ITTO20110716A1 - Procedimento per la produzione di superfici di titanio multifunzionali per riduzione del rischio di infezione ed incrementata osteointegrazione e prodotto realizzato mediante tale procedimento. - Google Patents

Description

“PROCEDIMENTO PER LA PRODUZIONE DI SUPERFICI DI TITANIO MULTIFUNZIONALI PER RIDUZIONE DEL RISCHIO DI INFEZIONE ED INCREMENTATA OSTEOINTEGRAZIONE E PRODOTTO REALIZZATO MEDIANTE TALE PROCEDIMENTOâ€

DESCRIZIONE

La presente invenzione si riferisce ad un procedimento per la produzione di superfici di titanio multifunzionali per riduzione del rischio di infezione e per una più rapida osteointegrazione e ad un prodotto realizzato mediante tale procedimento.

Il problema delle infezioni in ortopedia à ̈ presentato dai clinici come “high medical need†, la cui insorgenza à ̈, per esempio, del 1-2% nelle operazioni di protesizzazione dell’anca. Ancora maggiore à ̈ l’insorgenza di infezioni in implantologia orale, come ad esempio i casi di perimplantite. In entrambi i casi à ̈ necessaria la revisione ed asportazione dell’impianto, con conseguente dolore e forte disagio per il paziente.

È noto che alcuni metalli come argento, bismuto, rame e zinco esercitino un’azione antibatterica, inibendo sia l’adesione sia la proliferazione dei batteri. In particolare l’argento ha un’azione antibatterica di lunga durata e ad ampio spettro, anche in concentrazioni molto basse (ppb), che à ̈ efficace anche su specie batteriche resistenti agli antibiotici (Staphylococcus aureus). Esso à ̈ efficace anche come antimicotico. Per quanto noto finora, le specie batteriche non sviluppano resistenza all’azione dell’argento. Opportunamente dosato, l’argento non ha effetti genotossici o citotossici (né su osteoblasti né su cellule epiteliali) né locali né sistemici. Quanto detto vale essenzialmente per l’argento in forma ionica, mentre il metallo massivo necessita di trattamenti specifici per poter esplicare un’azione antibatterica(come, per esempio, descritto in US 4476590), senza esercitare un’azione citotossica. Caso diverso risulta essere quello delle naoparticelle di Argento, che risultano essere di per sé antibatteriche.

Anche il rame ha mostrato, in alcuni studi, una buona efficacia antibatterica, unita ad una bassa tossicità.

Esistono alcune tecniche già note per introdurre questi agenti antibatterici inorganici su diversi biomateriali, come quelle descritte in US4476590 e US2004129112A1 che prevedono impiantazione ionica, quelle descritte in US2004129112A1 che prevedono tecniche CVD/PVD, quelle descritte in US4476590 e US2004129112A1 che prevedono tecniche di sputtering, quelle descritte in US4476590 che prevedono tecniche di film evaporation, quelle descritte in US2009100792 che prevedono anodizzazione/ossidazione elettrolitica in elettroliti contenenti argento, elettrodeposizione, formazione di nanotubi di titanato di sodio o di ossido di titanio contenenti argento come quelle descritte in US2009093881A1, rivestimento con titanato di sodio contenente Ag come quelle descritte in CN101766540, rivestimenti sol-gel, rivestimenti con idrossiapatite contente Ag, rivestimenti plasma spray.

In particolare, il materiale prodotto secondo CN101766540 presenta un rivestimento di titanato di sodio ed una superficie con gradiente composizionale di Na sfruttando reazioni di scambio ionico che coinvolgono il sodio.

Inoltre, nel materiale prodotto secondo US2010015193A1 l’agente antibatterico à ̈ presente ad isole, mentre in Journal of Clinical Neuroscience 18 (2011) 391–395 tale agente costituisce un rivestimento che maschera la superficie sottostante.

Inoltre, il materiale prodotto secondo US2009280156 presenta un rivestimento non permanente e biosolubile.

Inoltre, Journal of Colloid and Interface Science 350 (2010) 402–408 descrive un procedimento che utilizza una soluzione pre-preparata di nanoparticelle di Ag.

International Journal of Nanomedicine 2010;5:261–267 descrive invece un procedimento nel quale à ̈ necessaria la silanizzazione della superficie seguita dalla fase di rivestimento.

Scopo quindi della presente invenzione à ̈ quello di risolvere i suddetti problemi della tecnica anteriore fornendo un procedimento per la produzione di superfici di titanio multifunzionali per riduzione del rischio di infezione e per una più rapida osteointegrazione che consiste nello sfruttamento della reazione fra titanio, perossido di idrogeno e sale/ossido di Ag/Cu/Zn/Bi in un unico stadio.

Inoltre, uno scopo della presente invenzione à ̈ quello di fornire un procedimento per la produzione di superfici di titanio multifunzionali per riduzione del rischio di infezione e per una più rapida osteointegrazione più economico rispetto a quanto proposto dalla tecnica nota, in quanto non richiede l’utilizzo né di apparecchiature sofisticate, né di soluzioni corrosive o di applicazione di campi elettrici o di trattamenti di lunga durata, ed a molti stadi, e non ha rischi di contaminazione della superficie, conferendo le proprietà bioattive e antibatteriche alla superficie mediante un unico processo, con significativi risparmi in termini sia di tempi che di costi rispetto alle soluzioni a molti stadi note nello stato della tecnica.

Un altro scopo della presente invenzione à ̈ quello di fornire un procedimento per la produzione di superfici di titanio multifunzionali per riduzione del rischio di infezione e per una più rapida osteointegrazione che, nel sistema ternario, presenti caratteristiche diverse da quanto presumibile considerando le singole reazioni dei sistemi binari perossido di idrogeno più sale /ossido di Ag/Cu/Zn/Bi e perossido di idrogeno/Ti, senza fare uso di una soluzione pre-preparata di nanoparticelle di Ag, e generando l’agente antibatterico direttamente in situ sulla superficie.

Inoltre, uno scopo della presente invenzione à ̈ quello di fornire un procedimento per la produzione di superfici di titanio multifunzionali per riduzione del rischio di infezione e per una più rapida osteointegrazione che non richieda la silanizzazione della superficie nà ̈ fasi di rivestimento, conservando la rugosità della superficie pre-esitente rispetto al trattamento.

Inoltre, uno scopo della presente invenzione à ̈ quello di fornire un procedimento per la produzione di superfici di titanio multifunzionali per riduzione del rischio di infezione e per una più rapida osteointegrazione che consenta di modulare la quantità di agente antibatterico introdotta sulla superficie, in modo da evitare che esso, in dosi eccessive, svolga un’azione citotossica .

Un altro scopo della presente invenzione à ̈ quello di fornire un prodotto che si presenti con uno strato nanoporoso superficiale di ossido di titanio contenente l’agente antibatterico sotto forma di nanoparticelle singole e omogeneamente disperse sulla superficie o come ione.

Inoltre, uno scopo della presente invenzione à ̈ quello di fornire un prodotto nel quale la distribuzione dell’agente antibatterico non à ̈ presente ad isole né costituisce un rivestimento continuo.

Un altro scopo della presente invenzione à ̈ quello di fornire un prodotto dotato di una unica superficie multifunzionale bioattiva, osteoinduttiva ed antibatterica, permanente e non biosolubile.

I suddetti ed altri scopi e vantaggi dell’invenzione, quali risulteranno dal seguito della descrizione, vengono raggiunti con un procedimento per la produzione di superfici di titanio multifunzionali per riduzione del rischio di infezione e per una più rapida osteointegrazione come quello descritto nella rivendicazione 1.

Inoltre, i suddetti ed altri scopi e vantaggi dell’invenzione, vengono raggiunti con un prodotto come quello descritto nella rivendicazione 17.

Forme di realizzazione preferite e varianti non banali della presente invenzione formano l’oggetto delle rivendicazioni dipendenti.

Risulterà immediatamente ovvio che si potranno apportare a quanto descritto innumerevoli varianti e modifiche (per esempio relative a forma, dimensioni, disposizioni e parti con funzionalità equivalenti) senza discostarsi dal campo di protezione dell'invenzione come appare dalle rivendicazioni allegate.

La presente invenzione verrà meglio descritta da alcune forme preferite di realizzazione, fornite a titolo esemplificativo e non limitativo.

In generale, il procedimento secondo la presente invenzione per la produzione di una superficie multifunzionale prevede una modifica superficiale di titanio o sue leghe utilizzate, in particolare, per artroprotesi o impianti dentali con lo scopo di introdurre un agente inorganico antibatterico, che possa essere rilasciato gradualmente a seguito dell’impianto inducendo, nel contempo, un comportamento bioattivo ed una topografia superficiale multiscala (macro-micro e nano), atti a promuovere l’osteointegrazione.

Il procedimento secondo la presente invenzione comprende almeno quindi le fasi seguenti:

a) attacco acido finalizzato a rimuovere l'ossido nativo presente sulla superficie del materiale di titanio o di lega di titanio ed a rendere questa microrugosa. Preferibilmente, la fase di attacco acido à ̈ eseguita con l'impiego di acido fluoridrico diluito, ad esempio, con una concentrazione da 0.5 M a 8 M, per un tempo compreso tra 1 e 5 minuti; b) preparazione di una soluzione di perossido di idrogeno e di un agente antibatterico: preferibilmente, l’agente antibatterico, di tipo inorganico, à ̈ un metallo come, per esempio, argento, bismuto, rame o zinco; ancora più preferibilmente tale metallo à ̈ in forma ionica o in polvere. Vantaggiosamente quindi l’agente antibatterico à ̈ introdotto durante l’ossidazione in perossido di idrogeno, tramite l’aggiunta in soluzione di un suo sale o ossido, che funga da precursore;

c) ossidazione superficiale del materiale di titanio o di lega di titanio con tale soluzione di perossido di idrogeno e di agente antibatterico in modo da arricchire la superficie del suddetto agente antibatterico, generare una topografia superficiale caratteristica (macro, micro e nano rugosità) e gruppi ossidrili legati a detta superficie.

La fase di ossidazione superficiale della fase c) deve essere eseguita in modo tale da evitare la ripassivazione (riossidazione) della superficie tra le fasi di attacco acido e di ossidazione.

Inoltre, il procedimento secondo la presente invenzione può comprendere una fase, compresa tra la fase b) e la fase c), di ossidazione superficiale del materiale di titanio o di lega di titanio con una soluzione di perossido di idrogeno di concentrazione variabile tra 15-70 volumi, preferibilmente ad una temperatura compresa tra 20°C e 80°C e per un tempo compreso tra 30 e 400 minuti, più preferibilmente tra 30 e 225 minuti.

Lo strato di ossido sviluppato presenta un elevato numero di ossidrili ed una morfologia con rugosità e porosità sub-micrometrica.

Vantaggiosamente, il procedimento secondo la presente invenzione permette di sfruttare l’azione del perossido di idrogeno, in un unico passaggio, per produrre da un lato uno strato di ossido di titanio, bioattivo e con topografia multiscala e, dell’altro, la precipitazione in esso di un agente antibatterico inorganico. Il procedimento secondo la presente invenzione consente quindi di sfruttare una serie di reazioni, fra loro sinergiche, che avvengono nel sistema ternario perossido di idrogeno, titanio, sale/ossido di Ag/Cu/Zn/Bi. Durante la reazione avviene contemporaneamente l’ossidazione del titanio, la decomposizione del perossido di idrogeno e la deposizione dell’agente antibatterico sulla superficie del titanio. Tali reazioni sono fra loro sinergiche e collegate: per esempio, l’agente antibatterico agisce anche da catalizzatore della decomposizione del perossido di idrogeno ed il titanio catalizza la riduzione dello ione antibatterico. Tali reazioni, fatte avvenire in un unico stadio, avvengono in condizioni, ad esempio di pH acido, diverse da quanto non succeda per le singole reazioni, fatte avvenire separatamente. Inoltre, il procedimento secondo la presente invenzione permette di mantenere la rugosità pre-esistente sul substrato.

La presente invenzione riguarda inoltre un prodotto realizzato mediante il procedimento sopra descritto. In particolare, il prodotto secondo la presente invenzione, particolarmente adatto all’implantologia ortopedica e dentale, comprende almeno un substrato di titanio, o di sua lega, di varia rugosità superficiale, con una superficie comprendente almeno uno strato nanoporoso di ossido di titanio contenente l’agente inorganico antibatterico (Ag e/o Cu e/o Zn e/o Bi) sotto forma di nanoparticelle singole e omogeneamente disperse sulla superficie o come ione. Esso quindi si presenta come multifunzionale ossia contemporaneamente bioattivo (promuovendo la precipitazione di idrossiapatite nei fluidi fisiologici), osteoinduttivo (presentando una topografia superficiale multiscala tale da stimolare le cellule) e antibatterico (essendo in grado di ridurre il rischio di infezioni e la formazione di biofilm al sito di impianto).

Il prodotto secondo la presente invenzione presenta quindi una superficie ottimizzata non solo per essere bioattiva e antibatterica, ma anche per avere rugosità, resistenza a corrosione, rilascio ionico, topografia superficiale e caratteristiche meccaniche adeguate (durezza, resistenza a fatica ed allo scratch).

In particolare, il prodotto secondo la presente invenzione presenta (dopo immersione in Soluzione Fisiologica Simulata –SBF) in superficie precipitati con la morfologia tipica dell’idrossiapatite, che risultano aggregati di piccole particelle sferiche. Lo spettro EDS evidenzia la loro composizione chimica qualitativa. Il rapporto Ca/P risulta 1,7, cioà ̈ molto vicino a quello stechiometrico per idrossiapatite (1,67). La superficie del campione non coperta da particelle presenta un arricchimento in calcio e fosforo a seguito dell'immersione in SBF. Questo à ̈ indice di una capacità diffusa della superficie di adsorbire questi elementi.

I campioni trattati chimicamente (prima in HF e poi in H2O2) sono stati successivamente sottoposti ad una fase di trattamento termico per stabilizzare lo strato di ossido generato. Il trattamento termico può essere eseguito in un campo di temperature compreso tra 300°C e 600°C, sotto vuoto o in aria, o in atmosfera inerte, con una durata del trattamento da 1 a 8 ore. La morfologia superficiale e la bioattività sono mantenute a seguito di tale trattamento termico.

I gruppi ossidrili si dimostrano termicamente stabili, in quanto se ne riscontra la presenza (anche se quantitativamente modificata) dopo prolungato periodo di stoccaggio e dopo trattamento termico.

Lo spessore e la cristallinità dello strato di ossido possono essere modificati variando la temperatura e l'atmosfera impiegate nel trattamento termico. Si osserva, come prevedibile, un progressivo incremento del picco relativo all'anatasio con l'aumento della temperatura.

Inoltre, i test di fatica evidenziano un basso decremento della resistenza (2-15%) a seguito del trattamento; si può quindi ritenere che questo tipo di modifica superficiale non alteri significativamente le proprietà meccaniche del materiale.

Preferibilmente, il procedimento secondo l'invenzione può comprendere inoltre una fase di funzionalizzazione della superficie di titanio o di una sua lega con biomolecole bioattive dal punto di vista biologico, in particolare molecole organiche naturali o di sintesi coinvolte nei meccanismi di mineralizzazione del tessuto osseo (ad esempio proteine della matrice extracellulare, peptidi o enzimi coinvolti nel processo di adesione/proliferazione, proteine morfogenetiche, fattori di crescita, albumina, fibronettina, fosfatasi alcalina e simili). Il vantaggio della funzionalizzazione superficiale à ̈ la possibilità di ancorare alla superficie un quantitativo controllato di biomolecole, evitando il rischio di un utilizzo eccessivo, come quello conseguente all'iniezione locale o alla somministrazione sistemica.

Nell'ambito della presente invenzione, le biomolecole di interesse in grado di stimolare la risposta cellulare sono preferibilmente fissate in modo covalente sulla superficie di titanio o sue leghe, precedentemente resa bioattiva dal punto di vista inorganico ed antibatterica. Il legame covalente diretto à ̈ stato scelto come meccanismo di ancoraggio, in quanto risulta più selettivo e consente un'adesione migliore rispetto al semplice assorbimento o al rilascio di carrier riassorbibili.

Il procedimento adottato di funzionalizzazione evita la silanizzazione o l'utilizzo di molecole spacer che possono risultare tossiche (come la glutaraldeide). In particolare, nella fase di funzionalizzazione adottata risulta di fondamentale importanza la presenza di gruppi ossidrili sulla superficie del metallo trattato, in quanto tali gruppi risultano essere il gruppo funzionale reattivo utile per le reazioni che portano alla funzionalizzazione della superficie.

In particolare, per questa modifica superficiale, la fase di funzionalizzazione comprende le sottofasi di:

− attivazione della superficie di titanio o sue leghe, precedentemente trattata secondo le fasi a), c) ed opzionalmente secondo la fase di trattamento termico, con un cloruro organico, preferibilmente con trifluoroetanosolfonil cloruro puro o in soluzione; e

− incubazione delle superfici attivate con una soluzione contenente una biomolecola.

Preferibilmente, la fase di attivazione con trifluoroetanosolfonil cloruro si effettua a temperatura di reazione da 20°C a 50°C, con tempi da 10 minuti a 72 ore. Condizioni preferite sono una temperatura di 37°C per 48 ore.

Inoltre, preferibilmente, la fase di incubazione à ̈ attuata esponendo la superficie attivata alla suddetta soluzione avente una concentrazione compresa tra 2 e 40 mg/ml, per un tempo da 0,5 a 72 ore, ad una temperatura compresa tra 0°C e 50°C.

Inoltre, la biomolecola può essere una biomolecola naturale, ricombinante o sintetica, scelta tra bioadesivi, fattori di adesione cellulare, biopolimeri, proteine del sangue, enzimi, proteine o biomolecole della matrice extracellulare, fattori di crescita, ormoni, peptidici, acidi deossiribonucleici (DNA), acidi ribonucleici (RNA), recettori, inibitori enzimatici, farmaci, anioni e cationi biologicamente attivi, peptidi, proteine morfogenetiche, adenosina monofosfato (AMP), adenosima difosfato (ADP), adenosina trifosfato (ATP), albumina, fibronettina, fosfatasi alcalina e combinazioni di queste.

In uno specifico esempio di attuazione, la funzionalizzazione biologica à ̈ stata attuata con l'utilizzo dell'enzima fosfatasi alcalina (ALP), che à ̈ coinvolta nei processi di mineralizzazione dei tessuti duri; diversi lavori di letteratura suggeriscono che la sua applicazione locale promuove la crescita e la mineralizzazione del tessuto osseo danneggiato. Inoltre, ALP si presenta come una buona molecola modello, in quanto à ̈ piuttosto semplice da individuare. Si intende tuttavia che la fase di funzionalizzazione con biomolecole non à ̈ limitata all'esempio specifico descritto, essendo possibile utilizzare in generale proteine della matrice extracellulare o enzimi coinvolti nel processo di adesione/proliferazione cellulare, come sopra indicato.

La presenza di un rilevante quantitativo di gruppi ossidrili sulla superficie à ̈ fondamentale per la risposta del materiale a questa seconda fase.

La fase finale prevede l'ancoraggio enzimatico alle superfici trattate. A tale fine, la biomolecole di interesse à ̈ posta in soluzione, preferibilmente in PBS, con una concentrazione preferibilmente compresa tra 2 e 40 mg/ml, per un tempo da 0,5 a 72 ore, ad una temperatura preferibilmente compresa tra 0°C e 50°C.

In un esempio specifico di attuazione, si à ̈ utilizzata una soluzione di ALP in PBS con concentrazione di 5 mg/ml con un tempo di incubazione di 24 ore a 4°C.

Si ottiene un ancoraggio diretto della molecola alla superficie del titanio, in quanto il trifluoroetanosolfonil cloruro si comporta come buon gruppo uscente.

L'attività dell'enzima a seguito dell'ancoraggio sulla superficie à ̈ stata determinata mediante analisi UV- visibile, a seguito della reazione con paranitrofenilfosfato. Questa reazione produce paranitrofenolo che, in ambiente alcalino, ha una colorazione gialla. L'intensità del giallo misurata per via spettrofotometrica può essere correlata al quantitativo di ALP presente sulla superficie.

Si sono descritte alcune forme preferite di attuazione dell’invenzione, ma naturalmente esse sono suscettibili di ulteriori modifiche e varianti nell’ambito della medesima idea inventiva. In particolare, agli esperti nel ramo risulteranno immediatamente evidenti numerose varianti e modifiche, funzionalmente equivalenti alle precedenti, che ricadono nel campo di protezione dell'invenzione come evidenziato nelle rivendicazioni allegate.

Claims (18)

1. RIVENDICAZIONI 1. Procedimento di produzione di una superficie multifunzionale, in particolare per la riduzione del rischio di infezione e per una più rapida osteointegrazione, mediante un trattamento di modifica della superficie di titanio o lega di titanio, caratterizzato dal fatto che comprende le fasi di: a) attacco acido per la rimozione dell'ossido nativo presente su detta superficie; b) preparazione di una soluzione di perossido di idrogeno e di un agente antibatterico; e c) ossidazione superficiale di detto titanio o detta lega di titanio con detta soluzione di perossido di idrogeno e di agente antibatterico, in modo da arricchire la superficie del suddetto agente antibatterico, generare una topografia superficiale caratteristica (macro, micro e nano rugosità) e generare gruppi ossidrili legati a detta superficie, in cui detta fase c) di ossidazione superficiale à ̈ eseguita in modo tale da evitare la ripassivazione della superficie tra dette fasi di attacco acido a) e di ossidazione c).
2. 2. Procedimento secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che tra la fase b) e la fase c) comprende una fase d) di ossidazione superficiale di detto materiale di titanio o di detta lega di titanio con una soluzione di perossido di idrogeno.
3. 3. Procedimento secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che detto agente antibatterico à ̈ inorganico.
4. 4. Procedimento secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che detto agente antibatterico à ̈ un metallo.
5. 5. Procedimento secondo la rivendicazione 4, caratterizzato dal fatto che detto metallo à ̈ argento, bismuto, rame o zinco.
6. 6. Procedimento secondo la rivendicazione 4, caratterizzato dal fatto che detto metallo à ̈ in forma ionica o in polvere.
7. 7. Procedimento secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto di comprendere, dopo detta fase c), una fase di trattamento termico per la stabilizzazione dello strato di ossido generato.
8. 8. Procedimento secondo la rivendicazione 7, caratterizzato dal fatto che detta fase di trattamento termico à ̈ condotta con trattamento termico a temperatura compresa tra 300°C e 600°C, per tempi da 1 a 8 ore in aria, vuoto o atmosfera inerte.
9. 9. Procedimento secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che detta fase a) di attacco acido à ̈ effettuata con acido fluoridrico.
10. 10. Procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, caratterizzato dal fatto che detta soluzione di perossido di idrogeno ha una concentrazione tra 15-70 volumi, ad una temperatura compresa tra 20°C e 80°C e per un tempo compreso tra 30 e 400 min preferibilmente per un tempo tra 30 e 225 minuti.
11. 11. Procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, caratterizzato dal fatto di comprendere una fase di funzionalizzazione di detta superficie di titanio o di detta lega di titanio con biomolecole contenenti bioattività biologica.
12. 12. Procedimento secondo la rivendicazione 11, caratterizzato dal fatto che detta fase di funzionalizzazione comprende le sottofasi di: − attivazione della superficie di titanio o sue leghe, precedentemente trattata secondo le fasi a), c) ed opzionalmente secondo la fase di trattamento termico con un cloruro organico, preferibilmente con trifluoroetanosolfonil cloruro puro o in soluzione; e − incubazione delle superfici attivate con una soluzione contenente una biomolecola.
13. 13. Procedimento secondo la rivendicazione 12, caratterizzato dal fatto che detta fase di attivazione con trifluoroetanosolfonil cloruro si effettua a temperatura di reazione da 20°C a 50°C, con tempi da 10 minuti a 72 ore.
14. 14. Procedimento secondo le rivendicazioni 12 o 13, caratterizzato dal fatto che detta fase di incubazione à ̈ attuata esponendo detta superficie attivata a detta soluzione avente una concentrazione compresa tra 2 e 40 mg/ml, per un tempo da 0,5 a 72 ore, ad una temperatura compresa tra 0°C e 50°C.
15. 15. Procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, caratterizzato dal fatto che detta biomolecola à ̈ scelta tra molecole organiche naturali o di sintesi coinvolte nei meccanismi di mineralizzazione del tessuto osseo.
16. 16. Procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, caratterizzato dal fatto che detta biomolecola à ̈ una biomolecola naturale, ricombinante o sintetica, scelta tra bioadesivi, fattori di adesione cellulare, biopolimeri, proteine del sangue, enzimi, proteine o biomolecole della matrice extracellulare, fattori di crescita, ormoni, peptidici, acidi deossiribonucleici (DNA), acidi ribonucleici (RNA), recettori, inibitori enzimatici, farmaci, anioni e cationi biologicamente attivi, peptidi, proteine morfogenetiche, adenosina monofosfato (AMP), adenosina difosfato (ADP), adenosina trifosfato (ATP), albumina, fibronettina, fosfatasi alcalina e combinazioni di queste.
17. 17. Prodotto realizzato mediante il procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in particolare per artroprotesi o impianto dentale.
18. 18. Prodotto secondo la rivendicazione 17, caratterizzato dal fatto di comprendere almeno uno substrato di titanio, o di sua lega, con una superficie comprendente almeno uno strato nanoporoso di ossido di titanio contenente detto agente antibatterico sotto forma di nanoparticelle singole e omogeneamente disperse sulla superficie o come ione.