JP2000224988A - 形質転換方法およびベクター - Google Patents
形質転換方法およびベクターInfo
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- JP2000224988A JP2000224988A JP11029762A JP2976299A JP2000224988A JP 2000224988 A JP2000224988 A JP 2000224988A JP 11029762 A JP11029762 A JP 11029762A JP 2976299 A JP2976299 A JP 2976299A JP 2000224988 A JP2000224988 A JP 2000224988A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】安価な薬剤を選択マーカーとして用いることが
でき、かつ効率よく目的遺伝子を選択できる形質転換方
法を提供する。 【解決手段】転写因子遺伝子ＹＡＰ１及び外来性プロモ
ーターであるＰＧＫプロモーターよりなるセグメントを
利用して、転写因子の発現の増強による薬剤耐性能力向
上を指標としたことを特徴とする新規な出芽酵母の形質
転換方法。
でき、かつ効率よく目的遺伝子を選択できる形質転換方
法を提供する。 【解決手段】転写因子遺伝子ＹＡＰ１及び外来性プロモ
ーターであるＰＧＫプロモーターよりなるセグメントを
利用して、転写因子の発現の増強による薬剤耐性能力向
上を指標としたことを特徴とする新規な出芽酵母の形質
転換方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、各種研究用途及び
酒やパンの製造に用いられる出芽酵母、特にサッカロミ
セス・セレビジエ（Saccharomyces cerevisiae）を宿主
とする組換えＤＮＡ実験の際に有用な新規な形質転換方
法およびベクターに関するものである。
酒やパンの製造に用いられる出芽酵母、特にサッカロミ
セス・セレビジエ（Saccharomyces cerevisiae）を宿主
とする組換えＤＮＡ実験の際に有用な新規な形質転換方
法およびベクターに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】酵母の遺伝子操作、特に形質転換には、
目的の遺伝子が挿入された酵母を選択するための選択マ
ーカーが必要である。酵母には、真核生物のモデルとし
て研究に用いられる研究室酵母、および酒やパンの製造
に用いられる実用酵母が挙げられるが、研究室酵母は遺
伝子操作や遺伝子解析が行いやすいように通常栄養要求
性変異を持たせてあるので、各種の栄養要求性マーカー
（ＵＲＡ３，ＬＹＳ２，ＡＤＥ２，ＨＩＳ３，ＴＲＰ
１）を用いて形質転換を行うことができる。一方、実用
酵母においては、栄養要求性変異がないため、これらの
マーカーを用いることができないが、表１に示されるよ
うな薬剤を選択培地に用いた薬剤耐性遺伝子が選択マー
カーとして利用されている。
目的の遺伝子が挿入された酵母を選択するための選択マ
ーカーが必要である。酵母には、真核生物のモデルとし
て研究に用いられる研究室酵母、および酒やパンの製造
に用いられる実用酵母が挙げられるが、研究室酵母は遺
伝子操作や遺伝子解析が行いやすいように通常栄養要求
性変異を持たせてあるので、各種の栄養要求性マーカー
（ＵＲＡ３，ＬＹＳ２，ＡＤＥ２，ＨＩＳ３，ＴＲＰ
１）を用いて形質転換を行うことができる。一方、実用
酵母においては、栄養要求性変異がないため、これらの
マーカーを用いることができないが、表１に示されるよ
うな薬剤を選択培地に用いた薬剤耐性遺伝子が選択マー
カーとして利用されている。
【０００３】
【表１】
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記のような薬剤耐性
遺伝子は、実用酵母、研究室酵母に関係なくあらゆる酵
母に使用できるという利点があるが、現在使用されてい
るものは、薬剤が非常に高価であったり、選択効果が弱
いため使いにくいのが現状である。本発明の目的は、研
究室酵母及び実用酵母を用いた遺伝子操作、特に形質転
換において、安価な薬剤を選択マーカーとして用いるこ
とができ、かつ効率よく目的遺伝子を選択できる手法を
提供することにある。
遺伝子は、実用酵母、研究室酵母に関係なくあらゆる酵
母に使用できるという利点があるが、現在使用されてい
るものは、薬剤が非常に高価であったり、選択効果が弱
いため使いにくいのが現状である。本発明の目的は、研
究室酵母及び実用酵母を用いた遺伝子操作、特に形質転
換において、安価な薬剤を選択マーカーとして用いるこ
とができ、かつ効率よく目的遺伝子を選択できる手法を
提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するた
め、本発明者らは鋭意研究を重ね、本発明者らは、本発
明における課題を解決するために転写因子をコードする
遺伝子の使用が有効であることを見出した。そして、転
写因子遺伝子であるＹＡＰ１及び外来性プロモーターで
あるＰＧＫ(phosphoglycerate kinase)プロモーターよ
りなるセグメントを有するベクターを利用し、転写因子
の発現の増強による薬剤耐性能力向上を指標とすること
により、安価な薬剤を選択マーカーとして用いることが
でき、かつ効率よく目的遺伝子を選択できる形質転換方
法を開発することに成功し、本発明を完成するに至っ
た。
め、本発明者らは鋭意研究を重ね、本発明者らは、本発
明における課題を解決するために転写因子をコードする
遺伝子の使用が有効であることを見出した。そして、転
写因子遺伝子であるＹＡＰ１及び外来性プロモーターで
あるＰＧＫ(phosphoglycerate kinase)プロモーターよ
りなるセグメントを有するベクターを利用し、転写因子
の発現の増強による薬剤耐性能力向上を指標とすること
により、安価な薬剤を選択マーカーとして用いることが
でき、かつ効率よく目的遺伝子を選択できる形質転換方
法を開発することに成功し、本発明を完成するに至っ
た。
【０００６】即ち本発明は、以下のような構成より成
る。 （１）転写因子遺伝子ＹＡＰ１及び外来性プロモーター
であるＰＧＫプロモーターよりなるセグメントを利用し
て、転写因子の発現の増強による薬剤耐性能力向上を指
標としたことを特徴とする新規な出芽酵母の形質転換方
法。 （２）転写因子遺伝子ＹＡＰ１及び外来性プロモーター
であるＰＧＫプロモーターよりなるセグメントを有し、
転写因子の発現の増強による薬剤耐性能力の向上により
出芽酵母への遺伝子の導入を確認しうることを特徴とす
るベクター。 （３）出芽酵母由来の転写因子をコードするＹＡＰ１遺
伝子を含む酵母ベクターに、ＰＧＫプロモーターを組み
込んだことを特徴とするＹＡＰ１高発現ベクター。
る。 （１）転写因子遺伝子ＹＡＰ１及び外来性プロモーター
であるＰＧＫプロモーターよりなるセグメントを利用し
て、転写因子の発現の増強による薬剤耐性能力向上を指
標としたことを特徴とする新規な出芽酵母の形質転換方
法。 （２）転写因子遺伝子ＹＡＰ１及び外来性プロモーター
であるＰＧＫプロモーターよりなるセグメントを有し、
転写因子の発現の増強による薬剤耐性能力の向上により
出芽酵母への遺伝子の導入を確認しうることを特徴とす
るベクター。 （３）出芽酵母由来の転写因子をコードするＹＡＰ１遺
伝子を含む酵母ベクターに、ＰＧＫプロモーターを組み
込んだことを特徴とするＹＡＰ１高発現ベクター。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明において用いられる転写因
子ＹＡＰ１は、出芽酵母サッカロミセス・セレビジエの
転写因子であり、例えば、薬剤ストレス：cycloheximid
e、sulfometuron methyl、1,10-Phenanthroline(The Jo
urnal of Biological Chemistry 第２６８巻，第３１
巻，第２３６４０〜２３６４５頁，１９９３年)、酸化
ストレス：Ｈ2Ｏ2、diamide（The Journal of Biologic
al Chemistry 第２７２巻，第１２号，第７９０８〜７
９１４頁，１９９７年、The EMBO Journal第１６巻，第
７号，第１７１０〜１７２０頁，１９９７年）、4-Nitr
oquinoline N-oxide、金属ストレス：cadmium(The Jour
nal of Biological Chemistry 第２６９巻，第２０号，
第１４６９０〜１４６９７頁，１９９４年)等に酵母が
耐性を示す際の重要な媒体であり、通常は細胞質内に散
在しているが、上記のようなストレス要因が加わること
によって活性が増大し、核内へと移行する。これによっ
て酵母の細胞保護のための酵素や蛋白質をコードする遺
伝子群の発現を誘導することにより、酵母の生存率を向
上させる。
子ＹＡＰ１は、出芽酵母サッカロミセス・セレビジエの
転写因子であり、例えば、薬剤ストレス：cycloheximid
e、sulfometuron methyl、1,10-Phenanthroline(The Jo
urnal of Biological Chemistry 第２６８巻，第３１
巻，第２３６４０〜２３６４５頁，１９９３年)、酸化
ストレス：Ｈ2Ｏ2、diamide（The Journal of Biologic
al Chemistry 第２７２巻，第１２号，第７９０８〜７
９１４頁，１９９７年、The EMBO Journal第１６巻，第
７号，第１７１０〜１７２０頁，１９９７年）、4-Nitr
oquinoline N-oxide、金属ストレス：cadmium(The Jour
nal of Biological Chemistry 第２６９巻，第２０号，
第１４６９０〜１４６９７頁，１９９４年)等に酵母が
耐性を示す際の重要な媒体であり、通常は細胞質内に散
在しているが、上記のようなストレス要因が加わること
によって活性が増大し、核内へと移行する。これによっ
て酵母の細胞保護のための酵素や蛋白質をコードする遺
伝子群の発現を誘導することにより、酵母の生存率を向
上させる。
【０００８】該ＹＡＰ１遺伝子は上記文献に記載の方法
にて取得することができるが、本発明者らは以下の方法
により安価な薬剤（蛋白質合成阻害剤）であるシクロヘ
キシミド耐性遺伝子としてＹＡＰ１遺伝子を取得した。
すなわち、酵母をマルチコピー型のプラスミドバンクで
形質転換し、遺伝子の発現量を増加させたものをシクロ
ヘキシミド培地（１〜１０μｇ／ｍｌ）にまき、耐性能
増加により生育が見られた酵母を選択、シクロヘキシミ
ド耐性遺伝子ＹＡＰ１を抽出した(図１)。
にて取得することができるが、本発明者らは以下の方法
により安価な薬剤（蛋白質合成阻害剤）であるシクロヘ
キシミド耐性遺伝子としてＹＡＰ１遺伝子を取得した。
すなわち、酵母をマルチコピー型のプラスミドバンクで
形質転換し、遺伝子の発現量を増加させたものをシクロ
ヘキシミド培地（１〜１０μｇ／ｍｌ）にまき、耐性能
増加により生育が見られた酵母を選択、シクロヘキシミ
ド耐性遺伝子ＹＡＰ１を抽出した(図１)。
【０００９】上記のようにして取得したＹＡＰ１遺伝子
は、マルチコピー型のプラスミドベクターにより遺伝子
数を増加させることにより耐性能が向上している。しか
しながら、本発明の目的である研究室酵母及び実用酵母
を用いた遺伝子操作、特に形質転換において、安価な薬
剤を選択マーカーとして用いることができ、かつ効率よ
く目的遺伝子を選択できる手法を提供するためには、単
コピー型及び染色体組み込み型ベクターにおいても効果
がなければならない。
は、マルチコピー型のプラスミドベクターにより遺伝子
数を増加させることにより耐性能が向上している。しか
しながら、本発明の目的である研究室酵母及び実用酵母
を用いた遺伝子操作、特に形質転換において、安価な薬
剤を選択マーカーとして用いることができ、かつ効率よ
く目的遺伝子を選択できる手法を提供するためには、単
コピー型及び染色体組み込み型ベクターにおいても効果
がなければならない。
【００１０】しかし、これらのタイプのベクターは酵母
1細胞内に1コピーの遺伝子しか存在せず、このままでは
耐性能が低く実用性に欠ける。したがって、ＹＡＰ１遺
伝子が1コピーでも強い耐性能を保持するよう、ＹＡＰ
１遺伝子の改良を行う必要があった。本発明者らは、Ｙ
ＡＰ１遺伝子の上流に外来性プロモーターを組み込むこ
とにより、ＹＡＰ１の発現を増強せしめ薬剤耐性能力を
向上させることが可能であることを見出した。
1細胞内に1コピーの遺伝子しか存在せず、このままでは
耐性能が低く実用性に欠ける。したがって、ＹＡＰ１遺
伝子が1コピーでも強い耐性能を保持するよう、ＹＡＰ
１遺伝子の改良を行う必要があった。本発明者らは、Ｙ
ＡＰ１遺伝子の上流に外来性プロモーターを組み込むこ
とにより、ＹＡＰ１の発現を増強せしめ薬剤耐性能力を
向上させることが可能であることを見出した。
【００１１】本発明において用いる外来性プロモーター
は、宿主内での高発現を可能とするものであれば特に限
定されるものではない。酵母の外来性プロモーターとし
ては、解糖系酵素のプロモーターやガラクトース代謝関
連遺伝子のプロモーター、ホスファターゼ関連遺伝子の
プロモーターなどが好ましく用いることができるが、本
発明においてはｐＰＧＫを用いた。具体的には、ＹＡＰ
１遺伝子の上流にあるＹＡＰ１プロモーターをｐＰＧＫ
に変換することでＹＡＰ１の高発現を可能にし、これに
より酵母１細胞内に１コピーの遺伝子しか存在しない状
態でも安価な薬剤(例えば、シクロヘキシミド)に対する
耐性能力が向上し、実用的な形質転換方法とならしめた
ものである(図２)。
は、宿主内での高発現を可能とするものであれば特に限
定されるものではない。酵母の外来性プロモーターとし
ては、解糖系酵素のプロモーターやガラクトース代謝関
連遺伝子のプロモーター、ホスファターゼ関連遺伝子の
プロモーターなどが好ましく用いることができるが、本
発明においてはｐＰＧＫを用いた。具体的には、ＹＡＰ
１遺伝子の上流にあるＹＡＰ１プロモーターをｐＰＧＫ
に変換することでＹＡＰ１の高発現を可能にし、これに
より酵母１細胞内に１コピーの遺伝子しか存在しない状
態でも安価な薬剤(例えば、シクロヘキシミド)に対する
耐性能力が向上し、実用的な形質転換方法とならしめた
ものである(図２)。
【００１２】上記のように、本発明において転写因子遺
伝子ＹＡＰ１及び外来性プロモーターｐＰＧＫよりなる
セグメントを利用し転写因子の発現の増強による薬剤耐
性能力向上を指標とした新規な出芽酵母サッカロミセス
・セレビジエの形質転換方法を確立することができた。
また、転写因子遺伝子ＹＡＰ１と外来性プロモーターｐ
ＰＧＫよりなるセグメントを有し転写因子の発現の増強
による薬剤耐性能力向上により出芽酵母サッカロミセス
・セレビジエへの遺伝子の導入を確認しうるベクターを
構築することができた。
伝子ＹＡＰ１及び外来性プロモーターｐＰＧＫよりなる
セグメントを利用し転写因子の発現の増強による薬剤耐
性能力向上を指標とした新規な出芽酵母サッカロミセス
・セレビジエの形質転換方法を確立することができた。
また、転写因子遺伝子ＹＡＰ１と外来性プロモーターｐ
ＰＧＫよりなるセグメントを有し転写因子の発現の増強
による薬剤耐性能力向上により出芽酵母サッカロミセス
・セレビジエへの遺伝子の導入を確認しうるベクターを
構築することができた。
【００１３】具体的には、出芽酵母サッカロミセス・セ
レビジエ由来の転写因子をコードするＹＡＰ１遺伝子を
含む酵母ベクターに、高発現プロモーターｐＰＧＫを組
み込んだＹＡＰ１高発現ベクターを構築することができ
た。ここで、ｐＰＧＫは、恒常的に下流の蛋白を高発現
することで知られており(特許第２５０９１６３号公
報)、これによりＹＡＰ１蛋白が増産され、薬剤（例え
ば、シクロヘキシミド）耐性能が向上するものと考えら
れる。
レビジエ由来の転写因子をコードするＹＡＰ１遺伝子を
含む酵母ベクターに、高発現プロモーターｐＰＧＫを組
み込んだＹＡＰ１高発現ベクターを構築することができ
た。ここで、ｐＰＧＫは、恒常的に下流の蛋白を高発現
することで知られており(特許第２５０９１６３号公
報)、これによりＹＡＰ１蛋白が増産され、薬剤（例え
ば、シクロヘキシミド）耐性能が向上するものと考えら
れる。
【００１４】
【実施例】以下に、本発明に基づく形質転換方法および
ベクターを用いた実施例を示す。なお、実施例により、
本発明が特に限定されるものではない。
ベクターを用いた実施例を示す。なお、実施例により、
本発明が特に限定されるものではない。
【００１５】マルチコピー型 マルチコピー型プラスミドベクターにｐＰＧＫを組換
え、その下流にＹＡＰ１遺伝子を挿入し、ＹＥｐ−ＰＧ
Ｋｐ−ＹＡＰ１ベクターとした(図３)。これを、ＹＥｐ
−ＹＡＰ１ベクター、ＹＡＰ１を含まないｐＰＧＫのみ
のベクターとともに酵母Ｗ３０３−１Ａの形質転換に用
いたところ、ＹＥｐ−ＹＡＰ１ベクター（５μｇ／ｍ
ｌ）よりＹＥｐ−ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１ベクターにおい
て、はるかに高い濃度(１０μｇ／ｍｌ)の薬剤であるシ
クロヘキシミド耐性能が得られた(図４)。
え、その下流にＹＡＰ１遺伝子を挿入し、ＹＥｐ−ＰＧ
Ｋｐ−ＹＡＰ１ベクターとした(図３)。これを、ＹＥｐ
−ＹＡＰ１ベクター、ＹＡＰ１を含まないｐＰＧＫのみ
のベクターとともに酵母Ｗ３０３−１Ａの形質転換に用
いたところ、ＹＥｐ−ＹＡＰ１ベクター（５μｇ／ｍ
ｌ）よりＹＥｐ−ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１ベクターにおい
て、はるかに高い濃度(１０μｇ／ｍｌ)の薬剤であるシ
クロヘキシミド耐性能が得られた(図４)。
【００１６】単コピー型 単コピー型ベクターに、ｐＰＧＫを組換え、その下流に
ＹＡＰ１遺伝子を挿入し、ＹＣｐ−ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１
ベクターとした(図５)。これを、ＹＣｐ−ＹＡＰ１ベク
ター、ＹＡＰ１を含まないｐＰＧＫのみのベクターとと
もに酵母Ｗ３０３−１Ａの形質転換に用いたところ、Ｙ
Ｃｐ−ＹＡＰ１ベクター（１μｇ／ｍｌ）よりＹＣｐ−
ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１ベクターにおいて、はるかに高い濃
度(１０μｇ／ｍｌ)の薬剤であるシクロヘキシミド耐性
能が得られた(図６)。
ＹＡＰ１遺伝子を挿入し、ＹＣｐ−ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１
ベクターとした(図５)。これを、ＹＣｐ−ＹＡＰ１ベク
ター、ＹＡＰ１を含まないｐＰＧＫのみのベクターとと
もに酵母Ｗ３０３−１Ａの形質転換に用いたところ、Ｙ
Ｃｐ−ＹＡＰ１ベクター（１μｇ／ｍｌ）よりＹＣｐ−
ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１ベクターにおいて、はるかに高い濃
度(１０μｇ／ｍｌ)の薬剤であるシクロヘキシミド耐性
能が得られた(図６)。
【００１７】染色体組み込み型 染色体組み込み型ベクターに、ｐＰＧＫを組換え、その
下流にＹＡＰ１遺伝子を挿入し、ＹＩｐ−ＰＧＫｐ−Ｙ
ＡＰ１ベクターとした(図５)。これを、ＹＩｐ−ＹＡＰ
１ベクター、ＹＡＰ１を含まないｐＰＧＫのみのベクタ
ーとともに酵母Ｗ３０３−１Ａの形質転換に用いたとこ
ろ、ＹＩｐ−ＹＡＰ１ベクターよりＹＩｐ−ＰＧＫｐ−
ＹＡＰ１ベクターでより高い濃度の薬剤であるシクロヘ
キシミド耐性能が得られた(図６)。
下流にＹＡＰ１遺伝子を挿入し、ＹＩｐ−ＰＧＫｐ−Ｙ
ＡＰ１ベクターとした(図５)。これを、ＹＩｐ−ＹＡＰ
１ベクター、ＹＡＰ１を含まないｐＰＧＫのみのベクタ
ーとともに酵母Ｗ３０３−１Ａの形質転換に用いたとこ
ろ、ＹＩｐ−ＹＡＰ１ベクターよりＹＩｐ−ＰＧＫｐ−
ＹＡＰ１ベクターでより高い濃度の薬剤であるシクロヘ
キシミド耐性能が得られた(図６)。
【００１８】結果として、出芽酵母サッカロミセス・セ
レビジエ由来の転写因子をコードするＹＡＰ１遺伝子を
含む酵母ベクターに、高発現で知られるｐＰＧＫを組み
込んだＹＡＰ１高発現ベクター群で酵母を形質転換する
と、高濃度のシクロヘキシミド耐性能を得ることができ
た。
レビジエ由来の転写因子をコードするＹＡＰ１遺伝子を
含む酵母ベクターに、高発現で知られるｐＰＧＫを組み
込んだＹＡＰ１高発現ベクター群で酵母を形質転換する
と、高濃度のシクロヘキシミド耐性能を得ることができ
た。
【００１９】
【発明の効果】上述したように、本発明は新規な出芽酵
母の形質転換方法およびベクターを提供するものであ
り、転写因子遺伝子であるＹＡＰ１と外来性プロモータ
ーであるＰＧＫプロモーターよりなるセグメントを有す
るベクターを利用し、転写因子の発現の増強による薬剤
耐性能力向上を指標とすることにより、研究室酵母及び
実用酵母を用いた遺伝子操作、特に形質転換において、
安価な薬剤を選択マーカーとして用いることができ、か
つ効率よく目的遺伝子を選択できる。本発明は、各種研
究用途及び酒やパンの製造に用いられる出芽酵母サッカ
ロミセス・セレビジエを宿主とする組換えＤＮＡ実験の
際に特に有用なものとなる。
母の形質転換方法およびベクターを提供するものであ
り、転写因子遺伝子であるＹＡＰ１と外来性プロモータ
ーであるＰＧＫプロモーターよりなるセグメントを有す
るベクターを利用し、転写因子の発現の増強による薬剤
耐性能力向上を指標とすることにより、研究室酵母及び
実用酵母を用いた遺伝子操作、特に形質転換において、
安価な薬剤を選択マーカーとして用いることができ、か
つ効率よく目的遺伝子を選択できる。本発明は、各種研
究用途及び酒やパンの製造に用いられる出芽酵母サッカ
ロミセス・セレビジエを宿主とする組換えＤＮＡ実験の
際に特に有用なものとなる。
【図１】ＹＡＰ１遺伝子の取得方法を示す。
【図２】ＹＡＰ１遺伝子の高発現化方法を示す。
【図３】ＹＥｐ−ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１ベクターの構造を
示す。
示す。
【図４】ＹＥｐ−ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１ベクターのシクロ
ヘキシミド耐性能を示す。
ヘキシミド耐性能を示す。
【図５】ＹＣｐ−ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１ベクターおよびＹ
Ｉｐ−ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１ベクターの構造を示す。
Ｉｐ−ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１ベクターの構造を示す。
【図６】ＹＣｐ−ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１ベクターおよびＹ
Ｉｐ−ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１ベクターのシクロヘキシミド
耐性能を示す。
Ｉｐ−ＰＧＫｐ−ＹＡＰ１ベクターのシクロヘキシミド
耐性能を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B024 AA03 AA20 BA80 CA02 DA12 EA04 FA02 HA20 4B065 AA79X AA80X AA80Y AB01 AC10 BA01 CA24 CA42 CA46
Claims (3)
- 【請求項１】 転写因子遺伝子ＹＡＰ１及び外来性プロ
モーターであるＰＧＫプロモーターよりなるセグメント
を利用して、転写因子の発現の増強による薬剤耐性能力
向上を指標としたことを特徴とする新規な出芽酵母の形
質転換方法。 - 【請求項２】 転写因子遺伝子ＹＡＰ１及び外来性プロ
モーターであるＰＧＫプロモーターよりなるセグメント
を有し、転写因子の発現の増強による薬剤耐性能力の向
上により出芽酵母への遺伝子の導入を確認しうることを
特徴とするベクター。 - 【請求項３】 出芽酵母由来の転写因子をコードするＹ
ＡＰ１遺伝子を含む酵母ベクターに、ＰＧＫプロモータ
ーを組み込んだことを特徴とするＹＡＰ１高発現ベクタ
ー。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11029762A JP2000224988A (ja) | 1999-02-08 | 1999-02-08 | 形質転換方法およびベクター |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11029762A JP2000224988A (ja) | 1999-02-08 | 1999-02-08 | 形質転換方法およびベクター |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000224988A true JP2000224988A (ja) | 2000-08-15 |
Family
ID=12285084
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11029762A Withdrawn JP2000224988A (ja) | 1999-02-08 | 1999-02-08 | 形質転換方法およびベクター |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000224988A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014031831A1 (en) * | 2012-08-22 | 2014-02-27 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Production of fermentation products |
-
1999
- 1999-02-08 JP JP11029762A patent/JP2000224988A/ja not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014031831A1 (en) * | 2012-08-22 | 2014-02-27 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Production of fermentation products |
| US9593349B2 (en) | 2012-08-22 | 2017-03-14 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Fermentative production of alcohols |
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Legal Events
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