JP2000111555A - Method for determining blood type - Google Patents
Method for determining blood typeInfo
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の利用分野】本発明は、赤血球表面に存在する血
液型物質に基づいた血液型判定方法、及びそれに用いる
血液型判定用試験キット、並びに試験用具に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a blood type determination method based on a blood type substance present on the surface of red blood cells, a test kit for blood type determination used therefor, and a test device.
【０００２】[0002]
【発明の背景】血液型には、例えばＡＢＯ式血液型、Ｒ
ｈ式血液型、ＨＬＡ血液型等多くの種類がある。なかで
も、ＡＢＯ式血液型の判定は、輸血時の供血者と受血者
の適合性（輸血副作用）等の問題から特に重要であり、
一般に広く行われている。ＡＢＯ式血液型は、赤血球の
表面に存在する血液型物質であるＡ抗原、Ｂ抗原の有無
による分類で、該抗原は、赤血球のほか、ほとんど全て
の臓器、組織にも存在し、細胞膜の一部を構成している
と考えられている。また、血清中には、自己にない血液
型抗原に対する抗体が存在する。従って、ＡＢＯ式血液
型の判定は、赤血球表面の血液型物質（血液型抗原）を
検査する表試験の結果と、血清中の抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体
を検査する裏試験の結果とを照合して行われる。BACKGROUND OF THE INVENTION Blood types include, for example, ABO blood type, R
There are many types such as h-type blood type and HLA blood type. Above all, the determination of the ABO blood type is particularly important due to problems such as compatibility between the donor and the recipient at the time of transfusion (transfusion side effect),
Generally done widely. The ABO blood group is a classification based on the presence or absence of A and B antigens, which are blood group substances present on the surface of erythrocytes. The antigen is present on almost all organs and tissues in addition to erythrocytes, It is considered to make up the department. In addition, an antibody against a blood group antigen that is not present in the serum exists in the serum. Therefore, the ABO blood type is determined by comparing the results of a table test that tests blood group substances (blood group antigens) on the surface of red blood cells with the results of a back test that tests anti-A and anti-B antibodies in serum. It is done.
【０００３】また、Ｒｈ式血液型の不適合が輸血副作用
や新生児溶血性疾患等の原因となることから、臨床上重
要な血液型として知られており、Ｒｈ式血液型の判定
も、一般に広く行われている。Ｒｈ式血液型は、はじめ
アカゲザルの赤血球に対する動物免疫血清により発見さ
れたが、その後ヒト由来の抗体の検出によりＲｈ式血液
型が確立し、現在では40種類以上のＲｈ抗体が発見され
ている。[0003] Further, since incompatibility of the Rh blood type causes transfusion side effects and hemolytic diseases of newborn babies, it is known as a clinically important blood type. Have been done. Rh-type blood group was first discovered by animal sera against rhesus monkey erythrocytes, but then Rh-type blood group was established by detection of human-derived antibodies, and 40 or more Rh antibodies have been discovered at present.
【０００４】これらＡＢＯ式血液型の表試験やＲｈ式血
液型の判定には、3〜5％生食液浮遊血球（試料）と血液
型判定用抗体（血液型物質への特異的抗体）溶液とを混
合した後、遠心分離処理（3400rpm、15秒）し、血球沈
渣をほぐしながら凝集の有無を観察する試験管法や、5
〜10％生食液浮遊血球（試料）と血液型判定用抗体溶液
とをスライドグラス上で混合して凝集の有無を観察する
スライドグラス法等が知られている。しかしながら、こ
れらの方法は、凝集の有無による判定であるため、熟練
が必要であり、判定精度が低いという問題点や、ＡＢＯ
式血液型の場合、抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体の２種類、Ｒｈ式
血液型の場合、抗Ｃ抗体、抗ｃ抗体、抗Ｄ抗体、抗Ｅ抗
体、抗ｅ抗体の５種類の判定用抗体溶液を用いて凝集の
有無を観察する必要があり、操作が煩雑であるという問
題点等があった。[0004] For these ABO blood type table tests and Rh type blood type determinations, a 3-5% saline-floating blood cell (sample) and an antibody for blood type determination (antibody specific to blood type substances) solution are used. After mixing, centrifugation (3400 rpm, 15 seconds) and test tube method to observe the presence or absence of aggregation while loosening blood cell sediment,
A slide glass method and the like are known in which 血 10% saline solution blood cells (sample) and an antibody solution for blood type determination are mixed on a slide glass to observe the presence or absence of aggregation. However, since these methods are based on the presence or absence of agglutination, skill is required and the accuracy of the determination is low.
In the case of formula blood type, two kinds of anti-A antibody and anti-B antibody, and in the case of Rh type blood group, five kinds of determination antibodies of anti-C antibody, anti-c antibody, anti-D antibody, anti-E antibody and anti-e antibody It was necessary to observe the presence or absence of aggregation using a solution, and there was a problem that the operation was complicated.
【０００５】[0005]
【発明が解決すべき課題】本発明は、上記した如き状況
に鑑みなされたもので、簡便で高精度な血液型判定方
法、及びこれに用いる血液型判定用試験キット、並びに
試験用具の提供をその課題とする。SUMMARY OF THE INVENTION The present invention has been made in view of the above situation, and provides a simple and highly accurate blood type determination method, a blood type determination test kit and a test tool used therefor. The subject.
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】本発明は、血液型物質に
特異的に結合する物質（以下、血液型特異的結合物質と
略記する。）が担持され、且つ、赤血球が毛管現象によ
り移動可能な多孔体を用いることを特徴とする、血液型
判定方法の発明である。According to the present invention, a substance that specifically binds to a blood group substance (hereinafter abbreviated as a blood group specific binding substance) is supported, and red blood cells can move by capillary action. It is an invention of a blood type determination method, characterized by using a porous body.
【０００７】また、本発明は、血液型特異的結合物質が
担持され、且つ、赤血球が毛管現象により移動可能な多
孔体に、赤血球を含む液体試料を供し、その結果生じる
当該特異的結合物と当該赤血球との結合の有無により当
該試料の血液型を判定する方法の発明である。Further, the present invention provides a liquid sample containing erythrocytes on a porous body on which a blood type-specific binding substance is carried and on which erythrocytes can move by capillary action. This is an invention of a method for determining the blood type of the sample based on the presence or absence of binding to the red blood cells.
【０００８】更に、本発明は、血液型特異的結合物質が
担持され、且つ、赤血球が毛管現象により移動可能な多
孔体からなることを特徴とする、血液型判定用試薬キッ
トの発明である。Further, the present invention is an invention of a reagent kit for blood type determination, which is characterized by comprising a porous material carrying a blood type specific binding substance and allowing red blood cells to move by capillary action.
【０００９】更にまた、本発明は、血液型特異的結合物
質が担持されている判定部を具備した、赤血球が毛管現
象により移動可能な多孔体からなる血液型判定用試験用
具の発明である。Furthermore, the present invention is an invention of a blood type determination test device comprising a porous body in which red blood cells can move by capillary action, comprising a determination portion on which a blood type specific binding substance is carried.
【００１０】即ち、本発明者らは、簡便で、精度の高
い、赤血球表面に存在する血液型物質に基づいた血液型
判定方法を開発すべく鋭意研究を行った結果、血液型特
異的結合物質が担持され、且つ、赤血球が毛管現象によ
り移動可能な多孔体を用いて血液型の判定を行えば、従
来の血液型判定方法に於ける上記した如き問題を解決し
て、簡便に、高精度に血液型を判定し得ることを見出
し、本発明を完成するに至った。That is, the present inventors have conducted intensive studies to develop a simple and accurate blood type determination method based on the blood type substance present on the surface of red blood cells. Is carried out, and if the blood type is determined using a porous body in which red blood cells can move by capillary action, the above-described problems in the conventional blood type determination method can be solved, and simple and high accuracy can be achieved. It was found that the blood type could be determined in this manner, and the present invention was completed.
【００１１】本発明に於いて用いられる、赤血球が毛管
現象により移動可能な多孔体（以下、本発明に係る多孔
体と略記する。）としては、毛管現象が生じ得る性質を
有するものであり、且つ赤血球含有液体試料を接触させ
た場合に、その毛管現象により赤血球が移動可能である
ようなものであればよく、例えば多孔性のシート状乃至
膜状物、フォーム（発泡体）、織布状物、不織布状物、
編物状物等（所謂、吸収性担体）が挙げられる。また、
その孔径としては、例えば通常５〜100μm、好ましくは
７〜80μm、より好ましくは10〜50μmである。これら
は、天然、半合成又は合成の繊維状或いはその他の形状
の素材を、抄紙、製膜、発泡成型、編製、織製等の常法
により成型することにより得られるもの等が含まれる。
これらの素材としては、例えば綿、麻、絹、セルロー
ス、ロックウール、獣毛、ニトロセルロース、セルロー
スアセテート、ガラス繊維、カーボン繊維、ボロン繊
維、ポリアミド、アラミド、ポリビニルアルコール、ポ
リビニルアセテート、レーヨン、ポリエステル、ポリア
クリル酸、ポリアクリル酸エステル、ポリプロピレン、
ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン等
が挙げられる。尚、これら多孔体に更にアミノ基、カル
ボキシル基等の官能基を導入した、所謂活性基修飾多孔
体も本発明の多孔体に包含される。また、該多孔体の形
状は、特に限定されないが、矩形乃至方形や円形乃至楕
円形が一般的である。The porous material used in the present invention in which erythrocytes can move by capillary action (hereinafter, abbreviated as the porous material of the present invention) has a property capable of causing capillary action. In addition, any material can be used as long as the red blood cells can move by capillary action when the red blood cell-containing liquid sample is brought into contact with the liquid sample. For example, a porous sheet or film, foam (foam), woven cloth Objects, non-woven materials,
Knitted articles and the like (so-called absorbent carriers) are exemplified. Also,
The pore size is, for example, usually 5 to 100 μm, preferably 7 to 80 μm, and more preferably 10 to 50 μm. These include those obtained by molding natural, semi-synthetic or synthetic fibrous or other shaped materials by conventional methods such as paper making, film forming, foam molding, knitting, and weaving.
Examples of these materials include cotton, hemp, silk, cellulose, rock wool, animal hair, nitrocellulose, cellulose acetate, glass fiber, carbon fiber, boron fiber, polyamide, aramid, polyvinyl alcohol, polyvinyl acetate, rayon, polyester, Polyacrylic acid, polyacrylate, polypropylene,
Examples include polyethylene, polyvinyl chloride, polyvinylidene chloride and the like. In addition, a so-called active group-modified porous body in which a functional group such as an amino group or a carboxyl group is further introduced into these porous bodies is also included in the porous body of the present invention. The shape of the porous body is not particularly limited, but is generally rectangular or square or circular or oval.
【００１２】本発明に於いて用いられる血液型特異的結
合物質は、赤血球表面に存在する血液型物質（血液型抗
原；測定対象物質）に特異的に結合する物質であり、そ
の具体例としては、例えば抗体、レクチン等が挙げられ
る。The blood group-specific binding substance used in the present invention is a substance that specifically binds to a blood group substance (blood group antigen; substance to be measured) present on the surface of erythrocytes. For example, antibodies, lectins and the like can be mentioned.
【００１３】上記の抗体としては、例えば抗Ａ抗体、抗
Ｂ抗体等のＡＢＯ血液型抗原に対する抗体、抗Ｄ抗体、
抗Ｃ抗体、抗ｃ抗体、抗Ｅ抗体、抗ｅ抗体等のＲｈ血液
型抗原に対する抗体、抗Ｍ抗体、抗Ｎ抗体、抗Ｓ抗体、
抗ｓ抗体等のＭＮＳｓ血液型抗原に対する抗体、抗Ｐ1
抗体、抗Ｐk抗体、抗ＰＰ1ＰK抗体等のＰ血液型抗原に
対する抗体、抗Ｌｅa抗体、抗Ｌｅb抗体等のＬｅｗｉｓ
血液型抗原に対する抗体、抗Ｋ抗体、抗ｋ抗体等のＫｅ
ｌｌ血液型抗原に対する抗体、抗Ｆｙa抗体、抗Ｆｙb抗
体等のＤｕｆｆｙ血液型抗原に対する抗体、抗Ｊｋa抗
体、抗Ｊｋb抗体等のＫｉｄｄ血液型抗原に対する抗
体、抗Ｄｉa抗体、抗Ｄｉb抗体等のＤｉｅｇｏ血液型抗
原に対する抗体等が挙げられる。また、該抗体はポリク
ローナル抗体でもモノクローナル抗体でもよいが、均一
な性質を有する抗体の得易さ等を考慮すると、ポリクロ
ーナル抗体よりもモノクローナル抗体の方が好ましい。
これら抗体は、市販品を用いてもよいし、例えば兎、
馬、羊、山羊、ラット、マウス等の動物抗血清から公知
の方法〔例えば、「免疫実験学入門、第２刷、松橋直
ら、（株）学会出版センター(1981)」に記載の方法、
「タンパク質精製法，Robert.K.Scopes著，シュプリン
ガー・フェアラーク東京株式会社，1985年，37頁〜179
頁」に記載された方法等。〕で取得されるポリクローナ
ル抗体、或いは細胞融合技術や遺伝子組換え技術等を利
用した公知の方法〔Nature,vol.256,495(1975)に記載の
方法、Eur.J.Immunol, 6, 511(1976)に記載の方法
等。〕で取得されるモノクローナル抗体を用いてもよ
い。尚、これらを単独で用いても適宜組み合わせて用い
てもよい。また、本発明に於いて用いられる血液型特異
的結合物質としての抗体には、上記の抗体の一部、例え
ば、当該抗体をパパイン等で部分分解して得られるＦ
（ａｂ’）2フラグメント、Ｆ（ａｂ’）2フラグメント
を還元処理して得られるＦａｂ’フラグメント等の、所
謂抗体フラグメントも包含される。Examples of the above antibodies include antibodies against ABO blood group antigens such as anti-A antibody and anti-B antibody, anti-D antibody,
Antibodies against Rh blood group antigens such as anti-C antibody, anti-c antibody, anti-E antibody, anti-e antibody, anti-M antibody, anti-N antibody, anti-S antibody,
Antibody against MNSs blood group antigen such as anti-s antibody, anti-P 1
Antibody, anti-P k antibodies, antibodies to P blood group antigen such as anti-PP 1 P K antibody, anti-Le a antibody, Lewis, such as anti-Le b antibody
Ke such as an antibody against blood group antigen, anti-K antibody, anti-k antibody, etc.
Antibodies to ll blood group antigens, anti-Fy a antibodies, antibodies to Duffy blood group antigens such as anti-Fy b antibody, anti-Jk a antibody, an antibody against Kidd blood group antigens such as anti-Jk b antibody, anti-Di a antibodies, anti-Di b Antibodies to a Diego blood group antigen such as an antibody. The antibody may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody, but in consideration of the ease of obtaining an antibody having uniform properties, a monoclonal antibody is preferable to a polyclonal antibody.
These antibodies may be commercially available, for example, rabbits,
A method known from animal antisera of horses, sheep, goats, rats, mice, etc. [for example, the method described in “Introduction to Immunological Experiments, 2nd Printing, Nao Matsuhashi, Gakkai Shuppan Center (1981)”,
"Protein Purification Method, Robert.K.Scopes, Springer Verlag Tokyo Co., Ltd., 1985, pp. 37-179
Page ”. The polyclonal antibody obtained in, or a known method using cell fusion technology or gene recombination technology (Nature, vol. 256, 495 (1975) described method, Eur.J. Immunol, 6 , 511 (1976) And the like. ] May be used. These may be used alone or in combination as appropriate. The antibody as a blood group-specific binding substance used in the present invention includes a part of the above antibody, for example, F obtained by partially decomposing the antibody with papain or the like.
(Ab ') 2 fragments, F (ab') such as Fab 'fragments obtained by the 2 fragments reduction treatment, so-called antibody fragments are also encompassed.
【００１４】また、上記レクチンとしては、例えば抗A1
レクチン（ヒマラヤフジマメ由来）、抗Ｈレクチン（ハ
リエニシダ由来）等が挙げられる。これらレクチンは、
市販品を用いてもよいし、例えば公知の方法〔例えば、
「日本臨床衛生検査技師会ライブラリー XII 輸血検査
の実際，改訂第１版，「日臨技輸血検査標準法」改訂委
員会著，（社）日本臨床衛生検査技師会，1996年，171
頁」に記載の方法等。〕で取得されるものを用いてもよ
い。The lectins include, for example, anti-A1
Lectins (derived from Himalayan bean), anti-H lectins (derived from P. chinensis) and the like. These lectins are
A commercially available product may be used, or a known method [for example,
"The Japanese Society of Clinical Hygiene Laboratory XII Practice of Blood Transfusion, Revised 1st Edition", "Nichirin Skilled Blood Transfusion Test Standard Method" Revised Committee, Japan Clinical Hygiene Laboratory Engineers Association, 1996, 171
Page ”. ] May be used.
【００１５】本発明に於いて、血液型特異的結合物質を
本発明に係る多孔体に担持させる方法としては、通常こ
の分野で用いられる方法であればよく、例えば上記の本
発明に係る多孔体に上記した如き血液型特異的結合物質
を含有する溶液を、例えば塗布、滴下或いは噴霧等した
後、これを乾燥して物理的吸着により担持させる方法、
本発明に係る多孔体中の例えばアミノ基、カルボキシル
基等の官能基を利用して化学的に血液型特異的結合物質
を担持させる方法、目的の免疫反応に関与しないタンパ
ク質を血液型特異的結合物質と結合させた後、例えば塗
布、滴下或いは噴霧等した後、これを乾燥して物理的吸
着により担持させる方法等が挙げられる。尚、このよう
にして得られた血液型特異的結合物質が担持された本発
明に係る多孔体は、非特異的な吸着による測定への影響
を防止するために、所謂ブロッキング処理を施しておく
ことが望ましい。このようなブロッキング処理は、通常
この分野で行われる方法、例えば上記の多孔体を例えば
アルブミン、グロブリン、カゼイン、ポリビニルアルコ
ール、界面活性剤等のブロッキング剤（但し、測定への
影響のないものを選択して使用する。）を含有する適当
な緩衝液（例えばpHが５〜９程度で、10〜500mMの例え
ばトリス緩衝液、リン酸緩衝液、ベロナール緩衝液、ホ
ウ酸緩衝液、グッド緩衝液等）中に適当な時間浸漬した
後に乾燥する方法等により行えばよい。In the present invention, the method for supporting a blood type-specific binding substance on the porous material according to the present invention may be any method generally used in this field, such as the above-described porous material according to the present invention. A solution containing a blood group-specific binding substance as described above, for example, after coating, dripping or spraying, and then drying and carrying by physical adsorption,
A method for chemically supporting a blood group-specific binding substance by utilizing a functional group such as an amino group or a carboxyl group in a porous body according to the present invention, and a method in which a protein not involved in an objective immune reaction is bound to a blood group-specific binding substance. After binding with a substance, for example, a method of applying, dropping, spraying, or the like, drying the substance, and supporting the substance by physical adsorption is exemplified. In addition, the porous body according to the present invention carrying the blood group-specific binding substance thus obtained is subjected to a so-called blocking treatment in order to prevent the influence of nonspecific adsorption on the measurement. It is desirable. Such a blocking treatment is carried out by a method generally used in this field, for example, by using the above porous material as a blocking agent such as albumin, globulin, casein, polyvinyl alcohol, a surfactant, etc. (For example, Tris buffer, phosphate buffer, veronal buffer, borate buffer, Good buffer, etc., having a pH of about 5 to 9 and 10 to 500 mM, for example). ) May be carried out by a method of immersing in an appropriate time and then drying.
【００１６】血液型特異的結合物質の本発明に係る多孔
体への担持量は、測定対象物質（即ち、血液型物質）の
種類や、検出限界等をどの程度に設定するかによって変
動するが、例えば本発明に係る多孔体の血液型特異的結
合物質が担持される部分の単位面積（cm2）当たりの担
持量として通常0.01μg〜１mg、好ましくは0.01μg〜10
0μg、 より好ましくは0.05μg〜50μgである。The amount of the blood group-specific binding substance carried on the porous material according to the present invention varies depending on the type of the substance to be measured (ie, blood group substance) and the detection limit and the like. For example, the amount of the porous body according to the present invention that carries the blood group-specific binding substance per unit area (cm 2 ) is usually 0.01 μg to 1 mg, preferably 0.01 μg to 10 mg.
0 μg, more preferably 0.05 μg to 50 μg.
【００１７】本発明の判定方法は、血液型特異的結合物
質が担持され、且つ、赤血球が毛管現象により移動可能
な多孔体を用いる方法であればよく、特に限定されな
い。The determination method of the present invention is not particularly limited as long as it is a method using a porous body carrying a blood type-specific binding substance and capable of moving red blood cells by capillary action.
【００１８】本発明の方法は、具体的には例えば以下の
如く行えばよい。血液型特異的結合物質が担持され、且
つ、赤血球が毛管現象により移動可能な多孔体に、赤血
球を含む液体試料を供し、その結果生じる当該特異的結
合物と当該赤血球との結合の有無により当該試料の血液
型の判定を行う。即ち、当該赤血球が当該血液型特異的
結合物質と結合することで、当該箇所に赤血球が集積さ
れる結果、この赤血球の赤色（以下、「赤血球の結合に
由来する着色」という場合もある。）を認識することが
できる。図１に判定原理を示す。The method of the present invention may be specifically carried out, for example, as follows. The blood sample-specific binding substance is supported, and a liquid sample containing red blood cells is provided to a porous body in which red blood cells can move by capillary action. The blood type of the sample is determined. That is, as the red blood cells bind to the blood type-specific binding substance, the red blood cells accumulate at the location, resulting in the red color of the red blood cells (hereinafter, also referred to as “coloring derived from the binding of red blood cells”). Can be recognized. FIG. 1 shows the principle of determination.
【００１９】また、本発明の判定方法に於いて、種類の
異なる血液型特異的結合物質を複数個用いてこれを行え
ば、血液型の判定を一回の操作で行うことができる。Further, in the determination method of the present invention, if a plurality of different types of blood group-specific binding substances are used, the determination of the blood type can be performed by one operation.
【００２０】例えば抗Ａ抗体及び抗Ｂ抗体を用いて本発
明の判定方法を行えば、ＡＢＯ血液型の判定、即ち、Ａ
型、Ｂ型、ＡＢ型又はＯ型の判定を一回の操作で行うこ
とができる。For example, if the determination method of the present invention is performed using an anti-A antibody and an anti-B antibody, the determination of ABO blood group,
Type, B type, AB type or O type can be determined by one operation.
【００２１】即ち、図２に示すように、抗Ａ抗体と抗Ｂ
抗体が担持され、且つ赤血球が毛管現象により移動可能
な多孔体に、赤血球を含む液体試料を供し、その結果生
じる当該抗Ａ抗体と抗Ｂ抗体の担持部分に於ける赤血球
の結合に由来する着色をもとに当該試料の血液型の判定
を行えばよい。尚、図２で用いた液体試料はＡ型赤血球
を含有するものである。That is, as shown in FIG.
A liquid sample containing erythrocytes is provided to a porous body on which the antibody is carried and the erythrocytes can move by capillary action, and coloring resulting from the binding of the erythrocytes in the resulting portion carrying the anti-A and anti-B antibodies is performed. May be used to determine the blood type of the sample. The liquid sample used in FIG. 2 contains type A red blood cells.
【００２２】そして、上記ＡＢＯ血液型の判定に於い
て、抗Ａ抗体担持部位にのみ赤血球に由来する着色が認
められた場合、試料中の赤血球にはＡ型の抗原のみが存
在していることから、血液型はＡ型と判定され、抗Ｂ抗
体担持部位にのみ赤血球に由来する着色が認められた場
合、試料中の赤血球にはＢ型の抗原のみが存在している
ことから、血液型はＢ型と判定される。また、抗Ａ抗体
担持部位及び抗Ｂ抗体担持部位の両方に赤血球に由来す
る着色が認められた場合、試料中の赤血球にはＡ型とＢ
型の両方の抗原が存在していることから、血液型はＡＢ
型と判定され、抗Ａ抗体担持部位及び抗Ｂ抗体担持部位
の何れにも赤血球に由来する着色が認められない場合、
試料中の赤血球にはＡ型とＢ型の両方の抗原が存在して
いないことから、血液型はＯ型と判定される。In the above determination of ABO blood type, when coloring derived from erythrocytes is observed only at the site carrying the anti-A antibody, it is necessary that the erythrocytes in the sample contain only type A antigen. Therefore, the blood type was determined to be type A, and if coloring derived from erythrocytes was observed only in the anti-B antibody-carrying site, the erythrocytes in the sample contained only the B-type antigen. Is determined to be B-type. In addition, when coloring derived from erythrocytes is observed in both the anti-A antibody carrying site and the anti-B antibody carrying site, the erythrocytes in the sample are type A and B
Blood type is AB because both types of antigens are present
If it is determined that the type, the coloring derived from red blood cells is not observed in any of the anti-A antibody carrying site and the anti-B antibody carrying site,
Since the red blood cells in the sample do not have both type A and type B antigens, the blood type is determined to be type O.
【００２３】また、例えば抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体、抗Ｄ抗
体を用いて本発明の判定方法を行えば、ＡＢＯ血液型の
判定のみならずＲｈ血液型のうち最も重要であるＤ型の
判定、即ち、Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型又はＯ型の判定とＤ型
陽性又はＤ型陰性の判定とを一回の操作で同時に行うこ
とができる。即ち、図３に示すように、抗Ａ抗体、抗Ｂ
抗体及び抗Ｄ抗体が担持され、且つ赤血球が毛管現象に
より移動可能な多孔体に、赤血球を含む液体試料を供
し、その結果生じる当該抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体、抗Ｄ抗体
の担持部分に於ける赤血球の結合に由来する着色をもと
に当該試料の血液型の判定を行えばよい。尚、図３で用
いた液体試料はＡＢＯ血液型がＡ型であって、Ｄ型陽性
である赤血球を含有するものである。When the determination method of the present invention is performed using, for example, an anti-A antibody, an anti-B antibody, and an anti-D antibody, not only the determination of ABO blood type but also the determination of D type, which is the most important of Rh blood types, can be performed. That is, the determination of A type, B type, AB type or O type and the determination of D type positive or D type negative can be performed simultaneously by one operation. That is, as shown in FIG.
A liquid sample containing red blood cells is provided to a porous body on which antibodies and anti-D antibodies are supported and red blood cells can move by capillary action. The blood type of the sample may be determined based on the coloring resulting from the binding of red blood cells in the sample. The liquid sample used in FIG. 3 has an ABO blood type of A and contains red blood cells positive for D type.
【００２４】そして、上記ＡＢＯ血液型とＤ型の同時判
定に於いて、ＡＢＯ血液型の判定は先に述べたとおりで
ある。また、Ｄ型の判定は、抗Ｄ抗体担持部位に赤血球
に由来する着色が認められた場合、試料中の赤血球には
Ｄ型の抗原が存在していることから、Ｄ型陽性と判定さ
れ、抗Ｄ抗体担持部位に赤血球に由来する着色が認めら
れない場合、試料中の赤血球にはＤ型の抗原が存在して
いないことから、Ｄ型陰性と判定される。In the simultaneous determination of the ABO blood type and the D type, the determination of the ABO blood type is as described above. In addition, in the determination of D-type, if coloring derived from erythrocytes is observed in the anti-D antibody carrying site, since erythrocytes in the sample have D-type antigens, it is determined to be D-type positive, When no coloring derived from erythrocytes is observed in the anti-D antibody-carrying site, the erythrocytes in the sample have no D-type antigen, and thus are determined to be D-type negative.
【００２５】更に、例えば抗Ｄ抗体、抗Ｃ抗体、抗Ｅ抗
体、抗ｃ抗体及び抗ｅ抗体を用いて本発明の判定方法を
行えば、Ｒｈ血液型を判定することができる。即ち、Ｄ
型、Ｃ型、Ｅ型、ｃ型又はｅ型の判定を一回の操作で同
時に行うことができる。即ち、図４に示すように、抗Ｄ
抗体、抗Ｃ抗体、抗Ｅ抗体、抗ｃ抗体及び抗ｅ抗体が担
持され、且つ赤血球が毛管現象により移動可能な多孔体
に、赤血球を含む液体試料を供し、その結果生じる当該
抗Ｄ抗体、抗Ｃ抗体、抗Ｅ抗体、抗ｃ抗体及び抗ｅ抗体
の担持部分に於ける赤血球の結合に由来する着色をもと
に当該試料の血液型の判定を行えばよい。尚、図４で用
いた液体試料はＲｈ血液型がＥ型である赤血球を含有す
るものである。尚、上記Ｒｈ血液型の判定に於いては、
その重要性から、Ｄ型の判定が、Ｃ型、Ｅ型、ｃ型及び
ｅ型の判定に先立って行われる場合が多いので、このよ
うな場合には、Ｃ型、Ｅ型、ｃ型及びｅ型の判定と同時
にＤ型の判定を行う必要はない。従って、上記のＲｈ血
液型判定方法には、抗Ｃ抗体、抗Ｅ抗体、抗ｃ抗体及び
抗ｅ抗体のみを用いたものも包含される。Further, if the determination method of the present invention is performed using, for example, an anti-D antibody, an anti-C antibody, an anti-E antibody, an anti-c antibody and an anti-e antibody, the Rh blood type can be determined. That is, D
The type, C type, E type, c type or e type can be determined simultaneously by one operation. That is, as shown in FIG.
An antibody, an anti-C antibody, an anti-E antibody, an anti-c antibody and an anti-e antibody are carried, and a liquid sample containing erythrocytes is provided to a porous body on which erythrocytes can move by capillary action, and the resulting anti-D antibody, The blood type of the sample may be determined based on the coloring resulting from the binding of erythrocytes in the portion carrying the anti-C antibody, anti-E antibody, anti-c antibody and anti-e antibody. The liquid sample used in FIG. 4 contains red blood cells whose Rh blood type is E. In the determination of the Rh blood type,
Because of its importance, the D-type determination is often performed prior to the C-type, E-type, c-type and e-type determinations. In such a case, the C-type, E-type, c-type and It is not necessary to perform the D-type determination simultaneously with the e-type determination. Therefore, the above-mentioned Rh blood type determination method includes a method using only anti-C antibody, anti-E antibody, anti-c antibody and anti-e antibody.
【００２６】即ち、上記Ｒｈ血液型の判定に於いて、抗
Ｄ抗体担持部位に赤血球に由来する着色が認められた場
合、試料中の赤血球にはＤ型の抗原が存在していること
から、Ｒｈ血液型はＤ型と判定され、抗Ｃ抗体担持部位
に赤血球に由来する着色が認められた場合、試料中の赤
血球にはＣ型の抗原が存在していることから、Ｒｈ血液
型はＣ型と判定され、抗Ｅ抗体担持部位に赤血球に由来
する着色が認められた場合、試料中の赤血球にはＥ型の
抗原が存在していることから、Ｒｈ血液型はＥ型と判定
される。また、抗ｃ抗体担持部位に赤血球に由来する着
色が認められた場合、試料中の赤血球にはｃ型の抗原が
存在していることから、Ｒｈ血液型はｃ型と判定され、
抗ｅ抗体担持部位に赤血球に由来する着色が認められた
場合、試料中の赤血球にはｅ型の抗原が存在しているこ
とから、Ｒｈ血液型はｅ型と判定される。That is, in the above determination of the Rh blood type, if coloring derived from erythrocytes is observed in the anti-D antibody carrying site, the erythrocytes in the sample contain D-type antigens. The Rh blood type is determined to be D type, and when coloring derived from erythrocytes is observed at the site carrying the anti-C antibody, the R blood type is C type since red blood cells in the sample contain C type antigen. If it is determined to be type, and coloring derived from erythrocytes is observed in the anti-E antibody-carrying site, since the erythrocytes in the sample have an antigen of type E, the Rh blood type is determined to be type E. . In addition, when coloring derived from erythrocytes is observed in the anti-c antibody carrying site, since the erythrocytes in the sample have c-type antigens, the Rh blood type is determined to be c-type,
If coloring derived from erythrocytes is observed at the anti-e antibody carrying site, the erythrocytes in the sample contain e-type antigen, and thus the Rh blood type is determined to be e-type.
【００２７】本発明に係る多孔体に、種類の異なる血液
型特異的結合物質を複数個担持させるに当たっては、通
常、生体由来試料の移動方向上の異なる箇所に夫々別々
に担持させるか、或いは生体由来試料の移動方向上でな
い異なる箇所に夫々別々に担持させる。When a plurality of different types of blood group-specific binding substances are supported on the porous body according to the present invention, they are usually separately supported at different positions in the moving direction of the sample derived from a living body, respectively. Each sample is separately supported at a different position not in the moving direction of the origin sample.
【００２８】本発明に於ける液体試料としては、赤血球
を含むものであればよいが、例えば、血液、これから抽
出して得られた赤血球等、或いはこれらを適当な緩衝液
等で希釈或いは懸濁させて得られる液体試料等が挙げら
れる。また、当該液体試料中の赤血球濃度としては、通
常0.1〜20％、好ましくは0.5〜10％、より好ましくは１
〜５％である。The liquid sample in the present invention may be any liquid sample containing red blood cells. Examples of the liquid sample include blood, red blood cells obtained by extracting the blood, or diluting or suspending them with an appropriate buffer. And a liquid sample obtained by such a method. The concentration of red blood cells in the liquid sample is usually 0.1 to 20%, preferably 0.5 to 10%, more preferably 1 to 10%.
~ 5%.
【００２９】本発明の血液型判定用試薬キット及び血液
型判定用試験用具は、上述した如き本発明の血液型判定
方法に使用されるもので、血液型特異的結合物質が担持
され、且つ、赤血球が毛管現象により移動可能な多孔体
からなるものである。尚、本発明のキット又は試験用具
は単一の本発明に係る多孔体からなるものであっても、
複数の本発明に係る多孔体を組み合わせて一体に構成し
たものであっても良い。また、本発明のキット又は試験
用具の主要構成要素である血液型特異的結合物質や本発
明に係る多孔体の好ましい態様や具体例は上で述べた通
りである。The blood type determination reagent kit and blood type determination test tool of the present invention are used in the blood type determination method of the present invention as described above, and carry a blood type specific binding substance. The erythrocytes are made of a porous material that can move by capillary action. Incidentally, even if the kit or test device of the present invention is formed of a single porous body according to the present invention,
It may be configured integrally by combining a plurality of porous bodies according to the present invention. The preferred embodiments and specific examples of the blood group-specific binding substance, which is a main component of the kit or the test device of the present invention, and the porous body of the present invention are as described above.
【００３０】本発明のキット又は試験用具の態様の一例
を図５に示す。 ＄ 尚、図５に於いて各数字は夫々以下のものを示す。 １ ： 本発明に係る多孔体 ２ ： 血液型特異的結合物質担持部分（判定部）FIG. 5 shows an example of an embodiment of the kit or test device of the present invention. ＄ In FIG. 5, each numeral indicates the following. 1: porous body according to the present invention 2: blood group-specific binding substance-carrying portion (determination portion)
【００３１】また、本発明のキット又は試験用具の好ま
しい態様の一例を図６に示す。FIG. 6 shows an example of a preferred embodiment of the kit or test device of the present invention.
【００３２】尚、図６に於いて各数字は夫々以下のもの
を示す。 １ ： 支持体 ２ ： 本発明に係る多孔体（展開膜） ３ ： 血液型特異的結合物質担持部分（判定部） ４ ： 液体試料滴下部 ５ ： 液体吸収部 ６ ： テープIn FIG. 6, each numeral indicates the following. 1: support 2: porous body (developing membrane) according to the present invention 3: blood group-specific binding substance-supporting portion (determination portion) 4: liquid sample dropping portion 5: liquid absorption portion 6: tape
【００３３】また、ＡＢＯ血液型の判定に用いられる試
験用具の好ましい態様の一つを図７に示す。尚、図７に
於いて各数字は夫々以下のものを示す。 １ ： 支持体 ２ ： 本発明に係る多孔体（展開膜） ３ ： 抗Ａ抗体担持部分（Ａ型判定部） ４ ： 抗Ｂ抗体担持部分（Ｂ型判定部） ５ ： 液体試料滴下部 ６ ： 液体吸収部 ７ ： テープFIG. 7 shows a preferred embodiment of the test device used for determining the ABO blood type. In FIG. 7, each numeral indicates the following. 1: Support 2: Porous body (development membrane) according to the present invention 3: Anti-A antibody carrying portion (A-type determining portion) 4: Anti-B antibody carrying portion (B-type determining portion) 5: Liquid sample dropping portion 6: Liquid absorbing part 7: Tape
【００３４】ＡＢＯ血液型の判定とＤ型の判定を同時に
行う際に用いられる試験用具の好ましい態様の一つを図
８に示す。尚、図８に於いて各数字は夫々以下のものを
示す。 １ ： 支持体 ２ ： 本発明に係る多孔体（展開膜） ３ ： 抗Ａ抗体担持部分（Ａ型判定部） ４ ： 抗Ｂ抗体担持部分（Ｂ型判定部） ５ ： 抗Ｄ抗体担持部分（Ｄ型判定部） ６ ： 液体試料滴下部 ７ ： 液体吸収部 ８ ： テープFIG. 8 shows a preferred embodiment of a test device used for simultaneously determining the ABO blood type and the D type. In FIG. 8, each numeral indicates the following. 1: Support 2: Porous body (development membrane) according to the present invention 3: Anti-A antibody carrying portion (A-type determining portion) 4: Anti-B antibody carrying portion (B-type determining portion) 5: Anti-D antibody carrying portion ( D-type determination section) 6: Liquid sample dropping section 7: Liquid absorption section 8: Tape
【００３５】更に、Ｒｈ血液型の判定に用いられる試験
用具の好ましい態様の一つを図９に示す。尚、図９に於
いて各数字は夫々以下のものを示す。 １ ： 支持体 ２ ： 本発明に係る多孔体（展開膜） （３）： 抗Ｄ抗体担持部分（Ｄ型判定部） ４ ： 抗Ｃ抗体担持部分（Ｃ型判定部） ５ ： 抗Ｅ抗体担持部分（Ｅ型判定部） ６ ： 抗ｃ抗体担持部分（ｃ型判定部） ７ ： 抗ｅ抗体担持部分（ｅ型判定部） ８ ： 液体試料滴下部 ９ ： 液体吸収部 １０ ： テープ 尚、前述した如く、Ｒｈ血液型の判定に於いては、その
重要性から、Ｄ型の判定が、Ｃ型、Ｅ型、ｃ型及びｅ型
の判定に先立って行われる場合が多いので、このような
場合には、Ｃ型、Ｅ型、ｃ型及びｅ型の判定と同時にＤ
型の判定を行う必要はない。従って、上記の本発明に係
るＲｈ血液型の判定に用いられる試験用具には、抗Ｃ抗
体、抗Ｅ抗体、抗ｃ抗体及び抗ｅ抗体のみを担持させた
本発明に係る多孔体からなるＲｈ血液型判定用試験用具
も包含される。FIG. 9 shows a preferred embodiment of a test device used for determining the Rh blood type. In FIG. 9, each numeral indicates the following. 1: Support 2: Porous body according to the present invention (developing membrane) (3): Anti-D antibody carrying portion (D-type determining portion) 4: Anti-C antibody carrying portion (C-type determining portion) 5: Anti-E antibody carrying Part (E-type determination part) 6: Anti-c antibody carrying part (c-type determination part) 7: Anti-e antibody carrying part (e-type determination part) 8: Liquid sample dropping part 9: Liquid absorption part 10: Tape As described above, in the determination of the Rh blood type, the D type determination is often performed prior to the C type, E type, c type and e type determinations due to its importance. In the case, D is determined simultaneously with the determination of C type, E type, c type and e type.
There is no need to determine the type. Therefore, the test device used for the determination of the Rh blood type according to the present invention includes the Rh according to the present invention, which carries only the anti-C antibody, anti-E antibody, anti-c antibody and anti-e antibody. A blood-type determination test device is also included.
【００３６】上記した如き例えば図６乃至図９で示され
る本発明の試験用具を調製するには、例えば以下の如く
して行えばよい。即ち、先ず，例えば適当な大きさの支
持体上に、血液型特異的結合物質（例えば抗Ａ抗体、抗
Ｂ抗体、抗Ｄ抗体、抗Ｃ抗体、抗Ｅ抗体、抗ｃ抗体、抗
ｅ抗体等）が担持されている判定部を有する本発明に係
る多孔体を接着して展開膜を形成する。尚、該試験用具
に於いては、液体試料の吸収及び判定部での免疫反応を
円滑に行わせるために、判定部の上端に液体吸収部を設
け、展開膜より展開されてくる液体試料を効率よく吸収
し得るようにしてもよい。これらの部分は、相互間に毛
管現象が生じるように接着されていればよく、より毛管
現象を生じやすくするために、展開膜と液体吸収部とが
約１〜２mm程度重なるように接着されているのが望まし
い。また、該試験用具に於いて、液体試料滴下部に滴下
された液体試料が、展開膜の表面上に急速に展開し、赤
血球が判定部の表面付近に担持されている血液型特異的
結合物質にのみ結合して、判定部での着色が薄くなって
判定が困難となるのを防止する目的で、判定部の下端よ
り５mm〜20mmの位置にテープを貼付しても、或いは判定
部の下端より５mm〜20mmの位置から判定部を覆うように
テープを貼付してもよい。当該テープは、上記した目的
を達成し得るものであれば何れでもよく、例えばポリプ
ロピレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビ
ニリデン、ポリスチレン等の材質からなる非吸収性のシ
ート状乃至膜状物が挙げられる。尚、判定部を覆うよう
にテープを貼付する場合、当該テープは、無色透明なも
のが望ましい。また、該試験用具に於いて、支持体とし
ては、例えばポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロ
ピレン、ポリスチレン等の材質からなるシート状のもの
が挙げられ、液体吸収部の材質は、展開膜を形成させる
ために用いられる多孔体と同じものでもよい。尚、全体
の大きさとしては、液体試料滴下部に液体試料を例えば
滴下等してから毛管現象により展開膜の末端にまで液体
試料が展開されるまでの時間が、通常15分以内、好まし
くは10分以内となるように設定される。In order to prepare the test device of the present invention as shown in FIGS. 6 to 9 as described above, for example, it may be carried out as follows. That is, first, for example, a blood group-specific binding substance (for example, an anti-A antibody, an anti-B antibody, an anti-D antibody, an anti-C antibody, an anti-E antibody, an anti-c antibody, an anti-e antibody, on a support having an appropriate size). Etc.) are adhered to form a spread film by bonding the porous body according to the present invention, which has a determination portion carrying the same. In addition, in the test device, in order to smoothly absorb the liquid sample and perform an immune reaction in the determination unit, a liquid absorption unit is provided at an upper end of the determination unit, and the liquid sample developed from the development film is provided. You may make it absorb efficiently. These portions may be bonded to each other so as to cause a capillary phenomenon therebetween.In order to more easily cause the capillary phenomenon, the developing film and the liquid absorbing portion are bonded so as to overlap by about 1 to 2 mm. Is desirable. Further, in the test device, the liquid sample dropped on the liquid sample dropping portion rapidly spreads on the surface of the developing film, and the blood type-specific binding substance in which red blood cells are supported near the surface of the determination portion. In order to prevent the determination section from becoming less colored and making the determination difficult, a tape may be attached at a position 5 mm to 20 mm from the lower end of the determination section, or the lower end of the determination section. A tape may be attached so as to cover the determination unit from a position of 5 mm to 20 mm. The tape is not particularly limited as long as the above-mentioned object can be achieved, and examples thereof include non-absorbable sheet-like or film-like materials made of materials such as polypropylene, polyethylene, polyvinyl chloride, polyvinylidene chloride, and polystyrene. Can be When a tape is stuck so as to cover the determination unit, the tape is desirably colorless and transparent. Further, in the test device, as the support, for example, a sheet-like material made of a material such as polyvinyl chloride, polyethylene, polypropylene, and polystyrene is used, and the material of the liquid absorbing portion is used for forming a developing film. It may be the same as the porous body used in the above. In addition, as the entire size, the time from the dropping of the liquid sample to the liquid sample dropping portion, for example, to the development of the liquid sample to the end of the developing film by capillary action, is usually within 15 minutes, preferably Set to be within 10 minutes.
【００３７】上記した如き本発明の試験用具を用いて本
発明の判定方法を行うには、例えば以下の如く行えばよ
い。The determination method of the present invention using the test device of the present invention as described above may be performed, for example, as follows.
【００３８】即ち、先ず上記の如くして調製された試験
用具を用い、液体試料を展開膜上の然るべき部分に滴下
したり、展開膜自体を該試料中に浸漬する等して、展開
膜上の適当な箇所に液体試料を供する。（尚、当該試験
用具に液体試料滴下部が設けられている場合は、液体試
料滴下部に液体試料を滴下したり、液体試料滴下部を液
体試料中に浸漬する等すればよい。）暫時放置すると、
毛管現象により液体試料が展開膜上に展開して、血液型
特異的結合物質が担持されている部分に於いて、液体試
料中の赤血球と該赤血球表面に存在する血液型物質に対
応する血液型特異的結合物質との間に反応が生じ、該赤
血球と血液型特異的結合物質との複合体（反応生成物）
が形成される該反応生成物は赤血球に由来する着色を生
じるので、当該着色から液体試料の血液型を判定する。That is, first, using the test device prepared as described above, a liquid sample is dropped on an appropriate portion on the developing film, or the developing film itself is immersed in the sample, and the like. Provide the liquid sample to the appropriate place. (If the test device is provided with a liquid sample dropping portion, the liquid sample may be dropped into the liquid sample dropping portion, or the liquid sample dropping portion may be immersed in the liquid sample.) Then
The liquid sample develops on the developing membrane by capillary action, and at the portion where the blood type-specific binding substance is supported, the red blood cells in the liquid sample and the blood group corresponding to the blood group substance present on the surface of the red blood cells A reaction takes place between the specific binding substance and a complex (reaction product) of the red blood cells and the blood group-specific binding substance.
The color of the liquid sample is determined from the coloration of the reaction product, since the reaction product in which is formed produces a color derived from red blood cells.
【００３９】尚、判定は、目視で行なっても、また、例
えばプレテスター RM-405、プレテスター RM-505〔何れ
も和光純薬工業（株）製〕等の尿試験紙用のテスター、
例えばデンシトメーター等の機器を用いて行ってもよ
い。The determination may be made by visual inspection, or by using a urine test paper tester such as Pretester RM-405 or Pretester RM-505 (both manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.).
For example, the measurement may be performed using a device such as a densitometer.
【００４０】以下に実施例を挙げ、本発明を更に具体的
に説明するが、本発明はこれらにより何等限定されるも
のではない。Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, but the present invention is not limited thereto.
【００４１】[0041]
【実施例】実施例．１ （１）展開膜の作製 血液型抗Ａ抗体〔モノクローナル抗Ａワコー:和光純薬
工業（株）〕を多孔体であるニトロセルロース膜（孔
径：12μm、ワットマン社製）（３cm×0.5cm）に対して
塗布機（リノマート：カマグ社製）により下端より１cm
の位置に線塗布して（0.8μl／cm2）Ａ型判定部を作製
し、同じ膜の別の部位（下端より1.5cm）に血液型抗Ｂ
抗体〔モノクローナル抗Ｂワコー:和光純薬工業
（株）〕を塗布機により線塗布して（0.8μl／cm2）Ｂ
型判定部を作製する。更に、同じ膜の別の部位（下端よ
り２cm）に血液型抗Ｄ抗体〔モノクローナル抗Ｄワコ
ー:和光純薬工業（株）を〕塗布機により線塗布して
（0.8μl／cm2）Ｄ型判定部を作製し、抗Ａ型抗体、抗
Ｂ型抗体及び抗Ｄ抗体の夫々３種類からなる３本の判定
部を作製した。該膜を乾燥させた後、50mM Ｎ，Ｎ−ビ
ス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホ
ン酸（BES）緩衝液（１％ ショ糖及び１％ BSA含有、pH
7.2）中に30分間浸し、次いで、50mM BES緩衝液〔１％
ショ糖、１％ ポリ（ビニルピロリドン）−コ−ビニル
酢酸含有、pH7.2〕で洗浄した後、乾燥させて、展開膜
を作製した。DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS Embodiment. 1 (1) Preparation of spread membrane Blood type anti-A antibody [monoclonal anti-A Wako: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.] is a porous nitrocellulose membrane (pore size: 12 μm, manufactured by Whatman) (3 cm × 0.5 cm). 1cm from the lower end by a coating machine (Renomart: manufactured by Kamag)
(0.8 μl / cm 2 ) to form a type A determination part, and apply blood type anti-B to another part of the same membrane (1.5 cm from the lower end).
An antibody [monoclonal anti-B Wako: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.] is coated with a liner (0.8 μl / cm 2 ) B
A type determination unit is manufactured. Further, a blood type anti-D antibody [monoclonal anti-D Wako: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.] was applied to another part (2 cm from the lower end) of the same membrane using a coating machine to form a line (0.8 μl / cm 2 ). Judgment sections were prepared, and three judgment sections each consisting of three types of anti-A antibody, anti-B antibody and anti-D antibody were prepared. After the membrane was dried, 50 mM N, N-bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES) buffer (containing 1% sucrose and 1% BSA, pH
7.2) for 30 minutes and then 50 mM BES buffer [1%
After washing with sucrose, containing 1% poly (vinylpyrrolidone) -co-vinylacetic acid, pH 7.2], it was dried to produce a developed membrane.
【００４２】（２）試験用具の組立 支持体である塩ビシート（６cm×0.5cm）に（１）で作
製した展開膜と該展開膜の上端に液体吸収部用の濾紙
（ワットマン社製、３cm×0.5cm）を展開膜と約１〜２m
m程度重なるように両面テープで接着し、展開膜の下端
より0.5cmの位置にテープ〔コクヨ（株）製、材質：ポ
リ塩化ビニル、１mm×0.5cm〕を貼り、図１０に示す試
験用具を作製した。尚、図１０に於いて各数字は夫々以
下のものを示す。 １ ： 支持体 ２ ： 展開膜 ３ ： 抗Ａ抗体担持部分（Ａ型判定部） ４ ： 抗Ｂ抗体担持部分（Ｂ型判定部） ５ ： 抗Ｄ抗体担持部分（Ｄ型判定部） ６ ： 液体試料滴下部 ７ ： 液体吸収部 ８ ： テープ(2) Assembling of the test device On a PVC sheet (6 cm × 0.5 cm) as a support, the developing film prepared in (1) and a filter paper for liquid absorbing part (manufactured by Whatman, 3 cm) were placed on the upper end of the developing film. × 0.5cm) with the developed membrane and about 1-2m
A double-sided tape is adhered so as to overlap by about m, and a tape (manufactured by KOKUYO Co., Ltd., material: polyvinyl chloride, 1 mm × 0.5 cm) is attached to a position 0.5 cm from the lower end of the developed film, and the test tool shown in FIG. Produced. In FIG. 10, each numeral indicates the following. 1: support 2: developing membrane 3: anti-A antibody carrying portion (A-type determining portion) 4: anti-B antibody carrying portion (B-type determining portion) 5: anti-D antibody carrying portion (D-type determining portion) 6: liquid Sample dropping part 7: Liquid absorption part 8: Tape
【００４３】（３）血液型判定方法 （２）で作製した試験用具の液体試料滴下部に、液体試
料50〜100μlを滴下して、15分放置後、判定部の着色を
観察した。液体試料にＡ型の希釈血液を用いた場合に
は、Ａ型判定部のみに赤血球に由来する着色が認めら
れ、Ｂ型判定部に着色は認められず、液体試料にＢ型の
希釈血液を用いた場合には、Ｂ型判定部のみに赤血球に
由来する着色が認められ、Ａ型判定部に着色は認められ
なかった。また、液体試料にＡＢ型の希釈血液を用いた
場合には、Ａ型判定部及びＢ型判定部の両者に赤血球に
由来する着色が認められた。液体試料にＯ型の希釈血液
を用いた場合には、Ａ型判定部及びＢ型判定部の何れに
も赤血球に由来する着色は認められなかった。また液体
試料にＲｈ陽性の希釈血液を用いた場合には、Ｒｈ基本
型判定部に赤血球に由来する着色が認められ、液体試料
にＲｈ陰性の希釈血液を用いた場合には、Ｒｈ基本型判
定部に赤血球に由来する着色は認められなかった。これ
らのことから、本発明の試験用具を用いて血液型の判定
を行えば、ＡＢＯ型の判定（表試験）が一回の操作で簡
単に行え、更にはＲｈ陰性・陽性の判定も同時に行える
ことが判る。(3) Blood Type Judgment Method A liquid sample of 50 to 100 μl was dropped on the liquid sample dropping portion of the test device prepared in (2), and after standing for 15 minutes, coloring of the determination portion was observed. When the type A diluted blood is used for the liquid sample, coloring derived from erythrocytes is recognized only in the type A determination part, no coloring is recognized in the type B determination part, and the type B diluted blood is added to the liquid sample. When used, coloring derived from red blood cells was observed only in the B-type determination part, and no coloring was observed in the A-type determination part. When AB-type diluted blood was used as the liquid sample, coloring derived from red blood cells was observed in both the A-type determination section and the B-type determination section. When O-type diluted blood was used as the liquid sample, no coloration derived from red blood cells was observed in any of the A-type determination section and the B-type determination section. Further, when Rh-positive diluted blood is used for the liquid sample, coloring derived from red blood cells is observed in the Rh basic type determination section, and when Rh-negative diluted blood is used for the liquid sample, Rh basic type determination is performed. No coloring derived from red blood cells was observed in the part. From these facts, if the blood type is determined using the test device of the present invention, the ABO type determination (table test) can be easily performed in a single operation, and the determination of Rh negative / positive can be performed simultaneously. You can see that.
【００４４】実施例．２ （１）展開膜の作製 血液型抗Ｃ抗体〔モノクローナル抗Ｃワコー:和光純薬
工業（株）〕を多孔体であるニトロセルロース膜（孔
径：12μm、ワットマン社製）（３cm×0.5cm）に対して
塗布機により下端より１cmの位置に線塗布した（0.8μl
／cm2）Ｃ型判定部を作製し、同じ膜の別の部位（下端
より1.5cm）に血液型抗Ｅ抗体〔モノクローナル抗Ｅワ
コー:和光純薬工業（株）〕を塗布機により線塗布して
（0.8μl／cm2）Ｅ型判定部を作製した。更に、同じ膜
の別の部位（下端より２cm）に血液型抗ｃ抗体〔モノク
ローナル抗ｃワコー:和光純薬工業（株）〕を塗布機に
より線塗布して（0.8μl／cm2）ｃ型判定部を作製し、
また、同じ膜の別の部位（下端より2.5cm）に血液型抗
ｅ抗体〔モノクローナル抗ｅワコー:和光純薬工業
（株）〕を塗布機により線塗布して（0.8μl／cm2）ｅ
型判定部を作製し、抗Ｃ型抗体、抗Ｅ型抗体、抗ｃ型抗
体及び抗ｅ型抗体の４種類からなる４本の判定部を作製
した。該膜を乾燥させた後、50mM BES緩衝液（１％ シ
ョ糖及び１％ BSA含有、pH7.2）中に30分間浸し、次い
で、50mM BES緩衝液〔１％ ショ糖、１％ ポリ（ビニル
ピロリドン）−コ−ビニル酢酸含有、pH7.2〕で洗浄し
た後、乾燥させて、展開膜を作製した。Embodiment 1 2 (1) Preparation of spread membrane Blood type anti-C antibody [monoclonal anti-C Wako: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.] is a porous nitrocellulose membrane (pore size: 12 μm, manufactured by Whatman) (3 cm × 0.5 cm). Was applied by a coating machine at a position 1cm from the lower end (0.8μl
/ Cm 2 ) Create a C-type determination part, and apply a blood type anti-E antibody [monoclonal anti-E Wako: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.] to another part (1.5 cm from the lower end) of the same membrane with a coating machine. (0.8 μl / cm 2 ) to prepare an E-type judging part. Further, a blood group anti-c antibody [monoclonal anti-c Wako: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.] was line-coated on another portion (2 cm from the lower end) of the same membrane with a coating machine (0.8 μl / cm 2 ), and c-type. Make a judgment part,
A blood type anti-e antibody (monoclonal anti-e Wako: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was line-coated with another part (2.5 cm from the lower end) of the same membrane using a coating machine (0.8 μl / cm 2 ) e.
A type determination part was prepared, and four determination parts consisting of four types of anti-C type antibody, anti-E type antibody, anti-c type antibody and anti-e type antibody were prepared. After drying the membrane, it was immersed in 50 mM BES buffer (containing 1% sucrose and 1% BSA, pH 7.2) for 30 minutes, and then 50 mM BES buffer [1% sucrose, 1% poly (vinyl) After washing with (pyrrolidone) -co-vinyl acetic acid, pH 7.2], it was dried to produce a developed film.
【００４５】（２）試験用具の組立 塩ビシート（６cm×0.5cm）に（１）で作製した展開膜
と該展開膜の上端に液体吸収部用の濾紙（ワットマン社
製、３cm×0.5cm）を展開膜と約１〜２mm程度重なるよ
うに両面テープで接着し、展開膜の下端より0.5cmの位
置にテープ〔コクヨ（株）製、材質：ポリ塩化ビニル、
１mm×0.5cm〕を貼り、図１１に示す試験用具を作製し
た。尚、図１１に於いて各数字は夫々以下のものを示
す。 １ ： 支持体 ２ ： 展開膜 ３ ： 抗Ｃ抗体担持部分（Ｃ型判定部） ４ ： 抗Ｅ抗体担持部分（Ｅ型判定部） ５ ： 抗ｃ抗体担持部分（ｃ型判定部） ６ ： 抗ｅ抗体担持部分（ｅ型判定部） ７ ： 液体試料滴下部 ８ ： 液体吸収部 ９ ： テープ(2) Assembling of the test device The developed film prepared in (1) above and a filter paper for liquid absorbing part (Whatman, 3 cm × 0.5 cm) on the PVC sheet (6 cm × 0.5 cm) and the upper end of the developed film. With a double-sided tape so that it overlaps the development film by about 1 to 2 mm, and a tape [manufactured by KOKUYO Corporation, material: polyvinyl chloride, 0.5 cm from the lower end of the development film
1 mm × 0.5 cm] was applied to produce a test device shown in FIG. In FIG. 11, each numeral indicates the following. 1: support 2: spreading membrane 3: anti-C antibody carrying portion (C-type determining portion) 4: anti-E antibody carrying portion (E-type determining portion) 5: anti-c antibody carrying portion (c-type determining portion) 6: anti e antibody carrying part (e-type determination part) 7: liquid sample dropping part 8: liquid absorption part 9: tape
【００４６】（３）血液型判定方法 （２）で作製した試験用具の液体試料滴下部に液体試料
50〜100μlを滴下して、15分放置後、判定部の着色を観
察した。液体試料にＣ型の希釈血液を用いた場合には、
Ｃ型判定部のみに赤血球に由来する着色が認められ、液
体試料にＥ型の希釈血液を用いた場合には、Ｅ型判定部
のみに赤血球に由来する着色が認められた。また、液体
試料にｃ型の希釈血液を用いた場合には、ｃ型判定部の
みに赤血球に由来する着色が認められ、液体試料にｅ型
の希釈血液を用いた場合には、ｅ型判定部のみに赤血球
に由来する着色が認められた。これらのことから、本発
明の試験用具を用いて血液型の判定を行えば、Ｒｈ型の
判定が一回の操作で簡単に行えることが判る。(3) Blood type determination method The liquid sample was placed on the liquid sample dropping part of the test device prepared in (2).
After 50 to 100 μl was dropped and left for 15 minutes, coloring of the judgment part was observed. When using type C diluted blood for the liquid sample,
Coloring derived from erythrocytes was observed only in the C-type determination part, and coloring derived from erythrocytes was observed only in the E-type determination part when diluted blood of type E was used for the liquid sample. In addition, when the c-type diluted blood was used for the liquid sample, coloring derived from erythrocytes was observed only in the c-type determination section, and when the e-type diluted blood was used for the liquid sample, the e-type determination was performed. Coloring derived from erythrocytes was observed only in the part. From these facts, it can be understood that when the blood type is determined using the test device of the present invention, the determination of the Rh type can be easily performed by one operation.
【００４７】[0047]
【発明の効果】以上述べた如く、本発明は、簡便で、高
精度な血液型判定方法、及びこれに用いる血液型判定用
試薬キット並びに試験用具を提供するものであり、本発
明を利用することにより、簡便に、精度良く生体由来試
料の血液型を判定することができ、更には血液型を１回
の操作で判定することができるという効果を奏する。As described above, the present invention provides a simple and highly accurate blood type determination method, a blood type determination reagent kit and a test tool used in the method, and the present invention is utilized. This has the effect that the blood type of the biological sample can be easily and accurately determined, and the blood type can be determined by a single operation.
【図１】本発明の血液型判定方法の好ましい態様の原理
を模式的に示す図である。FIG. 1 is a diagram schematically showing the principle of a preferred embodiment of the blood type determination method of the present invention.
【図２】本発明の血液型判定方法の好ましい態様の原理
を模式的に示す図である。FIG. 2 is a diagram schematically illustrating the principle of a preferred embodiment of the blood type determination method of the present invention.
【図３】本発明の血液型判定方法の好ましい態様の原理
を模式的に示す図である。FIG. 3 is a diagram schematically illustrating the principle of a preferred embodiment of the blood type determination method of the present invention.
【図４】本発明の血液型判定方法の好ましい態様の原理
を模式的に示す図である。FIG. 4 is a diagram schematically illustrating the principle of a preferred embodiment of the blood type determination method of the present invention.
【図５】本発明の血液型判定用試験用具の一例を示す図
である。FIG. 5 is a diagram showing an example of a blood type determination test device of the present invention.
【図６】本発明の血液型判定用試験用具の好ましい態様
の一つを示す図である。FIG. 6 is a view showing one preferred embodiment of the test device for blood type determination of the present invention.
【図７】本発明の血液型判定用試験用具の好ましい態様
の一つを示す図である。FIG. 7 is a view showing one preferred embodiment of the test device for blood type determination of the present invention.
【図８】本発明の血液型判定用試験用具の好ましい態様
の一つを示す図である。FIG. 8 is a view showing one preferred embodiment of the blood type determination test device of the present invention.
【図９】本発明の血液型判定用試験用具の好ましい態様
の一つを示す図である。FIG. 9 is a view showing one of preferred embodiments of the blood type determination test device of the present invention.
【図１０】実施例１で作製したＡＢＯ型及びＲｈ基本型
判定用試験用具を示す図である。FIG. 10 is a view showing a test device for ABO type and Rh basic type determination produced in Example 1.
【図１１】実施例２で作製したＲｈ型判定用試験用具を
示す図である。FIG. 11 is a view showing a Rh-type determination test device manufactured in Example 2.
図５に於いて各数字は夫々以下のものを示す。 １ ： 本発明に係る多孔体 ２ ： 血液型特異的結合物質担持部分（判定部） 図６に於いて各数字は夫々以下のものを示す。 １ ： 支持体 ２ ： 本発明に係る多孔体（展開膜） ３ ： 血液型特異的結合物質担持部分（判定部） ４ ： 液体試料滴下部 ５ ： 液体吸収部 ６ ： テープ 図７に於いて各数字は夫々以下のものを示す。 １ ： 支持体 ２ ： 本発明に係る多孔体（展開膜） ３ ： 抗Ａ抗体担持部分（Ａ型判定部） ４ ： 抗Ｂ抗体担持部分（Ｂ型判定部） ５ ： 液体試料滴下部 ６ ： 液体吸収部 ７ ： テープ 図８に於いて各数字は夫々以下のものを示す。 １ ： 支持体 ２ ： 本発明に係る多孔体（展開膜） ３ ： 抗Ａ抗体担持部分（Ａ型判定部） ４ ： 抗Ｂ抗体担持部分（Ｂ型判定部） ５ ： 抗Ｄ抗体担持部分（Ｄ型判定部） ６ ： 液体試料滴下部 ７ ： 液体吸収部 ８ ： テープ 図９に於いて各数字は夫々以下のものを示す。 １ ： 支持体 ２ ： 本発明に係る多孔体（展開膜） （３）： 抗Ｄ抗体担持部分（Ｄ型判定部） ４ ： 抗Ｃ抗体担持部分（Ｃ型判定部） ５ ： 抗Ｅ抗体担持部分（Ｅ型判定部） ６ ： 抗ｃ抗体担持部分（ｃ型判定部） ７ ： 抗ｅ抗体担持部分（ｅ型判定部） ８ ： 液体試料滴下部 ９ ： 液体吸収部 １０ ： テープ 図１０に於いて各数字は夫々以下のものを示す。 １ ： 支持体 ２ ： 展開膜 ３ ： 抗Ａ抗体担持部分（Ａ型判定部） ４ ： 抗Ｂ抗体担持部分（Ｂ型判定部） ５ ： 抗Ｄ抗体担持部分（Ｄ型判定部） ６ ： 液体試料滴下部 ７ ： 液体吸収部 ８ ： テープ 図１１に於いて各数字は夫々以下のものを示す。 １ ： 支持体 ２ ： 展開膜 ３ ： 抗Ｃ抗体担持部分（Ｃ型判定部） ４ ： 抗Ｅ抗体担持部分（Ｅ型判定部） ５ ： 抗ｃ抗体担持部分（ｃ型判定部） ６ ： 抗ｅ抗体担持部分（ｅ型判定部） ７ ： 液体試料滴下部 ８ ： 液体吸収部 ９ ： テープ In FIG. 5, each numeral indicates the following. 1: porous body according to the present invention 2: blood group-specific binding substance-carrying portion (determination portion) In FIG. 6, each numeral indicates the following. 1: Support 2: Porous body (developing membrane) according to the present invention 3: Blood group-specific binding substance-carrying portion (determination portion) 4: Liquid sample dropping portion 5: Liquid absorption portion 6: Tape In FIG. The numbers indicate the following, respectively. 1: Support 2: Porous body (development membrane) according to the present invention 3: Anti-A antibody carrying portion (A-type determining portion) 4: Anti-B antibody carrying portion (B-type determining portion) 5: Liquid sample dropping portion 6: Liquid absorbing part 7: tape In FIG. 8, each numeral indicates the following. 1: Support 2: Porous body (development membrane) according to the present invention 3: Anti-A antibody carrying portion (A-type determining portion) 4: Anti-B antibody carrying portion (B-type determining portion) 5: Anti-D antibody carrying portion ( 6: liquid sample dropping part 7: liquid absorbing part 8: tape In FIG. 9, each number indicates the following. 1: Support 2: Porous body according to the present invention (developing membrane) (3): Anti-D antibody carrying portion (D-type determining portion) 4: Anti-C antibody carrying portion (C-type determining portion) 5: Anti-E antibody carrying Part (E-type determination part) 6: Anti-c antibody carrying part (c-type determination part) 7: Anti-e antibody carrying part (e-type determination part) 8: Liquid sample dropping part 9: Liquid absorption part 10: Tape FIG. In the figures, the numbers indicate the following, respectively. 1: support 2: developing membrane 3: anti-A antibody carrying portion (A-type determining portion) 4: anti-B antibody carrying portion (B-type determining portion) 5: anti-D antibody carrying portion (D-type determining portion) 6: liquid Sample dropping part 7: Liquid absorbing part 8: Tape In FIG. 11, each number indicates the following. 1: support 2: spreading membrane 3: anti-C antibody carrying portion (C-type determining portion) 4: anti-E antibody carrying portion (E-type determining portion) 5: anti-c antibody carrying portion (c-type determining portion) 6: anti e antibody carrying part (e-type determination part) 7: liquid sample dropping part 8: liquid absorption part 9: tape
Claims (13)
持され、且つ、赤血球が毛管現象により移動可能な多孔
体を用いることを特徴とする、血液型判定方法。1. A blood type determination method, comprising using a porous body that carries a substance that specifically binds to a blood group substance and that allows red blood cells to move by capillary action.
持され、且つ、赤血球が毛管現象により移動可能な多孔
体に、赤血球を含む液体試料を供し、その結果生じる当
該特異的結合物と当該赤血球との結合の有無により当該
試料の血液型を判定する方法。2. A liquid sample containing erythrocytes is provided to a porous body carrying a substance that specifically binds to a blood group substance and capable of moving erythrocytes by capillary action. A method for determining the blood type of the sample based on the presence or absence of binding to the red blood cells.
抗Ａ型抗体、抗Ｂ型抗体及び抗Ｄ型抗体からなる群より
選ばれた少なくとも１種以上である、請求項１又は２に
記載の方法。3. The substance which specifically binds to a blood group substance,
The method according to claim 1 or 2, wherein the method is at least one selected from the group consisting of an anti-A antibody, an anti-B antibody, and an anti-D antibody.
抗Ｃ型抗体、抗ｃ型抗体、抗Ｅ型抗体、抗ｅ型抗体及び
抗Ｄ型抗体からなる群より選ばれた少なくとも１種以上
である、請求項１又は２に記載の方法。4. The substance which specifically binds to a blood group substance,
3. The method according to claim 1, wherein the method is at least one selected from the group consisting of an anti-C antibody, an anti-c antibody, an anti-E antibody, an anti-e antibody, and an anti-D antibody.
のである、請求項１〜４の何れかに記載の方法。5. The method according to claim 1, wherein the porous body has a pore size of 5 to 100 μm.
持され、且つ、赤血球が毛管現象により移動可能な多孔
体からなることを特徴とする、血液型判定用試薬キッ
ト。6. A reagent kit for determining blood type, which comprises a substance which specifically binds to a blood group substance and which is made of a porous material in which red blood cells can move by capillary action.
抗Ａ型抗体、抗Ｂ型抗体及び抗Ｄ型抗体からなる群より
選ばれた少なくとも１種以上である請求項５に記載のキ
ット。7. The substance which specifically binds to a blood group substance,
The kit according to claim 5, wherein the kit is at least one member selected from the group consisting of an anti-A antibody, an anti-B antibody and an anti-D antibody.
抗Ｃ型抗体、抗ｃ型抗体、抗Ｅ型抗体、抗ｅ型抗体及び
抗Ｄ型抗体からなる群より選ばれた少なくとも１種以上
である、請求項５に記載のキット。8. The substance that specifically binds to a blood group substance,
The kit according to claim 5, which is at least one member selected from the group consisting of an anti-C antibody, an anti-c antibody, an anti-E antibody, an anti-e antibody, and an anti-D antibody.
のである、請求項６〜８の何れかに記載のキット。9. The kit according to claim 6, wherein the porous body has a pore size of 5 to 100 μm.
担持されている判定部を具備した、赤血球が毛管現象に
より移動可能な多孔体からなる血液型判定用試験用具。10. A blood type determination test device comprising a porous body in which erythrocytes can move by capillary action, comprising a determination unit carrying a substance that specifically binds to a blood type substance.
が、抗Ａ型抗体、抗Ｂ型抗体及び抗Ｄ型抗体からなる群
より選ばれた少なくとも１種以上である請求項８に記載
の試験用具。11. The substance according to claim 8, wherein the substance that specifically binds to a blood group substance is at least one selected from the group consisting of an anti-A antibody, an anti-B antibody and an anti-D antibody. Testing tools.
が、抗Ｃ型抗体、抗ｃ型抗体、抗Ｅ型抗体、抗ｅ型抗体
及び抗Ｄ型抗体からなる群より選ばれた少なくとも１種
以上である、請求項８に記載の試験用具。12. A substance that specifically binds to a blood group substance, wherein the substance is at least one selected from the group consisting of an anti-C antibody, an anti-c antibody, an anti-E antibody, an anti-e antibody, and an anti-D antibody. 9. The test device of claim 8, wherein the test device is at least a species.
ものである、請求項１０〜１２の何れかに記載の試験用
具。13. The test device according to claim 10, wherein the porous body has a pore size of 5 to 100 μm.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| JP29618998A JP2000111555A (en) | 1998-10-02 | 1998-10-02 | Method for determining blood type |
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|---|---|
| JP2000111555A true JP2000111555A (en) | 2000-04-21 |
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ID=17830331
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| JP (1) | JP2000111555A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010515030A (en) * | 2006-12-29 | 2010-05-06 | メディオン ダイアグノスティクス アクチェンゲゼルシャフト | Method and apparatus for determining small cell populations in heterogeneous cell populations |
| WO2012083361A1 (en) * | 2010-12-24 | 2012-06-28 | Monash University | Method and system for detection of blood types |
-
1998
- 1998-10-02 JP JP29618998A patent/JP2000111555A/en not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010515030A (en) * | 2006-12-29 | 2010-05-06 | メディオン ダイアグノスティクス アクチェンゲゼルシャフト | Method and apparatus for determining small cell populations in heterogeneous cell populations |
| WO2012083361A1 (en) * | 2010-12-24 | 2012-06-28 | Monash University | Method and system for detection of blood types |
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