ITMI20120008A1 - COMPOSITIONS WITH ANTI-NEURODEGENERATIVE ACTIVITY - Google Patents
COMPOSITIONS WITH ANTI-NEURODEGENERATIVE ACTIVITY Download PDFInfo
- Publication number
- ITMI20120008A1 ITMI20120008A1 IT000008A ITMI20120008A ITMI20120008A1 IT MI20120008 A1 ITMI20120008 A1 IT MI20120008A1 IT 000008 A IT000008 A IT 000008A IT MI20120008 A ITMI20120008 A IT MI20120008A IT MI20120008 A1 ITMI20120008 A1 IT MI20120008A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- compositions according
- extracts
- embryos
- somites
- embryonic development
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 40
- 230000002555 anti-neurodegenerative effect Effects 0.000 title description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 47
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims description 29
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 21
- 210000002023 somite Anatomy 0.000 claims description 16
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 10
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 claims description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 claims description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 claims description 5
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 3
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 claims description 3
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 claims description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 2
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 claims description 2
- 241000277331 Salmonidae Species 0.000 claims description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 2
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 2
- 241000252233 Cyprinus carpio Species 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 claims 1
- -1 ovules Substances 0.000 claims 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims 1
- HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N N-Methyl-D-aspartic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CC(O)=O HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 28
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 10
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 3
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 230000002682 anti-psoriatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 2
- 238000011278 co-treatment Methods 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KNSHLWJBSDBBRH-XOJFDHPMSA-N 1-[(s)-amino(carboxy)methyl]bicyclo[1.1.1]pentane-3-carboxylic acid Chemical compound C1C2(C(O)=O)CC1([C@@H](C(O)=O)N)C2 KNSHLWJBSDBBRH-XOJFDHPMSA-N 0.000 description 1
- LSTPKMWNRWCNLS-UHFFFAOYSA-N 1-amino-2,3-dihydroindene-1,5-dicarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C2C(N)(C(O)=O)CCC2=C1 LSTPKMWNRWCNLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000269350 Anura Species 0.000 description 1
- 102000004657 Calcium-Calmodulin-Dependent Protein Kinase Type 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010003721 Calcium-Calmodulin-Dependent Protein Kinase Type 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000047174 Disks Large Homolog 4 Human genes 0.000 description 1
- 108700019745 Disks Large Homolog 4 Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000001796 anti-degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 1
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 238000011458 pharmacological treatment Methods 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0604—Whole embryos; Culture medium therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Virology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Descrizione del brevetto per invenzione industriale avente per titolo: Description of the patent for industrial invention entitled:
“COMPOSIZIONI AD ATTIVITÀ ANTI-NEURODEGENERATIVA” "COMPOSITIONS WITH ANTI-NEURODEGENERATIVE ACTIVITIES"
Campo tecnico dell’invenzione Technical field of the invention
La presente invenzione è relativa all’uso di composizioni comprendenti una miscela di estratti ottenibili da embrioni ovipari, come ingrediente attivo, per la prevenzione e/o il trattamento di malattie degenerative. The present invention relates to the use of compositions comprising a mixture of extracts obtainable from oviparous embryos, as an active ingredient, for the prevention and / or treatment of degenerative diseases.
Stato dell’arte State of the art
Estratti di embrioni da impiegare come sostanze anti-tumorali o ad attività anti-psoriasica sono stati descritti in precedenti brevetti. Extracts of embryos to be used as anti-tumor substances or with anti-psoriatic activity have been described in previous patents.
Ad esempio nel brevetto francese n. 2451193 viene descritto l’impiego di un omogenato in soluzione idroalcolica ottenuto da embrioni di mucca, pecora o suino per il trattamento di tumori. For example in the French patent n. 2451193 describes the use of a homogenate in a hydroalcoholic solution obtained from cow, sheep or pig embryos for the treatment of tumors.
Nella domanda di brevetto n. WO 98/11905 viene descritta una composizione adatta al trattamento di tumori contenente un estratto di embrioni o di utero gravido, in cui gli embrioni sono prelevati da animali ovipari od ovovivipari e l’utero gravido è prelevato da topo, coniglio, pecora, suino. In the patent application n. WO 98/11905 describes a composition suitable for the treatment of tumors containing an embryo or pregnant uterus extract, in which the embryos are taken from oviparous or ovoviviparous animals and the pregnant uterus is taken from mice, rabbits, sheep, pigs.
Nel brevetto europeo n. 0929308 viene descritto che estratti di embrioni prelevati a specifici stadi del differenziamento embrionale sono efficaci nel trattamento di malattie tumorali e di altre patologie controllate dall’anti-oncogene p53 e che detti stadi specifici dipendono dalle specie animali da cui si prelevano gli estratti. In the European patent n. 0929308 it is described that extracts of embryos taken at specific stages of embryonic differentiation are effective in the treatment of tumor diseases and other pathologies controlled by the anti-oncogene p53 and that said specific stages depend on the animal species from which the extracts are taken.
Inoltre, nella domanda di brevetto europeo n. 03013959.6 viene descritto che gli estratti di embrioni animali non umani in specifici stadi del differenziamento cellulare sono efficaci come sostanze nutritive sia per via generale con effetti sistemici sullo stato di validità generale (performance status) di pazienti oncologici e defedati sia per via topica per il nutrimento della cute e degli annessi cutanei. Furthermore, in the European patent application n. 03013959.6 it is described that the extracts of non-human animal embryos in specific stages of cell differentiation are effective as nutrients both generally with systemic effects on the status of general validity (performance status) of cancer and defected patients and topically for nourishment of the skin and skin appendages.
Infine, il brevetto europeo n. 1570853 descrive l’uso di un estratto di embrioni di ovipari e di mucosa di utero gravido o di placenta di mammiferi non umani per la preparazione di un prodotto ad attività anti-psoriasica. Finally, the European patent no. 1570853 describes the use of an extract of oviparous embryos and mucous membrane of pregnant uterus or placenta of non-human mammals for the preparation of a product with anti-psoriatic activity.
Sommario dell’invenzione Summary of the invention
La presente invenzione è relativa a composizioni comprendenti una miscela di estratti ottenibili da embrioni di ovipari prelevati in specifici stadi dello sviluppo embrionale o in momenti compresi fra uno stadio e l’altro dello sviluppo embrionale per l’uso nella prevenzione e/o nel trattamento riparazione di patologie degenerative del sistema nervoso e/o di altri organi o apparati. The present invention relates to compositions comprising a mixture of extracts obtainable from oviparous embryos taken at specific stages of embryonic development or at times between one stage and the next of embryonic development for use in prevention and / or repair treatment. of degenerative pathologies of the nervous system and / or other organs or systems.
Descrizione dettagliata dell’invenzione Detailed description of the invention
È stato sorprendentemente trovato che estratti di embrioni di ovipari, costituiti prevalentemente da proteine con diversi pesi molecolari e da una frazione di acidi nucleici, sono molto efficaci nella prevenzione e/o nel trattamento di lesioni degenerative del sistema nervoso e di altri organi o apparati. It has surprisingly been found that extracts of oviparous embryos, consisting mainly of proteins with different molecular weights and a fraction of nucleic acids, are very effective in the prevention and / or treatment of degenerative lesions of the nervous system and other organs or systems.
La presente invenzione è relativa a composizioni comprendenti una miscela di estratti ottenibili da embrioni ovipari prelevati ad uno stadio specifico dello sviluppo embrionale o in momenti compresi fra uno stadio e l’altro dello sviluppo embrionale per l’uso nella prevenzione e/o nel trattamento di malattie degenerative del sistema nervoso e/o di altri organi o apparati, quali ad esempio l’organo della vista, il fegato, l’apparato cardiovascolare. The present invention relates to compositions comprising a mixture of extracts obtainable from oviparous embryos taken at a specific stage of embryonic development or at times between one stage and the next of embryonic development for use in the prevention and / or treatment of degenerative diseases of the nervous system and / or other organs or systems, such as the organ of vision, the liver, the cardiovascular system.
Gli embrioni utilizzabili per gli usi di cui alla presente invenzione sono preferibilmente prelevati da pesci, uccelli, anfibi. The embryos usable for the uses of the present invention are preferably taken from fish, birds, amphibians.
Secondo un aspetto preferito, tra i pesci gli embrioni sono prelevati dal Brachidanio Rerio (Zebrafish), dalla trota, dal salmone; tra gli anfibi dalle rane e tra gli uccelli dal pollo e dalle quaglie. According to a preferred aspect, among the fish the embryos are taken from the Brachidanio Rerio (Zebrafish), from the trout, from the salmon; among amphibians by frogs and among birds by chicken and quail.
Preferibilmente, gli embrioni sono prelevati nei seguenti stadi dello sviluppo embrionale: medio-blastula-gastrula, tail budd, 5 somiti, 20 somiti e nello stadio corrispondente a 24 ore dopo la fecondazione. Gli embrioni possono essere prelevati in altri momenti dello sviluppo embrionale, ad esempio in momenti compresi fra uno stadio e l’altro fra quelli sopra descritti (ovvero tra medio-blastula-gastrula e tail budd, tra tail budd e 5 somiti, tra 5 somiti e 20 somiti) ed in momenti dello sviluppo che vanno oltre le 24 ore dopo la fecondazione. Preferably, the embryos are collected in the following stages of embryonic development: mid-blastula-gastrula, tail budd, 5 somites, 20 somites and in the stage corresponding to 24 hours after fertilization. Embryos can be collected at other times of embryonic development, for example at times between one stage and the other among those described above (i.e. between medio-blastula-gastrula and tail budd, between tail budd and 5 somites, between 5 somites and 20 somites) and in moments of development that go beyond 24 hours after fertilization.
Secondo un ulteriore aspetto, gli embrioni possono essere prelevati in stadi diversi dello sviluppo embrionale. According to a further aspect, embryos can be collected at different stages of embryonic development.
Gli estratti possono essere ottenuti utilizzando il metodo descritto di seguito. Extracts can be obtained using the method described below.
Gli embrioni prelevati nei diversi stadi sopra-descritti vengono lavati abbondantemente in acqua distillata e quindi sospesi in soluzione costituita dall’85% di glicerolo e dal 15% di alcool etilico al 98%. La sospensione viene trattata con un ciclo di sonicazione di 10 secondi e quindi con due cicli di turboemulsione della durata di 3 minuti. The embryos taken in the various stages described above are washed abundantly in distilled water and then suspended in a solution consisting of 85% glycerol and 15% 98% ethyl alcohol. The suspension is treated with a 10-second sonication cycle and then with two turbo-emulsion cycles lasting 3 minutes.
Il contenuto di proteine totali in dette sospensioni può essere compreso fra 0,1 e 0,3 milligrammi per millilitro. Negli estratti l’analisi dei pesi molecolari delle diverse frazioni proteiche cambia in rapporto ai diversi stadi di sviluppo embrionale degli embrioni impiegati per ottenere gli estratti: ad esempio nel periodo di medio-blastula-gastrula si rileva usualmente una frazione di proteine che rappresenta circa il 15% del totale con un peso molecolare intorno ai 15 kDaltons, una frazione pari circa al 20% del totale con pesi molecolari compresi fra 20 e 30 kDaltons, una frazione pari circa al 20% del totale con pesi molecolari compresi fra 40 e 50 kDaltons ed una frazione intorno al 45% del totale con pesi molecolari compresi fra i 50 ed i 100 kDaltons. The total protein content in said suspensions can be comprised between 0.1 and 0.3 milligrams per milliliter. In the extracts, the analysis of the molecular weights of the different protein fractions changes in relation to the different stages of embryonic development of the embryos used to obtain the extracts: for example, in the mid-blastula-gastrula period, a fraction of proteins is usually detected which represents approximately 15% of the total with a molecular weight around 15 kDaltons, a fraction equal to about 20% of the total with molecular weights between 20 and 30 kDaltons, a fraction equal to about 20% of the total with molecular weights between 40 and 50 kDaltons and a fraction around 45% of the total with molecular weights between 50 and 100 kDaltons.
In stadi successivi dello sviluppo embrionale le diverse frazioni proteiche cambiano in percentuale fra loro, circa il 70% delle proteine presente nel periodo di medio-blastula-gastrula è presente fino a 18 ore dopo la fecondazione. In later stages of embryonic development the different protein fractions change in percentage between them, about 70% of the proteins present in the mid-blastula-gastrula period are present up to 18 hours after fertilization.
Invece, da 18 a 24 ore dopo la fecondazione, il rapporto tra le diverse frazioni proteiche cambia in modo molto evidente, con un aumento notevole della percentuale di proteine con peso molecolare inferiore a 25 kDaltons e con una diminuzione della frazione con peso molecolare sopra i 50 kDaltons. Instead, from 18 to 24 hours after fertilization, the ratio between the different protein fractions changes in a very evident way, with a notable increase in the percentage of proteins with a molecular weight lower than 25 kDaltons and with a decrease in the fraction with a molecular weight above 50 kDaltons.
Le sospensioni ottenute utilizzando i diversi stadi di differenziazione cellulare ed usualmente in periodo di medio-blastula-gastrula, 5 somiti e 20 somiti, ma anche a 24 ore ed oltre, diluite, come si è detto, in soluzione glicero-alcolica, vengono ulteriormente diluite con acqua depurata in un rapporto di volume 1:10 e quindi filtrate sotto vuoto con membrane Millipore di 90 micron e successivamente con membrane di 10 micron. Le soluzioni così ottenute hanno una concentrazione di proteine totali che può essere compresa fra 10 e 30 microgrammi per millilitro. The suspensions obtained using the different stages of cell differentiation and usually in the period of medium-blastula-gastrula, 5 somites and 20 somites, but also at 24 hours and beyond, diluted, as mentioned, in a glycero-alcoholic solution, are further diluted with purified water in a volume ratio of 1:10 and then filtered under vacuum with 90 micron Millipore membranes and subsequently with 10 micron membranes. The solutions thus obtained have a total protein concentration which can be between 10 and 30 micrograms per milliliter.
Gli estratti possono essere utilizzati come ingredienti attivi per la preparazione di composizioni utili per la prevenzione e/o il trattamento di malattie degenerative, in particolare del sistema nervoso e/o di altri organi o apparati. The extracts can be used as active ingredients for the preparation of compositions useful for the prevention and / or treatment of degenerative diseases, in particular of the nervous system and / or of other organs or systems.
Le composizioni possono inoltre comprendere, quali ingredienti attivi, anti-ossidanti, vitamine o altre sostanze utilizzate come integratori alimentari. The compositions may further comprise, as active ingredients, anti-oxidants, vitamins or other substances used as food supplements.
Nella preparazione di tali composizioni, gli ingredienti attivi possono essere miscelati con almeno un eccipiente o veicolo farmaceuticamente accettabile. In the preparation of such compositions, the active ingredients can be mixed with at least one pharmaceutically acceptable excipient or vehicle.
Le composizioni possono essere somministrate preferibilmente per via sublinguale o nasale. The compositions can preferably be administered sublingually or nasally.
Le composizioni possono essere sotto forma di soluzioni o spray. The compositions can be in the form of solutions or sprays.
Gli estratti possono anche essere liofilizzati e utilizzati per preparare composizioni in forma di compresse, capsule, ovuli, granuli, ecc. The extracts can also be freeze-dried and used to prepare compositions in the form of tablets, capsules, pessaries, granules, etc.
Gli estratti possono essere somministrati giornalmente in quantità variabile fra 10 e 40 microgrammi/die in relazione alle diverse patologie degenerative da trattare. The extracts can be administered daily in a variable quantity between 10 and 40 micrograms / day in relation to the various degenerative diseases to be treated.
Gli esempi di seguito riportati illustrano ulteriormente l' invenzione. The following examples further illustrate the invention.
ESEMPI EXAMPLES
Esempio di composizione Composition example
Una composizione secondo la presente invenzione può contenere: A composition according to the present invention can contain:
un estratto A ottenuto da embrioni prelevati allo stadio di sviluppo di medio-blastula-gastrula, an extract A obtained from embryos taken at the developmental stage of medio-blastula-gastrula,
un estratto B ottenuto da embrioni prelevati allo stadio di 5 somiti, un estratto C ottenuto da embrioni prelevati allo stadio di 20 somiti, in parti uguali. a B extract obtained from embryos taken at the 5 somite stage, a C extract obtained from embryos taken at the 20 somite stage, in equal parts.
Gli estratti sono stati preparati come descritto nella descrizione dettagliata dell’invenzione. The extracts were prepared as described in the detailed description of the invention.
Esempio sperimentale Experimental example
L’efficacia degli estratti ottenuti da embrioni di ovipari prelevati in precisi momenti del differenziamento cellulare è stata testata utilizzando i modelli di indagine usualmente impiegati per lo studio di patologie neurodegenerative. The effectiveness of the extracts obtained from oviparous embryos taken at specific moments of cell differentiation was tested using the survey models usually used for the study of neurodegenerative diseases.
Tra tali modelli, l’ippocampo prelevato da ratti con tutte le sue cellule e posto in vitro è uno dei più studiati. Le cellule dell’ippocampo possono essere trattate con sostanze che ne provocano facilmente la degenerazione e su tali cellule possono essere studiati gli effetti di varie altre sostanze che prevengono o riparano la degenerazione provocata da agenti neurotossici. Among these models, the hippocampus taken from rats with all its cells and placed in vitro is one of the most studied. The hippocampal cells can be treated with substances that easily cause degeneration and the effects of various other substances that prevent or repair the degeneration caused by neurotoxic agents can be studied on these cells.
Materiali e metodi Materials and methods
Fettine organotipiche ippocampali sono state preparate come descritto in letteratura (Gardoni et al., 2002) utilizzando ratti di 7-8 giorni; tutti i trattamenti farmacologici sono stati effettuati in fettine organotipiche al 14esimo giorno in coltura ( DIV14 ). Hippocampal organotypic slices were prepared as described in the literature (Gardoni et al., 2002) using 7-8 day old rats; all pharmacological treatments were carried out in organotypic slices on the 14th day in culture (DIV14).
Per testare l’effetto dell’estratto di zebrafish, fettine organotipiche sono state esposte a NMDA (N-Metil-D-Aspartato) 50 μΜ o a NMDA 300 μΜ in Serum Free medium, in presenza o assenza degli estratti. To test the effect of the zebrafish extract, organotypic slices were exposed to NMDA (N-Methyl-D-Aspartate) 50 μΜ or NMDA 300 μΜ in Serum Free medium, in the presence or absence of the extracts.
Negli esperimenti le fettine sono state incubate per un’ora in serum free medium in presenza o assenza degli estratti. In the experiments, the slices were incubated for one hour in serum free medium in the presence or absence of the extracts.
Dopo un’ora, le fettine sono state lavate con Serum-Free medium e poi incubate con il loro medium in presenza o assenza dell’estratto di zebrafish per 24 ore. After one hour, the slices were washed with Serum-Free medium and then incubated with their medium in the presence or absence of the zebrafish extract for 24 hours.
Per ogni tipo di trattamento, è stata valutata l’attività neuroprotettiva sia della miscela degli estratti (A+B+C) sia dei singoli estratti (A o B o C): l’estratto A è stato ottenuto da embrioni prelevati allo stadio di sviluppo di medio-blastula-gastrula, l’estratto B è stato ottenuto da embrioni prelevati allo stadio di 5 somiti, l’estratto C è stato ottenuto da embrioni prelevati allo stadio di 20 somiti e preparato come già descritto nella descrizione dettagliata dell’invenzione. For each type of treatment, the neuroprotective activity of both the mixture of the extracts (A + B + C) and of the individual extracts (A or B or C) was evaluated: extract A was obtained from embryos taken at the stage of development of medio-blastula-gastrula, extract B was obtained from embryos taken at the 5 somite stage, extract C was obtained from embryos taken at the 20 somite stage and prepared as already described in the detailed description of the invention .
Per valutare il danno cellulare indotto dai differenti trattamenti è stata utilizzata la fluorescenza associata all’uso del propidio ioduro (PI) (5 mg/ml) come descritto in letteratura (Pellegrini-G. et al., 1999). L’analisi quantitativa della mortalità cellulare è stata effettuata nell’area CA1 dell’ippocampo utilizzando come termine di paragone il massimo danno cellulare ottenuto esponendo le fettine organotipiche al trattamento con NMDA. To assess the cell damage induced by the different treatments, fluorescence associated with the use of propidium iodide (PI) (5 mg / ml) was used as described in the literature (Pellegrini-G. Et al., 1999). The quantitative analysis of cell mortality was carried out in the CA1 area of the hippocampus using as a term of comparison the maximum cellular damage obtained by exposing the organotypic slices to treatment with NMDA.
Le immagini sono state acquisite con un microscopio a epifluorescenza Zeiss Axiovert 200M (obiettivo 10x) e CoolSnap CCD camera. Per l’analisi quantitativa, le immagini sono state acquisite con gli stessi setting e tempi di esposizione. L’intensità media di fluorescenza è stata determinata dopo aver tracciato l’area corrispondente all’area CA1 e la mortalità analizzata in funzione dell’intensità di fluorescenza e dell’area espressa come pixel. The images were acquired with a Zeiss Axiovert 200M epifluorescence microscope (10x objective) and CoolSnap CCD camera. For the quantitative analysis, the images were acquired with the same settings and exposure times. The average fluorescence intensity was determined after tracing the area corresponding to the CA1 area and the mortality analyzed as a function of the fluorescence intensity and the area expressed as a pixel.
Esperimenti Experiments
Una prima serie di esperimenti è stata condotta al fine di stabilire le condizioni sperimentali ottimali per la valutazione di una possibile attività di tipo neuroprotettivo degli estratti di zebrafish. A first series of experiments was carried out in order to establish the optimal experimental conditions for the evaluation of a possible neuroprotective activity of the zebrafish extracts.
A questo scopo, è stato verificato che il trattamento per 1h con NMDA 50 μΜ e 300 μΜ inducesse una mortalità significativa nelle condizioni sperimentali studiate. Fettine ippocampali organotipiche ( DIV14 ) sono state trattate per un’ora con NMDA 50 μΜ, o con NMDA 300 μΜ, per avere una condizione che determini mortalità certa, e 24 ore dopo è stata condotta la colorazione con PI. Dopo fissazione, è stata acquisita l’area CA1 ed è stata analizzata la mortalità come descritto nei materiali e metodi. For this purpose, it was verified that treatment for 1 hour with NMDA 50 μΜ and 300 μΜ induced significant mortality in the experimental conditions studied. Organotypic hippocampal slices (DIV14) were treated for one hour with NMDA 50 μΜ, or NMDA 300 μΜ, to have a condition that determines certain mortality, and 24 hours later the staining with PI was carried out. After fixation, the CA1 area was acquired and mortality was analyzed as described in the materials and methods.
Il trattamento con NMDA 50 μΜ determina un aumento di mortalità del 47% (NMDA 50 μΜ vs controlli) mentre NMDA 300 μΜ causa un aumento di mortalità del 99% (NMDA 300 μΜ vs controlli) nell’area CA1 dell’ippocampo 24 ore dopo il trattamento per 1 ora con NMDA (50 μΜ) o con NMDA (300 μΜ). Treatment with NMDA 50 μΜ causes a 47% increase in mortality (NMDA 50 μΜ vs controls) while NMDA 300 μΜ causes a 99% increase in mortality (NMDA 300 μΜ vs controls) in the CA1 area of the hippocampus 24 hours later treatment for 1 hour with NMDA (50 μΜ) or NMDA (300 μΜ).
Sono state quindi valutate le proprietà neuroprotettive degli estratti in seguito ad esposizione di fettine organotipiche ippocampali a tre differenti stimoli tossici, di diversa intensità (deprivazione siero, NMDA 50 μΜ, NMDA 300 μΜ per 1 ora). In una prima serie di esperimenti è stato analizzato il possibile effetto neuroprotettivo della miscela di estratti A+B+C. La miscela degli estratti è stata aggiunta (con un ulteriore diluizione 1:100) contemporaneamente al trattamento con NMDA o alla semplice deprivazione da siero e le analisi sono state condotte dopo 24 h. Il trattamento con la miscela A+B+C determina una significativa riduzione della mortalità neuronaie (-31,6 ± 6,2%, *p=0,005) indotta da 1 ora di deprivazione da siero. ;Come già indicato il trattamento con NMDA (50 μΜ) causa un significativo aumento della mortalità nell’area CAI (*p=0,002, NMDA 50 μΜ vs controlli); il co-trattamento con la miscela A+B+C determina una riduzione significativa della mortalità indotta da NMDA (50 μΜ) (p=0,01, NMDA 50 μΜ con A+B+C vs NMDA 50 μΜ). The neuroprotective properties of the extracts were then evaluated following exposure of hippocampal organotypic slices to three different toxic stimuli, of different intensity (serum deprivation, NMDA 50 μΜ, NMDA 300 μΜ for 1 hour). In a first series of experiments the possible neuroprotective effect of the mixture of A + B + C extracts was analyzed. The mixture of the extracts was added (with a further 1: 100 dilution) simultaneously with the NMDA treatment or with the simple serum deprivation and the analyzes were carried out after 24 h. Treatment with the A + B + C mixture results in a significant reduction in neuronal mortality (-31.6 ± 6.2%, * p = 0.005) induced by 1 hour of serum deprivation. ; As already indicated, treatment with NMDA (50 μΜ) causes a significant increase in mortality in the CAI area (* p = 0.002, NMDA 50 μΜ vs controls); co-treatment with the A + B + C mixture results in a significant reduction in NMDA-induced mortality (50 μΜ) (p = 0.01, NMDA 50 μΜ with A + B + C vs NMDA 50 μΜ).
In un’ultima serie di esperimenti è stata analizzata la capacità della miscela A+B+C di indurre neuroprotezione anche a seguito di trattamento di fettine ippocampali con concentrazioni ancora più elevate di NMDA (300 μΜ). Anche in queste condizioni sperimentali, il co-trattamento con la miscela A+B+C determina una riduzione significativa della mortalità indotta da NMDA (300 μΜ) (p=0,009 NMDA 300 μΜ con A+B+C vs NMDA 300 μΜ). In a last series of experiments, the ability of the A + B + C mixture to induce neuroprotection was analyzed also following the treatment of hippocampal slices with even higher concentrations of NMDA (300 μΜ). Even under these experimental conditions, the co-treatment with the A + B + C mixture results in a significant reduction in NMDA-induced mortality (300 μΜ) (p = 0.009 NMDA 300 μΜ with A + B + C vs NMDA 300 μΜ).
L’uso di una miscela di estratti ottenuti da embrioni di ovipari prelevati in specifici momenti dello sviluppo embrionale ha dimostrato di avere effetti benefici sulla qualità della vita ed il performance status nell’uomo, in particolare quando le dosi somministrate di proteine totali contenute negli estratti è compresa fra 10 e 40 micro grammi/die, a seconda delle patologie trattata. The use of a mixture of extracts obtained from oviparous embryos taken at specific moments of embryonic development has been shown to have beneficial effects on the quality of life and performance status in humans, in particular when the administered doses of total proteins contained in the extracts it is between 10 and 40 micro grams / day, depending on the pathologies treated.
In conclusione, la miscela degli estratti A+B+C ha dimostrato invece una significativa attività neuroprotettiva nei confronti della morte neuronaie indotta da ih di deprivazione di siero o indotta dal trattamento con NMDA (sia 50 μΜ che 300 μΜ). In tutti i casi, l’attività neuroprotettiva è stata misurata 24h dopo l’insulto tossico. In conclusion, the mixture of the A + B + C extracts showed a significant neuroprotective activity against neuronal death induced by serum deprivation or induced by NMDA treatment (both 50 μΜ and 300 μΜ). In all cases, the neuroprotective activity was measured 24 hours after the toxic insult.
Detti risultati sono sorprendenti e dimostrano l’effetto anti-degenerativo legato all’ utilizzo di una miscela di diversi estratti, soprattutto alla luce dei risultati ottenuti somministrando separatamente gli estratti. These results are surprising and demonstrate the anti-degenerative effect associated with the use of a mixture of different extracts, especially in light of the results obtained by administering the extracts separately.
Successivamente, sono state infatti valutate le eventuali proprietà neuroprotettive degli estratti somministrati singolarmente (A, B o C). Anche in questo caso, la mortalità neuronaie tramite il saggio con propidio ioduro è stata valutata in seguito ad esposizione delle fettine organotipiche ippocampali a deprivazione di siero o a NMDA, in presenza dei diversi estratti di zebrafish. I singoli estratti hanno dimostrato una certa capacità neuroprotettiva, soprattutto l’estratto A, al limite della significatività, ma non diversa statisticamente rispetto ai controlli, nè in seguito a deprivazione di siero nè in seguito a trattamento con NMDA (50 μΜ) Subsequently, the possible neuroprotective properties of the extracts administered individually (A, B or C) were evaluated. Also in this case, neuronal mortality by the propidium iodide assay was evaluated following exposure of the organotypic hippocampal slices to serum deprivation or NMDA, in the presence of the different zebrafish extracts. The individual extracts have shown a certain neuroprotective capacity, especially extract A, at the limit of significance, but not statistically different from the controls, neither following serum deprivation nor following treatment with NMDA (50 μΜ)
I composti B o C utilizzati singolarmente non hanno mai dimostrato attività di tipo neuroprotettivo. L’estratto A ha invece mostrato una certa tendenza verso una possibile attività neuroprotettiva, che è possibile definire al limite della significatività, soprattutto nei confronti della morte cellulare indotta da deprivazione di siero. Compounds B or C used individually have never shown neuroprotective activity. Extract A, on the other hand, showed a certain tendency towards a possible neuroprotective activity, which can be defined at the limit of significance, especially in relation to cell death induced by serum deprivation.
REFERENZE REFERENCES
Gardoni F., Bellone C., Viviani B., Marinovich M., Meli E., Pellegrini- Giampietro D.E., Cattabeni F., Di Luca M.; Lack of PSD-95 drives hippocampal neuronal celi death through activation of an alpha CaMKII transduction pathway, Eur. J. Neurosci. 2002 Sep.; 16(5):777-86. Gardoni F., Bellone C., Viviani B., Marinovich M., Meli E., Pellegrini- Giampietro D.E., Cattabeni F., Di Luca M .; Lack of PSD-95 drives hippocampal neuronal celi death through activation of an alpha CaMKII transduction pathway, Eur. J. Neurosci. 2002 Sep .; 16 (5): 777-86.
Pellegrini- Giampietro D.E., Cozzi A., Peruginelli F., Leonardi P., Meli E., Pellicciari R., Moroni F.; 1-Aminoindan-1,5-dicarboxylic acid and (S)-(+)-2-(3’-carboxybicyclo[1.1.1] pentyl)-glycine, two mGlul receptorpreferring antagonists, reduce neuronal death in vitro and in vivo models of cerebral ischaemia; Eur. J. Neurosci. 1999 Oct.; 11(10):3637-47. Pellegrini- Giampietro D.E., Cozzi A., Peruginelli F., Leonardi P., Meli E., Pellicciari R., Moroni F .; 1-Aminoindan-1,5-dicarboxylic acid and (S) - (+) - 2- (3'-carboxybicyclo [1.1.1] pentyl) -glycine, two mGlul receptorpreferring antagonists, reduce neuronal death in vitro and in vivo models of cerebral ischaemia; Eur. J. Neurosci. 1999 Oct .; 11 (10): 3637-47.
Claims (11)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IT000008A ITMI20120008A1 (en) | 2012-01-04 | 2012-01-04 | COMPOSITIONS WITH ANTI-NEURODEGENERATIVE ACTIVITY |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IT000008A ITMI20120008A1 (en) | 2012-01-04 | 2012-01-04 | COMPOSITIONS WITH ANTI-NEURODEGENERATIVE ACTIVITY |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ITMI20120008A1 true ITMI20120008A1 (en) | 2013-07-05 |
Family
ID=45571699
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
IT000008A ITMI20120008A1 (en) | 2012-01-04 | 2012-01-04 | COMPOSITIONS WITH ANTI-NEURODEGENERATIVE ACTIVITY |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
IT (1) | ITMI20120008A1 (en) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005030246A1 (en) * | 2003-09-26 | 2005-04-07 | As-Faktor Ab | Novel use of antisecretory factor |
US20070087437A1 (en) * | 2005-10-14 | 2007-04-19 | Jifan Hu | Methods for rejuvenating cells in vitro and in vivo |
WO2009115429A1 (en) * | 2008-03-19 | 2009-09-24 | Joan Cunill Aixela | Food preparation and pharmaceutical composition containing an embryonic extract |
US20090274770A1 (en) * | 2006-05-11 | 2009-11-05 | Regenics As | Cellular extracts |
-
2012
- 2012-01-04 IT IT000008A patent/ITMI20120008A1/en unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005030246A1 (en) * | 2003-09-26 | 2005-04-07 | As-Faktor Ab | Novel use of antisecretory factor |
US20070087437A1 (en) * | 2005-10-14 | 2007-04-19 | Jifan Hu | Methods for rejuvenating cells in vitro and in vivo |
US20090274770A1 (en) * | 2006-05-11 | 2009-11-05 | Regenics As | Cellular extracts |
WO2009115429A1 (en) * | 2008-03-19 | 2009-09-24 | Joan Cunill Aixela | Food preparation and pharmaceutical composition containing an embryonic extract |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
"DOGtorX Scientific Research Humanofort Formula", 10 August 2005 (2005-08-10), XP002681054, Retrieved from the Internet <URL:http://www.petequinox.com.au/sci.html> [retrieved on 20120730] * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Holland et al. | Inflammatory microglia are glycolytic and iron retentive and typify the microglia in APP/PS1 mice | |
CN103648509B (en) | Method and composition relevant to mescenchymal stem cell allochthon | |
Jiang et al. | Cannabinoids promote embryonic and adult hippocampus neurogenesis and produce anxiolytic-and antidepressant-like effects | |
Kempermann et al. | Genetic influence on phenotypic differentiation in adult hippocampal neurogenesis | |
Veszelka et al. | Docosahexaenoic acid reduces amyloid-β induced toxicity in cells of the neurovascular unit | |
Lee et al. | Adenosine receptors and Huntington's disease | |
Tan et al. | Honokiol post-treatment ameliorates myocardial ischemia/reperfusion injury by enhancing autophagic flux and reducing intracellular ROS production | |
JP6574769B2 (en) | Bicyclic compounds and their use in the treatment of autism spectrum disorders and neurodevelopmental disorders | |
Raman et al. | Chemokines, macrophage inflammatory protein-2 and stromal cell-derived factor-1α, suppress amyloid β-induced neurotoxicity | |
Li et al. | Omega‑3 polyunsaturated fatty acids prevent murine dilated cardiomyopathy by reducing oxidative stress and cardiomyocyte apoptosis | |
Gao et al. | Glycine ameliorates MBP-induced meiotic abnormalities and apoptosis by regulating mitochondrial-endoplasmic reticulum interactions in porcine oocytes | |
Zhao et al. | Phorbol ester (PMA)-treated U937 cells cultured on type I collagen-coated dish express a lower production of pro-inflammatory cytokines through lowered ROS levels in parallel with cell aggregate formation | |
Nuñez-Figueredo et al. | The effects of JM-20 on the glutamatergic system in synaptic vesicles, synaptosomes and neural cells cultured from rat brain | |
Rajasinghe et al. | Omega-3 docosahexaenoic acid (DHA) impedes silica-induced macrophage corpse accumulation by attenuating cell death and potentiating efferocytosis | |
Janßen et al. | A pivotal role of nonmuscle myosin II during microglial activation | |
Poulsen et al. | Glutamate receptor antagonists and growth factors modulate dentate granule cell neurogenesis in organotypic, rat hippocampal slice cultures | |
WO2017086608A1 (en) | Composition for preventing or treating bone diseases and joint diseases, containing, as active ingredients, water-soluble ionized calcium and fructooligosaccharide complex | |
WO2018226230A1 (en) | Compounds and methods for treatment of diamond blackfan anemia | |
Tariq et al. | Menadione protects gastric mucosa against ethanol-induced ulcers | |
Gonzalez-Burgos et al. | Cerebellar granule cell and Bergmann glial cell maturation in the rat is disrupted by pre-and post-natal exposure to moderate levels of ethanol | |
ITMI20120008A1 (en) | COMPOSITIONS WITH ANTI-NEURODEGENERATIVE ACTIVITY | |
Roy et al. | High affinity capture and concentration of quinacrine in polymorphonuclear neutrophils via vacuolar ATPase-mediated ion trapping: Comparison with other peripheral blood leukocytes and implications for the distribution of cationic drugs | |
WO2021056996A1 (en) | Senolytic and antiinflammatory prodrugs and methods of use thereof | |
JP2019206495A (en) | Agent containing horse placenta extract as active ingredient | |
EP4035669A1 (en) | Preparation of drug for treating alzheimer's disease |