ITAN20120037U1 - DEVICE FOR STANDARDIZING THE IN VITRO EXECUTION OF THE SYNERGY TEST OF TWO ANTIBIOTICS BY USING THE GRADIENT STRIP WITH THE CROSSING METHOD - Google Patents

DEVICE FOR STANDARDIZING THE IN VITRO EXECUTION OF THE SYNERGY TEST OF TWO ANTIBIOTICS BY USING THE GRADIENT STRIP WITH THE CROSSING METHOD

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ITAN20120037U1
ITAN20120037U1 ITAN20120037U ITAN20120037U1 IT AN20120037 U1 ITAN20120037 U1 IT AN20120037U1 IT AN20120037 U ITAN20120037 U IT AN20120037U IT AN20120037 U1 ITAN20120037 U1 IT AN20120037U1
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Silvio Brocco
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Description

Titolo: Dispositivo per standardizzare l’esecuzione in vitro del test di sinergia di due antibiotici tramite l’utilizzo della striscia a gradiente con metodo dell’incrocio. Title: Device to standardize the in vitro execution of the synergy test of two antibiotics through the use of the gradient strip with the crossing method.

Descrizione Description

Campo dell'Invenzione Field of the Invention

La presente invenzione riguarda il settore delle analisi microbiologiche e più specificamente concerne un dispositivo che serve ad incrociare in maniera standardizzata e perfettamente a 90° due strisce graduate di carta ciascuna impregnata con un gradiente di concentrazione predefinita di un agente antimicrobico al fine di valutare il loro effetto sinergico della minima concentrazione inibente (MIC) su un terreno di coltura batterico. The present invention relates to the field of microbiological analyzes and more specifically concerns a device which serves to cross in a standardized manner and perfectly at 90 ° two graduated strips of paper each impregnated with a predefined concentration gradient of an antimicrobial agent in order to evaluate their synergistic effect of the minimal inhibitory concentration (MIC) on a bacterial culture medium.

Background dell'Invenzione Background of the Invention

In medicina, per combattere un germe resistente, capita sovente di dover somministrare ad un paziente contemporaneamente due o più antibiotici, per cui preventivamente è necessario effettuare un test di sinergia per verificare la loro compatibilità ed il loro effetto associato. In medicine, to fight a resistant germ, it often happens that a patient has to be administered two or more antibiotics at the same time, so a synergy test must be performed in advance to verify their compatibility and their associated effect.

Il test di sinergia di due antibiotici effettuato su un terreno di coltura batterico è infatti necessario per verificare: The synergy test of two antibiotics carried out on a bacterial culture medium is in fact necessary to verify:

- un effetto di antagonismo dei due antibiotici da somministrare al paziente, nel senso che le due molecole di antibiotico combinate insieme producono un effetto minore piuttosto che se considerate singolarmente; - an antagonistic effect of the two antibiotics to be administered to the patient, in the sense that the two antibiotic molecules combined together produce a lesser effect than if considered individually;

- un effetto di sinergia dei due antibiotici da somministrare al paziente, nel senso che le due molecole di antibiotico combinate insieme producono un effetto maggiore della somma dei singoli effetti delle due molecole; - a synergy effect of the two antibiotics to be administered to the patient, in the sense that the two antibiotic molecules combined together produce an effect greater than the sum of the single effects of the two molecules;

- un effetto di additività dei due antibiotici da somministrare al paziente, nel senso che le due molecole di antibiotico combinate insieme producono un effetto che è uguale alla somma dei singoli effetti delle due molecole; - an additivity effect of the two antibiotics to be administered to the patient, in the sense that the two antibiotic molecules combined together produce an effect which is equal to the sum of the single effects of the two molecules;

- un effetto indifferente dei due antibiotici da somministrare al paziente, che si ha quando le due molecole di antibiotico, anche se combinate insieme, non danno un effetto di miglioria piuttosto che se considerate singolarmente. - an indifferent effect of the two antibiotics to be administered to the patient, which occurs when the two antibiotic molecules, even if combined together, do not give an improvement effect rather than if considered individually.

Allo stato deH’arte esistono differenti metodologie di test di sinergia tra molecole antibiotiche: time-kill in macrodiluzione in brodo ', checkerboard in microdiluizione in brodo , sostituzione di strisce a gradiente antimicrobico su coltura microbica tramite agar diffusione , incrocio di strisce a gradiente antimicrobico su coltura microbica tramite agar diffusione<4>. At the state of the art, there are different methods of synergy test between antibiotic molecules: time-kill in macrodilution in broth, checkerboard in microdilution in broth, replacement of antimicrobial gradient strips on microbial culture through diffusion agar, crossing of antimicrobial gradient strips on microbial culture via diffusion agar <4>.

<l>'<2>'<4>Comparison of three different in vitro methods of detecting synergy: timekill, checkerboard, and Etest. <l> '<2>' <4> Comparison of three different in vitro methods of detecting synergy: timekill, checkerboard, and Etest.

R L White, D S Burgess, M Manduru and J A Bosso Antimicrob. Agents Chemother. 1996, 40(8):1914. R L White, D S Burgess, M Manduru and J A Bosso Antimicrob. Agents Chemother. 1996, 40 (8): 1914.

’ ’ Comparison of Etest, chequerboard dilution and time-kill studies for thè detection of synergy or antagonism between antifungal agents tested against Candida species. ’’ Comparison of Etest, chequerboard dilution and time-kill studies for the detection of synergy or antagonism between antifungal agents tested against Candida species.

Lewis, R., Diekema, D., Messer, S., Pfaller, M. and Klepser, M. (2002). JAC. Lewis, R., Diekema, D., Messer, S., Pfaller, M. and Klepser, M. (2002). JAC.

49: 345- 351. 49: 345- 351.

La determinazione della minima concentrazione inibente (MIC) di un agente antimicrobico verso un microrganismo tramite l'utilizzo di strisce graduate impregnate con gradiente antimicrobico consiste nel depositare una striscia, realizzata in materiale poroso o non poroso, su una popolazione microbica su un terreno di coltura agarizzato. La striscia rilascia l'antibiotico secondo il gradiente prestabilito e, dopo un'incubazione di 18 ore o più, si può osservare una zona di inibizione ellittica, simmetrica e centrata lungo la striscia. The determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) of an antimicrobial agent towards a microorganism through the use of graduated strips impregnated with an antimicrobial gradient consists in depositing a strip, made of porous or non-porous material, on a microbial population on a culture medium agarized. The strip releases the antibiotic according to the predetermined gradient and, after an incubation of 18 hours or more, an elliptical, symmetrical and centered zone of inhibition along the strip can be observed.

Il valore di MIC, espressa in pg/mL, viene letto nel punto di intersezione tra il bordo dell'ellisse di inibizione e la striscia. The MIC value, expressed in pg / mL, is read at the intersection point between the edge of the inhibition ellipse and the strip.

Il test di sinergia di due agenti antimicrobici tramite l'utilizzo della striscia a gradiente con metodo dell'incrocio delle strisce su terreno di coltura microbico prevede dapprima la determinazione della MIC per ciascun antibiotico; successivamente le strisce dei due antibiotici si dispongono perpendicolarmente sulla coltura batterica. L'incrocio tra le due strisce deve avvenire in corrispondenza dei valori della MIC dei singoli agenti antimicrobici, precedentemente determinati. Dopo l'incubazione si valuta la nuova MIC di ciascun antibiotico e il loro effetto combinato si calcola tramite il seguente algoritmo<5,6>: The synergy test of two antimicrobial agents through the use of the gradient strip with the crossing method of the strips on microbial culture medium first involves the determination of the MIC for each antibiotic; subsequently the strips of the two antibiotics are arranged perpendicularly on the bacterial culture. The crossing between the two strips must occur in correspondence with the MIC values of the individual antimicrobial agents, previously determined. After incubation, the new MIC of each antibiotic is evaluated and their combined effect is calculated using the following algorithm <5.6>:

Definiti: Defined:

MICA= MIC di antibiotico A MICA = MIC of antibiotic A

MICB= MIC di antibiotico B MICB = MIC of antibiotic B.

MICAB= MIC di antibiotico A in presenza di antibiotico B; MICAB = MIC of antibiotic A in the presence of antibiotic B;

MICBA= MIC di antibiotico B in presenza di antibiotico A. MICBA = MIC of antibiotic B in the presence of antibiotic A.

Si calcola l'indice FIC (Indice di Concentrazione Inibitoria Frazionale): The FIC index (Fractional Inhibitory Concentration Index) is calculated:

Indice FIC = MICW MICA+ MICBA/ MICBFIC index = MICW MICA + MICBA / MICB

Sinergia FIC < 0.5 FIC synergy <0.5

Addizionale FIC > 0.5 e < 1.0 Additional FIC> 0.5 and <1.0

Indifferenza FIC > 1 e < 4 Indifference FIC> 1 and <4

Antagonismo FIC > 4 FIC antagonism> 4

<5>Comparison of techniques far measurement of in vitro antibiotic synergism. Norden, C. W., Wentzel, H., Keleti, E. J. Infact. Dis. 140:629-633, 1979. <5> Comparison of techniques far measurement of in vitro antibiotic synergism. Norden, C. W., Wentzel, H., Keleti, E. J. Infact. Dis. 140: 629-633, 1979.

<6>Correlations between methods far measurement of synergy. Berenbaum, M. C. 1980. J. Infact. Dis. 142:476-480. <6> Correlations between methods far measurement of synergy. Berenbaum, M. C. 1980. J. Infact. Dis. 142: 476-480.

L’accuratezza di questo metodo di test di sinergia dipende dal corretto incrocio delle due strisce a gradiente antimicrobico che deve essere perfettamente perpendicolare. L'esecuzione di questo test è suscettibile di errore da parte dell'operatore, che potrebbe accidentalmente posizionare le strisce non a 90° o fallire il corretto punto di incrocio nella deposizione manuale della seconda striscia sulla prima, con il conseguente effetto di dover ripetere il test o di avere dei risultati non attendibili. The accuracy of this synergy test method depends on the correct crossing of the two antimicrobial gradient strips which must be perfectly perpendicular. The execution of this test is susceptible to error on the part of the operator, who could accidentally position the strips not at 90 ° or fail the correct crossing point in the manual deposition of the second strip on the first, with the consequent effect of having to repeat the test or to have unreliable results.

L'intersezione delle strisce a 90° è condizione necessaria per la corretta valutazione degli aloni di inibizione e lettura del valore della MIC sulla striscia graduata e del conseguente calcolo delfalgoritmo descritto sopra. The intersection of the strips at 90 ° is a necessary condition for the correct evaluation of the inhibition zones and the reading of the MIC value on the graduated strip and the consequent calculation of the algorithm described above.

La deposizione della seconda striscia sul punto di incrocio desiderato è difficoltosa e suscettibile di errore perché nella comune pratica di laboratorio viene effettuata manualmente tramite l'utilizzo di pinzette, secondo un posizionamento millimetrico sull'esatta tacca della striscia graduata che corrisponde al punto della MIC, esponendo l'operatore a naturale imprecisione. La striscia di gradiente antimicrobico, una volta entrata in contatto con la coltura batterica, non è più rimovibile né riposizionabile in quanto il processo di diffusione di antibiotico è immediato al contatto con l'agar. The deposition of the second strip on the desired crossing point is difficult and susceptible to error because in common laboratory practice it is carried out manually through the use of tweezers, according to a millimeter positioning on the exact notch of the graduated strip that corresponds to the point of the MIC, exposing the operator to natural inaccuracy. Once the antimicrobial gradient strip has come into contact with the bacterial culture, it is no longer removable or repositionable as the antibiotic diffusion process is immediate upon contact with the agar.

Divulgazione dell'Invenzione Disclosure of the Invention

Scopo della presente invenzione è quello di ovviare a detti inconvenienti ponendo a disposizione degli operatori del settore un dispositivo che, consentendo di incrociare perfettamente a 90° due strisce graduate di carta impregnate di due differenti antibiotici, facilita l’esecuzione del test di sinergia su un terreno di coltura batterico. The purpose of the present invention is to obviate said drawbacks by placing at the disposal of operators in the sector a device which, by allowing two graduated strips of paper impregnated with two different antibiotics to cross perfectly at 90 °, facilitates the execution of the synergy test on a bacterial culture medium.

Altro scopo della presente invenzione è quello di rendere accurato il risultato del test sinergico mediante l’esatto incrocio a 90° delle due strisce graduate di carta impregnate di due distinti antibiotici. Another purpose of the present invention is to make the result of the synergistic test accurate by means of the exact 90 ° crossing of the two graduated strips of paper impregnated with two distinct antibiotics.

Ulteriore scopo della presente invenzione è quello di standardizzare il metodo di esecuzione del test di sinergia in modo da conferire ripetibilità ai test di sinergia intra-laboratorio e riproducibilità inter-laboratorio. A further object of the present invention is to standardize the method of performing the synergy test so as to give repeatability to the intra-laboratory synergy and inter-laboratory reproducibility tests.

Questi ed altri scopi vengono raggiunti dall’ invenzione oggetto della presente domanda che riguarda un dispositivo che permette di incrociare perfettamente a 90° due strisce graduate di carta impregnate ciascuna con un gradiente di concentrazione predefinita di un agente antimicrobico al fine di determinare l’esatto risultato del loro effetto sinergico. These and other purposes are achieved by the invention which is the subject of the present application which relates to a device which allows two graduated paper strips each impregnated with a predefined concentration gradient of an antimicrobial agent to be perfectly crossed at 90 ° in order to determine the exact result. of their synergistic effect.

Breve descrizione dei disegni Brief description of the drawings

Ulteriori caratteristiche e vantaggi dell’ invenzione risulteranno maggiormente dalla descrizione di una forma di esecuzione, preferita ma non esclusiva, illustrata a titolo indicativo ma non limitativo nelle unità di disegno in cui: La Fig. 1 è una vista dall’alto di una base circolare (1) di diametro pari a 124 mm costituita da due scanalature (2a) e (2b) che si incrociano perfettamente a 90°, sfalsate in altezza ed aventi ognuna una larghezza di 6 mm che corrisponde alla larghezza della striscia di carta graduata (non raffigurata), sulle quali dette strisce graduate vengono fatte scorrere indipendentemente Luna dall’altra. Al centro della base circolare (1) vi sono: Further characteristics and advantages of the invention will become clearer from the description of a preferred but not exclusive embodiment, illustrated by way of example but not of limitation in the drawing units in which: Fig. 1 is a top view of a circular base (1) with a diameter of 124 mm consisting of two grooves (2a) and (2b) which cross perfectly at 90 °, staggered in height and each having a width of 6 mm which corresponds to the width of the graduated paper strip (not depicted), on which said graduated strips are made to slide independently the Moon from the other. At the center of the circular base (1) there are:

- un incavo circolare (3) del diametro di 20 mm; - a circular recess (3) with a diameter of 20 mm;

- un incavo circolare (4) del diametro di 4 mm concentrico all’ incavo circolare (3); - a circular recess (4) with a diameter of 4 mm concentric to the circular recess (3);

- quattro incavi circolari (4a) (4b) (4c) (4d) di diametro di 2 mm dello spessore di 1.5 mm posti ad una distanza di 7.5 mm dal centro dell’ incavo circolare (4). - four circular grooves (4a) (4b) (4c) (4d) with a diameter of 2 mm and a thickness of 1.5 mm placed at a distance of 7.5 mm from the center of the circular groove (4).

La Fig. 2 è una vista laterale della base circolare (1) dello spessore di 20 mm, dell’ incavo circolare (3) della profondità di 0.7 mm e dell’incavo circolare (4) della profondità di 5.4 mm. Fig. 2 is a side view of the circular base (1) with a thickness of 20 mm, the circular recess (3) with a depth of 0.7 mm and the circular recess (4) with a depth of 5.4 mm.

La Fig. 3 è una vista assonometrica della base circolare (1) in cui sono chiaramente visibili le due scanalature (2a) e (2b) sfalsate in altezza, realizzate per far scorrere indipendentemente le due strisce graduate di carta. La Fig. 4 è una vista dall’alto di un raccoglitore incrociato monouso (5) in cui vengono messi in evidenza un ago/punta centrale (6) di diametro di 8 mm e alto 1.4 mm e quattro aghi/punte (6a) (6b) (6c) (6d) di diametro 6 mm ed alti 0.4 mm, posti ad una distanza di 7.5 mm dal centro delFago/punta (6). Fig. 3 is an axonometric view of the circular base (1) in which the two grooves (2a) and (2b) staggered in height are clearly visible, made to slide the two graduated strips of paper independently. Fig. 4 is a top view of a disposable cross binder (5) featuring a central needle / tip (6) 8mm in diameter and 1.4mm high and four needles / tips (6a) ( 6b) (6c) (6d) 6 mm in diameter and 0.4 mm high, placed at a distance of 7.5 mm from the center of the phage / tip (6).

La Fig. 5 è una vista laterale del raccoglitore incrociato monouso (5) di diametro di 20 mm, dotato al centro dell’ ago/punta (6) che serve, una volta inserito nell’apposito incavo circolare (3), a bucare e prelevare le strisce graduate di carta perfettamente incrociate a 90°, e dotato di ulteriori quattro aghi/punte (6a) (6b) (6c) (6d) volti ad impedire la rotazione delle strisce durante il trasferimento dalla base circolare (1) alla coltura batterica in piastra petri. Fig. 5 is a side view of the disposable cross collector (5) with a diameter of 20 mm, equipped in the center with the needle / tip (6) which serves, once inserted in the special circular recess (3), to pierce and take the graduated strips of paper perfectly crossed at 90 °, and equipped with further four needles / points (6a) (6b) (6c) (6d) aimed at preventing the rotation of the strips during the transfer from the circular base (1) to the culture bacterial in petri dish.

La Fig. 6 è una vista assonometrica del raccoglitore incrociato monouso (5) in cui sono visibili due spessori incrociati (7a) e (7b) compatibili per il loro inserimento nelle scanalature (2a) e (2b) sfalsate in altezza della base circolare (1), al cui centro vi è un ago/punta (6) e ad una distanza di 7.5 mm dal centro dell’ago/punta (6) vi sono quattro aghi/punte (6a) (6b) (6c) (6d), e l’impugnatura (7) di diametro di 12 mm. Fig. 6 is an axonometric view of the disposable cross-collector (5) in which two compatible crossed thicknesses (7a) and (7b) are visible for their insertion in the grooves (2a) and (2b) offset in height of the circular base ( 1), at the center of which there is a needle / point (6) and at a distance of 7.5 mm from the center of the needle / point (6) there are four needles / points (6a) (6b) (6c) (6d) , and the handle (7) with a diameter of 12 mm.

Descrizione dettagliata dell' Invenzione Detailed description of the Invention

Il trovato oggetto della presente domanda concerne un dispositivo comprendente una base circolare (1) che serve per incrociare due strisce graduate di carta ed un raccoglitore incrociato monouso (5) che serve a prelevare e trasferire le due strisce graduate di carta, ciascuna precedentemente impregnata con un gradiente di concentrazione predefinita di un agente antimicrobico, dalla base circolare (1) alta 20 mm per incrociarle perfettamente a 90° nei punti ottenuti come risultato delle rispettive MIC effettuate in precedenza, al fine di ottenere l’esatta valutazione sinergica, una volta che vengono appoggiate su un terreno di coltura di batteri. The invention object of the present application relates to a device comprising a circular base (1) which serves to cross two graduated paper strips and a disposable crossed collector (5) which serves to pick up and transfer the two graduated paper strips, each previously impregnated with a predefined concentration gradient of an antimicrobial agent, with a circular base (1) 20 mm high to cross them perfectly at 90 ° in the points obtained as a result of the respective MICs carried out previously, in order to obtain the exact synergistic evaluation, once they are placed on a culture medium for bacteria.

Tale base circolare (1) dal diametro di 124 mm presenta sulla sua superficie due scanalature (2a) e (2b) incrociate a 90° aventi sezione rettangolare di larghezza di 6 mm e sfalsate in altezza. This circular base (1) with a diameter of 124 mm has on its surface two grooves (2a) and (2b) crossed at 90 ° having a rectangular section with a width of 6 mm and staggered in height.

La prima scanalatura (2a) sulla quale si deve far scorrere la prima striscia graduata di carta (non raffigurata) ha una profondità di 3.9 mm, mentre la seconda scanalatura (2b) sulla quale si deve far scorrere, indipendentemente dalla prima, la seconda striscia graduata di carta (non raffigurata) ha una profondità di 3.6 mm. The first groove (2a) on which the first graduated strip of paper (not shown) must slide has a depth of 3.9 mm, while the second groove (2b) on which the second strip must slide, independently of the first graduated paper (not shown) has a depth of 3.6 mm.

Tale sfalsamento tra le due scanalature incrociate (2a) e (2b) corrisponde esattamente allo spessore di una delle due strisce graduate di carta ed è proprio per questo motivo che esse, una volta inserite nelle rispettive scanalature incrociate (2a) e (2b), possono scorrere indipendentemente Luna dall’altra in quanto Luna scorre sopra l’altra, in modo da essere incrociate esattamente nei loro punti graduati corrispondenti al loro valore della minima concentrazione inibente MIC in precedenza effettuato. This offset between the two crossed grooves (2a) and (2b) corresponds exactly to the thickness of one of the two graduated paper strips and it is precisely for this reason that, once inserted into the respective crossed grooves (2a) and (2b), they can flow independently of the Moon as the Moon flows over the other, so as to be crossed exactly at their graded points corresponding to their value of the minimum inhibitory MIC concentration previously carried out.

Sulla superficie superiore di detta base circolare (1) vi è un incavo circolare (3) profondo 0.7 mm che serve per favorire il centramento del raccoglitore incrociato monouso (5) tramite i suoi due spessori incrociati (7 a) e (7b) compatibili per il loro inserimento nelle scanalature (2a) e (2b) della base circolare (1); detto raccoglitore incrociato monouso (5) è dotato al centro di un ago/punta (6) di diametro di 8 mm e alto 1 .4 mm il quale serve per bucare e prelevare le due strisce graduate di carta dalla base circolare (1) al terreno di coltura batterico in piastra petri. On the upper surface of said circular base (1) there is a circular recess (3) 0.7 mm deep which serves to favor the centering of the disposable cross-binder (5) through its two crossed thicknesses (7a) and (7b) compatible for their insertion in the grooves (2a) and (2b) of the circular base (1); said disposable cross collector (5) is equipped in the center with a needle / tip (6) with a diameter of 8 mm and a height of 1.4 mm which is used to puncture and withdraw the two graduated strips of paper from the circular base (1) to the bacterial culture medium in a petri dish.

Per facilitare Γ operazione di prelevamento delle due strisce di carta graduate è prevista anche Γ installazione di ulteriori quattro aghi/punte (6a) (6b) (6c) (6d) di diametro 6 mm ed alti 0.4 mm, posti ad uguale distanza di 7.5 mm dal centro dell’ago/punta (6), aventi la funzione di evitare una possibile rotazione delle strisce intorno all'ago durante il trasferimento. To facilitate the operation of picking up the two graduated paper strips, the installation of a further four needles / points (6a) (6b) (6c) (6d) with a diameter of 6 mm and 0.4 mm high, placed at an equal distance of 7.5 mm from the center of the needle / tip (6), having the function of avoiding a possible rotation of the strips around the needle during the transfer.

Concentrico allineavo circolare (3) della base circolare (1) è l’incavo circolare (4), dal diametro di 4 mm e dalla profondità di 5.4 mm, avente la funzione di facilitare Γ affondamento dell’ago del raccoglitore incrociato monouso (5) nelle due strisce graduate di carta, in modo tale da prelevarle dalla base circolare (1) ed appoggiarle nell’agar di coltura batterica esattamente incrociate a 90. Ad uguale distanza di 7.5 mm dal centro dell’incavo circolare (4) della base circolare (1), vi sono quattro incavi circolari (4a) (4b) (4c) (4d), dal diametro di 2 mm a dalla profondità di 1.5 mm aventi, come sopra, la funzione di facilitare l’affondamento degli aghi/punte (6a) (6b) (6c) (6d) del raccoglitore incrociato monouso (5) nelle due strisce graduate di carta. Concentric circular alignment (3) of the circular base (1) is the circular recess (4), with a diameter of 4 mm and a depth of 5.4 mm, with the function of facilitating Γ sinking of the needle of the disposable cross collector (5) in the two graduated strips of paper, in such a way as to take them from the circular base (1) and place them in the bacterial culture agar exactly crossed at 90. At an equal distance of 7.5 mm from the center of the circular recess (4) of the circular base ( 1), there are four circular notches (4a) (4b) (4c) (4d), with a diameter of 2 mm and a depth of 1.5 mm, having, as above, the function of facilitating the sinking of the needles / points (6a ) (6b) (6c) (6d) of the disposable cross stacker (5) in the two graduated strips of paper.

L’umidità dell’agar di coltura batterica faciliterà il distacco delle due strisce dal raccoglitore incrociato monouso (5) senza che possa essere variata la loro posizione di 90°. The humidity of the bacterial culture agar will facilitate the detachment of the two strips from the disposable cross collector (5) without changing their 90 ° position.

Una volta che dette strisce rilasciano sull’agar di coltura batterica l’antibiotico, delineano un alone; dopodiché, in base ai risultati delle MIC ottenute dalla combinazione delle due strisce graduate, si valuta Γ effetto dei due antibiotici combinati: se di sinergia, di antagonismo, di indifferenza o di additi vità. Once these strips release the antibiotic on the bacterial culture agar, they delineate a halo; then, on the basis of the results of the MICs obtained from the combination of the two graduated strips, the effect of the two combined antibiotics is evaluated: whether of synergy, antagonism, indifference or additiveness.

I materiali e le dimensioni del trovato come sopra descritto, illustrato negli uniti disegni e più avanti rivendicato, potranno essere qualsiasi a seconda delle esigenze. Inoltre tutti i dettagli sono sostituibili con altri tecnicamente equivalenti, senza per questo uscire dall’ambito protettivo della presente domanda di brevetto per invenzione. The materials and dimensions of the invention as described above, illustrated in the accompanying drawings and claimed hereinafter, may be any according to requirements. Furthermore, all the details can be replaced with other technically equivalent ones, without thereby departing from the protective scope of the present patent application for invention.

Claims (6)

RIVENDICAZIONI 1. Dispositivo per standardizzare l’esecuzione in vitro del test di sinergia di due antibiotici tramite l’utilizzo della striscia a gradiente con metodo dell’ incrocio comprendente: - una base circolare (1) che serve per incrociare due strisce graduate di carta ciascuna impregnata con un gradiente di concentrazione predefinita di un agente antimicrobico e che presenta sulla sua superficie due scanalature (2a) e (2b) incrociate a 90° - un raccoglitore incrociato monouso (5) dotato al centro di un ago/punta (6) e di quattro aghi/punte (6a) (6b) (6c) (6d) posti ad uguale distanza dal centro dell’ ago/punta (6). CLAIMS 1. Device to standardize the in vitro execution of the synergy test of two antibiotics through the use of the gradient strip with the crossing method comprising: - a circular base (1) which serves to cross two graduated strips of paper each impregnated with a predefined concentration gradient of an antimicrobial agent and which has on its surface two grooves (2a) and (2b) crossed at 90 ° - a disposable cross collector (5) equipped in the center with a needle / tip (6) and four needles / tips (6a) (6b) (6c) (6d) placed at equal distance from the center of the needle / tip (6 ). 2. Dispositivo per standardizzare l’esecuzione in vitro del test di sinergia di due antibiotici tramite l’utilizzo della striscia a gradiente con metodo dell’incrocio secondo la rivendicazione 1 caratterizzato dal fatto che le due scanalature (2a) e (2b) incrociate a 90° aventi sezione rettangolare di larghezza di 6 mm della base circolare (1) sono sfalsate in altezza, avendo la prima scanalatura (2a) una profondità di 3.9 mm e la seconda scanalatura (2b) una profondità di 3.6 mm. 2. Device for standardizing the in vitro execution of the synergy test of two antibiotics through the use of the gradient strip with the crossing method according to claim 1 characterized in that the two grooves (2a) and (2b) crossed a 90 ° having a 6 mm wide rectangular section of the circular base (1) are staggered in height, having the first groove (2a) a depth of 3.9 mm and the second groove (2b) a depth of 3.6 mm. 3. Dispositivo per standardizzare l’esecuzione in vitro del test di sinergia di due antibiotici tramite l’utilizzo della striscia a gradiente con metodo dell’incrocio secondo la rivendicazione 1 caratterizzato dal fatto che sulla superficie superiore della base circolare (1) vi è un incavo circolare (3) del diametro di 4 mm e profondo 0.7 mm per favorire il centramento del raccoglitore incrociato monouso (5). 3. Device for standardizing the in vitro execution of the synergy test of two antibiotics through the use of the gradient strip with the crossing method according to claim 1 characterized in that on the upper surface of the circular base (1) there is a circular recess (3) with a diameter of 4 mm and a depth of 0.7 mm to facilitate the centering of the disposable cross collector (5). 4. Dispositivo per standardizzare l’esecuzione in vitro del test di sinergia di due antibiotici tramite l’utilizzo della striscia a gradiente con metodo deirincrocio secondo le rivendicazioni 1, 3 caratterizzato dal fatto che sulla base circolare (1) Γ incavo circolare (4) dal diametro di 4 mm e dalla profondità di 5.4 mm è concentrico all’incavo circolare (3)· 4. Device for standardizing the in vitro execution of the synergy test of two antibiotics through the use of the gradient strip with the crossing method according to claims 1, 3 characterized in that on the circular base (1) Γ circular groove (4) with a diameter of 4 mm and a depth of 5.4 mm it is concentric with the circular recess (3) 5. Dispositivo per standardizzare resecuzione in vitro del test di sinergia di due antibiotici tramite Futi li zzo della striscia a gradiente con metodo deirincrocio secondo le rivendicazioni 1 e 4 caratterizzato dal fatto che sulla superficie superiore della base circolare (1), ad uguale distanza di 7.5 mm dal centro del Fi ricavo circolare (4), vi sono quattro incavi circolari (4a) (4b) (4c) (4d), del diametro di 2 mm e profondi di 1.5 mm per favorire il centramento del raccoglitore incrociato monouso (5). 5. Device for standardizing in vitro performance of the synergy test of two antibiotics by using the gradient strip with the crossing method according to claims 1 and 4 characterized in that on the upper surface of the circular base (1), at an equal distance of 7.5 mm from the center of the circular fixture (4), there are four circular recesses (4a) (4b) (4c) (4d), with a diameter of 2 mm and a depth of 1.5 mm to facilitate the centering of the disposable cross collector (5 ). 6. Dispositivo per standardizzare Fesecuzione in vitro del test di sinergia di due antibiotici tramite Futilizzo della striscia a gradiente con metodo delFincrocio secondo le rivendicazioni 1 e 2 il cui raccoglitore incrociato monouso (5) è caratterizzato da due spessori incrociati (7a) e (7b) compatibili per il loro inserimento nelle scanalature (2a) e (2b) della base circolare (1).6. Device for standardizing the in vitro execution of the synergy test of two antibiotics by using the gradient strip with the crossing method according to claims 1 and 2 whose disposable cross-collector (5) is characterized by two crossed thicknesses (7a) and (7b ) compatible for their insertion in the grooves (2a) and (2b) of the circular base (1).
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