僅かな加圧が必要とされ うるが、それにより、適用された圧力によってフィルターが悪影響を受けたり、 ひび割れが起こる危険性が減少される。最終生成物に関して効率的で、穏やかな 病原体の枯渇化とは別に、本発明の方法を実施するのに排除サイズが≧３５ｎｍ のナノフィルターを使用することにより排除サイズが小さいナノフィルターを用 いる場合よりも、フィルターについて低コストになるという利点がある。このこ とは、特に大工業規模への適用においてこの方法を興味深いものにする。 しかしながら、この方法の実施に＞１００ｎｍの排除サイズのフィルターを用 いることも可能である。しかし、この場合にはあらかじめ、非常に大きい病原体 −リガンド複合体又は抗体／抗原凝集物のそれぞれが形成され、または、所望に より凝集剤を用いて、リガンド／レセプター複合体が十分に大きくなり、それら がフィルターを通過しないことを確かめておかねばならない。条件は、もちろん 、従来の滅菌フィルターでも保持される視覚的に観察可能なサイズまでの抗原／ 抗体凝集物が形成される条件を選択することができる。原則として、フィルター の排除サイズが小さければ小さいほど、その製造は高価につく。 本発明の範囲内で、公称排除サイズが０.０４μｍ〜３μｍまでの排除サイズ のフィルターによっても、本発明により複合体を形成した病原体を生物学的材料 から完全に分離可能である。このように、本発明によれば可視的範囲（例、光学 顕微鏡で）のサイズに達したリガンド／レセプター複合体が形成される。 本発明の他の態様においては、リガンド／レセプター複合体の分離は沈降によ り行うことができる。好ましいのは密度勾配遠心分離法である。 本発明方法によれば、生物学的材料に混合されるリガンド又はレセプターはリ ガンド又はレセプター、すなわち病原体の特異的結合部位に結合し得る成分であ り、該成分は病原体との複合体、好ましくは高分子量複合体を形勢し得る成分で ある。病原体のリガンド又はレセプターは抗原、エピトープ又は抗原決定基であ ってよい。結合することができ、生物学的材料に混合され、病原体のリガンド又 はレセプターと反応しうる反応性リガンド又はレセプターは、抗体または結合し 得る抗体フラグメントであることが好ましい。抗体は任意のサブクラスであって よいが、サブクラスＩｇＧ及びＩｇＭが特に好ましい。しかしながら、リガンド 又はレセプターとしては、病原体のレセプター又はリガンドに結合し得、該病原 体と高分子量複合体を形成しうるあらゆる既知の成分が考慮される。 生物学的材料中に存在し得る病原体と結合し得るレセプター又はリガンドを加 えることにより、病原体とリガンド／レセプターから、高い凝集を示す高分子量 複合体が得られる。 本発明方法の１つの側面に従えば、感染性のヒト病原体に対する特異抗体を含 有する免疫グロブリン−含有溶液を生物学的材料、好ましくはタンパク含有溶液 、に混合し、それにより生物学的材料中に存在する可能性のある病原体と抗体の 間に抗体／抗原複合体を形成する。 本発明方法の他の側面では、リガンド／レセプター−病原体複合体の凝集をよ り一層増大し、より高密度でより大きい直径の複合体を形成させる。これは、本 発明によりさらに凝集剤、特に例えばコンカナバリンＡ、リシン、ファシン等の レクチン類、又は１又は数個の補体成分、コングルチニン、リューマチ因子、又 は例えばポリエチレングリコールのような合成ポリマー又はアルブミンなどを加 えることにより実行される。凝集剤は病原体と反応するリガンド又はレセプター と同時に、又はそれを加えたのちのあらかじめ定めた期間又は時間後に、生物学 的材料に加えて良い。しかしながら、凝集剤を免疫グロブリン溶液を加えた後、 時間差をおいて加えるのが好ましい。こうすることで、アグルチニン（凝集素） 又はコングルチニン（膠着素）が抗体と反応しそれを凝集させたり複合体化させ ないで、すでに形成された病原体／抗体複合体のみを高分子量複合体に凝集させ ることが、確実となる。また、このことにより、さらに凝集することで、確実に 高い複合体密度（濃度）が達成され、生物学的材料からの複合体の除去がより効 率的になる。抗原／抗体−凝集物のより高度の複合体化によりメンブランフィル ター、排除サイズがより高い、好ましくは≧３５ｎｍのメンブランフィルターで さえ、分離工程で使用することが可能になる。凝集した粒子がより高密度であれ ば、あらゆる複合体化した（複合体形の）病原体が包含されるので沈降による分 離の改善が容易である。 病原体と特異的に反応する免疫グロブリン含有溶液又はリガンド又はレセプタ ーを加えることにより、その物理化学的特性のいかんにかかわらずウイルス性及 び分子性病原体の両方を生物学的材料から枯渇化することが可能である。これは 従来法では枯渇化又は不活化することができなかったウイルス性又は分子性病原 体に特にあてはまる。このように、また、パルボウイルス又はＨＡＶのような小 さく脂質包膜がなく、従来、Ｓ／Ｄ処理のような物理化学的不活化法やナノろ過 のいずれでも、高濃縮タンパク溶液又は高分子量タンパク（＞１５０ｋＤ）を含 有する溶液から効率良く除去したり、不活化することができなかったウイルスも 本発明方法に含まれる。従って、本発明方法は、生物学的材料を汚染しうるあら ゆるウイルス性及び分子性病原体の枯渇化、とりわけに脂質包膜−ウイルス及び 非−脂質包膜−ウイルス、例えば、ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＩＶ、ＨＥＶ、 ＨＤＶ、ＨＧＶ、ＣＭＶ又はパルボウイルス、のみならずプリオン類の枯渇化に 適用可能である。本発明方法は特に生物学的材料中の病原体を枯渇化、及び免疫 グロブリン又はｖＷＦなどの高分子量タンパクを含有する生物学的材料の回収に 適する。 本発明はまた、本発明方法により得られる、病原体不含、ウイルス的に安全な 血漿タンパク−含有組成物であって、該血漿タンパクが出発原料の少なくとも８ ０％の活性を有する組成物を提供する。 本発明の具体的な側面では、本発明方法を実施するにあたり、高免疫グロブリ ン溶液又はハイブリドーマ細胞系の上清から得られる抗体をリガンドとして用い る。免疫グロブリン含有溶液は、特定の病原体に対する高力価の抗体を含有する 供与血漿から得られるであろう。これらは、特に抗−ＨＣＶ、抗−ＨＡＶ、抗ー ＨＢＶ、抗−ＨＩＶ、抗−ＨＥＶ、抗−ＨＤＶ、抗−ＨＧＶ、抗−ＣＭＶ又は抗 −パルボウイルス抗体を含有する供与者から得られた免疫グロブリン溶液である 。抗体含有溶液は又はイブリドーマ技術のような生物工学的な手法でも調製でき る。この方法では、特定の病原体の抗原に対するモノクローナル抗体がハイブリ ドーマ細胞系から培養培地の上清に分泌され、次いで、該上清から抗体を高力価 溶液中に単離する。 供与血漿から回収された免疫グロブリン含有溶液は、溶液中の抗体が惹起され た、遊離のウイルス及び他の病原体をも含有する可能性がある。このことは、ハ イブリドーマ技術、該方法でウイルス性病原体による汚染は排除できない、で得 られたモノクローナル抗体にも同じく言えることである。本発明方法の特別の態 様においては、本発明方法の実施に用いる高免疫グロブリン溶液を所望によりウ イルス不活化及び／又はウイルス枯渇化法に供する。 免疫グロブリン含有溶液が低力価で抗体を含有している場合には、所望により 抗体を濃縮したのちリガンド又はレセプターとして高濃度溶液中で用いることが できる。 特別な側面では、本発明方法を、抗体として抗−β−アミロイド抗体を用いて 実施する。抗−β−アミロイド抗体はプリオン表面の構造を好適に認識しそれに 結合しプリオン／抗体複合体を形成する。本発明によれば、具体的にプリオン、 特にクロイツフェルト・ヤコブ病の病原体、に対する抗体を調製するか、抗−β −アミロイド含有免疫グロブリン溶液を得、プリオンを含有する可能性のある生 物学的材料と混合する。プリオンに抗−β−アミロイド抗体が結合すると、低分 子量プリオンは凝集して高分子量複合体となり、続いてろ過又は沈降により生物 学的材料から選択的に分離することができる。 本発明のさらに特別な態様では、ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＩＶ、ＨＧＶ、 ＨＥＶ又はパルボウイルスに対する抗体をリガンド又はレセプターとして用いる 。本発明方法を実施するには特定のウイルスに対する抗体を含有する免疫グロブ リン含有溶液を生物学的材料に混合する。しかしまた、生物学的材料を汚染して いる可能性のある種々の病原体に対する抗体又は他のリガンドの混合物を混合し ても良い。特定の病原体に対する少なくとも１つの免疫グロブリン溶液、又は種 々の病原体に対する抗体含有溶液の混合物を加えた時点で、生物学的材料と免疫 グロブリン溶液との混合物を一定時間の間インキュベートすることで病原体の抗 原と抗体の複合体を形成させ、次いで、上記のごとく形成された複合体を生物学 的材料から分離する。 本発明方法は生物学的材料中のウイルス性及び／又は分子性病原体の枯渇化に 用いることができる。生物学的材料は血漿画分(plasma fraction)、免疫グロブ リン含有血漿画分、因子ＩＩ、因子ＶＩＩ、因子ＶＩＩＩ、因子ＩＸ、因子Ｘ、 因子ＸＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、ｖＷＦなどの血液因子を含有する血漿 タンパク−含有画分、上記血液因子の１つを含有する濃縮物、ハイブリドーマ細 胞系の上清、形質転換された又は感染した哺乳動物細胞の細胞培養物上清、又は 動物又はヒト組織からの抽出物であってよい。本発明を実施する上でのパラメー ターは、それぞれ生物学的材料のタイプ及び性質、存在し得る汚染性病原体のタ イプ及び性質に適合させる。このように、病原体の凝集のためのリガンド／レセ プター複合体の形成は複合体化に最適な条件下、特にレセプターとリガンド間の 結合又は抗体とレセプターの抗原との結合、それぞれに最適な条件下で行う。至 適パラメーター、例えば、本発明方法の実施におけるｐＨ、温度、インキュベー ション時間などは、当業者が、病原体のタイプ、混合されるリガンド又はレセプ ター（抗体）の特異性、及び生物学的材料の性質（溶液の純度、溶液中のタンパ ク濃度）により、通常の一般的な知識に基づいて決定することができる。リガン ド／レセプター複合体をろ過工程で生物学的材料から除去する場合に用いる透過 性フィルターは、生物学的材料は自由に通過できるがリガンド／レセプター複合 体は選択的にそのフィルターに保持されるような排除サイズのものを用いる。 生物学的材料中に存在するなんらかの遊離の病原体が、抗体と複合体を形成し てしまっていることを確かめるためにろ液及び濃縮液の両方をウイルスの存在又 は過剰の特異抗体に関して分析する。生物学的材料からの病原体の枯渇化率は、 ろ液及び濃縮液に関して、ウイルス力価測定法で測定するか、特定のウイルスの 遺伝子コピー数又はゲノム等価物それぞれを、例えばDornerら(1994，25，H 量的ＰＣＲによって測定することにより、測定される。 さらに本発明の他の側面では、本発明方法で得られた生物学的材料を使用した リガンド／レセプター、特に特異抗体の存在（過剰の存在）に関して分析する。 特定の病原体に対する抗体を過剰に加えた場合は非結合及び非複合体化抗体は複 合体化した抗体よりも低い密度及び分子サイズを有するので、生物学的材料中の 遊離の抗体の存在は、溶液中の抗体の濃度が遊離の病原体と複合体を形成するの に十分であったということの判断基準ともなる。用いたリガンド又はレセプター が過剰に存在することは、抗体に対して特異的なリガンド又はレセプターを有す る、既知量のウイルス性又は分子性病原体を病原体の枯渇化の前、及び後に生物 学的材料の試料に加え、このようにして回収された抗体／病原体複合体を含有す る生物学的材料を再度透過性フィルターに通し、ろ液中に残存する病原体の量を 測定することにより、決定される。この方法で枯渇化に用いた免疫グロブリン溶 液の抗体含量が病原体と複合体を形成するに十分であったか否か、及び非−複合 体化抗体がろ液中、即ち最終生成物中に存在するか否かを決定することができる 。 本発明のウイルス性及び分子性病原体を枯渇化する方法、及び病原体不含生物 学的材料を回収する方法は任意の既知のウイルス不活化法、例えば熱処理、低温 殺菌法又はＳ／Ｄ法などと組み合わせることができる。不活化法を本発明方法の 実施に先立って適用することが好ましく、そうすることで不活化法の対照となら ないウイルスが本発明方法で除去される。 別の側面では、本発明は、本発明方法におけるウイルス性又は分子性病原体の 複合体形成のためのリガンドとしてのウイルス性又は分子性病原体に対する特異 抗体を含有するウイルス−不活化免疫グロブリン溶液を提供する。 本発明のウイルス性及び/又は分子性病原体を枯渇化する方法は、特に、遊離 の非−複合体形、及び結合形の両形で、そして複合体形及び凝集物の形で存在す る特定の病原体を含有しない生物学的材料の回収及び調製に用いることができる 。 発明を実施するための最良の形態 本発明を、以下の実施例によりさらに詳しく説明するが、これら実施例は本発 明を制限するものではない。 出願人は、目下、実施例１が本発明の実施のための最良の形態であると考えて いる。 実施例１：ＨＡＶ‐特異的抗体、次いでナノろ過によるＨＡＶの枯渇化 抗体不含の２％ヒト血清アルブミン溶液９８ml、及びＡ型肝炎ウイルス（ＨＡ Ｖ）‐特異抗体を含有する２％ヒト免疫グロブリン溶液９８ｍｌを高力価ＨＡＶ でスパイクした。ウイルス力価は両溶液の一部をとり測定した。次いでこれら溶 液を初期圧0.８barで４時間、正接フローろ過（tangential flow filtration） に供した。0.001ｍ2／３５ｎｍのフィルター(Planova 35N，Asahi)を用いた。Ｈ ＡＶ力価測定はBarrettら(J.Med.Virol．(1996)，Vol.49:1-6)の方法に従って行 った。 細胞培地中での連続１／２対数希釈により、ウイルス力価を測定した。各連続 希釈液１００μｌをそれぞれ、ウエルあたり１ｘ１04FRhk-4細胞を含有するマイ クロタイタープレートの８つのウエルに入れた。次いで、プレートを３７℃で１ ４日間インキュベーションした。７日後、培地を交換した。このインキュベーシ ョン期間の経過後、細胞変性効果(ＣＰＥ)を顕微鏡的に決定した。ＣＰＥ陽性の マイクロタイタープレートのウエルの数に基づいてＴＣＩＤ50を決定した。ウイ ルス枯渇化法の効率は、E.C.Commitee for Proproetary Medicine (Commision o f the European Communities(1991):Ad hoc Working Party on Biotechnology/P harmacology-Note for Guidance（Validation of Virus Removal and Inactivat ion Procedures）III/8115/89-EN)により指定された下記式に従って求めた減少 係数（Ｒ．Ｆ．）として表した。 １０R.F.＝[（処理前の試料の容量）ｘ（処理前のウイルス力価）]÷[（処理後 の試料の容量）ｘ（処理後のウイルス力価）] ウイルスサイズ（直径２５−３０ｎｍ）から予測されたように、ＨＡＶ特異的 抗体なしではＨＡＶは３５ｎｍ以上のメンブランによるろ過では保持されなかっ た。しかしながら、ＨＡＶ-特異抗体を有する免疫グロブリン溶液を含有する試 料からは、３５ｎｍメンブランを通すろ過で、完全なウイルス除去が達成され（ Ｒ．Ｆ．＞５.２）、ろ過中にウイルスは検出可能でなく、濃縮液中に１００％ に至るウイルスが保持されていた（表１）。 表１：３５ｎｍナノろ過によるＡ型肝炎ウイルスの枯渇化における 特異抗体の影響 実施例２：抗−パルボウイルス−特異的抗体、次いでナノろ過によるパルボウ イルスの枯渇化 パルボウイルス「マイニュートマウスウイルス(minute mouse virus:MMV ATCC VR1346)」に対するウサギ抗血清が、このウイルスと複合体を形成し３５ｎｍ以 上のメンブランにウイルスを保持させることができるかどうかを試験した。 ウサギ抗血清は、動物に濃縮した、ホルマリン不活化ＭＭＶ製品と完全フロイ ンドアジュバントを接種したのち、最初の免疫化から4週間後に不完全フロイン ドアジュバントでブースター処理して免疫化することにより得た。2回目の免疫 から4週間後に血清の調製のために採血した。 ２％ヒト免疫グロブリン溶液９８ｍｌをＭＭＶ懸濁液２ｍｌでスパイクした。 ０、０.００５、０.０５、０.５、５.０ｍｌの抗ＭＭＶ血清を加え、各混合物を 実施例１記載の条件下でろ過した。 ウイルス−スパイクした出発原料、濃縮液（元の濃度に希釈）、及びろ液の試 料の力価を、ウイルス増殖にＡ９細胞（ATCC CRL6319）を、インキュベーション 時間として７日を選択した他は実施例１の記載と同様に、標準的ＴＣＩＤ50試 験法で測定した。 ウイルスサイズ（直径１８−２４ｎｍ）から予測されたように、ＭＭＶは、抗 血清を加えないと３５ｎｍフィルターでは保持されず、ろ液中に１００％観察さ れた（Ｒ.Ｆ.、−０.１）。ＭＭＶ特異抗血清５ｍｌを加えるとウイルスの感染 性は完全に中和され、ウイルスはろ液又は濃縮液のいずれにも検出されなかった 。しかも、非−中和濃度（0.5ml）の抗血清の添加によっても、ろ過によってウ イルスの完全な除去が達成され（Ｒ.Ｆ.、＞６.９）、ろ液中にウイルスは検出 されなかった。さらに低濃度のＭＭＶ特異抗血清（０.０５ｍｌ）でも、同様に ろ過によるＭＭＶの大量除去が起こった（Ｒ.Ｆ.、４.４）（表２）。 表２：３５ｎｍナノろ過によるパルボウイルスの枯渇化における 特異抗体の影響 実施例３：抗−ＨＣＶ−抗体、次いでナノろ過によるＨＣＶの枯渇化 Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の懸濁液にＨＣＶ−特異抗体を加えることにより 、ウイルスが３５ｎｍフィルターメンブランを通過することを阻止し得る可能性 について試験した。高力価ウイルスストックの出発物質としてＨＣＶにより高度 に汚染された抗ＨＣＶ抗体を含有しない血漿を用いた。血漿約２５０ｍｌをBeck mann遠心機(Rotor JA10；２０分間、10,000rpm）により清澄化した。上清をTiロ ーター中で、２.５時間超遠心(55,000rpm)した。ＰＢＳ及び血液（約１０ｍｌ） にペレットを再度懸濁し、プールした後、ＨＣＶゲノムのコピー数を 44)が記載したように、定量的ＰＣＲによって決定した。 ２％ヒト免疫グロブリン溶液９５ｍｌを濃縮ウイルスストック２．５ｍｌでス パイクした。ＨＣＶに対する抗体は含有するがＨＣＶゲノム等価物は含有しない （このことは定量的ＰＣＲで確認済み）１０％ヒト免疫グロブリン溶液５ｍｌ、 又は対照としてのＰＢＳ５ｍｌ、を混合した。両試料を実施例１記載の条件下で 正接フローろ過に供した。ＨＣＶ‐スパイク出発物質の試料中の、ろ液及び濃縮 液（元の容量まで希釈したもの）のＨＣＶ遺伝子コピー数を上記のごとく決定し た。抗−ＨＣＶ特異的免疫グロブリンを添加すると、３５ｎｍ以上のフィルター によるろ過でろ液からの完全なウイルスの除去が達成された（Ｒ.Ｆ.＞３.０） 。一方、対照混合物では実質的なＨＣＶの枯渇化は達成されなかった（Ｒ.Ｆ． ：１.４）（表３）。 表３：３５ｎｍナノろ過によるＣ型肝炎ウイルスの枯渇化における 特異抗体の影響 実施例４：様々な抗−ＨＡＶ−抗体力価の免疫グロブリン溶液によるＨＡＶの 枯渇化 ＨＡＶ抗体力価が１.５units/ml〜１１units/mlである、一連の異なる免疫グ ロブリン−含有溶液(ロット)、及び、対照としてＨＡＶ特異抗体を含有しないＨ ＳＡ溶液を抗力価ＨＡＶでスパイクした。次いで、両溶液を実施例１に記載のご とく全量２５０ｍｌで正接フローろ過に供し、濃縮液及びろ液のウイルス力価 を測定した。ＨＡＶ枯渇化の結果は表４に示されている。 表４：３５ｎｍナノろ過によるＡ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）の枯渇化 *:減少係数はＣＰＭＰガイドライン（ＣＰＭＰ／ＢＷＰ／２６８／９５）に従 って測定した。 また、より低いＨＡＶ抗体力価の免疫グロブリン溶液では＞６対数段階の減少 係数が可能である。ほぼ１０倍高い抗体力価の溶液の場合、ウイルス枯渇化の向 上は達成されなかった。従って、特異抗体の力価に関係無く少なくとも試験した 範囲内の再現性あるＨＡＶ枯渇化が可能である。 実施例５：ＨＡＶ−抗体含有溶液のウイルス枯渇化能力 抗体含有溶液のウイルス枯渇化能力を試験するために、実施例４に従って得ら れたろ液をＨＡＶで再スパイクし、ろ液にまだ残っている抗体のウイルス枯渇化 能力又は減少係数のそれぞれを決定した。 低力価から高力価の免疫グロブリン溶液からの再スパイクろ液のＨＡＶ枯渇化 能力を表５にまとめて示す。 表５：ＨＡＶによる再−スパイク後の３５Ｎ−ナノろ過によるＡ型肝炎ウイル ス（ＨＡＶ）の枯渇化 *:減少係数はＣＰＭＰガイドライン（ＣＰＭＰ／ＢＷＰ／２６８／９５）に従 って測定した。 低い抗体力価（１.５Ｕ／ｍｌ）の免疫グロブリン含有出発物質でも、もう一 度５対数段階以上の枯渇化を可能にするに充分な抗体が依然存在していることを 示している。これに比べて、高力価抗体溶液のウイルス枯渇化能力はごく僅かに 高いだけである。 第１回及び第２回のウイルススパイクによる枯渇化率を合計する、総減少係数 が少なくとも１１対数段階のウイルス枯渇化が可能である。 実施例６：抗−パルボウイルス抗体含有免疫グロブリン溶液によるパルボウイ ルスの枯渇化 一連の免疫グロブリン製品(ロット)をパルボウイルスＢ１９-特異抗体に関し て試験した。ＥＬＩＳＡによって異なるロットの抗体力価が1:400〜1:800である ことが分かった。 Ｂ‐１９特異抗体の力価が僅か1:400である２つの別のロットをパルボウイル スＢ１９の高力価ウイルスストックでスパイクし、両溶液の力価を定量的ＰＣＲ で測定した。定量的ＰＣＲによる測定はEP‐0714998の記載に従い、以下の１対 のパルボウイルス特異的プライマーセットを用いて行った。 *:番号はマスター配列PARPVBAU(EMBLデータバンク)の記載に従う。 ヌクレオチド（nt）1127-1550（(Shadeら（1986）J．Virol．58:9211)記載の 番号付けに従う）のパルボウイルス特異的配列を含有するプラスミドpParvo-wt を証拠(verifier)として用いた。プラスミドpParvo-15及びプラスミドpParvo+21 を内部基準として用いた。pParvo-15はnt1455−1489の３５ｂｐフラグメントを 欠失させ、プライマー5’GTT CCA GTA TAT GGC ATG GTT 3’及び5’ACC CAT GCC ATA TAC TGG AAC 3’から製造した二本鎖オリゴヌクレオチドを挿入することに より、調製した。pParvo+21はnt1453及び1454の間でbp1468-1487を重複(duplica tion)することにより得た。パルボウイルス特異的プライマーを用いて増幅した 後、ＰＣＲ産物の長さはそれぞれ１７７ｂｐ（ｗｔ）、１６２ｂｐ（−１５）又 は１９８ｂｐ（＋２１）であった。 混合物の各々を実施例1に記載の条件下でろ過した。ウイルスでスパイクした 出発物質、濃縮液（元の容量まで希釈）、及びろ液の試料中の力価を、定量的核 酸増幅法（ＰＣＲ）により測定した。力価の測定結果を表6に示す。約６対数段 階という優れた枯渇化が達成された。 表６：３５ｎｍナノろ過によるＡ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）の枯渇化 *:減少係数はＣＰＭＰガイドライン（ＣＰＭＰ／ＢＷＰ／２６８／９５）に従 って測定した。 実施例７：抗−パルボウイルスＢ１９−抗体含有溶液のウイルス枯渇化能力 抗体含有溶液のウイルス枯渇化能力を試験するために、実施例６に従って得ら れたろ液をパルボウイルスで再スパイクし、ろ液にまだ残っている抗体のウイル ス枯渇化能力又は減少係数のそれぞれを決定した。 １：４００抗体力価を含有する免疫グロブリン溶液からの再スパイクろ液のパ ルボウイルス枯渇化能力を表７に示す。 表７：パルボウイルスによる再スパイク後の３５Ｎ−ナノろ過によるＢ−１９ パルボウイルスの枯渇化 *:減少係数はＣＰＭＰガイドライン（ＣＰＭＰ／ＢＷＰ／２６８／９５）に従 って測定した。 ろ液中にも、さらに５対数段階の枯渇化を達成するに充分な抗体が依然存在し ていることが示された。第１回及び第２回のスパイクによる枯渇化率及び減少係 数を合計して、本発明の方法によれば総減少係数が少なくとも１１対数段階のウ イルス枯渇化が達成され、それは生物学的材料からの病原体の完全な除去に相当 する。 このように、このシステムは工業規模での適用に適しており感染性病原体を含 有しないタンパク含有溶液が得られることを確実なものとする。 実施例８：様々な排除サイズのフィルターを用いるパルボウイルスの枯渇化 実施例１では非中和濃度の抗血清を加えた後３５ｎｍ以上のメンブランでナノ ろ過することにより、病原体の完全な枯渇化が達成されることがすでに証明され た。より高い排除サイズのフィルターも抗原-抗体複合体の除去に適するかどう かを試験するために、０.０４μｍと３μｍの間の公称排除サイズのディープ・ ベッド・フィルター(deep bed filter)の、パルボウイルスＭＭＶ“マイニュー トマウスウイルス（minute mouse virus）”の保持能力を試験した。２％ＩｇＧ 溶液１９６ｍｌをＭＭウイルス滴定標品４ｍｌでスパイクした後、ウサギ抗−Ｍ ＭＶ血清と混合した。対照として、特異的な抗−ＭＭＶ血清を含有しない、スパ イクしたガンマグロブリン溶液を用いた。混合物を公称排除サイズが３μｍ、０ .５μｍ、０.３μｍ、及び０.０４μｍの異なるdeep bedフィルターにより、流 速５０ｍｌ／minにおいて最後までろ過した。出発物質とろ液中のウイルス力価 を測定した。結果を表８にまとめる。 表８：免疫グロブリンの通常のdeep bedろ過によるパルボウイルスＭＭＶの枯渇 化 本発明方法によれば、排除サイズ３μのフィルターを用いても５対数段階以上 の枯渇化が可能であり、病原体と複合体を形成するリガンドの添加が無いときに は約０.０４μｍのフィルターを用いたときのみ有意な減少が得られた。 実施例９：リウマチ因子のポリオウイルス枯渇化に対する影響 複合体のサイズを大きくする凝集素の添加が枯渇化の効率に及ぼす影響を調べ るために、凝集素又は膠着素としてリウマチ因子をスパイクした免疫グロブリン 溶液に加えた。２％免疫グロブリン溶液８５ｍｌを高力価の１型ポリオウイルス を含有する製品５ｍｌでスパイクした。力価８００U/mlのヒトリウマチ因子を含 有する製品１０ｍｌを混合物に加えた。対照として、リウマチ因子の代わりにバ ッファー１０ｍｌを加えたものを用いた。両混合物を実施例１に記載のように３ ５Nメンブランでろ過し、濃縮液及びろ液のウイルス力価を測定した。ウイルス 力価の測定はＶＥＲＯ細胞を用い、ＴＣＩＤ50法で行った。 リウマチ因子の存在下及び非存在下での結果及び減少係数を表９に示す。 表９：免疫グロブリン溶液からのポリオウイルスの 枯渇化及びナノろ過に対するリウマチ因子の影響 結果はリウマチ因子が特異的な抗ポリオウイルス抗体と一緒になってウイルス を複合体にし、３５Ｎフィルターによるナノろ過で有効に保持されていることを 示している。凝集剤（リウマチ因子）を加えないと、対数段階３.１の減少係数 でウイルス枯渇化が達成されるが、リウマチ因子が存在すると減少係数は＞７. ６に増大されうる。このように、タンパク溶液からの小さく、包膜を持たないウ イルスの効果的で実質上完璧な分離が始めて可能となった。 実施例１０：通常のDeep Bedろ過によるポリオウイルス枯渇化に対する凝集素 又は膠着素の影響 通常のdeep bedフィルターを用いる高力価ポリオウイルスの除去におけるリウ マチ因子の能力を決定した。そのような実験には、ポリオウイルス特異抗体の存 在下でもポリオウイルスの枯渇化に有効でないことが証明されている型のフィル ターを用いた。２％ガンマグロブリン溶液８５ｍｌを高力価のポリオウイルスス トック５ｍｌでスパイクし、８００units/mlのリウマチ因子溶液１０ｍｌを混合 した。対照として、リウマチ因子の代わりにバッファー１０ｍｌを加えたものを 用いた。両混合物をSeitz BKS-P deep bedフィルターに流速５０ml/minで通した 。出発物質のウイルス力価をろ過の前後に測定した。結果を表１０に示す。リウ マチ因子のような凝集素を加えるだけで、ポリオウイルスは従来のdeep bedフィ ルターを用いて効率的に枯渇化することができることが分かった。この方法 による枯渇化の減少係数は＞７.７対数段階という結果であり、リウマチ因子を 加えないと、約１.１対数段階の減少係数しか達成できなかった。これは、本発 明方法に従い、レクチンやコングルチニンのようなレクチン様タンパクを混合す ると、従来のdeep bedフィルターを用いても、病原体の実質上完全な分離が達成 できることを明確に証明している。 表１０：通常のDeep Bedろ過によるポリオウイルスの ガンマグロブリン溶液からの枯渇化に対するリウマチ因子の影響 実施例１１：ウイルス枯渇化の前及び後の因子ＶＩＩＩ及びｖＷＦの活性の測 定 本発明方法に従ったウイルス枯渇化の前及び後の、２つの血漿因子の活性を測 定した。このために、因子VIII／ｖＷＦ−複合体を含有する溶液１００ｍｌをCu omo ZA 90 deep bedフィルターに流速５０ml／minで通した。出発物質及びろ液 の試料中における因子VIII活性及びｖＷＦ抗原含量を測定し、ｖＷＦ多量体（マ ルチマー）分析を行った。平行して、同じ材料をマウスマイニュートウイルス（ ＭＭＶ）でスパイクし、特異的な抗−ＭＭＶ‐抗血清を加えてからろ過した。出 発物質及びろ液中のウイルスカ価をろ過の前後に測定した。結果を表１１に示す 。結果はこれらの条件下、＞６．５対数段階の枯渇化が達成されることを示して いる。因子VIII活性及びｖＷＦ抗原含量は、それぞれ、この方法により実質上、 影響を受けずに維持される。同様に、ｖＷＦ多量体パターンは実質上影響を受け ず維持されることが証明された（データは示さず）。 表１１：ろ過の前後の因子ＶＩＩＩ及びｖＷＦの活性の測定 実施例１２：ろ過後のCryo−上清からの血液因子の活性の測定 ヒト血漿のcryo（凍結）上清を高力価ポリオウイルス製品でスパイクしdeep b edフィルターに流速５０ml/minで供した。ろ過の前後の因子ＶＩＩ因子ＩX、抗 トロンビンIII（ＡＴＩＩＩ）及びＣ１‐エステラーゼインヒビターの活性を測 定した。結果を表１２に示す。結果は記載の方法により、＞７対数段階のウイル ス枯渇化が達成され、血液因子の活性が悪影響を受けないことを示している。 表１２：ろ過前後の因子ＶII因子ＩＸ、ＡＴIII及びＣ１−エステラーゼイン ヒビターの活性の測定 Description: FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to the field of biological materials free of viral and molecular pathogens and to a process for the production thereof. A method for depleting (removing) viral and molecular pathogens in a material. BACKGROUND ART The production of therapeutic proteins and products by extraction from human or animal tissues, or fluids such as blood or plasma, and continuously growing transformed mammalian cells often involves the production of viruses, virus-like particles or prions. There is a danger of potential contamination by pathogens such as Therefore, measures need to be taken to ensure that such potential pathogens are not transmitted to humans. Human blood or plasma, respectively, may contain a disease-causing virus, such as, for example, AIDS, hepatitis B, or hepatitis C. In the case of plasma proteins derived from plasma pools, the risk of transmission of infectious agents such as viruses is greatly reduced by the selection of blood or plasma donations and the method of manufacture. Appropriate measures, such as excluding high-risk donors from blood donation, eliminating the possibility of detecting and further distributing infectious blood donations in donated blood or plasma, and eliminating the majority of infectious blood donations The analysis that makes it possible to do so often fails to detect each and every thing. Existing analytical systems for detecting infectious viruses in biological materials do not always completely eliminate concerns about transmission of potential pathogens. The reason is that the presence of a wide range of infectious agents makes it impossible to analyze the starting material among all the viral or molecular pathogens that may be present in the sample. In addition, the majority of assays detect antibodies expressed against the virus rather than the virus, which makes it impossible to detect contamination during a so-called "diagnostic window". Moreover, there is no reliable or sufficiently sensitive detection method for a group of viruses. Newly developed assays, especially nucleic acid amplification methods, such as PCR, are very sensitive and specific, and are applicable only to pathogens with known nucleic acid sequences. If the human pathogen is known but no susceptibility detection method exists, the virus content is too low, i.e., the virus content is below the sensitivity limit of the assay system, resulting in negative results only. Uncertainties still remain. Therefore, specific removal and / or inactivation methods for virus depletion have been developed for the preparation of pharmaceutical and therapeutic products, since infectious particles are no longer expected in the final product. Many inactivation methods are based on physicochemical treatment with heat and / or chemicals. Examples of the method include heat treatment, pasteurization, treatment of a protein solution with β-propiolactone and UV light, treatment with a combination of a solvent and a cleaning agent (so-called S / D method), or photoprotein substance. For example, a method of exposing to the addition of phenol is used. 10 in these ways 6 Virus inactivation up to the log stage was achieved. However, the efficiency of the inactivation method varies with the type of virus. S / D-treated blood products are considered relatively safe for HCV, HBV or HIV transmission, but non-enveloped viruses, HAV or parvovirus, etc., are not inactivated by this method (Prowse C. 1994). , Vox Sang, 67: 191-196). The type of inactivation method can also affect the product, and stabilization was often required to prevent product loss. In addition, some inactivation methods required a subsequent purification step to remove added chemicals. As described in EP-0679405, virus depletion, in particular chromatographic methods, including filtering the protein solution through a membrane filter or adsorbing the virus to the solid phase and removing the solid phase There is a law. However, for example Aerosil TM Treatment with a solid phase such as described above can remove HIV from immunoglobulin-containing solutions up to 4 log steps, but can also lead to 42% loss of IgG (Gao et al., 1993, Vox Sang. 64). : 204-209). Such a high loss rate would be rather unsuitable for mass industrial scale applications. Due to the effect of the difference in size of the virus particles, virus depletion occurs by ultrafiltration. Bechtel et al. (Biomat., Art. Cells, Art. Org. 16: 123-128) use different sizes of virus (EMC: 30-50 nm, Sindbis virus: 50-70 nm, VSV: 80-100 nm) in all cases. Demonstrated that a 3.3-3.5 logarithmic step of virus depletion was achieved, thus depletion by ultrafiltration was independent of virus size and poorly selective. The exclusion size of conventional membrane filters is about 0.1 μm to 0.2 μm, which has the disadvantage that almost all viruses can pass through the filter freely. The development of nanofilters with different nominal exclusion sizes from 15 to 75 nm or 70 to 160 kd has made it possible to retain viruses up to 28 nm in size (DiLeo et al. (1991), Nature 351: 420-421, (1992) Bio / Technology 10: 182-188, Burnouf-Radisevich et al. (1994) Vox Sang. 67: 132-138, Hamamoto et al., (1989) Vox. Sang 56: 230-236. ). The use of nanofilters for virus depletion makes it possible to use gentle methods that can remove smaller viruses from biological material without changing the end product. Hoffer et al. (1995, J. Chromatography B, 669: 187-196) reported a Viresolve with an exclusion size of 70 kD. TM Describes a virus depletion method for the production of Factor IX-concentrates based on tangential flow filtration using a membrane, which describes a reduction factor in the case of enveloped (enveloped) viruses. Was found to be 3.5 log steps, and in the case of non-enveloped virus, 7.2 log steps. However, they noticed that high molecular weight products were retained on these filters. Low molecular weight blood factors such as Factor IX or Factor XI can freely pass through nanofilters between exclusion sizes between 15 and 35 nm (Burno uf-Radosevich et al. (1994), Vox Sang. 67: 132-138, Feldman et al. (1995) Acta Hae matol. 94: 25-34). Higher molecular weight products such as Factor VIII (350 kD), vWF (up to 2,000 kD) or immunoglobulin (IgG, 150 kD) can only pass through filters of larger exclusion size. However, with this filter there is a risk that much smaller diameter virus will not be retained and will enter the filtrate. Thus, the application of nanofiltration to the production of a virus-safe, especially small virus-free, therapeutically usable product such as HAV or parvovirus, is itself free to pass through nanofilters of small exclusion size. Limited to products containing small molecular size proteins that can be used. That is, only by using a nanofilter having an exclusion size as small as 15 nm, HAV and parvovirus B19 can be reliably removed from biological products. However, disadvantageously, nanofiltration using filters having such exclusion sizes is not applicable to the production of products containing high molecular weight proteins. This is because the latter cannot pass through the filter and is retained on the filter just like the virus. Another potential problem in nanofiltration is that the stated diameters for various viruses are not always absolute. The commonly indicated size for HCV is 40-50 nm (Murphyetal. (1995), Archives of Virology 10: 424). However, Muchmore et al. ((1993), International Symposium on Viral Hepatitis and Liver Diseases, Tokyo) found that chimpanzees became infected with HCV by a HCV-containing solution filtered through a 35 nm nanofilter. Such size variability (variability) in the various viruses limits, or imposes risk factors, the use of nanofilters in virus depletion and production of virus-free products. Therefore, viruses can be safely isolated from protein solutions to reduce the risk of infection in patients treated with pharmaceutical or therapeutic products of animal or human origin, or products made from cell culture in a genetically engineered manner. There is a need for an industrially applicable method for separation into water. Also, a mild manufacturing process that does not significantly affect and maintain the biological activity of the product, and that the manufacturing process guarantees that no pathogens are transmitted. A product is needed. DISCLOSURE OF THE INVENTION It is thus an object of the present invention to provide biological materials which optionally contain high molecular weight drug-related proteins and which do not contain specific viral and molecular pathogens, and such biological materials. It is to provide a method for producing a material. Further, it is an object of the present invention to provide a safe virus removal, containing no target virus, similar to a bacterial-proof filter. 7 Is to recover the biological material for which the reduction factor has been achieved. The above objects are achieved by the present invention, and a safe biological material free of the specific pathogen of the present invention is provided. The biological material is obtained as follows. At least one ligand or receptor contained in the biological material reacts with a particular pathogen receptor or ligand, resulting in the formation of a complexed pathogen ligand / receptor complex. The ligand / receptor complex is then removed from the biological material in a manner that can partially or completely separate the complex pathogen. The ligand or receptor that reacts with the receptor or ligand of the pathogen may already be present in the starting material. However, it is preferred to mix the biological material with at least one ligand or receptor that reacts with a particular pathogen receptor or ligand. This allows for further adjustment of parameters such as, for example, the amount of ligand or receptor, the choice of ligand or receptor, or the mixing of various ligands or receptors, or, if desired, additional components that assist in complex formation. Can add a well-targeted method. Similarly, the time at which complex formation occurs can be specifically determined. Thus, for example, if several operations or purification steps are performed prior to the isolation of the pathogen, the ligand or receptor may be passed through immediately prior to the final step prior to separation, especially through the biological material through the permeable filter. You may mix before making it. Thus, it is preferred to mix the ligand or receptor immediately prior to filtration. The ligand or receptor mixed with the biological material is a component capable of binding to the ligand or receptor, and thus to the specific binding site of the pathogen, which forms a complex with the pathogen, preferably a macromolecular complex. Can be. In this case, the ligand or receptor of the pathogen is an antigen, epitope or antigenic determinant. According to the present invention, the reactive ligand or receptor capable of binding, which is mixed with the biological material, is preferably a specific antibody or a fragment of an antibody, which fragment can bind to the ligand or receptor of the pathogen. . Preferably, the biological material of the invention uses an antibody as the ligand or receptor that reacts with the ligand or receptor of the pathogen, wherein the ligand or receptor of the pathogen is an antigen, and thus the antibody / antigen complex as a ligand / receptor complex Is obtained in the manner that is formed. According to the invention, the complex is then removed from the biological material. In a particular aspect of the present invention, the biological material that does not contain a particular pathogen contains a ligand / receptor complex, preferably an antibody / antigen complex, by allowing a solution to penetrate (permeate) through a permeable filter. Obtained by removing from the material. Separation of the complex from the solution can also be performed by sedimentation, preferably by density gradient centrifugation. According to the present invention, the antibody or a portion of the antibody capable of binding at least one infectious agent is mixed with a biological material suspected of containing the infectious agent. However, antibodies against some known infectious viruses (eg, HAV, HBV, HCV, HDV, HEV, HGV, HIV, CMV or parvovirus) or molecular pathogens (eg, prions) can also be added. The addition of the antibody can be effected by adding the immunoglobulin-containing solution to the protein-containing solution, or by adding the immunoglobulin in excess (and thus at a neutralizing concentration) to remove potential pathogens in free form. It is possible to eliminate the dangers still present in the biological material. However, it has also been found within the scope of the present invention that the addition of non-neutralizing concentrations of antisera can completely and fully deplete pathogens from biological material. Thus, the ligand or receptor, especially the antibody, is added at a non-neutralizing concentration, but at a concentration sufficient for the pathogens present to form a complex and be completely removed from the biological material by the separation step. Is preferred. In some cases, aggregates of various sizes may happen to form, and small aggregates that can pass freely through the filter or whose sedimentation concentration is insufficient for their separation from biological material Could be done. In another aspect of the invention, therefore, to improve the separation of the ligand / receptor complex, the aggregation of the complex is increased by adding an additional aggregating agent to the biological material in addition to the immunoglobulin-containing solution. . This additional aggregating agent further agglutinates free pathogens or increases ligand / receptor complex formation. This may be a lectin, one or more complement components, conglutinin, rheumatoid factor, a non-toxic, water-soluble synthetic polymer, especially polyethylene glycol, or albumin (at least 10%, preferably 20%) or other known in the prior art. Can be performed by adding a coagulant such as The flocculant is preferably added to form an antigen / antibody complex of a size observable under light microscopy. The biological material of the invention is particularly characterized in that it is absolutely free of certain viral pathogens from both lipid enveloped-viruses and non-envelope viruses. They include specific viruses such as HAV, HBV, HCV, HGV, HIV, HEV, HDV, CMV or parvovirus. Certain antibodies, which are suitably used as ligands or receptors, can recognize and bind to the corresponding antigen on the surface of each virus, so that each virus (antibodies against it are available or specific antibodies against it) Can be prepared or contained in an immunoglobulin solution or isolable from the latter), which can be removed according to the present invention from biological material. it can. Viruses which have not yet been identified in this way as well as known viruses, for which an immunoglobulin-containing solution is available, are complexed, optionally completely neutralized, and the biological complex To separate the antibody / antigen complex from the microorganism and thus recover safe and pathogen-free biological material. In the past few years, special attention has also been paid to the transmission of potentially infectious pathogens such as prions. At present, there are only a few methods available to reduce the pathogen of Creutzfeldt-Jakob disease (Creuzfeld-Jakob disease) or BSE (bovine spongiform encephalopathy "mad cow disease"). (1991, Horm. Res. 35: 161-166) proposed a combination of ultrafiltration and 6M urea for depletion of so-called "slow viruses". However, they do not provide any detailed description of how the biological activity of the protein thus treated was adversely affected. However, due to treatment with high concentrations of protein-denaturing urea, it is presumed that the proteins in the solution thus treated are at least partially denatured and thus inactivated. In yet another aspect, thus, the biological material of the present invention also does not contain molecular pathogens, such as, for example, BSE or pathogens of Creutzfeldt-Jakob disease, especially prions. Antibodies specific to these pathogens can be prepared or, in particular, immunoglobulin-containing solutions containing anti-β-amyloid antibodies can be obtained. By adding an immunoglobulin-containing solution containing an anti-β-amyloid antibody to the biological material, potential molecular pathogens can also bind into the complex and remove the complex from the biological material. . Since the separation of the ligand / receptor complex, ie, the separation of the complexed pathogen, is independent of the physicochemical properties of the virus, it has a physicochemical property unaffected by the virus depletion method, a virus-safe and Pathogen-free biological material is obtained. In the conventional inactivation method, it is known that the product itself is affected by addition of a chemical substance or heat treatment unless appropriate measures such as addition of a stabilizer are taken. Depleting a pathogen by forming a complex with a ligand or receptor and separating the complex from biological material without physicochemical treatment requires efficient removal of the pathogen and the There is a great advantage that the shape is not affected. The biological material obtained in this way contains a protein which has properties corresponding to those of the original protein in the starting material before the depletion step and whose activity remains unchanged. Furthermore, the possibility of forming denatured proteins, which have to be separated again from the protein solution in extra complicated purification steps, as in certain virus inactivation methods, is also avoided. Of course, upon depletion of the pathogen from the biological material, the resulting pathogen-free material can be subjected to further purification steps to remove associated proteins that would be undesirable in the final product. For this purpose, it is possible to carry out all methods known in the prior art, such as, for example, chromatography, in particular ion exchange chromatography or affinity chromatography, or gel filtration. Separation of ancillary proteins from the biological material of the invention, eg, separation of blood factors from fractions that have been determined for the preparation of immunoglobulin-containing preparations, may also be performed prior to virus depletion. However, it is preferred that the depletion of the pathogen from the biological material be carried out prior to the chromatographic separation of the associated proteins. That is, apart from the purification effect, the chromatographic method allows for the further removal of complexed pathogens and ligands and receptors that may initially be mixed with biological material and still remain. Because it is possible. The biological material obtained according to the present invention is characterized in that it is safe, in particular, free of certain viral and molecular pathogens, since the pathogen has been substantially completely removed from the biological material. . In this case, the phrase "completely" means that the reduction factor in the depletion of pathogens in biological material by this method has achieved at least about 7 log steps-a bacteria-proof filter. ) Means-. Preferably, the separation is performed with a capacity of> 7 log steps, preferably> 9 log steps, particularly preferably> 10 log steps. According to the United States Pharmacopeia (1995, USP 23, NF 18: 1978-1980), the retention capacity of a filter is described by a log reduction value (RF). For example, 10 7 The retention capacity of a 0.2 μm sterile filter capable of retaining at least 7 microorganisms is at least 7 log steps. In this case, this amount is considered to be that the virus was completely separated by the filter. Since the antibody-containing hyperimmunoglobulin solution is optionally mixed in excess with the biological material to form a complex of any free infectious agent, the biological material of the present invention sometimes forms a complex. It also contains the free form of the antibody. When the antibody / antigen complex is separated from the biological material by filtration or sedimentation, the pathogen-free biological material also contains anti-HAV, anti-HCV, anti-HBV or anti-parvovirus specific antibodies. there is a possibility. Free virus is no longer present in the biological material, since the excess ligand or receptor, respectively, is contained or added to the biological material and binds to the pathogen to form a complex, Separation of the (complexed) pathogen is performed by either filtration or sedimentation, and neither the free form of the pathogen nor the pathogen complexed with the ligand / receptor enters the filtrate. The filtrate containing the biological material thus obtained according to the invention does not contain pathogens in uncomplexed and free form but also contains pathogens present in a complex with a ligand such as an antibody. I haven't. The pathogen-free biological material obtainable according to the invention is a plasma fraction, an immunoglobulin-containing plasma fraction, factor II, factor VII, factor VIII, factor IX, factor X, factor XI, protein C, protein S. , Plasma protein-containing fractions containing blood factors such as vWF, concentrates containing one of the above blood factors, supernatants of hybridoma cell lines, on cell cultures of transformed or infected mammalian cells It may be purified, or an extract from animal or human tissues. In another aspect, the present invention provides a method for depleting viral and molecular pathogens from biological material and a method for recovering safe biological material free of viral and molecular pathogens. The method is particularly useful in that at least one receptor or ligand contained in a biological material (suspected for the presence of a particular antigenic pathogen) reacts with the receptor or ligand of the pathogen, thereby causing the ligand / receptor of the complexed pathogen It is characterized in that a complex can be formed. Preferably, a ligand or receptor that reacts with the receptor or ligand of the pathogen is added to the biological material. The ligand / receptor complex that can be formed is then removed from the biological material by a method that partially or completely separates the complexed pathogen. By complexing the free pathogen with the ligand in the complex, an increased complexed pathogen partial, which is denser or has a higher sedimentation coefficient than the free pathogen, is obtained. Can be In addition, because the complex is a higher aggregate than the free pathogen, the diameter of the complexed pathogen is expanding due to its high aggregability and the ability to pass through certain membrane filters is altered. Thus, the method of the present invention for depleting pathogens and recovering pathogen-free biological material involves forming complexes with pathogens and ligands / receptors to increase density or sedimentation properties due to increased aggregation. , Performed by increasing the diameter. The complexed pathogen thus altered is separated from the biological material. In a preferred embodiment of the invention, the separation of the ligand / receptor-pathogen-complex is carried out by passing the complex through a permeable filter which is selectively retained on the filter. According to the present invention, the exclusion size of the filter may be, for example, a size such that high molecular weight proteins such as factor VIII, vWF or immunoglobulins can freely pass through the filter. Choose a size that does not predict clogging of the filter holes. Of course, the exclusion size of the filter does not exceed the highest possible aggregate size of the ligand / receptor complex, in particular the antibody / antigen (pathogen) complex. Otherwise, a high molecular weight, high density pathogen / antibody complex will pass through the filter and enter the filtrate. Thus, nanofilters are suitable for the practice of the present invention. In particular, nanofilters with a nominal exclusion size of 35 to 100 nm are preferred. This excluded size allows high molecular weight proteins to pass freely through the filter, while at the same time they retain uncomplexed pathogens> 100 nm in diameter as well as pathogen complexes of such size. In addition, the use of filters of average exclusion size avoids clogging, which may be caused by high molecular weight proteins and other components that may be present in the biological material, reducing the filter's ability to pass. Also, when tangential flow filtration is employed, a slight pressurization may be required for the liquid to pass through the filter, which may cause the filter to be adversely affected or cracked by the applied pressure. Is reduced. Efficient with respect to the end product, apart from mild pathogen depletion, the use of nanofilters with an exclusion size of ≧ 35 nm to carry out the method of the invention is less than using nanofilters with a smaller exclusion size However, there is an advantage that the cost of the filter is reduced. This makes the method interesting, especially in large industrial scale applications. However, it is also possible to use filters with an exclusion size of> 100 nm in carrying out this method. However, in this case, in advance, a very large pathogen-ligand complex or antibody / antigen aggregate, respectively, is formed, or the ligand / receptor complex becomes sufficiently large, if desired with an aggregating agent, You must make sure that does not pass through the filter. The conditions can of course be selected so that antigen / antibody aggregates up to a visually observable size retained by conventional sterile filters are formed. In principle, the smaller the reject size of the filter, the more expensive it is to manufacture. Within the scope of the present invention, filters with a nominal exclusion size of 0.04 μm to 3 μm can also completely separate pathogens complexed according to the invention from biological material. Thus, according to the present invention, a ligand / receptor complex is formed that has reached the size of the visible range (eg, with a light microscope). In another aspect of the invention, separation of the ligand / receptor complex can be performed by sedimentation. Preferred is density gradient centrifugation. According to the method of the present invention, the ligand or receptor mixed with the biological material is a ligand or receptor, ie, a component capable of binding to a specific binding site of a pathogen, wherein the component is a complex with the pathogen, preferably a complex with the pathogen. It is a component that can form a molecular weight complex. The ligand or receptor of the pathogen may be an antigen, an epitope or an antigenic determinant. Preferably, the reactive ligand or receptor capable of binding, mixed with the biological material and reacting with the ligand or receptor of the pathogen is an antibody or an antibody fragment capable of binding. Antibodies can be of any subclass, but subclasses IgG and IgM are particularly preferred. However, ligands or receptors include any known components that can bind to the receptor or ligand of the pathogen and form a high molecular weight complex with the pathogen. By adding a receptor or ligand capable of binding to a pathogen that may be present in the biological material, the pathogen and ligand / receptor result in a high molecular weight complex that exhibits high aggregation. According to one aspect of the method of the present invention, an immunoglobulin-containing solution containing a specific antibody against an infectious human pathogen is mixed with a biological material, preferably a protein-containing solution, whereby the biological material is mixed with the biological material. Form an antibody / antigen complex between the pathogen and the antibody, which may be present in the organism. In another aspect of the method of the invention, the aggregation of the ligand / receptor-pathogen complex is further increased to form a denser, larger diameter complex. This is furthermore according to the invention that flocculants, in particular lectins such as, for example, concanavalin A, lysine, fascin, or one or several complement components, conglutinin, rheumatoid factors or synthetic polymers such as, for example, polyethylene glycol or albumin Is performed by adding The flocculant may be added to the biological material at the same time as the ligand or receptor that reacts with the pathogen, or after a predetermined period or time after its addition. However, it is preferred to add the aggregating agent at a time lag after adding the immunoglobulin solution. In this way, agglutinin (agglutinin) or conglutinin (agglutinin) reacts with the antibody and does not agglomerate or complex it, but only the pathogen / antibody complex already formed into the high molecular weight complex. That is certain. This also ensures that a higher aggregate density (concentration) is achieved by further aggregation, making removal of the complex from the biological material more efficient. The higher degree of complexation of the antigen / antibody-aggregate allows even membrane filters, even those with a higher exclusion size, preferably ≧ 35 nm, to be used in the separation step. The higher the density of the aggregated particles, the easier it is to improve the separation by sedimentation since any complexed (complex form) pathogens are included. By adding immunoglobulin-containing solutions or ligands or receptors that react specifically with pathogens, both viral and molecular pathogens can be depleted from biological material, regardless of their physicochemical properties It is. This is especially true for viral or molecular pathogens that could not be depleted or inactivated by conventional methods. As described above, also, there is no small lipid envelope such as parvovirus or HAV, and conventionally, any of physicochemical inactivation methods such as S / D treatment and nanofiltration can be used for highly concentrated protein solutions or high molecular weight proteins. Viruses that cannot be efficiently removed or inactivated from a solution containing (> 150 kD) are also included in the method of the present invention. Thus, the method of the present invention may be used to deplete any viral and molecular pathogens that can contaminate biological material, especially lipid envelope-viruses and non-lipid envelope-viruses, such as HAV, HBV, HCV, It is applicable to depletion of prions as well as HIV, HEV, HDV, HGV, CMV or parvovirus. The method of the invention is particularly suitable for depleting pathogens in biological material and for recovering biological material containing high molecular weight proteins such as immunoglobulins or vWF. The present invention also provides a pathogen-free, virus-safe plasma protein-containing composition obtainable by the method of the invention, wherein said plasma protein has an activity of at least 80% of the starting material. I do. In a specific aspect of the present invention, in performing the method of the present invention, an antibody obtained from a high immunoglobulin solution or a supernatant of a hybridoma cell line is used as a ligand. An immunoglobulin-containing solution will be obtained from donor plasma containing high titers of antibodies to a particular pathogen. These are in particular obtained from donors containing anti-HCV, anti-HAV, anti-HBV, anti-HIV, anti-HEV, anti-HDV, anti-HGV, anti-CMV or anti-parvovirus antibodies. It is an immunoglobulin solution. Antibody-containing solutions can also be prepared by biotechnological techniques, such as in hybridoma technology. In this method, a monoclonal antibody against the antigen of the particular pathogen is secreted from the hybridoma cell line into the culture medium supernatant, and the antibody is then isolated from the supernatant in a high titer solution. The immunoglobulin-containing solution recovered from the donor plasma may also contain free viruses and other pathogens from which the antibodies in the solution have been raised. This is equally true for monoclonal antibodies obtained with the hybridoma technology, a method which does not eliminate contamination by viral pathogens. In a particular embodiment of the method of the invention, the hyperimmune globulin solution used to carry out the method of the invention is optionally subjected to a virus inactivation and / or virus depletion method. When the immunoglobulin-containing solution contains the antibody at a low titer, the antibody can be concentrated, if desired, and then used as a ligand or receptor in a high-concentration solution. In a particular aspect, the method of the invention is performed using an anti-β-amyloid antibody as the antibody. Anti-β-amyloid antibodies preferably recognize and bind to the structure of the prion surface to form a prion / antibody complex. According to the present invention, specifically, an antibody against prions, particularly a pathogen of Creutzfeldt-Jakob disease, is prepared or an anti-β-amyloid-containing immunoglobulin solution is obtained, and a biological solution that may contain prions is obtained. Mix with ingredients. Upon binding of the anti-β-amyloid antibody to the prion, the low molecular weight prion aggregates into a high molecular weight complex, which can be subsequently separated from the biological material by filtration or sedimentation. In a further particular aspect of the invention, antibodies against HAV, HBV, HCV, HIV, HGV, HEV or parvovirus are used as ligands or receptors. To carry out the method according to the invention, a solution containing immunoglobulins containing antibodies against a particular virus is mixed with the biological material. However, a mixture of antibodies or other ligands for various pathogens that may contaminate the biological material may also be mixed. Upon addition of at least one immunoglobulin solution for a particular pathogen or a mixture of solutions containing antibodies to various pathogens, the mixture of the biological material and the immunoglobulin solution is incubated for a period of time to allow antigens of the pathogen to be present. And the antibody is allowed to form a complex, and then the complex formed as described above is separated from the biological material. The method of the present invention can be used for depletion of viral and / or molecular pathogens in biological material. Biological materials include plasma fractions, immunoglobulin-containing plasma fractions, blood factors such as factor II, factor VII, factor VIII, factor IX, factor X, factor XI, protein C, protein S, and vWF. A plasma protein-containing fraction, a concentrate containing one of the above blood factors, a supernatant of a hybridoma cell line, a cell culture supernatant of a transformed or infected mammalian cell, or an animal or human tissue Extract from the plant. The parameters in practicing the present invention are adapted to the type and nature of the biological material, respectively, and the type and nature of the contaminating pathogen that may be present. Thus, the formation of the ligand / receptor complex for the aggregation of the pathogen is carried out under the optimal conditions for the complexation, especially under the optimal conditions for the binding between the receptor and the ligand or the antibody and the antigen for the receptor, respectively. Do with. Optimum parameters, such as pH, temperature, incubation time, etc. in the practice of the method of the invention, will be known to those skilled in the art by the type of pathogen, the specificity of the ligand or receptor (antibody) to be mixed, and the nature of the biological material ( (Purity of the solution, concentration of the protein in the solution) can be determined based on ordinary general knowledge. The permeable filter used when the ligand / receptor complex is removed from the biological material in the filtration step is such that the biological material can pass freely but the ligand / receptor complex is selectively retained on the filter. Use a reject size. Both the filtrate and the concentrate are analyzed for the presence of virus or excess specific antibody to ensure that any free pathogen present in the biological material has formed a complex with the antibody. The rate of pathogen depletion from biological material can be determined by virus titration on filtrates and concentrates, or by determining the gene copy number or genomic equivalent of each particular virus, for example, by Dorner et al. (1994, 1994). 25, H It is measured by measuring by quantitative PCR. In still another aspect of the present invention, the biological material obtained by the method of the present invention is analyzed for the presence of ligands / receptors, particularly specific antibodies (existence of excess). The presence of free antibodies in biological material is due to the fact that unbound and unconjugated antibodies have a lower density and molecular size than conjugated antibodies when antibodies to a particular pathogen are added in excess. It is also a criterion that the concentration of the antibody in the solution was sufficient to form a complex with the free pathogen. The presence of an excess of the ligands or receptors used may result in known amounts of viral or molecular pathogens having ligands or receptors specific for the antibody before and after pathogen depletion of biological material. It is determined by passing the biological material containing the antibody / pathogen complex thus recovered in addition to the sample again through a permeable filter and measuring the amount of pathogen remaining in the filtrate. Whether the antibody content of the immunoglobulin solution used for depletion in this way was sufficient to form a complex with the pathogen and whether non-complexed antibodies were present in the filtrate, i.e. in the final product Can be determined. The methods of the present invention for depleting viral and molecular pathogens, and for recovering pathogen-free biological material may be performed by any known virus inactivation method, such as heat treatment, pasteurization or S / D. Can be combined. Preferably, the inactivation method is applied prior to carrying out the method of the invention, so that viruses which are not controllable for the inactivation method are removed by the method of the invention. In another aspect, the present invention provides a virus-inactivated immunoglobulin solution containing a specific antibody against a viral or molecular pathogen as a ligand for complexing the viral or molecular pathogen in the method of the present invention. I do. The method of depleting viral and / or molecular pathogens of the present invention is particularly useful for identifying specific pathogens that exist in both free, non-complex and bound forms, and in complex and aggregate forms. It can be used for recovery and preparation of biological material that does not contain. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but these examples do not limit the present invention. Applicants currently believe that Example 1 is the best mode for carrying out the present invention. Example 1: Depletion of HAV by HAV-specific antibody followed by nanofiltration 98 ml of antibody-free 2% human serum albumin solution and 2% human immunoglobulin containing hepatitis A virus (HAV) -specific antibody 98 ml of the solution was spiked with high titer HAV. Virus titers were measured on portions of both solutions. The solutions were then subjected to tangential flow filtration at an initial pressure of 0.8 bar for 4 hours. 0.001m Two A / 35 nm filter (Planova 35N, Asahi) was used. HAV titration was performed according to the method of Barrett et al. (J. Med. Virol. (1996), Vol. 49: 1-6). Virus titers were determined by serial 対 log dilution in cell medium. 100 μl of each serial dilution was added to each well at 1 × 10 Four Eight wells of a microtiter plate containing FRhk-4 cells were placed. The plate was then incubated for 14 days at 37 ° C. Seven days later, the medium was changed. After this incubation period, the cytopathic effect (CPE) was determined microscopically. TCID based on number of wells in CPE positive microtiter plate 50 It was determined. The efficiency of the virus depletion method was determined by ECCommitee for Proproetary Medicine (Commision of the European Communities (1991): Ad hoc Working Party on Biotechnology / Pharmacology-Note for Guidance (Validation of Virus Removal and Inactivat ion Procedures) III / 8115/89 -EN) as a reduction coefficient (RF) determined according to the following equation. 10 RF = [(Volume of sample before treatment) x (virus titer before treatment)] ÷ [(volume of sample after treatment) x (virus titer after treatment)] Predicted from virus size (diameter 25-30 nm) As noted, without the HAV-specific antibody, HAV was not retained by filtration through membranes above 35 nm. However, from samples containing immunoglobulin solutions with HAV-specific antibodies, complete virus removal was achieved by filtration through a 35 nm membrane (RF> 5.2), and the virus was detectable during filtration. Instead, up to 100% of the virus was retained in the concentrate (Table 1). Table 1: Effect of specific antibodies on depletion of hepatitis A virus by 35 nm nanofiltration Example 2: Depletion of parvovirus by anti-parvovirus-specific antibody followed by nanofiltration Rabbit antiserum to parvovirus "minute mouse virus (MMV ATCC VR1346)" is complexed with this virus Was formed to test whether the virus could be retained on a membrane of 35 nm or more. Rabbit antiserum was obtained by inoculating animals with concentrated, formalin-inactivated MMV product and complete Freund's adjuvant, followed by immunization 4 weeks after the first immunization by booster treatment with incomplete Freund's adjuvant. Four weeks after the second immunization, blood was collected for serum preparation. 98 ml of a 2% human immunoglobulin solution was spiked with 2 ml of the MMV suspension. 0.005, 0.05, 0.5, 0.5 and 5.0 ml of anti-MMV serum were added and each mixture was filtered under the conditions described in Example 1. Virus-Spiked starting material, concentrate (diluted to original concentration), and sample of filtrate were titrated, A9 cells (ATCC CRL6319) were used for virus propagation, and 7 days were selected as incubation time, except that Standard TCID as described in 1. 50 It was measured by a test method. As expected from the virus size (18-24 nm in diameter), MMV was not retained on the 35 nm filter without the addition of antiserum, and was observed 100% in the filtrate (R.F., -0.1). ). Addition of 5 ml of MMV-specific antiserum completely neutralized the infectivity of the virus and no virus was detected in either the filtrate or the concentrate. Moreover, even with the addition of a non-neutralizing concentration (0.5 ml) of antiserum, complete removal of the virus was achieved by filtration (RF,> 6.9) and no virus was detected in the filtrate. Was. Even at a lower concentration of MMV-specific antiserum (0.05 ml), a large amount of MMV was removed similarly by filtration (R.F., 4.4) (Table 2). Table 2: Effect of specific antibodies on parvovirus depletion by 35 nm nanofiltration Example 3: Depletion of HCV by anti-HCV-antibody followed by nanofiltration Addition of HCV-specific antibody to a suspension of hepatitis C virus (HCV) prevents virus from passing through a 35 nm filter membrane The possibility of doing this was tested. Plasma without anti-HCV antibodies highly contaminated with HCV was used as starting material for the high titer virus stock. About 250 ml of plasma was clarified using a Beckmann centrifuge (Rotor JA10; 20 minutes, 10,000 rpm). The supernatant was ultracentrifuged (55,000 rpm) for 2.5 hours in a Ti rotor. After resuspending the pellet in PBS and blood (about 10 ml) and pooling, the copy number of the HCV genome was determined. Determined by quantitative PCR as described in 44). 95 ml of a 2% human immunoglobulin solution was spiked with 2.5 ml of the concentrated virus stock. 5 ml of a 10% human immunoglobulin solution containing antibodies to HCV but no HCV genomic equivalent (this was confirmed by quantitative PCR) or 5 ml of PBS as a control was mixed. Both samples were subjected to tangential flow filtration under the conditions described in Example 1. The HCV gene copy number of the filtrate and concentrate (diluted to original volume) in the sample of HCV-spike starting material was determined as described above. Upon addition of anti-HCV specific immunoglobulin, complete removal of virus from the filtrate was achieved by filtration through a 35 nm or greater filter (R.F.> 3.0). On the other hand, no substantial HCV depletion was achieved in the control mixture (RF: 1.4) (Table 3). Table 3: Effect of specific antibodies on depletion of hepatitis C virus by 35 nm nanofiltration Example 4: Depletion of HAV by immunoglobulin solutions with different anti-HAV-antibody titers A series of different immunoglobulin-containing solutions (lots) with HAV antibody titers between 1.5 units / ml and 11 units / ml. And a HSA solution containing no HAV-specific antibody as a control was spiked with a titer HAV. Next, both solutions were subjected to tangential flow filtration in a total volume of 250 ml as described in Example 1, and the virus titers of the concentrated solution and the filtrate were measured. The results of HAV depletion are shown in Table 4. Table 4: Depletion of hepatitis A virus (HAV) by 35 nm nanofiltration * : The reduction coefficient was measured according to the CPMP guideline (CPMP / BWP / 268/95). Also, with immunoglobulin solutions with lower HAV antibody titers, a reduction factor of> 6 log steps is possible. No improvement in virus depletion was achieved with solutions with nearly 10-fold higher antibody titers. Thus, reproducible HAV depletion, at least within the range tested, is possible regardless of the titer of the specific antibody. Example 5: Virus depletion capacity of HAV-antibody containing solution To test the virus depletion capacity of the antibody containing solution, the filtrate obtained according to Example 4 was re-spiked with HAV and still remains in the filtrate Each of the antibodies' virus depleting capacity or reduction factor was determined. Table 5 summarizes the HAV depleting ability of the respike filtrate from low to high titer immunoglobulin solutions. Table 5: Depletion of hepatitis A virus (HAV) by 35N-nanofiltration after re-spike with HAV * : The reduction coefficient was measured according to the CPMP guideline (CPMP / BWP / 268/95). Even low antibody titers (1.5 U / ml) of immunoglobulin-containing starting material indicate that enough antibody is still present to allow another five or more logarithmic steps of depletion. In comparison, the ability of high titer antibody solutions to deplete viruses is only marginally higher. It is possible to achieve virus depletion at a total reduction factor of at least 11 log steps, which is the sum of the depletion rates by the first and second virus spikes. Example 6: Depletion of parvovirus by immunoglobulin solution containing anti-parvovirus antibodies A series of immunoglobulin products (lots) were tested for parvovirus B19-specific antibodies. ELISA showed different lots of antibody titers between 1: 400 and 1: 800. Two separate lots with a titer of B-19 specific antibody of only 1: 400 were spiked with a high titer virus stock of parvovirus B19 and the titers of both solutions were determined by quantitative PCR. The measurement by quantitative PCR was performed using the following pair of parvovirus-specific primer sets according to the description in EP-0714998. * : Number follows the description of the master sequence PARPVBAU (EMBL data bank). Plasmid pParvo-wt, containing the parvovirus-specific sequence of nucleotides (nt) 1127-1550 (according to the numbering described in (Shade et al. (1986) J. Virol. 58: 9211)), was used as a verifier. Plasmids pParvo-15 and pParvo + 21 were used as internal standards. pParvo-15 deletes the 35 bp fragment of nt1455-1489 and inserts a double-stranded oligonucleotide made from primers 5'GTT CCA GTA TAT GGC ATG GTT 3 'and 5'ACC CAT GCC ATA TAC TGG AAC 3' Thus, it was prepared. pParvo + 21 was obtained by duplication of bp 1468-1487 between nt1453 and 1454. After amplification using parvovirus-specific primers, the length of the PCR product was 177 bp (wt), 162 bp (-15) or 198 bp (+21), respectively. Each of the mixtures was filtered under the conditions described in Example 1. The titers in the samples of virus spiked starting material, concentrate (diluted to original volume), and filtrate were determined by quantitative nucleic acid amplification (PCR). Table 6 shows the measurement results of the titers. Excellent depletion of about 6 logarithmic steps has been achieved. Table 6: Depletion of hepatitis A virus (HAV) by 35 nm nanofiltration * : The reduction coefficient was measured according to the CPMP guideline (CPMP / BWP / 268/95). Example 7: Virus depleting capacity of anti-parvovirus B19-antibody containing solution To test the virus depleting capacity of the antibody containing solution, the filtrate obtained according to Example 6 was respiked with parvovirus and the filtrate The virus depleting capacity or the reduction factor of the antibody still remaining in each was determined. Table 7 shows the parvovirus depletion capacity of the re-spiked filtrate from an immunoglobulin solution containing a 1: 400 antibody titer. Table 7: Depletion of B-19 parvovirus by 35N-nanofiltration after respike with parvovirus * : The reduction coefficient was measured according to the CPMP guideline (CPMP / BWP / 268/95). It was shown that enough antibody was still present in the filtrate to achieve an additional 5 log steps of depletion. Summing the depletion rates and reduction factors due to the first and second spikes, virus depletion with a total reduction factor of at least 11 log steps is achieved according to the method of the present invention, which comprises Corresponding to the complete removal of the pathogen. Thus, the system is suitable for application on an industrial scale and ensures that a protein-containing solution free of infectious agents is obtained. Example 8: Depletion of parvovirus using filters of various exclusion sizes In Example 1, complete depletion of pathogens was achieved by adding a non-neutralizing concentration of antiserum followed by nanofiltration through a 35 nm or greater membrane. It has already been proven to be achieved. To test whether a higher exclusion size filter is also suitable for removing antigen-antibody complexes, a parvovirus with a nominal exclusion size deep bed filter between 0.04 μm and 3 μm was used. The ability to retain MMV "minute mouse virus" was tested. 196 ml of a 2% IgG solution was spiked with 4 ml of a MM virus titer and then mixed with rabbit anti-MV MV serum. As a control, a spiked gamma globulin solution containing no specific anti-MMV serum was used. The mixture was filtered through different deep bed filters with nominal exclusion sizes of 3 μm, 0.5 μm, 0.3 μm and 0.04 μm at a flow rate of 50 ml / min. The virus titer in the starting material and the filtrate was determined. The results are summarized in Table 8. Table 8: Depletion of parvovirus MMV by conventional deep bed filtration of immunoglobulins According to the method of the present invention, depletion of more than 5 logarithms is possible even with a filter having an exclusion size of 3 μm, and a filter of about 0.04 μm was used when no ligand forming a complex with a pathogen was added. Only when was a significant decrease obtained. Example 9: Effect of rheumatoid factor on poliovirus depletion To examine the effect of adding agglutinin, which increases the size of the complex, on the efficiency of depletion, immunoglobulins spiked with rheumatoid factor as agglutinin or agglutinin Added to the solution. 85 ml of a 2% immunoglobulin solution was spiked with 5 ml of a product containing a high titer of type 1 poliovirus. 10 ml of a product containing a rheumatoid factor with a titer of 800 U / ml was added to the mixture. As a control, the one to which 10 ml of buffer was added instead of rheumatoid factor was used. Both mixtures were filtered through a 35N membrane as described in Example 1 and the virus titers of the concentrates and filtrates were determined. Virus titers were measured using VERO cells and TCID 50 Performed by law. Table 9 shows the results and reduction factors in the presence and absence of rheumatoid factor. Table 9: Effect of rheumatoid factor on poliovirus depletion and immunofiltration from immunoglobulin solution The results indicate that the rheumatoid factor is combined with a specific anti-poliovirus antibody to complex the virus and is effectively retained by nanofiltration with a 35N filter. Without the addition of a flocculant (rheumatic factor), virus depletion is achieved with a logarithmic step 3.1 reduction factor, but in the presence of rheumatoid factor the reduction factor can be increased to> 7.6. Thus, effective and virtually complete separation of small, non-enveloped viruses from protein solutions has become possible for the first time. Example 10: Effect of Agglutinin or Agglutinin on Poliovirus Depletion by Conventional Deep Bed Filtration The ability of rheumatoid factor in removing high titer poliovirus using a conventional deep bed filter was determined. For such experiments, filters of the type that have proven to be ineffective in depleting poliovirus even in the presence of poliovirus-specific antibodies were used. 85 ml of a 2% gamma globulin solution was spiked with 5 ml of a high titer poliovirus stock and mixed with 10 ml of a 800 units / ml rheumatoid factor solution. As a control, the one to which 10 ml of buffer was added instead of rheumatoid factor was used. Both mixtures were passed through a Seitz BKS-P deep bed filter at a flow rate of 50 ml / min. The virus titer of the starting material was measured before and after filtration. Table 10 shows the results. It was found that poliovirus can be efficiently depleted using a conventional deep bed filter only by adding an agglutinin such as a rheumatoid factor. The reduction factor for depletion by this method resulted in> 7.7 log steps, and without the addition of the rheumatoid factor, only a reduction factor of about 1.1 log steps could be achieved. This clearly demonstrates that mixing lectin-like proteins such as lectin and conglutinin according to the method of the present invention can achieve virtually complete isolation of pathogens using conventional deep bed filters. Table 10: Effect of rheumatoid factor on depletion of poliovirus from gamma globulin solution by conventional Deep Bed filtration Example 11: Measurement of the activity of factor VIII and vWF before and after virus depletion The activity of two plasma factors before and after virus depletion according to the method of the invention was measured. For this, 100 ml of the solution containing the factor VIII / vWF-complex were passed through a Cu omo ZA 90 deep bed filter at a flow rate of 50 ml / min. Factor VIII activity and vWF antigen content in starting material and filtrate samples were measured and vWF multimer analysis was performed. In parallel, the same material was spiked with mouse minute virus (MMV), the specific anti-MMV-antiserum was added and then filtered. The starting material and the virus titer in the filtrate were measured before and after filtration. Table 11 shows the results. The results show that under these conditions,> 6.5 log steps of depletion are achieved. Factor VIII activity and vWF antigen content are each maintained substantially unaffected by this method. Similarly, the vWF multimer pattern proved to be substantially unaffected and maintained (data not shown). Table 11: Measurement of factor VIII and vWF activity before and after filtration Example 12: Measurement of blood factor activity from filtered Cryo-supernatant The cryo (frozen) supernatant of human plasma was spiked with a high titer poliovirus product and applied to a deep bed filter at a flow rate of 50 ml / min. . The activities of Factor VII Factor IX, antithrombin III (ATIII) and C1-esterase inhibitor before and after filtration were measured. Table 12 shows the results. The results show that the method described achieves> 7 logarithmic viral depletion and does not adversely affect the activity of blood factors. Table 12: Measurement of Factor VII Factor IX, ATIII and C1-esterase inhibitor activity before and after filtration

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 39/395 Ｍ Ｃ０７Ｋ 16/08 Ｃ１２Ｎ 7/00 Ｃ０７Ｋ 16/08 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｎ 7/00 37/465 (72)発明者 ドルナー，フリードリッヒ オーストリア、アー―1230ヴィーン、ペー ターリニガッセ17番 (72)発明者 ペルスラー，ゲルハルト オーストリア、アー―1220ヴィーン、ジー モンスガッセ25／12番 (72)発明者 ヘンマーレ，トマス オーストリア、アー―1190ヴィーン、ホー フツァイレ10―12／15／８番──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) A61K 39/395 A61K 39/395 M C07K 16/08 C12N 7/00 C07K 16/08 A61K 37/02 C12N 7 / 00 37/465 (72) Inventor Dorner, Friedrich, Austria, Aar-1230 Wien, Peterlini Gasse No. 17 (72) Inventor Persler, Gerhard Austria, Aar-1220 Wien, Gee Monsgasse 25/12 (72) Inventor Hemmare, Thomas Austria, Ar-1190 Vienna, Hofziele 10-12 / 15/8

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １．特定の病原体を含有しない生物学的材料であって、生物学的材料中に含まれ る特定の病原体のレセプター又はリガンドとリガンド又はレセプターとを反応さ せてリガンド／レセプター複合体を形成させ、複合体を形成した病原体を生物学 的材料から部分的又は完全に分離し得る方法でそのリガンド／レセプター複合体 を分離することにより得ることができる生物学的材料。 ２．生物学的材料を、特定の病原体のレセプター又はリガンドと反応する少なく とも１つのリガンド又はレセプターと混合することを特徴とする、請求項１記載 の生物学的材料。 ３．病原体のリガンド又はレセプターが抗原であり、病原体のリガンド又はレセ プターと反応するリガンド又はレセプターとして抗体を用いることにより、リガ ンド／レセプター複合体として抗体／抗原複合体を形成させることによって得ら れる請求項１又は２記載の生物学的材料。 ４．リガンド／レセプター複合体を、透過性フィルターを貫通させて分離するこ とにより得られる請求項１〜３のいずれかに記載の生物学的材料。 ５．リガンド／レセプター複合体の分離を、沈降により行うことで得られる請求 項１〜３のいずれかに記載の生物学的材料。 ６．リガンド／レセプター複合体の分離を、密度勾配遠心分離法により行うこと で得られる請求項５記載の生物学的材料。 ７．リガンド／レセプター複合体の分離を改善するために、凝集素、特にレクチ ン、補体成分、コングルチニン、リウマチ因子、又は非毒性、水溶性合成ポリマ ー、特にポリエチレングリコールによりさらに凝集を起こすことで得られる請求 項１〜６のいずれかに記載の生物学的材料。 ８．ウイルス性及び分子性病原体ならびに病原体の凝集物及び複合体を含有せず 安全なことを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の生物学的材料。 ９．ウイルス性病原体がＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＩＶ、ＨＥＶ、ＨＤＶ、Ｈ ＧＶ、ＣＭＶ及び／又はパルボウイルスである請求項７記載の生物学的材料。 １０．ＨＡＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ及び／又はパルボウイルスに対して特異的な抗体 を含有していることを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の生物学的材料 。 １１．血漿画分、例えば因子ＩＩ、因子ＶＩＩ、因子ＶＩＩＩ、因子ＩＸ、因子 Ｘ、因子ＸＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、ｖＷＦなどの血液因子を含有する 血漿タンパク含有画分、該血液因子の１つを含有する濃縮物、免疫グロブリン含 有血漿画分、ハイブリドーマ細胞系の上清、形質転換された又は感染した哺乳動 物細胞の細胞培養物上清、又は動物又はヒト組織の抽出物であることを特徴とす る請求項１〜９のいずれかに記載の生物学的材料。 １２．ウイルス性及び分子性病原体を枯渇化し、病原体を含有しない安全な生物 学的材料を回収する方法であって、ある生物学的材料中に含まれる病原体のレセ プター又はリガンドとリガンド又はレセプターとを反応させ、可能な複合体を形 成した病原体のリガンド／レセプター複合体を形成させ、所望により、複合体を 形成した病原体を生物学的材料から部分的又は完全に分離し病原体を含有しない 生物学的材料を回収し得る方法で、そのリガンド／レセプター複合体を分離する ことを特徴とする方法。 １３．生物学的材料を特定の病原体のレセプター又はリガンドと反応する少なく とも１つのリガンド又はレセプターと混合し、可能なリガンド／レセプター複合 体を形成させることを特徴とする請求項１２記載の方法。 １４．リガンド／レセプター複合体が遊離の病原体よりも高密度であるか高い沈 降係数を有することを特徴とする請求項１２又は1３に記載の方法。 １５．リガンド／レセプター複合体が遊離の病原体よりもより高く凝集している ことを特徴とする請求項１２又は１３に記載の方法。 １６．リガンド／レセプター複合体の分離を透過性フィルターを貫通させること により行うことを特徴とする請求項１１〜１５のいずれかに記載の方法。 １７．リガンド／レセプター複合体が透過性フィルターに選択的に保持されるこ とを特徴とする請求項１６記載の方法。 １８．透過性フィルターとしてナノフィルターを用いることを特徴とする請求項 １６又は１７に記載の方法。 １９．透過性フィルターとしてdeep bedフィルターを用いることを特徴とする請 求項１６又は１７に記載の方法。 ２０．リガンド／レセプター複合体の分離を沈降により行うことを特徴とする請 求項１２又は１３に記載の方法。 ２１．複合体の沈降を密度勾配遠心分離法により行うことを特徴とする請求項２ ０記載の方法。 ２２．病原体のリガンド又はレセプターが、抗原、エピトープ、又は抗原決定基 であることを特徴とする請求項１２〜２１のいずれかに記載の方法。 ２３．病原体のリガンド又はレセプターと反応する病原体又はレセプターがアグ ルチニン（凝集素）、抗体、又は結合しうる抗体フラグメント又は抗体の部分で あることを特徴とする請求項１２〜２１のいずれかに記載の方法。 ２４．リガンド／レセプター複合体が抗体／抗原複合体であることを特徴とする 請求項１２〜２３のいずれかに記載の方法。 ２５．さらに、凝集剤、特に例えばコンカナバリンＡ、リシン又はファシンのよ うなレクチン類、又は補体成分、コングルチニン、リューマチ因子、又は例えば ポリエチレングリコールのような無毒で水溶性の合成ポリマー、又はアルブミン の存在下で複合体をさらに凝集させることを特徴とする請求項１２〜２４のいず れかに記載の方法。 ２６．さらに凝集させることにより、複合体をより高密度にし、その結果複合体 を生物学的材料からより効率的に除去することを特徴とする請求項１２〜２５の いずれかに記載の方法。 ２７．ウイルス性又は分子性病原体が脂質包膜−ウイルス及び非−包膜ウイルス 又はプリオンから選択されることを特徴とする請求項１１〜２６のいずれかに記 載の方法。 ２８．病原体が、ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＩＶ、ＨＥＶ、ＨＤＶ、ＨＧＶ、 ＣＭＶ又はパルボウイルス等から選択されることを特徴とする請求項２７記載の 方法。 ２９．高免疫グロブリン溶液又はハイブリドーマ細胞系の上清から得られる抗体 をリガンドとして用いることを特徴とする請求項１２〜２８のいずれかに記載の 方法。 ３０．抗体をウイルス不活化及び／又はウイルス枯渇化法に供すること、及び所 望により濃縮してリガンドとして用いることを特徴とする請求項２９記載の方法 。 ３１．抗体が抗−β−アミロイド抗体であることを特徴とする請求項１２〜３０ のいずれかに記載の方法。 ３２．抗体がプリオンと反応し複合体を形成することを特徴とする請求項３１記 載の方法。 ３３．抗体がＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ、ＣＭＶ、ＨＩＶ、ＨＧＶ、ＨＥ Ｖ又はパルボウイルスに特異的な抗体であることを特徴とする請求項１２〜３２ のいずれかに記載の方法。 ３４．生物学的材料が血漿画分、例えば因子ＩＩ、因子ＶＩＩ、因子ＶＩＩＩ、 因子ＩＸ、因子Ｘ、因子ＸＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、ｖＷＦなどの血液 因子を含有する血漿タンパク−含有画分、該血液因子の１つを含有する濃縮物、 免疫グロブリン含有血漿画分、又はハイブリドーマ細胞系の上清、形質転換され た又は感染した哺乳動物細胞の細胞培養物上清、又は動物又はヒト組織の抽出物 であることを特徴とする請求項１２〜３３のいずれかに記載の方法。 ３５．生物学的材料が、分子量＞１５０ｋＤの高分子量のタンパク質を含有する ことを特徴とする請求項１２〜３４のいずれかに記載の方法。 ３６．生物学的材料が透過性フィルターを自由に通過し、リガンド／レセプター 複合体は保持されることを特徴とする請求項１２〜３５のいずれかに記載の方法 。 ３７．得られた生物学的材料をリガンド、特に抗体の存在に関して分析すること を特徴とする請求項３６記載の方法。 ３８．抗体に対して特異的なリガンド又はレセプターを有する既知量のウイルス 性又は分子性病原体を生物学的材料に混合し、抗体／病原体複合体を含有する生 物学的材料を再度透過性フィルターによりろ過し、ろ液中の病原体の残存量を測 定することを特徴とする請求項３７記載の方法。 ３９．減少係数が少なくとも７対数段階である標的ウイルスを含有せず安全な、 ウイルス−除去生物学的材料を回収することを特徴とする請求項１２〜３８のい ずれかに記載の方法。 ４０．病原体の生物学的材料からの完全な分離が枯渇化率の測定、特に病原体の ゲノム等価物を測定することにより行われることを特徴とする請求項１２〜３９ のいずれかに記載の方法。 ４１．請求項１２〜４０のいずれかの方法においてリガンドとして用いられるウ イルス−不活化免疫グロブリン溶液。 ４２．特定の病原体、ならびに病原体の凝集物又は複合体を含有しない安全な生 物学的材料の製造のための請求項１２〜４０のいずれかに記載の方法の使用。[Claims] 1. Biological material that does not contain a specific pathogen and is contained in the biological material Reacting a ligand or receptor with a specific pathogen receptor or ligand To form a ligand / receptor complex, Ligand / receptor complex in a manner that can be partially or completely separated from the target material Biological material that can be obtained by separating 2. Biological material is reduced by reacting with specific pathogen receptors or ligands. 2. The mixture according to claim 1, wherein the mixture is mixed with one ligand or receptor. Biological material. 3. If the ligand or receptor of the pathogen is an antigen, the ligand or receptor of the pathogen is By using antibodies as ligands or receptors that react with By forming an antibody / antigen complex as an antibody / receptor complex. The biological material according to claim 1 or 2, wherein 4. Separation of ligand / receptor complex by passing through a permeable filter The biological material according to any one of claims 1 to 3, which is obtained by: 5. Claims obtained by separating the ligand / receptor complex by sedimentation Item 4. The biological material according to any one of Items 1 to 3. 6. Separation of ligand / receptor complex by density gradient centrifugation The biological material according to claim 5, which is obtained by: 7. To improve the separation of ligand / receptor complexes, agglutinins, especially lecti , Complement components, conglutinin, rheumatoid factor, or non-toxic, water-soluble synthetic polymers -In particular, claims obtained by further aggregation with polyethylene glycol Item 7. The biological material according to any one of Items 1 to 6. 8. Free of viral and molecular pathogens and pathogen aggregates and complexes The biological material according to any one of claims 1 to 7, which is safe. 9. The viral pathogen is HAV, HBV, HCV, HIV, HEV, HDV, H The biological material according to claim 7, which is GV, CMV and / or parvovirus. 10. Antibodies specific for HAV, HCV, HBV and / or parvovirus The biological material according to any one of claims 1 to 8, comprising: . 11. Plasma fractions such as Factor II, Factor VII, Factor VIII, Factor IX, Factor Contains blood factors such as X, factor XI, protein C, protein S, vWF Plasma protein-containing fraction, concentrate containing one of the blood factors, immunoglobulin-containing Plasma fraction, supernatant of hybridoma cell line, transformed or infected mammal A cell culture supernatant of a target cell, or an extract of an animal or human tissue. The biological material according to claim 1. 12. Safe organisms that deplete viral and molecular pathogens and do not contain pathogens A method for recovering biological material, comprising the steps of retrieving pathogens contained in a biological material. Reacting the ligand or receptor with the receptor or ligand to form a possible complex To form a ligand / receptor complex of the pathogen thus formed, and Partially or completely separate pathogens formed from biological material and are pathogen-free Separating the ligand / receptor complex in a manner that allows biological material to be recovered A method comprising: 13. Reducing biological material with specific pathogen receptors or ligands Mixed with one ligand or receptor, and possible ligand / receptor complex 13. The method of claim 12, wherein the body is formed. 14． If the ligand / receptor complex is denser or higher than the free pathogen 14. The method according to claim 12, wherein the method has a decreasing coefficient. 15. Ligand / receptor complex is more aggregated than free pathogen 14. A method according to claim 12 or claim 13, wherein: 16. Penetrating a permeable filter for separation of the ligand / receptor complex The method according to any one of claims 11 to 15, wherein the method is performed. 17． That the ligand / receptor complex is selectively retained on the permeable filter. 17. The method according to claim 16, wherein: 18. Claims: A nanofilter is used as the permeable filter. 18. The method according to 16 or 17. 19. A contractor characterized by using a deep bed filter as a permeability filter. 18. The method according to claim 16 or 17. 20. A method for separating a ligand / receptor complex by sedimentation. 14. The method according to claim 12 or 13. 21. 3. The sedimentation of the complex is performed by density gradient centrifugation. 0. The method of claim 0. 22. The ligand or receptor of the pathogen is an antigen, epitope, or antigenic determinant The method according to any one of claims 12 to 21, wherein 23. If the pathogen or receptor that reacts with the ligand or receptor With rutinin (agglutinin), an antibody, or an antibody fragment or part of an antibody that can bind A method according to any of claims 12 to 21, characterized in that: 24. The ligand / receptor complex is an antibody / antigen complex A method according to any of claims 12 to 23. 25. In addition, flocculants, especially, for example, concanavalin A, lysine or fascin. Lectins, or complement components, conglutinin, rheumatoid factor, or for example Non-toxic, water-soluble synthetic polymers such as polyethylene glycol or albumin 25. The aggregate according to any one of claims 12 to 24, wherein the complex is further aggregated in the presence of The method according to any of the above. 26. By further aggregating, the composite becomes denser and, as a result, 26. More efficiently removes from biological material The method according to any of the above. 27. If the viral or molecular pathogen is a lipid enveloped-virus and a non-enveloped virus Or selected from prions. The method described. 28. The pathogen is HAV, HBV, HCV, HIV, HEV, HDV, HGV, 28. The method according to claim 27, which is selected from CMV or parvovirus. Method. 29. Antibodies from high immunoglobulin solutions or supernatants of hybridoma cell lines The compound according to any one of claims 12 to 28, wherein is used as a ligand. Method. 30. Subjecting the antibody to a virus inactivation and / or virus depletion method, and 30. The method according to claim 29, wherein the compound is used as a ligand after being concentrated if desired. . 31. 31. The antibody according to claim 12, wherein the antibody is an anti-β-amyloid antibody. The method according to any of the above. 32. The antibody according to claim 31, wherein the antibody reacts with prion to form a complex. The method described. 33. Antibody is HAV, HBV, HCV, HDV, CMV, HIV, HGV, HE 33. An antibody specific for V or parvovirus. The method according to any of the above. 34. The biological material is a plasma fraction, such as Factor II, Factor VII, Factor VIII, Blood such as Factor IX, Factor X, Factor XI, Protein C, Protein S, vWF A plasma protein-containing fraction containing the factor, a concentrate containing one of the blood factors, Immunoglobulin-containing plasma fraction or supernatant of hybridoma cell line, transformed Cell culture supernatant of infected or infected mammalian cells, or extracts of animal or human tissues The method according to any of claims 12 to 33, wherein 35. Biological material contains high molecular weight proteins with molecular weight> 150 kD A method according to any of claims 12 to 34, characterized in that: 36. The biological material is free to pass through the permeable filter and the ligand / receptor The method according to any of claims 12 to 35, wherein the complex is retained. . 37. Analyzing the resulting biological material for the presence of ligands, especially antibodies 37. The method of claim 36, wherein: 38. A known amount of virus having a ligand or receptor specific for the antibody A mixture of biological or molecular pathogens with biological material and containing antibody / pathogen complexes The physical material is filtered again through a permeable filter, and the residual amount of pathogen in the filtrate is measured. 38. The method according to claim 37, wherein 39. Safe without containing a target virus with a reduction factor of at least 7 log steps, The virus-removed biological material is recovered. The method described in any of them. 40. Complete isolation of pathogens from biological material can be a measure of depletion rates, especially The method is performed by measuring a genomic equivalent. The method according to any of the above. 41. C) used as a ligand in the method of any of claims 12 to 40; Ils-inactivated immunoglobulin solution. 42. Safe pathogens that do not contain specific pathogens or pathogen aggregates or complexes Use of a method according to any of claims 12 to 40 for the manufacture of a physical material.
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6221614B1 (en) * 1997-02-21 2001-04-24 The Regents Of The University Of California Removal of prions from blood, plasma and other liquids
US6617119B2 (en) 1997-02-21 2003-09-09 The Regents Of The University Of California Assay for specific strains of multiple disease related conformations of a protein
US6620629B1 (en) 1997-02-21 2003-09-16 The Regents Of The University Of California Method for detecting prions
US6720355B2 (en) 1997-02-21 2004-04-13 The Regents Of The University Of California Sodium dodecyl sulfate compositions for inactivating prions
AU726999B2 (en) * 1997-06-13 2000-11-30 Baxter Aktiengesellschaft Process for reducing the concentration of viral and molecular pathogens in a biological material
DE19752898A1 (en) * 1997-11-28 1999-08-05 Centeon Pharma Gmbh Method for the detection of high concentrations of four in blood plasma and / or blood serum by means of the polymerase chain reaction
US5977324A (en) * 1998-02-20 1999-11-02 The Regents Of The University Of California Process for concentrating protein with disease-related conformation
DE69929986T2 (en) * 1998-08-31 2006-10-19 Ambrus, Julian L. METHOD FOR REMOVING HIV AND OTHER VIRUSES FROM BLOOD
EP1237908A2 (en) * 1999-12-02 2002-09-11 V.I. Technologies, Inc. Ligands for a target molecule and method for identifying them
WO2002062956A2 (en) * 2001-02-02 2002-08-15 Chemocentryx, Inc. Chemomagnetic retrieval of cmv and cmv infected cells
CA2516403C (en) 2003-01-17 2014-08-12 Aethlon Medical, Inc. Method for removal of viruses from blood by lectin affinity hemodialysis

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3896218A (en) * 1972-07-13 1975-07-22 Research Corp Radiommunoassay determining the hepatitis associated antigen content of blood
ZA838856B (en) * 1982-12-02 1984-07-25 Usv Pharma Corp Hepatitis b and non-a-non-b-safe biological products
JPS63243032A (en) * 1987-03-27 1988-10-07 Green Cross Corp:The Method for heat-treating thrombin
EP0477302B1 (en) * 1989-06-15 1995-02-01 SMITH, William I. Jr. Apparatus for inactivating infectious agents in and resisting coagulation of biological fluids
EP0443724B1 (en) * 1990-02-20 1999-03-17 Baxter International Inc. Viral-safe purified human thrombin
EP0447984A1 (en) * 1990-03-20 1991-09-25 Abbott Laboratories Hyperimmune globulin against hepatitis C virus and method for making same
DE4125625C2 (en) * 1991-08-02 1999-12-02 Octapharma Ag Glarus Process for the preparation of virus-inactivated immunoglobulin solutions
DE4142908C2 (en) * 1991-12-24 1994-02-10 Octapharma Ag Glarus Method for producing a virus-inactivated prothrombin complex concentrate (PPSB)
EP0679405A1 (en) * 1994-04-25 1995-11-02 Rotkreuzstiftung Zentrallaboratorium Blutspendedienst Srk Method for separating viruses from protein solutions
AT406019B (en) * 1995-05-08 2000-01-25 Immuno Ag METHOD FOR PRODUCING A MEDICINAL PRODUCT CONTAINING ONE OR MORE PLASMA DERIVATIVES

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