ITMI20120008A1 - COMPOSITIONS WITH ANTI-NEURODEGENERATIVE ACTIVITY - Google Patents
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
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- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
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Description
Descrizione del brevetto per invenzione industriale avente per titolo: Description of the patent for industrial invention entitled:
“COMPOSIZIONI AD ATTIVITÀ ANTI-NEURODEGENERATIVA” "COMPOSITIONS WITH ANTI-NEURODEGENERATIVE ACTIVITIES"
Campo tecnico dell’invenzione Technical field of the invention
La presente invenzione è relativa all’uso di composizioni comprendenti una miscela di estratti ottenibili da embrioni ovipari, come ingrediente attivo, per la prevenzione e/o il trattamento di malattie degenerative. The present invention relates to the use of compositions comprising a mixture of extracts obtainable from oviparous embryos, as an active ingredient, for the prevention and / or treatment of degenerative diseases.
Stato dell’arte State of the art
Estratti di embrioni da impiegare come sostanze anti-tumorali o ad attività anti-psoriasica sono stati descritti in precedenti brevetti. Extracts of embryos to be used as anti-tumor substances or with anti-psoriatic activity have been described in previous patents.
Ad esempio nel brevetto francese n. 2451193 viene descritto l’impiego di un omogenato in soluzione idroalcolica ottenuto da embrioni di mucca, pecora o suino per il trattamento di tumori. For example in the French patent n. 2451193 describes the use of a homogenate in a hydroalcoholic solution obtained from cow, sheep or pig embryos for the treatment of tumors.
Nella domanda di brevetto n. WO 98/11905 viene descritta una composizione adatta al trattamento di tumori contenente un estratto di embrioni o di utero gravido, in cui gli embrioni sono prelevati da animali ovipari od ovovivipari e l’utero gravido è prelevato da topo, coniglio, pecora, suino. In the patent application n. WO 98/11905 describes a composition suitable for the treatment of tumors containing an embryo or pregnant uterus extract, in which the embryos are taken from oviparous or ovoviviparous animals and the pregnant uterus is taken from mice, rabbits, sheep, pigs.
Nel brevetto europeo n. 0929308 viene descritto che estratti di embrioni prelevati a specifici stadi del differenziamento embrionale sono efficaci nel trattamento di malattie tumorali e di altre patologie controllate dall’anti-oncogene p53 e che detti stadi specifici dipendono dalle specie animali da cui si prelevano gli estratti. In the European patent n. 0929308 it is described that extracts of embryos taken at specific stages of embryonic differentiation are effective in the treatment of tumor diseases and other pathologies controlled by the anti-oncogene p53 and that said specific stages depend on the animal species from which the extracts are taken.
Inoltre, nella domanda di brevetto europeo n. 03013959.6 viene descritto che gli estratti di embrioni animali non umani in specifici stadi del differenziamento cellulare sono efficaci come sostanze nutritive sia per via generale con effetti sistemici sullo stato di validità generale (performance status) di pazienti oncologici e defedati sia per via topica per il nutrimento della cute e degli annessi cutanei. Furthermore, in the European patent application n. 03013959.6 it is described that the extracts of non-human animal embryos in specific stages of cell differentiation are effective as nutrients both generally with systemic effects on the status of general validity (performance status) of cancer and defected patients and topically for nourishment of the skin and skin appendages.
Infine, il brevetto europeo n. 1570853 descrive l’uso di un estratto di embrioni di ovipari e di mucosa di utero gravido o di placenta di mammiferi non umani per la preparazione di un prodotto ad attività anti-psoriasica. Finally, the European patent no. 1570853 describes the use of an extract of oviparous embryos and mucous membrane of pregnant uterus or placenta of non-human mammals for the preparation of a product with anti-psoriatic activity.
Sommario dell’invenzione Summary of the invention
La presente invenzione è relativa a composizioni comprendenti una miscela di estratti ottenibili da embrioni di ovipari prelevati in specifici stadi dello sviluppo embrionale o in momenti compresi fra uno stadio e l’altro dello sviluppo embrionale per l’uso nella prevenzione e/o nel trattamento riparazione di patologie degenerative del sistema nervoso e/o di altri organi o apparati. The present invention relates to compositions comprising a mixture of extracts obtainable from oviparous embryos taken at specific stages of embryonic development or at times between one stage and the next of embryonic development for use in prevention and / or repair treatment. of degenerative pathologies of the nervous system and / or other organs or systems.
Descrizione dettagliata dell’invenzione Detailed description of the invention
È stato sorprendentemente trovato che estratti di embrioni di ovipari, costituiti prevalentemente da proteine con diversi pesi molecolari e da una frazione di acidi nucleici, sono molto efficaci nella prevenzione e/o nel trattamento di lesioni degenerative del sistema nervoso e di altri organi o apparati. It has surprisingly been found that extracts of oviparous embryos, consisting mainly of proteins with different molecular weights and a fraction of nucleic acids, are very effective in the prevention and / or treatment of degenerative lesions of the nervous system and other organs or systems.
La presente invenzione è relativa a composizioni comprendenti una miscela di estratti ottenibili da embrioni ovipari prelevati ad uno stadio specifico dello sviluppo embrionale o in momenti compresi fra uno stadio e l’altro dello sviluppo embrionale per l’uso nella prevenzione e/o nel trattamento di malattie degenerative del sistema nervoso e/o di altri organi o apparati, quali ad esempio l’organo della vista, il fegato, l’apparato cardiovascolare. The present invention relates to compositions comprising a mixture of extracts obtainable from oviparous embryos taken at a specific stage of embryonic development or at times between one stage and the next of embryonic development for use in the prevention and / or treatment of degenerative diseases of the nervous system and / or other organs or systems, such as the organ of vision, the liver, the cardiovascular system.
Gli embrioni utilizzabili per gli usi di cui alla presente invenzione sono preferibilmente prelevati da pesci, uccelli, anfibi. The embryos usable for the uses of the present invention are preferably taken from fish, birds, amphibians.
Secondo un aspetto preferito, tra i pesci gli embrioni sono prelevati dal Brachidanio Rerio (Zebrafish), dalla trota, dal salmone; tra gli anfibi dalle rane e tra gli uccelli dal pollo e dalle quaglie. According to a preferred aspect, among the fish the embryos are taken from the Brachidanio Rerio (Zebrafish), from the trout, from the salmon; among amphibians by frogs and among birds by chicken and quail.
Preferibilmente, gli embrioni sono prelevati nei seguenti stadi dello sviluppo embrionale: medio-blastula-gastrula, tail budd, 5 somiti, 20 somiti e nello stadio corrispondente a 24 ore dopo la fecondazione. Gli embrioni possono essere prelevati in altri momenti dello sviluppo embrionale, ad esempio in momenti compresi fra uno stadio e l’altro fra quelli sopra descritti (ovvero tra medio-blastula-gastrula e tail budd, tra tail budd e 5 somiti, tra 5 somiti e 20 somiti) ed in momenti dello sviluppo che vanno oltre le 24 ore dopo la fecondazione. Preferably, the embryos are collected in the following stages of embryonic development: mid-blastula-gastrula, tail budd, 5 somites, 20 somites and in the stage corresponding to 24 hours after fertilization. Embryos can be collected at other times of embryonic development, for example at times between one stage and the other among those described above (i.e. between medio-blastula-gastrula and tail budd, between tail budd and 5 somites, between 5 somites and 20 somites) and in moments of development that go beyond 24 hours after fertilization.
Secondo un ulteriore aspetto, gli embrioni possono essere prelevati in stadi diversi dello sviluppo embrionale. According to a further aspect, embryos can be collected at different stages of embryonic development.
Gli estratti possono essere ottenuti utilizzando il metodo descritto di seguito. Extracts can be obtained using the method described below.
Gli embrioni prelevati nei diversi stadi sopra-descritti vengono lavati abbondantemente in acqua distillata e quindi sospesi in soluzione costituita dall’85% di glicerolo e dal 15% di alcool etilico al 98%. La sospensione viene trattata con un ciclo di sonicazione di 10 secondi e quindi con due cicli di turboemulsione della durata di 3 minuti. The embryos taken in the various stages described above are washed abundantly in distilled water and then suspended in a solution consisting of 85% glycerol and 15% 98% ethyl alcohol. The suspension is treated with a 10-second sonication cycle and then with two turbo-emulsion cycles lasting 3 minutes.
Il contenuto di proteine totali in dette sospensioni può essere compreso fra 0,1 e 0,3 milligrammi per millilitro. Negli estratti l’analisi dei pesi molecolari delle diverse frazioni proteiche cambia in rapporto ai diversi stadi di sviluppo embrionale degli embrioni impiegati per ottenere gli estratti: ad esempio nel periodo di medio-blastula-gastrula si rileva usualmente una frazione di proteine che rappresenta circa il 15% del totale con un peso molecolare intorno ai 15 kDaltons, una frazione pari circa al 20% del totale con pesi molecolari compresi fra 20 e 30 kDaltons, una frazione pari circa al 20% del totale con pesi molecolari compresi fra 40 e 50 kDaltons ed una frazione intorno al 45% del totale con pesi molecolari compresi fra i 50 ed i 100 kDaltons. The total protein content in said suspensions can be comprised between 0.1 and 0.3 milligrams per milliliter. In the extracts, the analysis of the molecular weights of the different protein fractions changes in relation to the different stages of embryonic development of the embryos used to obtain the extracts: for example, in the mid-blastula-gastrula period, a fraction of proteins is usually detected which represents approximately 15% of the total with a molecular weight around 15 kDaltons, a fraction equal to about 20% of the total with molecular weights between 20 and 30 kDaltons, a fraction equal to about 20% of the total with molecular weights between 40 and 50 kDaltons and a fraction around 45% of the total with molecular weights between 50 and 100 kDaltons.
In stadi successivi dello sviluppo embrionale le diverse frazioni proteiche cambiano in percentuale fra loro, circa il 70% delle proteine presente nel periodo di medio-blastula-gastrula è presente fino a 18 ore dopo la fecondazione. In later stages of embryonic development the different protein fractions change in percentage between them, about 70% of the proteins present in the mid-blastula-gastrula period are present up to 18 hours after fertilization.
Invece, da 18 a 24 ore dopo la fecondazione, il rapporto tra le diverse frazioni proteiche cambia in modo molto evidente, con un aumento notevole della percentuale di proteine con peso molecolare inferiore a 25 kDaltons e con una diminuzione della frazione con peso molecolare sopra i 50 kDaltons. Instead, from 18 to 24 hours after fertilization, the ratio between the different protein fractions changes in a very evident way, with a notable increase in the percentage of proteins with a molecular weight lower than 25 kDaltons and with a decrease in the fraction with a molecular weight above 50 kDaltons.
Le sospensioni ottenute utilizzando i diversi stadi di differenziazione cellulare ed usualmente in periodo di medio-blastula-gastrula, 5 somiti e 20 somiti, ma anche a 24 ore ed oltre, diluite, come si è detto, in soluzione glicero-alcolica, vengono ulteriormente diluite con acqua depurata in un rapporto di volume 1:10 e quindi filtrate sotto vuoto con membrane Millipore di 90 micron e successivamente con membrane di 10 micron. Le soluzioni così ottenute hanno una concentrazione di proteine totali che può essere compresa fra 10 e 30 microgrammi per millilitro. The suspensions obtained using the different stages of cell differentiation and usually in the period of medium-blastula-gastrula, 5 somites and 20 somites, but also at 24 hours and beyond, diluted, as mentioned, in a glycero-alcoholic solution, are further diluted with purified water in a volume ratio of 1:10 and then filtered under vacuum with 90 micron Millipore membranes and subsequently with 10 micron membranes. The solutions thus obtained have a total protein concentration which can be between 10 and 30 micrograms per milliliter.
Gli estratti possono essere utilizzati come ingredienti attivi per la preparazione di composizioni utili per la prevenzione e/o il trattamento di malattie degenerative, in particolare del sistema nervoso e/o di altri organi o apparati. The extracts can be used as active ingredients for the preparation of compositions useful for the prevention and / or treatment of degenerative diseases, in particular of the nervous system and / or of other organs or systems.
Le composizioni possono inoltre comprendere, quali ingredienti attivi, anti-ossidanti, vitamine o altre sostanze utilizzate come integratori alimentari. The compositions may further comprise, as active ingredients, anti-oxidants, vitamins or other substances used as food supplements.
Nella preparazione di tali composizioni, gli ingredienti attivi possono essere miscelati con almeno un eccipiente o veicolo farmaceuticamente accettabile. In the preparation of such compositions, the active ingredients can be mixed with at least one pharmaceutically acceptable excipient or vehicle.
Le composizioni possono essere somministrate preferibilmente per via sublinguale o nasale. The compositions can preferably be administered sublingually or nasally.
Le composizioni possono essere sotto forma di soluzioni o spray. The compositions can be in the form of solutions or sprays.
Gli estratti possono anche essere liofilizzati e utilizzati per preparare composizioni in forma di compresse, capsule, ovuli, granuli, ecc. The extracts can also be freeze-dried and used to prepare compositions in the form of tablets, capsules, pessaries, granules, etc.
Gli estratti possono essere somministrati giornalmente in quantità variabile fra 10 e 40 microgrammi/die in relazione alle diverse patologie degenerative da trattare. The extracts can be administered daily in a variable quantity between 10 and 40 micrograms / day in relation to the various degenerative diseases to be treated.
Gli esempi di seguito riportati illustrano ulteriormente l' invenzione. The following examples further illustrate the invention.
ESEMPI EXAMPLES
Esempio di composizione Composition example
Una composizione secondo la presente invenzione può contenere: A composition according to the present invention can contain:
un estratto A ottenuto da embrioni prelevati allo stadio di sviluppo di medio-blastula-gastrula, an extract A obtained from embryos taken at the developmental stage of medio-blastula-gastrula,
un estratto B ottenuto da embrioni prelevati allo stadio di 5 somiti, un estratto C ottenuto da embrioni prelevati allo stadio di 20 somiti, in parti uguali. a B extract obtained from embryos taken at the 5 somite stage, a C extract obtained from embryos taken at the 20 somite stage, in equal parts.
Gli estratti sono stati preparati come descritto nella descrizione dettagliata dell’invenzione. The extracts were prepared as described in the detailed description of the invention.
Esempio sperimentale Experimental example
L’efficacia degli estratti ottenuti da embrioni di ovipari prelevati in precisi momenti del differenziamento cellulare è stata testata utilizzando i modelli di indagine usualmente impiegati per lo studio di patologie neurodegenerative. The effectiveness of the extracts obtained from oviparous embryos taken at specific moments of cell differentiation was tested using the survey models usually used for the study of neurodegenerative diseases.
Tra tali modelli, l’ippocampo prelevato da ratti con tutte le sue cellule e posto in vitro è uno dei più studiati. Le cellule dell’ippocampo possono essere trattate con sostanze che ne provocano facilmente la degenerazione e su tali cellule possono essere studiati gli effetti di varie altre sostanze che prevengono o riparano la degenerazione provocata da agenti neurotossici. Among these models, the hippocampus taken from rats with all its cells and placed in vitro is one of the most studied. The hippocampal cells can be treated with substances that easily cause degeneration and the effects of various other substances that prevent or repair the degeneration caused by neurotoxic agents can be studied on these cells.
Materiali e metodi Materials and methods
Fettine organotipiche ippocampali sono state preparate come descritto in letteratura (Gardoni et al., 2002) utilizzando ratti di 7-8 giorni; tutti i trattamenti farmacologici sono stati effettuati in fettine organotipiche al 14esimo giorno in coltura ( DIV14 ). Hippocampal organotypic slices were prepared as described in the literature (Gardoni et al., 2002) using 7-8 day old rats; all pharmacological treatments were carried out in organotypic slices on the 14th day in culture (DIV14).
Per testare l’effetto dell’estratto di zebrafish, fettine organotipiche sono state esposte a NMDA (N-Metil-D-Aspartato) 50 μΜ o a NMDA 300 μΜ in Serum Free medium, in presenza o assenza degli estratti. To test the effect of the zebrafish extract, organotypic slices were exposed to NMDA (N-Methyl-D-Aspartate) 50 μΜ or NMDA 300 μΜ in Serum Free medium, in the presence or absence of the extracts.
Negli esperimenti le fettine sono state incubate per un’ora in serum free medium in presenza o assenza degli estratti. In the experiments, the slices were incubated for one hour in serum free medium in the presence or absence of the extracts.
Dopo un’ora, le fettine sono state lavate con Serum-Free medium e poi incubate con il loro medium in presenza o assenza dell’estratto di zebrafish per 24 ore. After one hour, the slices were washed with Serum-Free medium and then incubated with their medium in the presence or absence of the zebrafish extract for 24 hours.
Per ogni tipo di trattamento, è stata valutata l’attività neuroprotettiva sia della miscela degli estratti (A+B+C) sia dei singoli estratti (A o B o C): l’estratto A è stato ottenuto da embrioni prelevati allo stadio di sviluppo di medio-blastula-gastrula, l’estratto B è stato ottenuto da embrioni prelevati allo stadio di 5 somiti, l’estratto C è stato ottenuto da embrioni prelevati allo stadio di 20 somiti e preparato come già descritto nella descrizione dettagliata dell’invenzione. For each type of treatment, the neuroprotective activity of both the mixture of the extracts (A + B + C) and of the individual extracts (A or B or C) was evaluated: extract A was obtained from embryos taken at the stage of development of medio-blastula-gastrula, extract B was obtained from embryos taken at the 5 somite stage, extract C was obtained from embryos taken at the 20 somite stage and prepared as already described in the detailed description of the invention .
Per valutare il danno cellulare indotto dai differenti trattamenti è stata utilizzata la fluorescenza associata all’uso del propidio ioduro (PI) (5 mg/ml) come descritto in letteratura (Pellegrini-G. et al., 1999). L’analisi quantitativa della mortalità cellulare è stata effettuata nell’area CA1 dell’ippocampo utilizzando come termine di paragone il massimo danno cellulare ottenuto esponendo le fettine organotipiche al trattamento con NMDA. To assess the cell damage induced by the different treatments, fluorescence associated with the use of propidium iodide (PI) (5 mg / ml) was used as described in the literature (Pellegrini-G. Et al., 1999). The quantitative analysis of cell mortality was carried out in the CA1 area of the hippocampus using as a term of comparison the maximum cellular damage obtained by exposing the organotypic slices to treatment with NMDA.
Le immagini sono state acquisite con un microscopio a epifluorescenza Zeiss Axiovert 200M (obiettivo 10x) e CoolSnap CCD camera. Per l’analisi quantitativa, le immagini sono state acquisite con gli stessi setting e tempi di esposizione. L’intensità media di fluorescenza è stata determinata dopo aver tracciato l’area corrispondente all’area CA1 e la mortalità analizzata in funzione dell’intensità di fluorescenza e dell’area espressa come pixel. The images were acquired with a Zeiss Axiovert 200M epifluorescence microscope (10x objective) and CoolSnap CCD camera. For the quantitative analysis, the images were acquired with the same settings and exposure times. The average fluorescence intensity was determined after tracing the area corresponding to the CA1 area and the mortality analyzed as a function of the fluorescence intensity and the area expressed as a pixel.
Esperimenti Experiments
Una prima serie di esperimenti è stata condotta al fine di stabilire le condizioni sperimentali ottimali per la valutazione di una possibile attività di tipo neuroprotettivo degli estratti di zebrafish. A first series of experiments was carried out in order to establish the optimal experimental conditions for the evaluation of a possible neuroprotective activity of the zebrafish extracts.
A questo scopo, è stato verificato che il trattamento per 1h con NMDA 50 μΜ e 300 μΜ inducesse una mortalità significativa nelle condizioni sperimentali studiate. Fettine ippocampali organotipiche ( DIV14 ) sono state trattate per un’ora con NMDA 50 μΜ, o con NMDA 300 μΜ, per avere una condizione che determini mortalità certa, e 24 ore dopo è stata condotta la colorazione con PI. Dopo fissazione, è stata acquisita l’area CA1 ed è stata analizzata la mortalità come descritto nei materiali e metodi. For this purpose, it was verified that treatment for 1 hour with NMDA 50 μΜ and 300 μΜ induced significant mortality in the experimental conditions studied. Organotypic hippocampal slices (DIV14) were treated for one hour with NMDA 50 μΜ, or NMDA 300 μΜ, to have a condition that determines certain mortality, and 24 hours later the staining with PI was carried out. After fixation, the CA1 area was acquired and mortality was analyzed as described in the materials and methods.
Il trattamento con NMDA 50 μΜ determina un aumento di mortalità del 47% (NMDA 50 μΜ vs controlli) mentre NMDA 300 μΜ causa un aumento di mortalità del 99% (NMDA 300 μΜ vs controlli) nell’area CA1 dell’ippocampo 24 ore dopo il trattamento per 1 ora con NMDA (50 μΜ) o con NMDA (300 μΜ). Treatment with NMDA 50 μΜ causes a 47% increase in mortality (NMDA 50 μΜ vs controls) while NMDA 300 μΜ causes a 99% increase in mortality (NMDA 300 μΜ vs controls) in the CA1 area of the hippocampus 24 hours later treatment for 1 hour with NMDA (50 μΜ) or NMDA (300 μΜ).
Sono state quindi valutate le proprietà neuroprotettive degli estratti in seguito ad esposizione di fettine organotipiche ippocampali a tre differenti stimoli tossici, di diversa intensità (deprivazione siero, NMDA 50 μΜ, NMDA 300 μΜ per 1 ora). In una prima serie di esperimenti è stato analizzato il possibile effetto neuroprotettivo della miscela di estratti A+B+C. La miscela degli estratti è stata aggiunta (con un ulteriore diluizione 1:100) contemporaneamente al trattamento con NMDA o alla semplice deprivazione da siero e le analisi sono state condotte dopo 24 h. Il trattamento con la miscela A+B+C determina una significativa riduzione della mortalità neuronaie (-31,6 ± 6,2%, *p=0,005) indotta da 1 ora di deprivazione da siero. ;Come già indicato il trattamento con NMDA (50 μΜ) causa un significativo aumento della mortalità nell’area CAI (*p=0,002, NMDA 50 μΜ vs controlli); il co-trattamento con la miscela A+B+C determina una riduzione significativa della mortalità indotta da NMDA (50 μΜ) (p=0,01, NMDA 50 μΜ con A+B+C vs NMDA 50 μΜ). The neuroprotective properties of the extracts were then evaluated following exposure of hippocampal organotypic slices to three different toxic stimuli, of different intensity (serum deprivation, NMDA 50 μΜ, NMDA 300 μΜ for 1 hour). In a first series of experiments the possible neuroprotective effect of the mixture of A + B + C extracts was analyzed. The mixture of the extracts was added (with a further 1: 100 dilution) simultaneously with the NMDA treatment or with the simple serum deprivation and the analyzes were carried out after 24 h. Treatment with the A + B + C mixture results in a significant reduction in neuronal mortality (-31.6 ± 6.2%, * p = 0.005) induced by 1 hour of serum deprivation. ; As already indicated, treatment with NMDA (50 μΜ) causes a significant increase in mortality in the CAI area (* p = 0.002, NMDA 50 μΜ vs controls); co-treatment with the A + B + C mixture results in a significant reduction in NMDA-induced mortality (50 μΜ) (p = 0.01, NMDA 50 μΜ with A + B + C vs NMDA 50 μΜ).
In un’ultima serie di esperimenti è stata analizzata la capacità della miscela A+B+C di indurre neuroprotezione anche a seguito di trattamento di fettine ippocampali con concentrazioni ancora più elevate di NMDA (300 μΜ). Anche in queste condizioni sperimentali, il co-trattamento con la miscela A+B+C determina una riduzione significativa della mortalità indotta da NMDA (300 μΜ) (p=0,009 NMDA 300 μΜ con A+B+C vs NMDA 300 μΜ). In a last series of experiments, the ability of the A + B + C mixture to induce neuroprotection was analyzed also following the treatment of hippocampal slices with even higher concentrations of NMDA (300 μΜ). Even under these experimental conditions, the co-treatment with the A + B + C mixture results in a significant reduction in NMDA-induced mortality (300 μΜ) (p = 0.009 NMDA 300 μΜ with A + B + C vs NMDA 300 μΜ).
L’uso di una miscela di estratti ottenuti da embrioni di ovipari prelevati in specifici momenti dello sviluppo embrionale ha dimostrato di avere effetti benefici sulla qualità della vita ed il performance status nell’uomo, in particolare quando le dosi somministrate di proteine totali contenute negli estratti è compresa fra 10 e 40 micro grammi/die, a seconda delle patologie trattata. The use of a mixture of extracts obtained from oviparous embryos taken at specific moments of embryonic development has been shown to have beneficial effects on the quality of life and performance status in humans, in particular when the administered doses of total proteins contained in the extracts it is between 10 and 40 micro grams / day, depending on the pathologies treated.
In conclusione, la miscela degli estratti A+B+C ha dimostrato invece una significativa attività neuroprotettiva nei confronti della morte neuronaie indotta da ih di deprivazione di siero o indotta dal trattamento con NMDA (sia 50 μΜ che 300 μΜ). In tutti i casi, l’attività neuroprotettiva è stata misurata 24h dopo l’insulto tossico. In conclusion, the mixture of the A + B + C extracts showed a significant neuroprotective activity against neuronal death induced by serum deprivation or induced by NMDA treatment (both 50 μΜ and 300 μΜ). In all cases, the neuroprotective activity was measured 24 hours after the toxic insult.
Detti risultati sono sorprendenti e dimostrano l’effetto anti-degenerativo legato all’ utilizzo di una miscela di diversi estratti, soprattutto alla luce dei risultati ottenuti somministrando separatamente gli estratti. These results are surprising and demonstrate the anti-degenerative effect associated with the use of a mixture of different extracts, especially in light of the results obtained by administering the extracts separately.
Successivamente, sono state infatti valutate le eventuali proprietà neuroprotettive degli estratti somministrati singolarmente (A, B o C). Anche in questo caso, la mortalità neuronaie tramite il saggio con propidio ioduro è stata valutata in seguito ad esposizione delle fettine organotipiche ippocampali a deprivazione di siero o a NMDA, in presenza dei diversi estratti di zebrafish. I singoli estratti hanno dimostrato una certa capacità neuroprotettiva, soprattutto l’estratto A, al limite della significatività, ma non diversa statisticamente rispetto ai controlli, nè in seguito a deprivazione di siero nè in seguito a trattamento con NMDA (50 μΜ) Subsequently, the possible neuroprotective properties of the extracts administered individually (A, B or C) were evaluated. Also in this case, neuronal mortality by the propidium iodide assay was evaluated following exposure of the organotypic hippocampal slices to serum deprivation or NMDA, in the presence of the different zebrafish extracts. The individual extracts have shown a certain neuroprotective capacity, especially extract A, at the limit of significance, but not statistically different from the controls, neither following serum deprivation nor following treatment with NMDA (50 μΜ)
I composti B o C utilizzati singolarmente non hanno mai dimostrato attività di tipo neuroprotettivo. L’estratto A ha invece mostrato una certa tendenza verso una possibile attività neuroprotettiva, che è possibile definire al limite della significatività, soprattutto nei confronti della morte cellulare indotta da deprivazione di siero. Compounds B or C used individually have never shown neuroprotective activity. Extract A, on the other hand, showed a certain tendency towards a possible neuroprotective activity, which can be defined at the limit of significance, especially in relation to cell death induced by serum deprivation.
REFERENZE REFERENCES
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