ITBO20100504A1 - MICROFLUID SYSTEM - Google Patents

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ITBO20100504A1
ITBO20100504A1 IT000504A ITBO20100504A ITBO20100504A1 IT BO20100504 A1 ITBO20100504 A1 IT BO20100504A1 IT 000504 A IT000504 A IT 000504A IT BO20100504 A ITBO20100504 A IT BO20100504A IT BO20100504 A1 ITBO20100504 A1 IT BO20100504A1
Authority
IT
Italy
Prior art keywords
valve
chamber
particles
sample
pressure
Prior art date
Application number
IT000504A
Other languages
Italian (it)
Inventor
Alex Calanca
Nicolo' Manaresi
Gianni Medoro
Gerardo Perozziello
Giuseppina Simone
Original Assignee
Silicon Biosystems Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Silicon Biosystems Spa filed Critical Silicon Biosystems Spa
Priority to IT000504A priority Critical patent/ITBO20100504A1/en
Publication of ITBO20100504A1 publication Critical patent/ITBO20100504A1/en

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Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C5/00—Separating dispersed particles from liquids by electrostatic effect
    • B03C5/02—Separators

Description

DESCRIZIONE DESCRIPTION

del brevetto per Invenzione Industriale dal titolo: of the patent for Industrial Invention entitled:

"SISTEMA MICROFLUIDICO" "MICROFLUIDIC SYSTEM"

La presente invenzione è relativa ad un sistema microfluidico, ad un apparato per l'isolamento di particelle, ad un dispositivo microfluidico e ad un metodo per l'isolamento di particelle. The present invention relates to a microfluidic system, an apparatus for the isolation of particles, a microfluidic device and a method for the isolation of particles.

È noto un dispositivo per l'isolamento di particelle di un tipo determinato comprendente una camera principale, in cui un operatore inserisce tramite pipetta ed attraverso un foro della camera principale un campione, ed una camera di recupero, da cui l'operatore preleva sempre tramite pipetta ed attraverso un foro della camera di recupero le particelle del tipo determinato. Spesso, in uso, la separazione tra le particelle del tipo determinato ed il resto del campione dalla camera principale alla camera di recupero viene effettuata mediante dielettroforesi. A device for the isolation of particles of a specific type is known comprising a main chamber, in which an operator inserts a sample by means of a pipette and through a hole in the main chamber, and a recovery chamber, from which the operator always takes pipette and through a hole in the recovery chamber the particles of the determined type. Often, in use, the separation between the particles of the determined type and the rest of the sample from the main chamber to the recovery chamber is carried out by dielectrophoresis.

I dispositivi noti presentano diversi problemi di precisione durante le fasi di separazione, inserimento, e recupero. Inoltre, i risultati non sono sempre riproducibili, a volte si verificano contaminazione del campione durante le diverse fasi, ed è spesso necessario l'intervento di operatori con elevate capacità manuali. The known devices present various precision problems during the separation, insertion, and recovery steps. Furthermore, the results are not always reproducible, sometimes contamination of the sample occurs during the different phases, and the intervention of operators with high manual skills is often required.

Scopo della presente invenzione è quello di fornire un sistema microf luidico, un apparato per l'isolamento di particelle, un dispositivo microf luidico ed un metodo per l'isolamento di particelle, i quali permettano di superare, almeno parzialmente, qli inconvenienti dello stato dell'arte e siano, nel contempo, di facile ed economica realizzazione . The purpose of the present invention is to provide a microfluidic system, an apparatus for the isolation of particles, a microfluidic device and a method for the isolation of particles, which allow to overcome, at least partially, the drawbacks of the state of the art and are, at the same time, easy and inexpensive to produce.

Secondo la presente invenzione, viene fornito un sistema microfluidico secondo quanto licitato nelle rivendicazioni indipendenti che sequono e, preferibilmente, in una qualsiasi delle rivendicazioni dipendenti direttamente od indirettamente dalle rivendicazioni indipendenti . According to the present invention, a microfluidic system is provided as disclosed in the independent claims which follow and, preferably, in any one of the claims directly or indirectly dependent on the independent claims.

A meno che non sia esplicitamente differentemente specificato, nel presente testo i sequenti termini presentano il siqnificato indicato qui sotto. Unless explicitly specified differently, in this text the following terms have the meaning indicated below.

Per diametro equivalente di una sezione si intende il diametro di un cerchio presentante la medesima area della sezione . The equivalent diameter of a section means the diameter of a circle having the same area as the section.

Per sezione di un canale o di un condotto si intende la sezione sostanzialmente perpendicolare all'estensione longitudinale del canale (o condotto) ovvero alla direzione di avanzamento del fluido nel canale (o condotto). The section of a channel or duct is understood to mean the section substantially perpendicular to the longitudinal extension of the channel (or duct) or to the direction of advance of the fluid in the channel (or duct).

Per diametro equivalente di un foro si intende il diametro di un cerchio presentante la medesima area della sezione trasversale di minori dimensioni del foro stesso. By equivalent diameter of a hole we mean the diameter of a circle having the same area as the smaller cross-section of the hole itself.

Per sistema (o dispositivo) microfluidico si intende un sistema (o dispositivo) comprendente almeno un canale (o condotto) microfluidico. By microfluidic system (or device) is meant a system (or device) comprising at least one microfluidic channel (or duct).

Per canale (o condotto) microfluidico si intende un canale (o condotto) presentante una sezione con diametro equivalente inferiore a 1 mm. By microfluidic channel (or duct) we mean a channel (or duct) having a section with an equivalent diameter of less than 1 mm.

Le dimensioni dei canali o condotti possono essere misurate in modo standard con dei profilometri. The dimensions of the ducts or ducts can be measured in a standard way with profilometers.

Nel presente testo, per particella si intende un corpuscolo presentante la dimensione maggiore inferiore a 500 μπι (vantaggiosamente inferiore a 150 μπι). Esempi non limitativi di particelle sono: cellule, detriti cellulari (in particolare, frammenti cellulari), aggregati cellulari (quali per es. piccoli cluster di cellule derivanti da cellule staminali come neurosfere o mammosfere) batteri, liposfere, microsfere (in polistirene e/o magnetiche), nanosfere (per es. nanosfere fino a 100 nm) complessi formati da microsfere legate a cellule. Vantaggiosamente, le particelle sono cellule. In the present text, by particle we mean a corpuscle having the largest dimension of less than 500 μπι (advantageously less than 150 μπι). Non-limiting examples of particles are: cells, cell debris (in particular, cell fragments), cell aggregates (such as small clusters of cells deriving from stem cells such as neurospheres or mammospheres), bacteria, lipospheres, microspheres (in polystyrene and / or magnetic), nanospheres (e.g. nanospheres up to 100 nm) complexes formed by cell-bound microspheres. Advantageously, the particles are cells.

Secondo alcune forme di attuazione, le particelle (vantaggiosamente cellule e/o detriti cellulari) presentano la dimensione maggiore inferiore a 60 μπι. According to some embodiments, the particles (advantageously cells and / or cellular debris) have the largest dimension of less than 60 μπι.

Le dimensioni delle particelle possono essere misurate in modo standard con dei microscopi con scala graduata o microscopi normali utilizzati con vetrini (sui quali vengono depositate le particelle) a scala graduata. The particle size can be measured in a standard way with graduated scale microscopes or normal microscopes used with graduated scale slides (on which the particles are deposited).

Nel presente testo, per dimensioni di una particella si intende la lunghezza, la larghezza e lo spessore della particella . In this text, the size of a particle refers to the length, width and thickness of the particle.

Il termine "sostanzialmente selettivo" viene utilizzato per identificare uno spostamento (o altri termini analoghi indicanti un movimento e/o una separazione) di particelle, in cui le particelle che vengono spostate e/o separate sono particelle in gran maggioranza di uno o più tipi determinati. Vantaggiosamente, uno spostamento (o altri termini analoghi indicanti un movimento e/o una separazione) sostanzialmente selettivo prevede di spostare particelle con almeno il 90% (vantaggiosamente il 95%) di particelle del o dei tipi determinati (percentuale data dal numero di particelle del/i tipo/i determinato/i rispetto al numero di particelle complessive) . The term "substantially selective" is used to identify a displacement (or other similar terms indicating a movement and / or separation) of particles, in which the particles that are displaced and / or separated are particles largely of one or more types determined. Advantageously, a substantially selective displacement (or other similar terms indicating a movement and / or separation) provides for displacing particles with at least 90% (advantageously 95%) of particles of the determined type or types (percentage given by the number of particles of the / the type (s) determined with respect to the total number of particles).

L'invenzione viene di seguito descritta con riferimento ai disegni annessi, che ne illustrano alcuni esempi d'attuazione non limitativi, in cui: The invention is described below with reference to the attached drawings, which illustrate some non-limiting examples of implementation, in which:

la figura 1 illustra in modo schematico un sistema realizzato in accordo con la presente invenzione; Figure 1 schematically illustrates a system made in accordance with the present invention;

la figura 2 illustra in modo schematico un'alternativa forma di attuazione di un sistema realizzato in accordo con la presente invenzione; Figure 2 schematically illustrates an alternative embodiment of a system made in accordance with the present invention;

la figura 3 è una vista laterale e schematica del sistema della figura 1; Figure 3 is a schematic side view of the system of Figure 1;

la figura 4 è una vista prospettica di un esploso di un dispositivo realizzato in accordo con la presente invenzione; Figure 4 is a perspective view of an exploded view of a device made in accordance with the present invention;

la figura 5 è una vista dall'alto di un componente del dispositivo della figura 4; Figure 5 is a top view of a component of the device of Figure 4;

la figura 6 è una vista dal basso del componente della figura 5; Figure 6 is a bottom view of the component of Figure 5;

la figura 7 è una vista prospettica di componenti del dispositivo della figura 4; Figure 7 is a perspective view of components of the device of Figure 4;

la figura 8 è una vista prospettica di un esploso di un componente del dispositivo della figura 4; figure 8 is a perspective view of an exploded view of a component of the device of figure 4;

la figura 9 è una vista dall'alto del componente della figura 8; Figure 9 is a top view of the component of Figure 8;

la figura 10 è una vista prospettica parziale con particolari asportati per chiarezza di un apparato realizzato in accordo con la presente invenzione; Figure 10 is a partial perspective view with details removed for clarity of an apparatus made in accordance with the present invention;

la figura 11 è una vista prospettica parziale con particolari asportati per chiarezza dell'apparato della figura 10 in una differente posizione operativa; Figure 11 is a partial perspective view with details removed for clarity of the apparatus of Figure 10 in a different operating position;

la figura 12 è una vista prospettica dal basso di un particolare dell'apparato delle figure 10 e 11; Figure 12 is a perspective view from below of a detail of the apparatus of Figures 10 and 11;

la figura 13 è una vista dall'alto di una parte dell'apparato delle figure 10 e 11 con particolari asportati per chiarezza; figure 13 is a top view of a part of the apparatus of figures 10 and 11 with details removed for clarity;

le figure 14 e 15 illustrano in sezione parziale un particolare dei sistemi delle figure da 1 a 3 in due differenti posizioni operative; Figures 14 and 15 show in partial section a detail of the systems of Figures 1 to 3 in two different operating positions;

la figura 16 illustra in sezione parziale un particolare dei sistemi delle figure da 1 a 3; Figure 16 is a partial section view of a detail of the systems of Figures 1 to 3;

la figura 17 è una vista prospettica di una parte del particolare delle figure 14 e 15; Figure 17 is a perspective view of a part of the detail of Figures 14 and 15;

la figura 18 è un esploso prospettico del particolare della figura 17; Figure 18 is an exploded perspective view of the detail of Figure 17;

le figure 19 e 20 illustrano un particolare del dispositivo della figura 4 in diverse fasi operative; Figures 19 and 20 show a detail of the device of Figure 4 in different operating phases;

la figura 21 è una vista dall'alto di un dispositivo della figura 4; Figure 21 is a top view of a device of Figure 4;

la figura 22 illustra fotografie di prove effettuate con il sistema della figura 1; Figure 22 illustrates photographs of tests carried out with the system of Figure 1;

la figura 23 illustra in scala ingrandita una forma d'attuazione di un particolare delle figure 1 e 2; la figura 24 è una vista prospettica di una variante della parte illustrata dalla figura 17; Figure 23 illustrates on an enlarged scale an embodiment of a detail of Figures 1 and 2; Figure 24 is a perspective view of a variant of the part illustrated in Figure 17;

la figura 25 è un esploso prospettico della variante della figura 24; Figure 25 is a perspective exploded view of the variant of Figure 24;

la figura 26 è una sezione laterale della variante della figura 24; figure 26 is a side section of the variant of figure 24;

le figure 27 e 28 illustrano un particolare del dispositivo della figura 31 in diverse fasi operative; Figures 27 and 28 show a detail of the device of Figure 31 in different operating phases;

- la figura 29 è una vista prospettica di un esploso di un componente del dispositivo della figura 31; Figure 29 is a perspective view of an exploded view of a component of the device of Figure 31;

- la figura 30 è una vista dall'alto del componente della figura 29; Figure 30 is a top view of the component of Figure 29;

- la figura 31 è una vista dall'alto di un dispositivo realizzato in accordo con la presente invenzione; Figure 31 is a top view of a device made in accordance with the present invention;

- la figura 32 è una vista dal basso di variante del componente della figura 6 ed, in particolare, un componente del dispositivo della figura 31; e Figure 32 is a variant bottom view of the component of Figure 6 and, in particular, a component of the device of Figure 31; And

la figura 33 illustra in scala ingrandita un particolare della figura 32. Figure 33 illustrates a detail of Figure 32 on an enlarged scale.

Sistema microfluidico Microfluidic system

Secondo un primo aspetto della presente invenzione viene fornito un sistema 1 microfluidico per il sostanziale isolamento di particelle Ci (schematicamente illustrate nella figura 20) di almeno un tipo determinato da un campione. Il sistema 1 (figura 1) comprende un ingresso 2, attraverso il quale, in uso, il campione viene inserito nel sistema 1; un'unità di separazione 3, la quale è atta a separare in modo sostanzialmente selettivo almeno una parte delle particelle CI del tipo determinato da ulteriori particelle C2 del campione (schematicamente illustrate nella fiqura 20); ed un'uscita 8, la quale è colleqata all'unità di separazione 3 e attraverso la quale, in uso, almeno parte delle particelle CI del tipo determinato separate in modo sostanzialmente selettivo escono dal sistema 1. According to a first aspect of the present invention, a microfluidic system 1 is provided for the substantial isolation of particles C1 (schematically illustrated in Figure 20) of at least one type determined by a sample. System 1 (Figure 1) comprises an inlet 2, through which, in use, the sample is inserted into system 1; a separation unit 3, which is adapted to substantially selectively separate at least a part of the particles C1 of the type determined from further particles C2 of the sample (schematically illustrated in Figure 20); and an outlet 8, which is connected to the separation unit 3 and through which, in use, at least part of the particles C1 of the determined type separated in a substantially selectively way leave the system 1.

Secondo alcune forme d'attuazione, il sistema 1 comprende una valvola 9 disposta tra l'inqresso 2 e l'unità di separazione 3; ed una valvola 12 disposta tra l'uscita 8 e l'unità di separazione 3. In particolare, il sistema 1 comprende una valvola disposta tra l'unità di separazione 3 e ciascuna apertura del sistema 1 verso l'esterno. According to some embodiments, the system 1 comprises a valve 9 arranged between the inlet 2 and the separation unit 3; and a valve 12 arranged between the outlet 8 and the separation unit 3. In particular, the system 1 comprises a valve arranged between the separation unit 3 and each opening of the system 1 towards the outside.

Secondo alcune forme d'attuazione, l'unità di separazione 3 comprende una camera 4 principale ed una camera 5 di recupero ed è atta a trasferire almeno parte delle particelle CI del tipo determinato dalla camera 4 principale alla camera 5 di recupero in modo sostanzialmente selettivo rispetto alle ulteriori particelle C2 del campione. According to some embodiments, the separation unit 3 comprises a main chamber 4 and a recovery chamber 5 and is able to transfer at least part of the particles C1 of the type determined from the main chamber 4 to the recovery chamber 5 in a substantially selective manner. with respect to the further C2 particles of the sample.

L'unità di separazione 3 comprende, inoltre, un canale 5, il quale colleqa (vale dire permette il passaqqio di fluido tra) le camere 4 e 5 e presenta dimensioni (in particolare, larghezza e lunghezza) molto inferiori ad entrambe le camere 4 e 5 stesse. The separation unit 3 also comprises a channel 5, which connects (i.e. allows the passage of fluid between) the chambers 4 and 5 and has dimensions (in particular, width and length) much smaller than both chambers 4 and 5 same.

Il sistema 1 è dotato di una uscita 7 collegata alla camera 4 principale per permettere al campione di entrare liberamente all'interno della camera 4 principale fungendo da sfiato; e l'uscita 8, la quale è collegata alla camera 5 di recupero e attraverso la quale, in uso, almeno parte delle particelle CI del tipo determinato raccolte nella camera 5 di recupero escono dal sistema 1. The system 1 is equipped with an outlet 7 connected to the main chamber 4 to allow the sample to freely enter the main chamber 4 acting as a vent; and the outlet 8, which is connected to the recovery chamber 5 and through which, in use, at least part of the particles C1 of the determined type collected in the recovery chamber 5 leave the system 1.

Il sistema 1 comprende, inoltre, la valvola 9 disposta a monte della camera 4 principale; una valvola 10 disposta tra la camera 4 principale e l'uscita 7; una valvola 11 disposta a monte della camera 5 di recupero; e la valvola 12 disposta tra la camera 5 di recupero e l'uscita 8. The system 1 also comprises the valve 9 arranged upstream of the main chamber 4; a valve 10 arranged between the main chamber 4 and the outlet 7; a valve 11 arranged upstream of the recovery chamber 5; and the valve 12 arranged between the recovery chamber 5 and the outlet 8.

Le valvole 9 e 10 sono atte a regolare l'afflusso del campione alla camera 4 principale. The valves 9 and 10 are adapted to regulate the flow of the sample to the main chamber 4.

Le valvole 11 e 12 atte a regolare l'afflusso di un liquido di trasporto (carrier liquid) alla camera 5 di recupero ed il deflusso del liquido di trasporto assieme alle particelle CI del tipo determinato dalla camera 5 di recupero attraverso l'uscita 8. The valves 11 and 12 adapted to regulate the flow of a carrier liquid to the recovery chamber 5 and the outflow of the transport liquid together with the particles C1 of the type determined by the recovery chamber 5 through the outlet 8.

Se, in uso, le valvole 9 e 12 vengono chiuse e le valvole 11 e 10 vengono aperte, viene effettuato un lavaggio della camera 4 principale; in altre parole, le ulteriori particelle C2 del campione vengono scaricate (vale a dire fatte defluire) dalla camera 4 principale. If, in use, the valves 9 and 12 are closed and the valves 11 and 10 are opened, a washing of the main chamber 4 is carried out; in other words, the further particles C2 of the sample are discharged (ie made to flow out) from the main chamber 4.

Secondo specifiche forme d'attuazione il liquido di trasporto è una soluzione tampone, in particolare PBS (Phosphate Buffer Saline). According to specific embodiments, the transport liquid is a buffer solution, in particular PBS (Phosphate Buffer Saline).

Secondo la forma d'attuazione illustrata nella figura 1, il sistema 1 comprende un serbatoio 13 (reservoir), il quale è disposto tra l'ingresso 2 e la valvola 9 ed è atto a raccogliere il campione inserito attraverso l'ingresso 1 stesso; ed un serbatoio 14 per contenere il liquido di trasporto, che è atto a riempire la camera 5 di recupero. Il sistema 1 comprende, inoltre, un serbatoio 7' il quale è disposto in corrispondenza dell'uscita 7 ed è atto a raccogliere i fluidi provenienti dalla camera 4 principale. According to the embodiment illustrated in Figure 1, the system 1 comprises a reservoir 13 (reservoir), which is arranged between the inlet 2 and the valve 9 and is adapted to collect the sample inserted through the inlet 1 itself; and a tank 14 for containing the transport liquid, which is adapted to fill the recovery chamber 5. The system 1 also comprises a tank 7 'which is arranged at the outlet 7 and is adapted to collect the fluids coming from the main chamber 4.

La valvola 9 è disposta tra l'ingresso 2 e la camera 4 principale, in particolare tra il serbatoio 13 e la camera 4 principale, ed è atta a collegare o isolare l'ingresso 2 e la camera 4 principale uno rispetto all'altra. The valve 9 is arranged between the inlet 2 and the main chamber 4, in particular between the tank 13 and the main chamber 4, and is adapted to connect or isolate the inlet 2 and the main chamber 4 with respect to each other.

Vantaggiosamente, il sistema 1 comprende, inoltre, una sorgente di pressione 15 per imporre una pressione dal serbatoio 13 verso la camera 5 principale in una direzione di alimentazione della pressione determinata. In particolare, il serbatoio 13 è disposto tra la sorgente di pressione 15 e la valvola 9. Advantageously, the system 1 further comprises a pressure source 15 for imposing a pressure from the tank 13 towards the main chamber 5 in a given pressure supply direction. In particular, the tank 13 is arranged between the pressure source 15 and the valve 9.

In particolare, il serbatoio 13 è disposto tra la sorgente di pressione 15 e la camera 4 principale. In particular, the tank 13 is arranged between the pressure source 15 and the main chamber 4.

Secondo specifiche forme di attuazione, il sistema 1 comprende un condotto 16, il quale collega (vale dire permette il passaggio di fluido tra) la sorgente di pressione 15 e la camera 4 principale e lungo il quale sono disposti il serbatoio 13 e la valvola 9. Il condotto 16 presenta una sezione di diametro equivalente inferiore o uguale a 2 mm; vantaggiosamente, il condotto 16 presenta una sezione di diametro equivalente superiore o uguale a 50 μπι. Il condotto 16 comprende almeno un tratto il quale presenta una sezione con diametro equivalente inferiore o uguale a 0,9 mm. According to specific embodiments, the system 1 comprises a duct 16, which connects (i.e. allows the passage of fluid between) the pressure source 15 and the main chamber 4 and along which the tank 13 and the valve 9 are arranged. The duct 16 has a section with an equivalent diameter of less than or equal to 2 mm; advantageously, the duct 16 has a section with an equivalent diameter greater than or equal to 50 μπι. The duct 16 comprises at least one section which has a section with an equivalent diameter less than or equal to 0.9 mm.

Il sistema 1 comprende, inoltre, un dispositivo di vibrazione 17, il quale è atto a fare variare in modo oscillante la pressione esercitata sul campione almeno in una zona dall'ingresso 2 alla camera 4 principale ed è disposto tra la sorgente di pressione 15 ed il serbatoio 13. In questo modo, le particelle CI e C2 del campione presenti nel serbatoio 13 e/o nel condotto 16 e/o nella camera 4 principale vengono fatte vibrare; l'afflusso delle particelle CI e C2 del campione dal serbatoio 13 alla camera 4 principale viene migliorato. Le particelle CI e C2 presentano una minore tendenza a raggrupparsi o aderire alle pareti del serbatoio 13 e/o del condotto 16 e/o della camera 4 principale. L'omogeneità della distribuzione delle particelle CI e C2 all'interno della camera 4 principale viene migliorata. The system 1 also comprises a vibrating device 17, which is adapted to cause the pressure exerted on the sample to vary in an oscillating way at least in an area from the inlet 2 to the main chamber 4 and is arranged between the pressure source 15 and the tank 13. In this way, the particles C1 and C2 of the sample present in the tank 13 and / or in the duct 16 and / or in the main chamber 4 are made to vibrate; the flow of the particles C1 and C2 of the sample from the tank 13 to the main chamber 4 is improved. The particles C1 and C2 have a lesser tendency to group or adhere to the walls of the tank 13 and / or of the duct 16 and / or of the main chamber 4. The homogeneity of the distribution of the particles C1 and C2 inside the main chamber 4 is improved.

Vantaggiosamente, il dispositivo di vibrazione 17 comprende un diaframma oscillante 18 collegata, in particolare mediante un giunto 19 a T, al condotto 16. Secondo specifiche forme d'attuazione, il diaframma oscillante è una micropompa (Thinxxs<®>MDP2205) con ingresso ed uscita cortocircuitati. Advantageously, the vibration device 17 comprises an oscillating diaphragm 18 connected, in particular by means of a T-joint 19, to the duct 16. According to specific embodiments, the oscillating diaphragm is a micropump (Thinxxs <®> MDP2205) with inlet and output short-circuited.

Secondo alcune forme di attuazione, (non illustrate nella figura 1) l'ingresso 2 è disposto lungo il condotto 16, tra la sorgente di pressione 15 (in particolare, il giunto 19) ed il serbatoio 13. According to some embodiments, (not shown in Figure 1) the inlet 2 is arranged along the duct 16, between the pressure source 15 (in particular, the joint 19) and the tank 13.

Secondo alcune forme di attuazione, il sistema 1 comprende un condotto 20, il quale è disposto tra la camera 4 principale e l'uscita 7 e presenta almeno un tratto 20' avente una sezione inferiore alla sezione del condotto 16. In particolare, la sezione del tratto 20' è inferiore di almeno 100 μπι rispetto alla sezione del condotto 16. Vantaggiosamente, il tratto 20' è disposto immediatamente a valle (vale a dire senza l'interposizione di ulteriori tratti o elementi) della camera 4 principale. According to some embodiments, the system 1 comprises a duct 20, which is arranged between the main chamber 4 and the outlet 7 and has at least one section 20 'having a section lower than the section of the duct 16. In particular, the section of the section 20 'is at least 100 μπι lower than the section of the duct 16. Advantageously, the section 20' is arranged immediately downstream (ie without the interposition of further sections or elements) of the main chamber 4.

Il tratto 20' presenta una larghezza inferiore a 150 μπι, una profondità inferiore a 110 μπι ed una lunghezza maggiore di 2 mm. Vantaggiosamente, il tratto 20' presenta una larghezza superiore a 100 μπι, una profondità superiore a 30 μπι, ed, in particolare, una lunghezza inferiore a 6 min. The 20 'section has a width of less than 150 μπι, a depth of less than 110 μπι and a length greater than 2 mm. Advantageously, the portion 20 'has a width greater than 100 μπι, a depth greater than 30 μπι, and, in particular, a length less than 6 min.

Secondo alcune forme di attuazione, il condotto 20 comprende un tratto 20'', il quale è disposto tra il tratto 20' e l'uscita 7 e presenta una sezione di diametro equivalente superiore a quella del tratto 20' (in particolare sostanzialmente uguale a quella del condotto 16). According to some embodiments, the duct 20 comprises a section 20 '', which is arranged between the section 20 'and the outlet 7 and has a section with an equivalent diameter greater than that of the section 20' (in particular substantially equal to that of duct 16).

In generale, secondo diverse forme d'attuazione, il sistema 1 comprende un sensore per rilevare direttamente o indirettamente quando il campione incomincia ad entrare nel condotto 20; un dispositivo di bloccaggio per bloccare l'afflusso del campione verso la camera principale; ed un gruppo di controllo collegato al sensore ed al dispositivo di bloccaggio per azionare il dispositivo di bloccaggio in funzione di quanto rilevato dal sensore (in particolare, quando il campione incomincia ad entrare nel condotto 20). In general, according to different embodiments, the system 1 comprises a sensor for detecting directly or indirectly when the sample begins to enter the duct 20; a locking device for blocking the flow of the sample to the main chamber; and a control unit connected to the sensor and to the locking device for operating the locking device according to what is detected by the sensor (in particular, when the sample begins to enter the duct 20).

Secondo alcune specifiche forme di attuazione, il sistema 1 comprende un sensore di pressione 21 per rilevare variazioni di pressione lungo il condotto 16 e/o in corrispondenza della camera 4 principale; ed un dispositivo di bloccaggio 22 per bloccare l'afflusso del campione verso la camera 4 principale. Il sistema 1 comprende, inoltre, un gruppo di controllo 23 collegato al sensore di pressione 21 ed al dispositivo di bloccaggio 22 per azionare il dispositivo di bloccaggio 22 in funzione della variazione di pressione rilevata. In particolare, in uso, il gruppo di controllo 23 aziona il dispositivo di bloccaggio 22 quando il sensore di pressione 21 rileva una pressione superiore ad una pressione di soglia determinata. According to some specific embodiments, the system 1 comprises a pressure sensor 21 for detecting pressure variations along the duct 16 and / or in correspondence with the main chamber 4; and a blocking device 22 for blocking the flow of the sample towards the main chamber 4. The system 1 further comprises a control unit 23 connected to the pressure sensor 21 and to the locking device 22 to actuate the locking device 22 according to the detected pressure variation. In particular, in use, the control unit 23 activates the locking device 22 when the pressure sensor 21 detects a pressure higher than a determined threshold pressure.

Secondo ulteriori specifiche forme d'attuazione, il sistema 1 comprende, in aggiunta o in alternativa al sensore di pressione 21, uno o più tra i seguenti elementi: un rilevatore ottico disposto in corrispondenza dell'entrata del tratto 20'; un rilevatore della conducibilità elettrica, il quale è disposto in corrispondenza dell'entrata del tratto 20' per rilevare variazioni di conducibilità dovute all'inizio del passaggio del campione; un rilevatore della permettività elettrica, il quale è disposto in corrispondenza dell'entrata del tratto 20' per rilevare variazioni di permettività dovute all'inizio del passaggio del campione; un rilevatore di resistenza termica, il quale è disposto in corrispondenza dell'entrata del tratto 20' per rilevare variazioni di resistenza termica dovute all'inizio del passaggio del campione; e un rilevatore di capacità termica, il quale è disposto in corrispondenza dell'entrata del tratto 20' per rilevare variazioni di capacità termica dovute all'inizio del passaggio del campione. In tutti questi casi, il gruppo di controllo 23 è collegato al/i rilevatore/i ed è atto ad azionare il dispositivo di bloccaggio 20 in funzione delle variazioni rilevate dal/i rilevatore/i. According to further specific embodiments, the system 1 comprises, in addition or as an alternative to the pressure sensor 21, one or more of the following elements: an optical detector arranged in correspondence with the inlet of the section 20 '; an electrical conductivity detector, which is arranged at the entrance of the section 20 'to detect variations in conductivity due to the beginning of the passage of the sample; an electrical permittivity detector, which is arranged at the entrance of the portion 20 'to detect variations in permittivity due to the beginning of the passage of the sample; a thermal resistance detector, which is arranged at the entrance of the section 20 'to detect variations in thermal resistance due to the beginning of the passage of the sample; and a heat capacity detector, which is arranged in correspondence with the inlet of the section 20 'to detect changes in heat capacity due to the beginning of the passage of the sample. In all these cases, the control unit 23 is connected to the detector (s) and is adapted to actuate the locking device 20 according to the variations detected by the detector (s).

Secondo alcune forme d'attuazione, il rilevatore ottico è un fotodiodo integrato oppure una telecamera esterna (eventualmente con sistema di ingrandimento dell'immagine) . According to some embodiments, the optical detector is an integrated photodiode or an external camera (possibly with image enlargement system).

Facendo particolare riferimento alla figura 23, il dispositivo di bloccaggio 22 comprende una valvola di sfiato 22' ed è, vantaggiosamente, disposto tra la sorgente di pressione 15 ed il serbatoio 13; quando il dispositivo di bloccaggio 22 viene azionato la valvola di sfiato viene aperta ed il getto d'aria proveniente dalla sorgente di pressione 15 sfiata verso l'esterno e la pressione lungo il condotto 16 cala. La valvola di sfiato 22' è idraulicamente collegata al condotto 16 mediante un giunto 22'' a T. With particular reference to Figure 23, the locking device 22 comprises a vent valve 22 'and is advantageously arranged between the pressure source 15 and the tank 13; when the locking device 22 is actuated, the vent valve is opened and the jet of air coming from the pressure source 15 is vented outwards and the pressure along the duct 16 drops. The relief valve 22 'is hydraulically connected to the duct 16 by means of a T-joint 22' '.

In particolare, il dispositivo di bloccaggio 22 è disposto tra il giunto 19 e la sorgente di pressione 15, specificamente a monte del sensore di pressione 21 rispetto alla direzione di alimentazione della pressione alla camera 4 principale. In particular, the locking device 22 is arranged between the joint 19 and the pressure source 15, specifically upstream of the pressure sensor 21 with respect to the direction of supply of the pressure to the main chamber 4.

Da quanto sopra esposto si desume che viene migliorato l'inserimento del campione nell'unità di separazione 3, riducendo il rischio che una parte rilevante del campione superi l'unità di separazione 3 stessa. From the above it can be deduced that the insertion of the sample into the separation unit 3 is improved, reducing the risk that a significant part of the sample exceeds the separation unit 3 itself.

Secondo forme di attuazione alternative, non è presente il dispositivo di bloccaggio 22; la funzione di bloccaggio viene svolta dalla valvola 9, la quale è collegata al gruppo di controllo 23. In altre parole, il gruppo di controllo 23, in uso, chiude la valvola 9 quando il sensore di pressione 21 rileva una pressione superiore alla pressione di soglia determinata. According to alternative embodiments, the locking device 22 is not present; the locking function is performed by the valve 9, which is connected to the control unit 23. In other words, the control unit 23, in use, closes the valve 9 when the pressure sensor 21 detects a pressure higher than the determined threshold.

Vantaggiosamente, il gruppo di controllo 23 è collegato alle valvole 9, 10, 11 e 12. Advantageously, the control unit 23 is connected to the valves 9, 10, 11 and 12.

Il collegamento tra il gruppo di controllo ed altri elementi (dispositivi, unità valvole ecc.) può essere realizzato tramite collegamenti elettrici tradizionali (cavi conduttori) ovvero tramite onde elettromagnetiche (ad esempio mediante onde radio, microonde ecc.). The connection between the control unit and other elements (devices, valve units, etc.) can be made by means of traditional electrical connections (conducting cables) or by means of electromagnetic waves (for example by means of radio waves, microwaves, etc.).

Secondo alcune forme di attuazione, il sistema 1 comprende un ingresso 24. Il serbatoio 14 è disposto tra l'ingresso 24 e la valvola 11 ed è atto a raccogliere il liquido di trasporto inserito attraverso l'ingresso 24. According to some embodiments, the system 1 comprises an inlet 24. The tank 14 is arranged between the inlet 24 and the valve 11 and is adapted to collect the transport liquid inserted through the inlet 24.

La valvola 11 è disposta tra l'ingresso 24 e la camera 5 di recupero ed è atta a collegare o isolare l'ingresso 24 e la camera 5 di recupero uno rispetto all'altra. In particolare, la valvola 11 è disposta tra il serbatoio 14 e la camera 5 di recupero ed è atta a collegare o isolare il serbatoio 14 e la camera 5 di recupero uno rispetto all'altra. The valve 11 is arranged between the inlet 24 and the recovery chamber 5 and is adapted to connect or isolate the inlet 24 and the recovery chamber 5 with respect to each other. In particular, the valve 11 is arranged between the tank 14 and the recovery chamber 5 and is adapted to connect or isolate the tank 14 and the recovery chamber 5 with respect to each other.

Secondo alcune forme di attuazione, il sistema 1 comprende una sorgente di pressione 25 per imporre una pressione dal serbatoio 14 verso la camera 5 di recupero. According to some embodiments, the system 1 comprises a pressure source 25 for imposing a pressure from the tank 14 towards the recovery chamber 5.

Vantaggiosamente, il serbatoio 14 è disposto tra la sorgente di pressione 25 e la valvola 11. In particolare, il sistema 1 comprende un condotto 26, il quale collega (vale dire permette il passaggio di fluido tra) la sorgente di pressione 25 e la camera 5 di recupero e lungo il quale sono disposti il serbatoio 14 e la valvola 13. Advantageously, the tank 14 is arranged between the pressure source 25 and the valve 11. In particular, the system 1 comprises a duct 26, which connects (that is, allows the passage of fluid between) the pressure source 25 and the chamber. 5 and along which the tank 14 and the valve 13 are arranged.

Secondo alcune forme d'attuazione, l'ingresso 24 è disposto lungo il condotto 26, in particolare tra la sorgente di pressione 25 ed il serbatoio 14. According to some embodiments, the inlet 24 is arranged along the duct 26, in particular between the pressure source 25 and the tank 14.

Facendo particolare riferimento alla figura 3, il sistema 1 comprende un dispositivo di vibrazione 17a, il quale è analogo al dispositivo di vibrazione 17 ed è atto a fare variare in modo oscillante la pressione almeno in una zona della camera 5 di recupero. In questo modo, le particelle CI del tipo determinato presenti all'interno della camera 5 di recupero vengono fatte vibrare ed il deflusso delle particelle CI del tipo determinato stesso dalla camera 5 di recupero verso l'uscita viene migliorato. Le particelle CI presentano una minore tendenza a raggrupparsi o aderire alle pareti della camera 5 di recupero e/o di un condotto 27 che collega (vale dire permette il passaggio di fluido tra) la camera 5 di recupero all'uscita 8. La valvola 12 è disposta tra la camera 5 di recupero e l'uscita 8. With particular reference to Figure 3, the system 1 comprises a vibration device 17a, which is similar to the vibration device 17 and is adapted to cause the pressure to vary in an oscillating manner at least in one area of the recovery chamber 5. In this way, the particles C1 of the determined type present inside the recovery chamber 5 are made to vibrate and the outflow of the particles C1 of the determined type from the recovery chamber 5 towards the outlet is improved. The particles C1 have a lesser tendency to group or adhere to the walls of the recovery chamber 5 and / or of a duct 27 which connects (ie allows the passage of fluid between) the recovery chamber 5 to the outlet 8. The valve 12 it is arranged between the recovery chamber 5 and the outlet 8.

Vantaggiosamente, il dispositivo di vibrazione 17a comprende una pompa a diaframma 18a collegata, in particolare, mediante un giunto 19a a T, al condotto 26. Advantageously, the vibration device 17a comprises a diaphragm pump 18a connected, in particular, by means of a T-joint 19a, to the duct 26.

Secondo forme d'attuazione non illustrate, il sistema per il riempimento della camera 5 è analogo a quello della camera 4. Pertanto, in tali casi, un dispositivo di bloccaggio (non illustrato) è disposto tra la sorgente di pressione 25 ed il serbatoio 14: inoltre, uno o più sensori e/o rilevatori (non illustrati) analoghi a quelli sopra descritti con riferimento alla camera 4 principale sono disposti in corrispondenza dell'entrata del condotto 27 o in altre posizioni adatte. According to embodiments not illustrated, the system for filling the chamber 5 is similar to that of the chamber 4. Therefore, in such cases, a locking device (not illustrated) is arranged between the pressure source 25 and the tank 14. Furthermore, one or more sensors and / or detectors (not shown) similar to those described above with reference to the main chamber 4 are arranged at the entrance to the duct 27 or in other suitable positions.

Secondo non illustrate forme di attuazione, il sistema 1 comprende un rilevatore (in particolare ottico o impedenziometrico o ad ultrasuoni), il quale è disposto in corrispondenza dell'uscita 8, è collegato al gruppo di controllo 23 ed è atto a rilevare un liquido che esce dall'uscita 8. Il gruppo di controllo 23 è atto a regolare l'apertura della valvola 11 e/o 12 in funzione di quanto rilevato dal rilevatore ottico. In particolare, in uso, quando il rilevatore ottico rileva almeno una goccia di liquido di trasporto (nel quale è presente almeno parte delle particelle CI del tipo determinato) il gruppo di controllo 23 aziona una valvola di sfiato che porta la pressione di attuazione a zero bloccando il flusso del liquido. According to embodiments not illustrated, the system 1 comprises a detector (in particular optical or impedance meter or ultrasound), which is arranged in correspondence with the output 8, is connected to the control unit 23 and is able to detect a liquid which exits from output 8. The control unit 23 is adapted to regulate the opening of the valve 11 and / or 12 according to what is detected by the optical detector. In particular, in use, when the optical detector detects at least one drop of transport liquid (in which at least part of the particles C1 of the given type is present) the control unit 23 activates a vent valve which brings the actuation pressure to zero. blocking the flow of liquid.

In aggiunta o in alternativa, quando il rilevatore ottico rileva almeno una goccia di liquido di trasporto (nel quale è presente almeno parte delle particelle CI del tipo determinato) il gruppo di controllo 23 chiude la valvola 12 e/o la valvola 11. In addition or alternatively, when the optical detector detects at least one drop of transport liquid (in which at least part of the particles C1 of the determined type is present) the control unit 23 closes the valve 12 and / or the valve 11.

In questo modo, è possibile ottenere le particelle CI in un volume molto piccolo di liquido. Ciò facilita le fasi di analisi successive. In this way, it is possible to obtain the CI particles in a very small volume of liquid. This facilitates the subsequent analysis steps.

La figura 2 illustra una forma di attuazione del sistema 1 che si differenzia dal sistema 1 della figura 1 per la posizione del condotto 26 rispetto alla camera di recupero 5 e per il fatto di comprendere un condotto 28, il quale collega la camera 5 di recupero all'uscita 7 (o ad un'ulteriore uscita non illustrata) e lungo il quale è disposta una valvola 29, collegata al gruppo di controllo 23. Il condotto 26 si raccorda alla camera 5 di recupero tra i condotti 27 e 28. In particolare, il condotto 26 si raccorda alla camera 5 di recupero sostanzialmente di fronte al canale 6. Figure 2 illustrates an embodiment of the system 1 which differs from the system 1 of Figure 1 for the position of the duct 26 with respect to the recovery chamber 5 and for the fact that it comprises a duct 28, which connects the recovery chamber 5 at the outlet 7 (or to a further outlet not shown) and along which a valve 29 is arranged, connected to the control unit 23. The duct 26 is connected to the recovery chamber 5 between the ducts 27 and 28. In particular , the duct 26 is connected to the recovery chamber 5 substantially in front of the duct 6.

Facendo particolare riferimento alle figure 14 e 15, secondo alcune forme di attuazione, almeno una tra le valvole 9, 10, 11 e 12 (in particolare ciascuna valvola 9, 10 11 e 12) presenta una particolare struttura sotto descritta con riferimento ad una particolare valvola V (in altre parole, una o più delle valvole 9, 10, 11 e 12 presenta la struttura della valvola V sotto descritta). With particular reference to figures 14 and 15, according to some embodiments, at least one of the valves 9, 10, 11 and 12 (in particular each valve 9, 10, 11 and 12) has a particular structure described below with reference to a particular valve V (in other words, one or more of the valves 9, 10, 11 and 12 has the structure of the valve V described below).

Secondo un secondo aspetto della presente invenzione, viene fornita una valvola V. According to a second aspect of the present invention, a V valve is provided.

La valvola V è dotata di un elemento di chiusura 30, il quale comprende (in particolare, è costituito di) un materiale sostanzialmente elastico, è atto a passare tra una posizione di bloccaggio (illustrata nella figura 14), in cui l'elemento di chiusura 30 separa due tratti 31 e 32 di un rispettivo condotto, ed una posizione di apertura (illustrata nella figura 15), in cui l'elemento di chiusura 30 è disposto in modo che sia permesso il passaggio di fluido tra i tratti 31 e 32. The valve V is equipped with a closing element 30, which comprises (in particular, is made of) a substantially elastic material, is able to pass between a locking position (illustrated in Figure 14), in which the closing element closure 30 separates two portions 31 and 32 of a respective duct, and an opening position (illustrated in Figure 15), in which the closure element 30 is arranged so that the passage of fluid between portions 31 and 32 is allowed .

La valvola V comprende un setto 33, il quale è disposto tra i due tratti 31 e 32. Quando l'elemento di chiusura 30 è disposto nella posizione di bloccaggio, l'elemento di chiusura 30 stesso è a contatto con il setto 33 in modo da separare i tratti 31 e 32. Quando l'elemento di chiusura 30 è disposto nella posizione di apertura, l'elemento di chiusura 30 stesso è distanziato dal setto 33 in modo da permettere il passaggio di fluido tra i tratti 31 e 32. The valve V comprises a septum 33, which is arranged between the two portions 31 and 32. When the closing element 30 is arranged in the locking position, the closing element 30 itself is in contact with the septum 33 in a manner to separate the sections 31 and 32. When the closing element 30 is arranged in the open position, the closing element 30 itself is spaced from the baffle 33 so as to allow the passage of fluid between the sections 31 and 32.

La valvola V comprende, inoltre, un rispettivo elemento di pressione meccanico 34, il quale spinge l'elemento di chiusura 30 verso i tratti 31 e 32 (in particolare, verso il setto 33) in modo da mantenere l'elemento di chiusura 30 stesso nella posizione di bloccaggio. Vantaggiosamente l'elemento di pressione meccanico 34 comprende (in particolare, è) una molla, la quale si comprime quando l'elemento di chiusura 34 passa dalla posizione di bloccaggio alla posizione di apertura e si estende quando l'elemento di chiusura 34 passa dalla posizione di apertura alla posizione di bloccaggio. The valve V also comprises a respective mechanical pressure element 34, which pushes the closing element 30 towards the portions 31 and 32 (in particular, towards the septum 33) so as to maintain the closing element 30 itself. in the locked position. Advantageously, the mechanical pressure element 34 comprises (in particular, is) a spring, which compresses when the closure element 34 passes from the locking position to the open position and extends when the closure element 34 passes from the open position to locked position.

La valvola V comprende un attuatore fluidodinamico 35, il quale a sua volta comprende un ugello attuatore 36 dotato di un elemento cavo 37, che alloggia l'elemento di pressione meccanico 34. L'elemento cavo 37 presenta un canale interno 38 ed un'estremità aperta (in particolare dotata di un foro 39 attuatore) disposta a contatto dell'elemento di chiusura 34. The valve V comprises a fluid-dynamic actuator 35, which in turn comprises an actuator nozzle 36 equipped with a hollow element 37, which houses the mechanical pressure element 34. The hollow element 37 has an internal channel 38 and an end open (in particular equipped with an actuator hole 39) arranged in contact with the closing element 34.

L'attuatore fluidodinamico 35 comprende un elemento di tenuta 40, il quale è atto a scorrere a tenuta di fluido lungo il canale interno 38 ed è disposto in corrispondenza del foro 39 attuatore a contatto dell'elemento di pressione meccanico. The fluid-dynamic actuator 35 comprises a sealing element 40, which is able to slide in a fluid-tight manner along the internal channel 38 and is arranged in correspondence with the actuator hole 39 in contact with the mechanical pressure element.

L'attuatore fluidodinamico 35 comprende, inoltre, un'unità aspirante 41, la quale, a sua volta, comprende un condotto 42 che collega l'ugello attuatore 36 ad una sorgente di aspirazione 43 (illustrata nella figura 3). The fluid-dynamic actuator 35 also comprises a suction unit 41, which, in turn, comprises a duct 42 which connects the actuator nozzle 36 to a suction source 43 (illustrated in Figure 3).

In uso, quando l'unità aspirante 41 viene azionata, l'elemento di tenuta 30 viene aspirato e spinge l'elemento di tenuta 40 che scorre all'interno del canale interno 38 in modo da comprimere l'elemento di pressione meccanico 34. Tale depressione allontana l'elemento di chiusura 30 dal setto 33 in modo che l'elemento di chiusura 30 raggiunga la posizione di apertura. Quando l'unità aspirante viene disattivata, l'elemento di pressione meccanico 34 spinge l'elemento di tenuta 40 verso l'esterno attraverso il foro 39 attuatore. L'elemento di tenuta 40, a sua volta, spinge l'elemento di chiusura 30 contro il setto 33 in modo che l'elemento di chiusura 30 stesso raggiunga la posizione di bloccaggio . In use, when the suction unit 41 is operated, the sealing element 30 is sucked in and pushes the sealing element 40 which slides inside the internal channel 38 so as to compress the mechanical pressure element 34. Such depression moves the closing element 30 away from the septum 33 so that the closing element 30 reaches the open position. When the suction unit is turned off, the mechanical pressure element 34 pushes the sealing element 40 outwardly through the actuator hole 39. The sealing element 40, in turn, pushes the closing element 30 against the septum 33 so that the closing element 30 itself reaches the locking position.

L'elemento di chiusura 30 (anche illustrato nella figura 7) presenta una porzione a membrana 44 ed un rilievo 45 che si estende lungo un bordo perimetrale della porzione a membrana 44. In altre parole, l'elemento di chiusura 30 presenta un spessore maggiore in corrispondenza del bordo perimetrale. Ciò permette di migliorare la resistenza meccanica della membrana e la tenuta di fluido tra l'elemento 30 di chiusura e l'ugello attuatore 36 (in particolare l'elemento cavo 37). Il rilievo 45 presenta una forma anulare. The closure element 30 (also illustrated in Figure 7) has a membrane portion 44 and a relief 45 which extends along a perimeter edge of the membrane portion 44. In other words, the closure element 30 has a greater thickness at the perimeter edge. This allows to improve the mechanical resistance of the membrane and the fluid tightness between the closing element 30 and the actuator nozzle 36 (in particular the hollow element 37). Relief 45 has an annular shape.

Secondo specifiche forme di attuazione la porzione a membrana 44 presenta un forma sostanzialmente cilindrica; in questo caso il rilievo 45 presenta la forma di una anello circolare. According to specific embodiments, the membrane portion 44 has a substantially cylindrical shape; in this case the relief 45 has the shape of a circular ring.

Secondo alcune forme di attuazione, l'elemento di chiusura 30 è costituito da un unico materiale elastomerico (vale a dire un elastomero) oppure da una combinazione (ad esempio una miscela) di più materiali elastomerici tra loro differenti. According to some embodiments, the closing element 30 is constituted by a single elastomeric material (ie an elastomer) or by a combination (for example a mixture) of several elastomeric materials which are different from each other.

Vantaggiosamente, l'elastomero comprende (in particolare consiste di) un silicone, in particolare una gomma siliconica. Secondo alcune forme di attuazione, il silicone presenta la seguente formula: Advantageously, the elastomer comprises (in particular consists of) a silicone, in particular a silicone rubber. According to some embodiments, silicone has the following formula:

[R2SiO]n[R2SiO] n

in cui n è un numero intero maggiore di 4, ciascun R è scelto, indipendentemente dagli altri, nel gruppo consistente in: metile, etile, propile. where n is an integer greater than 4, each R is chosen, independently of the others, from the group consisting of: methyl, ethyl, propyl.

Secondo alcune forme di attuazione l'elastomero comprende (ovvero è costituito da) un solo silicone o, alternativamente, più siliconi tra loro differenti. According to some embodiments, the elastomer comprises (ie consists of) a single silicone or, alternatively, several silicones that are different from each other.

Secondo alcune forme di attuazione, al disotto dell'ugello attuatore 36 è disposto un elemento di pressione meccanico 46 (in particolare una molla) per spingere l'ugello attuatore 36 stesso contro l'elemento di chiusura 30. According to some embodiments, a mechanical pressure element 46 (in particular a spring) is arranged below the actuator nozzle 36 to push the actuator nozzle 36 against the closure element 30.

Secondo una variante, 1'attuatore fluidodinamico 35 presenta la struttura illustrata nelle figure da 24 a 26, in cui l'elemento di tenuta 40 comprende due componenti tra loro smontabili 40' e 40''. According to a variant, the fluid-dynamic actuator 35 has the structure illustrated in Figures 24 to 26, in which the sealing element 40 comprises two mutually removable components 40 'and 40' '.

È importante sottolineare, che la particolare struttura della valvola V presenta rilevanti vantaggi rispetto allo stato dell'arte. It is important to underline that the particular structure of the valve V has significant advantages with respect to the state of the art.

Un primo vantaggio consiste nel minore rischio di contaminazione gassosa (in particolare di aria) del campione. A questo riguardo, si noti che solitamente l'elemento di chiusura 30 è parzialmente permeabile ai gas e che nella soluzione proposta non è necessario alimentare un getto d'aria per mantenere l'elemento di chiusura 30 nella posizione di bloccaggio (alimentando il getto d'aria, parte del getto d'aria entrerebbe nel condotto). A first advantage consists in the lower risk of gaseous contamination (in particular of air) of the sample. In this regard, it should be noted that usually the closing element 30 is partially permeable to gases and that in the proposed solution it is not necessary to supply an air jet to keep the closing element 30 in the locking position (feeding the jet d air, part of the air jet would enter the duct).

Un secondo vantaggio consiste nella riduzione delle perdite di carico quando la sorgente di aspirazione è in funzione (le parti sono tra loro accoppiate in modo da presentare un'elevata tenuta di fluido). A second advantage consists in the reduction of the pressure drops when the suction source is in operation (the parts are coupled together so as to present a high fluid tightness).

Nella forma d'attuazione della figura 3 le valvole 9 e 11 sono illustrate schematicamente e presentano sostanzialmente la medesima struttura della valvola V sopra descritta. In questo caso, vantaggiosamente, le valvole 9 e 11 sono collegate, ciascuna, ad una rispettiva sorgente di aspirazione 43. In the embodiment of Figure 3, the valves 9 and 11 are schematically illustrated and substantially have the same structure as the valve V described above. In this case, advantageously, the valves 9 and 11 are each connected to a respective suction source 43.

Secondo alcune non illustrate forme d'attuazione, il sistema 1 non comprende le sorgenti di pressione 15 e 25. According to some embodiments not illustrated, the system 1 does not include the pressure sources 15 and 25.

In questo caso le valvole 9 e/o 11, invece di essere delle singole valvole comprendono una pluralità di valvole disposte in successione lungo il condotto 16 e/o 26. In uso, le valvole disposte in successione vengono aperte e chiuse in sequenza per alimentare il campione e/o il liquido di trasporto all'unità di separazione 3. In questo modo, le valvole disposte in successione lavorano in maniera analoga ad una pompa peristaltica. In this case the valves 9 and / or 11, instead of being individual valves, comprise a plurality of valves arranged in succession along the duct 16 and / or 26. In use, the valves arranged in succession are opened and closed in sequence to supply the sample and / or the transport liquid to the separation unit 3. In this way, the valves arranged in succession work in a similar way to a peristaltic pump.

Si noti che per lavorare come una pompa peristaltica normalmente sono necessarie almeno tre valvole disposte in successione . Note that at least three valves arranged in succession are normally required to work as a peristaltic pump.

Secondo alcune forme d'attuazione, tuttavia, le valvole 9 e/o 11 comprendono (in particolare, consistono di), ciascuna, due valvole disposte in successione. In questi casi, tali valvole vengono azionate in combinazione con le valvole 10 e/o 12 per lavorare come una pompa peristaltica . According to some embodiments, however, the valves 9 and / or 11 comprise (in particular, consist of), each, two valves arranged in succession. In these cases, such valves are operated in combination with valves 10 and / or 12 to work as a peristaltic pump.

Queste forme d'attuazione, presentano alcuni vantaggi: non necessitano dell'integrazione di ingombranti sorgenti di pressione; permettono di regolare in modo molto preciso la quantità di fluido che viene alimentata all'unità di separazione 3. These forms of implementation have some advantages: they do not require the integration of bulky pressure sources; allow to regulate very precisely the quantity of fluid that is fed to the separation unit 3.

In accordo con la forma di attuazione illustrata nella figura 3, l'unità di separazione 3 comprende una parte di un sistema di dielettroforesi. In accordance with the embodiment illustrated in Figure 3, the separation unit 3 comprises a part of a dielectrophoresis system.

In particolare, il sistema 1 (specificamente il sistema di dielettroforesi) comprende un rilevatore ottico 47. Il gruppo di controllo 23 è collegato al rilevatore ottico 47 e all'unità di separazione 3. Vantaggiosamente, il rilevatore ottico 46 comprende una telecamera 48. In uso, il gruppo di controllo 23 aziona diversi componenti attivi delle camere 4 e 5 in funzione di quanto rilevato dal rilevatore ottico 47. In particular, the system 1 (specifically the dielectrophoresis system) comprises an optical detector 47. The control unit 23 is connected to the optical detector 47 and to the separation unit 3. Advantageously, the optical detector 46 comprises a camera 48. use, the control unit 23 operates various active components of the chambers 4 and 5 as a function of what is detected by the optical detector 47.

Secondo alcune forme di attuazione, l'unità di separazione 3 comprende, inoltre, un interfaccia operatore 49 (Human/Machine Interface) . Vantaggiosamente, l'interfaccia operatore 49 comprende un personal computer. According to some embodiments, the separation unit 3 further comprises an operator interface 49 (Human / Machine Interface). Advantageously, the operator interface 49 comprises a personal computer.

Secondo alcune forme di attuazione, il sistema di dielettroforesi e/o il suo funzionamento è come descritto in almeno una delle domande di brevetto W00069565, W02007010367, W02007049120, il cui contenuto viene qui integralmente richiamato per completezza di descrizione (incorporato per riferimento). According to some embodiments, the dielectrophoresis system and / or its operation is as described in at least one of the patent applications W00069565, WO2007010367, WO2007049120, the content of which is referred to in its entirety for the sake of completeness of description (incorporated by reference).

Secondo alcune forme di attuazione, il sistema 1 (figura 2) comprende un gruppo di raffreddamento 50, il quale è atto a raffreddare almeno parte dell'unità di separazione 3, in particolare la camera 4 principale e la camera 5 di recupero. According to some embodiments, the system 1 (Figure 2) comprises a cooling unit 50, which is adapted to cool at least part of the separation unit 3, in particular the main chamber 4 and the recovery chamber 5.

Il gruppo di raffreddamento 50, secondo alcune forme di attuazione, è un Peltier e comprende un piatto di raffreddamento 51 presentante una superficie attiva 52 atta ad assorbire il calore dall'unità di separazione 3; ed una superficie di scarico 53 per cedere calore. Vantaggiosamente, la superficie attiva 52 presenta una estensione minore della superficie di scarico 53. The cooling unit 50, according to some embodiments, is a Peltier and comprises a cooling plate 51 having an active surface 52 suitable for absorbing the heat from the separation unit 3; and a discharge surface 53 for releasing heat. Advantageously, the active surface 52 has a smaller extension than the unloading surface 53.

Secondo alcune forme d'attuazione, tra la superficie attiva 52 e l'unità di separazione 3 è interposto un tappetino (di per sé noto) di un materiale polimerico conduttore di calore. According to some embodiments, a mat (known per se) of a heat conducting polymeric material is interposed between the active surface 52 and the separation unit 3.

Il gruppo di raffreddamento 50 comprende, inoltre, un piatto di trasferimento calore 54 collegato ad un circuito 55 di condizionamento che funge da dispositivo scambiatore di calore. The cooling unit 50 further comprises a heat transfer plate 54 connected to a conditioning circuit 55 which acts as a heat exchanger device.

Il circuito 55 comprende due condotti 56; un radiatore 57, il quale è disposto tra i due condotti 56; una pluralità di ventole 58 per raffreddare un liquido di condizionamento mentre scorre all'interno del radiatore 57; ed una pompa 59 per fare scorrere il liquido di condizionamento lungo i condotti 56 ed attraverso il radiatore 57. The circuit 55 comprises two conduits 56; a radiator 57, which is arranged between the two ducts 56; a plurality of fans 58 for cooling a conditioning liquid as it flows within the radiator 57; and a pump 59 for flowing the conditioning liquid along the conduits 56 and through the radiator 57.

Secondo la forma d'attuazione illustrata nella figura 3, il sistema 1 comprende almeno un (nel caso specifico quattro) elemento di pressione meccanico 60 (in particolare, una molla) per spingere il gruppo di raffreddamento 50 verso la camera 4 principale e la camera 5 di recupero. According to the embodiment illustrated in Figure 3, the system 1 comprises at least one (in the specific case four) mechanical pressure element 60 (in particular, a spring) for pushing the cooling unit 50 towards the main chamber 4 and the chamber 5 recovery.

Con particolare riferimento alle figure 16, 18, 13 e 3, il sistema 1 comprende, inoltre, due ugelli di alimentazione pressione 61 e 61a disposti tra due tratti del condotto 16 e del condotto 26, rispettivamente. With particular reference to figures 16, 18, 13 and 3, the system 1 further comprises two pressure supply nozzles 61 and 61a arranged between two portions of the duct 16 and of the duct 26, respectively.

L'ugello di alimentazione pressione 61 comprende un corpo cavo 62, il quale è collegato ad un dispositivo di pressione 64, e presenta un foro di alimentazione pressione 63 disposto ad una estremità opposta rispetto al dispositivo di pressione 64. The pressure supply nozzle 61 comprises a hollow body 62, which is connected to a pressure device 64, and has a pressure supply hole 63 arranged at an opposite end with respect to the pressure device 64.

Il dispositivo di pressione 64 comprende un'unità di pressione 65, la quale, a sua volta, comprende la sorgente di pressione 15 ed un condotto (in particolare, un primo tratto del condotto 16) il quale collega la sorgente di pressione 15 all'ugello di alimentazione pressione 61. The pressure device 64 comprises a pressure unit 65, which, in turn, comprises the pressure source 15 and a duct (in particular, a first section of the duct 16) which connects the pressure source 15 to the pressure supply nozzle 61.

Tra il foro di alimentazione pressione 63 ed un secondo tratto del condotto 16 è disposto un anello di tenuta 66 (illustrato nelle figure 7, 16) comprendente (in particolare, consistente di) un materiale sostanzialmente elastico . Between the pressure supply hole 63 and a second portion of the duct 16 there is a sealing ring 66 (illustrated in Figures 7, 16) comprising (in particular, consisting of) a substantially elastic material.

Vantaggiosamente il materiale sostanzialmente elastico è definito come sopra descritto con riferimento all'elemento di chiusura 30. Advantageously, the substantially elastic material is defined as described above with reference to the closure element 30.

Secondo alcune forme d'attuazione, l'anello di tenuta 66 è di forma sostanzialmente circolare e presenta un foro 67 sostanzialmente centrale; una porzione interna che delimita il foro 67; ed una porzione periferica di spessore maggiore rispetto ad una porzione interna. According to some embodiments, the sealing ring 66 is substantially circular in shape and has a substantially central hole 67; an internal portion that delimits the hole 67; and a peripheral portion of greater thickness than an internal portion.

Secondo alcune forme di attuazione, il sistema 1 comprende, inoltre almeno un elemento di pressione meccanico 68 (in particolare, una molla), il quale è disposto in modo da spingere l'ugello di alimentazione pressione 63 contro l'anello di tenuta 66. In questo modo si ottiene una minore dispersione della pressione (vale a dire una migliore tenuta) tra l'ugello di alimentazione pressione 63, l'anello di tenuta 66 ed il secondo tratto del condotto 16. L'elemento di pressione meccanico 68 ha l'importante funzione di compensare eventuali mancanze di planarità del dispositivo e di regolare le forze di contatto applicate. According to some embodiments, the system 1 further comprises at least one mechanical pressure element 68 (in particular, a spring), which is arranged so as to push the pressure supply nozzle 63 against the sealing ring 66. In this way, less pressure dispersion is obtained (i.e. a better seal) between the pressure supply nozzle 63, the sealing ring 66 and the second section of the duct 16. The mechanical pressure element 68 has the important function of compensating for any lack of planarity of the device and of regulating the contact forces applied.

Secondo vantaggiose forme di attuazione, l'ugello di alimentazione pressione 61a presenta la medesima struttura dell'ugello di alimentazione pressione 61, è collegato al dispositivo di pressione 64 ed è sospinto verso un rispettivo anello di tenuta 66a da un relativo elemento di pressione meccanico 68a. According to advantageous embodiments, the pressure supply nozzle 61a has the same structure as the pressure supply nozzle 61, is connected to the pressure device 64 and is pushed towards a respective sealing ring 66a by a relative mechanical pressure element 68a .

Il sistema 1 comprende, inoltre, una sede 69 (parzialmente illustrata nella figura 13), la quale è atta ad alloggiare un raccoglitore asportabile (ad esempio una provetta), di tipo di per sé noto e non illustrato, ed è disposta in corrispondenza dell'uscita 8. The system 1 also comprises a seat 69 (partially illustrated in Figure 13), which is adapted to house a removable collector (for example a test tube), of a per se known type and not illustrated, and is arranged in correspondence with the 'exit 8.

Tra il condotto 27 e la sede 69 è disposto un anello di tenuta 70, il quale è atto a garantire una minore dispersione (vale a dire una migliore tenuta) tra il condotto 27 e la sede 69. L'anello di tenuta 70 comprende (in particolare, consiste di) un materiale sostanzialmente elastico. Between the duct 27 and the seat 69 there is a sealing ring 70, which is able to ensure less dispersion (that is, a better seal) between the duct 27 and the seat 69. The sealing ring 70 comprises ( in particular, it consists of) a substantially elastic material.

Vantaggiosamente il materiale sostanzialmente elastico è definito come sopra descritto con riferimento all'elemento di chiusura 30. Advantageously, the substantially elastic material is defined as described above with reference to the closure element 30.

Secondo alcune forme d'attuazione, l'anello di tenuta 70 è di forma sostanzialmente circolare e presenta un foro 71 sostanzialmente centrale; una porzione interna che delimita il foro 71; ed una porzione periferica di spessore maggiore rispetto ad una porzione interna. According to some embodiments, the sealing ring 70 is substantially circular in shape and has a substantially central hole 71; an internal portion that delimits the hole 71; and a peripheral portion of greater thickness than an internal portion.

Secondo alcune forme di attuazione il sistema 1 comprende due porzioni tra loro separabili: un apparato 72 sostanzialmente fisso (una forma d'attuazione dell'apparato 72 è parzialmente illustra nel figure 10 ed 11) ed un dispositivo 73 (una forma d'attuazione del dispositivo 73 è illustrata dall'alto nella figura 21 ed in esploso nella figura 4) According to some embodiments, the system 1 comprises two mutually separable portions: a substantially fixed apparatus 72 (an embodiment of the apparatus 72 is partially illustrated in Figures 10 and 11) and a device 73 (an embodiment of the device 73 is shown from above in figure 21 and exploded in figure 4)

In uso, il sistema 1 viene utilizzato secondo il metodo sotto descritto. In use, system 1 is used according to the method described below.

Metodo Method

Secondo un terzo aspetto della presente invenzione, viene fornito un metodo per l'isolamento di particelle CI di almeno un tipo determinato da un campione mediante un sistema microfluidico . Il sistema microfluidico è il sistema 1 od un sistema microfluidico simile al sistema 1; in ogni caso, per semplicità nella successiva descrizione del metodo il sistema microfluidico e le sue parti verranno identificate con i numeri di riferimento utilizzati sopra per identificare il sistema 1 e parti analoghe o identiche, rispettivamente . According to a third aspect of the present invention, a method is provided for isolating C1 particles of at least one determined type from a sample by means of a microfluidic system. The microfluidic system is system 1 or a microfluidic system similar to system 1; in any case, for simplicity in the subsequent description of the method, the microfluidic system and its parts will be identified with the reference numbers used above to identify the system 1 and similar or identical parts, respectively.

Il metodo comprende una fase di inserimento del campione in un sistema 1 attraverso un ingresso 2 del sistema 1; una fase di separazione, durante la quale almeno parte delle particelle CI del tipo determinato vengono separate da ulteriori particelle C2 all'interno di un'unità di separazione 3 del sistema 1; una prima fase di alimentazione, la quale è almeno parzialmente precedente alla fase di separazione e durante la quale almeno parte del campione viene alimentata all'unità di separazione 3 (la prima fase di alimentazione è schematicamente illustrata nelle figure 19e-19i); ed una fase di recupero, la quale è almeno parzialmente successiva alla fase di separazione e durante la quale almeno parte delle particelle CI del tipo determinato separate in modo sostanzialmente selettivo defluiscono dall'unità di separazione 3 attraverso un'uscita 8 del sistema 1 (la fase di recupero è schematicamente illustrata nelle figure 20c e 2Od). The method comprises a step of inserting the sample into a system 1 through an inlet 2 of the system 1; a separation step, during which at least part of the particles C1 of the given type are separated from further particles C2 inside a separation unit 3 of system 1; a first feeding step, which is at least partially prior to the separation step and during which at least part of the sample is fed to the separation unit 3 (the first feeding step is schematically illustrated in Figures 19e-19i); and a recovery step, which is at least partially subsequent to the separation step and during which at least part of the particles C1 of the determined type separated in a substantially selectively way flow from the separation unit 3 through an outlet 8 of the system 1 (the recovery phase is schematically illustrated in Figures 20c and 2Od).

Secondo alcune forme d'attuazione, il sistema 1 comprende una valvola 9 disposta tra l'ingresso 2 e l'unità di separazione 3; ed una valvola 12 disposta tra l'uscita 8 e l'unità di separazione 3. Durante la fase di separazione, le valvole 9 e 12 vengono mantenute chiuse. According to some embodiments, the system 1 comprises a valve 9 arranged between the inlet 2 and the separation unit 3; and a valve 12 arranged between the outlet 8 and the separation unit 3. During the separation step, the valves 9 and 12 are kept closed.

In particolare, il sistema 1 comprende una valvola disposta tra ciascuna apertura (ad esempio ingressi e/o uscite) del sistema 1 verso l'esterno e l'unità di separazione 3. Durante la fase di separazione, ciascuna di queste valvole viene mantenuta chiusa. In particular, the system 1 comprises a valve arranged between each opening (for example inlets and / or outlets) of the system 1 to the outside and the separation unit 3. During the separation step, each of these valves is kept closed .

Secondo alcune forme di attuazione, la fase di recupero è completamente successiva alla fase di separazione. According to some embodiments, the recovery phase is completely subsequent to the separation phase.

Secondo alcune forme d'attuazione, la fase di separazione è completamente successiva alla prima fase di alimentazione. According to some embodiments, the separation phase is completely subsequent to the first feeding phase.

Secondo alcune forme d'attuazione, durante la fase di separazione, le particelle CI del tipo determinato vengono trasferite da una camera 4 principale ad una camera 5 di recupero dell'unità di separazione 3 in modo sostanzialmente selettivo rispetto ad ulteriori particelle C2 del campione (il termine della fase di separazione è illustrato nella figura 20a). According to some embodiments, during the separation step, the particles C1 of the given type are transferred from a main chamber 4 to a recovery chamber 5 of the separation unit 3 in a substantially selective manner with respect to further particles C2 of the sample ( the end of the separation step is illustrated in Figure 20a).

Secondo alcune forme di attuazione, durante la fase di separazione, utilizzando un sistema come descritto in figura 2, le particelle CI di più tipi determinati vengono trasferite da una camera principale 4 ad una particolare zona della camera di recupero 5 isolata tramite resistenza fluidiche dal resto della camera di recupero. According to some embodiments, during the separation phase, using a system as described in Figure 2, the particles C1 of several determined types are transferred from a main chamber 4 to a particular area of the recovery chamber 5 isolated by fluidic resistance from the rest of the recovery chamber.

Un'uscita 7 ed un'uscita 8 del sistema 1 sono collegate alla camera 4 principale ed alla camera 5 di recupero, rispettivamente. An output 7 and an output 8 of the system 1 are connected to the main chamber 4 and to the recovery chamber 5, respectively.

Vantaggiosamente, il sistema 1 comprende la valvola 9, la quale è disposta a monte della camera 4 principale; una valvola 10 disposta a valle della camera 4 principale; una valvola 11 disposta a monte della camera 5 di recupero; la valvola 12 disposta a valle della camera 5 di recupero. Durante la fase di separazione, le valvole 9, 10, 11, 12 sono chiuse, in particolare in modo da isolare la camera 4 principale e la camera 5 di recupero rispetto all'esterno. Advantageously, the system 1 comprises the valve 9, which is arranged upstream of the main chamber 4; a valve 10 arranged downstream of the main chamber 4; a valve 11 arranged upstream of the recovery chamber 5; the valve 12 arranged downstream of the recovery chamber 5. During the separation step, the valves 9, 10, 11, 12 are closed, in particular so as to isolate the main chamber 4 and the recovery chamber 5 from the outside.

Il metodo comprende, inoltre, la prima fase di alimentazione, la quale è almeno parzialmente precedente alla fase di separazione e durante la quale almeno parte del campione viene alimentata nella camera 4 principale (la prima fase di alimentazione è schematicamente illustrata nelle figure 19e-19i); ed una seconda fase di alimentazione, la quale è almeno parzialmente precedente alla fase di separazione e durante la quale del liquido di trasporto viene alimentato alla camera 5 di recupero (la seconda fase di alimentazione è illustrata nelle fiqure 19a-19d). The method also comprises the first feeding step, which is at least partially prior to the separation step and during which at least part of the sample is fed into the main chamber 4 (the first feeding step is schematically illustrated in Figures 19e-19i ); and a second feeding step, which is at least partially prior to the separation step and during which some transport liquid is fed to the recovery chamber 5 (the second feeding step is illustrated in Figures 19a-19d).

Il metodo comprende, inoltre, la fase di recupero, durante la quale il liquido di trasporto assieme ad almeno parte delle particelle CI del tipo determinato defluiscono dalla camera 5 di recupero attraverso l'uscita 8 (la fase di recupero è schematicamente illustrata nelle fiqure 20c e 2Od). The method also comprises the recovery phase, during which the transport liquid together with at least part of the particles C1 of the given type flow from the recovery chamber 5 through the outlet 8 (the recovery phase is schematically illustrated in Figures 20c and 2Od).

Secondo alcune forme di attuazione, durante la fase di inserimento almeno parte del campione viene inserito in un serbatoio 13 (reservoir) del sistema 1. According to some embodiments, during the insertion step at least part of the sample is inserted into a reservoir 13 (reservoir) of the system 1.

Vantaqqiosamente, la fase di separazione avviene per dielettroforesi. Almeno durante la fase di separazione, l'unità di separazione 3 viene raffreddata. Advantageously, the separation phase takes place by dielectrophoresis. At least during the separation step, the separation unit 3 is cooled.

Secondo alcune forme di attuazione, almeno una o entrambe la prima e la seconda fase di alimentazione sono completamente precedenti alla fase di separazione. According to some embodiments, at least one or both of the first and second feeding phases are completely preceding the separation phase.

Secondo alcune forme di attuazione, la seconda fase di alimentazione è almeno parzialmente precedente alla prima fase di alimentazione. Vantaqqiosamente, la seconda fase di alimentazione è completamente precedente alla prima fase di alimentazione . According to some embodiments, the second feeding phase is at least partially prior to the first feeding phase. Advantageously, the second feeding phase is completely prior to the first feeding phase.

Secondo alcune forme di attuazione, una prima pressione viene imposta per alimentare il campione alla camera 4 principale. According to some embodiments, a first pressure is imposed to feed the sample to the main chamber 4.

In particolare, la prima pressione spinge il campione dal serbatoio 13 verso la camera 4 principale. In particular, the first pressure pushes the sample from the tank 13 towards the main chamber 4.

Secondo alcune forme di attuazione, la prima pressione viene esercitata almeno prima e durante la prima fase di alimentazione . According to some embodiments, the first pressure is exerted at least before and during the first feeding phase.

Vantaggiosamente, durante la fase di recupero, almeno parte delle particelle CI del tipo determinato vengono sottoposte a vibrazione, in particolare vengono sottoposte ad una pressione che varia in modo oscillante (la frequenza di vibrazione è tra 2 e 80Hz, vantaggiosamente da 5 a 40Hz). Advantageously, during the recovery phase, at least part of the particles C1 of the given type are subjected to vibration, in particular they are subjected to a pressure which varies in an oscillating way (the vibration frequency is between 2 and 80Hz, advantageously from 5 to 40Hz) .

Vantaggiosamente, durante la prima fase di alimentazione una valvola 9 del sistema 1, la quale valvola 9 è disposta a monte della camera 4 principale, ed una valvola 10 del sistema 1, la quale valvola 10 è disposta tra la camera 4 principale e l'uscita 7, sono aperte. In particolare, durante la prima fase di alimentazione, il campione passa attraverso la valvola 9. Advantageously, during the first feeding phase a valve 9 of the system 1, which valve 9 is arranged upstream of the main chamber 4, and a valve 10 of the system 1, which valve 10 is arranged between the main chamber 4 and the exit 7, are open. In particular, during the first feeding phase, the sample passes through valve 9.

Secondo alcune forme di attuazione, durante la prima fase di alimentazione, il campione viene sottoposto a vibrazione, in particolare viene sottoposto ad una pressione che varia in modo oscillante (la frequenza di vibrazione è tra 2 e 80Hz, vantaggiosamente da 5 a 40Hz). According to some embodiments, during the first feeding phase, the sample is subjected to vibration, in particular it is subjected to a pressure which varies in an oscillating way (the vibration frequency is between 2 and 80Hz, advantageously from 5 to 40Hz).

Secondo particolari forme d'attuazione, il sistema 1 comprende un condotto 16 per collegare l'ingresso 2 alla camera 4 principale; ed un condotto 20, il quale è disposto tra la camera 4 principale e l'uscita 7 e presenta una sezione inferiore, in particolare di almeno 100 μπι, alla sezione del condotto 16. Durante la prima fase di alimentazione, venendo rilevata la pressione del campione; l'alimentazione del campione venendo bloccata in funzione della pressione rilevata, in particolare quando viene rilevata una pressione superiore ad un valore determinato. According to particular embodiments, the system 1 comprises a conduit 16 for connecting the inlet 2 to the main chamber 4; and a duct 20, which is arranged between the main chamber 4 and the outlet 7 and has a lower section, in particular of at least 100 μπι, than the section of the duct 16. During the first feeding phase, the pressure of the sample; the supply of the sample is blocked according to the pressure detected, in particular when a pressure higher than a determined value is detected.

Secondo ulteriori forme d'attuazione, in aggiunta o in alternativa alla rivelazione di pressione una o più delle seguenti rilevazione viene effettuata: rilevazione ottica del passaggio del campione tra la camera 4 ed il condotto 20; rilevazione della variazione della conducibilità elettrica in corrispondenza di una zona di collegamento tra la camera 4 ed il condotto 20 dovuta all'inizio del passaggio del campione; rilevazione della variazione della permettività elettrica in corrispondenza di una zona di collegamento tra la camera 4 ed il condotto 20 dovuta all'inizio del passaggio del campione; rilevazione della variazione della resistenza termica in corrispondenza di una zona di collegamento tra la camera 4 ed il condotto 20 dovuta all'inizio del passaggio del campione; rilevazione della variazione della capacità termica in corrispondenza di una zona di collegamento tra la camera 4 ed il condotto 20 dovuta all'inizio del passaggio del campione. According to further embodiments, in addition or as an alternative to the pressure detection one or more of the following detections is carried out: optical detection of the passage of the sample between the chamber 4 and the duct 20; detection of the variation of the electrical conductivity in correspondence of a connection zone between the chamber 4 and the duct 20 due to the beginning of the passage of the sample; detection of the variation of the electrical permittivity in correspondence of a connection zone between the chamber 4 and the duct 20 due to the beginning of the passage of the sample; detection of the variation of the thermal resistance in correspondence of a connection zone between the chamber 4 and the duct 20 due to the beginning of the passage of the sample; detection of the variation of the thermal capacity in correspondence of a connection zone between the chamber 4 and the duct 20 due to the beginning of the passage of the sample.

In tutti questi casi, l'afflusso del campione 40 viene bloccato quando viene rilevato che il campione incomincia ad entrare nel condotto 20. In all of these cases, the flow of sample 40 is blocked when it is detected that the sample begins to enter conduit 20.

Secondo alcune forme di attuazione, durante la seconda fase di alimentazione, una valvola 11 del sistema 1, la quale valvola 11 è disposta a monte della camera 5 di recupero, ed una valvola 12, la quale valvola 12 è disposta tra la camera 5 di recupero e l'uscita 8, sono aperte. According to some embodiments, during the second supply phase, a valve 11 of the system 1, which valve 11 is arranged upstream of the recovery chamber 5, and a valve 12, which valve 12 is arranged between the recovery and exit 8 are open.

Vantaggiosamente, una seconda pressione viene imposta per alimentare il liquido di trasporto alla camera 5 di recupero. In particolare, la seconda pressione spinge il liquido di trasporto da un serbatoio 14 del sistema 1 verso la camera 5 di recupero. Durante la seconda fase di alimentazione, il liquido di trasporto passa attraverso la valvola 11. Advantageously, a second pressure is imposed to feed the transport liquid to the recovery chamber 5. In particular, the second pressure pushes the transport liquid from a tank 14 of the system 1 towards the recovery chamber 5. During the second feed stage, the carrier liquid passes through valve 11.

Secondo alcune forme di attuazione, la seconda pressione viene esercita almeno prima e durante la seconda fase di alimentazione. According to some embodiments, the second pressure is exerted at least before and during the second feeding phase.

Durante la fase di recupero le valvole 11 e 12 sono aperte. During the recovery phase the valves 11 and 12 are open.

Secondo alcune forme di attuazione, il metodo comprende una fase di scarico, la quale è almeno parzialmente successiva alla fase di separazione e almeno parzialmente precedente alla fase di recupero e durante la quale almeno parte delle ulteriori particelle C2 del campione vengono fatte defluire dalla camera 4 principale attraverso l'uscita 7; la fase di scarico è schematicamente illustrata nelle figure 20b e 20c. Vantaggiosamente la fase di scarico è completamente successiva alla fase di separazione e/o completamente precedente alla fase di recupero. According to some embodiments, the method comprises a discharge step, which is at least partially subsequent to the separation step and at least partially preceding the recovery step and during which at least part of the further particles C2 of the sample are made to flow out of the chamber 4 main through exit 7; the unloading step is schematically illustrated in figures 20b and 20c. Advantageously, the unloading phase is completely subsequent to the separation phase and / or completely preceding the recovery phase.

Durante la fase di scarico, le valvole 10 e 11 sono aperte in modo da alimentare il liquido di trasporto alla camera 4 principale. During the discharge phase, the valves 10 and 11 are open so as to feed the transport liquid to the main chamber 4.

L'effettuazione della fase di scarico permette di ridurre i rischi che, durante la fase di recupero, passino attraverso l'uscita 8 parte delle ulteriori particelle C2 che vengano richiamate dalla camera 4 principale dal flusso del liquido di trasporto attraverso la camera 5 di recupero. Carrying out the discharge phase allows to reduce the risks that, during the recovery phase, part of the further particles C2 pass through the outlet 8 and are recalled from the main chamber 4 by the flow of the transport liquid through the recovery chamber 5 .

In pratica, secondo alcune forme di attuazione, le valvole 11 e 12 vengono aperte in modo da riempire la camera 5 di recupero con il liquido di trasporto. A questo punto, le valvole 9 e 10 vengono aperte in modo che il campione riempia la camera 4 principale. Le valvole 9, 10, 11 e 12 vengono, quindi, chiuse e le particelle CI del tipo determinato vengono portate in modo sostanzialmente selettivo dalla camera 4 principale alla camera 5 di recupero. A questo punto, le valvole 11 e 10 vengono aperte in modo da fare defluire dalla camera 4 almeno parte delle ulteriori particelle C2. In practice, according to some embodiments, the valves 11 and 12 are opened so as to fill the recovery chamber 5 with the transport liquid. At this point, valves 9 and 10 are opened so that the sample fills the main chamber 4. The valves 9, 10, 11 and 12 are then closed and the particles C1 of the determined type are brought in a substantially selective manner from the main chamber 4 to the recovery chamber 5. At this point, the valves 11 and 10 are opened so as to cause at least part of the further particles C2 to flow out of the chamber 4.

Secondo alcune forme di attuazione, le particelle CI del tipo determinato vengono disposte all'interno della camera 5 di recupero in modo che, durante la fase di scarico, rimangano almeno in parte all'interno della camera 5 di recupero stessa. In particolare, le particelle CI del tipo determinato vengono disposte lateralmente (vale a dire non di fronte) ad un canale 6 di collegamento tra la camera 4 principale e la camera 5 di recupero. Specificamente, le particelle C2 vengono disposte tra il canale 6 ed un condotto 26 di collegamento all'uscita 8. According to some embodiments, the particles C1 of the given type are arranged inside the recovery chamber 5 so that, during the unloading step, they remain at least partially inside the recovery chamber 5 itself. In particular, the particles C1 of the determined type are arranged laterally (ie not in front of) a connecting channel 6 between the main chamber 4 and the recovery chamber 5. Specifically, the particles C2 are arranged between the channel 6 and a connection duct 26 to the outlet 8.

Secondo alcune forme di attuazione, il sistema 1 comprende una valvola 29 (figure 2 e 27), la quale è disposta tra la camera di recupero e l'uscita 7 (o un'ulteriore uscita non illustrata). La camera 5 comprende una prima zona 5' la quale è idraulicamente collegata al condotto 27 (e quindi alla valvola 12); una seconda zona 5'' idraulicamente collegata al condotto 28 (e quindi alla valvola 29); ed un'ulteriore zona che definisce un tratto terminale del condotto 26 (ed è quindi collegata alla valvola 11). According to some embodiments, the system 1 comprises a valve 29 (Figures 2 and 27), which is arranged between the recovery chamber and the outlet 7 (or a further outlet not shown). The chamber 5 comprises a first zone 5 'which is hydraulically connected to the duct 27 (and therefore to the valve 12); a second zone 5 '' hydraulically connected to the duct 28 (and therefore to the valve 29); and a further zone which defines a terminal portion of the duct 26 (and is therefore connected to the valve 11).

Durante la seconda fase di riempimento, le valvole 12 e 11 sono aperte in modo da riempiere la prima zona 5' della camera 5 di recupero che collega le valvole 12 e 11; le valvole 11 e 29 sono aperte per riempire la seconda zona 5'' della camera 5 di recupero che collega le valvole 11 e 29. During the second filling phase, the valves 12 and 11 are open so as to fill the first zone 5 'of the recovery chamber 5 which connects the valves 12 and 11; the valves 11 and 29 are open to fill the second zone 5 '' of the recovery chamber 5 which connects the valves 11 and 29.

Secondo specifiche forme d'attuazione, le valvole 12, 11 e 29 vengono aperte in modo da riempire la prima zona 5' (figure 27b e 27c), a questo punto viene chiusa la valvola 12 viene riempita la seconda zona 5'' (figura 27d). According to specific embodiments, the valves 12, 11 and 29 are opened so as to fill the first zone 5 '(figures 27b and 27c), at this point the valve 12 is closed and the second zone 5' 'is filled (figure 27d).

Durante la fase di separazione, almeno parte delle particelle CI del tipo determinato ed almeno parte di particelle C3 di almeno un secondo tipo determinato vengono trasferite nella camera 5 di recupero (figure 28a e 28b) (in particolare, nella seconda zona 5''). La fase di recupero comprende una prima sottofase di recupero, durante la quale almeno parte delle particelle CI del tipo determinato viene portata in modo sostanzialmente selettivo nella prima zona 5' (figura 28d) e, successivamente, almeno parte delle particelle CI del tipo determinato viene fatta defluire dalla prima zona 5' attraverso l'uscita 8 alimentando alla camera 5 di recupero ulteriore liquido di trasporto (figura 28e). During the separation step, at least part of the particles C1 of the determined type and at least part of the particles C3 of at least a second determined type are transferred to the recovery chamber 5 (Figures 28a and 28b) (in particular, in the second zone 5 '') . The recovery phase comprises a first recovery sub-phase, during which at least part of the particles C1 of the determined type is brought in a substantially selective manner into the first zone 5 '(Figure 28d) and, subsequently, at least part of the particles C1 of the determined type is made to flow from the first zone 5 'through the outlet 8, feeding further transport liquid to the recovery chamber 5 (figure 28e).

La fase di recupero comprende una seconda sottofase di recupero, durante la quale almeno parte delle particelle C3 viene fatta uscire dalla camera 5 di recupero attraverso l'uscita 8 alimentando alla camera 5 di recupero ulteriore liquido di trasporto. The recovery phase comprises a second recovery sub-phase, during which at least part of the particles C3 is made to leave the recovery chamber 5 through the outlet 8, feeding further transport liquid to the recovery chamber 5.

Vantaggiosamente, durante la seconda sottofase di recupero, almeno parte delle particelle C3 viene portata nella prima zona 5' (figure 28e e 28f) e, successivamente, almeno parte delle particelle C3 viene fatta defluire dalla prima zona 5' attraverso 1' uscita 8 (figura 28g). Advantageously, during the second recovery sub-phase, at least part of the particles C3 is brought into the first zone 5 '(Figures 28e and 28f) and, subsequently, at least part of the particles C3 is made to flow out of the first zone 5' through the outlet 8 ( figure 28g).

Secondo alcune forme d'attuazione, il metodo comprende una fase di lavaggio, durante la quale ulteriori particelle C2 presenti della camera 4 principale vengono allontanate dal canale 6. Durante la fase di lavaggio, le valvole 11 e 10 vengono aperte (figura 28c). Vantaggiosamente, durante la fase di lavaggio la valvola 29 è chiusa e le particelle CI e C3 sono disposte nella seconda zona 5''. Vantaggiosamente, durante la fase di lavaggio, la valvola 12 è chiusa. Vantaggiosamente, durante la fase di lavaggio, la valvola 9 è chiusa. According to some embodiments, the method comprises a washing step, during which further particles C2 present in the main chamber 4 are removed from the channel 6. During the washing step, the valves 11 and 10 are opened (Figure 28c). Advantageously, during the washing step the valve 29 is closed and the particles C1 and C3 are arranged in the second zone 5 ''. Advantageously, during the washing step, the valve 12 is closed. Advantageously, during the washing step, the valve 9 is closed.

Vantaggiosamente, la fase di lavaggio è almeno parzialmente (in particolare, completamente) successiva alla fase di recupero ed almeno parzialmente (in particolare, completamente) precedente alla fase di recupero . Advantageously, the washing step is at least partially (in particular, completely) subsequent to the recovery step and at least partially (in particular, completely) preceding the recovery step.

Secondo alcune forme di attuazione, durante la fase di recupero, viene rilevato la prima goccia di liquido di trasporto che esce dall'uscita 8; quando la prima goccia viene rilevata il deflusso dalla camera 5 di recupero viene bloccato. According to some embodiments, during the recovery step, the first drop of transport liquid coming out of the outlet 8 is detected; when the first drop is detected the outflow from the recovery chamber 5 is blocked.

Secondo alcune forme di attuazione, più fasi di recupero si susseguono, cambiando i contenitori disposti in prossimità dell'uscita 8 ogni qualvolta almeno una goccia viene rilevata. According to some embodiments, several recovery phases follow one another, changing the containers arranged near the outlet 8 each time at least one drop is detected.

Secondo alcune forme di attuazione, all'interno del sistema 1 viene alimentata dell'anidride carbonica. In questo modo si riduce o si elimina la presenza di ossigeno all'interno del sistema 1. La presenza di ossigeno all'interno del sistema può portare alla formazione di bolle durante le varie fasi del metodo. According to some embodiments, carbon dioxide is fed inside the system 1. This reduces or eliminates the presence of oxygen within the system 1. The presence of oxygen within the system can lead to the formation of bubbles during the various steps of the method.

Secondo alternative forme d'attuazione, il liquido di trasporto (e/o eventualmente il campione) viene degassato mediante ultrasuoni prima dell'inserimento nel sistema 1 (o nell'unità di separazione 3). According to alternative embodiments, the transport liquid (and / or possibly the sample) is degassed by means of ultrasounds before being inserted into the system 1 (or into the separation unit 3).

Vantaggiosamente, il campione ed il liquido di trasporto vengono utilizzati ad una temperatura superiore a 20°C, in particolare superiore a 25°C. Anche questo riduce il rischio della formazione di bolle. Advantageously, the sample and the transport liquid are used at a temperature higher than 20 ° C, in particular higher than 25 ° C. This also reduces the risk of blistering.

Secondo alcune forme d'attuazione, il metodo viene applicato utilizzando un sistema 1 definito in accordo con il primo aspetto della presente invenzione. According to some embodiments, the method is applied using a system 1 defined in accordance with the first aspect of the present invention.

Secondo alcune forme di attuazione, il sistema 1 comprende due porzioni tra loro separabili: un apparato 72 sostanzialmente fisso (una forma d'attuazione dell'apparato 72 è parzialmente illustrata nel figure 10 ed 11) ed un dispositivo 73 (una forma d'attuazione del dispositivo 73 è illustrata dall'alto nella figura 21 ed in esploso nella figura 4). According to some embodiments, the system 1 comprises two mutually separable portions: a substantially fixed apparatus 72 (an embodiment of the apparatus 72 is partially illustrated in Figures 10 and 11) and a device 73 (an embodiment of the device 73 is shown from above in Figure 21 and exploded in Figure 4).

Secondo alcune forme d'attuazione, solo parte del campione viene portato nella camera 4 principale. In pratica il campione viene sottoposto ad una pluralità di separazioni parziali successive. According to some embodiments, only part of the sample is brought into the main chamber 4. In practice, the sample is subjected to a plurality of successive partial separations.

Dispositivo microfluidico Microfluidic device

Secondo un quarto aspetto della presente invenzione viene fornito il dispositivo 73 per l'isolamento di particelle CI di almeno un tipo determinato da un campione. Il dispositivo 73 comprende l'ingresso (inlet) 2, attraverso il quale, in uso, il campione viene inserito nel dispositivo 73; l'unità di separazione 3, la quale comprende una camera 4 principale ed una camera 5 di recupero. According to a fourth aspect of the present invention, the device 73 is provided for the isolation of C1 particles of at least one type determined by a sample. The device 73 comprises the inlet 2, through which, in use, the sample is inserted into the device 73; the separation unit 3, which comprises a main chamber 4 and a recovery chamber 5.

In uso, quando il dispositivo 73 è montato all'interno dell'apparato 72, l'unità di separazione 3 è atta a trasferire almeno parte delle particelle CI del tipo determinato dalla camera 4 principale alla camera 5 di recupero in modo sostanzialmente selettivo rispetto ad ulteriori particelle C2 del campione. In use, when the device 73 is mounted inside the apparatus 72, the separation unit 3 is able to transfer at least part of the particles C1 of the type determined from the main chamber 4 to the recovery chamber 5 in a substantially selective manner with respect to further C2 particles of the sample.

Secondo alcune forme di attuazione, il dispositivo 73 comprende l'uscita 7 collegata alla camera 4 principale; l'uscita 8, la quale è collegata alla camera 5 di recupero. Attraverso l'uscita 8, in uso, almeno parte delle particelle CI del tipo determinato raccolte nella camera 5 di recupero escono dal dispositivo 73. According to some embodiments, the device 73 comprises the outlet 7 connected to the main chamber 4; the output 8, which is connected to the recovery chamber 5. Through the outlet 8, in use, at least part of the particles C1 of the determined type collected in the recovery chamber 5 leave the device 73.

L'uscita 7 è atta a permettere al campione di entrare liberamente all'interno della camera 4 principale fungendo da sfiato. The outlet 7 is designed to allow the sample to freely enter the main chamber 4 acting as a vent.

Il dispositivo 73 comprende, inoltre, una porzione valvolare 74, la quale è disposta a monte della camera 4 principale; ed una porzione valvolare 75, la quale è disposta tra la camera 4 principale e l'uscita 7. The device 73 also comprises a valve portion 74, which is arranged upstream of the main chamber 4; and a valve portion 75, which is arranged between the main chamber 4 and the outlet 7.

La porzione valvolare 74 è atta a costituire parte della valvola 9. La porzione valvolare 75 è atta a costituire parte della valvola 10. The valve portion 74 is adapted to form part of the valve 9. The valve portion 75 is adapted to form part of the valve 10.

Il dispositivo comprende anche una porzione valvolare 76, la quale è disposta a monte della camera 5 di recupero; ed una porzione valvolare 77, la quale è disposta tra la camera 5 di recupero e l'uscita 8. The device also comprises a valve portion 76, which is arranged upstream of the recovery chamber 5; and a valve portion 77, which is arranged between the recovery chamber 5 and the outlet 8.

La porzione valvolare 75 è atta a costituire parte della valvola 11. La porzione valvolare 76 è atta a costituire parte della valvola 12. The valve portion 75 is adapted to form part of the valve 11. The valve portion 76 is adapted to form part of the valve 12.

Secondo alcune forme di attuazione, almeno una delle porzioni valvolari 74, 75, 76 e 77 comprende l'elemento di chiusura 30, il quale è atto a passare tra una posizione di bloccaggio, in cui l'elemento di chiusura 30 è disposto in modo da separare due tratti di un rispettivo canale del dispositivo 73, ed una posizione di apertura, in cui l'elemento di chiusura 30 è disposto in modo tale che i due tratti siano tra loro collegati. Vantaggiosamente, ciascuna porzione valvolare 74, 75, 76 e 77 comprende un rispettivo elemento di chiusura 30. According to some embodiments, at least one of the valve portions 74, 75, 76 and 77 comprises the closing element 30, which is able to pass between a locking position, in which the closing element 30 is arranged so to separate two portions of a respective channel of the device 73, and an opening position, in which the closing element 30 is arranged in such a way that the two portions are connected to each other. Advantageously, each valve portion 74, 75, 76 and 77 comprises a respective closing element 30.

Vantaggiosamente, l'elemento di chiusura 30 è definito come sopra descritto in relazione al sistema 1. In particolare, l'elemento di chiusura 30 presenta una parte a membrana, la quale comprende, in particolare è costituita da, un materiale sostanzialmente elastico. Advantageously, the closing element 30 is defined as described above in relation to the system 1. In particular, the closing element 30 has a membrane part, which comprises, in particular is constituted by, a substantially elastic material.

Secondo alcune forme di attuazione, almeno una, in particolare ciascuna, delle porzioni valvolari 74, 75, 76 e 77 comprende il setto 33, il quale è disposto tra i due tratti del condotto del dispositivo 73. Nella posizione di bloccaggio l'elemento di chiusura 30 è a contatto con il setto 33; nella posizione di apertura l'elemento di chiusura 30 è distanziato dal setto 33. According to some embodiments, at least one, in particular each, of the valve portions 74, 75, 76 and 77 comprises the septum 33, which is arranged between the two portions of the duct of the device 73. In the locking position, the locking element closure 30 is in contact with the septum 33; in the open position the closing element 30 is spaced from the baffle 33.

Almeno una, in particolare ciascuna, delle porzioni valvolari 74, 75, 76 e 77 comprende almeno un foro in un canale del dispositivo 73. In particolare, ciascun elemento di chiusura 30 è disposto in corrispondenza di due rispettivi fori di un relativo canale, i quali fori sono tra loro separati da un rispettivo setto 33. Ciascuno di questi fori presenta un diametro da 0,1 a 0,7 mm. Secondo specifiche forme d'attuazione, ciascun foro presenta un diametro di circa 0,5 mm. At least one, in particular each, of the valve portions 74, 75, 76 and 77 comprises at least one hole in a channel of the device 73. In particular, each closure element 30 is arranged in correspondence with two respective holes of a relative channel, which holes are separated from each other by a respective septum 33. Each of these holes has a diameter from 0.1 to 0.7 mm. According to specific embodiments, each hole has a diameter of about 0.5 mm.

Secondo alcune forme di attuazione, ciascuna porzione valvolare 74, 75, 76 e 77 corrisponde ad una parte della valvola V sopradescritta priva dell'attuatore fluidodinamico 35. According to some embodiments, each valve portion 74, 75, 76 and 77 corresponds to a part of the valve V described above without the fluid-dynamic actuator 35.

Secondo alcune forme d'attuazione, il dispositivo 73 comprende, inoltre, il serbatoio 13, il quale è disposto tra l'ingresso 2 e la porzione valvolare 74 ed è atto a raccogliere il campione inserito attraverso l'ingresso 2; ed un canale 78, il quale collega il serbatoio 13 alla camera 4 principale e lungo il quale è disposta la porzione valvolare 74. In particolare, il canale 78 è una parte del condotto 16. According to some embodiments, the device 73 further comprises the tank 13, which is arranged between the inlet 2 and the valve portion 74 and is adapted to collect the sample inserted through the inlet 2; and a channel 78, which connects the tank 13 to the main chamber 4 and along which the valve portion 74 is arranged. In particular, the channel 78 is a part of the duct 16.

Vantaggiosamente, il canale 78 presenta una sezione di diametro equivalente da 0,9 mm a 50 μπι. In particolare, il canale 78 presenta una larghezza da 0,7 a 0,1 mm ed una profondità da 1,00 a 0,15 mm. Secondo specifiche forme d'attuazione, il canale 78 presenta una larghezza di circa 0,5 mm ed una profondità da circa 0,25 a circa 0,5 mm. I particolari percorsi del canale 78 contribuiscono a ridurre il rischio che dell'aria entri nel dispositivo 73. Advantageously, the channel 78 has a section with an equivalent diameter from 0.9 mm to 50 μπι. In particular, the channel 78 has a width of 0.7 to 0.1 mm and a depth of 1.00 to 0.15 mm. According to specific embodiments, the channel 78 has a width of about 0.5 mm and a depth of from about 0.25 to about 0.5 mm. The particular paths of the channel 78 help reduce the risk of air entering the device 73.

Vantaggiosamente, il serbatoio 13 presenta un volume da 5μ1. a 100 μΐ., in particolare una larghezza da 3 a 0,8 mm ed una profondità da 1,5 a 0,25 mm. Advantageously, the tank 13 has a volume of 5μ1. to 100 μΐ., in particular a width from 3 to 0.8 mm and a depth from 1.5 to 0.25 mm.

Secondo specifiche forme d'attuazione, il serbatoio 13 presenta un volume di circa 35 μΐ., una larghezza di circa 1 mm ed una profondità di circa 0,5 mm. According to specific embodiments, the tank 13 has a volume of about 35 μΐ., A width of about 1 mm and a depth of about 0.5 mm.

Vantaggiosamente, la porzione valvolare 74 è disposta tra il serbatoio 13 e la camera 4 principale. Advantageously, the valve portion 74 is arranged between the tank 13 and the main chamber 4.

Secondo alcune forme d'attuazione, il dispositivo 73 comprende un foro di alimentazione 79. In particolare, il foro di alimentazione 79 è disposto in corrispondenza dell'ingresso 2. Il serbatoio 13 è disposto tra il foro di alimentazione 79 e la camera 4 principale. Il canale 78 collega il foro di alimentazione 79 alla camera 4 principale . According to some embodiments, the device 73 comprises a feed hole 79. In particular, the feed hole 79 is arranged in correspondence with the inlet 2. The tank 13 is arranged between the feed hole 79 and the main chamber 4 . The channel 78 connects the feed hole 79 to the main chamber 4.

Secondo alcune forme di attuazione, il dispositivo 73 comprende l'anello di tenuta 66, il quale circonda verso l'esterno il foro di alimentazione 79. According to some embodiments, the device 73 comprises the sealing ring 66, which surrounds the supply hole 79 towards the outside.

Vantaggiosamente, l'anello di tenuta 66 è definito come sopra descritto in relazione al sistema 1 ed, in particolare, è atto ad accoppiarsi con un rispettivo ugello di alimentazione pressione 61. Advantageously, the sealing ring 66 is defined as described above in relation to the system 1 and, in particular, is adapted to couple with a respective pressure supply nozzle 61.

Secondo alcune forme d'attuazione, il dispositivo 73 comprende un canale 80 (corrispondente a parte del condotto 20), il quale è disposto tra la camera 4 principale e l'uscita 7 e comprende il tratto 20' . Il tratto 20' presenta una sezione inferiore, in particolare di almeno 100 μπι, alla sezione del canale 78 (il tratto 20' è meglio illustrato nella figura 9). According to some embodiments, the device 73 comprises a channel 80 (corresponding to part of the duct 20), which is arranged between the main chamber 4 and the outlet 7 and comprises the portion 20 '. The section 20 'has a lower section, in particular of at least 100 μπι, than the section of the channel 78 (the section 20' is better illustrated in Figure 9).

Vantaggiosamente, il tratto 20' presenta una larghezza inferiore a 150 μπι, una profondità inferiore a 110 μπι ed una lunghezza maggiore di 2 mm. Vantaggiosamente, il tratto 20' presenta una larghezza superiore a 100 μπι, una profondità superiore a 30 μπι, ed, in particolare, una lunghezza inferiore a 6 mm. Advantageously, the portion 20 'has a width of less than 150 μπι, a depth of less than 110 μπι and a length greater than 2 mm. Advantageously, the portion 20 'has a width greater than 100 μπι, a depth greater than 30 μπι, and, in particular, a length less than 6 mm.

Secondo alcune forme d'attuazione, il dispositivo 73 comprende il serbatoio 14, il quale è atto a contenere il liquido di trasporto. According to some embodiments, the device 73 comprises the tank 14, which is adapted to contain the transport liquid.

Vantaggiosamente, il serbatoio 14 presenta un volume da lOmL a 100 μΐ., una larghezza da 5 a 0,8 mm ed una profondità da 1,5 a 0,25 mm. Advantageously, the tank 14 has a volume from 10mL to 100 μΐ., A width from 5 to 0.8 mm and a depth from 1.5 to 0.25 mm.

Secondo specifiche forme d'attuazione, il serbatoio 14 presenta un volume di circa 150 μΐ., una larghezza di circa 1 mm ed una profondità di circa 0,5 mm. According to specific embodiments, the tank 14 has a volume of approximately 150 μΐ., A width of approximately 1 mm and a depth of approximately 0.5 mm.

Il dispositivo 73 comprende un canale 81, il quale collega il serbatoio 14 alla camera 5 di recupero e lungo il quale è disposta la porzione valvolare 76. The device 73 comprises a channel 81, which connects the tank 14 to the recovery chamber 5 and along which the valve portion 76 is arranged.

In particolare, il canale 81 è una parte del condotto 26. In particular, the channel 81 is a part of the duct 26.

Vantaggiosamente, il canale 81 presenta una sezione di diametro equivalente da 0,9 mm a a 200 μπι. In particolare, il canale 81 presenta una larghezza da 0,7 a 0,25 mm ed una profondità da 0,7 a 0,15 mm. Secondo specifiche forme d'attuazione, il canale 81 presenta una larghezza di circa 0,5 mm ed una profondità di circa 0,25 miti. Advantageously, the channel 81 has a section with an equivalent diameter from 0.9 mm to 200 μπι. In particular, the channel 81 has a width of 0.7 to 0.25 mm and a depth of 0.7 to 0.15 mm. According to specific embodiments, the channel 81 has a width of about 0.5 mm and a depth of about 0.25 m.

I particolari percorsi del canale 81 contribuiscono a ridurre il rischio che dell'aria entri nel dispositivo 73. The particular paths of the channel 81 help reduce the risk of air entering the device 73.

Secondo alcune forme d'attuazione, la porzione 76 valvolare è disposta tra il serbatoio 14 e la camera 5 di recupero. According to some embodiments, the valve portion 76 is arranged between the tank 14 and the recovery chamber 5.

Secondo alcune forme di attuazione, il dispositivo 73 comprende un foro di alimentazione 82. Il serbatoio 14 è disposto tra il foro di alimentazione 82 e la camera 5 di recupero; il canale 81 collegando il foro di alimentazione 82 alla camera 5 di recupero. According to some embodiments, the device 73 comprises a feed hole 82. The tank 14 is arranged between the feed hole 82 and the recovery chamber 5; the channel 81 connecting the feed hole 82 to the recovery chamber 5.

Secondo alcune forme di attuazione, il dispositivo 73 comprende l'anello di tenuta 66a, il quale circonda verso l'esterno il foro di alimentazione 82. According to some embodiments, the device 73 comprises the sealing ring 66a, which surrounds the supply hole 82 towards the outside.

Vantaggiosamente, l'anello di tenuta 66a è definito come sopra descritto in relazione al sistema 1 ed, in particolare, è atto ad accoppiarsi con un rispettivo ugello di alimentazione pressione 61a. Advantageously, the sealing ring 66a is defined as described above in relation to the system 1 and, in particular, is adapted to couple with a respective pressure supply nozzle 61a.

II dispositivo 73 comprende connettori elettrici 83 (illustrati nella figura 3) per collegare elettricamente il dispositivo 73 stesso all'apparato 72. Vantaggiosamente, i connettori elettrici 83 comprendono (in particolare consistono di) almeno un circuito elettrico, in particolare un circuito elettrico stampato (PCB) di collegamento. The device 73 comprises electrical connectors 83 (illustrated in Figure 3) for electrically connecting the device 73 itself to the apparatus 72. Advantageously, the electrical connectors 83 comprise (in particular they consist of) at least one electrical circuit, in particular a printed electrical circuit ( PCB) connection.

Secondo la forma d'attuazione illustrata nella figura 31, il dispositivo 73 comprende un'ulteriore porzione valvolare 29' atta a costituire una parte della valvola 29. In questo caso, la porzione valvolare 29' è disposta tra la camera 5 di recupero ed un'uscita del dispositivo 73 (ovvero del sistema 1). Tale uscita può essere un'ulteriore uscita rispetto alle uscite 7 e 8 sopra descritte o può coincidere con l'uscita 7 o l'uscita 8 (nella forma d'attuazione illustrata nella figura 31, tale uscita corrisponde con l'uscita 7). According to the embodiment illustrated in Figure 31, the device 73 comprises a further valve portion 29 'adapted to constitute a part of the valve 29. In this case, the valve portion 29' is arranged between the recovery chamber 5 and a output of device 73 (i.e. of system 1). This output can be a further output with respect to the outputs 7 and 8 described above or it can coincide with the output 7 or the output 8 (in the embodiment illustrated in Figure 31, this output corresponds with the output 7).

Pertanto, secondo alcune forme d'attuazione, il dispositivo 73 comprende un'ulteriore uscita; la porzione valvolare 29' è disposta tra la camera 5 di recupero e l'ulteriore uscita; opzionalmente, l'ulteriore uscita corrisponde all'uscita 7. Therefore, according to some embodiments, the device 73 comprises a further output; the valve portion 29 'is arranged between the recovery chamber 5 and the further outlet; optionally, the further output corresponds to output 7.

Il dispositivo 73 comprende, inoltre, il condotto 28, il quale collega idraulicamente la camera 5 (in particolare, la seconda zona 5'') all'ulteriore uscita. La porzione valvolare 29' è disposta in corrispondenza del condotto 28. The device 73 also comprises the duct 28, which hydraulically connects the chamber 5 (in particular, the second zone 5 '') to the further outlet. The valve portion 29 'is arranged in correspondence with the duct 28.

In questi casi, la camera 5 comprende la prima zona 5' la quale è idraulicamente collegata al condotto 27 (e quindi alla porzione valvolare 77); la seconda zona 5'' idraulicamente collegata al condotto 28 (e quindi alla porzione valvolare 29'); e l'ulteriore zona che definisce un tratto terminale del canale 81 (ovvero del condotto 26) (ed è quindi collegata con la porzione valvolare 76). In these cases, the chamber 5 comprises the first zone 5 'which is hydraulically connected to the duct 27 (and therefore to the valve portion 77); the second zone 5 '' hydraulically connected to the duct 28 (and therefore to the valve portion 29 '); and the further zone which defines an end portion of the channel 81 (or of the duct 26) (and is therefore connected with the valve portion 76).

Il condotto 28 presenta una sezione di diametro equivalente da 0,9 mm a 200 μπι. In particolare, il condotto 28 presenta una larghezza da 0,7 a 0,25 mm ed una profondità da 0,7 a 0,15 mm. Secondo specifiche forme d'attuazione, il condotto 28 presenta una larghezza di circa 0,5 mm ed una profondità di circa 0,25 mm. The duct 28 has a section with an equivalent diameter from 0.9 mm to 200 μπι. In particular, the duct 28 has a width of 0.7 to 0.25 mm and a depth of 0.7 to 0.15 mm. According to specific embodiments, the duct 28 has a width of about 0.5 mm and a depth of about 0.25 mm.

Il dispositivo 73 della figura 31 è atto ad essere parte del sistema 1 illustrato nella figura 2 ed a funzionare secondo quanto illustrato nelle figure 27 e 28. The device 73 of Figure 31 is adapted to be part of the system 1 illustrated in Figure 2 and to operate according to what is illustrated in Figures 27 and 28.

Apparato Apparatus

Secondo un quinto aspetto della presente invenzione, viene fornito un apparato 72 per l'isolamento di particelle C2 di almeno un tipo determinato da un campione. According to a fifth aspect of the present invention, an apparatus 72 is provided for isolating C2 particles of at least one type determined from a sample.

L'apparato 72 comprende una sede 84 (illustrata aperta nella figura 11 e chiusa nella figura 10) per alloggiare un dispositivo micorf luidico (in particolare il dispositivo 73) per l'isolamento delle particelle CI del tipo determinato dal campione; connettori elettrici 85 (illustrati nelle figure 3 e 13) per collegare elettricamente l'apparato 1 al dispositivo microfluidico ; ed il gruppo di controllo 23 collegato ai connettori elettrici 85. The apparatus 72 comprises a seat 84 (shown open in Figure 11 and closed in Figure 10) for housing a microphluidic device (in particular the device 73) for the isolation of the particles C1 of the type determined by the sample; electrical connectors 85 (illustrated in Figures 3 and 13) for electrically connecting the apparatus 1 to the microfluidic device; and the control unit 23 connected to the electrical connectors 85.

Secondo alcune forme d'attuazione, l'apparato 72 comprende uno sportello 86, il quale è illustrato in posizione sollevata nella figura 11 ed in posizione abbassata nella figura 10. La faccia inferiore dello sportello 86 è illustrata nella figura 12. According to some embodiments, the apparatus 72 comprises a door 86, which is illustrated in the raised position in Figure 11 and in the lowered position in Figure 10. The lower face of the door 86 is illustrated in Figure 12.

L'apparato 72 comprende almeno quattro attuatori fluidodinamici 35, ciascuno dei quali è atto a costituire una parte di una rispettiva valvola e comprende un rispettivo ugello attuatore 36 (si veda, in particolare, la figura 13), che presenta un rispettivo foro 39 attuatore; almeno due ugelli di alimentazione pressione 61 e 61a, i quali presentano, ciascuno, un rispettivo foro di alimentazione pressione 63 e 63a. The apparatus 72 comprises at least four fluid-dynamic actuators 35, each of which is adapted to constitute a part of a respective valve and comprises a respective actuator nozzle 36 (see, in particular, Figure 13), which has a respective actuator hole 39 ; at least two pressure supply nozzles 61 and 61a, which each have a respective pressure supply hole 63 and 63a.

L'apparato comprende almeno il dispositivo di pressione 64 collegato agli ugelli di alimentazione di pressione 61 per determinare una pressione in corrispondenza dei fori di alimentazione pressione 63 e 63a; ed almeno un dispositivo di pressione 87, il quale è collegato agli ugelli attuatori 36 (figura 3) ed è atto ad determinare una aspirazione in corrispondenza di almeno uno dei fori 39 attuatori (figure 14 e 15). The apparatus comprises at least the pressure device 64 connected to the pressure supply nozzles 61 for determining a pressure at the pressure supply holes 63 and 63a; and at least one pressure device 87, which is connected to the actuator nozzles 36 (Figure 3) and is able to cause suction in correspondence with at least one of the actuator holes 39 (Figures 14 and 15).

Quando lo sportello 86 è in posizione sollevata la sede 84 è aperta ed accessibile dall'esterno (figura 11); in particolare, quando lo sportello 86 è in posizione sollevata il dispositivo microfluidico (in particolare il dispositivo 73) può essere inserito al disotto dello sportello 86 stesso. In uso, una volta che il dispositivo microfluidico è stato inserito sotto lo sportello 86, lo sportello 86 viene abbassato (figura 10) ed il dispositivo microfluidico viene portato nella sede 84. Ciò viene fatto ruotando delle maniglie 88 che presentano in corrispondenza di una propria estremità dei profili a camma 89. I profili a camma 89, ruotando, spingono verso il basso lo sportello 86 superando la resistenza di molle (di per sé note e non illustrate) che tendono a mantenere lo sportello 86 in posizione sollevata. When the door 86 is in the raised position, the seat 84 is open and accessible from the outside (Figure 11); in particular, when the door 86 is in the raised position, the microfluidic device (in particular the device 73) can be inserted under the door 86 itself. In use, once the microfluidic device has been inserted under the door 86, the door 86 is lowered (Figure 10) and the microfluidic device is brought into the seat 84. This is done by rotating handles 88 which have their own ends of the cam profiles 89. The cam profiles 89, by rotating, push the door 86 downwards, overcoming the resistance of springs (known per se and not illustrated) which tend to keep the door 86 in the raised position.

Secondo quanto illustrato nella figura 12, lo sportello 86 comprende dei fori 86a per ispezionare le valvole 9, 10, 11 e 12 ed un'apertura 86b per rendere visibile le camere 4 e 5. As illustrated in Figure 12, the door 86 comprises holes 86a for inspecting the valves 9, 10, 11 and 12 and an opening 86b to make the chambers 4 and 5 visible.

Secondo alcune forme d'attuazione, l'apparato 72 comprende un gruppo di pressione 90 (figura 3) comprendente i dispositivi di pressione 64 e 87. Il gruppo di pressione 90 comprende almeno una pompa. According to some embodiments, the apparatus 72 comprises a pressure assembly 90 (Figure 3) comprising the pressure devices 64 and 87. The pressure assembly 90 comprises at least one pump.

Secondo alcune forme d'attuazione, il dispositivo di pressione 64 comprende l'unità di pressione 65 ed almeno un'unità di pressione 65a collegate, ciascuna, al rispettivo ugello di alimentazione pressione 61 e 61a. Le unità di pressione 65 e 65a sono azionabili separatamente e sono atte, ciascuna, a definire una pressione in corrispondenza del (in particolare un getto d'aria attraverso il) relativo foro di alimentazione pressione 63 e 63a. According to some embodiments, the pressure device 64 comprises the pressure unit 65 and at least one pressure unit 65a each connected to the respective pressure supply nozzle 61 and 61a. The pressure units 65 and 65a can be operated separately and are each capable of defining a pressure in correspondence with (in particular an air jet through the) relative pressure supply hole 63 and 63a.

Secondo alcune forme d'attuazione, il dispositivo di pressione 64 comprende almeno una sorgente di pressione 15 (e/o 25) (figure 1, 2 e 3). Almeno una tra le unità di pressione 65 e 65a comprende un relativo condotto (in particolare, per l'unità di pressione 65, un primo tratto del condotto 16; per l'unità di pressione 65a, un primo tratto del condotto 26), il quale collega la sorgente di pressione 15 e/o 25 al rispettivo ugello di alimentazione pressione 61 e/o 61a. According to some embodiments, the pressure device 64 comprises at least one pressure source 15 (and / or 25) (Figures 1, 2 and 3). At least one of the pressure units 65 and 65a comprises a relative duct (in particular, for the pressure unit 65, a first section of the duct 16; for the pressure unit 65a, a first section of the duct 26), the which connects the pressure source 15 and / or 25 to the respective pressure supply nozzle 61 and / or 61a.

L'apparato 72 comprende il sensore di pressione 21 per rilevare la pressione lungo il citato condotto; ed il dispositivo di bloccaggio 22, il quale è atto ad interrompere la trasmissione di pressione al rispettivo ugello di alimentazione pressione 61 e/o 61a. Il gruppo di controllo 23 è collegato al sensore di pressione 21 ed al dispositivo di bloccaggio 22 per azionare il dispositivo di bloccaggio 22 in funzione della pressione rilevata. The apparatus 72 comprises the pressure sensor 21 for detecting the pressure along the aforementioned duct; and the locking device 22, which is adapted to interrupt the pressure transmission to the respective pressure supply nozzle 61 and / or 61a. The control unit 23 is connected to the pressure sensor 21 and to the locking device 22 to actuate the locking device 22 according to the pressure detected.

Secondo alcune forme di attuazione, il sensore di pressione 21 è disposto in corrispondenza del dispositivo di pressione 64. According to some embodiments, the pressure sensor 21 is arranged in correspondence with the pressure device 64.

Vantaggiosamente, il dispositivo di bloccaggio 22 comprende una valvola di sfiato, la quale è, in particolare, disposta lungo il citato condotto (un primo tratto del condotto 16 e/o un primo tratto del condotto 26). Advantageously, the locking device 22 comprises a vent valve, which is, in particular, arranged along the aforementioned duct (a first portion of the duct 16 and / or a first portion of the duct 26).

Secondo le forme d'attuazione illustrate nelle figure 1 e 2, il dispositivo di bloccaggio 22 è disposto lungo un primo tratto del condotto 16 ed il sensore di pressione 21 è atto a rilevare la pressione all'interno del condotto 16 stesso. According to the embodiments illustrated in Figures 1 and 2, the locking device 22 is arranged along a first portion of the duct 16 and the pressure sensor 21 is able to detect the pressure inside the duct 16 itself.

Secondo alcune non illustrate forme d'attuazione, l'apparato 72 comprende un sensore di pressione per rilevare la pressione in corrispondenza del condotto 26 ed un dispositivo di bloccaggio. Il sensore di pressione ed il dispositivo di bloccaggio sono definiti e disposti in modo analogo a quanto sopradescritto con riferimento al sensore di pressione 21 ed al dispositivo di bloccaggio 22. According to some embodiments not illustrated, the apparatus 72 comprises a pressure sensor for detecting the pressure in correspondence with the duct 26 and a locking device. The pressure sensor and the locking device are defined and arranged in the same way as described above with reference to the pressure sensor 21 and the locking device 22.

Secondo alcune forme di attuazione, l'apparato 72 comprende almeno un dispositivo di vibrazione 17 e/o 17a, il quale è disposto lungo il citato condotto (un primo tratto del condotto 16 e/o un primo tratto del condotto 26) ed è atto a fare variare in modo oscillante la pressione definita dalla sorgente di pressione 15 e/o 25 in corrispondenza del rispettivo foro di alimentazione pressione 63 e/o 63° (figura 3). According to some embodiments, the apparatus 72 comprises at least one vibration device 17 and / or 17a, which is arranged along the aforementioned duct (a first portion of the duct 16 and / or a first portion of the duct 26) and is to cause the pressure defined by the pressure source 15 and / or 25 to vary in an oscillating manner in correspondence with the respective pressure supply hole 63 and / or 63 ° (Figure 3).

Vantaggiosamente, il dispositivo di vibrazione 17 e/o 17a comprende una pompa a diaframma. Advantageously, the vibrating device 17 and / or 17a comprises a diaphragm pump.

Vantaggiosamente, l'apparato 72 comprende due dispositivi di vibrazione 17 e 17a, i quali sono disposti lungo un primo tratto del condotto 16 ed un primo tratto del condotto 26, rispettivamente. I dispositivi di vibrazione 17 e 17a sono atti a fare variare in modo oscillante la pressione definita dalle relative sorgenti di pressioni 15 e 25 in corrispondenza dei fori di alimentazione pressione 63 e 63a, rispettivamente. Advantageously, the apparatus 72 comprises two vibration devices 17 and 17a, which are arranged along a first portion of the duct 16 and a first portion of the duct 26, respectively. The vibrating devices 17 and 17a are adapted to cause the pressure defined by the relative pressure sources 15 and 25 to vary in an oscillating manner in correspondence with the pressure supply holes 63 and 63a, respectively.

Secondo alcune forme d'attuazione, il dispositivo di pressione 87 comprende almeno quattro unità aspiranti 41 collegate, ciascuna, ad un rispettivo ugello di attuatore 36. Le unità aspiranti 41 sono azionabili separatamente una dalle altre e sono atte, ciascuna, ad definire almeno una aspirazione in corrispondenza di un relativo foro 39 attuatore. According to some embodiments, the pressure device 87 comprises at least four suction units 41 each connected to a respective actuator nozzle 36. The suction units 41 can be operated separately from one another and are each capable of defining at least one suction in correspondence with a related actuator hole 39.

Vantaggiosamente, il dispositivo di pressione 87 comprende almeno una sorgente di aspirazione 43. Almeno una delle unità aspiranti 41 comprende un rispettivo condotto 42, il quale collega la sorgente di aspirazione 43 al rispettivo ugello di attuatore 36; ed un dispositivo di bloccaggio (di per sé noto e non illustrato), il quale è atto ad interrompere la trasmissione dell'aspirazione al detto rispettivo ugello attuatore 36. Advantageously, the pressure device 87 comprises at least one suction source 43. At least one of the suction units 41 comprises a respective duct 42, which connects the suction source 43 to the respective actuator nozzle 36; and a locking device (known per se and not illustrated), which is able to interrupt the transmission of the suction to said respective actuator nozzle 36.

Vantaggiosamente, il citato dispositivo di bloccaggio comprende un elemento scelto in un gruppo consistente di: una valvola disposta lungo il condotto 42, ed un azionamento della sorgente di pressione 43, il quale azionamento è atto ad attivare o a disattivare la sorgente di pressione 43 stessa. Advantageously, the aforementioned locking device comprises an element selected from a group consisting of: a valve arranged along the duct 42, and an actuation of the pressure source 43, which actuation is adapted to activate or deactivate the pressure source 43 itself.

Secondo alcune forme di attuazione, almeno uno degli ugelli attuatori 36 comprende (figure 14 e 15) un relativo elemento di pressione meccanico 34 il quale è atto ad esercitare una pressione attraverso il rispettivo foro 39 attuatore verso l'esterno. According to some embodiments, at least one of the actuator nozzles 36 comprises (Figures 14 and 15) a relative mechanical pressure element 34 which is able to exert a pressure through the respective actuator hole 39 towards the outside.

Vantaggiosamente, l'elemento di pressione meccanico 34 comprende una molla, in corrispondenza di una estremità esterna della quale è disposto l'elemento di tenuta 40. Advantageously, the mechanical pressure element 34 comprises a spring, at an outer end of which the sealing element 40 is arranged.

Vantaggiosamente, uno o più degli ugelli attuatori 36 comprende un elemento cavo 37 per alloggiare l'elemento di pressione meccanico 34 e per collegare la rispettiva unità aspirante 41 al relativo foro 39 attuatore. L'elemento cavo 37 è dotata di una estremità presentante il relativo foro 39 attuatore. Advantageously, one or more of the actuator nozzles 36 comprises a hollow element 37 for housing the mechanical pressure element 34 and for connecting the respective suction unit 41 to the relative actuator hole 39. The hollow element 37 is provided with one end having the relative actuator hole 39.

Secondo alcune forme d'attuazione, l'apparato 72 comprende almeno un elemento di pressione meccanico 46 per spingere uno o più degli ugelli attuatori 36 verso il dispositivo microfluidico. Vantaggiosamente, 1' elemento di pressione meccanico 46 comprende (in particolare, è costituito da) una molla. According to some embodiments, the apparatus 72 comprises at least one mechanical pressure element 46 for pushing one or more of the actuator nozzles 36 towards the microfluidic device. Advantageously, the mechanical pressure element 46 comprises (in particular, it consists of) a spring.

Vantaggiosamente, l'apparato 72 comprende una pluralità di elementi di pressione meccanici 46, ciascuno, per spingere un rispettivo ugello attuatore 36 verso il dispositivo microfluidico. Advantageously, the apparatus 72 comprises a plurality of mechanical pressure elements 46, each, for pushing a respective actuator nozzle 36 towards the microfluidic device.

Secondo alcune forme d'attuazione, uno o più (in particolare tutti) degli attuatori fluidodinamici 35 è definito come sopra descritto in relazione al sistema 1. According to some embodiments, one or more (in particular all) of the fluid dynamic actuators 35 is defined as described above in relation to system 1.

Secondo alcune forme d'attuazione, l'apparato 72 comprende almeno un elemento di pressione meccanico 68 e/o 68a per spingere almeno un rispettivo ugello di alimentazione pressione 61 e/o 61a verso il dispositivo microfluidico . According to some embodiments, the apparatus 72 comprises at least one mechanical pressure element 68 and / or 68a for pushing at least one respective pressure supply nozzle 61 and / or 61a towards the microfluidic device.

Secondo alcune forme d'attuazione, l'apparato 72 comprende il gruppo di raffreddamento 50, il quale è atto a raffreddare almeno una parte del dispositivo microfluidico. In particolare, la parte del dispositivo microfluidico da cui viene assorbito calore è l'unità di separazione 3. According to some embodiments, the apparatus 72 comprises the cooling unit 50, which is adapted to cool at least a part of the microfluidic device. In particular, the part of the microfluidic device from which heat is absorbed is the separation unit 3.

Vantaggiosamente, il gruppo di raffreddamento 50 è definito in accordo con quanto descritto in relazione al sistema 1. Advantageously, the cooling unit 50 is defined in accordance with what is described in relation to system 1.

In particolare, il gruppo di raffreddamento 50 comprende un piatto di raffreddamento 51 presentante una superficie attiva 52 atta a assorbire calore dal dispositivo microfluidico; ed una superficie di scarico 53 per cedere calore. La superficie attiva 52 è di dimensioni inferiori alla superficie di scarico 53. In particular, the cooling unit 50 comprises a cooling plate 51 having an active surface 52 suitable for absorbing heat from the microfluidic device; and a discharge surface 53 for releasing heat. The active surface 52 is smaller than the unloading surface 53.

Vantaggiosamente, il gruppo di raffreddamento 50 comprende un Peltier ed un dispositivo scambiatore di calore (in particolare, il circuito 55 di condizionamento) collegato al Peltier. Advantageously, the cooling unit 50 comprises a Peltier and a heat exchanger device (in particular, the conditioning circuit 55) connected to the Peltier.

Vantaggiosamente, l'apparato 72 comprende almeno un (in particolare, una pluralità) elemento di pressione meccanico 60 per spingere il gruppo di raffreddamento 50 verso il dispositivo microfluidico. Advantageously, the apparatus 72 comprises at least one (in particular, a plurality) mechanical pressure element 60 for pushing the cooling unit 50 towards the microfluidic device.

Secondo una forma d'attuazione non illustrata, l'apparato 72 comprende almeno un ulteriore ugello attuatore 36 ed una ulteriore relativa unità aspirante 41. According to an embodiment not shown, the apparatus 72 comprises at least one further actuator nozzle 36 and a further relative suction unit 41.

Secondo alcune forme d'attuazione, il gruppo di controllo 23 è collegato ai dispositivi di pressione 64 e 87 per regolare la pressione e/o l'aspirazione in corrispondenza di ciascun ugello attuatore 36 e/o ciascun ugello di alimentazione pressione 61 in modo indipendente uno dagli altri. According to some embodiments, the control unit 23 is connected to the pressure devices 64 and 87 to regulate the pressure and / or the suction at each actuator nozzle 36 and / or each pressure supply nozzle 61 independently from each other.

Secondo alcune forme d'attuazione, l'apparato 72 comprende un'unità di raccolta per raccogliere un liquido di trasporto contente almeno parte delle particelle CI del tipo determinato. In particolare, l'unità di raccolta comprende una sede 69 (figura 13), la quale è atta ad alloggiare un raccoglitore asportabile (ad esempio una provetta), di tipo di per sé noto e non illustrato, ed è disposta in corrispondenza dell'uscita 8. According to some embodiments, the apparatus 72 comprises a collection unit for collecting a transport liquid containing at least part of the C1 particles of the given type. In particular, the collection unit comprises a seat 69 (Figure 13), which is adapted to house a removable collector (for example a test tube), of a type known per se and not illustrated, and is arranged in correspondence with the exit 8.

Vantaggiosamente, l'apparato 72 comprende un rilevatore per rilevare (ad esempio una telecamera di per sé nota e non illustrata) quando una goccia del detto liquido di trasporto entra nell'unità di raccolta. Advantageously, the apparatus 72 comprises a detector for detecting (for example a camera known per se and not shown) when a drop of said transport liquid enters the collection unit.

Tale rilevatore è collegato al gruppo di controllo 23. In uso, quando il rilevatore avverte il passaggio di una goccia, il gruppo di controllo interrompe il deflusso del liquido di trasporto dalla camera 5 di recupero. This detector is connected to the control unit 23. In use, when the detector senses the passage of a drop, the control unit stops the flow of the transport liquid from the recovery chamber 5.

Secondo alcune forme d'attuazione, parti del dispositivo 73 e/o dell'apparato 72 sono definite, anche solo relativamente ad alcuni aspetti presi separatamente dagli altri, come le parti analoghe del sistema 1 e/o viceversa. According to some embodiments, parts of the device 73 and / or of the apparatus 72 are defined, even if only in relation to some aspects taken separately from the others, such as the analogous parts of the system 1 and / or vice versa.

Dispositivo microfluidico Microfluidic device

Secondo un ulteriore aspetto della presente invenzione, viene fornito un dispositivo 73 per il sostanziale isolamento di particelle CI di almeno un tipo determinato da un campione. Il dispositivo 73 comprende l'ingresso (inlet) 2, attraverso il quale, in uso, il campione viene inserito nel dispositivo 73; un'unità di separazione 3, la quale è atta a separare in modo sostanzialmente selettivo almeno una parte delle particelle CI del tipo determinato da ulteriori particelle C2 del campione; ed un'uscita 8, la quale è collegata all'unità di separazione 3 e attraverso la quale, in uso, almeno parte delle particelle CI del tipo determinato separate in modo sostanzialmente selettivo escono dal dispositivo 73. According to a further aspect of the present invention, a device 73 is provided for the substantial isolation of C1 particles of at least one type determined from a sample. The device 73 comprises the inlet 2, through which, in use, the sample is inserted into the device 73; a separation unit 3, which is adapted to substantially selectively separate at least a part of the particles C1 of the type determined from further particles C2 of the sample; and an outlet 8, which is connected to the separation unit 3 and through which, in use, at least part of the particles C1 of the determined type separated in a substantially selectively way exit the device 73.

Il dispositivo 73 comprende una porzione valvolare 74 disposta tra l'ingresso 2 e l'unità di separazione 3; ed una porzione valvolare 77 disposta tra l'uscita 8 e l'unità di separazione 3. In particolare, il dispositivo 73 comprende una porzione valvolare disposta tra ciascuna apertura del dispositivo 73 verso l'esterno e l'unità di separazione 3. The device 73 comprises a valve portion 74 arranged between the inlet 2 and the separation unit 3; and a valve portion 77 arranged between the outlet 8 and the separation unit 3. In particular, the device 73 comprises a valve portion arranged between each opening of the device 73 towards the outside and the separation unit 3.

Secondo alcune forme d'attuazione, il dispositivo 73 è definito, anche solo relativamente ad alcuni aspetti presi separatamente dagli altri, come in accordo con il quarto aspetto della presente invenzione. According to some embodiments, the device 73 is defined, even only relatively to some aspects taken separately from the others, as in accordance with the fourth aspect of the present invention.

Vantaggi Benefits

È importante sottolineare che la presente invenzione presenta diversi vantaggi, oltre a quelli sopra indicati, rispetto allo stato dell'arte. Tra questi citiamo i seguenti. It is important to underline that the present invention has several advantages, in addition to those indicated above, with respect to the state of the art. Among these we mention the following.

Le particelle CI del tipo determinato possono venire portate nella camera 5 recupero mentre l'unità di separazione 3 è isolata dall'esterno (le valvole 9-10 sono chiuse). In questo modo, viene sostanzialmente impedita l'evaporazione sia della parte liquida del campione che del liquido di trasporto. Evitando l'evaporazione, non si verificano correnti di ritorno dalla camera 5 di recupero alla camera 4 principale (o viceversa) riducendo il rischio che le particelle Cl e/o C2 si muovano in modo non controllato (specificamente, particelle Cl portate nella camera 5 di recupero non tornano della camera 4 principale; analogamente ulteriori cellule C2 non vengono richiamate nella camera 5 di recupero). Inoltre, evitando l'evaporazione, non si verifica un aumento della concentrazione dei sali nell'unità di separazione 3. L'aumento della concentrazioni dei sali può causare aumenti della conducibilità e della dissipazione locale di potenza con problemi relativi (danneggiamento di eventuali elettrodi presenti nelle camere 4 e 5). Particles C1 of the determined type can be brought into the recovery chamber 5 while the separation unit 3 is isolated from the outside (the valves 9-10 are closed). In this way, evaporation of both the liquid part of the sample and the transport liquid is substantially prevented. By avoiding evaporation, no back currents occur from the recovery chamber 5 to the main chamber 4 (or vice versa) reducing the risk that the Cl and / or C2 particles move in an uncontrolled way (specifically, Cl particles brought into the chamber 5 do not return to the main chamber 4; similarly, further C2 cells are not recalled to the recovery chamber 5). Furthermore, avoiding evaporation, there is no increase in the concentration of salts in the separation unit 3. The increase in the concentration of salts can cause increases in conductivity and local power dissipation with relative problems (damage to any electrodes present in rooms 4 and 5).

Le diverse fasi vengono controllate dal gruppo di controllo 23. Ciò determina una maggiore riproducibilità (precedentemente, un operatore inseriva il campione ed il liquido di recupero mediante una pipetta). The different phases are controlled by the control group 23. This results in greater reproducibility (previously, an operator inserted the sample and the recovery liquid using a pipette).

La presenza di anidride carbonica all'interno del dispositivo 73 prima del caricamento del campione riduce il rischio che si formino delle bolle dentro le camere 4 e 5. Le bolle riducono il volume del campione analizzato e possono impedire il recupero delle particelle Cl del tipo determinato soprattutto se si dispongono in corrispondenza del canale 6. The presence of carbon dioxide inside the device 73 before loading the sample reduces the risk of bubbles forming inside chambers 4 and 5. The bubbles reduce the volume of the analyzed sample and can prevent the recovery of the Cl particles of the determined type especially if they are arranged in correspondence with channel 6.

Il campione entra in contatto solo con il dispositivo 73, il quale è vantaggiosamente usa e getta (disposable). In questo modo non è necessario lavare le varie parti del sistema 1 e si riducono drasticamente i rischi di contaminazione tra campioni successivi. A questo riguardo, è importante anche sottolineare che la maggior parte delle componenti attive, più complesse e costose sono disposte nell'apparato 72 che non ha un utilizzo usa e getta. The sample comes into contact only with the device 73, which is advantageously disposable. In this way it is not necessary to wash the various parts of system 1 and the risks of contamination between successive samples are drastically reduced. In this regard, it is also important to point out that most of the active, more complex and expensive components are arranged in the apparatus 72 which is not disposable.

Il sistema 1 presenta piccolissimi volumi morti grazie al fatto che il campione viene mantenuto nel serbatoio 13 molto vicino all'unità di separazione 3. I serbatoi 13 e 14 sono entrambi parti del dispositivo 73. The system 1 has very small dead volumes due to the fact that the sample is kept in the tank 13 very close to the separation unit 3. The tanks 13 and 14 are both parts of the device 73.

Ulteriori caratteristiche della presente invenzione risulteranno dalla descrizione che segue di alcuni esempi meramente illustrativi e non limitativi della realizzazione del dispositivo 73 e del funzionamento del sistema 1. Further characteristics of the present invention will emerge from the following description of some merely illustrative and non-limiting examples of the realization of the device 73 and of the operation of the system 1.

Esempio 1 Example 1

Questo esempio descrive la realizzazione di un chip 91 a base di silicio dell'unità di separazione 3. Il chip è meglio rappresentato nella figura 9 ed in esploso nelle figura 8. This example describes the realization of a silicon-based chip 91 of the separation unit 3. The chip is best represented in Figure 9 and exploded in Figure 8.

Il chip ha una larghezza di 19,9 mm una lunghezza di 24,5 mm ed uno spessore di 1,2 mm e comprende un substrato 92 di silicio (spessore 600μπι); un elemento distanziatore 93, che delimita le camere 4 e 5 ed il canale 6 (spessore 90μπι); ed un coperchio 94 trasparente, in particolare in borosilicato o quarzo (500 μπι). The chip has a width of 19.9 mm, a length of 24.5 mm and a thickness of 1.2 mm and comprises a silicon substrate 92 (thickness 600μπι); a spacer element 93, which delimits the chambers 4 and 5 and the channel 6 (thickness 90μπι); and a transparent lid 94, in particular in borosilicate or quartz (500 μπι).

Il substrato 92 è stato ottenuto utilizzando tecnologie CMOS (Complementary metal oxide semiconductor) standard. Sul substrato 92 è stato laminato a 90° uno strato di foto-polimero (Dryresist<®>in particolare Ordyl SY300, Elga Europe) (spessore 90 μπι). Lo strato di fotopolimero è stato, quindi, parzialmente protetto da una maschera fotolitografica (una trasparenza - slide trasparente stampata con una risoluzione di 24000 DPI) e sottoposto a radiazioni UV (150W) per 15 secondi in modo che le aree dello strato di fotopolimero esposte (vale a dire non coperte dalle parti scure della maschera) polimerizzino . Una volta effettuata selettivamente la polimerizzazione, la parte non polimerizzata è stata rimossa immergendo il substrato laminato in uno sviluppatore (developer) (BMR developer - miscela di xilene, 2-butossietilacetato, miscela di isomeri). Substrate 92 was obtained using standard Complementary metal oxide semiconductor (CMOS) technologies. On the substrate 92 a photo-polymer layer (Dryresist <®> in particular Ordyl SY300, Elga Europe) (thickness 90 μπι) was laminated at 90 °. The photopolymer layer was then partially protected by a photolithographic mask (a transparency - transparent slide printed with a resolution of 24000 DPI) and subjected to UV radiation (150W) for 15 seconds so that the areas of the photopolymer layer exposed (i.e. not covered by the dark parts of the mask) polymerize. Once the polymerization had been selectively carried out, the uncured part was removed by immersing the laminated substrate in a developer (BMR developer - mixture of xylene, 2-butoxyethyl acetate, mixture of isomers).

A questo punto, il substrato 91 con il relativo elemento distanziatore 93 così ottenuto è stato messo in un forno a 50°C per 1 ora per ottenere un essiccamento. At this point, the substrate 91 with the relative spacer element 93 thus obtained was placed in an oven at 50 ° C for 1 hour to obtain drying.

Il coperchio 94 (in vetro) (spessore 500μπι) è stato realizzato mediante fresatura. I fori del coperchio 94 presentavano una forma tronco-conica con la parte inferiore avente diametro di 700 μπι e la parte superiore avente diametro di 1200 μπι. The lid 94 (glass) (thickness 500μπι) was made by milling. The holes in the lid 94 had a truncated conical shape with the lower part having a diameter of 700 μπι and the upper part having a diameter of 1200 μπι.

Il coperchio 94 è stato premuto contro l'elemento distanziatore 8 per 80 minuti alla temperatura di 95°C per ottenere un legame termico. The lid 94 was pressed against the spacer element 8 for 80 minutes at a temperature of 95 ° C to obtain a thermal bond.

Esempio 2 Example 2

Questo esempio descrive un PCB 95 (Printed Circuit Board) parzialmente illustrato in prospettiva nella figura 4. This example describes a PCB 95 (Printed Circuit Board) partially illustrated in perspective in Figure 4.

Il PCB 95 comprende quattro strati di rame preparati utilizzando tecniche foto-litogrfiche di tipo noto (si veda ad esempio l'esempio precedente). PCB 95 comprises four copper layers prepared using known photo-lithographic techniques (see for example the previous example).

Il PCB 95 presenta una struttura principale in materiale composito di polimero epossidico e fibra di vetro. La forma del PCB 95 illustrata nella figura 4 viene ottenuta fresando la struttura principale. PCB 95 has a main structure in composite material of epoxy polymer and glass fiber. The shape of the PCB 95 illustrated in Figure 4 is obtained by milling the main structure.

Gli strati di rame sono annegati nella struttura principale e sono esposti verso l'esterno con quattrocento piastre (pad) orientate (nella figura 4) verso l'alto (vale a dire verso il chip 91) e disposte (duecento, in corrispondenza della zona indicata con la freccia 96 e, duecento, in corrispondenza della zona indicata dalla freccia 97) da bande opposte di un'apertura 98 del PCB 95 stesso. The copper layers are embedded in the main structure and are exposed to the outside with four hundred plates (pads) oriented (in figure 4) upwards (i.e. towards chip 91) and arranged (two hundred, corresponding to the area indicated with the arrow 96 and, two hundred, in correspondence with the area indicated by the arrow 97) from opposite bands of an opening 98 of the PCB 95 itself.

Queste piastre sono elettricamente collegate ad ulteriori quattrocento piastre (pad) orientate (nella figura 4) verso il basso; duecento delle ulteriori piastre sono disposte in corrispondenza di un bordo del PCB nella zona indicata dalla freccia 99; duecento delle ulteriori piastre sono disposte in corrispondenza di un bordo del PCB 95 nella zona indicata dalla freccia 100. These plates are electrically connected to a further four hundred pads oriented (in figure 4) downwards; two hundred of the further plates are arranged at one edge of the PCB in the area indicated by the arrow 99; two hundred of the further plates are arranged at one edge of the PCB 95 in the area indicated by the arrow 100.

Le piastre disposte in corrispondenza delle zone 96 e 97 sono rivestite d'oro atte a collegare elettricamente il PCB 95 al chip 91. The plates arranged in correspondence of the zones 96 and 97 are coated with gold suitable for electrically connecting the PCB 95 to the chip 91.

Le piastre disposte in corrispondenza delle zone 98 e 99 sono rivestite d'oro e fungono da connettori elettrici per collegare elettricamente il dispositivo 73 all'apparato 72 ed, in particolare, al gruppo di controllo 23. The plates arranged in correspondence with the zones 98 and 99 are coated with gold and act as electrical connectors to electrically connect the device 73 to the apparatus 72 and, in particular, to the control unit 23.

Il PCB 95 presentava uno spessore di circa 1,6 mm. Esempio 3 PCB 95 was about 1.6mm thick. Example 3

Questo esempio descrive il collegamento tra il chip 91 ed il PCB 95. This example describes the connection between chip 91 and PCB 95.

Il chip 91 è stato allineato al centro del PCB 95 utilizzando un dispositivo "pick & place" ed incollato sul PCB 95 stesso con un adesivo. Chip 91 was aligned in the center of PCB 95 using a "pick & place" device and glued onto PCB 95 itself with an adhesive.

Le quattrocento piastre del PCB 95 disposte in corrispondenza delle zone 96 e 97 sono state collegate al chip 91 mediante tecniche note di "wire bonding" con fili di alluminio, ciascuno dei quali collegava una rispettiva piastra ad un lato 101 o 101a del chip 95. I fili sono stati, quindi, ricoperti con una resina epossidica che è stata fatta polimerizzare in modo da proteggere i fili stessi. The four hundred plates of the PCB 95 arranged at the zones 96 and 97 were connected to the chip 91 by known "wire bonding" techniques with aluminum wires, each of which connected a respective plate to a side 101 or 101a of the chip 95. The threads were then covered with an epoxy resin which was cured in order to protect the threads themselves.

A questo punto, un ΙμΒ di vernice contenente argento è stata introdotta in ciascuna di quattro camere 102 (figura 9) disposte in corrispondenza degli angolo del chip 91 attraverso quattro dei fori del coperchio 94 (tali fori sono indicati nelle figure 8 e 9 con il numero 103). La vernice è stata utilizzata per creare un collegamento elettrico tra il substrato 92 di silicio ed il coperchio 94. At this point, a ΙμΒ of silver-containing paint was introduced into each of four chambers 102 (Figure 9) arranged at the corners of the chip 91 through four of the holes in the lid 94 (these holes are indicated in Figures 8 and 9 with the number 103). The paint was used to create an electrical connection between the silicon substrate 92 and the lid 94.

Le figure 29 e 30 illustrano una variante del chip 91, Tale variante è producibile ed assemblabile in modo da ottenere il dispositivo 73 illustrato nella figura 31 in maniera analoga a quanto descritto negli esempi da 1 a 3. Figures 29 and 30 illustrate a variant of the chip 91. This variant can be manufactured and assembled in such a way as to obtain the device 73 illustrated in Figure 31 in a similar way to what is described in examples 1 to 3.

Esempio 4 Example 4

Questo esempio descrive la realizzazione di un piatto 104 intermedio di PMMA, un piatto 105 superiore di plexiglass, ed un piatto 106 di supporto di plexiglass (figura 4). This example describes the making of an intermediate plate 104 of PMMA, an upper plate 105 of plexiglass, and a support plate 106 of plexiglass (Figure 4).

I piatti 104, 105 e 106 presentavano uno spessore di circa 1 mm e sono ottenuti mediante fresatura. Dopo la fresatura è stata effettuata una satinatura per rimuovere le bave derivanti dalla fresatura. I piatti 104, 105 e 106 sono stati quindi lavati con bagno ultrasonico. The plates 104, 105 and 106 had a thickness of about 1 mm and are obtained by milling. After the milling, a satin finish was carried out to remove the burrs deriving from the milling. The dishes 104, 105 and 106 were then washed with an ultrasonic bath.

Il piatto 104 è illustrato dall'alto nella figura 5 e dal basso nelle figura 6. Come si può facilmente notare, sulla superficie superiore del piatto 104 (figura 5) sono stati ricavati parte dei canali (ad esempio 78, 80, 81), i serbatoi (ad esempio 13, Ί' e 14) ed i fori (ad esempio 79, 82, 107, 107', 107" e 108) del dispositivo 73. I fori 107 sono fori passanti attraverso l'intero spessore del piatto 104 e sono a coppie elementi componenti delle porzioni valvolari 74, 75, 76 e 77 (figura 21). Il foro 108 è disposto in corrispondenza dell'uscita 8; attraverso il foro 108, in uso, defluisce il liquido di trasporto assieme alle particelle C2. I fori 107' e 107'' sono fori passanti di collegamento al chip 91. The plate 104 is shown from the top in figure 5 and from the bottom in figure 6. As can easily be seen, on the upper surface of the plate 104 (figure 5) part of the channels have been obtained (for example 78, 80, 81), the tanks (for example 13, Ί 'and 14) and the holes (for example 79, 82, 107, 107', 107 "and 108) of the device 73. The holes 107 are holes passing through the entire thickness of the plate 104 and the component elements of the valve portions 74, 75, 76 and 77 are in pairs (Figure 21). The hole 108 is arranged in correspondence with the outlet 8; through the hole 108, in use, the transport liquid flows together with the particles C2 . Holes 107 'and 107' 'are through holes for connection to chip 91.

Sulla superficie inferiore del piatto 104 attorno a ciascuna coppia dei fori 107 ed attorno al foro 108 è disposta una rispettiva cavità 109. Ciascuna cavità è di forma anulare e presenta un diametro di circa 0,5 mm ed una profondità di circa 0,25 mm. La presenza delle cavità 109 riduce l'area che gli elementi di chiusura 30 e l'anello di tenuta 70 devono premere per rimanere in tenuta (per quanto riguarda gli elementi di chiusura 30 per chiudere i fori 107). A respective cavity 109 is arranged on the lower surface of the plate 104 around each pair of holes 107 and around the hole 108. Each cavity is annular in shape and has a diameter of about 0.5 mm and a depth of about 0.25 mm. . The presence of the cavities 109 reduces the area that the closing elements 30 and the sealing ring 70 must press in order to remain sealed (as regards the closing elements 30 to close the holes 107).

I piatti 104, 105 e 106 presentavano rispettivi fori 109 passanti. Durante l'assemblaggio del dispositivo 75, i piatti 104, 105 e 106 sono stati disposti in modo che aste lineari fisse si estendessero attraverso i fori 110, in questo modo è possibile allineare con precisione i piatti 104, 105 e 106. I piatti 104, 105 e 106 presentavano rispettive aperture centrali attraverso le quale, una volta assemblato il dispositivo 73, era possibile osservare il contenuto delle camere 4 e 5. The plates 104, 105 and 106 had respective through holes 109. During the assembly of the device 75, the plates 104, 105 and 106 were arranged so that fixed linear rods extended through the holes 110, in this way it is possible to precisely align the plates 104, 105 and 106. The plates 104 , 105 and 106 had respective central openings through which, once the device 73 was assembled, it was possible to observe the contents of the chambers 4 and 5.

Il piatto 106 presenta delle aperture 111 che, una volta assemblato il dispositivo 73 permettono l'esposizione verso l'esterno degli elementi di chiusura 30 e degli anelli di tenuta 66 e 70. Attorno a ciascuna apertura 111 è disposta una rispettiva cavità anulare che permette un migliore posizionamento ed una migliore tenuta degli elementi di chiusura 30 e degli anelli di tenuta 66 e 70. In pratica, tali cavità fungono da alloggiamenti per gli elementi di chiusura 30 e gli anelli di tenuta 66 e 70. The plate 106 has openings 111 which, once the device 73 has been assembled, allow the closure elements 30 and the sealing rings 66 and 70 to be exposed towards the outside. A respective annular cavity is arranged around each opening 111 which allows better positioning and better sealing of the closing elements 30 and the sealing rings 66 and 70. In practice, these cavities act as housings for the closing elements 30 and the sealing rings 66 and 70.

Anche i menzionati canali, serbatoi, cavità, aperture e fori sono stati ricavati per microfresatura. The aforementioned channels, tanks, cavities, openings and holes were also obtained by micro-milling.

Le figure 32 e 33 illustrano una variante del piatto 104. In questo caso, ciascuna cavità 109 presenta una canale 119 perimetrale, il quale è, in particolare, sostanzialmente circolare. Per ciascuna porzione valvolare 74, 75, 76 e 77, un foro 107 è disposto in corrispondenza del canale 119 ed un foro 107 è disposto nella cavità 109 fuori dal canale 119. Questa particolare configurazione permette di ridurre le perturbazioni (in particolare, movimento - aspirazione - di fluido) durante l'apertura della valvola V (figure 14 e 15). L'apertura della valvola V è relativamente graduale e, quindi, la depressione che si crea in corrispondenza della valvola V stessa durante l'apertura è relativamente bassa. Figures 32 and 33 illustrate a variant of the plate 104. In this case, each cavity 109 has a perimeter channel 119, which is, in particular, substantially circular. For each valve portion 74, 75, 76 and 77, a hole 107 is arranged in correspondence with the channel 119 and a hole 107 is arranged in the cavity 109 outside the channel 119. This particular configuration allows to reduce perturbations (in particular, movement - suction - of fluid) when opening valve V (figures 14 and 15). The opening of the valve V is relatively gradual and, therefore, the depression which is created in correspondence with the valve V itself during opening is relatively low.

Esempio 5 Example 5

Gli elementi di chiusura 30, gli anelli di tenuta 66 e 70 ed un elemento di collegamento 112 sono stati ottenuti per mezzo di tecniche di per sé note di stampaggio ad iniezione. Il materiale utilizzato è stato l'Elastosil<®>trattato in modo da ottenere un grado di durezza di 60 shore per gli elementi di chiusura 30 e 50 shore per gli anelli di tenuta 66 e 70 e l'elemento di collegamento 112. The closing elements 30, the sealing rings 66 and 70 and a connecting element 112 have been obtained by means of per se known injection molding techniques. The material used was Elastosil <®> treated in such a way as to obtain a degree of hardness of 60 shore for the closing elements 30 and 50 shore for the sealing rings 66 and 70 and the connecting element 112.

L'elemento di collegamento 112 presentava un'apertura centrale 113 e dei fori 114 passanti, i quali, una volta assemblato il dispositivo 73 collegano il chip 91 al piatto 104. In particolare, i fori 114 collegano i fori 107' con fori 115 del substrato 92 ed i fori 107'' con fori 116 del substrato 92. The connecting element 112 had a central opening 113 and through holes 114, which, once the device 73 has been assembled, connect the chip 91 to the plate 104. In particular, the holes 114 connect the holes 107 'with the holes 115 of the substrate 92 and the holes 107 '' with holes 116 of the substrate 92.

Esempio 6 Example 6

Questo esempio descrive l'assemblaggio delle diverse componenti sopradescritte per ottenere il dispositivo 73. Come già accennato, per allineare i diversi componenti sono state utilizzate delle aste lineari fisse. This example describes the assembly of the various components described above to obtain the device 73. As already mentioned, fixed linear rods were used to align the various components.

I piatti 104 e 105 sono stati collegati legame ad etanolo. Plates 104 and 105 were bonded to ethanol.

Uno strato 117 di biadesivo (Duplobond<®>della Elcom SpA - 0,325 mm di spessore) è stato applicato sulla faccia superiore del piatto 106. Lo strato 117 di biadesivo adeguatamente conformato (in particolare con un apertura centrale e dei fori corrispondenti ai fori 110) era stato, ad esempio, ottenuto da un nastro continuo che era stato tagliato mediante laser od una fustellatrice. A layer 117 of double-sided adhesive (Duplobond <®> by Elcom SpA - 0.325 mm thick) was applied on the upper face of the plate 106. The layer 117 of suitably shaped double-sided adhesive (in particular with a central opening and holes corresponding to the holes 110 ) had been, for example, obtained from a continuous ribbon that had been cut by laser or a die-cutter.

Gli elementi di chiusura 30, gli anelli di tenuta 66 e 70 e l'elemento di collegamento 111 sono stati montati sul piatto 106. A questo punto, uno strato di organosilano è stato depositato sulla superficie inferiore del piatto 104 ed è stato rimosso selettivamente mediante plasma per effettuare un legame solo dove necessario (un metodo di legame selettivo tra gli elementi di silicone ed il PMMA -polimetilmetacrilato - è descritto nella domanda di brevetto IT B02007A000588 il cui contenuto viene qui completamente richiamato per completezza di descrizione). In particolare, l'organo silano è stato rimosso o non è stato applicato in corrispondenza dei fori di alimentazione 79 e 82 e dei fori 107, 107' e 107''. Gli elementi di chiusura 30, gli anelli di tenuta 66 e 70 e l'elemento di collegamento 111 sono stati attivati mediante plasma. I piatti 104 e 106 sono stati portati in contatto e pressati uno contro l'altro. The closing elements 30, the sealing rings 66 and 70 and the connecting element 111 were mounted on the plate 106. At this point, a layer of organosilane was deposited on the lower surface of the plate 104 and was selectively removed by means of plasma to make a bond only where necessary (a selective bonding method between the silicone elements and the PMMA -polymethylmethacrylate - is described in the IT patent application B02007A000588, the content of which is referred to here completely for the sake of completeness of description). In particular, the silane member has been removed or has not been applied in correspondence with the feed holes 79 and 82 and the holes 107, 107 'and 107' '. The closing elements 30, the sealing rings 66 and 70 and the connecting element 111 were activated by plasma. Plates 104 and 106 were brought into contact and pressed against each other.

A questo punto, un'ulteriore strato 118 di biadesivo (Duplobond<®>della Lohmann SpA - 0,325 mm di spessore) è stato applicato sulla faccia inferiore del piatto 106. At this point, a further layer 118 of double-sided adhesive (Duplobond <®> by Lohmann SpA - 0.325 mm thick) was applied on the lower face of the plate 106.

Il piatto 106 è stato, quindi pressato contro la faccia superiore del PCB 95, sulla quale faccia era già stato montato il chip 91. Plate 106 was then pressed against the top face of PCB 95, on which face chip 91 had already been mounted.

Esempio 7 Example 7

Questo esempio descrive delle prove effettuate per ottimizzare il funzionamento del sistema 1. This example describes tests carried out to optimize the operation of system 1.

La sedimentazione delle particelle Cl e/o C2 rappresenta una delle cause dell'adesione delle particelle nel serbatoio 13 e/o nel condotto 78. The sedimentation of the particles Cl and / or C2 represents one of the causes of the adhesion of the particles in the tank 13 and / or in the duct 78.

Solitamente, prima che il campione venga inserito nella camera 4, il campione stesso rimane nel serbatoio 13 per parecchio tempo (in particolare, approssimativamente per mezz'ora). Durante questo periodo, le particelle Cl e C2 si depositano sul fondo del serbatoio. Per staccare le particelle dal fondo è solitamente necessaria un'elevata forza. Inoltre, le particelle Cl e C2 si spostano generalmente più lentamente della parte liquida del campione all'interno della camera 4. Pertanto, le particelle Cl e C2 entrano nella camera 4 quando la camera 4 è già stata almeno in parte occupata dalla parte liquida del campione e riescono a distribuirsi solo nella parte centrale della camera 4 e non in modo uniforme (non riescono a raggiungere le parti periferiche angolari della camera 4). Si noti che c'è anche il forte rischio che non tutte le particelle Cl e C2 raggiungano la camera 4. Usually, before the sample is inserted into the chamber 4, the sample itself remains in the tank 13 for a long time (in particular, approximately half an hour). During this time, the Cl and C2 particles settle to the bottom of the tank. A high force is usually required to detach the particles from the bottom. Furthermore, the particles Cl and C2 generally move more slowly than the liquid part of the sample inside the chamber 4. Therefore, the particles Cl and C2 enter the chamber 4 when the chamber 4 has already been at least partially occupied by the liquid part of the sample and are able to distribute themselves only in the central part of chamber 4 and not uniformly (they cannot reach the peripheral angular parts of chamber 4). Note that there is also a strong risk that not all Cl and C2 particles reach chamber 4.

La non uniforme distribuzione delle particelle Cl e C2 all'interno della camera 4 rende più difficoltosa la separazione delle particelle CI dalla particelle C2 ed il trasferimento delle particelle CI stesse nella camera 5. The non-uniform distribution of the Cl and C2 particles inside the chamber 4 makes the separation of the Cl particles from the C2 particles and the transfer of the Cl particles into the chamber 5 more difficult.

Sono state, pertanto, effettuate due prove di caricamento della camera 4 mantenendo spento ed azionato (ad una frequenza di 30Hz), rispettivamente, il dispositivo di vibrazione 17 (comprendente una micropompa Thinxxs<®>MDP2205 cortocircuitata) . Therefore, two loading tests of the chamber 4 were carried out, keeping the vibration device 17 (comprising a short-circuited Thinxxs <®> MDP2205 micropump) turned off and activated (at a frequency of 30Hz).

I campioni utilizzati sono stati preparati utilizzando una cultura di cellule K562 (la concentrazione dei campioni era di circa 1250 particelle^ L) marcate con DAPI. The samples used were prepared using a culture of K562 cells (the concentration of the samples was approximately 1250 ^ L particles) labeled with DAPI.

I risultati delle prove con il dispositivo di vibrazione 17 disattivato sono illustrati nelle fotografie della colonna sinistra della figura 22. I risultati delle prove con il dispositivo di vibrazione 17 attivato sono illustrati nelle fotografie della colonna destra della figura 22. Le fotografie sono state effettuate in diverse condizioni ottiche. The results of the tests with the vibration device 17 deactivated are illustrated in the photographs in the left column of Figure 22. The results of the tests with the vibration device 17 activated are illustrated in the photographs in the right column of Figure 22. The photographs were taken in different optical conditions.

Come si può facilmente notare, quando il dispositivo di vibrazione 17 è stato attivato le particelle Ci e C2 si sono distribuite in modo più omogeneo anche all'interno degli angoli della camera 4 portando ad una rilevante riduzione dei volumi morti. As can easily be seen, when the vibration device 17 was activated, the particles C1 and C2 were distributed more homogeneously also inside the corners of the chamber 4, leading to a significant reduction in dead volumes.

Claims (1)

R IV E N D ICA Z IO N I 1.- Sistema microfluidico per l'isolamento di particelle (Cl) di almeno un tipo determinato da un campione; il sistema (1) comprendendo un primo ingresso (2) (inlet), attraverso il quale, in uso, il campione viene inserito nel sistema (1); un'unità di separazione (3), la quale comprende una camera (4) principale ed una camera (5) di recupero ed è atta a trasferire almeno parte delle particelle (Cl) del tipo determinato dalla camera (4) principale alla camera (5) di recupero in modo sostanzialmente selettivo rispetto ad ulteriori particelle (C2) del campione; una prima uscita (7) collegata alla camera (4) principale; ed una seconda uscita (8), la quale è collegata alla camera (5) di recupero, attraverso la quale, in uso, almeno parte delle particelle (Cl) del tipo determinato raccolte nella camera (5) di recupero escono dal sistema (1); il sistema (1) essendo caratterizzato dal fatto di comprendere un prima valvola (9) disposta a monte della camera (4) principale; una seconda valvola (10) disposta tra la camera (4) principale e la prima uscita (7); una terza valvola (11) disposta a monte della camera (5) di recupero; una quarta valvola (12) disposta tra la camera (5) di recupero e la seconda uscita (8); ed un gruppo di raffreddamento (50), il quale è atto a raffreddare almeno parte dell'unità di separazione (3). 2.- Sistema secondo la rivendicazione 1, in cui il gruppo di raffreddamento (50) comprende un piatto di raffreddamento (51) presentante una superficie attiva (52) atta a assorbire calore dall'unità di separazione (3); ed una superficie di scarico (53) per cedere calore; la superficie attiva (52) essendo di dimensioni inferiori alla superficie di scarico (53). 3.- Sistema secondo la rivendicazione 1 o 2, e comprendente un terzo elemento di pressione meccanico (60) per spingere il gruppo di raffreddamento (50) verso l'unità di separazione (3). 4.- Sistema secondo una delle rivendicazioni precedenti, in cui l'unità di separazione (3) comprende un sistema di dielettroforesi; il gruppo di raffreddamento (50) è atto a raffreddare almeno parte del sistema di dielettroforesi. 5.- Sistema secondo una delle rivendicazioni precedenti, in cui la prima e la seconda valvola (9, 10) sono atte a regolare l'afflusso del campione alla camera (4) principale; la terza e la quarta valvola (11, 12) essendo atte a regolare l'afflusso di liquido di trasporto (carrier liquid) alla camera (5) di recupero ed il deflusso del liquido di trasporto assieme alle particelle (Cl) del tipo determinato dalla camera (5) di recupero attraverso la seconda uscita (8). 6.- Sistema secondo una delle rivendicazioni precedenti, e comprendente un primo serbatoio (13) (reservoir), il quale è disposto tra il primo ingresso (2) e la prima valvola (9) ed è atto a raccogliere il campione inserito attraverso il primo ingresso (2). 7.- Sistema secondo una delle rivendicazioni precedenti, in cui la prima valvola (9) è disposta tra il primo ingresso (2) e la camera (4) principale, in particolare tra il primo serbatoio (13) e la camera principale (4), ed è atta a collegare o isolare il primo ingresso (2) e la camera (4) principale uno rispetto all'altra. 8.- Sistema secondo una delle rivendicazioni precedenti, e comprendente un secondo serbatoio (14) (reservoir) per contenere il liquido di trasporto (carrier liquid), che è atto a riempire la camera (5) di recupero. 9.- Sistema secondo la rivendicazione 8, e comprendente un secondo ingresso (24); il secondo serbatoio (14) essendo disposto tra il secondo ingresso (24) e la terza valvola (11) ed essendo atto a raccogliere il liquido di trasporto inserito attraverso il secondo ingresso (24). 10.- Sistema secondo la rivendicazione 8 o 9, in cui la terza valvola (11) è disposta tra il secondo serbatoio (14) e la camera (5) di recupero ed è atta a collegare o isolare il secondo serbatoio (14) e la camera (5) di recupero uno rispetto all'altra .R IV E N D ICA C IO N I 1.- Microfluidic system for the isolation of particles (Cl) of at least one type determined by a sample; the system (1) comprising a first inlet (2) (inlet), through which, in use, the sample is inserted into the system (1); a separation unit (3), which comprises a main chamber (4) and a recovery chamber (5) and is able to transfer at least part of the particles (Cl) of the type determined from the main chamber (4) to the chamber ( 5) recovering in a substantially selective manner with respect to further particles (C2) of the sample; a first outlet (7) connected to the main chamber (4); and a second outlet (8), which is connected to the recovery chamber (5), through which, in use, at least part of the particles (Cl) of the given type collected in the recovery chamber (5) leave the system (1 ); the system (1) being characterized in that it comprises a first valve (9) arranged upstream of the main chamber (4); a second valve (10) arranged between the main chamber (4) and the first outlet (7); a third valve (11) arranged upstream of the recovery chamber (5); a fourth valve (12) arranged between the recovery chamber (5) and the second outlet (8); and a cooling unit (50), which is adapted to cool at least part of the separation unit (3). 2. A system according to Claim 1, wherein the cooling unit (50) comprises a cooling plate (51) having an active surface (52) capable of absorbing heat from the separation unit (3); and a discharge surface (53) for releasing heat; the active surface (52) being smaller than the discharge surface (53). 3. A system according to Claim 1 or 2, and comprising a third mechanical pressure element (60) for pushing the cooling unit (50) towards the separation unit (3). 4.- System according to one of the preceding claims, wherein the separation unit (3) comprises a dielectrophoresis system; the cooling unit (50) is able to cool at least part of the dielectrophoresis system. 5. A system according to one of the preceding claims, in which the first and second valves (9, 10) are adapted to regulate the flow of the sample to the main chamber (4); the third and fourth valves (11, 12) being able to regulate the flow of carrier liquid to the recovery chamber (5) and the outflow of the transport liquid together with the particles (Cl) of the type determined by recovery chamber (5) through the second outlet (8). 6.- System according to one of the preceding claims, and comprising a first tank (13) (reservoir), which is arranged between the first inlet (2) and the first valve (9) and is adapted to collect the sample inserted through the first entrance (2). 7.- System according to one of the preceding claims, in which the first valve (9) is arranged between the first inlet (2) and the main chamber (4), in particular between the first tank (13) and the main chamber (4 ), and is adapted to connect or isolate the first input (2) and the main chamber (4) from each other. 8. A system according to one of the preceding claims, and comprising a second tank (14) (reservoir) for containing the carrier liquid, which is adapted to fill the recovery chamber (5). 9. A system according to Claim 8, and comprising a second inlet (24); the second tank (14) being arranged between the second inlet (24) and the third valve (11) and being able to collect the transport liquid introduced through the second inlet (24). 10.- System according to Claim 8 or 9, in which the third valve (11) is arranged between the second tank (14) and the recovery chamber (5) and is adapted to connect or isolate the second tank (14) and the recovery chamber (5) with respect to each other.
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