ITRM960032A1

ITRM960032A1 - PEPTIDES DERIVED FROM CD4, ANALOGUES AND USES OF THEM IN DIAGNOSIS AND THERAPY

Info

Publication number: ITRM960032A1
Application number: IT96RM000032A
Authority: IT
Inventors: Antonio Facchiano
Original assignee: Mini Ricerca Scient Tecnolog
Priority date: 1996-01-17
Filing date: 1996-01-17
Publication date: 1997-07-17
Also published as: IT1283883B1; ITRM960032A0

Abstract

Sono descritti peptidi derivati da sequenza amminoacidica di CD4, analoghi di essi e usi in terapie e diagnostica anti-virale, preferibilmente anti-HIV.Peptides derived from CD4 amino acid sequence, analogues thereof and uses in anti-viral therapies and diagnostics, preferably anti-HIV, are described.

Description

DESCRIZIONE DESCRIPTION

a corredo di una domanda di brevetto di invenzione dal titolo: accompanying an invention patent application entitled:

"Peptidi derivati da CD4, analoghi e usi di essi in diagnosi e terapia" "Peptides derived from CD4, analogues and their uses in diagnosis and therapy"

La presente invenzione concerne peptidi derivati da CD4, analoghi e usi di essi in diagnosi e terapia. The present invention relates to peptides derived from CD4, analogues and uses thereof in diagnosis and therapy.

Il CD4 e' una proteina membro della famiglia delle immunoglobuline, presente sulla membrana dei linfociti T-helper. Gioca un ruolo centrale nella attivazione della risposta immune e rappresenta il recettore cellulare del virus HIV il quale interagisce con il CD4 attraverso le proteine del suo involucro esterno, cioè' con la gp120 e con la gp41. CD4 is a member of the immunoglobulin family, present on the membrane of T-helper lymphocytes. It plays a central role in the activation of the immune response and represents the cellular receptor of the HIV virus which interacts with CD4 through the proteins of its external envelope, that is, with gp120 and with gp41.

Il CD4 umano e' il recettore piu' importante del virus HIV. E' formato di 4 domini extracellulari, dei quali il primo e il secondo sono coinvolti direttamente nella interazione con l’HIV. La sequenza del CD4 e' nota e le coordinate cristallografiche sono disponibili (Wang J et al Nature 1990, 348, 411-418); Ryu S et al Nature 1990, 348, 419-426). Le regioni del CD4 coinvolte nella interazione con la gp120 sono state individuate e sono riportate in letteratura (Kieber-Emmons et al. Bio Biophs Acta 1989, 989, 218-300; Clayton LK et al. Nature 1989, 339, 548-551; Golding T et al Proc. Nati. Acad. Se. USA 1990, 87, 4108 4111). Sono noti peptidi che inibiscono la infettività' del virus HIV sono stati identificati e derivati dal loop V3 della gp120 (Celi 1987, 50, 975985; J. Vir 11993, 841-6846) o da altre regioni della gp120 e gp41 (Morrow et al. Immunology 1992, 75, 557; Pert et al Proc Nati. Acad. Se. USA 1986, 83, 924; Owens et al AIDS Res Hum Retrov. 1990, 6, 1289). Peptidi attivi sono stati anche identificati nella regione CDR3 del CD4 (Jameson BA et al Science 1988, 240, 1335-1338; Batinic and Robey J.B.C. 1992, 267, 6664-6671; Bradsky et al. J. Immunol 1990, 3078-3086; Lifson et al. Science 1988, 241, 712) Human CD4 is the most important receptor of the HIV virus. It is made up of 4 extracellular domains, of which the first and second are directly involved in the interaction with HIV. The CD4 sequence is known and the crystallographic coordinates are available (Wang J et al Nature 1990, 348, 411-418); Ryu S et al Nature 1990, 348, 419-426). The CD4 regions involved in the interaction with gp120 have been identified and are reported in the literature (Kieber-Emmons et al. Bio Biophs Acta 1989, 989, 218-300; Clayton LK et al. Nature 1989, 339, 548-551; Golding T et al Proc. Nati. Acad. Se. USA 1990, 87, 4108 4111). Peptides that inhibit HIV infectivity are known to have been identified and derived from the V3 loop of gp120 (Celi 1987, 50, 975985; J. Vir 11993, 841-6846) or from other regions of gp120 and gp41 (Morrow et al . Immunology 1992, 75, 557; Pert et al Proc Nati. Acad. Se. USA 1986, 83, 924; Owens et al AIDS Res Hum Retrov. 1990, 6, 1289). Active peptides have also been identified in the CDR3 region of CD4 (Jameson BA et al Science 1988, 240, 1335-1338; Batinic and Robey J.B.C. 1992, 267, 6664-6671; Bradsky et al. J. Immunol 1990, 3078-3086; Lifson et al. Science 1988, 241, 712)

Mutazioni indotte sui residui disposti intorno alla fenilalanina 43 del CD4 inducono un cambio notevole della capacita* di legame, perciò almeno uno dei siti che collaborano alla formazione de! sito recettoriaie e* stato localizzato nella regione intorno alla fenilalanina 43 (Arthos J et al. Celi 1989, 57, 469-481). Mutations induced on the residues arranged around the phenylalanine 43 of CD4 induce a significant change in the binding capacity, therefore at least one of the sites that collaborate in the formation of! receptor site has been located in the region around phenylalanine 43 (Arthos J et al. Cell 1989, 57, 469-481).

I tentativi di disegnare e modellare peptidi derivati da questa regione del CD4, in grado di inibire il legame del'HIV, non hanno prodotto risultati apprezzabili. Ciò e' dovuto in parte al fatto che molto spesso i peptidi devono assumere specifiche conformazioni per esercitare la propria attività e quindi specifiche restrizioni conformazionali devono essere indotte sui peptidi per indurne la appropriata conformazione. Attempts to design and model peptides derived from this region of CD4, capable of inhibiting HIV binding, have not produced appreciable results. This is partly due to the fact that very often peptides must assume specific conformations to exert their activity and therefore specific conformational restrictions must be induced on the peptides to induce the appropriate conformation.

Nessun peptide e* stato al momento identificato e derivato dalla regione CDR2 del CD4, dove e* stata puntata la attenzione dello studio corrente, e in particolare nella regione intorno alla fenilalanina 43. Attraverso tecniche di computer modelling e grafica molecolare e* stato simulato il comportamento in soluzione di peptidi estrapolati da questa regione. In tale modo e' stato possibile ottenere predizioni attendibili della conformazione; di conseguenza sono state indotte appropriate restrizioni (ciclizzazione attraverso ponti disolfuro) e mutazioni per modellare i peptidi affinché' acquistassero una conformazione ragionevolmente simile a quella della regione della proteina da cui sono derivati. I peptidi sono stati quindi sintetizzati, sottoposti alla restrizione conformazionale, purificati e liofilizzati. Quindi ne e' stata valutata la attività' in esperimenti in vitro. At the moment no peptide has been identified and derived from the CDR2 region of CD4, where the attention of the current study has been focused, and in particular in the region around phenylalanine 43. Through computer modeling and molecular graphics techniques, the behavior in solution of peptides extrapolated from this region. In this way it was possible to obtain reliable predictions of the conformation; consequently appropriate restrictions (cyclization through disulfide bridges) and mutations were induced to model the peptides so that they acquired a conformation reasonably similar to that of the region of the protein from which they are derived. The peptides were then synthesized, subjected to conformational restriction, purified and freeze-dried. Then its activity was evaluated in in vitro experiments.

La presente invenzione ha per oggetto peptidi sintetici (compresi tra 7 e 16 residui) derivati dalla sequenza del CD4, che interferiscono con la capacita' infettante del virus HIV. Questi peptidi sono compresi nei peptidi RI1, RI2, RI3, a sequenza amminoacidica SEQ ID N.1, SEQ ID N. 2 e SEQ ID N: 3, rispettivamente. The present invention relates to synthetic peptides (comprised between 7 and 16 residues) derived from the CD4 sequence, which interfere with the infectious capacity of the HIV virus. These peptides are included in the peptides RI1, RI2, RI3, with amino acid sequence SEQ ID N.1, SEQ ID N. 2 and SEQ ID N: 3, respectively.

La presente invenzione si riferisce anche ad un approccio innovativo per modulare la infettività' del virus HIV attraverso l'uso di peptidi derivati dalla sequenza del CD4, sottoposti a tecniche di restrizione conformazionale, come l'uso di ponti disolfuro covalenti. Questi peptidi sono derivati dalla regione del CD4 che interagisce con la gp120 dell'involucro del virus HIV. The present invention also refers to an innovative approach to modulate the infectivity of the HIV virus through the use of peptides derived from the CD4 sequence, subjected to conformational restriction techniques, such as the use of covalent disulfide bridges. These peptides are derived from the CD4 region that interacts with the gp120 of the HIV envelope.

Sono oggetto della invenzione analoghi delle molecole qui riportate di seguito come SEQ ID N1, SEQ ID N.2, SEQ ID N.3, in forma monomerica o polimerica, della lunghezza compesa fra 3 e 25 residui, contenenti parti intere o porzioni delle sequenze riportate come tali o contenenti mutazioni. E' anche oggetto della invenzione ogni molecola correlata alle molecole SEQ ID N.1, SEQ ID N.2, SEQ ID N.3, il cui effetto e' ottenuto tramite una riproduzione della distribuzione delle cariche o delle caratteristiche fisico-chimiche o stereochimiche delle molecole SEQ ID N.1, SEQ ID N.2, SEQ ID N.3, come ad esempio molecole peptidomimetiche, analoghi stereochimici, molecole enantiomere o speculari, molecole con composizione e\o distribuzione aminoacidica simile o uguale. The object of the invention is analogues of the molecules listed below such as SEQ ID N1, SEQ ID N.2, SEQ ID N.3, in monomeric or polymeric form, with a length comprised between 3 and 25 residues, containing whole parts or portions of the sequences reported as such or containing mutations. Also object of the invention is each molecule related to the molecules SEQ ID N.1, SEQ ID N.2, SEQ ID N.3, the effect of which is obtained through a reproduction of the distribution of the charges or of the physico-chemical or stereochemical characteristics. molecules SEQ ID N.1, SEQ ID N.2, SEQ ID N.3, such as peptidomimetic molecules, stereochemical analogues, enantiomeric or specular molecules, molecules with similar or equal amino acid composition and / or distribution.

E' anche oggetto della invenzione ogni molecola la cui produzione richiede l'uso delle molecole SEQ ID N.1, SEQ ID N.2, SEQ ID N.3 o di loro analoghi, come anticorpi o oligonucleotidi senso o antisenso che codifichino i peptidi oggetto della invenzione. Also object of the invention is any molecule whose production requires the use of the molecules SEQ ID N.1, SEQ ID N.2, SEQ ID N.3 or their analogues, such as antibodies or sense or antisense oligonucleotides encoding peptides object of the invention.

I peptidi dell’invenzione possono essere vantaggiosamente utilizzati come inibitori della infezione da HIV, nella terapia dell'AIDS, da soli o in combinazione con altri farmaci antivirali o immunostimolatori. I peptidi oggetto della invenzione possono agire in maniera diretta come inibitori della infezione da HIV interferendo con i processi di riconoscimento, binding e infezione, oppure in maniera indiretta stimlando la sorveglianza e attivazione immunitaria e\o la crescita dei linfociti CD4+. The peptides of the invention can be advantageously used as inhibitors of HIV infection, in the therapy of AIDS, alone or in combination with other antiviral or immunostimulatory drugs. The peptides object of the invention can act directly as inhibitors of HIV infection by interfering with the processes of recognition, binding and infection, or indirectly by stimulating the surveillance and immune activation and / or the growth of CD4 + lymphocytes.

E’ ulteriore oggetto dell’invenzione una composizione comprendente tali peptidi, in dosi farmaceuticamente accettabili ed efficaci per una terapia anti-virale, preferibilmente anti-HIV. A further object of the invention is a composition comprising these peptides, in pharmaceutically acceptable and effective doses for an anti-viral therapy, preferably anti-HIV.

L’invenzione comprende anche un uso di tali peptidi per la preparazione di composizioni per la terapia e la diagnosi antivirale, preferibilmente anti-HIV. The invention also includes the use of such peptides for the preparation of compositions for antiviral therapy and diagnosis, preferably anti-HIV.

Le molecole SEQ ID N.1, SEQ ID N.2, SEQ ID N.3 possono anche essere usate in condizioni patologiche dove la attivazione di linfociti e' necessaria come azione terapeutica principale o come azione terapeutica di supporto, ad esempo nelle immuno-deficienze e nei disordini immunologici, in presenza o in assenza di infezioni virali. The molecules SEQ ID N.1, SEQ ID N.2, SEQ ID N.3 can also be used in pathological conditions where the activation of lymphocytes is necessary as a main therapeutic action or as a supportive therapeutic action, for example in immune systems. deficiencies and immunological disorders, in the presence or absence of viral infections.

Ativatori della infetività' di HIV, come la molecola SEQ ID N.3 o suoi analoghi, possono essere utilizzati con scopi diagnostici, per aumentare la sensibilità' della identificazione del virus in campioni di sangue o altri campioni biologici. I campioni possono essere trattati con SEQ ID N.3 o suoi analoghi per aumentare la infettività' del virus eventualmente presente e stimolarne la crescita. Questo tratamento riduce la quantità' di virus necessaria nel campione originale per la sua identificazione. HIV infectivity activators, such as the SEQ ID N.3 molecule or its analogues, can be used for diagnostic purposes, to increase the sensitivity of virus identification in blood or other biological samples. Samples can be treated with SEQ ID N.3 or its analogues to increase the infectivity of any virus present and stimulate its growth. This treatment reduces the amount of virus needed in the original sample for its identification.

Un uso ulteriore dei peptidi dell’invenzione e' possibile nei processi industriali di produzione, amplificazione e screening di virus HIV, per scopi di ricerca, terapeutici, anche ex vivo, vaccinologici e industriali. Further use of the peptides of the invention is possible in the industrial processes of HIV virus production, amplification and screening, for research, therapeutic, including ex vivo, vaccinological and industrial purposes.

La presente invenzione verrà ora descritta a titolo illustrativo ma non limitativo con riferimento ai disegni allegati in cui: The present invention will now be described for illustrative but not limitative purposes with reference to the attached drawings in which:

- la figura 1 rappresenta un grafico che illustra la percentuale di inibizione della formazione di sincizi, dopo trattamento con RI1 (SEQ. ID N.1); - figure 1 represents a graph illustrating the percentage of inhibition of syncytium formation, after treatment with RI1 (SEQ. ID N.1);

- la fìg. 2 rappresenta un grafico che illustra la percentuale di inibizione della formazione di sincizi, dopo trattamento con RI2 (SEQ. ID N.); - fig. 2 represents a graph illustrating the percentage of inhibition of syncytosis formation, after treatment with RI2 (SEQ. ID N.);

- la fìg. 3 rappresenta un grafico che illustra la percentuale di inibizione della formazione di sincizi, dopo trattamento con RI3 (SEQ. ID N.3); l'inibizione negativa indica una stimolazione della formazione dei sincizi; - fig. 3 represents a graph illustrating the percentage of inhibition of syncytia formation, after treatment with RI3 (SEQ. ID N.3); negative inhibition indicates a stimulation of syncytia formation;

- la ftg. 4 rappresenta un grafico che illustra la percentuale di incorporazione di timidina in cellulle non trattate (Celi), trattate con RI1 o con un peptide di controllo; l'esperimento e' stato effettuato in assenza dello stimolo specifico OKT3; - the ftg. 4 represents a graph illustrating the percentage of incorporation of thymidine in untreated cells (Cells), treated with RI1 or with a control peptide; the experiment was performed in the absence of the specific OKT3 stimulus;

- (a fig. 5 rappresenta un grafico che illustra la percentuale di incorporazione di timidina in cellulle trattate con Rii o con un peptide di controllo; l esperimento e' stato effettualo in presenza dello stimolo specifico OKT3. - (Fig. 5 shows a graph illustrating the percentage of incorporation of thymidine in cells treated with Rii or with a control peptide; the experiment was carried out in the presence of the specific stimulus OKT3.

I test sperimentali effettuati consistono in : The experimental tests carried out consist of:

- saggio di formazione dei sincizi, in presenza di HIV - assay of syncytia formation in the presence of HIV

- saggio di attivazione dei linfociti, in assenza di HIV. - lymphocyte activation assay, in the absence of HIV.

Procedure sperimentali Experimental procedures

Sintesi dei peptidi: i peptidi sono stati sintetizzati con un sintetizzatore automatico ABI, seguendo le procedure standard di tecnologia F-moc e attivazione HBTU. La ciclizzazione dei peptidi e' stata ottenuta attraverso l'inserimento di due residui di cisteina nella sequenza. La ossidazione di questi residui determina la formazione di un legame covalente tra le due cisteine ed e' ottenuta attraverso la diluzione del peptide in un tampone NH4CO3 0.05 M, pH 8,3, alla concentrazione di 1 mg di peptide per 10 mi di tampone. La soluzione e' tenuta sotto agitazione a temperatura ambiente per 20 ore, e liofilizzata. Ciascun peptide e' stato quindi purificato tramite HPLC in fase inversa con colonna C18, e liofilizzato nuovamente. Peptide synthesis: Peptides were synthesized with an ABI automatic synthesizer, following standard F-moc technology and HBTU activation procedures. The cyclization of the peptides was obtained through the insertion of two cysteine residues in the sequence. The oxidation of these residues determines the formation of a covalent bond between the two cysteines and is obtained by diluting the peptide in a 0.05 M NH4CO3 buffer, pH 8.3, at a concentration of 1 mg of peptide per 10 ml of buffer. The solution is kept under stirring at room temperature for 20 hours, and lyophilized. Each peptide was then purified by reverse phase HPLC with C18 column, and lyophilized again.

Formazione dei sincizi: in una piastra multiwell da 96, 105 cellule SUPT1 in 50 microlitri di medium RPMI sono state preincubate con 100 microlitri di peptide 1mg\ml diluito in PBS, per 15 minuti a 37 °C. Quindi sono state aggiunte 103 cellule MOLT4 infettate con HIV strain IIIB. Dopo 72 ore di incubazione a 37 °C, sono stati contati al microscopio ottico i sincizi formati. Il numero dei sincizi nei campioni trattati e' stato espresso come percentuale rispetto al numero di sincizi contati nei campioni non preincubati con alcun peptide. Syncytium formation: In a 96 multiwell plate, 105 SUPT1 cells in 50 microliters of RPMI medium were pre-incubated with 100 microliters of 1mg \ ml peptide diluted in PBS, for 15 minutes at 37 ° C. Then 103 MOLT4 cells infected with HIV strain IIIB were added. After 72 hours of incubation at 37 ° C, the syncytia formed were counted under an optical microscope. The number of syncytes in the treated samples was expressed as a percentage with respect to the number of syncytes counted in the samples not preincubated with any peptide.

Attivazione dei linfociti: la attivazione dei linfociti in assenza di HIV e' stata testata in un saggio di incorporazione di timidina su cellule JURKAT, in presenza e in assenza di un pretrattamento con anticorpo OKT3. Il protocolllo seguito e’ una versione modificata di quello pubblicato da Geppert e Lipsky (J.Clin Invest. 1988, 81, 1497-1505). Cellule JURKAT sincronizzate per 48 ore in 0.5% FCS sono state trasferite in piastra multiwell da 96 alla concentrazione di 5 x 10^ cellule in 100 microlitri, e sono state incubate con 50 microlitri di 0,5, 0,1, 0,01 microgrammi\ml di OKT3. Lymphocyte activation: Lymphocyte activation in the absence of HIV was tested in a thymidine incorporation assay on JURKAT cells, in the presence and absence of an OKT3 antibody pretreatment. The protocol followed is a modified version of that published by Geppert and Lipsky (J.Clin Invest. 1988, 81, 1497-1505). JURKAT cells synchronized for 48 hours in 0.5% FCS were transferred to a 96 multiwell plate at a concentration of 5 x 10 ^ cells in 100 microliters, and incubated with 50 microliters of 0.5, 0.1, 0.01 micrograms. \ ml of OKT3.

I peptidi sono stati coincubati con OKT3, alla concentrazione finale di 1 mg\mi. Dopo 1 ora a 37 °C le cellule sono state lavate e risospese in RPMI con 2% FCS. Dopo 48 ore di incubazione a 37 °C, e' stato aggiunto 1 microCi di timidina tritiate in 25 microlitri di medium. Dopo 16 ore di incubazione sono state raccolte le cellule e misurata la radioattivita'. Un esperimento simile e' stato effettuato anche in assenza dello stimolo specifico alla incorporazione rappresentato dall' anticorpo OKT3. The peptides were coincubated with OKT3, at the final concentration of 1 mg \ ml. After 1 hour at 37 ° C the cells were washed and resuspended in RPMI with 2% FCS. After 48 hours of incubation at 37 ° C, 1 microCi of tritiate thymidine was added in 25 microliters of medium. After 16 hours of incubation the cells were collected and radioactivity measured. A similar experiment was also performed in the absence of the specific stimulus to incorporation represented by the OKT3 antibody.

Risultati Results

I tre peptidi, indicati come RI1, RI2, RI3, mostrano un effetto significativo sulla formazione di sincizi, paragonati al controllo. Le figure 1, 2 e 3 mostrano la percentuale di inbizione di formazione di sincizi da parte di R1, R2 e R3 rispettivamente, in maniera dose dipendente. RI1 inibisce piu del 70% della formazione di sincizi alla concentrazione di 1mg\ml. R2 inibisce il 50% della formazione di sincizi alla concentrazione di 1 ,2 mg\ml. RI3 mostra una inibizione negativa (cioè' una stimolazione) della formazione di sincizi, fino al 100% alla concentrazione di 1 mg\ml. The three peptides, indicated as RI1, RI2, RI3, show a significant effect on syncytium formation, compared to the control. Figures 1, 2 and 3 show the percentage of inhibition of syncytium formation by R1, R2 and R3 respectively, in a dose dependent manner. RI1 inhibits more than 70% of syncytium formation at a concentration of 1mg \ ml. R2 inhibits 50% of syncytia formation at a concentration of 1.2 mg \ ml. RI3 shows a negative inhibition (i.e. a stimulation) of syncytia formation, up to 100% at the concentration of 1 mg \ ml.

Le figure 4 e 5 mostrano l’effetto di RI1, RI2 e RI3 in un saggio di attivazione dei linfociti, misurata attraverso la incorporazione di timidina. RI1 mostra un chiaro effetto di stimolazione della incorporazione di timidina, fino al 240% del controllo in assenza di stimolo, e fino a) 140% del controllo in presenza dello stimolo OKT3. Questi risultati indicano che i peptidi oggetto della invenzione modulano in maniera negativa (RI1 e RI2) e positiva (RI3) la capacita' del virus HIV di indurne la formazione di sincizi su linficiti T, in esperimenti in vitro. La formazione dei sincizi e' correiabile alla capacita' del virus di infettare le cellule bersaglio. Figures 4 and 5 show the effect of RI1, RI2 and RI3 in a lymphocyte activation assay, measured through the incorporation of thymidine. RI1 shows a clear stimulation effect of thymidine incorporation, up to 240% of the control in the absence of stimulus, and up to) 140% of the control in the presence of the OKT3 stimulus. These results indicate that the peptides object of the invention negatively (RI1 and RI2) and positively (RI3) modulate the ability of the HIV virus to induce the formation of syncytia on T cells, in in vitro experiments. The formation of syncytium is correctable to the ability of the virus to infect target cells.

RI1 mostra anche un effetto diretto sui linfociti T in assenza di HIV, che consiste nella stimolazione della incorporazione di timidina in vitroTale effetto presumibilmente indica un possibile effetto di stimolazione della attivazione dei linfociti in vivo. RI1 also shows a direct effect on T lymphocytes in the absence of HIV, consisting in the stimulation of thymidine incorporation in vitro. This effect presumably indicates a possible effect of stimulation of the activation of lymphocytes in vivo.

i dati raccolti consentono di ipotizzare che il trattamento con tali peptidi (in particolare RI1 e RI2) può' indurre la attivazione linfocitaria che rende i linfociti piu' resistenti alla infezione da HIV. the data collected allow us to hypothesize that treatment with such peptides (in particular RI1 and RI2) can induce lymphocyte activation which makes lymphocytes more resistant to HIV infection.

R1 1 SEQ ID N.1 R1 1 SEQ ID N.1

Cys-Asn-Gln-Gly-Ser-Phe-Cys Cys-Asn-Gln-Gly-Ser-Phe-Cys

anche con ponte disolfuro tra la cisteina n.1 e la cisteina n.7 also with disulfide bridge between cysteine n.1 and cysteine n.7

RI2 SEQ ID N.2 RI2 SEQ ID N.2

Cys-Arg-Arg-Ser-Leu-Ala-Asp-Gln-Gly-Asn-Phe-Cys Cys-Arg-Arg-Ser-Leu-Ala-Asp-Gln-Gly-Asn-Phe-Cys

anche con ponte disolfuro tra la cisteina n.1 e la cisteina n.12 also with disulfide bridge between cysteine n.1 and cysteine n.12

RI3 SEQ ID N.3 RI3 SEQ ID N.3

Cys-Leu-Gly-Asn-Ala-Gly-Ser-Phe-Cys-Leu-Lys-Gly-Pro-Ser-Lys-Leu anche con ponte disolfuro tra la cisteina n.1 e la cisteina n.9. Cys-Leu-Gly-Asn-Ala-Gly-Ser-Phe-Cys-Leu-Lys-Gly-Pro-Ser-Lys-Leu also with disulfide bridge between cysteine # 1 and cysteine # 9.

La presente invenzione è stata descritta, a titolo illustrativo ma non limitativo, secondo sue forme preferite di realizzazione, ma è da intendersi che variazioni e/o modifiche potranno essere apportate dagli esperti nel ramo senza per questo uscire dal relativo ambito di protezione. The present invention has been described, for illustrative but not limitative purposes, according to its preferred embodiments, but it is to be understood that variations and / or modifications may be made by those skilled in the art without thereby departing from the relative scope of protection.

Claims

CLAIMS 1. Peptide having an amino acid sequence included in or substantially homologous to the amino acid sequence of the CDR2 region of the CD4 protein and capable of interfering with viral infection.

2. A peptide according to claim 1 having an amino acid sequence comprised in or substantially homologous to one of the sequences SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 2 and SEQ ID No. 3.

3. A peptide according to claim 2 comprising at least two tank residues.

4. A peptide according to claim 3 wherein said two cysteine residues are linked by a disulfide bridge.

5. Analog of the peptide according to one of claims 1 to 4.

6. Molecule having a conformation or an antigenic profile complementary to the peptide according to one of claims 1 to 5.

7. Molecule having an antigenic conformation or profile which reproduces the peptide according to one of claims 1 to 5.

8. Antibodies or synthetic molecules which recognize the pepetide according to one of claims 1 to 5.

9. Nucleic acid encoding for one of the peptides according to one of claims 1 to 5, or complementary thereto.

Composition comprising one of the peptides according to one of claims 1 to 5 for industrial production of HIV, screening for contamination of cell lines or blood samples or other biological samples.

11. Composition comprising in pharmaceutically effective and acceptable quantity one of the peptides according to one of claims 1 to 5 for the diagnosis and / or therapy of disorders linked to CD4, such as HIV infections, disorders related to HIV infections, immune and autoimmune disorders , neurological degenerative diseases, cellular aging, apoptotic disorders, tumor growth.

12. Composition according to claim 11 for the treatment of blood cells or samples or of biological derivation, for live therapies.