JP2000292428A - 環境化学物質の内分泌攪乱活性の新規測定方法及びその装置 - Google Patents
環境化学物質の内分泌攪乱活性の新規測定方法及びその装置Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 環境化学物質の内分泌攪乱活性の新規測定方
法及びその装置を提供する。 【解決手段】 紫外線照射下で誘導される、男性ホルモ
ンの女性ホルモンへの変換反応を促進する効果を指標と
して被験化学物質の内分泌攪乱活性を測定することを特
徴とする化学物質の内分泌攪乱活性の測定方法、該方法
により内分泌攪乱活性を有する物質をスクリーニングす
る方法、及び該方法に使用する測定装置。
法及びその装置を提供する。 【解決手段】 紫外線照射下で誘導される、男性ホルモ
ンの女性ホルモンへの変換反応を促進する効果を指標と
して被験化学物質の内分泌攪乱活性を測定することを特
徴とする化学物質の内分泌攪乱活性の測定方法、該方法
により内分泌攪乱活性を有する物質をスクリーニングす
る方法、及び該方法に使用する測定装置。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、太陽光の分光、特
に紫外線照射によって誘導される男性ホルモン（雄性ホ
ルモン）の女性ホルモン（雌性ホルモン）への変換反応
を応用した、化学物質、特に環境化学物質等の内分泌攪
乱活性を測定する新規な方法並びにその測定装置に関す
るものであり、更に詳しくは、本発明は、燐酸緩衝液
（ＰＢＳ（＋））、カルモジュリン（calmodulin; calc
ium-dependant modulator protein ）水溶液に男性ホル
モンのテストステロンのエタノール溶液を加えた均一反
応液に紫外線、特に、ＵＶＣを照射してテストステロン
を女性ホルモンのエストラジオール−１７βに変換させ
る新規な変換反応を利用して、該変換反応を促進する効
果を指標として環境化学物質、特に“環境ホルモン”と
称される環境汚染物質等の内分泌攪乱活性を測定する方
法及びその測定装置に関するものである。
に紫外線照射によって誘導される男性ホルモン（雄性ホ
ルモン）の女性ホルモン（雌性ホルモン）への変換反応
を応用した、化学物質、特に環境化学物質等の内分泌攪
乱活性を測定する新規な方法並びにその測定装置に関す
るものであり、更に詳しくは、本発明は、燐酸緩衝液
（ＰＢＳ（＋））、カルモジュリン（calmodulin; calc
ium-dependant modulator protein ）水溶液に男性ホル
モンのテストステロンのエタノール溶液を加えた均一反
応液に紫外線、特に、ＵＶＣを照射してテストステロン
を女性ホルモンのエストラジオール−１７βに変換させ
る新規な変換反応を利用して、該変換反応を促進する効
果を指標として環境化学物質、特に“環境ホルモン”と
称される環境汚染物質等の内分泌攪乱活性を測定する方
法及びその測定装置に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】野性生物の生殖異常や行動異常、化学物
質による環境汚染の進行、ヒトの内分泌系異常及び内分
泌との関係を疑われる健康異常の報告等々から、近年、
世界的に内分泌攪乱化学物質（以下、ＥＤＣと記載する
ことがある。）問題が大きな関心を呼んでいる。しかし
ながら、これまで、生態系異常の調査研究のみが先行
し、その科学的な機序の解明がないまま、機械的に環境
化学物質にその原因を求め、“環境エストロゲン”、
“環境ホルモン”として位置付け、これらのエストロゲ
ン様作用のみ着目して、これらのエストロゲン受容体
（以下、ＥＲと記載することがある。）に対する結合性
による内分泌攪乱活性の評価研究が行われて来た。従っ
て、化学物質の内分泌攪乱活性の測定は、専ら、そのＥ
Ｒに対する結合の強弱に依って来た。
質による環境汚染の進行、ヒトの内分泌系異常及び内分
泌との関係を疑われる健康異常の報告等々から、近年、
世界的に内分泌攪乱化学物質（以下、ＥＤＣと記載する
ことがある。）問題が大きな関心を呼んでいる。しかし
ながら、これまで、生態系異常の調査研究のみが先行
し、その科学的な機序の解明がないまま、機械的に環境
化学物質にその原因を求め、“環境エストロゲン”、
“環境ホルモン”として位置付け、これらのエストロゲ
ン様作用のみ着目して、これらのエストロゲン受容体
（以下、ＥＲと記載することがある。）に対する結合性
による内分泌攪乱活性の評価研究が行われて来た。従っ
て、化学物質の内分泌攪乱活性の測定は、専ら、そのＥ
Ｒに対する結合の強弱に依って来た。
【０００３】その結果、代表的な環境化学物質１５種で
環境エストロゲン活性を示すのは、僅かにＤＥＳ（diet
hylstilbestrol; 合成女性ホルモン）のみという、環境
生態異常研究結果とは著しく不整合な結果を与えている
（Bolger et al., "Rapid screening of environmental
chemicals for estrogen receptor binding capacity"
(1998), Environ. Health Perspect. 106 (in pres
s);）。即ち、これでは、現在、世界中でＥＤＣ候補と
して注目を集めている、ビスフェノールＡ（ＢＰＡ）、
フタル酸エステル類、ノニルフェノール、オクチルフェ
ノール、ＤＤＴ類、Ｄｉｅｌｄｒｉｎ、ＨＰＴＥ等は全
く内分泌攪乱活性を示さないことになってしまう。
環境エストロゲン活性を示すのは、僅かにＤＥＳ（diet
hylstilbestrol; 合成女性ホルモン）のみという、環境
生態異常研究結果とは著しく不整合な結果を与えている
（Bolger et al., "Rapid screening of environmental
chemicals for estrogen receptor binding capacity"
(1998), Environ. Health Perspect. 106 (in pres
s);）。即ち、これでは、現在、世界中でＥＤＣ候補と
して注目を集めている、ビスフェノールＡ（ＢＰＡ）、
フタル酸エステル類、ノニルフェノール、オクチルフェ
ノール、ＤＤＴ類、Ｄｉｅｌｄｒｉｎ、ＨＰＴＥ等は全
く内分泌攪乱活性を示さないことになってしまう。
【０００４】本発明者らは、ＥＤＣに関し鋭意研究を続
けた結果、１９７０年代から出現し始めた大気汚染物質
によるオゾンホールに起因する、その地表照射量が急増
しているいわゆる殺菌光線と別称される高エネルギー短
波長紫外線ＵＶＣ（２５４ｎｍ）が、生体液モデル中の
男性ホルモン、テストステロン、を女性ホルモンのエス
トラジオール−１７βに有意に変換させる（以下、Ｔ／
Ｅ変換と記載することがある。）ことを世界で始めて見
出した。更に、該反応系に典型的なＥＤＣ候補物質のＢ
ＰＡを添加すると、驚くべきことに、Ｔ／Ｅ変換が用量
依存的に加速されることを見出し、ＥＤＣそのものが
“環境エストロゲン”として作用するのではなく（Ｂｏ
ｌｇｅｒ ｅｔ ａｌ．）、ＵＶＣ誘導Ｔ／Ｅ変換反応
を特異的に加速させる結果として生体内エストロゲン量
を増加させる、という機序によってその内分泌攪乱作用
を発現させていることを始めて明らかにした（Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ投稿中）。この結果は、ＵＶＣに代えて太陽光
（北海道札幌近郊）を照射しても再現され、その結果、
ＵＶＣ照射下の雄ニジマス飼育系で血中エストロゲンの
有意な増加を認め、実際の生態系においても起こり得る
こと、などが確認されている。同じ雄ニジマスにエスト
ロゲンを注射すると血中ビテロジェニン（雌特有の卵黄
蛋白質）が有意に発現することから、ＵＶＣによるＴ／
Ｅ変換の環境汚染物質による加速的作用を介して“メス
化”が惹起され得る可能性が強く示唆される。
けた結果、１９７０年代から出現し始めた大気汚染物質
によるオゾンホールに起因する、その地表照射量が急増
しているいわゆる殺菌光線と別称される高エネルギー短
波長紫外線ＵＶＣ（２５４ｎｍ）が、生体液モデル中の
男性ホルモン、テストステロン、を女性ホルモンのエス
トラジオール−１７βに有意に変換させる（以下、Ｔ／
Ｅ変換と記載することがある。）ことを世界で始めて見
出した。更に、該反応系に典型的なＥＤＣ候補物質のＢ
ＰＡを添加すると、驚くべきことに、Ｔ／Ｅ変換が用量
依存的に加速されることを見出し、ＥＤＣそのものが
“環境エストロゲン”として作用するのではなく（Ｂｏ
ｌｇｅｒ ｅｔ ａｌ．）、ＵＶＣ誘導Ｔ／Ｅ変換反応
を特異的に加速させる結果として生体内エストロゲン量
を増加させる、という機序によってその内分泌攪乱作用
を発現させていることを始めて明らかにした（Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ投稿中）。この結果は、ＵＶＣに代えて太陽光
（北海道札幌近郊）を照射しても再現され、その結果、
ＵＶＣ照射下の雄ニジマス飼育系で血中エストロゲンの
有意な増加を認め、実際の生態系においても起こり得る
こと、などが確認されている。同じ雄ニジマスにエスト
ロゲンを注射すると血中ビテロジェニン（雌特有の卵黄
蛋白質）が有意に発現することから、ＵＶＣによるＴ／
Ｅ変換の環境汚染物質による加速的作用を介して“メス
化”が惹起され得る可能性が強く示唆される。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】オゾン層が然るべく保
持されていた１９７０年代以前においては、有害なＵＶ
Ｃは該オゾン層に吸収され地表までは到達し得なかった
ために、現在はＥＤＣとして作用する環境化学物質も、
その内分泌攪乱機能を潜在化させ、その作用を発現させ
るに至らなかったものと考えられる。オゾンホールはい
つ消滅するのか、あるいは、いつ消滅させ得るのかが全
く不明な現在、どのような化学物質がどの程度の内分泌
攪乱活性を有するのかを可及的速やかに見極めること
が、ヒトを含む全生態系の生命の恒常性を保持させる上
での急務の課題である。本発明では、化学物質等の被験
物質の簡便で正確なｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏ
の内分泌攪乱活性測定方法及びその測定装置を提供し
て、これ以上ヒトを含む全生態系の生命の恒常性を損な
うことを防止することに貢献することを目的にしてい
る。それと同時に、既存の環境排出化学物質の内分泌攪
乱機能の低減化にも貢献しようとするものである。
持されていた１９７０年代以前においては、有害なＵＶ
Ｃは該オゾン層に吸収され地表までは到達し得なかった
ために、現在はＥＤＣとして作用する環境化学物質も、
その内分泌攪乱機能を潜在化させ、その作用を発現させ
るに至らなかったものと考えられる。オゾンホールはい
つ消滅するのか、あるいは、いつ消滅させ得るのかが全
く不明な現在、どのような化学物質がどの程度の内分泌
攪乱活性を有するのかを可及的速やかに見極めること
が、ヒトを含む全生態系の生命の恒常性を保持させる上
での急務の課題である。本発明では、化学物質等の被験
物質の簡便で正確なｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏ
の内分泌攪乱活性測定方法及びその測定装置を提供し
て、これ以上ヒトを含む全生態系の生命の恒常性を損な
うことを防止することに貢献することを目的にしてい
る。それと同時に、既存の環境排出化学物質の内分泌攪
乱機能の低減化にも貢献しようとするものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決することを目標として鋭意研究を積み重ねた結果、
以下の手法及び装置によって上記課題が解決され得るこ
とを見出し、本発明を完成させるに至った。即ち、本発
明は、以下の技術手段から構成されるものである。 （１）紫外線照射下で誘導される、男性ホルモン（雄性
ホルモン）の女性ホルモン（雌性ホルモン）への変換反
応を促進する効果を指標として被験物質の内分泌攪乱活
性を測定することを特徴とする被験物質の内分泌攪乱活
性の測定方法。 （２）男性ホルモンの女性ホルモンへの変換反応がｉｎ
ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏの反応である前記
（１）の方法。 （３）以下のステップ； （ａ）紫外線照射下で誘導される、男性ホルモンの女性
ホルモンへの変換反応系に被験化学物質を共存させるス
テップ； （ｂ）上記（ａ）により発現される、該変換反応を促進
させる効果（エンハンサー効果）を指標として上記被験
化学物質の内分泌攪乱活性を測定するステップ；を含む
ことを特徴とする前記（１）の被験物質の内分泌攪乱活
性の測定方法。 （４）変換反応系が反応基質としてテストステロンを含
み、基本反応媒体として、カルモジュリン，燐酸緩衝液
を含む前記（３）の方法。 （５）前記（１）又は（３）の方法により、被験物質の
内分泌攪乱活性を測定し、該測定値を基準として内分泌
攪乱作用を有する物質をスクリーニングすることを特徴
とする内分泌攪乱物質のスクリーニング方法。 （６）前記（３）の被験物質の内分泌攪乱活性の測定方
法に使用する装置であって、男性ホルモンの女性ホルモ
ンへの変換反応系と被験物質を共存させる反応室、該反
応室に紫外線を照射するための紫外線ランプ、反応室の
反応液を移送させるための移送ポンプ、を有するＵＶ変
換装置と、反応液のホルモン含量を測定するためのホル
モン定量装置を含むことを特徴とする被験物質の内分泌
攪乱活性の測定装置。
解決することを目標として鋭意研究を積み重ねた結果、
以下の手法及び装置によって上記課題が解決され得るこ
とを見出し、本発明を完成させるに至った。即ち、本発
明は、以下の技術手段から構成されるものである。 （１）紫外線照射下で誘導される、男性ホルモン（雄性
ホルモン）の女性ホルモン（雌性ホルモン）への変換反
応を促進する効果を指標として被験物質の内分泌攪乱活
性を測定することを特徴とする被験物質の内分泌攪乱活
性の測定方法。 （２）男性ホルモンの女性ホルモンへの変換反応がｉｎ
ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏの反応である前記
（１）の方法。 （３）以下のステップ； （ａ）紫外線照射下で誘導される、男性ホルモンの女性
ホルモンへの変換反応系に被験化学物質を共存させるス
テップ； （ｂ）上記（ａ）により発現される、該変換反応を促進
させる効果（エンハンサー効果）を指標として上記被験
化学物質の内分泌攪乱活性を測定するステップ；を含む
ことを特徴とする前記（１）の被験物質の内分泌攪乱活
性の測定方法。 （４）変換反応系が反応基質としてテストステロンを含
み、基本反応媒体として、カルモジュリン，燐酸緩衝液
を含む前記（３）の方法。 （５）前記（１）又は（３）の方法により、被験物質の
内分泌攪乱活性を測定し、該測定値を基準として内分泌
攪乱作用を有する物質をスクリーニングすることを特徴
とする内分泌攪乱物質のスクリーニング方法。 （６）前記（３）の被験物質の内分泌攪乱活性の測定方
法に使用する装置であって、男性ホルモンの女性ホルモ
ンへの変換反応系と被験物質を共存させる反応室、該反
応室に紫外線を照射するための紫外線ランプ、反応室の
反応液を移送させるための移送ポンプ、を有するＵＶ変
換装置と、反応液のホルモン含量を測定するためのホル
モン定量装置を含むことを特徴とする被験物質の内分泌
攪乱活性の測定装置。
【０００７】
【発明の実施の形態】以下、本発明について更に詳細に
説明する。本発明は、前記のように、紫外線、特に短波
長のＵＶＣ照射下に誘導される、男性ホルモン（雄性ホ
ルモン）の女性ホルモン（雌性ホルモン）への変換反応
系の反応を促進する効果を指標として被験物質の内分泌
攪乱活性を測定することを基本構成としている。本発明
において、紫外線照射下に誘導される、男性ホルモンの
女性ホルモンへの変換反応系は、紫外線照射下に、基質
の男性ホルモンを女性ホルモンへ変換する反応系であれ
ば、適宜の反応基質及び反応媒体からなる反応系が使用
されるが、好適には、例えば、反応基質としてテストス
テロン（ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ）又はその誘導体を
含み、基本反応媒体としてカルモジュリン（ｃａｌｍｏ
ｄｕｌｉｎ：ＣａＭ），燐酸緩衝液を含む反応系が使用
される。この反応系は、紫外線照射下で誘導される男性
ホルモンの女性ホルモンへの変換反応であれば、その反
応基質、基本反応媒体の種類は特に限定されるものでは
ない。上記基本反応媒体に、テストステロンから解裂す
るメチルラジカルの受容体、例えば、ホモシステイン
（Ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎ）を共存させることが好まし
いが、同効の受容体であれば適宜のものが使用できる。
この反応系の場合、上記基本反応媒体にテストステロン
のアルコール溶液を添加し、室温で短時間ＵＶＣランプ
で照射すればエストラジオール（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）
−１７βが生成する。本発明では、この反応系に被験物
質を共存させて、紫外線照射下に誘導される被験物質に
よる上記変換反応の促進効果、即ち、該反応系における
エストラジオール−１７βの生成のレベルを指標とし
て、該被験物質の内分泌攪乱活性を測定する。
説明する。本発明は、前記のように、紫外線、特に短波
長のＵＶＣ照射下に誘導される、男性ホルモン（雄性ホ
ルモン）の女性ホルモン（雌性ホルモン）への変換反応
系の反応を促進する効果を指標として被験物質の内分泌
攪乱活性を測定することを基本構成としている。本発明
において、紫外線照射下に誘導される、男性ホルモンの
女性ホルモンへの変換反応系は、紫外線照射下に、基質
の男性ホルモンを女性ホルモンへ変換する反応系であれ
ば、適宜の反応基質及び反応媒体からなる反応系が使用
されるが、好適には、例えば、反応基質としてテストス
テロン（ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ）又はその誘導体を
含み、基本反応媒体としてカルモジュリン（ｃａｌｍｏ
ｄｕｌｉｎ：ＣａＭ），燐酸緩衝液を含む反応系が使用
される。この反応系は、紫外線照射下で誘導される男性
ホルモンの女性ホルモンへの変換反応であれば、その反
応基質、基本反応媒体の種類は特に限定されるものでは
ない。上記基本反応媒体に、テストステロンから解裂す
るメチルラジカルの受容体、例えば、ホモシステイン
（Ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎ）を共存させることが好まし
いが、同効の受容体であれば適宜のものが使用できる。
この反応系の場合、上記基本反応媒体にテストステロン
のアルコール溶液を添加し、室温で短時間ＵＶＣランプ
で照射すればエストラジオール（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）
−１７βが生成する。本発明では、この反応系に被験物
質を共存させて、紫外線照射下に誘導される被験物質に
よる上記変換反応の促進効果、即ち、該反応系における
エストラジオール−１７βの生成のレベルを指標とし
て、該被験物質の内分泌攪乱活性を測定する。
【０００８】本発明において、照射線種は、紫外線（Ｕ
Ｖ）、特に、２５４ｎｍを中心とする短波長紫外線帯で
あるＵＶＣが好適に使用される。該紫外線の発生装置と
しては、市販の装置、例えば、アトー（株）社製の可搬
照射装置（ＨＰ型）等が好適なものとして使用できる
が、同効の装置であれば適宜のものを使用することがで
きる。照射条件は、例えば、０．１−１ｍＷ／ｃｍ2 ／
２−６時間、好ましくは０．２ｍＷ／ｃｍ2 ／３時間で
ある。基本反応液組成は、好適には、例えば、基質とな
る男性ホルモン、シグマ社製テストステロンを、１ｍｇ
／ｍｌの濃度で試薬特級エチルアルコールに溶解させて
１０μｌ（１０μｇ）と、カルモジュリン（ＣａＭ）
を、１ｍｇ／ｍｌの濃度で蒸留水に溶解させて１０μｌ
（１０μｇ）とし、これを、燐酸緩衝液ＰＢＳ（＋）９
８０μｌに添加して１ｍｌに調整して作製する。被験物
質（被評価試料）は、例えば、１ｍｇ／ｍｌ濃度で試薬
特級エチルアルコールに溶解させて１０μｌとし、これ
を上記の基質及びＣａＭとともに、ＰＢＳ（＋）９７０
μｌに添加して試薬反応液１ｍｌとする。
Ｖ）、特に、２５４ｎｍを中心とする短波長紫外線帯で
あるＵＶＣが好適に使用される。該紫外線の発生装置と
しては、市販の装置、例えば、アトー（株）社製の可搬
照射装置（ＨＰ型）等が好適なものとして使用できる
が、同効の装置であれば適宜のものを使用することがで
きる。照射条件は、例えば、０．１−１ｍＷ／ｃｍ2 ／
２−６時間、好ましくは０．２ｍＷ／ｃｍ2 ／３時間で
ある。基本反応液組成は、好適には、例えば、基質とな
る男性ホルモン、シグマ社製テストステロンを、１ｍｇ
／ｍｌの濃度で試薬特級エチルアルコールに溶解させて
１０μｌ（１０μｇ）と、カルモジュリン（ＣａＭ）
を、１ｍｇ／ｍｌの濃度で蒸留水に溶解させて１０μｌ
（１０μｇ）とし、これを、燐酸緩衝液ＰＢＳ（＋）９
８０μｌに添加して１ｍｌに調整して作製する。被験物
質（被評価試料）は、例えば、１ｍｇ／ｍｌ濃度で試薬
特級エチルアルコールに溶解させて１０μｌとし、これ
を上記の基質及びＣａＭとともに、ＰＢＳ（＋）９７０
μｌに添加して試薬反応液１ｍｌとする。
【０００９】上記反応液にＵＶＣを照射した後、反応液
のホルモン変換量（生成量）を定量する。この場合、定
量方法は特に限定されないが、例えば、ユーロピウムラ
ベル時間分解蛍光免疫法でエストラジオール−１７βを
定量し、基本反応のホルモン生成量に対する被評価試料
によるホルモン生成量の対比から被評価試料のテストス
テロン／エストラジオール変換（Ｔ／Ｅ変換）の増強
（促進）効果を算定し、その結果を指標としてその内分
泌攪乱活性を評価する。また、本発明においては、男性
ホルモンの女性ホルモンへの変換反応は、前記のような
ｉｎ ｖｉｔｒｏの反応に限らず、ｉｎ ｖｉｖｏの反
応であってもよく、例えば、後記する実施に示したよう
に、魚介類などの生体内のＴ／Ｅ変換反応を利用するこ
とが可能である。この場合には、例えば、魚介類を投入
した飼育水槽に被験物質を含む水を供給し、又は被験物
質を生体内の例えば腹腔内に注入し、紫外線照射下で誘
導される生体の血中Ｔ／Ｅ変換量を定量／算出し、その
数値に基づいて被験物質の内分泌攪乱活性を測定すれば
よい。生体内のＴ／Ｅ変換反応系は、Ｔ／Ｅ変換反応を
測定しうる適宜の生体内器官を使用することができる。
のホルモン変換量（生成量）を定量する。この場合、定
量方法は特に限定されないが、例えば、ユーロピウムラ
ベル時間分解蛍光免疫法でエストラジオール−１７βを
定量し、基本反応のホルモン生成量に対する被評価試料
によるホルモン生成量の対比から被評価試料のテストス
テロン／エストラジオール変換（Ｔ／Ｅ変換）の増強
（促進）効果を算定し、その結果を指標としてその内分
泌攪乱活性を評価する。また、本発明においては、男性
ホルモンの女性ホルモンへの変換反応は、前記のような
ｉｎ ｖｉｔｒｏの反応に限らず、ｉｎ ｖｉｖｏの反
応であってもよく、例えば、後記する実施に示したよう
に、魚介類などの生体内のＴ／Ｅ変換反応を利用するこ
とが可能である。この場合には、例えば、魚介類を投入
した飼育水槽に被験物質を含む水を供給し、又は被験物
質を生体内の例えば腹腔内に注入し、紫外線照射下で誘
導される生体の血中Ｔ／Ｅ変換量を定量／算出し、その
数値に基づいて被験物質の内分泌攪乱活性を測定すれば
よい。生体内のＴ／Ｅ変換反応系は、Ｔ／Ｅ変換反応を
測定しうる適宜の生体内器官を使用することができる。
【００１０】本発明では、上記測定方法を利用すること
により、種々の被験物質の中から内分泌攪乱作用を有す
る物質を簡便かつ効率よく探索することが可能であり、
本発明により、上記方法により被験物質の内分泌攪乱活
性を測定し、該測定値を基準として内分泌攪乱作用を有
する物質をスクリーニングする方法が提供される。即
ち、被験物質を共存させた場合、Ｔ／Ｅ変換量を増強さ
せる作用を有する物質を内分泌攪乱作用を有する物質と
して質的及び量的に区分し、選択することが可能とな
る。本発明のスクリーニング方法により、Ｔ／Ｅ変換反
応に対する増強効果を有する各種の物質がいわゆる環境
ホルモン様物質として探索される。例えば、環境汚染物
質として知られるＢＰＡ、ＤＤＴ、ＤＯＰ、ＰＣＢ、Ｎ
Ｏ3 、ＰＯ4 3 - 等は、上記Ｔ／Ｅ変換反応系に該汚染物
質を添加すると、該変換を促進させる作用が発現する
が、これらの汚染物質それ自身からエストラジオールが
生成する可能性は認められない。本発明では、これらの
汚染物質に限らず、あらゆる化学物質、該化学物質から
構成される物質（例えば、各種の容器、包装材、物品な
ど）、それらの廃棄物など、その種類を問わず被験物質
として対象となる。
により、種々の被験物質の中から内分泌攪乱作用を有す
る物質を簡便かつ効率よく探索することが可能であり、
本発明により、上記方法により被験物質の内分泌攪乱活
性を測定し、該測定値を基準として内分泌攪乱作用を有
する物質をスクリーニングする方法が提供される。即
ち、被験物質を共存させた場合、Ｔ／Ｅ変換量を増強さ
せる作用を有する物質を内分泌攪乱作用を有する物質と
して質的及び量的に区分し、選択することが可能とな
る。本発明のスクリーニング方法により、Ｔ／Ｅ変換反
応に対する増強効果を有する各種の物質がいわゆる環境
ホルモン様物質として探索される。例えば、環境汚染物
質として知られるＢＰＡ、ＤＤＴ、ＤＯＰ、ＰＣＢ、Ｎ
Ｏ3 、ＰＯ4 3 - 等は、上記Ｔ／Ｅ変換反応系に該汚染物
質を添加すると、該変換を促進させる作用が発現する
が、これらの汚染物質それ自身からエストラジオールが
生成する可能性は認められない。本発明では、これらの
汚染物質に限らず、あらゆる化学物質、該化学物質から
構成される物質（例えば、各種の容器、包装材、物品な
ど）、それらの廃棄物など、その種類を問わず被験物質
として対象となる。
【００１１】本発明で使用される装置は、基本的には、
男性ホルモンの女性ホルモンへの変換反応系と被験物質
を共存させる反応室、該反応室に紫外線を照射するため
の紫外線ランプ、反応室の反応液を移送させるための移
送ポンプ、を有するＵＶ変換装置と、反応液のホルモン
含量を測定するためのホルモン定量装置を含むことを特
徴としている。図１に、上記ＵＶ変換装置の実施例を示
す。図１の装置は、反応室として石英キャピラリー（内
径０．４５ｍｍ、長さ３００ｍｍ×３）から構成される
反応管、紫外線ランプとしてＵＶＣランプ、移送ポンプ
（図示せず）を具備し、更に、ＵＶカットフィルター付
き観察窓、ＵＶＣランプの照射光を反射するための反射
板、反応液及び装置を冷却するための冷却ファンを具備
している。
男性ホルモンの女性ホルモンへの変換反応系と被験物質
を共存させる反応室、該反応室に紫外線を照射するため
の紫外線ランプ、反応室の反応液を移送させるための移
送ポンプ、を有するＵＶ変換装置と、反応液のホルモン
含量を測定するためのホルモン定量装置を含むことを特
徴としている。図１に、上記ＵＶ変換装置の実施例を示
す。図１の装置は、反応室として石英キャピラリー（内
径０．４５ｍｍ、長さ３００ｍｍ×３）から構成される
反応管、紫外線ランプとしてＵＶＣランプ、移送ポンプ
（図示せず）を具備し、更に、ＵＶカットフィルター付
き観察窓、ＵＶＣランプの照射光を反射するための反射
板、反応液及び装置を冷却するための冷却ファンを具備
している。
【００１２】この装置では、反応系及び被験化学物質か
らなるサンプル反応液を１時間当たり６００μｍ注入す
ると約３時間ＵＶ照射され、十分にＴ／Ｅ変換する。上
記装置は、本発明の装置の好適な一例を示すものであ
り、本発明は、これと同効の機能を有するものであれ
ば、反応室の形状、構造などは特に限定されるものでは
ない。図２に、上記ＵＶ変換装置を使った環境ホルモン
物質のスクリーニング及びホルモン定量のためのフロー
図を示す。ここでは、環境ホルモンサンプル（被験化学
物質）を微量定量ポンプ（定量／移送ポンプ）を介して
ＵＶ変換装置へ移送し、ＵＶＣ照射下でＴ／Ｅ変換す
る。ＵＶ変換装置でＴ／Ｅ変換されたホルモンの定量
は、例えば、市販のホルモンレセプター結合測定装置、
ホルモン免疫定量装置などを用いて定量すればよく、該
ホルモン定量装置としては適宜の装置が使用される。
らなるサンプル反応液を１時間当たり６００μｍ注入す
ると約３時間ＵＶ照射され、十分にＴ／Ｅ変換する。上
記装置は、本発明の装置の好適な一例を示すものであ
り、本発明は、これと同効の機能を有するものであれ
ば、反応室の形状、構造などは特に限定されるものでは
ない。図２に、上記ＵＶ変換装置を使った環境ホルモン
物質のスクリーニング及びホルモン定量のためのフロー
図を示す。ここでは、環境ホルモンサンプル（被験化学
物質）を微量定量ポンプ（定量／移送ポンプ）を介して
ＵＶ変換装置へ移送し、ＵＶＣ照射下でＴ／Ｅ変換す
る。ＵＶ変換装置でＴ／Ｅ変換されたホルモンの定量
は、例えば、市販のホルモンレセプター結合測定装置、
ホルモン免疫定量装置などを用いて定量すればよく、該
ホルモン定量装置としては適宜の装置が使用される。
【００１３】ｉｎ ｖｉｖｏの変換反応系を利用した測
定方法には、直接照射法と間接照射法の２種類がある。
前者の実施例を図３に、後者の実施例を図４にそれぞれ
示す。図３の装置は、概９℃に水温を保持する冷却装置
及び飼育水の浄化循環装置を備えた６０１の飼育水槽
に、出力２０ＷのＵＶＣランプを装備した装置から構成
されている。一方、図４の装置は飼育水槽の構造は前者
と同一であるが、飼育循環水の入水口直前に出力２０Ｗ
のＵＶＣランプを浸漬させて飼育水を予め繰り返しＵＶ
Ｃ処理する仕組を有している。これらの装置を使って、
雄ニジマスを飼育した後に、採血して、血中のエストラ
ジオール−１７βを定量する。本発明では、このような
生体中のｉｎ ｖｉｖｏ変換系を利用して被験化学物質
の内分泌攪乱活性を測定することができる。
定方法には、直接照射法と間接照射法の２種類がある。
前者の実施例を図３に、後者の実施例を図４にそれぞれ
示す。図３の装置は、概９℃に水温を保持する冷却装置
及び飼育水の浄化循環装置を備えた６０１の飼育水槽
に、出力２０ＷのＵＶＣランプを装備した装置から構成
されている。一方、図４の装置は飼育水槽の構造は前者
と同一であるが、飼育循環水の入水口直前に出力２０Ｗ
のＵＶＣランプを浸漬させて飼育水を予め繰り返しＵＶ
Ｃ処理する仕組を有している。これらの装置を使って、
雄ニジマスを飼育した後に、採血して、血中のエストラ
ジオール−１７βを定量する。本発明では、このような
生体中のｉｎ ｖｉｖｏ変換系を利用して被験化学物質
の内分泌攪乱活性を測定することができる。
【００１４】生体のｉｎ ｖｉｖｏ変換反応を利用した
測定方法に用いる装置は、前記図３及び４のものが例示
されるが、これに限らず、これらと同効の機能を有する
ものであれば適宜の装置を使用することができる。本発
明の実験結果によると、図３及び４の装置を用いて生体
のＴ／Ｅ変換量を定量した結果、紫外線照射下で飼育さ
れた雄ニジマスでは、その血清エストラジオールが経時
的に増加し、テストステロンは経時的に減少することを
認めた。また、雄ニジマス稚魚（概６ヶ月令）を微弱Ｕ
ＶＣ、連続直接照射下で１０日間飼育したところ、血清
エストラジオールは極めて顕著に増加することを認め
た。上記生体のｉｎ ｖｉｖｏ変換系を利用する場合
に、あらかじめテストステロンを投与し、その血清テス
トステロン及びエストラジオールの動態検索試験によ
り、血清テストステロンを定量することも適宜可能であ
る。この場合、被験化学物質はあらかじめ腹腔内注射な
どにより生体内に投与し、これにより発現するエストラ
ジオールの量を定量することにより、エストラジオール
の発現量に比例した被験化学物質の内分泌攪乱活性を知
ることができる。生体には上記変換反応促進因子が内在
しているが、該因子の存在及びその影響は、本発明で生
体内のＴ／Ｅ変換反応系を利用することを困難にするほ
どのものではない。
測定方法に用いる装置は、前記図３及び４のものが例示
されるが、これに限らず、これらと同効の機能を有する
ものであれば適宜の装置を使用することができる。本発
明の実験結果によると、図３及び４の装置を用いて生体
のＴ／Ｅ変換量を定量した結果、紫外線照射下で飼育さ
れた雄ニジマスでは、その血清エストラジオールが経時
的に増加し、テストステロンは経時的に減少することを
認めた。また、雄ニジマス稚魚（概６ヶ月令）を微弱Ｕ
ＶＣ、連続直接照射下で１０日間飼育したところ、血清
エストラジオールは極めて顕著に増加することを認め
た。上記生体のｉｎ ｖｉｖｏ変換系を利用する場合
に、あらかじめテストステロンを投与し、その血清テス
トステロン及びエストラジオールの動態検索試験によ
り、血清テストステロンを定量することも適宜可能であ
る。この場合、被験化学物質はあらかじめ腹腔内注射な
どにより生体内に投与し、これにより発現するエストラ
ジオールの量を定量することにより、エストラジオール
の発現量に比例した被験化学物質の内分泌攪乱活性を知
ることができる。生体には上記変換反応促進因子が内在
しているが、該因子の存在及びその影響は、本発明で生
体内のＴ／Ｅ変換反応系を利用することを困難にするほ
どのものではない。
【００１５】
【実施例】次に、実施例に基づいて本発明を具体的に説
明するが、本発明は当該実施例によって何等限定される
ものではない。 実施例１ この実施例１では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ反応系を用いて被
験物質の評価試験を行った。 １）基本反応液組成 （１）反応系及び被験化学物質 テストステロンのエチルアルコール溶液（１ｍｇ／１ｍｌエタノール） １０μｌ（１０μｇ） ＣａＭの蒸留水溶液（１ｍｇ／ｍｌ蒸留水） １０μｌ（１０μｇ） リン酸緩衝液（ＰＢＳ（＋）） ９８０μｌ ２）評価試験反応液組成 被評価試料のエチルアルコール溶液又は水溶液（１ｍｇ／１ｍｌエタノール蒸 留水） １０μｌ（１０μｇ） 上記テストステロンエタノール溶液 １０μｌ（１０μｇ） 上記ＣａＭ蒸留水溶液 １０μｌ（１０μｇ） ＰＢＳ（＋） ９７０μｌ 被験化学物質としては、ＢＰＡ（ビスフェノールＡ）及
び硝酸ナトリウムを用いた。
明するが、本発明は当該実施例によって何等限定される
ものではない。 実施例１ この実施例１では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ反応系を用いて被
験物質の評価試験を行った。 １）基本反応液組成 （１）反応系及び被験化学物質 テストステロンのエチルアルコール溶液（１ｍｇ／１ｍｌエタノール） １０μｌ（１０μｇ） ＣａＭの蒸留水溶液（１ｍｇ／ｍｌ蒸留水） １０μｌ（１０μｇ） リン酸緩衝液（ＰＢＳ（＋）） ９８０μｌ ２）評価試験反応液組成 被評価試料のエチルアルコール溶液又は水溶液（１ｍｇ／１ｍｌエタノール蒸 留水） １０μｌ（１０μｇ） 上記テストステロンエタノール溶液 １０μｌ（１０μｇ） 上記ＣａＭ蒸留水溶液 １０μｌ（１０μｇ） ＰＢＳ（＋） ９７０μｌ 被験化学物質としては、ＢＰＡ（ビスフェノールＡ）及
び硝酸ナトリウムを用いた。
【００１６】（２）方法 図１のＵＶＣ変換装置を使用して、１ｃｍの石英セル中
に反応液１ｍｌを入れ、常温下、ＵＶ２５４ｎｍのＵＶ
Ｃを０．２ｍＷ／ｃｍ2 で３時間照射した。反応終了
後、反応液をエーテルで抽出処理し、エーテル抽出液を
エストラジオール−１７βの時間分解蛍光免疫法（ＤＥ
ＬＨＩＡ）による微量分析に供した。
に反応液１ｍｌを入れ、常温下、ＵＶ２５４ｎｍのＵＶ
Ｃを０．２ｍＷ／ｃｍ2 で３時間照射した。反応終了
後、反応液をエーテルで抽出処理し、エーテル抽出液を
エストラジオール−１７βの時間分解蛍光免疫法（ＤＥ
ＬＨＩＡ）による微量分析に供した。
【００１７】（３）結果 評価結果をまとめて表１に示した。エストラジオールの
生成量は、基本反応液のエストラジオール生成量１００
に対して、大気汚染化学物質の硝酸化合物が３倍強、Ｂ
ＰＡは４倍弱、硝酸塩とＢＰＡ共存下では、実に１２倍
という、Ｔ／Ｅ変換反応を用量依存的に促進する効果を
示すことが明らかとなり、これにより被験物質の内分泌
攪乱活性を測定及びスクリーニングできることが分かっ
た。
生成量は、基本反応液のエストラジオール生成量１００
に対して、大気汚染化学物質の硝酸化合物が３倍強、Ｂ
ＰＡは４倍弱、硝酸塩とＢＰＡ共存下では、実に１２倍
という、Ｔ／Ｅ変換反応を用量依存的に促進する効果を
示すことが明らかとなり、これにより被験物質の内分泌
攪乱活性を測定及びスクリーニングできることが分かっ
た。
【００１８】
【表１】
【００１９】実施例２ この実施例ではｉｎ ｖｉｖｏ反応系を用いて被験物質
の評価試験を行った。（１）直接法による評価試験 １）使用試験動物 雄ニジマス（０年魚）５尾／区 ２）投与方法 腹腔内注射（ｉｐ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ） ３）供試試料 ・テストステロン ・ビスフェノール−Ａ（ＢＰＡ）
の評価試験を行った。（１）直接法による評価試験 １）使用試験動物 雄ニジマス（０年魚）５尾／区 ２）投与方法 腹腔内注射（ｉｐ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ） ３）供試試料 ・テストステロン ・ビスフェノール−Ａ（ＢＰＡ）
【００２０】４）飼育方法 図４に示した９℃の６０１飼育水（循環・浄化）中で各
々のニジマスを０．２ｍＷ／ｃｍ2 の照射条件で２０Ｗ
のＵＶＣランプにより一日１時間照射して５日間飼育し
た後、血中エストラジオール−１７βを定法により定量
した。一方、対照として、ＵＶＣカット水槽でニジマス
を飼育し、同じくエストラジオールを測定した。
々のニジマスを０．２ｍＷ／ｃｍ2 の照射条件で２０Ｗ
のＵＶＣランプにより一日１時間照射して５日間飼育し
た後、血中エストラジオール−１７βを定法により定量
した。一方、対照として、ＵＶＣカット水槽でニジマス
を飼育し、同じくエストラジオールを測定した。
【００２１】５）結果 その結果を図６に示した。 対照群では、照射の有無に
拘わらずエストラジオールの増減は認められないがテス
トステロン注射区では照射によって有意にエストラジオ
ールが増加し、更に、ＢＰＡ共存区においては、テスト
ステロン単独区に対し照射の有無に拘わらず有意にエス
トラジオール濃度が上昇し、且つ、照射群では非照射群
に比べ何れも３倍強、更に、共存区内で照射群は非照射
群対比２倍強に、各々血中エストラジオール濃度の顕著
な上昇が認められ、これにより被験物質の内分泌攪乱活
性を測定及びスクリーニングできることが分かった。
拘わらずエストラジオールの増減は認められないがテス
トステロン注射区では照射によって有意にエストラジオ
ールが増加し、更に、ＢＰＡ共存区においては、テスト
ステロン単独区に対し照射の有無に拘わらず有意にエス
トラジオール濃度が上昇し、且つ、照射群では非照射群
に比べ何れも３倍強、更に、共存区内で照射群は非照射
群対比２倍強に、各々血中エストラジオール濃度の顕著
な上昇が認められ、これにより被験物質の内分泌攪乱活
性を測定及びスクリーニングできることが分かった。
【００２２】（２）間接法による評価試験 １）使用試験動物 雄ニジマス（０年魚）５尾／区 ２）供試試料 なし ３）飼育方法 図３に示した６０１飼育水槽で、予め２０ＷのＵＶＣラ
ンプを通過させて処理した流水系で、９℃で一定期間飼
育し、血中エストラジオールを測定した。対照として、
ＵＶＣカット飼育水槽でニジマスを飼育し、分析に供し
た。
ンプを通過させて処理した流水系で、９℃で一定期間飼
育し、血中エストラジオールを測定した。対照として、
ＵＶＣカット飼育水槽でニジマスを飼育し、分析に供し
た。
【００２３】４）結果 まとめて図５（上、下）に示した。照射の有無に拘わら
ず、テストステロンは時間とともに有意に減少し、照射
群では２０日後に当初の１／１０まで著減した。一方、
エストラジオールは１０日では照射の有無に拘わらず変
化ないが、２０日後では、照射群で顕著にその濃度が上
昇することを認めた。紫外線照射下で生体内Ｔ／Ｅ変換
反応が誘導されることを認め、そして、それにより、内
分泌攪乱活性を有する物質を測定及びスクリーニングす
る測定及びスクリーニング法として利用し得ることが分
かった。
ず、テストステロンは時間とともに有意に減少し、照射
群では２０日後に当初の１／１０まで著減した。一方、
エストラジオールは１０日では照射の有無に拘わらず変
化ないが、２０日後では、照射群で顕著にその濃度が上
昇することを認めた。紫外線照射下で生体内Ｔ／Ｅ変換
反応が誘導されることを認め、そして、それにより、内
分泌攪乱活性を有する物質を測定及びスクリーニングす
る測定及びスクリーニング法として利用し得ることが分
かった。
【００２４】（３）エストラジオール濃度上昇による内
分泌攪乱作用の雄ニジマスでのシミュレーション １）使用試験動物 雄ニジマス（０年魚）５尾／区 ２）投与方法 腹腔内注射（ｉｐ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）５０ｍｇ／ｋ
ｇ（体重） ３）餌料 通常飼料 ４）飼育方法 水温９℃、その他所定条件
分泌攪乱作用の雄ニジマスでのシミュレーション １）使用試験動物 雄ニジマス（０年魚）５尾／区 ２）投与方法 腹腔内注射（ｉｐ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）５０ｍｇ／ｋ
ｇ（体重） ３）餌料 通常飼料 ４）飼育方法 水温９℃、その他所定条件
【００２５】５）結果 エストラジオール−１７β投与により雄ニジマスの血中
に発現した卵黄特異的蛋白質のビテロジェニン（Ｖｉｔ
ｅｌｌｏｇｅｎｉｎ）を免疫抗体法（ＥＬＩＺＡ）で定
量した。結果を図７に示した。この結果は、エストラジ
オールの血中濃度上昇により血中ビテロジェニンの発現
が昂進することを示唆している。
に発現した卵黄特異的蛋白質のビテロジェニン（Ｖｉｔ
ｅｌｌｏｇｅｎｉｎ）を免疫抗体法（ＥＬＩＺＡ）で定
量した。結果を図７に示した。この結果は、エストラジ
オールの血中濃度上昇により血中ビテロジェニンの発現
が昂進することを示唆している。
【００２６】（４）ｉｎ ｖｉｖｏ反応系による評価試
験の総括 上記の直接及び間接法の何れの結果も、上記ｉｎ ｖｉ
ｔｒｏ反応系による本発明の測定方法の有効性を支持す
るものであり、しかも、内分泌攪乱作用のシミュレーシ
ョンの一つとして、雄ニジマスへのエストラジオール投
与による女性ホルモン生体内濃度上昇に伴う雌特有の卵
黄特異的蛋白質のビテロジェニン（ｖｉｔｅｌｌｏｇｅ
ｎｉｎ）の血中濃度変化を検討した結果からも、典型的
内分泌異常とされている“雌化”の惹起が強く示唆され
ていることから、本発明のｉｎｖｉｖｏ反応系を利用し
てなる内分泌攪乱活性アッセイ法及びその測定装置は極
めて優れていることが実証された。
験の総括 上記の直接及び間接法の何れの結果も、上記ｉｎ ｖｉ
ｔｒｏ反応系による本発明の測定方法の有効性を支持す
るものであり、しかも、内分泌攪乱作用のシミュレーシ
ョンの一つとして、雄ニジマスへのエストラジオール投
与による女性ホルモン生体内濃度上昇に伴う雌特有の卵
黄特異的蛋白質のビテロジェニン（ｖｉｔｅｌｌｏｇｅ
ｎｉｎ）の血中濃度変化を検討した結果からも、典型的
内分泌異常とされている“雌化”の惹起が強く示唆され
ていることから、本発明のｉｎｖｉｖｏ反応系を利用し
てなる内分泌攪乱活性アッセイ法及びその測定装置は極
めて優れていることが実証された。
【００２７】
【発明の効果】本発明は、紫外線照射下で誘導される、
男性ホルモンの女性ホルモンへの変換反応を促進する効
果を指標として被験物質の内分泌攪乱活性を測定するこ
とを特徴とする被験物質の内分泌攪乱活性の測定方法及
びその測定装置に係るものであり、本発明により、１）
ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏのＴ／Ｅ変換反応
系を利用して簡便な方法で被験物質の内分泌攪乱活性を
測定することができる、２）同活性を有する物質をスク
リーニングすることができる、３）該方法に用いる測定
装置を提供することができる、等の格別の効果が奏され
る。
男性ホルモンの女性ホルモンへの変換反応を促進する効
果を指標として被験物質の内分泌攪乱活性を測定するこ
とを特徴とする被験物質の内分泌攪乱活性の測定方法及
びその測定装置に係るものであり、本発明により、１）
ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏのＴ／Ｅ変換反応
系を利用して簡便な方法で被験物質の内分泌攪乱活性を
測定することができる、２）同活性を有する物質をスク
リーニングすることができる、３）該方法に用いる測定
装置を提供することができる、等の格別の効果が奏され
る。
【図１】ＵＶＣ変換装置の一実施例を示す。
【図２】ＵＶＣ変換装置を使った環境ホルモン物質のス
クリーニング及びホルモン定量のフローを示す。
クリーニング及びホルモン定量のフローを示す。
【図３】ｉｎ ｖｉｖｏ変換反応系を利用した測定方法
に用いる装置を示す。
に用いる装置を示す。
【図４】ｉｎ ｖｉｖｏ変換反応系を利用した測定方法
に用いる装置を示す。
に用いる装置を示す。
【図５】血清エストラジオール−１７βの生成量を示
す。
す。
【図６】血清テストステロン（上）、血清エストラジオ
ール−１７β（下）の測定結果を示す。
ール−１７β（下）の測定結果を示す。
【図７】血中ビテロジェニンを免疫抗体法（ＥＬＩＺ
Ａ）で定量した結果を示す。
Ａ）で定量した結果を示す。
Claims (6)
- 【請求項１】 紫外線照射下で誘導される、男性ホルモ
ン（雄性ホルモン）の女性ホルモン（雌性ホルモン）へ
の変換反応を促進する効果を指標として被験物質の内分
泌攪乱活性を測定することを特徴とする被験物質の内分
泌攪乱活性の測定方法。 - 【請求項２】 男性ホルモンの女性ホルモンへの変換反
応がｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏの反応である
請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 以下のステップ； （ａ）紫外線照射下で誘導される、男性ホルモンの女性
ホルモンへの変換反応系に被験化学物質を共存させるス
テップ； （ｂ）上記（ａ）により発現される、該変換反応を促進
させる効果（エンハンサー効果）を指標として上記被験
化学物質の内分泌攪乱活性を測定するステップ；を含む
ことを特徴とする請求項１記載の被験物質の内分泌攪乱
活性の測定方法。 - 【請求項４】 変換反応系が反応基質としてテストステ
ロンを含み、基本反応媒体として、カルモジュリン，燐
酸緩衝液を含む請求項３記載の方法。 - 【請求項５】 請求項１又は３記載の方法により、被験
物質の内分泌攪乱活性を測定し、該測定値を基準として
内分泌攪乱作用を有する物質をスクリーニングすること
を特徴とする内分泌攪乱物質のスクリーニング方法。 - 【請求項６】 請求項３記載の被験物質の内分泌攪乱活
性の測定方法に使用する装置であって、男性ホルモンの
女性ホルモンへの変換反応系と被験物質を共存させる反
応室、該反応室に紫外線を照射するための紫外線ラン
プ、反応室の反応液を移送させるための移送ポンプ、を
有するＵＶ変換装置と、反応液のホルモン含量を測定す
るためのホルモン定量装置を含むことを特徴とする被験
物質の内分泌攪乱活性の測定装置。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9822999A JP2000292428A (ja) | 1999-04-05 | 1999-04-05 | 環境化学物質の内分泌攪乱活性の新規測定方法及びその装置 |
| AU36699/00A AU3669900A (en) | 1999-04-05 | 2000-04-05 | Novel method for measuring endocrine disrupting activity of environmental chemical and apparatus therefor |
| PCT/JP2000/002197 WO2000060347A1 (fr) | 1999-04-05 | 2000-04-05 | Nouvelle methode de mesure de l'activite d'une substance chimique environnementale perturbant le systeme endocrinien et appareil a cet effet |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9822999A JP2000292428A (ja) | 1999-04-05 | 1999-04-05 | 環境化学物質の内分泌攪乱活性の新規測定方法及びその装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000292428A true JP2000292428A (ja) | 2000-10-20 |
Family
ID=14214143
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9822999A Ceased JP2000292428A (ja) | 1999-04-05 | 1999-04-05 | 環境化学物質の内分泌攪乱活性の新規測定方法及びその装置 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000292428A (ja) |
| AU (1) | AU3669900A (ja) |
| WO (1) | WO2000060347A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007534643A (ja) * | 2003-12-10 | 2007-11-29 | シェーリング アーゲー | 感光性活性成分を含む、紫外線安定、液体、または半固体の経皮投与体 |
-
1999
- 1999-04-05 JP JP9822999A patent/JP2000292428A/ja not_active Ceased
-
2000
- 2000-04-05 WO PCT/JP2000/002197 patent/WO2000060347A1/ja active Application Filing
- 2000-04-05 AU AU36699/00A patent/AU3669900A/en not_active Abandoned
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007534643A (ja) * | 2003-12-10 | 2007-11-29 | シェーリング アーゲー | 感光性活性成分を含む、紫外線安定、液体、または半固体の経皮投与体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2000060347A1 (fr) | 2000-10-12 |
| AU3669900A (en) | 2000-10-23 |
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